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丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)

简介：

丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。

丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)其检测原理是在NADH 存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸生成乳酸，同时生成NAD +。在中性条件下平衡偏向丙酮酸氧化为乳酸的方向，驱动反应完成。通过分光光度比色法(酶标仪)测定340nm 处吸光度的下降速率，据此通过比色分析就可以计算出PA 水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①_x0001_ 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。 ②_x0001_ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于PA 的检测。 ③_x0001_

高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA ，可以使用原有的裂解液或

PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2、配制标准品工作液：取丙酮酸标准(25mmol/L) 0.01ml 溶解于0.49ml 丙酮酸标准稀释

液，使浓度达到0.5mmol/L ，即为标准品工作液-丙酮酸标准(0.5mmol/L)。4℃避光保存24h 有效。

编号名称

TC0754 120T Storage

试剂(A): 丙酮酸标准(25mmol/L) 1ml 4℃ 避光试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 1ml RT 试剂(C):

PA 显色液 C1: PA Assay buffer

25ml 4℃ C2: NADH

2支

-20℃ 避光

临用前，按C1:C2=12.5ml:1支的比例混合，即为PA 显色液。试剂(D): LDH solution 0.42ml

-20℃ 避光使用说明书

1份

3、酶标仪比色检测：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，

并注意避免产生气泡。如果样品中的PA 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。

充分混匀，分光光度计检测的340nm 吸光度，比色杯光径1.0cm ，室温孵育1min 后再读取各管吸光度，此后每隔1min 读1次吸光度，直至读数稳定，分别为A 空白2、A 标

准2、A 测定2。

4、自动分析仪检测：样品中的PA 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

样品的检测最好能设置平行管。根据实验室的自动分析仪性能，下列参数仅供参考：

分别检测待测样品管吸光度的下降速率(ΔA u /min)和标准管吸光度的下降速率(Δ

A s /min)。

计算：

分光光度计比色计算公式：

丙酮酸(mmol/L)={(ΔA 测定?ΔA 空白)/(ΔA 标准?ΔA 空白}×0.05 也可根据NADH 毫摩尔吸光度计算：

全血丙酮酸(mmol/L)=(ΔA 测定?ΔA 空白)×(1.56/6.22) 2.33=反应液的总体积(ml) 6.22=NADH 毫摩尔吸光度

加入物空白孔标准孔测定孔蒸馏水/μl

20 — — 待测样品(血清、血浆、体液等)/μl — — 20 丙酮酸标准(0.5mmol/L)/μl — 20 — PA 显色液/μl

196

充分混匀，蒸馏水调零，于340nm 处读取各管吸光度，分别为A

空白1、A 标准1、A 测定1。

LDH solution/μl 3.3 3.3 3.3

温度 37℃ pH 7.4 波长 340nm 延迟时间 30s 检测时间

120s 待测样品/丙酮酸标准(0.5mmol/L)体积

25μl PA 显色液

275μl

换算公式：丙酮酸(mg/dl)=丙酮酸(mmol/L)×8.8

自动分析仪计算公式：

血清、血浆、尿液、脑脊液丙酮酸(mmol/L)={(ΔA u/min)/(ΔA s/min)}×0.5

组织丙酮酸(mmol/g)={(ΔA u/min)/(ΔA s/min)}×{(0.5/待测样品蛋白浓度(g/L)}

参考区间：

空腹静脉、动脉血<0.1mmol/L

注意事项：

1、本法适用于自动分析仪，分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓

度。如果采用自动分析仪，该120T试剂盒可检测约100次。

2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。

3、抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。

4、草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

唾液酸酶法与常规镜检法的临床应用比较

唾液酸酶法与常规镜检法的临床应用比较摘要：目的通过唾液酸酶检测法和白带常规镜检法的结果进行对比分析，探讨唾液酸酶法在细菌性阴道病（BV）中的诊断价值，为临床快速诊断BV提供可靠的方法。方法将480例患者按年龄分为四组（50岁），同时应用唾液酸酶法和常规镜检法检测，对比分析结果。结果唾液酸酶法的阳性率为17.91%，白带常规镜检法的阳性率8.75%，两种方法检测细菌性阴道病的阳性率的比较，差异有统计学意义（P50岁组的阳性率为最高（25.68%）。结论唾液酸酶法操作简便、快速，提高了阳性检出率和准确度，适合临床推广。关键词：细菌性阴道病；阴道分泌物；白带常规镜检法；唾液酸酶法 Abstract：Objective To investigate the significance of sialidase test in diagnosis of bacterial vaginosis by comparing sialidase test with conventional microscopy，and provide rapid and reliable methods for diagnosis BV in clinic. Methods Sialidase test and conventional microscopy were used to determine 480 samples （50 years old group） and the results were analyzed comparatively. Results The positive rate of sialidase test for diagnosis BV was

丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法

丙酮酸脱氢酶（PDH）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号:BC0380 规格:50T/48S 产品内容：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体1mL×1支，-20℃避光保存；试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；试剂六：粉剂×1支，4℃保存；试剂七：粉剂×1支，4℃保存；工作液的配制：临用前把试剂四、五、六、七转移到试剂三中混合溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周。产品说明： PDH（EC4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致605nm光吸收的减少。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤：一、样本的处理称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm，蒸馏水调零。 2、每个样本需要900μL工作液，按样本数加一取出一定量的工作液于37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中孵育5min。 3、空白管：在1mL比色皿中加入900μL工作液和50μL水，混匀，立即记录605nm处初始吸光值A1和1min 后的吸光值A2，计算ΔA空白=A1-A2。 4、测定管：在1mL比色皿中加入900μL工作液和50μL样本，混匀，立即记录605nm处初始吸光值A3和1min后的吸光值A4，计算ΔA测定=A3-A4。三、PDH活性计算（1）按样本蛋白浓度计算单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 PDH活性（U/mg prot）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T =904.762×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr （2）按样本鲜重计算单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 PDH活性(U/g鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T =913.81×(ΔA测定-ΔA空白)÷W （3）按细菌或细胞密度计算单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 PDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)÷T =1.828×(ΔA测定-ΔA空白) V反总：反应体系总体积，9.5×10-4L； ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积，0.05mL；

唾液酸(SA)测定试剂盒(神经氨酸苷酶法)产品技术要求百奥泰康

唾液酸（SA）测定试剂盒（神经氨酸苷酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中唾液酸的浓度。 1.1 产品规格

1.2 组成成分 1.2.1 试剂组成试剂1： Tris缓冲液 0.1 mol/L PH=7.0 神经氨酸苷酶 >0.2U/mL 乳酸脱氢酶 >2U/mL 试剂2： Tris缓冲液 0.1 mol/L PH=9.0 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH） >0.13mmol/L N-乙酰神经氨酸醛缩酶 >2U/mL。 1.2.2 校准品的组成单水平的液体校准品，在水基质中添加唾液酸（60mg/dL），稳定剂<0.1%；定值范围：(50-70)mg/dL。 1.2.3质控品的组成两个水平的液体质控品，在牛血清（30g/L）中添加唾液酸（60mg/dL和150mg/dL），稳定剂<0.1%；定值范围：（50-70）mg/dL、（120-180）mg/dL。 2.1 外观液体双试剂：试剂1:无色至淡黄色液体，试剂2：无色至淡黄色液体。校准品：无色至淡黄色澄清液体。

质控品：无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 空白吸光度在规定参数下，试剂空白吸光度≥0.8。 2.4 分析灵敏度浓度为60mg/dL时，吸光度变化应≥0.005.。 2.5 线性在(0，200]mg/dL线性范围内，线性相关系数r ≥0.996。在(0，50]mg/dL范围内绝对偏差不超过5mg/dL，在（50，200]mg/dL范围内的相对偏差不超过±10%。 2.6 精密度变异系数CV应≤8% 2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8准确度回收试验：回收率应在90%-110%范围内。 2.9 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。 2.10校准品溯源性要求根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供唾液酸校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。校准品溯源至唾液酸纯品（Sigma）。

白带常规与BV唾液酸酶法联合检测的临床价值

白带常规与BV唾液酸酶法联合检测的临床价值发表时间：2013-12-10T12:57:52.687Z 来源：《医药前沿》2013年11月第31期供稿作者：朱建新 [导读] 在育龄期妇女的阴道感染性疾病中，细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎和滴虫性阴道感染是最为常见的妇科病。朱建新（江苏省常熟市辛庄中心卫生院检验科江苏常熟 215500）【摘要】目的对白带常规、BV唾液酸酶法在妇产科常规检查中的临床价值。同时观察BV合并霉菌滴虫感染情况。方法对本院妇产科门诊2012年11月至2013年10月321例阴道分泌物常规检查。通过盐水涂片法查找滴虫，进行革兰染色判断清洁度及检查念珠菌、线索细胞，通过唾液酸酶检测细菌性阴道病(BV)。结果清洁度Ⅱ度占31.46%；Ⅲ度占62.62%；Ⅳ度占5.92%；霉菌感染占20.87%；滴虫感染占3.43%；BV唾液酸酶法检测阳性占27.10%；念珠菌、滴虫和BV阳性混合感染占4.05%。结论白带常规与BV唾液酸酶法联合检测在妇科常规检查中两者都有其独立的临床价值，能更好的正确诊断、合理用药，规范治疗，提高治疗效果。【关键词】白带常规 BV唾液酸酶法联合检测【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）31-0262-01 在育龄期妇女的阴道感染性疾病中，细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎和滴虫性阴道感染是最为常见的妇科病。特别是对于孕前女性阴道分泌物常规筛查，女性患有阴道炎症会引起产道感染和宫内感染，还会造成早产、胎膜早破、低体重儿、先天发育畸形等严重后果。现对本院321例阴道分泌物检测结果分析报道如下。 1 资料与方法 1.1 临床资料对我院妇产科门诊2012年11月至2013年10月321例阴道分泌物进行白带常规与BV唾液酸酶法联合检测。 1.2 试剂（1）0.9％的氯化钠溶液。（2）细菌性阴道病检测试剂盒（唾液酸酶法）。 1.3 仪器江元医疗AT-1600全自动细菌性阴道病检测仪。 1.4 检测方法通过显微镜检和形态学检测阴道毛滴虫、霉菌、线索细胞和清洁度。（1） 0.9％氯化钠湿片法：阴道毛滴虫采用0.9％氯化钠湿片法高倍镜观察20个视野，找到波状运动的阴道毛滴虫可以判断为阳性。（2）革兰染色法：霉菌性阴道炎采用革兰染色法，油镜观察。霉菌可以找到革兰氏阳性孢子或假菌丝与出芽细胞相连接，成链状及分枝状。（3）细菌性阴道病检测（唾液酸酶法）：根据仪器操作规程与细菌性阴道病检测（唾液酸酶法）试剂盒操作规程操作。 1.5 白带常规清洁度判定标准：参照《全国临床检验操作规程》第三版。 2 结果 2.1 妇产科门诊321例白带常规与BV唾液酸酶法联合检测结果。见表（1）。表（1） 321例白带常规与BV唾液酸酶法联合检测结果 3 讨论通过阴道分泌物检查除了可以判断阴道有无炎症，还能进一步诊断炎症发生的原因。当清洁度达到Ⅲ、Ⅳ度时，多数情况下可诊断为阴道炎症（如滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎和细菌性阴道炎）为炎症的治疗提供依据。单纯清洁度增高多见于非特异性阴道炎。在检查中发现有阴道滴虫可诊断为滴虫性阴道炎或滴虫感染。有阴道霉菌时可作为霉菌性阴道炎的诊断依据。此外，清洁度、阴道霉菌、阴道滴虫，它们与BV无直接关联。但患有滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎的患者由于其阴道内正常菌群数量减少，更易感染BV，也就是会出现合并感染。镜检有线索细胞，但BV检测不一定是阳性。因为镜检时有人为带来的错误，而且现在主张线索细胞占20%以上才能判断线索细胞阳性。所以，如果把镜检有线索细胞就认为BV检测一定阳性这错误的观点用在诊断和治疗中，就会产生不良的后果。BV则是由于阴道内原有的菌群比例发生了改变，加特纳菌、厌氧菌占绝对优势而引起的阴道病症，和长期滥用抗生素有关，该病阴道黏膜无充血的炎症表现。在临床上，清洁度II度时，BV检测阳性率也占了一定的百分比。因此，白带常规与BV唾液酸酶法联合检测，在临床妇科病的诊断和治疗中有积极意义。参考文献 [1] 《全国临床检验操作规程》第三版 324. [2] 辛华，占伏良等《白带常规找线索细胞检测细菌性阴道炎与Amsel、BV Blue结果比较》检验医学 2006,21(3) 307-308.

丙酮酸脱氢酶(Pyruvate dehydrogenase,PDH)试剂盒说明书

货号：QS2103 规格：50管/48样丙酮酸脱氢酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义： PDH（EC 4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。测定原理： PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致600nm光吸收的减少。自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制：试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：1mL×1支，-20℃保存；试剂四：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×1支，4℃保存；试剂六：粉剂×1支，4℃保存；试剂七：粉剂×1支，4℃保存；试剂八：粉剂×1支，4℃保存; 工作液的配制：临用前把试剂五、试剂六、试剂七和试剂八转移到试剂四中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： 1、称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。 2、将匀浆600g，4℃离心5min。 3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。 4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的PDH（此步可选做）。 5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体PDH活性测定。测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm处，蒸馏水调零。 2、工作液于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）中孵育5min。 3、在1mL玻璃比色皿中加入50μL样本和900μL工作液，混匀，立即记录605nm处初始吸光第1页，共2页

唾液酸测定试剂盒(神经氨酸苷酶法)产品技术要求danda

唾液酸测定试剂盒（神经氨酸苷酶法）适用范围：本品用于体外定量测定人血清中唾液酸的含量。 1.1规格规格1： (试剂1：15mL；试剂2：5mL)；规格2： (试剂1：30mL；试剂2：10mL)；规格3： (试剂1：60mL；试剂2：20mL)；校准品：（选配）: 规格1（0.3mL×1；1水平)；规格2（0.5mL×1；1水平)；规格3（1.0mL×1；1水平)；质控品：（选配）规格1（0.5mL×2；2水平)；规格2（1.0mL×2；2水平)。 1.2组成试剂盒组成见表1 表1 唾液酸测定试剂盒组成

注：校准品及质控品赋值具有批特异性，每批次浓度详见标签。 2.1试剂 2.1.1外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；组分齐全，液体无漏液；试剂1、试剂2为透明液体，不得有沉淀和絮状物。 2.1.2装量每瓶不少于标示值。 2.1.3试剂空白吸光度用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在340 nmm处测定试剂空白吸光度≥0.8A，空白吸光度变化率≤0.01A。 2.1.4分析灵敏度试剂测定75mg/dL被测物，吸光度变化≥0.01A。 2.1.5线性范围 2.1.5.1在[2，200] mg/dL内,相关系数R≥0.990。

2.1.5.2在[2，40] mg/dL内，线性绝对偏差不超过±4mg/dL；(40，200] mg/dL 内，线性相对偏差不超过±10%。 2.1.6 重复性重复测试（75±15）mg/dL和（150±30）mg/dL样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。 2.1.7批间差测定（75±15）mg/dL和（150±30）mg/dL样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。 2.1.8准确度）中加入一定体积高于200 mg/dL的唾液酸纯在正常浓度范围的临床样本（C 品（Cs）或由纯品配制的标准溶液，回收率应在90%-110%范围内。 2.2校准品 2.2.1外观校准品为淡黄色液体。 2.2.2装量每瓶不少于标示值。 2.2.3准确度与配套试剂组成测试系统，指标要求同2.1.8。 2.2.4 校准品溯源性根据GB/T21415-2008的要求，校准品溯源至工作校准品，工作校准品采用上海聚创医药科技有限公司SA试剂盒进行方法学比对赋值。 2.3质控品

可治性罕见病—丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症

可治性罕见病—丙酮酸脱氢酶E1-α缺乏症一、疾病概述丙酮酸脱氢酶缺乏症是一系列的较为常见的神经系统退行性病变，并伴随线粒体代谢异常的疾病，也是儿童高乳酸血症最常见的病因之一。其中，丙酮酸脱氢酶E1 -a缺乏症( pyruvate dehydrogenaseEl -a deficiency)是由于丙酮酸脱氢酶复合物(pyruvate dehydrogenase complex，PDH complex)中E1 -a亚基的缺陷造成的。编码El-α亚基的PDHA1基因位于Xp22.1上[1]。该病呈X染色体连锁显性遗传，其临床表现和生化缺陷存在较大的异质性。该病尚无明确的发病率和患病率报道，多为散发病例，男女发病率大致相等。 PDH复合物是细胞核基因编码的线粒体基质多酶系统，催化依赖硫胺素的丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶A，将糖酵解、三羧酸循环和氧化磷酸化连接起来，在线粒体能量代谢中起重要作用。PDH复合物缺乏导致丙酮酸代谢障碍，造成乳酸堆积和能量生成不足，引起神经系统结构和功能异常。该复合物包括 3种酶：丙酮酸脱氢酶(E1酶)、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶(E2酶)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(E3酶)。E1酶的作用是移除丙酮酸上的羧基，并把乙酰基转给E2酶。El酶的a亚基是其活性部位，并且参与组成PDH复合物的核心结构。El-a亚基的缺陷可造成ATP生成减少和丙酮酸盐堆积，PDHA1基因突变是PDH复合物缺乏最常见的病因。ATP缺乏导致的能量供应不足对脑组织影响较大。丙酮酸盐堆积可导致丙酮酸盐、丙氨酸、乳酸之间的平衡被打破，最终引起乳酸酸中毒。ATP缺乏常引起肌张力低下、肌无力或运动不耐受等[2]。二、临床特征 PDH复合物缺乏症患者的临床表现呈高度的异质性，发病年龄可从胎儿期至成人各年龄阶段，症状可从新生儿期的致死性乳酸酸中毒，到慢性神经功能异常伴大脑发育不全。本病一般在婴儿期和儿童早期发病，临床表现较复杂，主要累及代谢和神经系统。可有胼胝体发育不良、婴儿痉挛、Leigh病、复发性共济失调、慢性神经病变等。病情轻重及存活时间的长短取决于乳酸酸中毒的严重程度。患儿残存的酶活性越低，临床症状出现越早，血乳酸越高，死亡越早[3]。男性患者可归纳为3类表型：一种是严重的新生儿高乳酸血症和大脑发育

细胞唾液酸化相关酶的荧光成像检测新方法研究

细胞唾液酸化相关酶的荧光成像检测新方法研究糖基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰,它们在各种基础生命活动的过程中起重要作用,并且对机体的恶性转化特别敏感。绝大部分聚糖的生物合成发生在细胞的内质网和高尔基体中,然而即使在糖蛋白生物合成之后,聚糖结构的修饰依然在酶催化作用下不断的进行着,这一过程称为聚糖重构。聚糖重构主要受两类酶的催化作用,糖基转移酶和糖苷水解酶,它们的作用分别为生成和降解糖苷键。由于细胞的糖基化程度通常与疾病,尤其是肿瘤,密切相关,因此糖基转移酶和糖苷水解酶作为潜在的药物靶点和肿瘤诊断标志物引起了研究人员的极大兴趣。唾液酸化是糖基化中一个备受关注的分支,可以在附着于蛋白质或脂的聚糖链末端位置引入唾液酸(N-乙酰神经氨酸),肿瘤细胞中唾液酸的表达普遍是异常的。糖缀合物上唾液酸的表达主要受唾液酸转移酶和唾液酸酶的活性的影响。然而在大多数情况下,肿瘤细胞中唾液酸化异常改变的机理,唾液酸化相关酶的活性与唾液酸化聚糖的表达之间的相互关系仍然未知。为了阐明唾液酸化相关酶的生物学和病理学功能以及使其作为疾病诊断和治疗的工具,发展检测唾液酸转移酶和唾液酸酶活性的新方法已成为迫切需求。因此,本工作将化学生物学,细胞学和分子生物学等进行交叉结合,并利用荧光显微技术,纳米材料等,设计发展了新型分析检测方法和纳米探针,对肿瘤细胞中唾液酸转移酶,唾液酸酶的活性分别进行了原位无创检测,为研究聚糖生物合成机理、肿瘤临床诊断和药物开发提供了有力工具。具体包括以下两个部分工作:1、基于化学选择性识别的活细胞内唾液酸转移酶活性检测唾液酸化的聚糖结构是由唾液酸转移酶(Sialyltransferase,ST)催化合成的,为了阐明唾液酸转移

丙酮酸脱氢酶复合体

丙酮酸脱氢酶复合体成都医学院?检验医学院检验一队4班任亮摘要：丙酮酸脱氢复合体广泛存在于动物、植物和微生物体内。主要是附着于线粒体上。丙酮酸脱氢酶复合体是2-氧（代）酸脱氢酶复合体中的一种。丙酮酸脱氢酶复合体是一种限速酶。主要作用是催化丙酮酸不可逆的转变为乙酰辅酶A，同时将NAD+还原成NADH，后者进入呼吸链产生ATP。丙酮酸脱氢酶复合体还使得糖的有氧氧化中的糖酵解途径和三羧酸循环联系了起来。关键词：丙酮酸脱氢酶复合体；调控机制；蛋白质的结构和功能一、丙酮酸脱氢酶复合体的组成丙酮酸脱氢酶复合体是由三种酶以及相应的辅助因子形成，因物种的不同其各种成分的所占比例不同。丙酮酸脱氢酶复合体的分子量为7×106kDa。第一种酶为丙酮酸脱氢酶（E1），它的辅助因子是焦磷酸硫胺素（ThDP），所以这种酶是ThDP依赖型酶。它是以α2β2四聚体的形式存在。α、β亚单位的分子量分别是41和36kDa。第二种酶为二氢硫辛酰胺转乙酰酶（E2），它的辅助因子是硫辛酸，所以这种酶是硫辛酸依赖型酶，它的分子量是52kDa。第三种为二氢硫辛酰胺脱氢酶（E3），它的辅助因子是FAD，所以这种酶是FAD依赖型酶，它的分子量是55kDa，是以二聚体的形式存在。此外，在高等生物的体内还有丙酮酸脱氢酶激酶（PDK）、丙酮酸脱氢酶磷酸酶（PDP）、E3蛋白结合酶（E3BP）和NAD+、CoA-SH。二、丙酮酸脱氢酶复合体的结构每个丙酮酸脱氢酶复合体是由30个E1、60个E2和12个E3构成的，其中60个E2相互紧密连接但是以非共价键的形式形成的核心部分，而每个E2的亚单位都是由形成核心部分的内部区域和形成外部延伸部分的“Super arm”构成的，所以一个丙酮酸脱氢酶复合体就会有60个外部延伸部分。E1是以非共价键的形式连接在E2的外部延伸部分的E1结构区域。E3则是通过E3连接蛋白与E2的核心部分相连的。三、丙酮酸脱氢酶复合体的作用机制在丙酮酸脱氢酶复合体总的催化反应中。首先是丙酮酸在Mg2+( Mg2+结合在 ThDP 的磷酸基团上)存在下脱去的羧基与丙酮酸脱氢酶的辅助因子ThDP 形成羟乙基OThDP, 丙酮酸脱氢酶与 ThDP在α、β亚单位之间的深沟内结合。然后，羟乙基被氧化并将乙酰基转移到 E2,，即二氢硫辛酸乙酰转移酶的硫辛酰基形成中间产物乙酸硫酰胺，同时释放出ThDP，接下来在二氢硫辛酸乙酰转移酶催化下，乙酰硫酰胺上的乙酰基从乙酰硫辛酰基转移给辅酶A ，形成乙酰辅酶A。最后二氢硫辛酸脱氢酶E3 与二硫化物结合，被还原的硫辛酸重新氧化并将氢递给它的辅基FAD。在氧化和脱羧过程中硫辛酸充当乙酰基载体和电子传递体。

唾液酸检测试剂盒酶法

附件6 唾液酸检测试剂盒（酶法）注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对唾液酸检测试剂盒（酶法）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是对唾液酸检测试剂盒（酶法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围唾液酸检测试剂盒（酶法）是指基于分光光度法原理，利用全自动生化分析仪、半自动生化分析仪或分光光度计，对人血清、血浆或其他体液中的唾液酸含量进行体外定量分析的试剂。依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监

督管理总局令第5号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管…2013?242号），唾液酸检测试剂盒（酶法）管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。目前唾液酸(SA)含量的测定方法主要有比色法和酶法两种方法。比色法是一种直接测定方法，如间苯二酚法、Ehrlich 法、色氨酸、过氧化氢法、氢氯酸和硫乙酸法等；酶法是一种间接测定方法，国内常规检测为酶偶联速率法，一种是利用丙酮酸氧化酶的比色法，另一种是利用乳酸脱氢酶的紫外分光光度法。详情如下： 1.丙酮酸氧化酶法原理：血清中的SA受神经氨酸苷酶的作用，形成N-乙酰神经氨酸，进而在N-乙酰神经氨酸醛缩酶（NANA-醛缩酶）的作用下生成丙酮酸和N-乙酰甘露糖胺；其中丙酮酸在丙酮酸氧化酶作用下生成H2O2，借助于Trinder反应，在POD 作用下生成有色醌，引起540nm波长下吸光度的上升。通过测定其540nm波长下的吸光度变化，与经过同样处理的校准品比较，即可计算出样品中SA的含量。 2.乳酸脱氢酶比色法原理：血清中的SA受神经氨酸苷酶的作用，形成N-乙酰神经氨酸，进而在N-乙酰神经氨酸醛缩酶（NANA-醛缩酶）的作用下生成丙酮酸和N-乙酰甘露糖胺；其中丙酮酸与NADH在乳酸脱氢酶（LDH）作用下生成乳酸和NAD+，引起340nm波长下吸光度的下降。通过测定340nm波长下的吸光度变化，与经过同样处理的校准品比较，即可计算出样

P0306 神经氨酸酶检测试剂盒

神经氨酸酶检测试剂盒产品编号产品名称包装 P0306 神经氨酸酶检测试剂盒 100次产品简介： ?神经氨酸酶检测试剂盒(Neuraminidase Assay Kit)是一个用荧光法快速高灵敏度检测神经氨酸酶酶活性的试剂盒。?本试剂盒可以检测来源于不同生物的神经氨酸酶的酶活力，包括禽流感病毒的神经氨酸酶的酶活力。 ?试剂盒中提供了纯化的神经氨酸酶作为阳性对照，便于检测体系的建立。 ?试剂盒中提供了可以被神经氨酸酶催化产生荧光的底物，该底物被神经氨酸酶催化后可以产生较强的荧光，从而实现了对神经氨酸酶的快速高灵敏检测。 ?一个包装的本试剂盒可以检测100个样品或标准品。包装清单：产品编号产品名称包装 P0306-1 神经氨酸酶检测缓冲液 10ml P0306-2 神经氨酸酶50μl P0306-3 神经氨酸酶荧光底物1ml P0306-4 Milli-Q水 1.2ml — 说明书1份保存条件： -20℃保存，半年有效。注意事项： ?相同体积的情况下，样品中神经氨酸酶的酶活力不宜高过试剂盒中所提供的标准品的酶活力。单位体积内酶活力过高会导致荧光底物相对不足，使测定出来的酶活力低于实际的酶活力。如果样品中酶活力过高，可以适当稀释后再进行测定。 ?神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物尽量避免反复冻融。 ?试剂盒中所用溶液溶解后4℃保存，两天有效。如果两天内不能全部用完，建议尽早把留作以后使用的神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物适当分装后-70℃保存，-20℃冻存也可，但有效期会较短。其余试剂直接-20℃或-70℃保存即可。 ?需使用荧光酶标仪，并需自备专门用于荧光酶标仪荧光检测的96孔荧光酶标板。或使用可以检测小体积样品的荧光分光光度计。使用荧光分光光度计时参考荧光酶标板的操作方法。 ?由于荧光检测非常灵敏，测定出来的荧光强度有时容易产生波动。一方面要避免灰尘等掉入检测孔中产生荧光干扰，另一方面所有检测最好在同一块检测板上做双份平行检测甚至三份平行检测。 ?为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明： 1.阳性和阴性对照检测的准备(参考表1)： a.在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。 b.每孔再分别加入10或0微升神经氨酸酶。 c.每孔再加入10微升溶解神经氨酸酶的溶液。例如神经氨酸酶在RIPA溶液中，则加10微升RIPA溶液。 d.每孔再加入0或10微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。 2.样品检测的准备(参考表1)： a.在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。 b.每孔再加入10微升神经氨酸酶样品。 c.每孔再加入10微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。 3. 检测(参考表1)： a.振动混匀约1分钟。 b.每孔加入10微升神经氨酸酶荧光底物。 c.再振动混匀约1分钟。

唾液酸测定试剂盒(比色法)产品技术要求lepu

唾液酸测定试剂盒(比色法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中唾液酸的浓度。 1.1 规格试剂盒是由试剂1和试剂2组成的液体双试剂,校准品为液体剂型，质控品为冻干粉。规格及装量见表1。表1 规格及装量 1.2主要组成成分

试剂1主要组分：试剂2主要组分：校准品主要组分：质控品主要组分： 2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或黄色透明溶液，校准品：为无色透明液体，质控品：为浅黄色至黄色冻干粉，复溶后为浅黄色至黄色液体。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度在340nm处测定试剂空白吸光度，应≥0.05； 2.3.2 试剂空白吸光度变化率

试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.8。 2.4 分析灵敏度测试50 mg/dL的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0005。 2.5 准确度参照EP9-A2的方法，用比对试剂盒同时测试40例线性区间内的不同浓度的血清样本，其相关系数r≥0.975。[10,60）mg/dL区间内绝对偏差不超过±6mg/dL；[60，180]mg/dL区间内相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性批内变异系数（CV）应不超过10％。 2.7 线性 2.7.1在[10,180]mg/dL区间内，线性相关系数r应不低于0.990； 2.7.2[10,60）mg/dL区间内绝对偏差不超过±6mg/dL；[60，180]mg/dL区间内相对偏差不超过±10%。 2.8 批间差对同一份样品进行重复测定，相对极差不大于10％。 2.9质控品批内瓶间差变异系数（CV）应≤5%。 2.10溯源性根据GB/T 21415-2008的规定，本试剂盒内校准品溯源至企业工作校准品，与已上市公司试剂盒进行比对赋值。 2.11质控品赋值有效性质控品测值应在靶值范围内。

鱼丙酮酸脱氢酶(PDH)说明书

鱼丙酮酸脱氢酶（PDH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T 0.3U/L -15 U/L 使用目的：本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中丙酮酸脱氢酶（PDH）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼丙酮酸脱氢酶（PDH）水平。用纯化的鱼丙酮酸脱氢酶（PDH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙酮酸脱氢酶（PDH），再与HRP标记的丙酮酸脱氢酶（PDH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙酮酸脱氢酶（PDH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼丙酮酸脱氢酶（PDH）浓度。试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶 2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（24U/L）0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书 1 份 5 显色剂A液6ml×1 瓶11 封板膜 2 张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋 1 个标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 12 U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 6 U/L 4 号标准品150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 3 U/L 3 号标准品150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 1.5U/L 2 号标准品150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 0.75U/L 1 号标准品150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体在高糖引起的胰岛素分泌障碍中的作用机制

细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体在高糖引起的胰岛素分泌障碍中的作用机制【摘要】目的探讨细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）在高糖引起的β细胞胰岛素分泌障碍中的作用机制。方法设立空白组、对照组（5.5mmol/L）和高糖组（33.3mmol/L）培养β-TC6细胞72h。采用丙酮酸脱氢酶（E1）活性检测试剂盒检测各组β-TC6细胞中E1活性。E1-siRNA转染细胞后，采用ELISA法检测各组核内乙酰辅酶A的变化情况；ChIP-qPCR法检测各组Islet1、Ins、Pdx1基因表达水平；Western blot法检测各组ISLET1、INS、PDX1蛋白表达水平。结果与对照组相比，高糖组β-TC6细胞E1活性降低，间接表明PDC 受损（P <0.05）；采用E1-siRNA处理后，核内乙酰辅酶A的生成量明显减少（P < 0.05）；细胞内的Islet1、Ins和Pdx1基因表达和蛋白水平均降低（P< 0.05）。结论高糖会引起PDC损伤，造成核内乙酰辅酶A生成减少，胰岛素及其分泌相关基因和蛋白水平降低，导致胰岛素分泌障碍。【关键词】丙酮酸脱氢酶复合体；高糖；乙酰辅酶A；乙酰化；胰岛素分泌障碍 Mechanism of pyruvate dehydrogenase complex in nucleus in insulin secretion disorder caused by high glucose 【Abstract】Objective: To investigate effect of pyruvate dehydrogenase complex (PDC) in the nucleus on insulin secretion deficiency of β-TC6 cells induced by high glucose condition. Methods:β-TC6 cell was cultured with blank group, control group (5.5mmol/L) and high glucose

5.唾液酸测定试剂盒说明书

唾液酸测定试剂盒（酶法）说明书【产品名称】通用名称：唾液酸测定试剂盒（酶法）英文名称：SA Determination Kit 【包装规格】试剂1/试剂2： 99ml×6/99ml×2、 99ml×4/66ml×2、 99ml×3/99ml×1、 99ml×2/66ml×1、 99ml×1/33ml×1、 84ml×6/84ml×2、 84ml×4/56ml×2、 84ml×3/84ml×1、 84ml×2/56ml×1、 84ml×1/28ml×1、 60ml×6/20ml×6、 60ml×5/20ml×5、 60ml×4/20ml×4、 60ml×3/20ml×3、 60ml×2/20ml×2、 60ml×1/20ml×1、 48ml×6/16ml×6、 48ml×5/16ml×5、 48ml×4/16ml×4、 48ml×3/16ml×3、 48ml×2/16ml×2、 48ml×1/16ml×1、 45ml×8/20ml×6、 45ml×6/18ml×5、 45ml×4/20ml×3、 45ml×2/15ml×2、 45ml×1/15ml×1、 21ml×5/7ml×5、 21ml×4/ 7ml×4、 21ml×3/7ml×3、 21ml×2/7ml×2、 21ml×1/7ml×1 【预期用途】本试剂用于体外定量测定人血清中唾液酸的含量，临床上可作为一种非特异性炎症指标之一。【检验原理】神经氨酸苷酶唾液酸（结合型） N-乙酰神经氨酸 NANA-醛缩酶 N-乙酰神经氨酸 N-乙酰甘露糖胺 + 丙酮酸 LDH 丙酮酸+ NADH + H + 乳酸 + NAD + 样本中的唾液酸（SA ）受神经氨酸苷酶的作用，形成N-乙酰神经氨酸，进而在NANA-醛缩酶的作用生成丙酮酸和N-乙酰甘露糖胺，丙酮酸在NADH 存在下有LDH 作用下生成乳酸和NAD +，测定NADH 吸光度下降的速度可求得样本中的唾液酸的浓度。【主要组成成分】试剂1 Tris-HCl 100mmol/L pH 7.0、神经氨酸苷酶 0.2KU/L 、乳酸脱氢酶（LDH ） 2KU/L 试剂2 烟酰腺嘌呤二核苷酸（NADH ） 0.13mmol/L 、 N-乙酰神经氨酸醛缩酶（NANA-醛缩酶）2KU/L 【储存条件及有效期】 1.试剂在2~8℃密封避光保存，有效期12个月。 2.已开瓶试剂注意避免污染，2~8℃可稳定15天。【适用仪器】本产品适用于所有开放式的半自动或全自动生化分析仪。【样本要求】新鲜血清样本：用真空采血管静脉采血，采集后尽快（2h 内）分离，避免溶血，送检应及时并注意密封；22℃保存不超过8h ，如不能完成应转入2~8℃冰箱保存，在48h 内不能完成或者需贮存48h 以上，应于-20℃保存；保持密封，避免反复冻融。【检验方法】酶法。【操作步骤】【计算】样本浓度= 样本△A/min × 校准品浓度校准△A/min 【参考区间】 45.6mg/dl ～75.4 mg/dl 各实验室应根据地区及人群情况建立自己的正常参考范围。【检验结果的解释】人体SA 主要来源为葡萄糖代谢的中间产物。在一些炎症，发热等情况SA 也会升高。专业人员负责检验结果的审核，检验结果的分析，受年龄、性别、饮食、地域影响，通常在参考范围内认为正常，如超出范围，应重新测定进行确认，检验结果如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析查找原因。【检验方法的局限性】若样本中：胆红素≤50mg/dl 、血红蛋白≤500 mg/dl 、抗坏血酸≤100 mg/dl ，对测定结果无明显影响。【产品性能指标】 1.外观：试剂1为无色澄清液体，试剂2为无色澄清液体。 2.试剂空白 a)试剂空白吸光度：在340nm 波长下测得的试剂空白吸光度（A ）≥1.0000（1cm ；340nm ；37℃）； b)空白吸光度变化率：在波长340nm ，1cm 光径下，空白吸光度变化率（△A/min ）≤0.2000。 3.分析灵敏度：当样本浓度为60mg/dl 时，试剂与样本反应产生的每分钟吸光度变化率≥0.0020。 4.线性范围：在0mg/dl ～200 mg/dl 范围内，线性相关系数r ≥0.990；在42mg/dl ～200 mg/dl 范围内的相对偏差≤15%；测定浓度小于42 mg/dl 时，绝对偏差≤3mg/dl 。 5.测量精密度 a)重复性：批内变异系数（CV ）≤10%； b)批间差：不同批号之间测定结果的相对极差（R ）≤10%。 6.准确度：使用质控品测试相对偏差应不超过±10%。【注意事项】 1.试剂与样本量可按生化分析仪器要求恒比例增减。 2.仪器内无所需波长滤光片，选择波长接近的滤光片数值输入。 3.避免试剂接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用水冲洗污染部位，必要时在医生的指导下做进一步处理。 4.试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中收集后交当地废物处理站处理。 5.试剂中含叠氮钠（NaN 3），废瓶、废液应按有关规定销毁处理。 6.在检测的过程中，请不要混合或者交换使用批号不同的试剂，换用不同批号的试剂时，必须重新定标。【参考文献】 1.Sugahara,K.,et al,Enzymatic assay of serum sialic acid.Clin. Chim. Acta, 108, 493-498 (1980). 2.Kolisis,F.N.An immobilized bienzyme system for assay of sialic acid.Biotechnol.Appl.Biochem,8,148-152 (1986). 3.WS/T225-2002，临床化学检验血液标本的收集与处理[S].中华人民共和国卫生部，2002-07-01. 4.陶月仙.临床标本的正确采集[A].第三届全国临床检验实验室管理学术会议[C].2005. 【基本信息】生产企业名称/售后服务单位名称：永和阳光（湖南）生物科技有限公司住所：长沙国家生物产业基地康天路邮编：410329 生产地址：长沙国家生物产业基地康天路电话：86-731-83285463 传真：86-731-83285465 技术服务：400 077 3639 生产许可证编号：湘食药监械生产许（2012）第A128号（更）【医疗器械注册证编号】【产品技术要求编号】【说明书核准日期及修改日期】样本量 sample volume μl 7 试剂1（R1） Reagent 1 μl 210 混匀，在37℃孵育300秒。试剂2（R2） Reagent 2 μl 70 混匀，37℃下孵育90秒，连续监测90秒吸光度变化速率。主波长 main wavelength nm 340 副波长 sub wavelength nm 405 反应类型 reaction type 速率法反应方向 reaction direction 降反应 (-) 定标模式 Calibration mode 线性

BV单卡临床试验方案

临床试验方案（体外诊断试剂）产品名称：细菌性阴道病检测卡(唾液酸酶法) 型号规格：25人份／盒，50人份／盒实施者：北京泰格科信生物科技有限公司承担临床试验的医疗机构：首都医科大学右安门临床检验中心临床试验类别：临床验证临床试验负责人：（签字）统计学负责人：（签字）年月日

说明 1、产品在临床试验前，必须制定临床试验方案。 2、临床试验方案由医疗机构和实施者共同设计、制定。实施者与医疗机构签署双方同意的临床试验方案，并签订临床试验合同。 3、市场上尚未出现的第三类植入体内或借用中医理论制成的，临床试验方案应当向技术审评机构备案。 4、医疗机构和实施者应当共同制定每病种的临床试验例数及持续时间，以确保达到试验预期目的。 5、临床试验类别分临床试用和临床验证。

目录 1 产品原理 (1) 2 产品的指定用途 (1) 3 临床试验背景 (1) 4 临床试验目的和内容 (1) 5 承担临床试验机构的要求 (2) 6 临床试验方法的选择 (2) 7 临床试验的设计 (2) 7.1 样本量及样本量确定的依据 (2) 7.2 样本选择依据、入选标准、排除标准和剔除标准 (3) 7.2.1 选择依据 (3) 7.2.2 入选标准 (3) 7.2.3 排除标准 (3) 7.2.4 剔除标准 (3) 7.3 临床试验产品基本信息 (3) 7.3.1 试验试剂信息 (3) 7.3.2 对比试剂信息 (3) 7.3.3 第三方试剂信息 (3) 7.4 研究中发生的问题及其处理措施 (3) 7.5 临术研究统计分析方法 (4)

7.6 临床试验数据统计分析的判断标准 (4) 7.7 临床试验持续时间 (5) 8 临床试验试验具体操作方案 (5) 8.1 样本采集 (5) 8.2 样本制备 (5) 8.3 试验流程 (5) 9 成功和失败的可能性分析 (5) 9.1 成功可能性分析 (5) 9.2 失败可能性分析 (6) 10 有关安生性方面的说明 (6) 10.1 样本 (6) 10.2 试验产生的废弃物 (6) 11 风险的预测及事先应采取的措施 (6) 12 病人知情同意书及有关伦理事宜的说明 (6)