蓝莓组培苗瓶外生根技术
蓝莓育苗方式有生长季嫩枝扦插、秋冬季硬枝扦插、嫁接育苗、组织培养育苗。蓝莓组织培养育苗经过脱毒，种苗整齐健壮，但蓝莓组织培养苗瓶内生根时间长，一般要三个月以上，多采用在瓶内用50天时间培养出无根苗，出瓶后用微型扦插技术培养“苔藓苗”（有根），“苔藓苗”仅需30天时间就能培养健壮根系壮苗，大大提高蓝莓组培育苗效率、降低成本。
蓝莓组培瓶苗
瓶外扦插前处理
瓶外生根前，将在继代培养室培养50天左右的继代芽苗(此时丛生芽分化基本完成)移到
温室准备室，以自然散射光为光源，光照强度为3000-4000lx，温度控制在15-25℃，培养7-
8天后，打开瓶盖，在原炼苗室继续炼苗1-2天(依季节不同而调整，以培养基不滋生菌为准)，完成丛生继代芽苗的炼苗。扦插前取出放入清水中，将沾带的培养基清洗干净待用。扦插时，用剪刀将芽苗茎低端用剪刀剪断，选用生长旺盛、粗壮的继代芽苗，把剪口端3厘米左右茎
段快速浸蘸配制好的激素溶液，然后扦插到准备好的基质中。
栽培基质
珍珠岩、蛭石、苔藓按1：1：1的比例，珍珠岩先装入塑料穴盘(每个穴盘72个穴)下层，用0.1%的高锰酸钾消毒基质，覆盖薄膜24小时后即可使用。
生根调节剂
有条件的可用NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚乙酸）1000mg/L的浓度配制生根调节剂。如果没有配制条件，也可直接购买ABT生根粉按规定浓度配制溶液用于速蘸枝条，也可达到90％以上的成苗率。
扦插后培养条件控制
芽苗移栽后，加强大棚(瓶外生根环境)内水分、光照、温度、湿度、通风透气等培养条件
的控制，营建适宜于芽苗生根诱导的培养条件是提高瓶外生根率的基本保障。
大棚内最高温度控制在30℃以下，最低温不低于18℃，适当的温差有利于根的诱导，蓝莓组培苗不喜强光直射，需用透光率50%的遮阳网以覆盖薄膜上部，如遇阴雨天及时揭去遮阳网，以保持棚内的光照，可通过喷雾调控温室温度。
全光照嫩枝扦插技术的关键是在整个扦插期保证叶片上有层水膜保护扦插枝条，可根据光照、温度、风力和白昼调节喷水量和喷水间隔时间。
上盆或定植
约一个月时间，蓝莓“苔藓苗”长出健壮的根系，停止喷水两三天练苗，上盆或移植大田。
蓝莓根系对养分的需求量较低，耐盐能力弱。盐分过高，根系易受伤害，甚至死亡，低
盐分的根际环境有利于生根及根系的生长。在生根前，不需养分的供应。蓝莓的根系适宜疏松、有机质含量高的酸性基质，一般pH值4.0-5.2为宜。水苔是有机基质，具有保湿、透气、pH值适宜、使用方便等优点，其自身具有活性因子，利于诱发根系，并促进其生长。在水苔中生长的根系活性强，可在短时间内形成根群。
组培苗的炼苗方法
试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料：生根组培苗； 2、器具用品：镊子；水盆；蛭石、珍珠岩、草木灰；育苗盘；喷雾器；竹签等。 三、方法与步骤 （一）练苗将生根的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口，再放置3~7天。 （二）基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20分钟，或者采用高温干热灭菌法灭菌，灭菌后冷却备用。 （三）育苗盘准备取干净的育苗盘，将蛭石和珍珠岩按1：1混合，然后倒入育苗盘中，用木板刮平。将育苗盘放入1－2cm深的水槽中，使水分浸透基质，然后取出备用。（四）试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部琼脂，然后涝出，放入干净的小盆中。 （五）移栽用竹签在基质上打孔，将小苗栽入育苗穴盘中，轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中，正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤，统计移栽成活率。 解释： 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开，在自然光下进行开瓶练苗3~7天，正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周，一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖（或塞）一两天，然后部分开盖一两天，最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度，开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部
植物组织培养报告
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
蓝莓的主要特性等详细介绍
2121212121 一．蓝莓的主要特性 蓝莓(Blueberry)属杜鹃花科越桔属(Vaccinium) 浆果类灌木，其果实内所特有的蓝莓花青素等物质具有提高视力、抗衰老和防癌等功效，被誉为“21世纪功能性保健浆果”和“水果中的皇后”，并被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一，近年来风靡欧美及日本。1．保健价值 蓝莓果实不仅营养价值高，含有大量对人类健康有益的物质，包括抗氧化物(VA, Vc, VE),靴酸、叶酸(vb)、抗菌成分和丰富的食用纤维等，概况起来主要有以下几个方面的保健作用: (1)蓝莓果实的VMA(花色苷色素)对眼睛有良好的保健作用，能够减轻眼的疲劳及提高夜间视力。 (2)具有保护毛细血管及抗氧化的作用。 (3)延缓脑神经衰老，增强记忆力。
(4)具有良好的消除体内炎症的作用，尤其对尿路感染、慢性肾炎的作用最为显著。 (5)具有抗癌作用。 2．品种特性 蓝莓果实大小近似于樱桃，呈蓝色及亮蓝色，风味甜酸并有特殊的香气，口感极佳。蓝莓种子极小入口几乎没有感觉，没有象樱桃那样的果柄和种子等不可食用部分，吃起来非常方便。 植物分类为杜鹃科越橘属植物的统称，因其果实呈蓝色而称为蓝莓，主要分布于北美和欧洲。树高1～2m，喜酸性土壤，不耐干旱。目前全世界值得推广的栽培品种近200余个，并因气候特点的不同可分为： （1）适于北方较寒冷地区的矮丛蓝莓和北高丛蓝莓； （2）适于南方暖温带地区的南高丛蓝莓； （3）适于南方地区的兔眼蓝莓等。 其中北高丛蓝莓风味及蓝莓花青素含量均好于其他两类，国际市场需求量最大。 3.栽培要点
蓝莓对生态环境的要求，尤其是对土壤条件的要求具有独特之处，它的根系生长需要偏酸的环境条件，所以要求土壤PH为4.0～5.2之间,并且还要求土壤湿润、有机质含量高、通气状况良好。在我国北方的大部分地区土壤属于中性沙壤土，栽培越橘时要进行土壤改良。一般采取施加S粉的方法。在辽宁省以北地区冬季需采取防寒措施，防止树木枯稍或枯死。为维持树木正常生长和结果，要适时修剪。育苗通常采取扦插、组织培养等方法。 二、国内外蓝莓栽培概况 1.国外栽培情况 北美在过去的10年内，栽培面积以平均30%的速度递增，到2003年达10万公顷，总产量超过20万吨。 智利和阿根廷在90年代以后开始发展蓝莓，98%鲜果出口，栽培面积每年以30％～50%的速度递增，到2003年为2500公顷，总产量为1万吨。 波兰以出口德国和英国为目标，2000年栽培面积500公顷，到2003年达到1000公顷。 日本2003年全国种植面积300公顷，产量约3000吨，仅够国内需求量的7％。每年进口5万吨。
大樱桃组培苗炼苗技术
大樱桃组培苗炼苗技术 摘要:根据大樱桃的生物学特性,通过多年大樱桃组培试管苗炼苗的试验,总结出了大樱桃组培试管苗炼苗前后的一系列管理技术。结果表明,试管苗炼苗基质的选择、试管苗温室驯化生根壮苗与开瓶炼苗这3个阶段的工作非常重要。基质选用细沙与蛭石6:4混合为宜,试管苗温室训化生根壮苗与开瓶炼苗时间以10～15d为宜,移入沙床后定期喷洒营养液和杀菌液,按照此方法进行试管苗炼苗可获得很高的成活率。 关键词:大樱桃;组培;炼苗;技术方法 试管苗的炼苗移栽是组织培养过程中重要的环节,这个环节最需要的是操心和细心,即对大棚温湿度操心,对瓶苗移栽各管理环节的细心,若稍有疏忽,则会造成大批幼苗死亡,使整个组培工作前功尽弃,造成巨大的损失。通过几年的实践,总结出了大樱桃试管苗炼苗的关键技术,从试管苗炼苗基质的选择、试管苗温室驯化生根壮苗与开瓶炼苗这3个阶段进行了详细介绍,为天水市优良大樱桃品种的工厂化生产提供了科学依据和技术支持。 1苗床及基质的选择 1.1苗床的制作 苗床在日光温室内要做成凹畦,长6m,宽2m,畦深15~20cm为宜,将畦整平拍实后,喷洒杀虫剂500倍液,在畦内将细砂、蛭石混匀后用木板刮平,并用800倍液多菌灵液将沙床洒透,在畦上搭建小拱棚,可用扁竹或圆竹搭建,高度保持在1.50m 左右,上遮盖遮阳网。 1.2栽种试管苗的基质 栽种试管苗的基质要具备透气、保湿、容易灭菌处理、不利于杂菌滋生的特点,选用珍珠岩、炉渣、蛭石、锯末、草炭土等多种基质进行试验,结果表明,最适合大樱桃组培苗生长的基质为:细沙与蛭石6:4混合,细砂为颗粒为0.10~0.20mm 的面砂。 2试管苗的移栽方法 2.1试管苗的驯化 试管苗从培养架上长好后,将试管苗小心从培养架上取下,要轻取轻放,迅速转移到日光温室中,在日光温室中将瓶苗均匀地摆在地上,温度控制在15~25℃,光照强度为3 000Lx,每天中午在瓶苗周围喷洒多次雾水,达到保湿降温的效果,移到
组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
我国蓝莓_越桔_栽培研究现状及发展措施
文章编号:1002-1728(2003)03-0021-03 我国蓝莓(越桔)栽培研究现状及发展措施 Ξ 修英涛,常凤英,姜 河,杨伟力,候利军 (沈阳农业科技开发院,辽宁沈阳 110161) 中图分类号:Q949.772.3文献标识码:B 蓝莓(Blueberry )又名越桔,属于杜鹃花科越桔属(V accinium )植物,灌木小浆果果树,广泛分布于北半球,从北极到热带高山地区均有分布。其果可生食,亦可加工果汁、果酒、果酱等,从其加工果汁的果渣中,可以提取越桔红,是优良的天然食品红色素。蓝梅具有较高经济 价值和广阔开发前景[1、29] 。蓝莓果实含有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目及抗癌等独特功效物质,因此被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一[17]。近年来,美国、加拿大、日本、智利和欧洲的很多国家都把蓝莓视为保健与功能食品,倍受人们青睐,国际市场售价昂贵,供不应求[2]。蓝莓的栽培驯化工作1900年始于美国,到目前为止,已选育出适合各地气候条件的优良品种100余个,总栽培面积近20000hm 2,年产量达20万t ,形成了缅因州、佛罗里达州、新泽西州、明尼苏达州等十余个主要产区。继美国之后,荷兰、加拿大、德国、波兰、澳大利亚、新西兰、日本等国竞相引种栽培,根据自己国家的气候特点和资源优势开展了具有本国特色的蓝莓研究和栽培工作,并相继进入商业性栽培[3]。尽管中国也有越桔属植物分布,但对其研究很少。随着人们生活水平的提高,蓝莓、树莓、沙棘、酸枣等以风味独特,营养保健作用日益受到人们的关注,被列入世界第三代水果的行 列[10、11]。自20世纪80年代后,我国科学工作者对我国 野生蓝莓资源的现状及开发利用状况进行了调查,分析了蓝莓的营养成分,并对野生蓝莓进行了初步的加工利 用研究[4、5、6、7、8、9、12、29]。我国蓝莓栽培起步较晚,自1983 年后,有关单位先后从国外引进100个左右蓝莓品种,并进行一些栽培研究工作,筛选出了一些适合我国南方、北方气候条件栽培的品种,并进行了有关育苗、栽培环境与栽培管理方面的研究。 1 栽培品种与育苗技术 111 栽培品种 我国东北山区有着丰富的越桔属资源,其中以笃斯越桔(V .ulginosum )和红豆越桔(V .vitis 2idaea )面积校大、储量较多,集中分布于大小兴安岭、长白山。大兴安岭产量可占全国的90%,丰年产量可达数十万吨[5]。大兴安岭素以高寒著称,被认为是水果栽培的禁地,而野生越桔却生长繁茂。因此要加强对这一地区野生越桔资源保护和开发利用,同时要引进推广适于这一高寒环境的 优质高产栽培品种进行商业化栽培。我国有许多适于蓝 莓栽培的生态区,仅长白山就有近百万亩的强酸沼泽地,稍加改造即可进行商业化栽培。但大面积开发,需要与各地环境相适应的优良品种和大量优质苗木[13]。野生蓝莓品种果实小,产量低,口味差,难以适应商业化栽培需要,因此,自20世纪80年代初以来,吉林农业大学、南京植物研究所、山东省果树研究所等单位先后从美国、加拿大、波兰、芬兰、德国等国家引进蓝莓品种100个左右,并进行了栽培筛选与育苗研究。根据树体特征、果实特点及区域分布分为四类。 矮丛蓝莓:树体矮小,一般高30～50cm ,抗旱能力较强,且有极强抗寒能力,极适宜于东北高寒山区大面积商业化栽培,果实较小,适于做加工原料。代表品种有美登(Biomidom )、斯卫克(Brunswick )、坤蓝(Cumber 2 land )[14、16、27] 。 半高丛蓝莓:一般树高50～100cm ,果实比矮丛蓝莓大,比高丛蓝莓小,抗寒力强,一般可抗-35℃低温,适于北方寒冷地区栽培。代表品种有北陆(Northland )、北村(Northcountry )、北蓝(Northblue )、圣云(St.cloud )[14,16]。 高丛蓝莓:株高2～3m ,果实较大,品质佳,鲜食口感好,可以作鲜果市场销售主栽品种。分为南高丛蓝莓和北高丛蓝莓两类。南高丛蓝莓喜湿润、温暖气候条件,适于我国黄河以南地区发展;北高丛蓝莓喜冷凉气候,抗寒力较强,有些品种可抵抗-30℃低温,适于我国北方沿海湿润地区及寒地发展。代表品种有艾文蓝(Avonblue )、蓝丰(Bluecrop )、爱国者(Patroit )、泽西(Jersey )、艾朗 (Aron )[17、21、27] 。 兔眼蓝莓:一般株高达7m 以上,生产上控制在3m 以下,寿命长、抗湿热,对土壤条件要求不严,且抗旱。适于我国长江以南地区的丘陵地带栽培。代表品种有巨丰(Dellite )、杰兔(Premier )、粉蓝(Powerblue )[27]。112 育苗技术 蓝莓苗木繁殖方法主要有3种,即硬枝扦插、绿枝扦插和组织培养方法。 硬枝扦插:主要适合于高丛蓝莓和矮丛蓝莓。一般于每年春季(3～4月)剪取1年生的营养枝,扦插条长度以15cm 为宜。上部切口为平切,下部切口为斜切,正好位于芽下,扦插基质为腐苔藓或草碳与河沙(1∶1)的混合基质,枝条插入基质时只留一个顶芽,扦插苗床应支离地 Ξ收稿日期:2002-05-08 辽宁农业科学 2003(3):21～23Liaoning Agricultural Sciences
植物组织培养技术
三．组培苗生长环境有何特点？如何针对这些特点提高移栽成活率？ 1.组培炼苗是组培过程较为重要的一个环节，是一个较为复杂的技术体系，提高炼苗成活率是决定组培成败和降低组培成本的关键。试管苗一般在高湿（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒温（25℃）下培养， 2.1组培苗的特点 叶片无保护组织（角质层、蜡质、表皮毛等），加之细胞间隙大，气孔开张大，因此水分散失较快，易于萎蔫。根无根毛或极少，并且有些从愈伤组织上发育的根与芽的疏导组织不相同，因此吸水能力较弱。 2.2提高移栽成活率的方法 而当炼苗移栽时，环境有了极大的改变：湿度降低、光照增强、温度升高、温差变大。具以上特点的组培苗，在此环境下，叶片失水较严重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸腾水量，从而造成植物萎蔫，炼苗失败。另一种情况是，空气温度上升要比基质温度上升快，而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的，当气温升高时，加之湿度较低，叶片蒸腾急速增加，此时基质温度上不去，根系吸水能力不够，造成蒸腾大于吸水的失衡状态，从而萎蔫死亡。要想获得高的炼苗成活率就得针对以上问题，一方面提高出瓶苗的质量，提高其抗逆性，生根前的壮苗、理想的生根配方和生根培养环境的调控是关键；另一方面就得有针对组培苗特点创造一个适宜的炼苗环境，比如保证空气湿度，平衡空气和基质的温度平衡关系等。 四、生长素类分裂素类调节剂在主培中有哪些生理作用？在快速繁殖的起始，芽增殖及生根培养阶段应该如何使用？ 培养中生长素一方面用于诱导愈伤组织的形成和生根，另一方面是与一定量的细胞分裂素配合使用共同诱导不定芽的分化，侧芽的萌发与生长以及某些植物胚状体的诱导。 在植物组织培养中的细胞分裂素的主要功能是促进细胞的分裂和分化，打破顶端优势，诱导芽的分化和增殖，促进组织和器官的不定芽发育。当培养基中的细胞分裂素与生长素的比例高时，诱导芽的分化，反之，诱导根的分化。 快速繁殖的起始阶段培养基中加入适量的生长素和细胞分裂素类 芽增殖阶段向培养基中加入较多的细胞分裂素类的物质促进芽的分化 生根培养阶段向培养基中加入较多的生长素类物质促进根的分化 五．利用组织培养技术生产苗木及次生代谢物的手段有哪些？培养对象分别是什么？培养新品种的手段有哪些？培养对象分别是什么？
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
蓝莓组织培养
蓝莓组织培养方案 1、植物介绍： 1）供试材料来源： 选取长势旺盛的幼嫩枝条，去除多余的叶片，切取除顶芽外的第3节~第10节作为外植体。提供的材料希望老师可以从组培室提供。 2）技术路线： 外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽 2方法步骤： 1）外植体的剪取与消毒程序的筛选： 切取除顶芽外的第3节~第10节作为外植体段去叶片留叶柄→流水冲洗30min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒 3~7min→无菌水冲洗4~5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成带有1~2个腋芽的小段 2)初代培养基的筛选： 选用MS为最基本的培养基，根据需要的不同，添加激素6-BA、
NAA、ZT。 3)增殖培养基的筛选： 以MS为基本培养基，按激素6-BA、NAA、ZT含量的不同， 诱导增殖培养基设4系列处理（培养基1~4号），生根培养 基设2系列处理（培养基5~6号），培养基配方表如下： 表中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g/L，pH值5.6~5.8， 在115MPa气压下灭菌20min。 4)生根培养基的筛选 不同的培养基进行生根的优势也不一样，根据大量的材料表明1/4 MS中的小苗生根均明显优于全量的MS培养基，所以用激素以IBA 0.5mg/L效果最好，生根情况好且所需天数也最短。最适培养基应
该为1/4 MS+IBA 0.5mg/L 5)试管苗移栽试验： 当苗根长到1~1.5cm时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基。用多灵菌500~800倍浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。苗床基质分5个处理，分别为沙：草炭土=1:1、沙：蛭石=1：1、纯沙、纯蛭石、腐苔藓。（根据资料查找以腐苔藓为基质最好，成活率达80%以上，草炭土和沙半量也可达50%的成活率。）
植物组培实验报告
姓名班级学号实验日期 科目植物生理学实验实验名称Effects of Hormones on Morphogenesis in Plant Tissue Culture 合作者指导教师成绩 Effects of Hormones on Morphogenesis in Plant Tissue Culture Introduction The technology of plant tissue culture is based on the principle of totipotency which means the capacity to generate a whole plant from any cells or an explant.During the plant tissue culture,the hormones affect largely on morphogenesis,such as Auxin and Cytokinin.And the content and ratio of these hormones can make different results.NAA is the routine reagent of auxine and6-BA is the reagent of cytokinin.For the tissue culture,we prepare the Murashige and Skoog’s medium(MS medium).The MS medium contains hormones,macronutrients and micronutrients(detailed ingredients are in Table 2-1).The pH in the medium will be adjusted with1M NaOH.We should prepare10MS media with hormones. During the whole operation of tissue culture,six potential source of contamination are air,water, growth media,equipment,explant and people.We use the laminar flow hood to remove most of microbes from air flow.The water and the media have been autoclaved.The tools should be kept sterile in the70%alcohol and flamed by alcohol burner.And we sterilize the explants with Ca(ClO)2and70% ethanol and sterile water. We use the NAA to induce the callus to generate root. Materials Fresh young leaves of tobacco(Nicotiana tabacum) MS medium:NH4NO3,KNO3,CaCl2,MgSO4,KH2PO4,MnSO4?H2O,ZnSO4?7H2O,KI,Na2MoO4?2H2O,CuSO4?5H2O,CoCl2?6H2O,Na2EDTA,FeSO4?7H2O,Nicotinic acid,Pyridoxine HCl(VB6), Thiamine HCl(VB1).Glycine,Mesoinositol. Agar,HgCl2,NAA,6-BA.2%Ca(ClO)2,sterile distilled water,70%ethanol,Beaker,Balance,10 Bottles,pH test strips,Laminar flow hood,Tween-80,Scissor,Forceps,Scalpels,Alcohol lamp. Method Part1:Prepare10bottles of culture. 1.Wash10bottles and dry them for a group. 2.Our group’s task:Weigh50mg6-BA and mix with sterile distilled water to be50mL1mg/ml solution in a bottle and mark the stock solution name,the date,and our group number. 3.Other groups prepare the MS medium culture,agar,NAA and sugar.In Table2-1,MS=100ml A+ 1ml B+10ml C+5ml D+10ml E.Every3group prepare1L medium=MS+1mg/ml6-BA+ 0.2mg/L NAA+3%sugar+0.7%agar.Boil the solution with induction cooker to mix thoroughly. 4.Adjust the pH of medium to 5.8with1M NaOH or HCl. 5.Repackage the1L medium to the bottles of3groups.10bottles of each group,30ml for each bottle. 6.Sterilize the culture bottles by autoclaving at115℃for30min.Store them at room temperature. Part2:Operation of plant tissue culture. 1.The space in the laminar flow hood has been sterilized by UV light for15min.We place all items in well order to start working. 2.Rinse4young leaves as explants in tap water for10-30min.The next operations are all aseptic.
世界蓝莓生产现状和我国蓝莓发展趋势
世界蓝莓生产现状和我国蓝莓发展趋势 李亚东教授(吉林农业大学浆果研究所) 蓝莓又称越橘，为杜鹃花科越橘属植物，是具有较高经济价值和广阔开发前景的新兴果树树种。果实为蓝色，果实大小因种类不同而异，一般单果重为0.5-2.5g，其果实果肉细腻，种子极小，甜酸适口，有清爽宜人的香气。同时，蓝莓具有较高的保健作用和药用价值，在国内外极受欢迎，并已被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。 蓝莓的种类、品种很多，近几年通过农业科技工作者的努力，现已选育出适合寒带、温带、亚热带等不同气候条件下栽培的种类和优良品种，在很多地区已经推广种植，并取得了很好的经济价值。蓝莓管理技术简便，见果年限短，经济效益大，一般栽后l-2年即可结果，3年进入盛果期，植株寿命长。 一、栽培历史 蓝莓的栽培历史不到一个世纪，最早始于美国。1906年，F.V.coville首先开始了野生选种工作，1937年将选出的15个品种，进行商业性栽培。到上世纪80年代，已选育出适应各地气候条件的优良品种100多个，形成了缅因州、佐治亚州、佛罗里达州、新泽西州、密执安州、明尼苏达州、俄勒冈州主要经济产区，总面积1.9万hm2，产量20万t。目前，蓝莓已成为美国主栽果树树种。到2003年，北美地区栽培面积达到96.9hm2，总产量超过40万t。继美国之后，世界各国竞相引种栽培。各国根据自己的气候特点和资源优势开展了具有本国特色的蓝莓研究和栽培工作。荷兰、加拿大、德国、奥地利、丹麦、意大利、
芬兰、英国、波兰、罗马尼亚、澳大利亚、保加利亚、新西兰和日本等国相继进入商业性栽培。据统计，全球已有30多个国家和地区开始蓝莓产业化栽培，总面积目前达到12万hm2，但仍处于市场供不应求状态。 我国蓝莓栽培起步较晚，但发展速度较快。上世纪80年代初期，吉林省和黑龙江省采集野生资源加工果酒、饮料。吉林省安图县山珍酒厂生产的蓝莓酒曾获农业部银质奖，其产品在市场上很畅销。但由于依靠野果原料供应不稳及果酒市场的衰退，未能形成一个稳定的产业。在采集野生资源基础上，一些林业部门曾作过野生笃斯越橘的家植驯化栽培，但由于产量及产值低，栽培效益差，生产上也难于推广。针对这一问题，吉林农业大学于1983年率先在我国开展了蓝莓引种栽培工作，到1997年，从美国、加拿大、芬兰、德国引入抗寒、丰产的蓝莓优良品种70余个，其中包括高丛蓝莓、半高丛蓝莓、矮丛蓝莓等六大类型。1989年，解决了蓝莓组织培养工厂化育苗技术，扩繁后，在长白山建立了5个蓝莓引种栽培基地。1995年，初步选出适宜长白山区栽培的蓝莓优良品种4个，并开始向生产推广。对一些基本的栽培技术和育苗、土壤管理等也作了研究。1999年，吉林农业大学与日本的环球贸易公司合作，率先在我国开展了蓝莓的产业化生产栽培工作。2000年开始，相继在辽宁、山东、黑龙江、北京、江苏、浙江、四川等地引种试栽。2004年在吉林、辽宁和山东省发展300hm2，总产量300t，产品80%出口日本。到2006年为止，国内种植已经遍布全国各个省市，总面积已近千公顷。 二、经济意义 (一)营养价值及医学价值
蓝莓组培快繁技术实例 · 附配方
蓝莓（Vaccinium corymbosum）属杜鹃花科，越橘属植物。起源于北美，多年生灌木小浆果果树。因果实呈蓝色，故称为蓝莓国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。 本试验以蓝莓半木质化茎段为外植体，并通过瓶外生根技术，建立起植株再生体系。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 高灌蓝莓半木质化茎段。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 剪取蓝莓半木质化枝条，立即去掉上部叶片带回室内，剪成带有一个叶芽2-3厘米长茎段，在流动自来水中冲洗20-30分钟，在超净工作台上用75%酒精消毒2-3分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水后在0.1%升汞中消毒5-8分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水分，剪去茎段两端约 0.5-1厘米，立即接种到初代培养基中。 1.1.3 培养条件 诱导培养基：改良WPM + ZT 1.0mg/L 增殖培养基：改良WPM + IAA 0.1mg/L + ZT 2.0mg/L 复壮培养基：改良WPM + IBA 0.1mg/L WPM具体改良为：以硝酸钙 684mg/L、硝酸钾 190mg/L、EDTA铁钠 73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L代替原WPM培养基中的硫酸钾、氯化钙、硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠。 以上培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH值5.2。 培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时长为12-16时/天。
2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 将处理好的外植体立即接种到诱导培养基中，5-6天叶芽开始萌动，10天开始展叶，20天腋芽长到1厘米长，30天腋芽长到1.5-2.5厘米长。 2.2 继代增殖培养 将初代培养长出的茎剪成1.5-2厘米长茎段转接到增殖培养基中。30-35天增殖5-7倍，增殖苗生长健壮。 2.3 复壮培养 将继代苗剪成1-1.5厘米茎段，转接到壮苗培养基，复壮培养30-40天，复壮苗高5-6厘米且粗壮。 2.4 瓶外生根培养
蓝莓组培苗瓶外生根技术
蓝莓育苗方式有生长季嫩枝扦插、秋冬季硬枝扦插、嫁接育苗、组织培养育苗。蓝莓组织培养育苗经过脱毒，种苗整齐健壮，但蓝莓组织培养苗瓶内生根时间长，一般要三个月以上，多采用在瓶内用50天时间培养出无根苗，出瓶后用微型扦插技术培养“苔藓苗”（有根），“苔藓苗”仅需30天时间就能培养健壮根系壮苗，大大提高蓝莓组培育苗效率、降低成本。
蓝莓组培瓶苗 瓶外扦插前处理 瓶外生根前，将在继代培养室培养50天左右的继代芽苗(此时丛生芽分化基本完成)移到 温室准备室，以自然散射光为光源，光照强度为3000-4000lx，温度控制在15-25℃，培养7- 8天后，打开瓶盖，在原炼苗室继续炼苗1-2天(依季节不同而调整，以培养基不滋生菌为准)，完成丛生继代芽苗的炼苗。扦插前取出放入清水中，将沾带的培养基清洗干净待用。扦插时，用剪刀将芽苗茎低端用剪刀剪断，选用生长旺盛、粗壮的继代芽苗，把剪口端3厘米左右茎 段快速浸蘸配制好的激素溶液，然后扦插到准备好的基质中。
栽培基质 珍珠岩、蛭石、苔藓按1：1：1的比例，珍珠岩先装入塑料穴盘(每个穴盘72个穴)下层，用0.1%的高锰酸钾消毒基质，覆盖薄膜24小时后即可使用。
生根调节剂 有条件的可用NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚乙酸）1000mg/L的浓度配制生根调节剂。如果没有配制条件，也可直接购买ABT生根粉按规定浓度配制溶液用于速蘸枝条，也可达到90％以上的成苗率。 扦插后培养条件控制 芽苗移栽后，加强大棚(瓶外生根环境)内水分、光照、温度、湿度、通风透气等培养条件
的控制，营建适宜于芽苗生根诱导的培养条件是提高瓶外生根率的基本保障。 大棚内最高温度控制在30℃以下，最低温不低于18℃，适当的温差有利于根的诱导，蓝莓组培苗不喜强光直射，需用透光率50%的遮阳网以覆盖薄膜上部，如遇阴雨天及时揭去遮阳网，以保持棚内的光照，可通过喷雾调控温室温度。 全光照嫩枝扦插技术的关键是在整个扦插期保证叶片上有层水膜保护扦插枝条，可根据光照、温度、风力和白昼调节喷水量和喷水间隔时间。
组培苗的炼苗方法图文稿
组培苗的炼苗方法集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-
试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料：生根组培苗； 2、器具用品：镊子；水盆；蛭石、珍珠岩、草木灰；育苗盘；喷雾器；竹签等。 三、方法与步骤 （一）练苗将生根的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口，再放置3~7天。 （二）基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20分钟，或者采用高温干热灭菌法灭菌，灭菌后冷却备用。 （三）育苗盘准备取干净的育苗盘，将蛭石和珍珠岩按1：1混合，然后倒入育苗盘中，用木板刮平。将育苗盘放入1－2cm深的水槽中，使水分浸透基质，然后取出备用。 （四）试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部琼脂，然后涝出，放入干净的小盆中。 （五）移栽用竹签在基质上打孔，将小苗栽入育苗穴盘中，轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中，正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤，统计移栽成活率。 解释： 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为 50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开，在自然光下进行开瓶练苗3~7天，正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬
或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周，一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖（或塞）一两天，然后部分开盖一两天，最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度，开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部（因为残留的蔗糖和营养会成为潜在的致病微生物的生长培养基，洗不净容易引起移栽苗烂根死亡），并且避免损坏根系。之后直接移栽或使用0.1%~0.3%的高锰酸钾或多菌灵等杀菌剂溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床或盆钵，也可用水清洗后用多菌灵溶液浸泡10~30分钟后移栽，栽后淋足定根水。炼苗在塑料薄膜（或玻璃）温室内或遮阴网室内进行，使用温室或温棚时应注意设置通风口，防止浇水后高温引起萎蔫及高湿引起烂苗。生长基质应当具有适合的pH值、多空隙、良好的排水和通气性能，如一般用珍珠岩、蛭石、草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5。也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。这些基质在使用前应高压灭菌，或用至少小时烘烤来消灭其中的微生物。由于移出的试管小植株极容易感染病，所以生长环境的卫生状况和病害防治对移栽能否成功十分关键。通常对生长基质、培养容器和苗床进行消毒处理，采用新的培养容器或聚乙烯薄膜效果都很好，必要时可喷施稀的杀菌剂。 4、移栽后的管理。移出的试管苗一般在炼苗前4周遮阴要达到50%~90%，并采用喷雾洒水保持一定的湿度（85%左右），之后逐渐降低湿度和增强光照。湿度降低幅度及光照增加量依不同植物而定，总体上应促使老叶缓慢衰退并同时产生新叶。如果降低或增加过快，会使叶片褪绿和灼伤，缓苗期延长，甚至导致移栽苗死亡。但是，只要小植株能够忍受，尽可能高的光照水平是有利的。温度不应低于20℃，最好达到25~30℃。但温度湿度过高易于滋生杂菌，造成苗霉烂或根茎处腐烂，因此应对温度加以控制。遮阴和调节湿度（喷雾或塑料薄膜覆盖）也有助于控制温度。在炼苗时可适当施用大量和微量元素，如采用1/4或
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌