大鼠取材方案
实验大鼠取材方案
[取材内容]
1. 取大鼠静脉血 分离血浆、血清 -80℃保存。
2. 取大鼠门静脉血 分离血清 -80℃保存。
3. 取大鼠甲状腺组织 制备甲状腺电镜观察标本 其余组织液氮冰冻保存备用。
4. 取大鼠胸腺组织 制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织 制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6. 取大鼠肝脏组织 制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠胰腺组织 制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织 制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本 其余组织液氮冰冻保存。
9. 取大鼠胃部组织 制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组织 制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织 制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大鼠肾组织 制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本 右肾组织液氮冰冻保存备用。
13. 取大鼠肾上腺组织 左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本 右侧肾上腺液氮冰冻保存
备用。
14. 取大鼠睾丸组织 左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本 右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
[试剂及药品]
戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3 戊二醛磷酸
盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛、肝素钠、器械液 器械清洗消毒液
[器材]
备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器 10ml、5ml、
2ml 、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐
[取材动物]
Wistar大鼠
[取材步骤]
1. 取材大鼠前夜禁食 自由饮水。
2. 腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。用5ml的注射
器 配合5.5 7号针头。
腹腔注射时右手持注射器 左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴 另外三个手指抓住大鼠的颈部 使大鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部 防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作轻柔 防止刺伤腹部器官。尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离 最好是从腹部一侧进针 穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔 注射完药物后 缓缓拔出针头 并轻微旋转针头 防止漏液。待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3. 修剪去颈部及腹部毛发 75%酒精消毒。
4. 沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部皮肤直至剑突 向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织 暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉 剪开腹膜 暴露腹腔 将肝脏向上
翻起 显露门并游离静脉 将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉 抽取
门静脉血2ml 无创血管夹夹闭门静脉止血。将抽取门静脉血加入一次性离心管 低温
静置过夜 4℃离心 3000-3500/min 10分钟 吸出上清液 分装 -80摄氏度保存备用。
5. 把胃与脾之间的薄膜除去 可见到在其下方有如树枝状的肉色组织 分为左、右两叶 钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织 结扎止血。胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培
养皿中涮洗去血迹。①切取胰腺体部约1mm×1mm×1mm组织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲
液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或
福尔马林液中固定 ③其余组织全部液氮冰冻保存备用。生理盐水冲洗操作器械。
6. 剔除脾周组织 放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①从脾脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定 ②继续切取脾约1mm×1mm×1mm 组
织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ③其余组织
液氮冰冻保存备用。
7. 从剑突继续向上剪开皮肤自颌下 向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织 暴露胸廓及颈浅肌层。沿正中剪开胸廓、胸膜 避免损伤胸腺的胸腔脏器。暴露心脏 找到上下腔静脉后
确认右心房 5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。加4ml静脉血入肝素锂真空采血管 摇匀 室温静置10分钟 4℃离心 3000-3500/min 5分钟 吸出上清液 分装 -80摄氏度保存备用。2ml加入普通真空采血管 低温静置过夜 4℃离心
3000-3500/min 5分钟 吸出上清液 分装 -80摄氏度保存备用。
8. 展开肠系膜 于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织 剔取肠系膜淋巴结数枚 放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福
尔马林液中固定 ②其余组织放置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。心管 5ml、9. 上端于贲门上端结扎食管 下端于直肠远端结扎直肠末端 钝锐结合完整取下胃肠道。
10. 离断胃 放置于无菌培养皿 残端结扎。①沿胃大弯剖开 生理盐水洗涤 切取约1mm ×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4) 或4 戊二醛固定 ②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条 浸入多聚甲醛或福
尔马林液中固定 ③其余胃组织放置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
11. ①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm 距回盲部10cm处切取回肠10cm 生理盐水洗涤
切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液
(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②剪取宽约0.5-1.0cm包含全层的空肠和回
肠组织各1条 做标记 浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定 ③其余空肠和回肠组织
全部放置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
12. 结扎剪断肝门管道系统 钝锐结合完整取出大鼠肝脏 放置于无菌培养皿 生理盐水冲
洗 称重并记录。①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中
固定 ③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
13. 于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏 表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。在肾脏的前方内侧
和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。右侧肾上腺呈豆状 长轴指向后内侧 左侧呈卵
圆形 长轴指向腹外侧。钝锐结合摘取两侧肾上腺。①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔
马林液中固定 ②右叶肾上腺放置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
14. 剪开后腹膜 结扎剪断双侧肾门 钝锐结合 取下双侧肾脏 剔除肾周筋膜组织 放置
于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。①于中间肾门部横行切开左侧肾脏 切取
上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定 ③右侧肾脏放置于无
菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
15. 大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。性成熟的大鼠睾丸和附睾下降入阴囊 使表面凸出并突向后方。小心剪开双侧阴囊 可见椭圆形睾丸 钝锐结合 摘
取双侧睾丸、附睾 放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
16. 颈白线钝锐结合分离颈前肌群 直至气管 向上显露甲状腺。仔细操作 切取包括甲状软骨在内的甲状腺。①切取约1mm×1mm×1mm组织各3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液
中固定。切取左侧睾丸下端1mm×1mm×1mm组织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林
液中固定 ③右侧睾丸组织放置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
17. 大鼠胸腺由两叶组成 似等边三角形。大部分位于胸腔前纵膈 顶端近喉部 基底部附着于心包腹面的前上方。钝锐结合完整取下胸腺 放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中
涮洗去血迹。①切取胸腺1mm×1mm×1mm组织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液
(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定 ②切取胸腺5mm×5mm×5mm组织1块浸入多聚
甲醛或福尔马林液中固定 ③其余组织置于无菌冻存管 液氮冰冻保存备用。
18. 整体取下大鼠心肺组织 剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血
迹。①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块 3 戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)
或4 戊二醛固定 ②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定 冻存管 液氮冰冻保存备用。
19. 各取样标本细致编号登记。
20. 大鼠废弃尸体处理。
[注意事项
1. 戊巴比妥钠 配成1%生理盐水溶液 平均每只大鼠用量1
2.6mg 1.2ml左右 。
2. 大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为5 10ml/kg。
3. 完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎 不易寻找肠系膜淋巴结 所以先取淋巴结。取下胃
肠道 由专人操作 取胃肠道及胃肠道取下后取材的操作器械单用一套。
4.取材时三人同时操作取一只大鼠 结合取材方案 多脏器并行取材缩短取材时间。③右肺组织置于无菌
1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。
大鼠原代心肌细胞提取方法
大鼠原代心肌细胞提取方法 原代心肌细胞培养是体外研究心血管疾病相关机制的主要手段和基本技术基础实验中，与细胞系相比，原代心肌细胞的形态及电生理方面更接近在体细胞，因此，培养原代心肌细胞的质量直接关系实验的进程及结果。 乳鼠原代心肌细胞分离须注意以下几点： 1. 鼠龄的选择：新生1-3d龄，最好半日龄。 新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长。建议选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养。 2.消化酶的选择：胰蛋白酶和胶原酶混合使用（0.4%胶原酶:0.05%胰酶=2:1）。 常用的消化酶有2种：胰蛋白酶和胶原酶，胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏，胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小。 3.消化程度的把握：组织由红转白呈半透明状态时，停止消化。 新生大鼠心肌细胞对消化酶极为敏感。消化不足，细胞聚集成团，无法得到单层细胞，不利于观察和后续实验；消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力；消化的适宜温度为35~37℃。 4.抑制成纤维细胞生长：加入BrdU，更换小牛血清。 分离出来的心肌细胞会伴有较多成纤维细胞，成纤维细胞具有较强增殖能力会干预心肌细胞的贴壁和增殖，需要尽量去除成纤维细胞。成纤维细胞较心肌细胞更容易贴壁，可以通过差速贴壁去除大部分成纤维细胞，但仍有少量成纤维细胞混杂于心肌细胞之中。溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)可干扰细胞的有丝分裂，故常规使用BrdU抑制成纤维细胞的生长。由于胎牛血清所含的促细胞有丝分裂的因子较多，BrdU很难完全抑制成纤维细胞的生长.改用小牛血清则可克服这种现象的出现，获得高达90％以上的心肌细胞。 5.培养液pH值：pH范围在7.2~7.4之间。 操作过程： 手持大鼠乳鼠（出生24h内），75%乙醇消毒皮肤，剪开胸部皮肤，再消毒1次，更换手术器械，弯镊提取心脏，置于盛有PBS（1:50双抗）的大皿中； 将心脏表面附着的大血管剪去，剪去心房，放入5ml灭菌离心管中充分剪碎成肉泥状； 加3ml左右胶原酶和1.5ml 0.05%胰酶充分吹匀，37℃消化8 min，自然沉淀，弃上清，再加3ml左右胶原酶和1.5ml0.05%胰酶，充分吹匀，37℃消化10min； 取上清，3000 rpm 5min，铺中皿加含有10%胎牛血清的DMEM培养基（记1），剩余沉淀中加入3ml左右胶原酶和1.5ml0.5%胰酶，充分吹匀，37℃消化10min； 重复4的步骤4-5次，直至组织块消化完毕，记（2-5） 放培养箱2到3小时待成纤维细胞贴壁后轻轻吹打培养基，所有的中皿上清移入离心管离心3000 rpm 5min，弃上清，加含有10%小牛血清的DMEM培养基以及Brdu（10mM）（1:80），铺中皿培养。 48h换液后可得心肌细胞。观察心肌细胞形态及搏动状况。
实验报告-大鼠
姓名：薛桂凤学号：132015200300 实验报告（二） 一、实验目的： 1.掌握大鼠的抓取和固定。 2.掌握大鼠的编号与标记方法。 3.掌握大鼠的常用实验方法。 4.掌握大鼠的常用麻醉方法。 5.掌握大鼠的安死术。 6.掌握大鼠的釆血方法。 7.了解小鼠的采尿、粪的方法。 8.了解小鼠各种脏器标本的采集方法。 二、实验器材：SD大鼠、电子称、手套、实验托盘、固定板、烧杯、注射器（3支）、 剪刀、镊子、灌胃针头、毛细管、酒精棉球、5%水合氯醛、生理盐水 三、实验内容 1.抓取：两种方法。第一种方法：右手食指和中指夹住大鼠颈部，使其头部固定，右 手拇指及无名指分别在大鼠前爪下抓住大鼠身体。第二种方法类似单手抓取小鼠的 方法，用右手拇指及其余四指并捏住大鼠颈部背部皮肤。 2.称重：小鼠放在烧杯中称重（去除烧杯重量），记录小鼠体重210g。 3.鉴别大鼠性别：观察生殖器雄性大鼠的阴囊非常明显。 4.编号：染色法：逆毛方向涂上有色斑点，顺序由左到右，由上向下，用两种颜色 可标记99只动物。 5.给药： （1）皮下注射小于1ml/100g（俯卧固定，左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮肤，阻力消失后回抽无血注入药物，拔针）（2）皮内注射小于0.1ml （麻醉后进行，先备皮）（俯卧固定，与皮肤平行刺入捏起的皮肤，阻力大，注射药物局部有皮丘后停留片刻后拔针）（3）腹腔注射0.01-0.02ml/g（仰面固定，在腹正中线两侧腹股沟平行的位置30-45°进针，挑起皮肤和肌肉，回抽无血，注药） （4）灌胃1-2ml/100g （大鼠固定身体呈一条直线，灌胃针头顺着上颚插入咽部，先少量注药证明未入气管后继续给药） 6.釆血：尾尖釆血法、眼眶静脉丛釆血法、心脏釆血法(麻醉后) 。 7.大鼠的采尿、粪的方法 （1）少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便 （2）长期大量采集：使用代谢笼 8.麻醉：根据大鼠体重计算麻醉药物用量5%水合氯醛按300mg/kg，给药，计算药 量为 1.26ml，ip 麻醉小鼠，观察小鼠麻醉期。 (1)全身麻醉的第一期（随意兴奋期）：出现运动和运动失调；35秒 (2)全身麻醉的第二期（不随意兴奋期）：是由意识完全丧失至深而规则的自动 呼吸开始时止;2分30秒 (3)全身麻醉的第三期：角膜反射由迟钝渐趋消失，翻正反射消失，疼痛反射 消失； 9.安死术：颈椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、 不间断地向后、略向上使劲拉，以致脊椎脱臼，脊髓与脑干断离而死亡。 10.解剖：观察大鼠的脏器解剖结构
大鼠心肌细胞原代培养
实验二大鼠CM的体外分离、培养及鉴定 1、材料与方法 1.1 材料 1.1.1实验动物新生3天清洁级Wistar大鼠乳鼠（中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心，动物许可证号：scxk2005-0001）。 1.1.2主要仪器与试剂 5％CO 2恒温培养箱（model TC2323 CO 2 incubator）；倒 置相差显微镜（XD-101 98010）；PH计（mettler toledo320-s）；立式自动电热压力蒸汽灭菌器（LDZX-40BI），上海申安医疗器械厂；SW-CJ-2FD型单人双面净化工作台；微量移液枪（法国Gilson）；血球记数板（上海市沪江医疗器材经营部）；HH-6数显恒温水浴锅；离心机（LDZ5-2）；75cm2培养瓶、50ml离心管（美国corning公司）；无菌手术器械；磁力搅拌器；电子天平板（BS1101S 德国）；一次性滤器（22μm, GILSON）；DMEM/F12培养基 (美国GIBCO)；特级胎牛血清（FBS， Hyclone）；青、链霉素（Hyclone）；D-Hank’s液（NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、NaOH、NaHCO3，苯酚红,南京化学试剂厂）；心肌肌钙蛋白T(Santa cruz) ;FITC连接的兔抗山羊IgG(Santa cruz);Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶(Sigma)；Triton-X-100(AMRESCO);BrdU(solarbio)。 1.2方法 于无菌操作下开胸取出心脏，仔细去除心脏相连大血管和心房组织（留心尖部），于4℃的D-Hank’S液中漂洗3～4次，以去除残存血液，眼科剪将心尖部组织剪成1 mm3碎块后，加入4 ml的0.0625%胰蛋白酶液，于37℃恒温水浴箱中消化3 min，然后弃上清。于剩余沉淀中加入混合消化液5 ml（0.0625％胰蛋白酶+0.1％Ⅱ型胶原酶），置37℃水浴消化8～10 min，其间振荡2～3次，静置后将上清液移入离心管中，加含10％胎牛血清预冷的DMEM/F12培养液终止消化。 随后用上述方法反复消化7～8次至组织块基本消化完毕。收集各次上清液并终止消化后，200目的尼龙网筛过滤去除残留组织块，以1000 r/min速度离心8 min，将所得的细胞与培养液混悬后，采用差速贴壁分离法去除心肌成纤维细胞每次2 h，将未贴壁的心肌细胞悬液吸出，调整细胞密度接种于培养板中。培养前3 d加入0.1 mmol/LBrdU抑制成纤维细胞生长。48 h首次换液，以后根据情况2～3 d换液。
实验报告-大鼠
姓名：薛桂凤学号： 实验报告（二） 一、实验目的： 1.掌握大鼠的抓取和固定。 2.掌握大鼠的编号与标记方法。 3.掌握大鼠的常用实验方法。 4.掌握大鼠的常用麻醉方法。 5.掌握大鼠的安死术。 6.掌握大鼠的釆血方法。 7.了解小鼠的采尿、粪的方法。 8.了解小鼠各种脏器标本的采集方法。 二、实验器材：SD大鼠、电子称、手套、实验托盘、固定板、烧杯、注射器（3支）、 剪刀、镊子、灌胃针头、毛细管、酒精棉球、5%水合氯醛、生理盐水 三、实验内容 1.抓取：两种方法。第一种方法：右手食指和中指夹住大鼠颈部，使其头部固定，右 手拇指及无名指分别在大鼠前爪下抓住大鼠身体。第二种方法类似单手抓取小鼠的 方法，用右手拇指及其余四指并捏住大鼠颈部背部皮肤。 2.称重：小鼠放在烧杯中称重（去除烧杯重量），记录小鼠体重210g。 3.鉴别大鼠性别：观察生殖器雄性大鼠的阴囊非常明显。 4.编号：染色法：逆毛方向涂上有色斑点，顺序由左到右，由上向下，用两种颜色 可标记99只动物。 5.给药： （1）皮下注射小于1ml/100g（俯卧固定，左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮肤，阻力消失后回抽无血注入药物，拔针）（2）皮内注射小于（麻醉后进行，先备皮）（俯卧固定，与皮肤平行刺入捏起的皮肤，阻力大，注射药物局部有皮丘后停留片刻后拔针） （3）腹腔注射（仰面固定，在腹正中线两侧腹股沟平行的位置30-45°进针，挑起皮肤和肌肉，回抽无血，注药） （4）灌胃1-2ml/100g （大鼠固定身体呈一条直线，灌胃针头顺着上颚插入咽部，先少量注药证明未入气管后继续给药） 6.釆血：尾尖釆血法、眼眶静脉丛釆血法、心脏釆血法(麻醉后) 。 7.大鼠的采尿、粪的方法 （1）少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便 （2）长期大量采集：使用代谢笼 8.麻醉：根据大鼠体重计算麻醉药物用量5%水合氯醛按300mg/kg，给药，计算药 量为，ip 麻醉小鼠，观察小鼠麻醉期。 (1)全身麻醉的第一期（随意兴奋期）：出现运动和运动失调；35秒 (2)全身麻醉的第二期（不随意兴奋期）：是由意识完全丧失至深而规则的自动 呼吸开始时止;2分30秒 (3)全身麻醉的第三期：角膜反射由迟钝渐趋消失，翻正反射消失，疼痛反射 消失； 9.安死术：颈椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、 不间断地向后、略向上使劲拉，以致脊椎脱臼，脊髓与脑干断离而死亡。 10.解剖：观察大鼠的脏器解剖结构
成年大鼠心肌细胞培养方法的建立和形态学观察
成年大鼠心肌细胞培养方法 的建立和形态学观察 北京心肺血管疾病研究所细胞免疫室 许秀芳 李温斌3 陈宝田3 吕燕宁 赵莉敏 陈 燕 提要:为探索稳定的成年大鼠心肌细胞的分离和培养方法,应用生物酶(5g/L胰蛋白酶及1g/L胶原酶)灌注法分离成年大鼠心肌细胞,用形态学及台盼蓝染色法鉴定分离的心肌细胞,并在光镜和电镜下观察和摄像记录。结果:心肌细胞的存活率为91.7%;存活的心肌细胞静止地贴在培养板底上,细胞完整,呈杆状,长宽比约为4～6∶1。结果提示:该方法是比较理想的心肌细胞培养法。 关键词:成年大鼠心肌细胞;胰蛋白酶;胶原酶;分离技术 中图分类号:Q253;R322.1+1 自从1953年Durrows和Moscona首次成功地应用生物酶分离出鸡胚心肌细胞后[1],其分离培养技术不断发展,逐渐发展为3种分离方法:离体心脏灌注法、心肌细胞浸泡法和贴块培养法。对动物而言,离体心脏生物酶灌注法分离心肌细胞的质量及数量最佳。成年心肌细胞的分离较幼年及新生动物心肌细胞的分离更为困难,但成年心肌细胞做为一种生物学实验工具是其他心肌细胞不可替代的。国内仅有少数单位分离培养成功成年动物心肌细胞。1992年1月至1998年12月,我们建立了成年大鼠心肌细胞分离培养方法并进行了形态学观察。 1 材料和方法 1.1 材料 实验动物为成年Wistar大鼠,体质量150～200g,由本研究所实验动物室提供。 DM EM培养液、胰蛋白酶均购自美国GIBC公司;胶原酶购自美国Sigma公司;牛血清白蛋白购自美国BM公司;胎牛血清由金华生物制品公司提供;淋巴细胞分离液由中科院血液学研究所出品;安贞Ⅱ号心脏停跳液由本院体外循环组提供。 实验药物及试剂的配制:2%胎牛血清20 mL加DM EM培养液100mL,青霉素100mg/ L,链霉素100万U/L,p H7.2～7.4,过滤除菌。酶消化液:胶原酶0.1g加胰蛋白酶0.5 g、牛血清白蛋白1g,加入DM EM培养液100 mL,于使用前配制。 1.2 方法 采用离体心脏灌注法分离心肌细胞[2,3]。 Wistar大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉(含1∶200肝素45mg/kg),麻醉满意后胸腹部用75%乙醇消毒,“U”字形切开腹壁,快速剪断左右前腔静脉及后腔静脉,经升主动脉根部灌注4℃高钾安贞Ⅱ号心脏停跳液30mL,待心脏停跳呈灰白色后取下心脏,接在Langendorff 灌注架上,按下列步骤进行实验: 1)清洗心脏:用无Ca2+、Mg2+的D2Hank 液灌洗心脏5min即可;目的是解离桥粒和细胞间连结。由于Ca2+在心肌细胞连结上起重要作用,用无Ca2+的液体灌洗心脏能带走大量的Ca2+,心肌细胞间糖蛋白被破坏,桥粒和连结随之解离。 2)溶解细胞外基质:应用酶消化液37℃灌注,保持灌注压在4.90～7.84kPa(50～80 cmH2O)。 3)心肌细胞的释放:经一定时间(30～90 min)酶消化后,心肌细胞外基质大部分被消化,但细胞间连结如缝隙连结并没有完全断开,心脏仍保持大体形态,松弛状,机械作用才能将细胞分开。见心脏变软、呈暗红色,取下心脏,轻揉搅拌几分钟后剪下心室肌,剪成1mm3大 2000年 6月第21卷 第2期 首都医科大学学报 Journal of Capital University of Medical Sciences J un.2000 Vol.21 No.2 收稿日期:1999203209 3首都医科大学附属北京安贞医院心外科
病理生理实验报告
实验一组织晶体渗透压改变在水肿发 生中的作用（水肿） 实验目的：通过实验了解组织晶体渗透压的改变在水肿发生中的意义，加深对水肿发生机理的理解。 实验动物：蟾蜍2只，要求体重、大小相仿。 器材与药品： 200克电子天平1台，盛水玻璃缸2个，2m1注射器连4号针头2支，脱脂棉球、纱布块适量。0.65％氯化钠液和20％氯化钠液各10ml。实验方法： 1. 取蟾蜍2只分别称重，注意观察背部外形。 2. 向一只蟾蜍背部淋巴囊内注入0．65％氯化钠液(即蛙生理盐水)2 m1，向另一只蟾蜍背部淋巴囊内注入20％氯化钠液2ml(蟾蜍皮下淋巴囊分布见图2－1)，然后分别放入装有水的玻璃缸内。 3．1小时后由水中取出蟾蜍，擦掉体表浮水后分别称重，同时仔细观察背部外形改变。 4. 解剖蟾蜍：由椎骨孔破坏神经系统。重点观察背部淋巴囊的变化。解剖观察其它脏器和解剖结构。 实验结果：将观测到的各种实验结果记入下表内 注前体重注前背部外 形注后体重注后背部外 形 注0.65％氯 化钠 141.2g 正常平坦146.3g 正常平坦
注20％氯化 141.8g 正常平坦169.5g 变肥 钠 结果分析：实验中这两只蟾蜍分别注射了不同浓度的氯化钠溶液，组织晶体渗透压升高，两只都有一定的吸水能力，注射低浓度氯化钠溶液的青蛙吸水较少，体重只有轻微的增长，体型无明显变化；注射高浓度氯化钠溶液的青蛙吸水较多，体重有大幅度的增长，体型出现明显变化。结果表明晶体在体内的浓度越高，吸水性越强。 心得：
实验二缺氧 实验目的：通过复制外呼吸性缺氧、血液性缺氧及组织中毒性缺氧的动物模型。 实验动物：成年小白鼠4只． 器材与药品： 1．外呼吸性缺氧：带有橡皮塞的250毫升广口瓶1只(见图3—1)，搪瓷盘1只、镊子、剪子各2把，100g电子天平1台。钠石灰(NaOH.CaO)10g，凡士林1瓶。 2．血液性缺氧：带有管道瓶塞的250m1广口瓶和三角烧瓶各2只，酒精灯1盏，三角架3个，充满一氧化碳的皮球胆1只，弹簧夹4个，lml注射器1支。甲酸、浓硫酸各300ml，2％亚硝酸钠溶液10ml 3．组织中毒性缺氧：1 m1注射器1支。0.04％氰化钾溶液。 实验方法： 一、外呼吸性缺氧 1.取小白鼠重只称重后放入广口瓶内，瓶内预先加入钠石灰5g。观察动物一般状况，如呼吸频率、呼吸状态，皮肤、粘膜色彩、精神状态等。 2.旋紧瓶塞，用弹簧夹夹闭通气胶管，防止漏气。记录时间，观察上述各项指标的变化，直至动物死亡。待本次实验内容全部完成之后，一起剖检动物，对比观察血液颜色的改变和其它变化（以下皆同)。 二、血液性缺氧 (一)一氧化碳中毒
实验大鼠取材方案
实验大鼠取材方案 [取材内容] 1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。 2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。 3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。 4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻 保存备用。 5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻 保存备用。 6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保 存。 9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液 氮冰冻保存备用。 10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保 存备用。 13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存 备用。 14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液） [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、
病理生理实验报告
实验一组织晶体渗透压改变在水肿发生中 的作用（水肿） 实验目的：通过实验了解组织晶体渗透压的改变在水肿发生中的意义，加深对水肿发生机理的理解。 实验动物：蟾蜍2只，要求体重、大小相仿。 器材与药品： 200克电子天平1台，盛水玻璃缸2个，2m1注射器连4号针头2支，脱脂棉球、纱布块适量。0.65％氯化钠液和20％氯化钠液各10ml。 实验方法： 1. 取蟾蜍2只分别称重，注意观察背部外形。 2. 向一只蟾蜍背部淋巴囊内注入0．65％氯化钠液(即蛙生理盐水)2 m1，向另一只蟾蜍背部淋巴囊内注入20％氯化钠液2ml(蟾蜍皮下淋巴囊分布见图2－1)，然后分别放入装有水的玻璃缸内。 3．1小时后由水中取出蟾蜍，擦掉体表浮水后分别称重，同时仔细观察背部外形改变。 4. 解剖蟾蜍：由椎骨孔破坏神经系统。重点观察背部淋巴囊的变化。解剖观察其它脏器和解剖结构。 实验结果：将观测到的各种实验结果记入下表内 注前体重注前背部外 形注后体重注后背部外 形 注0.65％氯 化钠 141.2g 正常平坦146.3g 正常平坦
注20％氯化 141.8g 正常平坦169.5g 变肥 钠 结果分析：实验中这两只蟾蜍分别注射了不同浓度的氯化钠溶液，组织晶体渗透压升高，两只都有一定的吸水能力，注射低浓度氯化钠溶液的青蛙吸水较少，体重只有轻微的增长，体型无明显变化；注射高浓度氯化钠溶液的青蛙吸水较多，体重有大幅度的增长，体型出现明显变化。结果表明晶体在体内的浓度越高，吸水性越强。 心得：
实验二缺氧 实验目的：通过复制外呼吸性缺氧、血液性缺氧及组织中毒性缺氧的动物模型。 实验动物：成年小白鼠4只． 器材与药品： 1．外呼吸性缺氧：带有橡皮塞的250毫升广口瓶1只(见图3—1)，搪瓷盘1只、镊子、剪子各2把，100g电子天平1台。钠石灰(NaOH.CaO)10g，凡士林1瓶。 2．血液性缺氧：带有管道瓶塞的250m1广口瓶和三角烧瓶各2只，酒精灯1盏，三角架3个，充满一氧化碳的皮球胆1只，弹簧夹4个，lml注射器1支。甲酸、浓硫酸各300ml，2％亚硝酸钠溶液10ml 3．组织中毒性缺氧：1 m1注射器1支。0.04％氰化钾溶液。 实验方法： 一、外呼吸性缺氧 1.取小白鼠重只称重后放入广口瓶内，瓶内预先加入钠石灰5g。观察动物一般状况，如呼吸频率、呼吸状态，皮肤、粘膜色彩、精神状态等。 2.旋紧瓶塞，用弹簧夹夹闭通气胶管，防止漏气。记录时间，观察上述各项指标的变化，直至动物死亡。待本次实验内容全部完成之后，一起剖检动物，对比观察血液颜色的改变和其它变化（以下皆同)。 二、血液性缺氧 (一)一氧化碳中毒
动物实验报告
动物实验报告 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
实验动物学实验报告 学院： 学号： 姓名 时间： 实验一：小鼠实验 一、实验目的 1、掌握小鼠抓取、固定的基本方法； 2、掌握小鼠的雌雄鉴别方法； 3、掌握小鼠的标记方法； 4、掌握小鼠的基本采血技术； 5、掌握小鼠的常用给药方法； 6、掌握小鼠的解剖方法，熟悉内部脏器的自然位置； 二、实验材料 1、实验动物：每组两只雌鼠，两只雄鼠； 2、实验器械及试剂：鼠笼；小鼠固定器和小鼠固定板；眼科剪；眼科镊；解剖刀；1ml 注射器；毛细玻璃管；灌胃针；苦味酸染料；葡萄糖液；2%水合氯醛；
三、实验内容及方法 1、小鼠的抓取和固定 抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。 2、小鼠的雌雄鉴别 雄鼠的阴囊明显，雄鼠可见阴道开口和五对乳头。幼鼠或仔鼠则主要从外生殖器与肛门的距离判定，近者为雌，远者为雄。另外，雌鼠肛门和生殖器之间有一无毛小沟，而雄鼠则在肛门和生殖器之间长毛。 3、小鼠的标记方法 1）耳孔法 用耳号钳在耳上打洞或者用剪刀在耳边缘剪缺口，左耳为十位，右耳为个位。 2）剪趾法 适用于出生一周以内新生仔鼠； 3）染色法
用毛笔将苦味酸涂在动物的不同部位，注意逆着毛发生长方向刷。 4、小鼠的基本采血 1）剪尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并历出鼠尾，将鼠尾在45℃温水中浸泡数分钟，也可用酒精棉球涂擦，使局新血管扩张。将鼠尾擦干，再用刀片剪去1-2mm，让血液滴入盛器或直接用吸取，同时自尾根部向尾尖按摩。取血后，先用棉球压迫止血并立即用6％液体火棉胶涂于尾巴伤口处，使伤口外结一层火棉胶薄膜，保护伤口。也可采用切割尾静脉的方法采血，三根尾势脉可交替切割，并自尾尖向尾根方向切割，每次可取～血，切割后用棉球压迫止血。这种采血方法在大鼠进行较好，可以较长的间隔时间连续取血，进行血常规检查。 2）眼眶后静脉丛取血 当需中等量的血液，而又需避免动物死亡时采用此法。用左手固定鼠，尽量捏紧头部皮肤，使头固定，并轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼球充分外突（示眼眶后静脉丛充血），右手持毛细玻璃管，沿内眦眼眶后壁向喉头方向旋转刺入。刺
大鼠心肌细胞说明书
大鼠心肌细胞说明书 一．产品简介 1、产品名称：大鼠心肌细胞Rat myocardial cells 2、组织来源：大鼠胚胎心室肌组织 3、产品规格：25cm2培养瓶 4、细胞简介： 大鼠心肌细胞分离自大鼠胚胎心脏组织，细胞呈多边形等不规则形状，2天以后大部分伸出伪足称巴掌状部分心肌细胞会出现搏动，成熟的心肌细胞增值缓慢或不增值。体外培养的人心肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 本公司生产的人心肌细胞采用混合酶解法制备而来，细胞总量约为5×105个/支，细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 5、培养基信息： 1）、培养基类型：DMEM/F12培养基 2）、添加因子：FBS, Penicillin, Streptomycin等 二.使用方法 客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。 1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3h，以稳定细胞状态； 2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养； 3、细胞传代 1）吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化； 3）用吸管轻轻吹打混匀，按1:2适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。 三．注意事项 1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月；
动物实验报告
动物实验（小鼠）的一般操作技术 实习日期：2007—11—13 一目的和要求： 通过实际操作，使学生掌握实验的一般操作方法，包括动物的抓去和固定、编号被毛的去除给药途径麻醉采血和处死等方法。 二实习内容： 1 实验动物的抓取 2 实验动物性别的鉴定 3 实验动物编号的标记方法 4实验动物被毛的去除 5 实验动物的给药途径和方法 6 实验动物的麻醉 7实验动物的采血 8 实验动物的处死方法 9 解剖 三实验的方法 1 小鼠的抓取：抓取时先用手将鼠尾提起，放在实验台上，轻轻拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈部皮肤，将鼠置于左手中心，用左手无名指和小指按住尾巴和后肢，即可做其他实验操作作用。 2 小鼠性别的鉴定：抓取小鼠后，观察动物肛门与生殖器之间的距离。距离远的为雄性，距离近的为雌性。成熟的雄性小鼠可看到小鼠睾丸的轮廓。 3 小鼠编号的标记方法：用被毛染色法做小鼠编号。用苦味酸（黄色），一般左前肢为1，左侧腹部为2，左后肢为3，头颈部为4，背部为5，尾根部为6，右前肢为7，右腹部为8，右后肢为9。用两种颜色可以染到99。 4 小鼠被毛去除：有剪毛法，拔毛法，剃毛法，用硫化钠脱毛法。 5 给药途径和方法：给药途径有经口灌胃法，经呼吸道吸入，经皮肤吸入和注射给药法。用一支特制的灌胃针进行灌胃，小鼠一般给1.5ml以下。用注射器抽好液体，然后抓取小鼠，针头延侧角通过食管进入胃内，然后将液体注入。 6 小鼠的麻醉：麻药有挥发性的和非挥发性两种。给药途径有吸入性麻醉，注射给药。小鼠一般用腹部麻醉的方法。用水合氯醛300ml／kg，根据小鼠的体重给药0.25ml。抓取小鼠后，使针头和腹部成30度的角，刺入腹腔，回抽若无回血或者肠内容物可以注入。注入麻药5分钟后，小鼠失去知觉。 7 小鼠的采血的方法：有静脉采血法，尾部采血法，眼眶静脉采血法和心脏采血法。将小鼠装入固定盒中，露出尾部，用二甲苯图擦，使尾静脉充盈。用锋利的刀片切断一根尾静脉即可用毛细管采血，也可用细注射器从尾静脉采血。 8 小鼠的处死方法：用颈椎脱臼的方法或者注射过量的麻药使小鼠死亡。 9 解剖：从腹部开始，查看腹部脏器，以肝脏胃脾肾输尿管姨小肠大肠膀胱前列腺性腺顺序。然后再看胸部，看到肺脏心脏胸腺等器官，并在直视的情况下进行了心脏的采血。然后再看颈部的解剖。最后解剖头部。 四讨论和结论： 通过此次实验，我们学到了实验动物的一般操作技术，如抓取和固定、编号被毛的去除给药途径麻醉采血和处死等方法。为以后进入临床进行实验研究做好了初步的准备。
大鼠的区别
SD大鼠: 生长快，繁育性能好，大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。该品系对性激素敏感，对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。 一般生物学特性 繁殖性能：产仔率：92～95％；平均窝产仔数：9.96～12.07只；胎间隔：28～52天；离乳存活率：95～98％。 Wistar大鼠：Wistar大鼠由美国费城Wistar研究所育成。常用的既有近交系，也有远交群。其被毛呈白色，特征为头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长。Wistar大鼠性情温顺，性周期稳定，早熟多产，平均每窝产仔10只左右，生长发育快，乳腺癌发病率很低，对传染病抵抗力强。 近交系动物：近交系是指近交程度相当于20代以上连续全同胞或亲子交配，近交系数达98.6%以上、群体基因达到高度纯合和稳定的动物群。近交系动物的育成是实验动物科学的一大进步，近交系动物的应用大大推动了遗传学、肿瘤学、免疫学等学科的发展。 远交群：一般情况下，远交系和封闭群作为和近交系相对的概念出现时，我们认为是一回事，但我们一般不用远交系这个概念而采用相对正式不会引起误解的封闭群这个概念，因为封闭群是指动物的一个种群在五年以上不从外部引进新种，仅在固定场所的一定群体中保持繁殖的动物群，其个体之间会存在一定的亲缘关系，而“远交系”只是通常供应使用的、保持于各种饲养系统(可能来源于不同的种群)的非近交群体而已，其个体之间可能不存在一点亲缘关系，所以封闭群和远交系从严格意义上讲并不是一回事，说到底其实是对一个种群培育过程的定义问题，封闭群这个概念更能定义这个过程而不会引起误解。 为什么白化？ 实验动物Wistar大鼠毛色：白化。 实验动物Wistar大鼠主要特性： ①头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长。 ②性周朝稳定，繁殖力强，产仔多，平均每胎产仔在10只左右，生长发育快。10周龄时雄鼠体重可达280～300g，雌鼠达170-260g。 ③性情温顺。
大鼠心肌梗死模型图解
大鼠心肌梗死模型制作图解 庄瑜制作 南京市第一医院 南京医科大学附属南京第一医院南京市心血管病医院心胸外科 https://www.wendangku.net/doc/bb1751104.html,/
制作前准备 1．器械：动物呼吸机，开胸制作心梗模型，维持呼吸至关重要。虽然据说某些牛人可以不用呼吸机，但是我想这是经验积累的结果，开始时必然要用；况且需要看此说明的人应该没有牛到这个程度。当然，如果你经费异常充足，不在乎死亡成千上万的大鼠也可以。 显微器械，最主要的是针持，大鼠胸腔、心脏均很小，常规器械无法进入胸腔缝扎。其他手术器械以眼科器械为主。 2．动物：应选择成年健康大鼠，耐受性较好。最重要的是要充分利用每一只动物，包括死亡的大鼠。许多人都知道制作大鼠模型需要多练习，但是练习不是买一大批大鼠，不停地缝扎，然后不停地扔掉死的大鼠；当然，制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。练习的前提是对大鼠解剖及操作过程的熟悉，如果可能的话，最好先找一份大鼠的解剖图谱，熟悉手术区域的解剖结构；同时研究实验流程，熟悉每一个实验步骤。大鼠死亡后，不要急着扔掉，利用它练习每一个你不熟悉的操作步骤，直到熟练为止。 3．实验者：实验者必须具有一种平和的、耐得住寂寞的心态，制作模型需要时间，尤其是早期，需要耐心、仔细的摸索；必须对每一个步骤进行认真地研究。最熟练的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分钟的时间，加上准备及扫尾的时间，制作十只模型就需要一天的时间，如果你废寝忘食多用用功也可能做到15只左右，这样一天下来腰酸背痛是必然的，你能坚持多久？不熟练的话，一只就要两、三个小时；同时还要看着大鼠在你的手中死亡，这是很揪心的事情。因此，实验者必须具备良好的心态，急于求成、难耐寂寞者不适合做此实验。 本人系气管切开插管，缝扎LAD制作模型。亦有人经口插管，液氮冷冻制作模型；不在本人讨论范围之内，哪位有经验的话可以传上来，一起讨论。最后祝各位早日成功！！
实验动物学实验报告大鼠,小鼠,小鼠的基本实验操作,大鼠的基本实验操作
实验一小鼠的基本实验操作 一、实验目的:通过实际操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓拿、标记、给药(灌 胃、腹腔注射、皮下、肌肉、尾静脉注射)、取血(眶后静脉丛,摘眼球)、脊椎脱臼法处死、大体解剖。 二、实验动物:昆明小鼠2只(1雌1雄) 三、实验步骤 1、抓取与固定,标记 2、去毛 3、给药:消化道、腹腔注射、尾静脉注射 4、取血:眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法 5、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉 6、处死:脊椎脱臼法 7、解剖: 雄性:睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,胶质状,透明) 雌性:双角子宫、卵巢 肾上腺、胆囊、甲状腺、胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏、甲状腺 四、实验结果 1、抓取与固定标记: 抓取:抓小鼠的尾根部 固定:抓住小鼠的尾根部,让小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇 指与食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤,小指与无名指将尾巴固定在手掌面。并标记: 2、灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃针,沿一侧口角进针,紧贴咽后壁,头后仰以便伸直消化道,进针2/3后灌生理盐水0、5ml 3、注射给药: 腹腔注射: 从下腹部的两侧进针 ,进针时针与腹部成45°。进针后稍微晃动针,如无粘滞感则可注射药物 尾静脉注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指与拇指将尾拉直,食指托住尾部,在尾动脉位置进针注射0、5ml生理盐水。注射完毕拔出针头,用无菌棉球压迫止血。 4、采血 从眼角内侧0、5cm处进针 眼球摘除法:左手抓取用固定小鼠,右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除,头朝下,眼眶内血迅速流出。 5、麻醉: 0、5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重22g,按100mg/kg的药量给药,2分钟麻醉成功 6、处死: 脊椎脱臼法:按住头部,将尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死 7、解剖: 雄性:寻找到睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺 雌性:双角子宫、卵巢 3、7、2 肾上腺:米粒大小 胰腺:位于胃下方,类似于脂肪组织,浑浊状 3、7、4 ,胆囊:芝麻大小,浅绿色,半透明,
新生大鼠心肌细胞培养技术
基金项目:新疆石河子大学科学技术研究发展计划项目(ZRK X2006 Q04) 新生大鼠心肌细胞培养技术 新疆石河子大学医学院(832002) 李润琴 慕晓玲 摘 要 目的 探讨新生大鼠心肌细胞的分离、培养方法。方法 取1~3d 龄新生大鼠的心室肌细胞,用胶原酶!分离心肌细胞,离心收集心肌细胞,差速贴壁法纯化后培养于DM EM 培养基。显微镜下鉴定心肌细胞的纯度和形态结构,锥虫蓝染色检查心肌细胞成活率。结果 心肌细胞纯度为96%,平均成活率95 43%,并出现同簇细胞的同步跳动。结论 该方法简单有效,为研究心肌细胞的人员提供了一种实验手段。 关键词 细胞培养技术; 心肌; 大鼠 Culture method of the myocardial cell in Neonate Rats LI Run qin,M U X iao lin.M edical College of Shi hez i Uni versity ,X inj iang 832002,China Abstract Objective T o find an easy way to separ ate and cultur e myocardial cells of neonate rats.Methods T o obtain ventr icular myocardium of neonate rats about 1~3years o ld.We separate myo cardial cell w ith collag enase I,and collect myocar dial cell w ith centrifug alization.M yocar dial cell was cultur ed in DM EM and was separated by the t ime of adherence.W e observed the structure of myocar dial cell from lig ht microscope and stained living my ocardial cell with trypan blue.Results W e find 96percent cells ar e myocardial cells and 95.43percent ar e alive.A ll the myocardial cells were jumping synchronously.C onclusion T his is an effective w ay to study myocardial cells. Key words Cell culture techniques; M yocardial; Rats 原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型, 被广泛地应用于心血管疾病的研究中。我们经过长期摸索总结出一套简便、有效的大鼠心肌细胞的培养技术,为研究心肌细胞的人员提供一种实验手段[1]。1 材料和方法 1 1 主要试剂和仪器 1 1 1 试剂:小牛血清:购自Sigma 公司。DM EM (Dulbcc co ?s M odified Eagle M edium)合成培养基:购自Sigma 公司,含10%的小牛血清,100万U 青霉素,100万U 链霉素。胶原酶!0 8g/L:购自Sig ma 公司(现用现配)。磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered saline,PBS ):购自Sigma 公司。锥虫蓝:购自G ibco 公司,加无菌三蒸水配成浓度0 04%备用。 1 1 2 仪器:超净工作台,CO 2培养箱,倒置相差显微镜,离心机等。所有手术器械高压灭菌。玻璃品均强酸浸泡过夜,流水冲洗20遍,蒸馏水冲洗3遍,烤干后高压灭菌备用。 1 2 实验动物 Wistar 大鼠,1~3d 龄,新生大鼠心肌细胞在出生后3d 内具有部分增殖能力,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长。1 3 心肌细胞的制备和培养 取一窝1~3d 龄新生大鼠,不用麻醉和处死,用手固定住四肢,75%的酒精消毒皮肤,无菌眼科剪在剑突上一肋处入剪(注意避免剪破消化道预防污染)。开口0 5cm,心脏自然跳出,将心尖部组织剪下迅速置于预冷的不含Ca 2+、M g 2+的PBS 中,反复冲洗3遍,洗去残留的血细胞,将其剪成0 5~1mm 3大小的组织块,放入锥形瓶中[2],加入8mL 0 8g/L 的胶原酶!,在37#水浴,磁力搅拌器转速为100r/min,消化10min 。将黏附在搅拌子上的心肌组织吹散,当组织液由红转白呈半透明状态时,应停止消化。用吸管吸取第一次消化后的上清液弃去,再次以同上的方法消化3次,收集以后每次的消化后的上清液,加适量含10%的小牛血清的DM EM 培养基,终止胶原酶!对心肌细胞的继续作用。将收集到的上清液在500r/min 的离心机上离心10min,弃去上清液,用PBS 吹散沉淀细胞,同条件下再次离心,弃上清,然后加含10%的小牛血清,100万U 青霉素,100万U 链霉素,p H =7 2的DM EM 培养基制成细胞悬液接种于培养瓶中,放入37#,5%CO 2培养箱中静置培养90min 后,轻轻振摇后倾出尚未贴壁的心肌细胞,重新接种。将纯化的心肌细胞以1 5?106/mL 接种于预先用50mg /L 多聚赖氨酸涂布的25mL 培养瓶中,每瓶3mL ,放入37#,5%CO 2培养箱中培养,每48h 更换1次培养基,取培养72h 的单层细胞进行实验。1 4 心肌细胞质量评价 1 4 1 心肌细胞纯度鉴定[3]:显微镜下观察、计数纯化后的细胞,心肌细胞成圆型,成纤维细胞成梭形,计算心肌细胞纯度=心肌细胞数/(心肌细胞数+成纤维细胞数)?100%。
呋塞米对大鼠的利尿作用(实验报告)【定稿材料】
呋塞米对大鼠的利尿作用 目的：利尿药是一种直接作用于肾脏，增加电解质和水的排出从而使尿量增加的药。其中呋塞米是这种药代表，也是一种强效的利尿药。在学习了利尿药的利尿机制之后，以本实验来验证性的观察呋塞米对麻醉大鼠以及清醒大鼠的利尿作用，从而加深对利尿药及其机制的理解，并掌握麻醉和清醒动物的利尿方法。 原理：呋塞米是一种高效的利尿药，其作用机制为：与肾小管髓袢升支粗短上皮上的Na+——K+——2Cl-同向转运体选择性的结合，从而抑制了其转运能力，因此，Na和Cl在肾小管处的重吸收就受到抑制，因此尿浓缩功能受到影响，从而排出大量几乎等渗的尿液。 同时，预先用1%NaCl对实验大鼠进行水负荷可以使实验现象更加明显。对清醒大鼠的利尿实验应采取代谢笼法。 一呋塞米对麻醉小鼠的利尿作用 1 材料与方法 1.1 实验动物：雄性大鼠 1.2 实验药品：乌拉坦麻醉药，1%呋塞米，生理盐水 1.3 实验器材：手术剪，止血钳，眼科剪，烧杯，刻度试管，导尿管，丝线，缝针，试验台，灌胃针。 2 实验方法： 1）取一只正常大白鼠，称重，然后用生理盐水按照20ml/kg
的比例进行灌胃处理。 2）腹腔注射乌拉坦1.2g/kg进行麻醉。麻醉好后将大鼠固定在大白鼠台上，取仰卧位，然后从颈部作一纵切口，分离出一侧颈外静脉，并做好静脉插管。 3）做腹部切口，暴露膀胱，并以荷包蛋缝合的方式对膀胱进行插管，并排空膀胱。 4）于颈静脉插管处注射生理盐水1ml/kg，并收集20分钟尿液流出量作为正常值。 5）同样方法注射呋塞米1ml/kg，并收集20分钟尿液。比较尿量的变化。 3 实验结果：如下。 分别注射生理盐水和呋塞米20分钟收集到的尿量 组号生理盐水呋塞米 1 0.45 2.5 2 0 1 3 0 0.28 4 0 2.1 5 1 3 均数0.29 1.776 标准差0.442 1.114 p值0.0151
试验用大鼠TheLaboratoryRAT
實驗用大鼠The Laboratory RAT 一、分類(Taxonomy ) (一)舊世界大鼠(Old World Rats) 1. 挪威種大鼠(Rattus norveaicus)－常見的實驗大鼠，實驗用大鼠之始祖，也就是常見之 大棕色鼠，可能發源自亞洲。 2. 大鼠(Rattus rattus)－常見之黑大鼠，即所稱的屋頂大鼠或閣樓大鼠。 3. 玻里尼西亞大鼠(Rattus exulans)－玻里尼西亞大鼠 4. Thamnomys srudaster－樹大鼠；為Plasmodium berghei的天然宿主，可作為瘧原蟲 研究。 5. Mastomys natalensis－具有一些特異的特徵 (1)其具有多對乳頭(8至12對) (2)為小型的大鼠；成熟時體重在40－80克 (3)雌鼠有發育良好之前列腺 (4)目前已知是引起拉薩熱之arena病毒唯一天然的宿主 (二) 新世界大鼠(New world Rats) 1. 棉花大鼠(cotton rats)
2. 木頭大鼠[wood rats ( pack trade rats )(貨櫃大鼠)] 3. 棍棒大鼠( cane rats) 4. 稻米大鼠(rice rats) 5. 攀爬大鼠(climbing rats) 6. 沙鼠(sand rats) 7. 袋鼠大鼠(kangaroo rats) 二、歷史背景 大鼠可能是經由跟隨人類從亞洲旅行到歐洲及美洲。幾乎全世界研究所使用之所有品系皆來自美國。大鼠是第一種為研究所馴養之哺乳動物。費城威斯達(Wistar Institute)研究所是全世界最大的實驗用大鼠種原庫。Henry Herbert Donaldson是第一個將實驗用大鼠標準化的人。Helen Dean King為第一個在1909年進行實驗用大鼠近親繁殖的人。 三、大鼠的優點 1. 容易取得 2. 遺傳穩定 3. 價錢便宜不貴 4. 處理容易 5. 聰明，適應能力強 6. 生理學上已知道的部分很多 7. 菌株已知 8. 對其所罹患疾病相當了解 9. 可作為許多疾病的動物模式 四、利用實驗大鼠進行的研究