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浙江大学生物化学2003-2007年参考答案

2003、真题解析

1、简述SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得基本原理，你使用该技术分离和检测过何种物质？主要操作步骤有哪些？

该题是实验操作中的常考题

SDS－PAGE：当SDS与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，从而掩盖了天然蛋白质分子间的电荷差别。与此同时蛋白质在SDS的作用下结构变得松散，形状趋向一致，所以各种SDS -蛋白质复合物在电泳时产生的泳动率差异，只反映了分子量的差异，即纯利用分子筛效应，按蛋白质分子量大小进行分离，分子量越大移动越慢。

●应用

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以用于未知蛋白分子量的测定，在同一凝胶上对一系列已知分子量的标准蛋白及未知蛋白进行电泳，测定各个的标准蛋白的电泳距离（或迁移率），并对各自分子量的对数（log Mr）作图，即得到标准曲线。测定未知蛋白质的电泳距离（或迁移率），通过标准曲线就可以求出未知蛋白的分子量。

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的灵敏度，一般只需要不到微克量级的蛋白质，而且通过电泳还可以同时得到关于分子量的情况，这些信息对于了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于单链ＤＮＡ、寡核苷酸片断以及蛋白质亚基，膜蛋白、肽类等物质的分析，还可以用于研究大分子的折叠结构等方面。

●基本操作

SDS-PAGE的基本操作和聚丙烯酰胺凝胶电泳相近，其支持介质都是聚丙烯酰胺凝胶，因此在制胶、加样和电泳仪器都都相同或相近，区别的是SDS-PAGE需要有标准蛋白溶液及供试品溶液的制备，样品预先需要用SDS处理。一般采用取标准蛋白，加水制成每1ml中含2～5mg的溶液，与水解液(取尿素21.6g和十二烷基硫酸钠0.04g，溶于40ml水中)1∶3混合，置冰箱中过夜。供试品照上述方法配制。此外，在电泳结束以后，需要对相对迁移率和分子量进行计算将电泳脱色后的区带用卡尺或用扫描定位法测量染料移动的距离、染色前胶条长度、蛋白移动距离和脱色后的胶条长度。

2、质粒是基因工程中最常用得载体，为获得某种质粒(如pUC18)DNA，请你设计一个简单得实验过程(步骤)。

大肠杆菌质粒DNA的提取（碱裂解法）

此方法适用于小量质粒DNA的提取提取的质粒DNA可直接用于酶切PCR扩增。

1. 取1.5ml细菌培养物于EP管中，4000rpm离心1分钟，弃上清液，使细菌沉淀尽

量干燥；

2. 将细菌沉淀重悬于用冰预冷的100 μl溶液I (50 mmol/L葡萄糖，10 mmol/L EDTA

pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0) 中，剧烈振荡；

3. 加入200 μl新配制的溶液II(0.2 mol/L NaOH，1％SDS（m/v）)，盖紧EP管口，

快速颠倒离心管5次，以混合混合物，确保离心管的整个内表面与溶液II接触，不要涡旋，置于冰浴中；

4. 加入150 μl预冷溶液III(每100 ml 的溶液III中含60 ml 5 mol/L 乙酸钾，11.5

ml冰乙酸，28.5 ml H2O)，盖紧EP管口，反复颠倒数次，使溶液III在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上3~5分钟；

5. 在最大转速下离心5min，取上清液于另一新EP管；

6. 用两倍体积的乙醇室温沉淀双链DNA，振荡混合于室温放置2分钟，最大转速离心

5分钟；

7. 小心吸去上清液，将离心管倒置于滤纸上，以使所有液体都流出，在将附于管壁的

液滴除尽；

8. 加1ml 70％乙醇洗涤沉淀，振荡混合，用12,000g离心2分钟，弃上清，将开口

的EP管置于室温使乙醇挥发，直至EP管中内没有可见的液体存在（5～10分钟），用适量的ddH2O溶解；

9. 用0.5μl的RNase 37℃温育5~10分钟；

10. 电泳鉴定。

3、谈谈你所了解的生物化学近年来的新进展。

自己发挥，比如：蛋白质结构与功能，RNA领域（RNA干扰），酶工程，分子病和遗传病的研究等等。

没有再出过，相当于送分题

4、DNA双螺旋模型是哪年由谁提出的？请简述其基本内容。为什么说该模型的提出是分子生物学发展史上的里程碑，具有划时代的贡献？

DNA的双螺旋结构模型是在1953年由Watson和Crick两个人提出的。

按Watson-Crick模型，DNA的结构特点有：两条反相平行的多核苷酸链围绕同一中心轴互绕；碱基位于结构的内侧，而亲水的糖磷酸主链位于螺旋的外侧，通过磷酸二酯键相连，形成核酸的骨架；碱基平面与轴垂直，糖环平面则与轴平行。两条链皆为右手螺旋；双螺旋的直径为2nm，碱基堆积距离为0.34nm，两核酸之间的夹角是36°，每对螺旋由10对碱基组成；碱基按A=T，G≡C配对互补，彼此以氢键相连系。维持DNA结构稳定的力量主要是碱基堆积力；双螺旋结构表面有两条螺形凹沟，一大一小。

DNA双螺旋结构的提出开始, 标志着生物科学的发展进入了分子生物学阶段.分子生物学使生物大分子的研究进入一个新的阶段,使遗传的研究深入到分子层次,"生命之谜"被打开,人们清楚地了解遗传信息的构成和传递的途径.在以后的近50年里,分子遗传学,分子免疫学,细胞生物学等新学科如雨后春笋般出现,一个又一个生命的奥秘从分子角度得到了更清晰的阐明,DNA重组技术更是为利用生物工程手段的研究和应用开辟了广阔的前景.在人类最终

全面揭开生命奥秘的进程中,化学已经并将更进一步地为之提供理论指导和技术支持.

该题太小，以后不大会再出

5、何谓变性？哪些因素可以引起蛋白质的变性？何谓别构(变构)？举一例说明之。

蛋白质受到某些物理或化学因素作用时，引起生物活性的丧失，溶解度的降低以及其它性质的改变，这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体，但未涉及共价键的断裂。有些变性是可逆的，有些变性是不可逆的。

引起蛋白质的变性的因素有：热、紫外线照射、高压和表面张力等物理因素，及有机溶剂、脲、胍、酸、碱等化学因素。

别构效应（allosteric effect）某种不直接涉及蛋白质活性的物质，结合于蛋白质活性部位以外的其他部位（别构部位），引起蛋白质分子的构象变化，而导致蛋白质活性改变的现象。可分为同促效应和异促效应两类。以氧与血红蛋白的结合为例。

该题出现多次，应引起重视。

6、试述三羧酸循环是如何沟通糖类、脂类、以及蛋白质三大有机物的代谢的？

一方面，TCA是糖、脂肪、氨基酸等彻底氧化分解的共同末端途径，另一方面，循环中生成的草酰乙酸、α-酮戊二酸、柠檬酸、琥珀酰CoA和延胡索酸等又是合成糖、氨基酸、脂肪酸、卟啉等的原料，因而TCA将各种有机物的代谢联系起来。TCA是联系体内三大物质代谢的中心环节，为合成其它物质提供C架。

重要，会是大题中的一个知识点

2004、真题解析

1、名词解释

1)埃德曼降解：

埃德曼降解是一种蛋白质或肽的氨基末端分析法,也是一种氨基酸序列测定法。其原理是在弱碱性条件下使N末端游离的α-氨基与苯异硫氰酸酯(PITC)偶联反应，然后用酸处理，经环化断裂、转化从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲衍生物(PTH-氨基酸)的形态从肽链上断裂下来，然后进行分析。

2)抗体：

抗体是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白，是一种可溶性的血清糖蛋白。其具有高度特异性和庞大的多样性两个特点。对保护人类和脊椎动物的抗御外来物种入侵的重要武器。

3)诱导契合学说：

诱导契合学说是一种解释酶催化活性的假说。它是指酶的活性部位并不是和底物的形状正好互补的，而是在酶和底物结合的过程中，底物分子或酶分子，有时两者的构象同时发生了一定的变化后才互补的，这时催化基团的位置也正好在所催化底物键的断裂和即将生成新键的合适位置。

4)热力学第二定律：

热力学第二定律指出，热的传导只能由高温物体传至低温物体，热的自发逆向传导是不可能的。它表明热力学体系的运动有一定的方向性，即自高温物体流向低温物体，如果要使热量从低温传向高温就必须做功。

5)补救途径：

补救途径是核苷酸合成的一种方式，它是由预先形成的碱基和核苷形成核苷酸的过程。

它包括a、碱基＋1－磷酸核糖在核苷磷酸化酶的作用下生成核苷，再在核苷磷酸激酶的作用下生成核苷酸；b、嘌呤碱与5－磷酸核糖焦磷酸在磷酸核糖转移酶作用下生成嘌呤核苷酸，这种方式更为重要。

6)荷尔蒙：

荷尔蒙又成激素，是生物体内特殊组织或腺体产生的，直接分泌到体液中，通过体液运送到特定作用部位，从而产生特殊激动效应——调节控制各种物质代谢或生理功能的一类微量的有机化合物。它在机体的生命活动中起着重要的作用，有利于多细胞有机体的细胞及组织器官既分工又合作，形成统一的整体。

7)竞争性抑制：

竞争性抑制是酶催化活性的一种可逆抑制作用，在竞争性抑制中，抑制剂会于酶相结合，从而干扰了底物与酶的结合，其使酶促反应动力学常数K m增大V max不变。由于底物或抑制剂与酶的结合都是可逆的，通过增加底物浓度可以消除竞争性抑制。

8)细胞膜：

任何细胞表面都以一层薄膜将其内含物与环境分开，这层膜成为细胞膜。其主要由磷脂双分子层，膜蛋白和糖类组成，还有水、金属离子等。它具有多种生物功能，起着物质运输，信号识别与传递，保护细胞等作用。

9)DNA聚合酶：

DNA聚合酶对DNA复制以及损伤修复起着重要作用。生物体中有多种DNA聚合酶。DNA聚合酶能催化脱氧核糖核苷酸加到DNA链末端的反应。它以四种脱氧核糖核苷三磷酸为底物，在模板链的指导和引物3’-羟基的引导下,沿着5’→3’方向合成与模板相同性质的DNA链。

10)基因表达：

基因表达即是遗传信息的转录和翻译过程。是指生物体通过转录将遗传信息由DNA传递到信使RNA，再由信使RNA通过翻译指导蛋白质的合成，从而将生物体储存在基因里的遗传信息通过蛋白质的形式得以表达，体现该生物体的生物学特性。

2、回答

1)根据国际分类法将酶分成哪几大类，分别叙述它们的酶反应特征。

答：酶可以分为氧化还原酶类，转移酶类，水解酶类，裂合酶类，异构酶类，连接酶类六大类。

a)氧化还原酶类：催化氧化还原反应。包括a、氧化酶类：催化底物脱氢，并氧化生

成H2O2或H2O。b、脱氢酶类：催化直接从底物上脱氢的反应。

b)转移酶类：催化化合物某些基团的转移，即将一种分子上的某一些基团转移到另一

种分子上的反应。

c)水解酶类：催化水解反应。

d)裂合酶类：催化从底物移去一个基团而形成双键的反应或其逆反应。

e)异构酶类：催化各种同分异构体之间的相互转变，即分子内部基团的重新排列。

f)连接酶类：催化有A TP（或相应核苷三磷酸）参加的合成反应，即由两种物质合成

一种新物质的反应。

2)对生物体转录和复制的特征进行说明比较。

答：DNA复制和RNA转录在原理上是基本一致的，体现在：①这两种合成的直接前体是核苷三磷酸，从它的一个焦磷酸键获得能量促使反应走向合成；②两种合成都是一个酶为四种核苷酸工作；③两种合成都是以DNA为模板；④合成前都必须将双链DNA解旋成单链；⑤合成的方向都是5’→ 3’。

DNA复制和RNA转录的不同点体现在：①复制和转录所用的酶是不同的，复制用的是

DNA 聚合酶，而转录用的是RNA 聚合酶；②所用前体核苷三磷酸种类不同，DNA 复制用四种脱氧核糖核苷三磷酸，即dATP 、dGTP 、dCTP 、dTTP ，而RNA 转录用四种核糖核苷三磷酸，即ATP 、GTP 、CrP 、UTP 做前体底物；③在DNA 复制时是A 与T 配对，而RNA 转录是A 与U 配对；④DNA 复制时两条链均做模板，而RNA 转录时只以其中一条链为模板；⑤DNA 复制是半不连续的，可产生冈崎片段，而RNA 转录是连续的；⑥DNA 复制时需RNA 做引物，而RNA 转录无需引物；⑦DNA 复制时需连接酶的参与，而RNA 转录时不需要。

3) 叙述基因文库和cDNA 文库的制作步骤并进行它们的特征比较。

答：基因文库是指生物染色体基因组各 DNA 片段的克隆总体。基因文库构建的简单步骤：① 从组织或细胞提取基因组 DNA ；② 用限制性酶部分水解或机械剪切成适当长度的 DNA 片段，经分级分离选出一定大小合适克隆的 DNA 片段；③ 通常采用λ噬菌体或柯斯质粒载体等容载量较大的克隆载体，在适当位点将载体切开；④ 将基因组 DNA 片段与载体进行体外连接；⑤ 重组体 DNA 直接转化细菌或用体外包装的重组λ噬菌体颗粒感染敏感细菌细胞。最后得到携带重组 DNA 的细菌群体或噬菌体群体即构成基因文库。

cDNA 文库是指生物体全部 mRNA 的 cDNA 克隆总体。构建 cDNA 文库的主要步骤：① 从生物体或细胞中提取 mRNA ；② 利用逆转录酶以寡聚（ dT ）或随机寡聚核苷酸为引物合成 cDNA 的和一条链；③ 利用 DNA 聚合酶 I ，以 cDNA 第一条链作为模板，用适当引物合成 cDNA 第二条链，常用 RNA 酶 H 在杂交分子的 mRNA 链上造成切口和缺口，产生一系列 RNA 引物，或是除去杂交分子的 mRNA 后，加入随机引物，即可合成第二条链；④ cDNA 与载体的体外连接；⑤ 噬菌体的体外包装及感染或质粒的转化。由于 cDNA 不含基因的启动子和内含子，因而序列比基因短，其克隆载体可选用质粒或病毒载体。

特征比较：①包含的遗传信息不同：基因文库中的每一个克隆只含基因组中某一特定的 DNA 片段。一个理想的基因文库应包括该生物染色体基因组全部遗传信息即全部 DNA 序列。cDNA 文库中的每一个克隆只含一种 mRNA 信息。②容量大小不同：由于细胞中的 mRNA 分子数要比基因组的基因数小得多（通常大约仅有 15% 左右基因被表达），因而若由 mRNA 逆转录为 cDNA ，那么所构建的 cDNA 文库的库容量相应较基因文库小。 4) 用图表来说明生物体内三羧酸循环ATP 产生的经路和它们的调控机理。答：

草酰乙酸＋乙酰辅酶A -------→柠檬酸-------→ 异柠檬酸

-酮戊二酸

延胡索酸-------→ 苹果酸

-------→ 草酰乙酸

每轮循环有2个C 原子以乙酰CoA 形式进入，有2个C 原子完全氧化成CO 2放出，分别发生1次底物水平的磷酸化（琥珀酰COA 转变成琥珀酸，生成GTP ）、2次脱羧反应，4次氧化脱氢。

乙酰-CoA + 3NAD + + FAD + GDP + Pi + 2H 2O → 3(NADH+H +) + FADH 2 + GTP + 2CO 2 + CoASH

柠檬酸合成酶

顺乌头酸酶

异柠檬酸脱氢酶

NAD + NADH ＋H +

α-酮戊二酸脱氢酶

复合体

NAD + NADH

琥珀酰CoA 合成酶

GDP GTP

FAD FADH2

琥珀酸脱氢酶

延胡索酸酶

三羧酸循环的调控酶是柠檬酸合酶、柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶。柠檬酸合酶是关键反应的限速酶，其活性受A TP、NADH、琥珀酰CoA及脂酰CoA的抑制，受乙酰CoA、草酰乙酸激活。异柠檬酸脱氢酶受NADH、ATP的抑制，ADP的激活。α-酮戊二酸脱氢酶受NADH和琥珀酰CoA抑制。

5)比较说明SDS－PAGE和琼脂糖凝胶电泳的物质分离原理和特点。

答：分离原理：

琼脂糖凝胶电泳：利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性，其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下带负电的核酸分子就可以向阳极迁移。琼脂糖凝的浓度影响给定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。DNA通过琼脂糖凝胶的迁移率取决于：DNA分子的大小：越大越慢；琼脂糖浓度：浓度越大越慢；DNA构型：相同分子量的DNA迁移率闭环>线状>开环；应用的电压：低压时迁移率与电压成正比，一般不超过5V/cm。

特点:

①适用对象：两者都可以用来分离生物大分子如蛋白质和核酸。但SDS－PAGE主要用于分离蛋白质，SDS－PAGE可以分离的蛋白质对象要求内径基本一致，核质比均一，不含二硫键的可溶性蛋白，而琼脂糖凝胶电泳常用于分离核酸，主要是分离鉴定DNA。②操作方法：SDS－PAGE常采用垂直板电泳，而琼脂糖凝胶电泳常采用水平板电泳。③应用：SDS－PAGE可以应用于分离纯化、测定分子量、纯度检测等，琼脂糖凝胶电泳可以分离蛋白质和同工酶，还可以与双向免疫扩散结合进行免疫电泳，也常用于核酸的分离鉴定，是基因工程的常用实验方法。④注意事项：电泳会产生大量的热量，会造成生物分子变性，改变胶的性质，从而改变电泳行为，应当通过冷凝槽加以避免；分离RNA是要防治RNase的干扰，加入蛋白质变性剂，如甲醛等，同时对缓冲液和容器进行处理以确保不含有RNase；在电泳之前需要对样品进行预处理，如脱盐、除去有机溶剂；进行预电泳，去除加样孔中的杂离子，使分子筛达到均一。

2005、真题解析

1、简单描述蛋白质的超二级结构和结构域的概念。

答:通常我们将蛋白质结构分为4个组织层次，但如果细分还可以在二级结构和三级结构之间增加两个层次：超二级结构和结构域。它们是蛋白质高级结构的重要组成部分，对蛋白质的功能起着重要的作用。

超二级结构:在蛋白质分子中特别是在球状蛋白质分子中由若干相邻的二级结构元件（主要是α螺旋和β折叠）组合在一起，彼此相互作用，形成种类不多的、有规则的二级结构组合或二级结构串，在多种蛋白质中充当三级结构的构件。其有3中基本的组合形式: αα、βαβ、ββ。

结构域:多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的部分折叠区，它是相对独立的紧密球状实体，是球状蛋白质的独立折叠单位。大体可以分为4类：全α－结构，α,β-结构，全β－结构，不规则小蛋白结构。

2、简单描述蛋白质及核酸的变性。

答:变性是指蛋白质及核酸生物活性丧失的现象。其实质是维持蛋白质和核酸高级结构的次

级键被破坏，引起天然构象的解体。它不涉及共价键的断裂，并不改变蛋白质及核酸的一级结构。变性不超过一定的限度，当恢复到原有条件时，又可以复性，即恢复到原来的空间构象和生物活性。

引起蛋白质变性的因素主要有物理因素如热、紫外线、高压和表面张力等；化学因素如有机溶剂、重金属离子、酸、碱等。其现象主要有生物活性丧失，溶解度下降，粘性增加（不对称性增大），及其他物理化学性质的改变。

核酸的变性指双螺旋区的氢键断裂，变成单链。引起核酸变性的因素很多，有高温、酸碱度、有机溶剂如尿素、甲醛等。其现象主要有紫外吸收值增高（增色效应），浮力密度增高，比旋降低，粘度降低等。

3、在功能上RNA可以分为几种？描述生物体内蛋白质合成过程及各种RNA在这个过程中

的作用是什么？

答:生物体内含有各种功能RNA，几乎涉及细胞功能的各个方面。我们按照功能主要将RNA 分为信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)三类，它们都是参与蛋白质的合成的。此外还有具有催化活性的核酶、反义RNA等等。

蛋白质的合成过程主要包括氨基酸活化、肽链合成的起始、肽链的延伸、肽链合成的终止和释放以及翻译后的折叠修饰五个阶段。

在蛋白质合成过程中，mRNA作为蛋白质合成的模板，rRNA作为蛋白质合成的场所，tRNA搬运蛋白质合成所需的活化氨基酸。

4、描述生物膜的机构特征及其生物学功能。

答：细胞是生物的基本结构和功能单位，而生物膜结构是细胞结构的基本形式。生物膜包括细胞的外周膜和细胞内各个细胞器的膜结构组成的内膜系统。

生物膜主要是由蛋白质（包括酶）、脂质（主要是磷脂）和糖类组成，还有水、金属离子等。生物膜通常呈脂双层结构，膜蛋白镶嵌、覆盖或贯穿其中，糖基附着在表面,大多与膜蛋白结合，少量与膜脂结合。生物膜中分子之间主要作用力是静电力、疏水作用和范德华力。

生物膜结构的主要特征有：生物膜的主要组分在膜两侧的分布不均匀；生物膜具有流动性，既包括膜脂，也包括膜蛋白的运动状态。

生物膜主要的生物学功能有：能量转换、物质运输、信号识别与传递、神经传导和代谢调控等。能量代谢如线粒体膜上的氧化磷酸化作用；物质运输包括被动运输和主动运输，是细胞获取营养物质，排除废物的主要途径；信号识别与传递主要由细胞表明的受体蛋白完成。

5、简单描述柠檬酸循环的反应机制。

答：柠檬酸循环是生物体重要的生物化学反应，它在细胞的线粒体中进行，它不但为生命活动提供大量的能量，而且是沟通糖类、脂类、蛋白质、核酸四种物质代谢的反应枢纽。柠檬酸循环是这四类物质的最终代谢途径，其中间代谢产物也为其他物质提供C骨架。

乙酰-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2H2O → 3(NADH+H+) + FADH2 + GTP + 2CO2 + CoASH

反应过程有：

1)草酰乙酸与乙酰-CoA在柠檬酸合成酶的作用下缩合形成柠檬酸。

2)柠檬酸在乌头酸酶的作用下异构化异柠檬酸。

3)异柠檬酸在异柠檬酸脱氢酶的作用下氧化脱羧形成α-酮戊二酸。同时1分子NAD+(或

NADP+)还原成NADH++H(或NADPH+H+)。

4)α-酮戊二酸在α-酮戊二酸脱氢酶的作用下氧化脱羧形成琥珀酰-CoA。同时1分子

NAD+还原成NADH++H。

5)琥珀酰-CoA在琥珀酰-CoA合成酶的作用下释放CoASH形成琥珀酸，并生成1分子

GTP。

6)琥珀酸在琥珀酸脱氢酶的作用下脱氢形成延胡索酸，同时1分子FAD被还原FANDH2。

7)延胡索酸在延胡索酸酶的作用下水合生成L-苹果酸。

8)L-苹果酸在苹果酸脱氢酶的作用下脱氢形成草酰乙酸。同时1分子NAD+还原成

NADH++H。

6、DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆转录酶是生物体内重要的核酸合成酶，通过触媒反应机

理，描述它们的相同点和不同点。

答：相同点：都需要以核酸（DNA或RNA）作为模板；需要四种三磷酸核苷（dNTP或rNTP）作为底物；新链合成的方向都是5’→3’。

不同点：三种酶的结构、催化性质和核酸的结合位点等都不相同。DNA聚合酶是以整条DNA 链作为模板，不能自发催化DNA新链的合成，必须要一段多核苷酸链（DNA或RNA）作为引物；RNA聚合酶是以DNA的一个转录区作为模板，能自动催化RNA新链的合成，不需要引物；逆转录酶是以整条RNA链为模板合成DNA新链。

7、什么是抗原和抗体？什么是单克隆抗体和多克隆抗体？基于抗体－抗原相互作用的生化

分析方法有酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印记测定(Western Blot)及抗体芯片等，描述其中一种的作用原理。

答：抗原是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体并与之发生特异性结合的物质,它可以是一种病毒、细菌细胞壁或蛋白质或其他大分子。抗体是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白，是一种可溶性的血清糖蛋白。

我们把只针对一个抗原决定簇起作用的由B细胞分化而成的浆细胞群称之为一个克隆。单克隆抗体是由生长在细胞培养物中同一种克隆合成分泌的特异性抗体，这些抗体是均一的，都识别同一的抗原决定簇。多克隆抗体是由多个不同的B淋巴细胞在应答一个抗原时而产生，识别抗原中不同的特异抗原决定簇的多种抗体的混合物。

酶联免疫吸附测定是一种快速筛查和定量一个抗原在样品中存在的方法。其原理是以待测抗原(或抗体)和酶标抗体(或抗原)的特异结合反应为基础，使待测抗原(或抗体)完全与酶标抗体(或抗原)结合，然后通过利用酶的催化活性测定酶活力，从而来确定抗原(或抗体)的含量。

免疫印迹测定：对蛋白质样品进行凝胶电泳分离，然后凝胶板与硝酸纤维膜贴在一起，进行电泳转移，将凝胶上的蛋白条带转印到纤维膜上。将纤维膜封闭，用含待测蛋白的第一抗体与底物相结合，再用酶标第二抗体与第一抗体相结合，并利用酶催化的显色反应指示待测蛋白质。该方法能检测样品中的微量成分和近似相对分子质量。

抗体芯片是可以同时检测几百种蛋白质表达水平；也可以用来研究蛋白质翻译后加工(磷酸化水平改变)或者研究蛋白质间相互作用。其原理是：大量不同的抗体按照预定的顺序排列并固定在固体支持物上且保留其抗原结合能力，制成抗体芯片膜，芯片膜与蛋白质样品一起孵育，在温育过程中芯片膜识别并捕捉抗原，通过化学发光方法对抗原以及与抗原相连的蛋白质进行研究。

8、根据国际分类法，酶分为哪六大类？酶作为生物催化剂的特点是什么？写出3－5种你所熟悉的酶并简单描述它们的活性。

答:酶可以分为氧化还原酶类，转移酶类，水解酶类，裂合酶类，异构酶类，连接酶类六大类。

2)氧化还原酶类：催化氧化还原反应。包括a、氧化酶类：催化底物脱氢，并氧化生成

H2O2或H2O。b、脱氢酶类：催化直接从底物上脱氢的反应。

3)转移酶类：催化化合物某些基团的转移，即将一种分子上的某一些基团转移到另一种分

子上的反应。

4)水解酶类：催化水解反应。

5)裂合酶类：催化从底物移去一个基团而形成双键的反应或其逆反应。

6)异构酶类：催化各种同分异构体之间的相互转变，即分子内部基团的重新排列。

7)连接酶类：催化有A TP（或相应核苷三磷酸）参加的合成反应，即由两种物质合成一种

新物质的反应。

酶是由活细胞产生的，受多种因素调节控制的具有催化能力的生物催化剂。其作为生物催化剂的特点有：

1)反应条件温和，高温、强酸碱、重金属盐等都会使酶失去催化活性。

2)催化高效性，比一般催化剂高106～1013倍。

3)高度专一性,包括结构专一性和立体异构专一性。

4)酶的多样性，已知的酶超过3000种。

5)酶的反应受多种因素调控，包括酶浓度、底物浓度、激素、抑制剂、激活剂以及反馈抑

制等。

乳酸脱氢酶，属于氧化还原酶类，以NAD＋为辅酶将乳酸氧化成丙酮酸。

谷丙转氨酶，属于转移酶类，以磷酸吡哆醛为辅基，使谷氨酸上的氨基转移到丙酮酸上，使之成为丙氨酸，而谷氨酸成为α－酮戊二酸。

氨酰－tRNA合成酶，属于连接酶类，其催化α－氨基酸与tRNA合成氨酰－tRNA，参与蛋白质的合成。

葡糖－6－磷酸异构酶，属于异构酶类，其催化葡糖－6－磷酸转变成果糖－6－磷酸。

缩醛酶，属于裂合酶类，催化果糖－1，6－二磷酸成为磷酸二羟丙酮及甘油醛－3－磷酸，是糖代谢过程中一个关键酶。

磷酸二酯酶，属于水解酶类，催化磷酸酯键水解。

9、作为生物化学实验室的新手，进入实验室后，首先你需要几周的时间刷瓶子和试管等，然后逐渐开始学习配制各种缓冲液和试剂。接下来你要开始一个蛋白质纯化实验。实验目的是分离一种参与柠檬酸循环的酶——即位于线粒体间质的柠檬酸盐合成酶。请根据一下的步骤回答相应的问题。

实验步骤1：取20kg新鲜牛的心脏，置于冰上，使用含有0.2M蔗糖，pH为7.2的缓冲液，匀浆（均质化）。

问题1:为什么要用心脏组织？并且为什么选用如此大量的组织？

问题2：在整个过程中为什么必须使组织始终保持在低温？为什么需要维持pH在7.2左右？问题3:下一步通过什么实验能够获得较纯的组织细胞中的线粒体组分？

问题4:纯化的线粒体通过渗透压裂解后，样品中含有线粒体膜和线粒体内含物。如何使得蛋白质从样品中沉淀下来？解释相应的原理。

实验步骤2:沉淀经溶解和透析后，进行分子量排阻层析分离。通过280nm紫外吸收收集各个分离的组分。

问题5:为什么使用280nm进行测定？第一个和最后一个组分所含蛋白质的分子特征是什么？

实验步骤3:将上一步收集的组分进行离子交换层析分离。

问题6: 实验步骤3的蛋白质分离的原理是什么?

实验步骤4:为了获得能够测序（氨基酸）的高纯度的蛋白质并且进一步特征分析，需要使用双向电泳进行纯化。

问题7：描述双向电泳的纯化原理。

答：问题1：因为心脏的心肌细胞相对于其他组织线粒体含量较高，而柠檬酸合成酶在组织

中的相对含量很低。

问题2：低温是为了防治酶变性。维持7.2左右的pH有利于溶液偏离酶的等电点，增强酶自身的缓冲能力，保持酶溶液的稳定性。

问题3：通过超速离心、膜分离或者超滤等方法。

问题4：进行盐析。其原理是破坏蛋白质的胶体性质，使之产生沉淀。

问题5：因为蛋白质中含有Phe、Trp、Tyr等三种芳香族氨基酸残基，在280nm具有紫外光吸收。第一个组分所含的蛋白质分子量最大，最后一个组分所含的蛋白质分子量最小。

问题6：根据蛋白质分子所带电荷的差异和分子极性的不同进行离子交换吸附。

问题7：双向电泳双结合了等电聚焦及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，其原理是第一向进行等电聚焦，利用两性电解质在聚丙烯酰胺凝胶上形成pH梯度，根据蛋白质的等电点不同对蛋白质进行分离。将所得的凝胶条取出，用含有SDS的缓冲液进行处理，然后放在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶上，使其固定并与浓缩胶连接。进行第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据蛋白质分子大小进行分离。这样各个蛋白质根据等电点和分子大小的不同而被分离，分布在二维图谱上。双向电泳具有很高的分辨率。

2006、真题解析

1、水是生命不可缺少的物质，从生物化学的角度描述水在生命体中的重要作用。

答：水是生物体中含量最丰富的物质，对生命体起着极其重要的作用。

1)水溶解生物分子，为生命体的生物反应提供了液体环境，如细胞中广泛存在的酶催化反

应大多都是在水溶液环境下进行的。

2)水分子的存在使生物大分子（如蛋白质和核酸）折叠成活性状态。

3)水分子还直接参与化学反应，包括以反应物或者产物的形式。比如水以反应物的形式参

加像蛋白质的水解反应中；如ATP的合成，氨基酸合成蛋白质，氧化磷酸化，水是反应的产物。

4)水起着运输生物分子的作用，水既是运输的载体，又是运输的屏障。生物分子大多是溶

解在水中进行运输的。

5)水具有很高的热容，对维护生命体体温的恒定起着重要作用。

6)水溶解代谢产物，起着排泄代谢废物的作用。

2、描述生物膜的结构特征及其生物学功能。

生物膜结构的主要特征有：生物膜的主要组分在膜两侧的分布不均匀；生物膜具有流动性，既包括膜脂，也包括膜蛋白的运动状态。

生物膜主要的生物学功能有：能量转换、物质运输、信号识别与传递、神经传导和代谢调控等。

3、简单描述生物体内的三种DNA重组方式。

答：DNA分子内或分子间发生遗产信息的重新组合称为DNA重组。其广泛存在与各类生物，通过优化组合积累有意义的遗传信息，对生物进化起着关键作用。

DNA重组包括同源重组、特异位点重组和转座重组等三种方式。

(1)同源重组又称为一般性重组，它是由两条同源区的DNA分子，通过配对、链的断裂和再连接，而产生片段交换的过程。

(2)特异位点重组发生在特定位点内，并有特异的酶（重组酶参与）。其结果决定于重组位点的位置和方向。如果重组位点以相反方向存在于同一DNA分子上，重组结果发生倒位；以相同方向存在于同一DNA分子上，重组发生切除；在不同位点上，重组发生整合。

(3)转座重组通常通过转座因子实现，转座因子是一段可以发生转座的DNA，又称为转座子，它可以由染色体的一个位置转移到另外位置。

4、简单描述生物体内的四种DNA修复系统。

答：DNA损伤会造成DNA结构和功能的破坏，进而引起生物突变，甚至导致死亡。然而在一定条件下，生物机体能够使其DNA的损伤得到修复，从而保证遗传的稳定性。

生物体内的DNA修复系统主要有：错配修复、直接修复、切除修复、重组修复等四种方式，此外，还有易错修复。

1)错配修复系统能够识别错配位点，并通过GATC序列中A是否甲基化区分“新”“旧”

链，将错配新链切开并加以修复。

2)直接修复即直接对损伤部位进行修复，比如光复活作用，它作用于紫外线引起的DNA

嘧啶二聚体，可见光激活光复活酶，它能分解紫外线引起的嘧啶二聚体。另外O6-甲基鸟嘌呤的修复也是直接修复。

3)切除修复是在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤的部分切除掉，并以完整的那

条链为模板，合成出被切去的部分，然后使DNA恢复正常结构的过程。包括碱基切除修复和核苷酸切除修复。

4)重组修复是指损伤DNA复制产生的遗传信息有缺陷的子代DNA分子可以通过遗传重

组而加以弥补，即从同源DNA母链上将相应核苷酸序列片段移至子链缺口处，然后用再合成的序列补上母链的空缺。这是复制后修复的方式。

5、简单描述蛋白质合成的五个阶段。

答：蛋白质是生命活动重要的生物大分子，其合成场所是核糖体，蛋白质的合成包括翻译和翻译后修饰。翻译是以mRNA为模板，tRNA为携带氨基酸载体，在核糖体中将氨基酸按照特定的顺序以酰胺键聚合起来成多肽的过程，其合成方向是从氨基端向羧基端延伸，通过水解ATP或GTP的高能磷酸键提供能量。蛋白质合成主要包括以下五个阶段：

1)、氨基酸的活化：氨基酸在氨酰－tRNA合成酶的帮助下结合到特定的tRNA上形成活化的氨酰－tRNA.

2)、肽链合成的起始：核糖体小亚基结合起始tRNA在起始因子的帮助下结合在mRNA合适的起始密码子AUG上形成复合物，然后核糖体大亚基与已经形成复合物的小亚基、起始tRNA、mRNA结合成起始复合物。

3)、肽链的延伸：在延长因子的帮助下分三步进行，即进位、转肽、移位。一个新进入的氨酰－tRNA结合到核糖体的A位点上后，肽酰基从P位点转移到A位点上，并形成肽键，核糖体沿mRNA移动一个密码子长度，mRNA上的下一个密码子又进入到A位点，肽酰－tRNA从A位点移位到P位点，开始新的一轮肽链延伸反应。

4)、肽链合成的终止及释放：翻译至终止密码子，终止因子与终止密码子结合，终止翻译。并改变酰基转移酶的活性使其具有水解酶的活性，使肽链释放出来。

5)、翻译后的折叠修饰：多肽合成之后，通过氨基末端的甲酰甲硫氨酸（真核为甲硫氨酸）的切除、二硫键的形成、氨基酸残基的修饰、肽段的切除、构象形成，亚基的聚合，辅基的连接，从而形成具有一定功能和构象的蛋白质。

6、简单描述柠檬酸循环的八个步骤：

答：柠檬酸循环是生物体重要的生物化学反应，它在细胞的线粒体中进行，它不但为生命活

动提供大量的能量，而且是沟通糖类、脂类、蛋白质、核酸四种物质代谢的反应枢纽。柠檬酸循环是这四类物质的最终代谢途径，其中间代谢产物也为其他物质提供C骨架。

乙酰-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2H2O → 3(NADH+H+) + FADH2 + GTP + 2CO2 + CoASH

反应过程有：

1)草酰乙酸与乙酰-CoA在柠檬酸合成酶的作用下缩合形成柠檬酸。

2)柠檬酸在乌头酸酶的作用下异构化异柠檬酸。

3)异柠檬酸在异柠檬酸脱氢酶的作用下氧化脱羧形成α-酮戊二酸。同时1分子NAD+(或

NADP+)还原成NADH++H(或NADPH+H+)。

4)α-酮戊二酸在α-酮戊二酸脱氢酶的作用下氧化脱羧形成琥珀酰-CoA。同时1分子

NAD+还原成NADH++H。

5)琥珀酰-CoA在琥珀酰-CoA合成酶的作用下释放CoASH形成琥珀酸，并生成1分子

GTP。

6)琥珀酸在琥珀酸脱氢酶的作用下脱氢形成延胡索酸，同时1分子FAD被还原FANDH2。

7)延胡索酸在延胡索酸酶的作用下水合生成L-苹果酸。

8)L-苹果酸在苹果酸脱氢酶的作用下脱氢形成草酰乙酸。同时1分子NAD+还原成

NADH++H。

7、非共价键在生物大分子中扮演了十分重要的作用，有哪四种非共价键？并举例说明它们

在维持蛋白质、核酸结构中所起到的作用。

答：有氢键、疏水作用、离子键和范德华力四种非共价键，它们是稳定蛋白质、核酸三维结构的主要作用力，而特殊的空间结构对生物大分子的生物活性至关重要。

1)氢键是指电负性很强的原子(O、N)与N-H或O-H中带正电荷的氢核产生的静电吸

引力。蛋白质通常形成分子内氢键，如α螺旋，β折叠，它是稳定蛋白质二级结构

主要作用力；核酸形成分子间氢键，如碱基互相配对，它是稳定DNA双螺旋结构

的重要作用力。

2)疏水作用是指非极性分子之间一种弱的相互作用。在水介质中蛋白质分子总是倾向

于把疏水残基埋藏在分子内部的现象即是由于疏水作用引起的，它是稳定蛋白质三

级结构的主要作用力；DNA的双螺旋结构中疏水性的碱基位于内侧，亲水性的磷

酸基和糖基位于外侧，疏水作用是使碱基相互堆积重要因素，碱基堆积力正是维持

DNA双螺旋结构的最主要作用力。

3)离子键是正电荷与负电荷之间的一种静电相互作用。蛋白质亚基表面的极性集团之

间形成的离子键使得亚基缔合成四级结构，它是维持蛋白质四级结构的主要作用

力；磷酸基团上的负电荷与介质中的阳离子之间形成的离子键也是稳定DNA双螺旋

结构的重要作用力。

4)范德华力包括定向效应、诱导效应和分散效应，是中性原子之间通过瞬间静电相互

作用产生的一种弱的分子间的作用力。它使蛋白质相互折叠形成球形结构，对维持

蛋白质三级、四级结构起着重要作用；碱基间的范德华力也是核酸碱基堆积力的实

质，这是维持DNA双螺旋结构的最主要作用力。

8、在自然界中构成蛋白质的氨基酸有20种，根据他们的R基的化学特征可以分成哪几大

类？每一类的特征是什么？请写出每一类中包括的氨基酸全称、三字母和单字母的缩写。

答：按照R基的化学结构分类可以分为：脂肪族氨基酸(15种)、芳香族氨基酸(3种)、杂环族氨基酸(2种)。

5)脂肪族氨基酸：

i.中性氨基酸(5种)：R基为烷烃基。

甘氨酸Gly G；丙氨酸Ala A；缬氨酸Val V；亮氨酸Leu L；异亮氨酸Ile I；

ii.含羟基或硫氨基酸(4种):R基中含有-OH或者S。

丝氨酸Ser S；苏氨酸Thr T；半胱氨酸Cys C；甲硫氨酸Met M；

iii.酸性氨基酸及其酰胺(4种)：R基中含有羧基或酰胺基。

天冬氨酸Asp D；谷氨酸Glu E；天冬酰胺Asn N；谷氨酰胺Gln Q；

iv.碱性氨基酸(2种)：R基中含有氨基。

赖氨酸Lys K；精氨酸Arg R；

6)芳香族氨基酸(3种):R基中含有苯环。

苯丙氨酸Phe P；酪氨酸Tyr Y；色氨酸Trp W；

7)杂环族氨基酸(2种)：R基中含有杂环。

组氨酸His H；脯氨酸Pro P。

9、传统的氨基酸测序原理是Edman化学降解法，近年来又发展了电喷射串联质谱法测定

氨基酸序列，分别描述它们的原理和特点。

答：Edman化学降解法是一种蛋白质或肽的氨基末端分析法。其原理是在在弱碱性条件下使N末端游离的α-氨基与苯异硫氰酸酯(PITC)偶联反应，然后用酸处理，经环化断裂、转化从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲衍生物(PTH-氨基酸)的形态从

肽链上断裂下来，然后进行分析。每次反应只切下N末端的一个氨基酸，剩下的肽链的N 端又成为游离的α-氨基，再与PITC反应，如此反复操作，即可从N端测定蛋白质或多肽的氨基酸序列。其特点是一次能连续测处60－70个残残基的序列，但其操作程序非常麻烦，工作量大。

电喷射串联质谱法是利用蛋白质分子挥发度低，加热容易分解的性质发展起来的。首先使蛋白质电力成高电荷的离子，进入第一台质谱仪，从蛋白质水解液中分理出寡肽。再进入第二台质谱仪通过分子碰撞裂解为离子碎片，这些碎片代表一套大小只相差一个氨基酸残疾的肽段。利用碎片之间分子量的差值是各个氨基酸的特征值，可以推断出氨基酸的序列。其特点是灵敏度高，所需样品量少，测定速度快。但还只能测定一些较短的序列，一般不超过15个氨基酸残基。

10、什么是抗原和抗体？什么是单克隆抗体和多克隆抗体？基于抗体－抗原相互作用的生化分析方法有酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印记测定(Western Blot)及抗体芯片等，描述其中一种的作用原理。

免疫印迹测定：对蛋白质样品进行凝胶电泳分离，然后凝胶板与硝酸纤维膜贴在一起，进行电泳转移，将凝胶上的蛋白条带转印到纤维膜上。将纤维膜封闭，用含待测蛋白的第一

抗体与底物相结合，再用酶标第二抗体与第一抗体相结合，并利用酶催化的显色反应指示待测蛋白质。该方法能检测样品中的微量成分和近似相对分子质量。

11、描述使用双向电泳进行蛋白质分离的原理，利用这项分离技术设计一个研究实验，写出实验目的、方法及步骤，并列出所需要的其它仪器、药品、研究工具等。

答：双向电泳结合了等电聚焦及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，其原理是第一向进行等电聚焦，利用两性电解质在聚丙烯酰胺凝胶上形成pH梯度，根据蛋白质的等电点不同对蛋白质进行分离。将所得的凝胶条取出，用含有SDS的缓冲液进行处理，然后放在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶上，使其固定并与浓缩胶连接。进行第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据蛋白质分子大小进行分离。这样各个蛋白质根据等电点和分子大小的不同而被分离，分布在二维图谱上。双向电泳具有很高的分辨率，是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段,可以利用它直接从细胞提取液中检测某个蛋白。我们设计这样一个实验：

实验目的：通过将mRNA转入细胞并表达，直接检测某个mRNA的翻译结果。

实验方法及步骤：

1)将某个蛋白质的mRNA转入到青蛙的卵母细胞中并培养，并同时培养没有转入该

mRNA的卵母细胞；

2)培养一定时间后，破碎卵母细胞得到提取液；

3)对转入和未转入的细胞提取液分别进行双向电泳得到相应的二维图谱；

4)通过对二维电泳图谱的比较，在转入mRNA的细胞提取液的图谱中应该存在一个特殊

的蛋白质斑点。该斑点上的蛋白质即所转入的mRNA翻译得到的蛋白质。

所需仪器、药品、研究工具：动物细胞培养基、离心机、移液枪、电泳仪、缓冲液、凝胶液、染色剂、石蜡油、离心管等等。

2007真题解析

1.什么是蛋白质？分类并举例描述蛋白质的功能，描述你最熟悉的5种蛋白质分离纯化方法的工作原理（20分）。

蛋白质是一类重要的生物大分子，组成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸通过脱水缩合形成肽链。蛋白质由一条或多条多肽链组成的生物大分子，每一条多肽

链有二十~数百个氨基酸残基不等；各种氨基酸残基按一定的顺序排列。产生蛋白

质的细胞器是核糖体。

按照功能分类有：

1)酶：催化

2)调节蛋白：调节其他蛋白执行其生理功能

3)转运蛋白：从一地到另一地转运特定的物质

4)贮存蛋白：作为提供充足氮素的一种方式

5)收缩和游动蛋白：运动

6)结构蛋白：建造和维持生物体的结构

7)支架蛋白：也叫受体蛋白，在细胞应答激素和生长因子的复杂途径中

起作用

8)保护和开发蛋白：起着保护细胞和进攻的作用

9)异常蛋白:如甜度，粘性等

分离纯化方法：

1)透析：利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分

子物质分开

2)凝胶过滤：根据分子大小分离蛋白质混合物

3)盐析：利用蛋白质在一定浓度盐溶液中溶解度降低，沉淀析出

4)有机溶剂沉淀：与水互溶的的有机溶剂能使蛋白质在水中的溶解度显

著降低

5)离子交换层析：根据蛋白质的电荷不同而分离蛋白质混合物

2.蛋白质分子变性与核酸分子变性的本质区别是什么？引起蛋白质和核酸变性的主要

因素有哪些，原理是什么？它们变性后进行复性的方法分别有哪些？（20分）

蛋白质变性作用的机理是蛋白质分子中的次级键被破坏，而引起天然构象的解体，但主链结构中的共价键并没受到破坏。蛋白质变性主要是次级键如氢键、盐键、范得华力等遭到破坏，导致天然构象变化，蛋白质生物活性散失。

核酸的变性是指核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链，并不涉及共价键的断裂。

它们之间的区别是破坏的作用力，前者是次级键如氢键、盐键、范得华力等遭到破坏，而后者仅为氢键。

蛋白质的复性主要是要去除变性因素，例如胃蛋白酶加热至80～90℃时，失去溶解性，也无消化蛋白质的能力，如将温度再降低到37℃，则又可恢复溶解性和消化蛋白质的能力。酸碱变性则，使溶液重新回到蛋白质的最适PH值。

核酸的复性主要是是变性核酸分子的双链重新缔合为双螺旋结构。如热变性的DNA缓慢冷却等。

3.什么是酶？酶的国际分类法将酶分为几类？举例说明每一类酶催化反应的原理？（20分）

酶是生物活体细胞产生的，以蛋白质为主要成分，具有催化功能的生物催化剂。

酶可以分为氧化还原酶类，转移酶类，水解酶类，裂合酶类，异构酶类，连接酶类六大类。

a)氧化还原酶类：催化氧化还原反应。包括a、氧化酶类：催化底物脱氢，并氧化生

成H2O2或H2O。b、脱氢酶类：催化直接从底物上脱氢的反应。

b)转移酶类：催化化合物某些基团的转移，即将一种分子上的某一些基团转移到另一

种分子上的反应。

c)水解酶类：催化水解反应。

d)裂合酶类：催化从底物移去一个基团而形成双键的反应或其逆反应。

e)异构酶类：催化各种同分异构体之间的相互转变，即分子内部基团的重新排列。

f)连接酶类：催化有A TP（或相应核苷三磷酸）参加的合成反应，即由两种物质合成

一种新物质的反应。

4.细胞呼吸分为几个阶段？简单描述这几个阶段的代谢特征。（20分）

指物质在细胞内的氧化分解，具体表现为氧的消耗和二氧化碳、水及三磷酸腺苷（ATP ）的生成，又称细胞呼吸。其根本意义在于给机体提供可利用的能量。细胞呼吸可分为3个阶段，在第1阶段中，各种能源物质循不同的分解代谢途径转变成乙酰辅酶A 。在第2阶段中，乙酰辅酶A （乙酰CoA ）的二碳乙酰基，通过三羧酸循环转变为CO2和氢原子。在第3阶段中，氢原子进入电子传递链（呼吸链），最后传递给氧，与之生成水；同时通过电子传递过程伴随发生的氧化磷酸化作用产生ATP 分子。

1.糖酵解是糖的无氧分解和有氧分解需共同经历的途径。共包括十步反应，分两个阶段。前5步为准备阶段，后5步为产生ATP 的贮能阶段。反应步骤如下：

葡萄糖

葡萄糖-6-磷酸 -----→ 果糖-6-磷酸 -------→ 果糖-1，6-二磷酸

----- 甘油醛-3-磷酸 2 {1，3-二磷酸甘油酸

→2 {3-磷酸甘油酸}

↑

磷酸二羟丙酮

-----→2 {2-

磷酸甘油酸} -----→2 {磷酸烯醇式丙酮酸 2 丙酮酸

EMP 总反应式为：

1葡萄糖+ 2Pi + 2ADP + 2NAD + → 2

丙酮酸 + 2ATP + 2NADH + 2H +

+2H 2O 整个过程中包含两个底物水平磷酸化：

一为1,3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸；二为磷酸烯醇式丙酮酸转变为丙酮酸。 2. 三羧酸循环（TCA ）的过程

草酰乙酸＋乙酰辅酶A -------→柠檬酸-------→ 异柠檬酸α-酮戊二酸延胡索酸-------→ 苹果酸

-------→ 草酰乙酸每轮循环有2个C 原子以乙酰CoA 形式进入，有2个C 原子完全氧化成CO 2放出，分别

ATP ADP 己糖激酶

磷酸葡萄糖异构

磷酸果糖激酶

醛缩酶

磷酸丙糖异构

酶

磷酸甘油醛脱氢酶

NAD + NADH+H +

磷酸甘油酸激酶 ADP ATP

磷酸甘油酸变位酶

烯醇化酶

丙酮酸激酶

ADP ATP

柠檬酸合成酶

顺乌头酸酶

异柠檬酸脱氢酶 NAD +

NADH

α-酮戊二酸脱氢酶

复合体

＋H +

琥珀酰CoA 合成酶

GDP GTP

FAD FADH2

琥珀酸脱氢酶延胡索酸酶

L-苹果酸脱氢酶

NAD + NADH

＋H + ATP ADP

发生1次底物水平的磷酸化（琥珀酰COA转变成琥珀酸，生成GTP）、2次脱羧反应，4次氧化脱氢。总反应式：

乙酰CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi → 3NADH + FADH2 + GTP + 2CO2 + H2O + CoA

3. 电子传递链

糖、脂肪、氨基酸等有机分子在自身的生物氧化过程中生成还原型辅酶，NADH和FADH2。还原型辅酶通过电子传递再氧化，它们脱下的电子通过一系列按电子亲和力递增顺序排列的电子载体传递给氧，该体系称为电子传递链，又称呼吸链。

电子传递链在原核细胞存在于质膜上，在真核细胞存在于线粒体的内膜上。

由NADH到O2的电子传递链主要包括三种蛋白复合体：NADH-Q还原酶（复合体I）、细胞色素还原酶（复合体III）、细胞色素氧化酶（复合体IV）。电子载体有黄素蛋白类、铁-硫复合体、醌类、细胞色素的血红素基团以及铜离子等。电子由NADH转移到NADH-Q还原酶的FMN辅基形成FMNH2，再转移到该酶的铁-硫中心上，使铁离子发生3价到2价的价态变化。NADH-Q还原酶再将电子转移给辅酶Q，使其转化成还原型的CoQH2。辅酶Q可自由地在膜内扩散，随后将电子传递给细胞色素还原酶。细胞色素还原酶含有细胞色素b、c1及铁-硫蛋白，通过铁离子3价到2价的价态变化进行电子逐步传递。细胞色素还原酶又将电子转移给可流动的载体细胞色素c上，再由其转移给细胞色素氧化酶。通过细胞色素氧化酶中细胞色素a、a3中铁离子3价到2价的价态变化及Cu A、Cu B2价到1价的价态变化进行电子传递，最终传给氧分子。由上述三种蛋白复合酶催化的反应其自由能的变化足以将H+从线粒体内膜基质泵到线粒体内外膜间隙产生质子梯度。每一种酶复合体都是一个质子泵。

由FADH2到O2的电子传递链是先将其所带的电子传递给琥珀酸-Q还原酶（复合体II），再将电子传递给辅酶Q，通过辅酶Q进入电子传递链的主链。琥珀酸-Q还原酶（复合体II）没有质子泵的作用。

能够阻断电子传递链中某一部位电子传递的物质称为电子传递抑制剂。鱼藤酮、安密妥抑制NADH-Q还原酶内的电子传递，抗霉素A抑制细胞色素还原酶的电子传递，氰化物、叠氮化物可抑制电子在细胞色素氧化酶中的传递作用。

5.真核生物mRNA分子构造通常都具有5’帽（5’cap）和3’端的多聚腺苷酸尾[3’poly(A) tail]，简单描述它们的结构特征和可能的生物学功能。（20分）

5’帽（5’cap）：倒扣的G，甲基化，mGpppNmpNmp结构

在翻译过程中起识别作用以及对mRNA起稳定作用，保护mRNA免遭核酸酶的破坏

3’端的多聚腺苷酸尾[3’poly(A) tail]：尾部保守的序列AAUAAA。一半为40－200个

提高mRNA在细胞质中的稳定性。

6.什么是生物膜？生物膜的主要分子组成、结构特征及生物学功能是什么？简单描述生物膜是如何被动及主动的进行溶质分子的运输的。（20分）

细胞是生物的基本结构和功能单位，而生物膜结构是细胞结构的基本形式。生物膜包括细胞的外周膜和细胞内各个细胞器的膜结构组成的内膜系统。

生物膜结构的主要特征有：生物膜的主要组分在膜两侧的分布不均匀；生物膜具有流动性，既包括膜脂，也包括膜蛋白的运动状态。

生物膜主要的生物学功能有：能量转换、物质运输、信号识别与传递、神经传导和代谢调控等。

1)被动运输

物质从高浓度一侧通过膜运送到低浓度一侧，即顺浓度梯度的方向跨膜运送的过程

称被动运输。在该过程中△G<0，O2、CO3等溶质沿浓度梯度靠自由扩散进细

胞，最代达到平衡为止。

2)主动运输

凡物质逆浓度梯度的运送称主动运送，这一过程进行需供给能量。

△G =2.3RT log(C2/C1) + ZF△V>0

主动运输的特点：

专一性；饱和性；方向性；可被选择性抑制；需提供能量。

7.细胞内收到损伤的RNA及蛋白质能跟很快被编码的DNA信息取代而得以修复，然而DNA

的损伤却不能被自身的信息所取代，DNA的损伤是依靠细胞内多重系统进行修复，请描述目前已知的可导致DNA损伤的物理化学因素以及细胞内的多重DNA修复系统，并结合相关知识，以癌症为例讨论“DNA的修复决定人的生死”的含义。（30分）

导致DNA损伤的物理化学因素：紫外线、电离辐射和化学诱变剂。

细胞内具有一系列起修复作用的酶系统，可以除去DNA上的损伤，恢复DNA的正常双螺旋结构。目前已经知道有五种修复系统：错配修复，直接修复，切除修复，重组修复和诱导修复。

错配修复

DNA的错配修复机制是在对大肠杆菌的研究中被阐明的。DNA在复制过程中发生错配，如果新合成链被校正，基因编码信息可得到恢复，但是如果模板链

被校正，突变就被固定。细胞错配修复系统能够区分“旧”链和“新”链。Dam甲基化酶可使DNA的GATC序列中腺嘌呤N6位甲基化。复制后DNA在短期内(数分钟)为半甲基化的GATC序列，一旦发现错配碱基，即将未甲基化的链切除，并以甲基化的链为模板进行修复合成。

直接修复

直接修复由很多修复类型，常见的有光复活修复。光复活作用是一种高度专一的修复方式。它只作用于紫外线引起的DNA嘧啶二聚体。光复活酶在生物界分布很广，从低等单细胞生物一直到鸟类都有，而高等的哺乳类却没有，这说明在生物进化过程中该作用逐渐被暗修复系统所取代，并丢失了这个酶。

切除修复

在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤部分切除掉，并以完整的那一条链为模板，合成出切去的部分，然后使DNA恢复正常结构的过程，这是比较普遍的一种修复机制，它对多种损伤均能起修复作用。参与切除修复的酶主要有：特异的核酸内切酶、外切酶、聚合酶和连接酶。细胞内有多种特异的核酸内切酶可识别由紫外线或其他因素引起的DNA的损伤部位，在其附近将核酸单链切开（incision），再由核酸外切酶将损伤链切除（excision），然后由DNA聚合酶进行修复合成，最后由DNA连接酶将新合成的DNA链与已有的链接上。大肠杆菌DNA聚合酶I兼有5′核酸外切酶活力，因此修复合成和切除两步可由同一酶来完成。真核细胞的DNA聚合酶不具有外切酶活力，切除必须由另外的外切酶来进行。现在已能利用有关的酶在离体情况下实现DNA损伤的切除修复。

DNA复制时，DNA聚合酶对dTTP和dUTP分辨力不高，有少量dUTP掺入DNA链。细胞中的尿嘧啶-N-糖苷酶可以切掉尿嘧啶。腺嘌呤脱氨形成次黄嘌呤时也可以被次黄嘌呤-N-糖苷酶切掉次黄嘌呤。

对于无嘌呤无嘧啶的损伤有两种修复方法：AP核酸内切酶切开，核酸外切酶切除，DNA 聚合酶修复，DNA连接酶连接；插入酶插入正确碱基。

由此可见修复作用是一种普遍的功能，它并不局限于某种特殊原因造成的损伤，而能一般地识别DNA双螺旋结构的改变，对遭到破坏而呈现不正常结构的部分加以去除。细胞的这种功能对于保护遗传物质DNA使它不轻易被破坏是有很大意义的。失去这种修复功能的细菌突变株，即表现出容易被紫外线所杀死，同样也提高了化学诱变剂的致死效应。

重组修复

遗传信息有缺损的子代DNA分子可通过遗传重组而加以弥补，即从完整的母链上将相应核苷酸序列片段移至子链缺口处，然后用再合成的序列来补上母链的空缺。此过程称为重

组修复，因为是发生在复制之后，又称为复制后修复

在重组修复过程中，DNA链的损伤并未除去。当进行第二轮复制时，留在母链上的损伤仍会给复制带来困难，复制经过损伤部位时所产生的缺口还需通过同样的重组过程来弥补，直至损伤被切除修复所消除。但是随着复制的不断进行，若干代后，即使损伤始终未从亲代链中除去，而在后代细胞群中也已被稀释，实际上消除了损伤的影响。

诱导修复

诱导修复是细胞DNA受到严重损伤或DNA复制系统受到抑制的紧急情况下，为求得生存而出现的一系列诱导性修复。

SOS反应诱导的修复系统包括避免差错的修复（无差错修复）和倾向差错的修复。避免差错的修复：SOS反应能诱导光复活切除修复和重组修复中某些关键酶和蛋白质的产生，从而加强光复活切除修复和重组修复的能力，这属于避免差错的修复。倾向差错的修复：SOS反应还能诱导产生缺乏校对功能的DNA聚合酶，它能在DNA损伤部位进行复制而避免了死亡，可是却带来了高的突变率，这属于倾向差错的修复。

SOS反应是由RecA蛋白和LexA阻遏物相互作用引起的。RecA蛋白不仅在同源重组中起重要作用，而且它也是SOS反应的最初发动因子。在有单链DNA和ATP存在时，RecA 蛋白被激活而表现出蛋白水解酶的活力，它能分解λ噬菌体的阻遏蛋白和LexA蛋白。LexA 蛋白（22Kd）许多基因的阻遏物，当它被RecA的蛋白水解酶分解后就可以使一系列基因得到表达其中包括紫外线损伤的修复基因uvrA、uvrB、uvrC（分别编码核酸内切酶的亚基）以及recA和lexA基因本身，还有单链结合蛋白基因ssb，与λ噬菌体DNA整合有关的基因himA、与诱变作用有关的基因umuDC，与细胞分裂有关的基因sulA，ruv，和lon，以及一些功能不清楚的基因dinA，B，D，F等。

SOS反应广泛存在于原核生物和真核生物，它是生物在极为不利的环境中求得生存的一种基本功能。然而癌变有可能也是通过SOS反应造成的，因为能引起SOS反应的作用剂通常都具有致癌作用，如X-射线，紫外线，烷化剂，黄曲霉素等，而某些不能致癌的诱变剂并不引起SOS反应，如5-溴尿嘧啶。目前，有关致癌物的一些简便检测方法就是根据SOS 反应原理而设计的，既测定细菌的SOS反应。

与癌症相关的基因有原癌基因和抑癌基因，只有原癌基因被激活而抑癌基因突变失去活性才会导致癌症。这是一个突变积累的过程。答题时从这个大方向就可以了。

1992-2016年浙江大学820普通物理考研真题及答案解析-汇编

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浙江大学生物化学丙实验报告3,4

,. 实验报告课程名称：生物化学实验（丙）指导老师：方祥年成绩：__________________ 实验名称：蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的和要求 1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法 ①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； ②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。 2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。二、实验内容和原理 1、Folin-酚测定法 Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。优点：简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。缺点：该反应受多种因素的干扰。 2、蔗糖酶活力测定蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。专业：农业资源与环境姓名：李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5. 26 地点：生物实验中心310 装订线

(完整版)浙江大学物理化学实验思考题答案

一、恒温槽的性能测试 1.影响恒温槽灵敏度的主要因素有哪些？如和提高恒温槽的灵敏度？答：影响灵敏度的主要因素包括：1)继电器的灵敏度；2)加热套功率；3)使用介质的比热；4)控制温度与室温温差；5)搅拌是否均匀等。要提高灵敏度：1)继电器动作灵敏；2)加热套功率在保证足够提供因温差导致的热损失的前提下，功率适当较小；3)使用比热较大的介质，如水；4)控制温度与室温要有一定温差；5)搅拌均匀等。 2.从能量守恒的角度讨论，应该如何选择加热器的功率大小？答：从能量守恒角度考虑，控制加热器功率使得加热器提供的能量恰好和恒温槽因为与室温之间的温差导致的热损失相当时，恒温槽的温度即恒定不变。但因偶然因素，如室内风速、风向变动等，导致恒温槽热损失并不能恒定。因此应该控制加热器功率接近并略大于恒温槽热损失速率。 3.你认为可以用那些测温元件测量恒温槽温度波动？答：1)通过读取温度值，确定温度波动，如采用高精度水银温度计、铂电阻温度计等；2)采用温差测量仪表测量温度波动值，如贝克曼温度计等；3)热敏元件，如铂、半导体等，配以适当的电子仪表，将温度波动转变为电信号测量温度波动，如精密电子温差测量仪等。 4.如果所需恒定的温度低于室温，如何装备恒温槽？答：恒温槽中加装制冷装置，即可控制恒温槽的温度低于室温。 5.恒温槽能够控制的温度范围？答：普通恒温槽(只有加热功能)的控制温度应高于室温、低于介质的沸点，并留有一定的差值；具有制冷功能的恒温槽控制温度可以低于室温，但不能低于使用介质的凝固点。其它相关问题： 1.在恒温槽中使用过大的加热电压会使得波动曲线：( B ) A.波动周期短，温度波动大； B.波动周期长，温度波动大； C.波动周期短，温度波动小； D.波动周期长，温度波动小。

浙江大学生物化学(乙)第1次

您的本次作业分数为：100分单选题2.生成酮体和胆固醇都需要的酶是（）。 A HMG-CoA 合成酶 B HMG-CoA还原酶 C HMG-CoA裂解酶 D 乙酰乙酰硫激酶 E 转硫酶正确答案:A 单选题 3.乳糖操纵子的调节水平在（）。 A 复制 B 转录 C 转录后 D 翻译 E 翻译后正确答案:B 单选题 4.变构效应物对酶结合的部位是（）。 A 活性中心与底物结合的部位 B 活性中心的催化基团 C 酶的-SH基 D 活性中心以外的特殊部位 E 活性中心以外的任何部位正确答案:D 单选题 5.1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为（）。 A 1 B 2 C 3 D 4 E 5 正确答案:D 单选题 6.酶的辅基具有下述性质（）。 A 是一种结合蛋白 B 与酶蛋白结合比较疏松 C 由活性中心的若干氨基酸残基组成 D 决定酶的专一性 E 与酶蛋白亲和力较大，一般不能用透析等物理方法彼此分开正确答案:E 单选题 7.体内转运一碳单位的载体是（）。 A 生物素 B 磷酸吡哆醛

C 四氢叶酸 D 二氢叶酸 E CoA 正确答案:C 单选题 8.原核生物转录的终止因子是（）。 A α B ρ C β D σ E Γ 正确答案:B 单选题 10.下列哪一物质含有高能键？（） A 6-磷酸葡萄糖 B 1,6-二磷酸果糖 C 1,3-二磷酸甘油酸 D 烯醇式丙酮酸 E 乳酸正确答案:C 单选题 12.肝脏不能氧化利用酮体是由于缺乏（）。 A HMGCoA合成酶 B HMGCoA裂解酶 C HMGCoA还原酶 D 琥珀酰CoA转硫酶 E 乙酰乙酰CoA硫解酶正确答案:D 单选题 14.下列关于遗传密码的基本特点，哪一点是错误的？（） A 密码无标点 B 一种氨基酸只有一种遗传密码 C 有终止密码和起始密码 D 密码专一性主要由头两个碱基决定 E 病毒、原核细胞或真核细胞都利用同一套遗传密码正确答案:B 单选题 16.三羧酸循环的第一个产物是（）。 A 乙酰CoA B 草酰乙酸 C 柠檬酸 D 苹果酸

大学物理习题册-陈晓-浙江大学出版社第七.八章答案

1、磁场的高斯定理??=?0S d B 说明了下面的哪些叙述是正确的？ a 穿入闭合曲面的磁感应线条数必然等于穿出的磁感应线条数； b 穿入闭合曲面的磁感应线条数不等于穿出的磁感应线条数； c 一根磁感应线可以终止在闭合曲面内； d 一根磁感应线可以完全处于闭合曲面内。 A 、ad ； B 、ac ； C 、cd ； D 、ab 。 [ ] 1. A 解释：磁感线闭合的特性。 2 洛仑兹力可以 A 、改变带电粒子的速率； B 、改变带电粒子的动量； C 、对带电粒子作功； D 、增加带电粒子的动能。 [ ] B 解释：洛仑兹力的特点，改变速度方向不改变速度大小。 3 如图所示，两个载有相等电流I 的半径为R 的圆线圈一个处于水平位置，一个处于竖直位置，两个线圈的圆心重合，则在圆心O 处的磁感应强度大小为多少? A 、0； B 、R I 2/0μ； C 、R I 2/20μ； D 、R I /0μ。 [ ] C 解释：两个圆电流中心磁感强度的合成，注意方向。 4 一载有电流I 的细导线分别均匀密绕在半径为R 和r 的长直圆筒上形成两个螺线管（R=2r ），两螺线管的匝数密度相等。两螺线管中的磁感应强度大小R B 和r B 应满足： A 、r R B B 2=； B 、r R B B =； C 、r R B B =2； D 、r R B B 4=。 [ ] B 解释：参考长直螺线管内部磁感强度公式nI B 0μ=，场强与半径无关。

5 B 6 D

7 B 一质量为m 、电量为q 的粒子，以速度υ垂直射入均匀磁场B 中，则粒子运动轨道所包围范围的磁通量与磁场磁感应强度B 大小的关系曲线是 [ ] （A ）（B ）（C ）（D ）解释：由半径公式qB m R υ = 求出磁通量表达式，反比关系。 8 如图所示，有一无限长通电流的扁平铜片，宽度为a ，厚度不计，电流I 在铜片上均匀分布，在铜片外与铜片共面，离铜片右边缘为b 处的P 点的磁感应强度B 的大小为： A 、 () b a I +πμ20 ； B 、； ) 2 1 (20b a I +πμ C 、b b a a I +ln 20πμ； D 、a b a b I +ln 20πμ。 [ ] C 解释：铜片上取线电流，由无限长线电流磁感强度公式) (20x b a a Idx dB -+= πμ积分求出p 点

浙大生化(丙)课堂期中试卷

生物化学（丙）期中试卷一．判断题 1.1分子的NADH+H+经呼吸链氧化可产生 2.5分子ATP。 2.蛋白质变性的本质是蛋白质分子的高级结构被破坏，一级结构则保持完整。 3.琥珀酸脱氢酶和NADH脱氢酶的辅助因子都是FAD。 4.磺胺药可使乙酰胆碱酯酶的Km上升，Vmax不变。 5.ATP的主要功能是为机体提供能量和提供活性磷酸基团。 6.糖异生是指由丙酮酸、琥珀酸CoA、6-磷酸果糖、苹果酸等物质转变为葡萄糖的过程。 7.蛋白质三级结构的稳定力包括氢键、盐键、疏水相互作用、范德华力、二硫键、配位键等次级键。 8.同源蛋白质的种属差异性说明一级结构的局部改变并不会影响蛋白质的功能。 9.同工酶是指功能相同，但结构和性质不同的一类酶。 10.限制性内切酶是指在一特殊序列处将DNA的两条链同时切断的一类酶。 11.ATP是磷酸果糖激酶I的底物，因此对该酶的活性起别构激活作用。 12.反馈抑制作用是指反应的产物对催化反应的酶的抑制作用。 13.硫辛酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和辅酶A都可以作为酰基的载体起传递作用。 14.酶催化高效性的机理是通过酸碱催化、温度效应、共价催化等因素降低了反应的活化能。 15.蛋白质的基本化学键是肽键、核酸的基本化学键是3’,5’-磷酸二酯键。二．单选题 1.根据酶催化反应的性质，延胡索酸酶属于： (1)水解酶类(2)合成酶类(3)裂合酶类(4)转移酶类 2.当[S]=2Km时，V的值是： (1)2Vmax(2)2/3Vmax(3)1/3Vmax(4)1/2Vmax 3.下列酶催化的反应无CO2参与的是： (1)6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (2)苹果酸酶 (3)3-磷酸甘油醛脱氢酶 (4)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 4.1分子的F1，6-2P被彻底氧化分解为CO2和H2O可产生的高能化合物分子数为（通过 α-磷酸甘油穿梭）： (1)32(2)30(3)34(4)28 5.在2,4-二硝基苯存在下一分子FADH2通过呼吸链可产生的ATP分子数是： (1)1(2)0(3)1.5(4)2.5 6.DNA的双螺旋结构中，主要的稳定力是： (1)氢键 (2)疏水相互作用 (3)范德华力 (4)离子键 7.下列代谢途径既不发生在细胞液也不发生在线粒体中的是： (1)EMP途径(2)TCA途径(3)HMP途径(4)乙醛酸循环 8.蛋白质的特征吸收波长是：(1)260nm(2)280nm(3)340nm(4)500nm 9.下列代谢途径中能为机体提供NADPH+H+的代谢途径是： (1)糖酵解途径(2)乙醛酸循环途径(3)磷酸戊糖途径(4)呼吸链 10.在酶的活化和去活化中，磷酸化和去磷酸化常发生在那个氨基酸残基：

浙江大学物理光学实验报告

本科实验报告课程名称：姓名：系：专业：学号：指导教师：物理光学实验郭天翱光电信息工程学系信息工程（光电系） 3100101228 蒋凌颖 2012年1 月7日实验报告实验名称：夫琅和弗衍射光强分布记录实验类型：_________ 课程名称：__物理光学实验_指导老师：_蒋凌颖__成绩：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得一、实验目的和要求 1．掌握单缝和多缝的夫琅和费衍射光路的布置和光强分布特点。 2．掌握一种测量单缝宽度的方法。 3．了解光强分布自动记录的方法。二、实验内容一束单色平面光波垂直入射到单狭缝平面上，在其后透镜焦平面上得到单狭缝的夫琅禾费衍射花样，其光强分布为： i?i0( 装式中 sin? ? ) 2 （1）订 ?? 线 ??sin?? （2） ?为单缝宽度，?为入射光波长，?为考察点相应的衍射角。i0为衍射场中心点（??0处）的光强。如图一所示。由（1）式可见，随着?的增大，i有一系列极大值和极小值。极小值条件 asin??n?(n?1,n?2) （3）是：如果测得某一级极值的位置，即可求得单缝的宽度。如果将上述单缝换成若干宽度相等，等距平行排列的单缝组合——多缝，则透镜焦面上得到的多缝夫琅禾费衍射花样，其光强分布： n? sin?2 )2 i?i0()( ?

2 （4） sin 式中 ?? sin??2???dsin? ? ?? （5） ?为单缝宽度，d为相邻单缝间的间距，n为被照明的单缝数，?为考察点相应的衍射角；i0为衍射中心点（??0处）的光强。 n? )2 (sin?2() 2称?为单缝衍射因子，为多缝干涉因子。前者决定了衍射花 sin （干涉）极大的条件是dsin??m?(m?0,?1,?2......)。 dsin??(m? m )?(m?0,?1,?2......;m?1,2,.......,n?1)n 样主极大的相对强度，后者决定了主极大的位置。（干涉）极小的条件是当某一考虑点的衍射角满足干涉主极大条件而同时又满足单缝衍射极小值条件，该点的光强度实际为0/，主极大并不出现，称该机主极大缺级。显然当d/??m/n为整数时，相应的m 级主极大为缺级。不难理解，在每个相邻干涉主极大之间有n-1个干涉极小；两个相邻干涉极小之间有一个干涉次级大，而两个相邻干涉主级之间共有n-2个次级大。三、主要仪器设备激光器、扩束镜、准直镜、衍射屏、会聚镜、光电接收扫描器、自动平衡记录仪。四、操作方法和实验步骤 1．调整实验系统（1）按上图所示安排系统。（2）开启激光器电源，调整光学元件等高同轴，光斑均匀，亮度合适。（3）选择衍射板中的任一图形，使产生衍射花样，在白屏上清晰显示。（4）将ccd的输出视频电缆接入电脑主机视频输出端，将白屏更换为焦距为100mm的透镜。（5）调整透镜位置，使衍射光强能完全进入ccd。（6）开启电脑电源，点击“光强分布测定仪分析系统”便进入本软件的主界面，进入系统的主界面后，点击“视频卡”下的“连接视频卡”项，打开一个实时采集窗口，调整透镜与ccd的距离，使电脑显示屏能清晰显示衍射图样，并调整起偏/检偏器件组，使光强达到适当的强度，将采集的图像保存为bmp、jpg两种格式的图片。 2．测量单缝夫琅和费衍射的光强分布（1）选定一条单狭缝作为衍射元件（2）运用光强分布智能分析软件在屏幕上显示衍射图像，并绘制出光强分布曲线。（3）对实验曲线进行测量，计算狭缝的宽度。 3．观察衍射图样将衍射板上的图形一次移入光路，观察光强分布的水平、垂直坐标图或三维图形。

浙江大学生物化学丙实验报告1

实验报告课程名称：生物化学实验（丙）指导老师：方祥年成绩：__________________ 实验名称：蔗糖酶的提取同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法； 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。二、实验内容和原理 1、实验内容：蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理： ①酵母细胞破碎细胞破碎的常用方法液体剪切法固体剪切法压力和研磨物理法、化学渗透法、酶溶本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 ②蔗糖酶的初步分离纯化蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。三、实验材料与试剂

1、实验材料市售干酵母粉10g/组(3～4人） 2、实验试剂石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。四、实验器材与仪器电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加研磨10min，使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min （条件：4℃、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min，并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。（条件：4℃，12000r/min） ④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，

浙江大学考研生物化学真题及答案

一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP+生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异同 3 请对中心法则加以阐述 4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,请说明其工作原理并简述用该法分离蛋白质的实验操作步骤

(完整版)大学物理习题册-陈晓-浙江大学出版社第二章答案

P8. 1.B A 重力在速度方向上的分力，大小在变，a τ 不为恒量 B 正确 2 2 sin sin N n N N v F mg ma m R v F m mg R v F θθθ-===+↑↑↑ C 合外力为重力和支持力的合力，错 D 错 2.C 说的是“经摩擦力”，应和重力构成平衡力。 3A 212 s at t = === 4C 杆Mg f Ma += 猴,0mg f ma -== 得M m a Mg += 5A 合外力为0 6C

() (sin )*(sin )(sin )0ma Fcos mg Fsin F cos mg cos a da F cos d tg θμθθμθμθμθμθθθ μθ =--=+-+=-==取最大值，则取最大值 7B 8B 2 sin cos v N m R N mg v Rgtg θθθ ?=???=?= 9

10 一质量为5kg 的物体（视为质点）在平面上运动，其运动方程为263()r i t j SI =-r r r ，则物体所受合外力f r 的大小为_____；其方向为______. 解因为()22 5630d r f m j j dt ==?-=-r r r ，所以物体所受合力f r 的大小为30N ，其方向沿y 轴负向。 11 0000000000022002cos cos sin sin cos (1cos )v t x t x dv F a t dt m F dv t dt m dx F v t dt m F dx t dt m F F x x t m m F x t x m ωωωωωωωωωωω= ==?===?-=-+=-+????

《大学物理》质点力学例题(浙大)

质点力学例题 1．一质点沿x 轴方向运动，其加速度随时间的变化关系为 a = 3 + 2t (SI)，如果初始时质点的速度为5 m/s ，则当 t = 3 s 时，质点的速度v = __________ m/s 。 )m/s (23)3(5d )23(53 023 =++=++=?t t t t v 2．质量为0.25 kg 的质点，受力F = t i （SI ）的作用，式中t 为时间，t = 0 s 时该质点以v 0 = 2j m/s 的速度通过坐标原点，则该质点任意时刻的位置矢量是__________。 i F a t m 4== j i 222+=t v j i r t t 23 2 3+= 3．已知一质点的运动方程为 r = 2 t i +（2 - t 2）j （SI ），则t = 2 s 时质点的位置矢量为__________，2秒末的速度为__________。 j i r 24-= j i 42-=v 4．一个具有单位质量的质点在力场 F = ( t 2 - 4t ) i + ( 12t - 6 ) j （SI ）中运动，设该质点在t = 0时位于原点，且速度为零。则t 时刻该质点的位置矢量r = ____________。 j i r )32()3 2121( 233 4t t t t -+-= 5．一质点从静止出发沿半径 R = 1 ( m )的圆周运动，其角加速度随时间t 的变化规律是 α = 12t 2 - 6t (SI)。则质点的角速度ω =_________，法向加速度a n =_________，切向加速度a τ =_________。 230 2 34d )612(t t t t t t -=-= ?ω t t R a 6122-==ατ 2232)34(t t R a n -==ω 6．一质点在水平面内以顺时针方向沿半径为2 m 的圆形轨道运动，质点的角速度与时间的关系为ω = kt 2（其中k 为常数），已知质点在第二秒末的线速度为32 m/s ，则在t = 0.5 s 时，该质点的切向加速度a τ = _______；法向加速度a n = _______。 2rkt r ==ωv 22232?=k 4=k 24t =ω t 8=α )m/s (85.0822=??==ατr a )m/s (25.0422422=??==ωr a n 7．已知质点的运动方程为 r = R sin ωt i +R cos ωt j ，则其速度v = __________，切向加速度a τ = __________，法向加速度a n = __________。 j i t R t R ωωωωsin cos -=v R ω=v 0d d ==t a v τ R R a n 22 ω==v

浙江省大学物理试题库204-热力学第一定律、典型的热力学过程

浙江工业大学学校 204 条目的4类题型式样及交稿式样热力学第一定律、典型的热力学过程一. 选择题题号：20412001 分值：3分难度系数等级：2 1 如图所示，一定量理想气体从体积V 1，膨胀到体积V 2分别经历的过程是：A →B 等压过程，A →C 等温过程；A →D 绝热过程，其中吸热量最多的过程 (A) 是A →B. (B) 是A →C. (C) 是A →D. (D) 既是A →B 也是A →C , 两过程吸热一样多。 [ ] 答案：A 题号：20412002 分值：3分难度系数等级：2 2 质量一定的理想气体，从相同状态出发，分别经历等温过程、等压过程和绝热过程，使其体积增加一倍．那么气体温度的改变(绝对值)在 (A) 绝热过程中最大，等压过程中最小． (B) 绝热过程中最大，等温过程中最小． (C) 等压过程中最大，绝热过程中最小． (D) 等压过程中最大，等温过程中最小．［］答案：D 题号：20412003 分值：3分难度系数等级：2 V

3 一定量的理想气体，从a 态出发经过①或②过程到达b 态，acb 为等温线(如图)，则①、②两过程中外界对系统传递的热量Q 1、Q 2是 (A) Q 1>0，Q 2>0． (B) Q 1<0，Q 2<0． (C) Q 1>0，Q 2<0． (D) Q 1<0，Q 2>0．［］答案：A 题号：20413004 分值：3分难度系数等级：3 4 一定量的理想气体分别由初态a 经①过程ab 和由初态a ′经②过程a ′cb 到达相同的终态b ，如p －T 图所示，则两个过程中气体从外界吸收的热量 Q 1，Q 2的关系为： (A) Q 1<0，Q 1> Q 2． (B) Q 1>0，Q 1> Q 2． (C) Q 1<0，Q 1< Q 2． (D) Q 1>0，Q 1< Q 2．［］答案：B 题号：20412005 分值：3分难度系数等级：2 5. 理想气体向真空作绝热膨胀． (A) 膨胀后，温度不变，压强减小． (B) 膨胀后，温度降低，压强减小． (C) 膨胀后，温度升高，压强减小． (D) 膨胀后，温度不变，压强不变．［］答案：A 题号：20412006 分值：3分难度系数等级：2 6. 一定量的理想气体，从p －V 图上初态a 经历(1)或(2)过程到达末态b ，已知a 、b 两态处于同一条绝热线上(图中虚线是绝热线)，则气体在 (A) (1)过程中吸热，(2) 过程中放热． (B) (1)过程中放热，(2) 过程中吸热． (C) 两种过程中都吸热． (D) 两种过程中都放热．［］答案：B 题号：20412007 分值：3分 p V

浙江大学生物化学丙实验报告1

专业：农业资源与环境姓名：李佳怡 ____________ 学号：_J6 _______________ 日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙）实验名称：蔗糖酶的提取一、实验目的和要求（必填）三、实验材料与试剂（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）七、实验结果与分析（必填） .指导老师：方祥年成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛二、实验内容和原理（必填）四、实验器材与仪器（必填）六、实验数据记录和处理八、讨论、心得一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法; 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。二、实验内容和原理订 1、实验内容: 线蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理: ① 酵母细胞破碎液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法固体剪切法一压力和研磨非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀来。 ② 蔗糖酶的初步分离纯化蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。实验报告细胞破碎的常用方法

三、实验材料与试剂 1、实验材料市售干酵母粉10g/组（3?4人） 2、实验试剂石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。四、实验器材与仪器电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10計约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨（干磨）：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：呈:取总体积40 ml的20mmol几Tris-HCl缓冲液，分2次加研磨lOmin, 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后（托盘天平上），离心lOmin （条件:4°C、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上淸液并量出体积VI （样品I）,另留1ml上淸液（样品I ）放置一20°C冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测眾、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I）,迅速放入50°C恒温水浴，保温30min, 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min a （条件：4°C, 12000r/min） ④收集+测量：收集上淸液并量出体积V2 （样品II）,另留1ml上淸液（样品II ）放宜一20°C冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测左、测左蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上淸液加入相同体枳的一20°C的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，

浙江大学考博生物化学03-13年试卷

2003年秋一、名词变性与复性构型和构象Km 氧化磷酸化脂肪酸ß-氧化核糖体中心法则辅酶与辅基人类基因组计划和后基因组计划分子伴侣二、论述 1 生物大分子中结构与功能的关系（10） 2 糖酵解过程（10） 3 选择一种分离方法，叙述其原理和操作过程（15） 4 生物化学的最新前沿进展（15） 2004年春一、名词 ATP 构型和构象Km 分解与合成代谢核糖体中心法则Sanger 反应变性与复性启动子基因表达二、论述 1．生物中大分子物质构成的基本结构（10） 2葡萄糖转化二氧化碳和水过程中相应步骤和酶（10） 3凝胶电泳的原理及应用（15） 4．生物化学的最新前沿进展（15） 2004年秋论述 1.蛋白质模体和结构域（15） 2.生物膜结构特征和生物学功能（15） 3.生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4. DNA复制和转录的原理（15） 5.真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6.比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20） 2005年春论述 1蛋白质模体和结构域（15） 2生物膜结构特征和生物学功能（15） 3生物体在同化和进化中能量的转化形式与关系（15） 4 DNA复制和转录的原理（15） 5真核生物基因的表达和表达的调节（20） 6比较离子交换、分子排阻、和亲和层析的分离原理（20） 2006年论述 1．生物化学研究的内容与目标 2．生物膜及其功能 3．蛋白膜质体与结构域 4．水对生物体的重要作用 5．DNA复制和转录的原理

6．氨基酸以R基分几类，写出其三字母、单字母的缩写 7．比较亲和层析、离子交换、分子排阻的原理 8．举例说明四种非共价键在蛋白质、核酸分子中的作用 9．构型与构象10. 生物体能量转化及其关系未知年份论述题 1.双向电泳的原理及步骤 2.单克隆抗体与多克隆抗体的定义 3.生物化学的定义与研究内容 4.蛋白质中二、三结构域的定义 5. DNA 的复制过程 2007年一、名词解释氧化磷酸化、折叠、第二信使、沉默子、反义RNA、胴体、一碳单位、别构酶、冈崎片段、基因文库二、论述题 1.乙酰COA在脂肪氧化中的作用 2. RNA的分离纯化与鉴定 3.乳糖操纵子 4.真核生物基因表达的调控因子及其作用 5.肝糖原的激素影响及分子原理 6.生物重大研究进展与动物科学对其的指导意义 2008 年论述 1.生物膜的组成及其功能 2.脂类的功能 3.蛋白质合成过程中和DNA复制过程中的化学防错 4.血红蛋白和BPG的结构和功能 5. ATP和NAD+的结构和功能 6.名词解释：糖酵解、乙醛酸循环、卡尔文循环、TCA循环 7.设计动力学试验，验证反应实质 2010年生物化学真题回忆版： 20种氨基酸的分类，简写实验题2个关于分子实验和蛋白质实验的电泳的原理和分类层析化学渗透学说蛋白组学和研究进展 c3植物和c4植物的区别 G蛋白介导的信号转导机制生化题都是大题，回忆出大概内容，题目记不住了。祝大家考博成功！

浙江大学普通物理1996年试卷及解答

普通物理(B)1996年1月23日一、一、填空题 1．（普朗克常量h =6.63×10-34J ·s ，基本电荷e =1.60×10-19C ）硫化镉（CdS ）晶体的禁带宽度为2.42eV ，要使这种晶体产生本征光电导，则入射到晶体上的光的波长不能大于__________________。 2．粒子在一维无限深方势阱中运动，下图为粒子处于某一能态上的波函数Ψ（x ）的曲线。粒子出现几率最大的位置为______________________。 3．一维无限深势阱中，已知势阱宽度为a ，应用测不准关系估计势阱中质量为m 的粒子的零点能量为_____________________________。 4．(选择题) 以一定频率的单色光照射在某种金属上，测出其光电流的曲线如图中实线所示，然后在光强度不变的条件下增大照射光的频率，测出其光电流的曲线如图中虚线所示，满足题意的图是_____________________。 5．一单色平面偏振光，垂直投射到一块用石英（正晶体）制成的四分之一波片（对投射光的频率）上，如图所示。如果入射光的振动面与光轴成30°角，则对着光看从波片射出的光是___________________光，并画出o-光和e-光的振动方向。 6． X 射线射到晶体上，对于间距为d 的平行点阵平面，能产生衍射主极大的最大波长为________________________。 7．如图所示，两个直径有微小差别的彼此平行的滚柱之间的距离为L ，夹在两块平晶的中间，形成空气劈尖，当单色光垂直入射时，产生N 条等厚干涉条纹。如果滚柱之间的距离L 变为L/2，则在L 范围内干涉条纹的数目为__________，密度为_________。 O X Ψ a a/3 2a/3 I I U I O I U O A B C D L

浙江大学生物化学丙实验报告5

实验报告课程名称：生物化学实验（丙）指导老师：方祥年成绩：__________________ 实验名称：蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的和要求 1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析 3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法二、实验内容和原理（1）实验内容 1、SDS －PAGE 凝胶制作； 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 电泳分离； 3、洗脱测定并计算相对分子质量。（2）实验原理 1、电泳是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。 2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。 3、区带电泳是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。 4、聚丙烯酰胺凝胶（PAG) 由丙烯酰胺和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有催化剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。

5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为 ⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。该电泳系统具有电荷效应、分子筛效应； ⑵不连续系统凝胶缓冲离子成分、pH值、凝胶浓度、电位梯度不连续，由浓缩胶和分离胶组成。由于浓缩胶的堆积（浓缩）作用，可使样品（即使是稀释样品）在浓缩胶和分离胶的界面上先浓缩成一窄带，然后在一定浓度（或一定浓度梯度）的凝胶上进行分离。该电泳系统具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。 7、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 以PAG为支持物的电泳，由于各种蛋白质所带静电荷、分子量大小和形状不同而有不同的迁移率。为消除静电荷对迁移率的影响，在整个电泳体系中加入一定量的阴离子去污剂“十二烷基硫酸钠（简称SDS）”和“强还原剂（巯基乙醇）”后，蛋白质样品就会与SDS结合形成带负电荷复合物，而SDS作为一种变性剂和助溶剂，它能破坏蛋白质分子内和分子间的非共价键，并结合到蛋白质分子上，使分子去折叠，破坏蛋白质分子内的二级和三级结构，使蛋白质变性而改变原有的空间构象。另外，SDS－蛋白质复合物在强还原剂（巯基乙醇）存在下，可打开蛋白质分子内或肽链间的二硫键，并能避免重新氧化，这样分离出的谱带即为蛋白质亚基。蛋白质亚基的电泳的迁移率主要取决于亚基的相对分子质量大小，而电荷的因素可以忽略。 8、蛋白质亚基相对分子质量的测方法在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的SDS时，蛋白质－SDS复合物在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为1.8nm，而长轴则随蛋白质的分子量成正比变化。这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只主要取决于它的椭圆棒的长度即蛋白质的相对分子质量的大小，而其他因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量不同，在电泳中反映出不同的迁移率。当蛋白质或亚基的相对分子质量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与相对分子质量的

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