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针刀对颈型颈椎病模型兔颈肌中SOD、MDA的影响-田弯弯

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第18卷 第5期 2016 年 5 月

辽宁中医药大学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

Vol. 18 No. 5 May,2016

针刀对颈型颈椎病模型兔颈肌中SOD、MDA 的影响

田弯弯,李开平,李敏,张欣

(南京中医药大学,江苏 南京 210023)

摘 要:

目的:观察针刀干预对颈型颈椎病模型兔颈部肌肉组织中SOD 活性以及MDA 含量的影响,探讨针刀治疗颈型颈椎病的作用机制。方法:采用“风寒湿刺激加低头位”的方法对实验动物新西兰大白兔进行造模,将造模成功的18只新西兰大白兔随机均分为3组:模型组、针刀组、电针组,每组6只。另选6只正常新西兰大白兔作为空白对照组,分别用针刀以及电针干预针刀组、电针组动物,干预结束后观察各组实验兔颈部肌肉组织形态学变化,以及检测各组实验兔颈部肌肉中SOD 活性及MDA 含量的变化。结果:模型组与空白组相比颈部肌肉组织中的SOD 活性明显降低(P <0.01)、MDA 含量明显升高(P <0.01),针刀组及电针组与模型组相比SOD 活性均明显升高(P <0.01),MDA 含量均明显降低(P <0.01),针刀组与电针组相比,SOD 活性以及MDA 含量均无明显差异(P >0.05)。结论:针刀治疗颈型颈椎病可能通过清除自由基、提高颈部肌肉抗氧化能力,进而修复颈部动力平衡,达到治疗效果。

关键词:针刀;颈型颈椎病;肌肉组织;SOD;MDA

中图分类号:R681.55 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2016) 05- 0136- 03收稿日期:2015-10-10

基金项目:江苏省中医药局师承项目(SC200935)作者简介:田弯弯(1988-),女,河南洛阳人,硕士研究生,研究方向:针刀治疗运动神经系统疾病。通讯作者:李开平(1967-),男,安徽马鞍山人,副教授,硕士研究生导师,博士,研究方向:针刀治疗运动神经系统疾病。

Effect of Acupotomy on Muscular SOD and MDA Contents in Rabbit Models of Cervical Spondylosis

TIAN Wanwan,LI Kaiping,LI Min,ZHANG Xin

(Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,Jiangsu,China)

Abstract:Objective :To observe the effect on muscular SOD and MDA in Rabbit Models of cervical

spondiloss treating by acupotomoy,and to explore the possible mechanism of acupotomy in intervening Cervical Spondylosis. Method :Build the experiment models by using the method of“Wind cold stimulation plus bow position”on New Zealand white rabbits,the successful 18 rabbits models were randomly divided into three groups:model group,acupotomy group,electro-acupuncture(EA)group,each group 6. Additionally choose six New Zealand white rabbits as a normal control group. Using acupotomoy and EA intervene acupotomy group and EA group respectively,observe the changes of the rabbit neck muscle tissue 广泛,所适应的病种之多,是其它方剂所罕见的。足少阳胆经属胆,络肝,与心有联系[8]。心主神明,神安则寐,神不安则不寐。肝郁化火,痰热内扰,神不安宅者发不寐。故取穴胆经即可疏解肝胆,又可泻胆经痰瘀。足少阳胆经五输穴,是胆经分布于肘膝关节以下的五个重要腧穴(井、荥、输、经、合),分

别为:足窍阴、侠溪、足临泣、阳辅、阳陵泉[5]

。《难经》详论五输穴,井穴专主心下满,荥穴泻火主身热,输治体重与节痛,经主喘咳并寒热,合当逆气而下泄。取肘膝关节以下的穴位为治疗穴,从神经解剖学看,肘膝关节以下部位在大脑皮层的投射区范围较大,作用力相对较强。古人言:善用针者,手不过肘,足不过膝。五输穴是五脏六腑的全信息点。温胆汤配合胆经五输穴放血疗法对改善胆郁痰扰型失眠及失眠诱发的其他临床症状有良好的效果[6]。

对于失眠的治疗除了药物干预外心理辅导也很必要。睡眠卫生知识教育,可以帮助养成良好的睡眠习惯,消除对失眠症状的关注和恐惧,是失

眠治疗的基础[1]。制定较规律的作息时间,禁吸烟、

浓茶、咖啡等刺激性因素,对改善睡眠情况也有帮助[1]

综上所述,温胆汤加减联合胆经五输穴放血治疗胆郁痰扰型失眠,疗效显著、安全有效、无副作用,患者接受性强,可进行临床推广。◆

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DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2016.05.044

18卷辽宁中医药大学学报

近年来,颈椎病患病率逐年递增,患病人群出现低龄化趋势,给患者的日常生活带来了极大困扰。根据患病阶段以及症状体征的不同,颈椎病分为五大类型:颈型、椎动脉型、神经根型、交感神经型和脊髓型。颈型颈椎病是其他各类颈椎病共同的早期病变阶段,也是治疗的最佳时机,针刀通过对颈部肌肉的大量临床研究表明,针刀治疗颈型颈椎病疗效显著确切,而其作用机制尚不明确,针刀治疗颈型颈椎病机制的探究对指导临床治疗方案的选取有重要的意义。

1 材料与方法

1.1实验动物

选择兔龄(6±0.5)个月的健康雄性新西兰大白兔40只,体重均在(2.5±0.5)kg,普通级。购自南京中医药大学动物实验中心,许可证号:SCXK(苏)2012-0008。单笼常规饲养。

1.2实验仪器设备

全自动石蜡包埋机、石蜡切片机、HE染色仪(德国Leica公司);Eclipse E200光学显微镜(日本尼康公司);电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司);高速冰冻离心机(上海安亭科学仪器厂);721分光光度仪(上海光学仪器厂);电子天平(上海天平仪器厂);吹风机(1800 W,220 V);兔固定盒;乐灸牌小针刀(0.60 mm×50 mm);华佗牌针灸针(0.3 mm×50 mm);华佗牌电针治疗仪;医用手术器械无菌包(弯钳、组织钳、皮肤剪、手术刀、持针器等);剃毛器;自制冰袋等。

1.3实验试剂

4%多聚甲醛溶液、0.9%生理盐水、苏木素-伊红染色液、75%乙醇溶液、碘伏消毒液、超氧化物岐化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒等。

1.4方法

1.4.1 制造实验造模

本实验参照施杞等风寒湿刺激的造模方法加以改进[1],使造模操作过程更具可行性且更符合颈椎病的发病原因,首先用剃毛器将实验兔颈部的兔毛剔去,暴露皮肤,置于兔盒中固定以防止其挣扎,然后打湿兔颈部皮肤,将自制的冰袋敷于兔颈部,拉紧冰袋两端的细绳将其系在兔盒前端的锁扣上,使兔的颈部成低头屈曲位45°,固定完毕后,将吹风机调至5级给予兔颈部冷风刺激。每天上、下午各造模1次,每次3 h,共6 h,造模间隔期间注意兔子的基本状况,避免出现冰袋细绳牵拉过紧致其窒息死亡,以及因其在兔盒内挣扎后肢伸出兔盒外造成的长时间压迫死亡,造模时间持续4周。

1.4.2 动物分组及干预处理

将造模成功的实验兔分为模型组、针刀组、电针组,每组6只;同时取6只同期购进的未造模动物作为空白组对照。空白组、模型组常规饲养,不做干预。造模结束后1周开始对针刀组和电针组进行干预治疗。针刀组:参照人体针刀治疗四步操作规程。定点:先将实验兔固定于治疗台上,剔去颈部皮毛,暴露皮肤,触诊颈部,寻找颈部棘突两侧肌肉的硬结以及条索状物,无明显阳性反应点者可选取C3~C6棘突旁开1.5 cm左右处,两侧分别选取3个治疗点,用记号笔标记,碘伏常规消毒;定向:使针刀刃口与肌纤维走向平行,将刃口压于选取的治疗点上;加压分离:定向准确后,右手拇食指持针柄,其余三指推住针体,稍加压力不使刺破皮肤,使进针点处形成一个长形凹陷;刺入:当继续加压,感到坚硬感时,说明刀口下皮肤已被挤到接近骨质,加压即可刺破皮肤。对病变部位进行小幅度切割3次后出针,干棉球按压针孔。每5 d干预1次,共干预2次。干预结束1周后处死。电针组:参照《实验针灸学》中“实验动物穴位标准定位”选取实验兔的C3~C6双侧颈夹脊穴位,接通电针治疗仪,选取疏密波,电流强度2 mA,治疗时间20 min,隔天治疗1次,共治疗5次。

1.4.3 标本采集处理及指标测定

干预结束1周后,将所有实验动物用耳缘静脉注射空气的方法处死,迅速切开实验兔颈后部皮肤,在C2~C6棘突旁开约1 cm左右处取两块大小约1 cm×1 cm×1 cm的皮下肌肉组织,然后置于冰上操作,除去其他非肌肉组织,操作时动作轻柔,避免用力钳夹,用4℃ 0.9%生理盐水冲洗肌肉组织残留的血迹,取一块称重,将其充分剪碎后,加4 ℃冰生理盐水,在组织匀浆器中持续研磨5 min左右,再以3000 r/min转速离心10 min后,取上清液后存于4 ℃冰箱中放置待测,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,用硫代巴比妥算法检测MDA含量,具体操作步骤严格按照试剂盒说明。取另一块肌肉组织置于4%多聚甲醛中固定,4 ℃冰箱保存,固定1周后,经石蜡包埋,切片,常规HE染色,在光镜下观察组织形态学变化。

1.5统计分析

用SPSS20.0软件对实验数据进行统计学分析。所得计量资料均用x—±s表示,多组样本均数间的比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),P<0.05有统计学意义。

2 实验结果

2.1光镜下颈部肌肉组织形态学观察

光镜下主要观察肌肉组织结构、肌纤维、肌核形态变化以及炎性细胞浸润、成纤维细胞增生等。空白组实验动物颈肌组织切片可见肌肉组织结构清晰,肌纤维沿长轴平行排列整齐,明暗带清晰,肌核

as well as SOD and MDA content in rabbits neck muscles. Result:Compared with normal group,SOD activity was significantly lowered and MDA contents was increased significantly in model group;Compared with model group,SOD activity was significantly increased and MDA contents was lowered significantly in acupotomy group and EA group;No significant differences exists between acupotomy group and EA group (P>0.05).Conclusion:The mechanism of acupotomy treatment for cervical spondylosis possibly through scavenging free radicals,improve the antioxidant capacity of the neck muscles,and then repair the neck dynamic balance,to achieve therapeutic effect.

Keywords:acupotomoy;cervical spondiloss;muscle tissue;SOD;MDA

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辽宁中医药大学学报 18卷

呈椭圆形,均匀分布于肌纤维周围,肌细胞无变性水肿,无炎性细胞浸润。模型组可见肌肉组织结构杂乱,肌纤维排列不齐,肌细胞肿胀变形,肌核分布不均,出现炎性细胞浸润。针刀组可见肌肉组织结构较模型组整齐,可能由于针刀的切割作用,肌纤维部分断裂,炎性细胞浸润明显减少,未出现肉芽组织和瘢痕组织,细胞核排列较前均匀整齐。电针组结构周围炎细胞浸润减少,整体出现修复过程状态,损伤部位有核排列较整齐等现象,较模型组明显减轻,肌组织炎症反应也明显减少。(见图1)

针刀对颈型颈椎病模型兔颈肌中SOD、MDA的影响-田弯弯

针刀对颈型颈椎病模型兔颈肌中SOD、MDA的影响-田弯弯

空白组 模型组

针刀对颈型颈椎病模型兔颈肌中SOD、MDA的影响-田弯弯

针刀对颈型颈椎病模型兔颈肌中SOD、MDA的影响-田弯弯

针刀组 电针组

图1 各组实验兔颈部肌肉形态学观察

2.2 针刀干预对模型兔颈部肌肉中SOD 活性、MDA 含

量的影响(x —

±s )

组别n SOD U/(mgprot)MDA nmol/(mgprot)空白组

6150.22±13.34 0.85±0.37模型组6116.53±7.23** 5.26±1.55**针刀组6139.56±6.99## 2.23±0.92##电针组

6

130.56±7.76## 2.84±1.05##

注:与空白组比较,**P <0.01;与模型组比较,##P <0.01。

3 讨论

颈型颈椎病属中医“痹症”“经筋病”“颈肩痛”等范畴,中医认为该病的病因主要是外伤、风寒湿邪侵袭、颈部劳损、肝肾亏虚等。因风寒湿邪入侵或者外伤劳损导致的气血运行不畅,筋肉拘挛不利,不通则痛;或因肝肾亏虚、脾肾两虚导致的气血不足、筋骨失养、不荣则痛。现代医学认为颈椎病是由多种因素共同作用的结果,生物力学失衡是颈椎病发病的主要机制,人体颈椎的平衡包括静力平衡以及动

力平衡[2]

,静力平衡主要由椎体、附件、椎间盘及相连的韧带维持,动力平衡主要由颈部的肌肉维持,这两方面的平衡共同维持了颈部活动的灵活性和稳定性,任何一方的失衡都会导致颈椎稳定结构的破坏,进而出现活动障碍。颈肌作为动力平衡中的重要因素,其改变对颈椎病的发病以及病情进展有着重大的影响,长期低头位、风寒湿刺激以及精神紧张等因素均可导致颈部肌肉受损,影响颈椎的动力平衡,长期的动力平衡失调得不到调整,进而影响颈椎的静力平衡,对颈椎生理弧度、椎间隙、椎间盘、关节突关

节、韧带等都产生了一系列的影响,大量实验研究也

充分证明了这一点[3]

,施杞等也因此提出了“动力失

衡在先,静力失衡为主”的病机学说[4]

。目前颈椎病低龄化以及临床采用针刺以及推拿颈部肌肉等方法治疗颈椎病的事实也进一步说明颈椎病的发病不仅仅是因为椎间盘的自然退变,而是与颈部肌肉的劳损密切相关。学者们对颈椎病的研究也不再局限于对椎间盘、韧带、椎骨的研究,开始关注颈部肌肉的损伤。

目前关于骨骼肌损伤的可能机制[5]包括机械损伤学说、自由基损伤学说、钙离子超载学说、急性炎症反应学说、细胞凋亡学说等。自由基与骨骼肌损伤密切相关,正常人体中存在着自由基产生和清除的动态平衡,当这种平衡被打破,机体产生过多的自由基不能被清除时,会导致脂质过氧化反应增加,进而破坏细胞膜的结构和功能,对肌细胞造成损伤,已有大量研究证实自由基参与了骨骼肌损伤的病理过程[6],武震等[7]研究发现家兔颈后伸肌在长期应力作用下,血清中肌酸激酶和乳酸脱氢酶明显增加,颈肌中SOD 活性显著降低,MDA 含量明显升高。SOD 作为一种广泛存在于各种生物体的重要抗氧化酶,是天然的自由基清除剂。它能将有害的超氧自由基转化为过氧化氢,后被体内的过氧化氢酶分解为完全无害的水,保护组织细胞受损。MDA 是自由基作用于脂质发生过氧化反应的产物,通过检测MDA 的含量可反应自由基的水平。

针刀疗法作为一种新兴的治疗方法,自朱汉章教授发明以来,被广泛应用于颈椎病的治疗,临床疗效确切。多数学者认为针刀治疗颈椎病的疗效机制是针刀通过对颈部肌肉的切割松解,修复了劳损的肌肉,恢复颈部肌肉的力学平衡,从而恢复了颈椎的力学平衡,达到治疗颈椎病的目的。然而针刀对颈部肌肉的作用机制尚不明确,本实验研究发现颈椎病模型组颈部肌肉组织中的SOD 活性较空白组明显降低,MDA 含量较空白组明显升高,而针刀组和电针组SOD 活性较模型组明显升高,MDA 含量明显降低,针刀组与电针组相比无明显差异性。结果提示针刀治疗颈椎病可能是通过切开张力过高的筋膜、肌膜,降低了组织静水压,改善局部血液循环,组织缺血缺氧状态得到改善,自由基得到清除,局部组织抗氧化能力增强,肌细胞损伤得到修复,进而恢复了颈部的动力平衡,达到治疗颈椎病的目的。◆

参考文献

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