一步法和二步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较

乙型肝炎病毒前S1抗原的结果解释

乙型肝炎病毒前S1抗原的结果解释 乙型肝炎病毒（HBV）外膜蛋白包括S、前S2和前S1三种成分。前S1蛋白在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用。含有前S1的蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗料上。前S1蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面起有十分重要作用。乙肝病毒前S1抗原酶免测定试剂盒的正式推向临床以及近两年在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家医院与乙肝“两对半”检测的联合应用，充分显示了该试剂在病毒性乙型肝炎的临床诊断，指导治疗等方面的重要价值。前S1抗原（Pre-S1Ag）检测是对乙肝“两对半”尤其是e抗原和HBV-DNA测定的重要补充和加强。前S1抗原与HBV-DNA检出率两者符合，前S1抗原仅在HBV-DNA阳性血清中检出。前S1蛋白随HBeAg消失而消失，且与阴转时间呈正相关，这样，前S1抗原可作为病毒清除与病毒转阴的指标。前S1抗原阳性的乙型肝炎患者传播乙型肝炎病毒比前S1抗原阴性和无症状HbsAg携带者的危险性更大，因而说明前S1抗原可反映乙型肝炎病毒复制和传染性的指标。如果前S1抗原持续阳性，指示AHB向慢性转变。比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、和HBsAg阳性的患者血清中前S1蛋白，前S1抗原阴转愈早，AHB患者的疗程愈短，预后也愈好。说明前S1抗原及其抗体的检测是急性乙型肝炎的临床诊断，疗效观察和判数据预后的良好指标。 前S1蛋白的分子生物学特性1．乙肝病毒（HBV）的基因结构HBV为嗜肝DNA病毒，由一个不完全双链DNA组成，约3200个氨基酸。长链L含4个开放读码框架，为病毒蛋白的编码区：S区、C区、P区、X区。短链S相当于长链的50%-100%，其不固定端可被内原性DNA多聚酶延长，使病毒成为完整的双链。2．HBV基因组编码HBV抗原，所有四个功能性读码框架位于DNA负链，P基因编码DNA聚合酶。C基因编码HbcAg。S 基因编码S抗原，前S1抗原和前S2抗原。X基因编码X产物。

373例乙型肝炎患者HBV-DNA定量与乙型肝炎病毒核心抗原及肝脏酶学指标的相关性分析

373例乙型肝炎患者HBV-DNA定量与乙型肝炎病毒核心抗原及肝脏 酶学指标的相关性分析 目的探讨HBV-DNA定量和乙型肝炎病毒核心抗原在诊断乙型肝炎和评价病情中的意义。方法收集373例乙型肝炎患者的HBV-DNA定量、HBeAg 与丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转移酶（GGT）等实验室诊断指标，进行相关性分析。结果（1）HBV-DNA定量与HBeAg具有相关性（P 0.05）。结论（1）HBeAg一定程度上反映了病毒在体内的复制情况，但HBV-DNA定量是评价体内病毒复制更直接的指标。（2）HBV-DNA定量结果与肝功能受损情况相关，高病毒载量是肝功能受损的危险因素。 [Abstract] Objective To explore the significance of quantitative HBV-DNA and HBeAg in the diagnosis of hepatitis B and in the evaluation of disease. Methods Three hundred and seventy-three cases of hepatitis B patients with HBV-DNA quantitative, HBeAg, ALT, AST and GGT laboratory diagnostic indicators were collected, and the correlation analysis was conducted. Results (1)There was correlation between HBV-DNA quantitative and HBeAg (P 0.05). Conclusion (1)HBeAg reflects the replication of the virus in the body to a certain extent. However, HBV-DNA quantitative is a more direct indicator to evaluate the viral replication in vivo. (2)HBV-DNA quantitative relates to the liver function impairment, and high viral load is a risk factor for liver function impairment. [Key words] Hepatitis B; Laboratory diagnosis; HBV-DNA; HBeAg; ALT; AST; GGT 乙型病毒性肝炎仍严重威胁着人类健康。据世界卫生组织统计，全球约有3.5亿慢性HBV感染者，每年直接或间接导致约100万人死亡[1]。最新流行病学调查数据显示，我国1～59岁一般人群HBsAg携带率为7.18%[2]。据此估计，我国现有慢性HBV感染者约9 300万人，其中慢性乙型肝炎患者约2 000万例[3]。 酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒（HBV）的相关血清学标志物，是临床诊断乙型肝炎的重要指标，不同的血清学标志物也具有不同的临床意义。近年来研发的荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA技术日益成熟，并逐渐推广，目前也已成为临床诊断乙型肝炎的重要标准[4]。此外，在临床诊断时，肝功能酶学指标也常同时检测，以反映肝脏的损伤程度。笔者收集了373例乙型肝炎患者的实验室诊断数据，对HBV-DNA定量、HBeAg与丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转移酶（GGT）等指标进行了相关性分析，探讨这些指标在疾病诊断及判断患者病情中的作用。 1 资料与方法 1.1 研究对象 373例乙型肝炎患者数据选自本院门诊及住院的乙型肝炎患者，其中，男性282例，女性91例，年龄13～77岁，平均39.5岁。 1.2 方法 1.2.1 样本入选及剔除入选的样本均同时检测了HBV-DNA、HBeAg、ALT、AST、GGT等项目；并排除了肝癌、血液病等其他疾病对肝功能的影响。1.2.2 HBV-DNA定量检测采用ABI公司7500荧光定量PCR仪检测，试剂由深圳凯

乙肝表面抗原定量测定的方法学验证分析

乙肝表面抗原的 ELISA 法定量分析 方法学验证 姓名 Z P 学号 0925400072 班级 09 级医学检验本科二班 指导老师 沈 富 兵 二〇一三年四月

乙肝表面抗原定量测定的方法学验证 作者：ZP（成都医学院检验医学院09级医学检验本科二班，610500） 【摘要】目的用福州蓝图生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒对乙肝表面 抗原定量测定的方法进行验证，以判断是否能用于教学以及临床分析。方法运用ELLISA法定量测定乙 肝表面抗原，应用试剂盒HBsAg标准从浓度为8ng/ml 的2 倍稀释的6个浓度梯度，根据OD值绘制标准 曲线再计算相对回收率和板内和板间精密度，通过资料数据综合分析。结果HBsAg 线性较好，其准确度、精密度、LOD值均在正常范内。结论ELISA法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病 毒复制情况，可以用于教学以及临床分析。 【关键词】乙肝表面抗原方法学验证标准曲线精密度ELLISA 病毒性肝炎中乙型肝炎的危害较大，我国是病毒性乙型肝炎的高发流行区，普通人群的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染率接近60％，约占世界HBV携带者的1/3。乙型肝炎病毒的病原体不仅具有传染性，还可能导致发展成肝硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。酶免分析法HBV—EIA是HBV抗原和抗体最常用的检测技术，其方法简便、价廉，适合一般实验室推广，其中酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)目前应用最为广泛，它常用聚苯乙烯为固相载体，使其与待测标本中的相应抗体或抗原结合，然后加酶标记的抗原或抗体，再加底物显色，最后根据色泽深浅来推算待测抗原或抗体的含量。此方法特异性高，有效测定范围可达到20500 ng/ml，且酶免疫法有标记的试剂比较稳定并且无放射线危害等优点。 我们采用对已知抗体浓度的样品进行E LISA的定量检测，通过对其数据的分析来验证ELISA法最乙肝表面抗原定量检测的准确性和可靠性，以衡量其实用性。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试剂盒 乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。 1.1.2 仪器及酶标板 酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：Millipore Elix；电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。 1.1.3 溶液配制 ⑴0.01M pH7.4的PBS 缓冲液： 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4, 溶于800ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)

乙型肝炎表面抗原（HBsAg） 1、原理：采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP,当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗- HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 2、标本采集与处理? 2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。 2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐５分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。 2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。 2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。

2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8o c 保存。如需长期保存，可在-20℃保存，并避免反复冻融。 3、试剂与仪器： 3.1测定试剂： 3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司 3.1.2批准文号：国药准字S1******* 3.1.3包装：48T×1、96T×1 3.1.3试剂配置： 25倍浓缩稀释液 40ml×1瓶 HBsAg微孔反应板 96孔 HBsAg酶结合物 6.2 ml×1瓶 HBsAg阳性对照 1.0 ml×1瓶 HBsAg阴性对照 1.0 ml×1瓶 显色液A、B液各8.0 ml×1瓶 终止液 7 ml×1瓶 封板纸 5片 说明书 1份3．2测定仪器： 3.2.1酶标仪：上海安泰 MODEL MT-858 3.2.2洗扳机： ANALYTECH828 4、操作步骤： 4．1配液：配制工作浓度洗涤液（以纯化水做25倍稀释）

乙型肝炎病毒标志物表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒(胶体金法)

血清乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc检测 作业指导书 1.目的：建立乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc定性检测标 准操作规程，确保检测结果的准确。 2.范围：适用于检验科免疫实验室。 3.规程： 3.1标本的收集与准备： 3.2用未加抗凝剂的真空抽血管抽取静脉血2ml。 3.3 标本完全凝固后才能离心，并分离血清。 3.4如试验8小时内不能完成，血清标本放2~8℃保存。 3..5标本拒收标准：严重脂血、溶血、黄疸。 4、测定原理： 本试剂盒采用胶体金标记免疫层析技术，将HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc单项胶体金标记免疫层析检测条组装成联合检测卡。样品加到检测卡各项加样孔后,再借助毛细作用移行至层析区,于检测区和对照区,胶体金标记颗粒由于抗原抗体反应形成富聚,形成或不形成肉眼可见的胶体金颗粒反应带,从而实现对HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc的检测，并作出存在与否的判定。 HBsAg用双抗体夹心法检测，胶体金标记抗HBs(鼠单抗)与样品中的HBsAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的抗HBs(鼠单抗)形成“Au-抗HBs(鼠单抗)-HBsAg-抗HBs(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显色。游离胶体金标记抗HBs(鼠单抗)则在对照线处与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。结果于30分钟内判定。 抗HBs用双抗原夹心法检测胶体金标记HBsAg与样品中的抗HBs结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的HBsAg形成“Au-HBsAg-抗HBs-HBsAg-固相材料”夹心物而凝聚显色。游离胶体金标记HBsAg则在对照线处与羊抗HBs结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。结果于30分钟内判定。 HBeAg用双抗体夹心法检测胶体金标记抗HBe(鼠单抗)与样品中的

乙肝表面抗原检测操作规程

乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA） 1原理： 在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。2试剂： 2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 2.3包装规格：96Test/Kit 2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg 酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。 2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。 3样本采集： 取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。 4所需仪器

4.1全自动酶免分析仪 4.2新鲜蒸馏水或去离子水 4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm） 4.4微量移液器 4.5 37℃恒温箱或水浴箱 4.6洗板机或洗瓶 5检验方法 5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。 5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。 5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。 5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。 5.6温育：置37℃温育60min。 5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。 5.8温育：置37℃温育30min。 5.9洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。 5.10显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗置30min。 5.11终止：每孔加入终止液50ul，混匀。 5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm

人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)试剂盒使用方法

人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)试剂盒使用方法 检测范围：96T 2 IU/L -48 IU/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)含量。实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)浓度。 试剂盒组成 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。

医学检验-微生物-肝炎病毒测试题

第29章 肝炎病毒测试题 一.概念 1.HBsAg：乙肝表面抗原。存在于Dane颗粒表面和小球形颗粒及管型颗粒中。可大量存在于感染血清中，是HBV感染的主要标志。 2.HBcAg：乙肝病毒核心抗原。为乙肝病毒衣壳成分，不易在血循环中检出，但抗原性强，可刺激机体产生抗HBc抗体，抗体在血清中维持时间较长，低滴度抗体是过去感染的标志，高滴度时提示病毒有活动性复制。 3.HBeAg：e抗原。游离于血清中，与病毒体及DNA多聚酶的消长一致，故可作为病毒有复制及血清具有感染性的一个指标。 二. 填空题

1．肝炎病毒有 、 、 、 和 五种类型。 2．肝炎病毒中，由粪—口途径传播的有 、 ；由血液 和垂直途径传播的有 、 、 ；属于DNA病毒的 有 ；属于缺损病毒的是 ；已有疫苗可主动免疫的是 和 ；可进行细胞培养的是 。 3．HBV的外衣壳由 、 和 蛋白组成，构成HBV的 ；内衣壳由 组成；核心由 和 组成。 4.甲型肝炎的传染源主要为 和 ,猩猩和猿猴作为传 染源的意义不大. 5.甲型肝炎的血清抗体中,表示现症感染的抗体是 ,而表示既往感 染的抗体是 . 6.乙型肝炎表面抗原(HbsAg)阳性者血清标本, 在电子显微镜下可观察 到3种不同 形态结构的颗粒,其传染性也不同, 即小球形颗粒和 以及 。 7.乙型肝炎基因组为双股环壮DNA,内含4个开放读框(ORF),分别称为S 区,C区, 和 . 1．HAV,HBV,HCV,HDV,HEV。 2．HAV、HEV, HBV,HCV,HDV, HBV, HDV, HAV,HBV, HAV。 3．S、pre-S1、pre-S2，HBsAg；HBcAg；双股非闭合环状DNA，DNA多聚 酶。 4.甲型肝炎的患者和隐性（亚临床）感染者。 5.潜伏期未期,急性期早期。

乙型肝炎病毒表面抗原研究新进展

乙型肝炎病毒表面抗原研究新进展 发表时间：2018-01-06T13:35:26.403Z 来源：《医药前沿》2017年12月第34期作者：张华清1 尹华发2（审校） [导读] 血清HBsAg水平分析作为一种非侵入性的诊断参数，在CHB患者抗病毒治疗中，HBsAg水平可帮助确定疗程优化和管理。（1中南大学湘雅医学院公共卫生学院湖南长沙 410083） （2安徽医科大学第一附属医院感染科安徽合肥 230022） 【摘要】乙型肝炎病毒是在全球导致肝硬化和肝癌的病因。血清乙肝表面抗原水平检测是非侵入性的血清诊断参数，临床上可以监测HBV感染及相关疾病的进程，提高核苷（酸）类似物抗病毒治疗的疗程优化和管理。 【关键词】乙型肝炎病毒；乙肝表面抗原；核苷（酸）类似物 【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）34-0005-01 【Abstract】Hepatitis B virus is the cause of cirrhosis and liver cancer worldwide. Detection of serum hepatitis B surface antigen level is a non-invasive diagnosis of serum parameters, in clinical practice, it can monitor HBV infection and related disease process, improve the nucleoside (acid) treatment optimization and management of analogs antiviral therapy. 【Key words】Hepatitis B virus;Hepatitis B surface antigen;Nucleoside (acid) analogue 1.前言 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染严重危害人体健康，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，相当于世界人口的5%，每年约有50多万人死于HBV感染所致的肝硬化(liver cirrhosis，LC)和肝细胞癌（hepatocellular crcinoma，HCC），约 40%亚裔慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者最终死于HBV-LC并发症或HCC[1]。 2.乙肝病毒HBsAg的合成和检测 2.1 乙肝病毒HBsAg的合成 HBV基因组包含S、C、P、和X四个重叠的开放阅读编码区，S区基因由S基因、Pre S1基因和Pre S2基因组成，编码相应蛋白，HBV的表面蛋白有三种，乙肝病毒大蛋白(LHBs)，包括HBsAg、Pre S2和Pre S1；中S蛋白(MHBs)，包括HBsAg和 Pre S2；小S(SHBs)即HBsAg[2]。 2.2 检测 HBsAg已被用于诊断HBV感染，其动态监测在病程和疗效监测中具有重要意义。目前主要的2种HBsAg定量检测试剂，即罗氏公司的电化学发光法和雅培公司的微粒子化学发光法，对于脂血、黄疸和溶血等干扰物，抗干扰能力相同，检测限均为0.05 IU/mL，对于高浓度超过线性的标本，通过稀释都可检测报告，检测结果方面具有良好的相关性[4]。 2.3 HBsAg在抗病毒治疗中的作用 2017年EASL定义治疗CHB目标是HBsAg消失，伴或不伴有血清学转换，和持续HBV DNA的长期抑制，其与疾病的自然过程有着密切相关，以及与患者良好的生存与防止HBV相关的LC和HCC等并发症及预防密切相关。达到HBsAg消失所需的关键环节是持续的病毒免疫控制[4]。临床上常用药物治疗CHB有聚乙二醇干扰素（PEGylated interferon，PEG-IFN）和5种核苷（酸）类似物（Nucleoside acid analog，NA）。HBsAg水平可以监测HBV感染的临床不同阶段及相关肝脏疾病的进程，以及预测抗病毒治疗效果，其水平的变化可以预测患者抗病毒治疗的应答率和HBsAg的清除率。血清HBsAg水平分析作为一种非侵入性的诊断参数，以预测HBV抗病毒治疗中的效果。不同病程阶段的HBV感染状态下，HBsAg水平有明显差异，临床诊断及治疗方案应结合临床相关不同指标的动态变化合理调整[4]。NA治疗能够持久抑制病毒可以改善肝脏组织学，CHB应用替诺福韦酯治疗5年是安全有效的，HBV长期的抑制甚至可以逆转肝硬化和肝纤维化，患者如果对NA治疗有效，且没有耐药性发生，使用NA的长期治疗还可以减少肝癌的发生率[6]。临床上使用NA治疗效果多数是不确定的，NA治疗抗HBe血清转换12个月后停药也可能复发，且症状隐匿。与使用干扰素治疗的患者相比，使用NA治疗的患者HBsAg的下降幅度较低，但NA治疗的患者有HBV DNA水平显著下降，其原因在于NA的作用机制，NA治疗影响的病毒基因组RNA的反转录，但不影响其与HBsAg水平相关联的cccDNA和亚基因组RNA的转录。PEG-IFN联合应用恩替卡韦(ETV)或替诺福韦酯（TDF）治疗更有利于CHB患者的HBsAg水平下降、e抗原血清学转换和持续病毒学反应率：PEG-IFN与阿德福韦酯联合治疗48周，HBeAg阳性CHB和HBeAg阴性CHB在治疗后2年后HBsAg水平的下降率分别为11%和17%，表明在HBeAg阴性患者中，低基线HBsAg水平是HBsAg消失的强预测因子[7]。同样国内学者也报道[8]，长期被NA完全抑制HBeAg阴性CHB患者加用PEG-IFN可以有效提高HBsAg阴转率，HBsAg血清含量降低明显。 3.总结与展望 HBV是导致LC和HCC的主要病因，目前临床完全治愈慢性HBV感染是需解决难题。血清HBsAg水平分析作为一种非侵入性的诊断参数，在CHB患者抗病毒治疗中，HBsAg水平可帮助确定疗程优化和管理。 【参考文献】 [1]魏来,李兰娟,侯金林,等.2014 年中国慢性乙型肝炎防治指南( 科普版)[M].北京:人民卫生出版社,2014. [2] Glebe D,Bremer C M.The molecular virology of hepatitis B virus[J].Seminars in Liver Disease,2013, 33(2):103. [3]盛欢,胡晓波,许洁.两种方法检测HBsAg定量结果的临床互认研究[J].检验医学,2013,28(09):828-834. [4] Lampertico P,Agarwal K,Berg T,et al.EASL 2017 Clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection. [J].Journal of Hepatology, 2017,67(2):370-398. [5]陈仁，廖金瑶，罗晓丹，等.慢性乙肝患者HBsAg水平与HBV-DNA相关性研究[J].中华疾病控制杂志，2016，20(08):856-859. [6]丁荣蓉，施光峰，张占卿，等.替诺福韦酯和恩替卡韦对慢性乙型肝炎初治患者疗效的荟萃分析[J].肝脏，2017，22(5):400-403. [7]余佳平，侯炜.聚乙二醇干扰素α-2a联合阿德福韦酯治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效预测因素分析[J].实用肝脏病杂志，2015，18(5):476-481. [8]范彩仙，李小芳，詹一飞，等.长期被核苷酸类似物完全抑制e抗原阴性CHB患者加用干扰素α-2b的疗效[J].世界华人消化杂志，2017(11):983-988.

乙型肝炎病毒标志物表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒(胶体金法)

乙型肝炎病毒标志物表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒(胶体金法)

血清乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc检测 作业指导书 1.目的：建立乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc定性检测 标准操作规程，确保检测结果的准确。 2.范围：适用于检验科免疫实验室。 3.规程： 3.1标本的收集与准备： 3.2用未加抗凝剂的真空抽血管抽取静脉血2ml。 3.3标本完全凝固后才能离心，并分离血清。 3.4如试验8小时内不能完成，血清标本放2~8℃保存。 3..5标本拒收标准：严重脂血、溶血、黄疸。 4、测定原理： 本试剂盒采用胶体金标记免疫层析技术，将HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc单项胶体金标记免疫层析检测条组装成联合检测卡。样品加到检测卡各项加样孔后,再借助毛细作用移行至层析区,于检测区和对照区,胶体金标记颗粒由于抗原抗体反应形成富聚,形成或不形成肉眼可见的胶体金颗粒反应带,从而实现对HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc的检测，并作出存在与否的判定。 HBsAg用双抗体夹心法检测，胶体金标记抗HBs(鼠单抗)与样品中的HBsAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的抗HBs(鼠单抗)形成“Au-抗HBs(鼠单抗)-HBsAg-抗HBs(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显色。游离胶体金标记抗HBs(鼠单抗)则在对照线处与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。结果于30分钟内判定。 抗HBs用双抗原夹心法检测胶体金标记HBsAg与样品中的抗HBs 结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的HBsAg形成“Au-HBsAg-抗HBs-HBsAg-固相材料”夹心物而凝聚显色。游离胶体金标记HBsAg则在对照线处与羊抗HBs结合而富集显色。 阴性标本则仅在对照线处显色。结果于30分钟内判定。 HBeAg用双抗体夹心法检测胶体金标记抗HBe(鼠单抗)与样品中的

乙肝表面抗原定量测定的方法学验证

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析 方法学验证 姓名 Z P 学号 0925400072 班级 09级医学检验本科二班 指导老师沈富兵 二〇一三年四月

乙肝表面抗原定量测定的方法学验证作者：ZP（成都医学院检验医学院09级医学检验本科二班，610500） 【摘要】目的用福州蓝图生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒对乙肝表面抗原定量测定的方法进行验证，以判断是否能用于教学以及临床分析。方法运用ELLISA法定量测定乙肝表面抗原，应用试剂盒HBsAg标准从浓度为8ng/ml的2倍稀释的6个浓度梯度，根据OD值绘制标准曲线再计算相对回收率和板内和板间精密度，通过资料数据综合分析。结果HBsAg线性较好，其准确度、精密度、LOD值均在正常范内。结论ELISA法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病毒复制情况，可以用于教学以及临床分析。 【关键词】乙肝表面抗原方法学验证标准曲线精密度ELLISA 病毒性肝炎中乙型肝炎的危害较大，我国是病毒性乙型肝炎的高发流行区，普通人群的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染率接近60％，约占世界HBV携带者的1/3。乙型肝炎病毒的病原体不仅具有传染性，还可能导致发展成肝硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。酶免分析法HBV—EIA是HBV抗原和抗体最常用的检测技术，其方法简便、价廉，适合一般实验室推广，其中酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)目前应用最为广泛，它常用聚苯乙烯为固相载体，使其与待测标本中的相应抗体或抗原结合，然后加酶标记的抗原或抗体，再加底物显色，最后根据色泽深浅来推算待测抗原或抗体的含量。此方法特异性高，有效测定范围可达到20500 ng/ml，且酶免疫法有标记的试剂比较稳定并且无放射线危害等优点。 我们采用对已知抗体浓度的样品进行ELISA的定量检测，通过对其数据的分析来验证ELISA法最乙肝表面抗原定量检测的准确性和可靠性，以衡量其实用性。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试剂盒 乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。 1.1.2 仪器及酶标板 酶标仪：Bio-Rad 680；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix； 电热恒温培养箱(DNP-9052):上海精宏实验设备有限公司。 1.1.3 溶液配制 ⑴0.01M pH7.4的PBS缓冲液： 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4, 溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。 ⑵质控品： 用PBS缓冲液将标准品配制成6、3、1.5ng/ml三个质控品，每质控品1ml。

乙型肝炎抗原

乙型肝炎抗原 乙型肝炎抗原检查目的 乙肝表面抗原检查用于判断是否感染了乙肝病毒。 1、乙肝表面抗原阳性是感染乙肝病毒的指标，乙肝表面抗原本身具有抗原性，无传染性。 2、其他肝功能正常而仅仅乙肝表面抗原阳性者，称为乙肝病毒携带者。 3、乙肝表面抗原的滴度高低可判断患者的传染性，HBsAg的滴度越高，HBsAg及乙肝病毒DNA阳性的可能性越大，传染性也就越大。 4、大三阳：是指在乙肝两对半检测中，乙肝表面抗原（HBsAg）、E抗原（HBeAg）和核心抗体（HBcAb）检测均是阳性，提示乙肝病毒感染病毒复制活跃，有传染性，并不能提示病情是否严重。 5、小三阳：是指在乙肝两对半检测中，乙肝表面抗原（HBsAg）、E抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）检测均是阳性提示：（1）大多数情况下表示乙肝病毒复制减少，仍然有传染性。（2）由大三阳转向小三阳并不意味着乙肝病毒复制完全停止。少数小三阳病人其血清HBV-DNA持续阳性，病毒复制活跃，病情较严重，病情进展迅速。 乙型肝炎抗原检查内容 乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2～6个月，当丙氨酸氨基转移酶升高前2～8周时，可在血清中测到阳性结果。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。 乙型肝炎表面抗原检查是最常用的检验乙型肝炎病原体的试验。 乙型肝炎抗原检查注意事项 首次检出乙肝表面抗原阳性者应在1/2～2周后复查1次，同时查血清转氨酶、乙肝核心抗体免疫球蛋白M、核心抗体、e抗原、e抗体及表面抗体。如果有条件，还可检测乙肝病毒去氧核糖核酸、去氧核糖核酸聚合酶等。如转氨酶明显增高者应住院治疗。无转氨酸增高而其它指标有不同程度增高或阳性时应请医生对自己的转归和传染性作出初步评价。必要时应配合医生做肝活检，了解肝脏是否存在病理变化，有病理阳性发现者应按现症乙型肝炎处理。 查出表面抗原和e抗原双阳性者，每3个月应复查1次。单纯乙肝表面抗原阳性无e 抗原阳性，且无症状者，可6个月至1年复查1次。因为表面抗原阳性者转变为肝炎的机会比一般人多好几倍。

乙型肝炎三种抗原、抗体系统检测

乙型肝炎三种抗原、抗体系统检测 发表时间：2009-08-01T09:39:42.093Z 来源：《中外健康文摘》2009年第7期供稿作者：谭耀武 [导读] 乙型病毒性肝炎简称乙型肝炎，由乙型肝炎病毒感染引起的，是威胁人类健康最重要的传染病之一。 谭耀武 (黑龙江省宝清县八五三农场疾控中心黑龙江宝清 156600) 【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085(2009)07-0242-02 乙型病毒性肝炎简称乙型肝炎，由乙型肝炎病毒感染引起的，是威胁人类健康最重要的传染病之一。现能分别测定血清中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎核心抗原（HBcAg）及抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc抗体。 乙型肝炎病毒属于嗜肝病毒族，具有独特的基因结构。HBV是迄今为止所发现的感染人类最小的DNA病毒。电镜下乙肝患者血清中可发现三种形态的病毒颗粒，即直径为42nm的Dane颗粒；直径22nm的圆形颗粒，以及直径22nm，长度为50～230nm不等的管形颗粒；以球形颗粒含量最高，Dane颗粒最少。Dane颗粒即完整的病毒颗粒，有双层脂蛋白外膜包裹核心。核心由核壳蛋白包裹双链DNA分子。球形和管形颗粒则只含病毒外壳蛋白，无病毒核心成分。Dane颗粒是完整的乙型肝炎病毒，其外壳部分称HBsAg；核心部分称乙型肝炎核心抗原（HBcAg），小球形颗粒和管形颗粒由众多小球形颗粒集合而成，只含表面抗原，不具有感染性的核心部分，故能诱发对乙型肝炎感染有保护作用的抗表面抗原的抗体（Anti-HBs），核心抗原能产生抗核心抗原的抗体（Anti-HBc），此种抗体可存在于体内多年，检出此抗体，提示病毒尚在复制或曾受感染而已康复。此外，还有e抗原（HBeAg）和e抗体（Anti-Hbe）。HBeAg阳性血清常伴有DNA多聚酶升高，是乙型肝炎病毒的复制指标。E抗原持续阳性者，病程呈慢性化，肝脏受损越重，传染性较强，e抗体阳性者，肝脏病变较轻，预后较好，无传染性或传染性很小。 1 乙型肝炎表面抗原及表面抗体 HBsAg为乙肝患者血清首先出现的病毒标志物，可作为乙肝早期诊断和普查项目。HBsAg阳性与其他标志物联合检测可诊断HBsAg携带者、急性乙型肝炎潜伏期、急性和慢性肝炎患者以及与HBV有关的肝硬化或肝癌。HBsAg阴性不能完全排除乙型肝炎。血清中同时出现HBsAg和抗-HBs可能是不同亚型重复感染，即原先存在的抗-HBs不能对另一型HBsAg起中和作用。无论急慢性肝炎和HBsAg携带者，只要在血中和其他体液中含有Dane颗粒，且有密切接触就有传染的可能性。如果单个HBsAg阳性者，则无传染性。抗-HBs阳性提示急性感染后康复，在发病后抗-HBs转为阳性或效价显著升高，亦有诊断乙型肝炎价值。临床上一般认为，抗-HBs是一种免疫保护性抗体，少数抗-HBs阳性感染者可以形成免疫复合物，但伴有高滴度抗-HBs者，不能排除肝脏有持续性HBV感染的可能。在接受抗-HBs阳性血液的受血者可出现短暂的抗-HBs阳性。接受HBV疫苗接种后，血中可检出抗-HBs阳性，接受乙肝疫苗接种能否检出抗-HBs，也是衡量乙肝疫苗质量的主要指标。抗-HBs和HBsAg同时阳性可见于暴发性肝炎和慢性活动性肝炎，此类病人为免疫功能低下或异亚型感染，如同时抗-HBc阳性则应注意预后和发展。 2 乙型肝炎核心抗原和核心抗体 HBcAg存在于肝细胞核内，血清中一般不能检出。HBcAg在HBV感染中占有重要地位。它能反映血清中Dane颗粒的存在及肝内HBV 的复制，并可与其他的HBV血清学标志物起互相配合和互相补充的作用。核心抗体包括IgM和IgG两种，目前常指的抗-HBc为总抗体（包括IgG，IgM），感染HBV后，继血清中HBsAg阳转后，早期出现的标志物即为抗-HBc，抗-HBc常出现于症状未暴露前，且在肝炎的早期呈高滴度，但是使用某些免疫抑制剂或无丙种球蛋白血症患者血清中也有测不出抗-HBc，高滴度的抗-HBc具有传染性。正常人HBcAg阴性，S<2.1N（SPRIA）；抗-HBc血清阴性，S<0.5N（SPRIA）。 HBcAg阳性可以作为乙肝传染性活动性病变的标志，HBsAg，HBcAg，抗-HBc等指标是体内存在乙型肝炎病毒颗粒的间接标志，而HBcAg则是乙肝病毒存在的直接标志。血清HBcAg更能反映乙肝病毒的存在。血清HBcAg与HBV复制标志HBV-DNA呈正相关，可以反映HBV活动的复制程度。同时阳性结果也提示，HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后HBcAg可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。同时该项目检测也可以反映药物的疗效。抗-HBc检测提高了HBV感染的检出率，在成人的HBV感染中，70%呈自限性感染，表现为一过性HBsAg阳性，23%未检出HBsAg，但可以出现原发性抗-HBs和抗-HBc，抗-HBc高滴度为肝内HBV复制指标，低滴度为既往感染。抗-HBc是急性乙型肝炎的唯一标志，此时称为“窗口期”或“核心窗口”，高滴度的抗-HBc对乙肝的诊断极有诊断意义。对献血员的筛选，单纯测HBsAg是不够的，只有和抗-HBc同时检测，才能更好地筛选献血员。 3 乙型肝炎e抗原和e抗体 乙型肝炎e抗原是一种可溶性球蛋白，多存在于HBsAg阳性血清中，HBsAg阴性的标本中，很少有HBeAg阳性。体机在HBeAg刺激下产生e抗体，存在于恢复期病人血清中，无症状的HBsAg携带者可长期存在。正常人：HBeAg血清为阴性，S<2.1N（SPRIA），e抗体：血清为阴性，S<0.5N（SPRIA）。 HBeAg阳性是乙肝传染性的标志，HBsAg滴度愈高，HBeAg检出率也愈高。HBeAg和HBV复制成正比，也和肝脏损伤成正比，HBeAg DNA聚合酶和血中Dane颗粒三者之间也极有明显的平行关系，与HBV-DNA有显著相关性。HBeAg消失和抗-Hbe出现提示肝炎病情好转，抗-Hbe阳性可显示病情好转，但不能作为无传染性标志。近年研究表明，抗-Hbe阳性血清中也有一定比例的HBV-DNA阳性。

三种方法检测乙肝表面抗原结果的比较

三种方法检测乙肝表面抗原结果的比较 发表时间：2012-02-02T14:50:30.183Z 来源：《中国健康月刊（学术版）》2011年第12期供稿作者：金大伟富宏然高莉莉[导读] 中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查, 人群发生率较高, 表面抗原携带率约为15% 金大伟富宏然高莉莉（黑龙江省牡丹江市红旗医院检验科黑龙江牡丹江157011）【摘要】目的：通过乙肝表面抗原，比较三种方法学的优缺点。方法：采用化学发光法检测乙肝，然后对阳性标本分别用酶联免疫吸附试验和金标方法复检。结果：总数为13207份标本，化学发光方法检测表面抗原阳性的标本为1524份，ELISA方法复检后阳性标本数为1415，金标方法复检后阳性标本数为1241。结论：灵敏度化学发光方法最高、ELISA方法居中、金标方法最差；操作金标方法最简单、ELISA居中、化学发光方法稍难；金标方法假阴性假阳性率最高。因此，金标方法只能进行筛检，阳性或阴性都不能定诊。【关键词】乙肝表面抗原；化学发光法；ELISA；金标法 【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0156-01 中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查, 人群发生率较高, 表面抗原携带率约为15%［1］。乙肝的实验诊断对于其治疗及预防有重要参考意义。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是由Dane颗粒的外壳和直径22 nm的球型颗粒和管型颗粒所组成［1］。HBsAg是HBV感染后第一个出现的血清学标志物,也是诊断的重要指标之一。HBsAg阳性见于急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者。值得注意的是在急性感染的恢复期,存在核心窗口期现象,即该时期HBsAg消失,抗- HBs还未出现的,此期可短至数天或长达数月。 目前检测乙肝有三种比较常用的方法学，即酶联免疫吸附试验(ELISA)、金标法、化学发光法。中国大多数临床实验室都采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法来检测HBsAg。但对于HBsAg低浓度的标本,检测时常因方法学的原因造成灵敏度较低,导致临床出现漏检,给病人带来损失,尤其是需要临床输血的病人。；金标法(Goldimmnnochromatography，GICA)是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术，由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点，也广泛应用于HBsAg的初筛；缺点式是此种方法灵敏度比ELISA更低，而且假阳性率、假阴性率都很高。近年来发展起来的化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)是灵敏度非常高的方法。解决了低浓度HBsAg的检测问题。现将三种种方法对乙肝表面抗原的检测作一比较。 1资料和方法 1.1 标本来源：收集牡丹江医学院红旗医院检验科免疫室2010年全年常规做乙肝“二对半”标本13207份，用半自动化学发光方法筛出乙肝表面抗原阳性的标本1515份进行复检，并通过金标法和酶联方法进行比较。 1.2 方法：半自动化学发光方法原理：采用酶促化学发光，双抗体夹心方法，用辣根过氧化物酶作为标记酶，催化鲁米诺发光，并在化学发光仪上读出发光值并计算含量，此种方法为定量方法。 金标方法原理：试剂条以胶体金为指示标记包被特异的抗体,应用免疫层析双抗体夹心原理检测样本中的乙肝表面抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)法原理：采用双抗体夹心方法，用辣根过氧化物酶作为标记酶，催化TMB和过氧化氢产生有色物质，加入酸性终止液后用酶标仪读取光密度值进行计算并判断阴阳性，此种方法未定性方法。 2试剂与仪器 半自动化学发光仪器为GloRunner型半自动化学发光仪，配套试剂为北京科美化学发光试剂。金标试剂为广州万孚乙肝二对半金标板。ELISA试剂为上海科华试剂，酶标仪为Bio-Tek ELX800，洗板机为ELx50洗板机。 3检测 所有标本先由半自动化学发光仪进行表面抗原检测，阳性标本再用ELISA和金表方法进行检测。所有检测严格按照标准SOP操作文件进行操作，质控品由黑龙江省临检中心提供。 4结果 总数为13207份标本，半自动化学发光方法表面抗原阳性的标本为1524份，ELISA方法复检后阳性标本数为1415，金标方法复检后阳性标本数为1241。 5讨论 从以上结果来看，半自动化学发光法阳性率最高，ELISA方法较化学发光法阳性率低，金标方法阳性率最低。化学发光方法要比ELISA方法敏感，化学发光方法检测弱阳性标本用ELISA方法检测呈现阴性，同样ELISA方法检测弱阳性的标本用金标方法同样也呈现阴性。ELISA方法是国内主要检测乙肝的方法，是一种操作步骤比较简单，灵敏度表较高的方法，所用仪器酶标仪的价格也不是很高，甚至目测也可以报结果。金标法操作最为简单，不需要任何仪器，很适合快速的筛检，但是此种方法的缺点也很明显，检测的灵敏度不高，存在一定假阳性率的问题，金标方法检测的结果，阴形可能存在假阴性，阳性也需要进行复检。在实际工作中，曾经有过金标表面抗原强阳性，但是经过化学发光和酶联免疫方法测定，变为阴性。因此金标方法检测的结果不能作为定诊的依据，必须经过其他的方法进行验证，只能作为乙肝的筛检，其结果还必须进行确认。化学发光法是近年发展比较快的检测方法学，我们所用的半自动化学发光方法采用的是酶促化学发光法，其基本的检测操作与ELISA方法一致，只有最后进行检测的时候加入的酶促底物不一样，ELISA加入的是TMB和双氧水，而酶促化学发光加入的是鲁米诺和双氧水。ELISA用酶标仪检测或根据检测孔的颜色进行目测判断结果；而酶促化学发光方法必须用化学发光仪进行定性或定量分析检测。化学发光方法检测灵敏度要高于ELISA，对于ELISA方法检测弱阳性的标本可以用化学发光方法进行复检并且进行定诊。酶促化学发光方法与ELISA方法操作步骤相当，敏感度却高很多。缺点是酶促化学发光方法检测必须依靠机器，不可以用肉眼观察结果。另外，加入酶促底物后，发光值会随着时间的延长而进行性衰减，因此化学发光法进行读取数据时必须在规定的时间内读取。经过我们监测发现，化学发光读取发光值时即使在规定的读取时间内，每隔1分钟检测一次发光值，同一孔在不同的时间点上的发光只相差很多，因此化学发光对于发光值的读取最好在加入底物后同一时间进行读取，这一点对于定量检测比较好。参考文献 ［1］化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝表面抗原的比较［2］刘秀琴,傅杭州,张晓俐《海南医学》2010年第21卷第8期