细胞培养技术考试重点
名词解释：
1.群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间。是由于表示群体细胞指数生长期内细胞分裂活动的程度，是判断细胞生长是否旺盛的重要指标。
2.接触抑制（contact inhibition）：细胞相互接触后失去运动的现象。
3.密度抑制（density inhibition）：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽，代谢产物过多和生存空间消失所引起的细胞增殖的抑制现象。
4.肿瘤干细胞(tu mor stem cells，TSC)表现为一种特殊类型的干细胞，具备高度增殖能力与自我更新能力，也具备多向分化的潜能。TSC增殖过程中，通过不均一分裂，一个TSC分裂形成一个新的TSC和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在内的各种细胞的子细胞，其结果是维持TSC数目稳定并产生肿瘤。
5.细胞汇合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。
6.饱和密度(Saturation density)：在特殊培养条件下，每平方厘米(单层培养)或每毫升细
胞悬液内可达到的最大细胞数。
7.二倍体细胞系或株(Diploid cell line or strain)：具有二倍体染色体数的细胞系或株。
8.二倍体(Diploid)：指双倍数的染色体数或具有此数的细胞系。
9.组织工程：是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
10.细胞融合(Cell fusion)：指两个独立的细胞借媒介物(PEG等)融合成杂种细胞的过程。
11.细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。
12.三维培养：把细胞悬液接种在一定立体形态的支架上，使细胞生长在三维环境中的培养方法。
13.平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS）：简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生量盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。兼具缓冲和调节溶液的酸碱度、维持渗透压、同时供给细胞生存所需的能量和无机离子成分的作用。
14.生长基质（growth substratum）：培养器皿表面包被的一层能改善生长表面的特性，促进细胞粘附和贴壁的物质。
15.去分化（dedifferentiation）：指已成熟的细胞和组织倒退分化，返回原始幼稚的状态。
16.消化液：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA），其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离（散）出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。
17.消毒 disinfection 杀死物体上病原微生物的方法。
灭菌 s terilization 杀灭物体上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生物、繁殖体和芽胞。
18.转化细胞系：指细胞发生了不可逆转的遗传改变而引起恒定的表型改变的细胞系。
19.杂交瘤技术：又称单克隆抗体制备技术，是指建立杂交瘤细胞系的技术，通常指B淋巴
细胞杂交瘤技术，即将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，以建立可以分泌单一性抗体的杂交瘤细胞系的技术。
20.指由一个B淋巴细胞克隆所产生的，只识别一种抗原决定簇的均质抗体。
21.干细胞：是指具有无限或较长期的自我更新能力、多种分化潜能和高度增殖能力的细胞。
22.全能干细胞，如ES细胞。全能干细胞可以分化成人体的各种细胞，这些细胞构成人体的
各种组织和器官。
23.成体干细胞：在胎儿、儿童和成人组织中存在的具有自我更新、多向分化潜能和增殖特
性的多能干细胞，统称为“成体干细胞”。
24.融合剂：两个或两个以上的细胞融合过程中，能促使细胞融合并使细胞融合的频率显著增大的物质，如仙台病毒，PEG等。
25.克隆化：专指一般DNA在与载体DNA分子重组后，重组DNA分子由载体导入宿主细胞内，依赖载体的复制能力在宿主细胞中进行扩增，形成一个无性繁殖系的过程。
26.细菌污染：包括所有混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质及细胞。培养的细胞被细菌污染均会造成细胞受损和死亡，是细胞培养工作的大敌。细胞发生污染时，常有培养液变浑浊和PH发生改变等现象，镜下观察细胞变形、生长缓慢或分裂相消失，以及细胞圆缩脱落等现象。常有抗生素预防该污染。
27. iPS：诱导多功能干细胞即诱导多能干细胞，是指体细胞经过基因“重新编排”，回归到胚胎细胞的状态，从而具有类似胚胎干细胞的分化能力。这种方法可以不需要用人胚胎或卵母细胞，就能制造干细胞。
28.克隆：指通过一定方法获得由单个细胞无性繁殖形成的细胞集落。
简答题：
1.简述细胞培养污染的种类及污染的预防措施
种类：（1）物理污染：温度、放射线、震动、辐射等；
（2）化学污染：水、血清、容器、孵箱等的有毒物质的残留；
（3）生物污染（支原体污染）：外界的动物、微生物如霉菌、细菌、支原体和其它类型的细胞都可能侵入培养环境引起污染。
预防措施：（1）良好的规章制度：只有相关人员才可进入细胞培养区，细胞培养区必须和其他区域分开，细胞培养区应布局合理；
（2）良好的无菌操作：所有玻璃器皿和培养液与试剂的配制应严格无菌，吸入或吸出液体时避免倾倒，不要触碰细胞培养瓶的瓶口，清洁区和污染区的
材料应单独处理；
（3）保持工作区清洁：常规清洗地面和台面，定期清洁水浴箱、CO2孵箱、生物安全柜等，及时清理废弃物；
（4）合理利用抗生素
（5）建立细胞库：消除了隐蔽污染的潜在危害
（6）细胞污染的检测
2.试述细胞培养的基本概念、原理、优缺点及实际意义
1）概念：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。
2) 原理及优缺点：细胞培养是将确定所选组织用剪碎的小组织块或分离的单个细胞进行培养，这种培养失去了原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增殖，特性化，获得遗传背景相同的群体，可以保存。
3）实际意义：组织（细胞）培养对医学、生命科学的意义
①培养的组织器官或细胞，能再一定范围和程度上反映生命活动规律和机体功能特点。
培养的细胞为生命科学和生物医学各种研究奠定了物质基础。如药物筛选，疗剂评价，新生物制品研发，研究病毒及其他微生物，发现新的传染因子，组织工程中的支撑技术
等。
②细胞培养技术已经成为商品化生物技术产品的核心。如目前可提供的产品，病毒疫苗：
口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗体型免疫调节剂：干扰素、白介素和集落
刺激因子等；多肽生长因子：表皮生长因子和神经生长因子等；酶类：组织型纤
溶酶原激活剂；激素：EPO和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状病毒；肿瘤特异抗
原；癌胚抗原；通过杂交瘤生产的各种单克隆抗体；细胞本身（如干细胞）；皮
肤重植等。
4）组织（细胞）培养的局限性：细胞（组织）培养，包括器官培养终归是离体培养，缺少生物整体的严密联系，不能代表整个机体。在进行医学生物实验过程及对结果的
评估都必须考虑这些。
3.简述细胞培养过程中如何进行微生物污染防治
1）把好每一个关口，尽可能禁止任何有污染的物品进入培养操作环节；
2）抗生素：一般用常用量的5~10倍作冲击疗法。用药24~48h后，再换常规培养液。3）加温处理：根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细胞放置在41℃作用5~10h，最长不超过18h后，以杀灭支原体。
4）动物体内接种：将支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借动物体内的免疫系统消灭支原体。待一定时间后取出细胞，做原代培养再进行繁殖。
4.试述目前体外细胞培养中广泛使用最多的天然培养基类型及其作用
天然培养基（液）的种类很多，包括生物性体液（如血清、血浆）、组织浸液（胚胎浸液）、水解乳蛋白等。
1）血清：①血清中含有基本的营养物质
②血清中含有激素与生长调节因子
③血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子
④血清中含有结合蛋白
⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质
⑥血清中含有pH缓冲物质
⑦血清中含有蛋白酶抑制剂
2）胚胎浸出液（embryonic extract）是早期动物细胞培养中应用的天然培养基，如鸡胚浸出液、牛胚浸出液等。胚胎浸出液主要成分为大分子蛋白和小分子氨基酸，
有促进细胞生长的作用。
3）水解乳蛋白（lactalbumin hydrolysate）为乳白蛋白经蛋白酶水解的产物，含有富的氨基酸，是常用的天然培养基，可用于许多细胞系和原代细胞的培养。
5.血清的优缺点：
1）优点：①血清中含有基本的营养物质
②血清中含有激素与生长调节因子
③血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子
④血清中含有结合蛋白
⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质
⑥血清中含有pH缓冲物质
⑦血清中含有蛋白酶抑制剂
2）缺点：①血清中也存在不少有害于细胞生长和繁殖的物质
②血清的成分不明确，影响对结果的分析
③对多数动物细胞来讲，血清并不是细胞在体时直接接触的生理性液体，只有
在伤口愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种
细胞在体内的正常状态。
④血清也具有潜在的细胞毒作用，除了特异性抑制成分、细菌毒素以及脂类成
分之外，还含有多胺氧化酶等。
⑤不同动物、不同批次的血清成分和活性差别较大，使得培养结果不稳定。需
要分批筛选，而且永远不可能保持批次间的一致；
⑥在培养液中使用血清会增加成本，尤其是对于动物细胞的大规模培养以及使
用胎牛血清培养的情况更如此；
⑦血清中有时所含的生长因子水平不足而需要补充，若补充过量会抑制细胞生
长。培养批次与血清批次不同，生长因子水平是难以控制的。
6.简述体外培养细胞的主要生物学特点
去分化；贴壁铺陈；接触抑制；密度依赖性生长抑制
7.体外培养用液的种类及用途
主要包括：培养液（维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织细胞培养时最重要的条件。）、缓冲液（中和培养液中的酸性物质）、平衡盐溶液（配抗生素、消化液、洗涤细胞等）、消化液（分离细胞）、血清、pH调整液和抗生素等其它常用液。
8.比较天然和合成培养基的优缺点
1）天然培养基：最初的体外细胞培养，均采用天然培养基。其主要取自动物体液或从动物组织中分离提取。
优点：营养丰富，培养效果良好；
缺点：成分复杂，来源受限，影响对某些实验产物的提取和结果的分析，易发生支原体染。2）合成培养基：细胞在体内生存生长所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定成本低。
缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。
9.试述细胞体外培养的条件
体外培养细胞的基本要求主要包括细胞接种、培养液成分、酸碱度、气体条件、温度、水的纯度及无菌条件。
1）细胞接种：接种细胞密度10-4-10-5。选择对数期的细胞接种。
2）营养物质：①天然培养基：营养成分复杂，包括血清、组织浸出液、淋巴液、水解乳蛋白等；
②合成培养基：包括水、无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸等；
3）酸碱度：细胞能耐受的pH范围是6.6-7.8，最是的pH为7.2-7.4，要依靠缓冲系统调节，主要是CO2-NaHCO3系统。
4)气体：细胞生长需要，主要用于调节细胞培养的pH，同时也用于合成细胞物质。
5）温度：最适宜生长的温度为35~37℃；
6）水：一般使用的是去离子水或三蒸水，适宜细胞培养；
7）抗生素：加入两性霉素可控制微生物的生长。
10.体外培养肿瘤细胞的三个显著特征：永生性、不受控增殖性、致瘤性。
（转化细胞系的特征）
1）永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞可无限传代而不凋亡。体外培养中的肿瘤细胞系（株）都表现有这种性状。
2）细胞接种同种动物或裸鼠后的致瘤性是客观反映细胞恶性程度的指标。
3）失去接触抑制，细胞能相互重叠向三维空间发展，形成堆积物。
失去锚着依赖性（停泊依赖性），可在琼脂、甲基纤维素等支撑物上生长。
癌细胞或培养中发生恶性转化后的单细胞培养时，形成集落的能力比正常细胞强。
11.简述原代肿瘤细胞制备过程及其注意事项及如何建成永久性细胞系
癌细胞建系的方法和程序相似于正常细胞，包括标本收集和处理、原代培养、传代、换液、冻存、复苏等过程。
1）取材：取材部位非常重要，要挑选活力较好的部位，一般是癌组织最外层最活跃细胞。
注意去除标本中混杂的间质组织。
2）分离：机械方法、酶消化法，其中酶消化法是分散癌细胞的好方法。
3）接种细胞：消化后制备的癌细胞，培养时应有足够的细胞密度，通常接种细胞浓度为5×105／ml，37℃培养。
4）成纤维细胞过度生长的去除：常采用机械刮除法、反复贴壁法等。
5）选择性培养基：选择性培养基是针对特殊细胞生长的营养要求设计的。在癌细胞建系中，选择性培养基的应用是提高癌细胞体外存活、抑制成纤维细胞生长的关键技术改进。
6）饲养层：在培养器皿底部接种能形成接触性抑制的成纤维细胞饲养层，可以有利于癌细胞生长和抑制癌组织中正常成纤维细胞过度生长。
7）及时换液
癌细胞系建立注意事项：取材应选择活力较好的部位，尽快培养且要防止污染。及时去除生长的成纤维细胞。掌握好传代时间，细胞没有长到足够量时不要急于传代。早期应先以高浓度接种，再逐渐降低。对于增殖能力低的细胞，应放入饲养层中培养，并加入一些促生长物质。精心传代、换液、避免污染，需经半年以上的细胞培养，方能够达到建立细胞系的目的。
如何建成永久性细胞系：建立癌细胞系需要在体外进行长期培养和传代，传代50次以上才能被认为是永久性细胞系。建系过程需要不断冻存以防细胞系中断。
12.杂交瘤技术产生的三个技术基础（关键）：
1）B淋巴细胞与骨髓瘤细胞：①B淋巴细胞（B lymphocytes）：接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞。②骨髓瘤细胞 (myeloma cells)：恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。没有抗体分泌。经筛选HGPRTˉ或TKˉ。
2）细胞融合技术：分泌抗体短命脾细胞(B淋巴细胞)、长命不分泌抗体骨髓瘤细胞、分泌抗体长命杂交瘤细胞。
3）杂交瘤细胞的筛选：用HAT选择培养基进行筛选，只有杂交瘤细胞被筛选出。
13.试述杂交瘤技术制备单克隆抗体三个基本环节和两个决定因素
三个基本环节
1）浆细胞瘤细胞系，骨髓瘤细胞NS1或SP2/0，需通过8-氮鸟嘌呤选择出来，有利于HAT 选择培养基筛选。而且NS1或SP2/0必须是对数生长期，细胞密度控制在105／ml，细胞活力达95%，进行细胞融合时1.5*108细胞数。
2）免疫鼠脾细胞良好、合适，大多数情况下，并不需要高度免疫；
3）融合剂良好合适，50%PEG。
两个决定因素
1）选择培养基（HAT） 2）饲养细胞（104／ml以上）：来自同系小鼠的胸腺细胞或腹腔巨噬细胞
14.与胚胎干细胞相比较，成体干细胞有以下几个特点：
(1)成体干细胞体积小，细胞器稀少，RNA含量较低，在增殖过程中处于相对静止状态，在组织结构中位置相对固定。
(2)成体干细胞数量很少，其基本功能是参与组织更新，创伤修复及维持机体内环境稳定。
(3)成体干细胞常处于一个有干细胞细胞基质、对干细胞的增殖和分化起调控作用的各种信号分子的特定微环境或称生物位中，干细胞是自我复制还是分化为功能细胞，取决于所在的微环境和自身的功能状态。
(4)成体干细胞没有确定的来源。
15.干细胞研究的意义
干细胞在生命科学的各个领域都有着重要而深远的影响，如移植治疗、克隆动物及转基因动物的生产、细胞组织和器官的修复、组织工程等有着广阔的应用前景。
1）移植治疗：移植治疗目前已成为治疗疾病的一个重要手段，如器官移植、细胞移植等。 2）克隆动物及转基因动物的生产：利用这项技术人们还可以将一些在发育过程中非必需的基因敲除（knock out），在体内进行功能缺失研究；还可以通过基因功能获得性突变，使特定基因在发育的某一时期表达，从而研究该基因在胚胎不同发育时期中的作用。
3）转基因干细胞基因治疗：现有的基因治疗有两类：①转基因细胞治疗②核酸治疗。
4）为发育生物学研究提供理想的体外模型：胚胎干细胞提供了在细胞和分子水平上研究个体发育过程中极早期事件的良好材料和方法。
5）高效新型药物的发现、筛选及动物和人类疾病的模型：胚胎干细胞提供了新药物的药理药效、毒理及药物代谢等研究的细胞水平的研究手段。利用胚胎干细胞体外分化的细胞组织检验筛选新药，可大大减少药物实验所需实验动物的数量及其人群数量。
总之，干细胞研究对细胞组织移植治疗，体外研究动物、人胚胎的发生、发展，新的人类因发现，药物的筛选和致畸实验及克隆动物、转基因动物等领域将产生重要的影响。
16.试述进行成体干细胞研究有哪些优势
1）成体干细胞则可从患者自身获得，而不存在组织相容性的问题，治疗时可避免长期应用免疫抑制剂对患者的伤害。此外，少量的骨髓切除治疗有助于形成部分造血嵌合体，可使异体成体干细胞的治疗成为可能。
2）成体干细胞不会引发畸胎瘤。
3）成体干细胞也具有类胚胎干细胞的高度分化能力。在人体发育的过程中，可能成体干细胞是存留在多种组织中具有多系分化能力的亚全能干细胞群体，这些细胞都具有相同或相似的细胞表型，在适合的微环境下可分化成多种组织细胞。
17.试述癌细胞系鉴定要点（简述体外培养肿瘤细胞生物学检测的常规项目）
培养的肿瘤细胞生长成形态上单一的细胞群体或细胞系(或株)后，需要做一系列的细胞生物学测定，主要的目的在于：证明所培养的细胞系的确来源于原体内具有恶性的细胞，而非正常细胞或其它细胞。
1）形态观察：主要观察细胞的一般形态，如大体形态、核浆比例、染色质和核仁大小、多少等以及细胞骨架微丝微管的排列状态等。
2）细胞生长增殖：检测细胞生长曲线、细胞分裂指数、倍增时间、细胞周期时间。
3）细胞核型分析：检测核型特点，染色体数量、标记染色体的有无、带型等。
4）软琼脂培养：检测集落形成能力。
5）异体动物接种：向异体动物体内(皮下)接种细胞悬液，观察成瘤能力。
6）其它：根据需要还可做同位素标记、组织化学成分分析，荧光显微镜观察等。
18.简述细胞系的生长过程及各期细胞的特点
1）原代培养期：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。组织到第一次传代时间大约为1～4周。特点：①培养细胞成分混杂，呈现异质性。②细胞活跃移动,分裂,但不旺盛,多呈二倍体核型。③原代与体内原组织形态结构和功能活动基本相似，适宜进行疫苗制备、药物测试、移植等。为保持二倍体体细胞性质，应在初代或传代后早期冰冻。
2）传代培养期：首次传代开始经反复传代一直到培养细胞开始衰退之前的全部时间。
初代培养细胞一经传代便称之为细胞系(cell line)。特点：①细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型，也叫二倍体细胞系(diploid cell line) 一般细胞在10代以内冻存。②细胞逐渐进入去分化状态。③原本成分混杂的培养物中,某一种增殖能力较强的细胞会逐渐处于优势,比例越来越大,而将其它数量较少比例较小的细胞逐渐淘汰掉。
3）衰退期：细胞仍然生存，但不增殖或增殖很慢，最后衰退死亡。轮廓增强，色泽变暗，胞质出现颗粒样及空泡状结构。
在细胞生命期阶段，少数情况下，在不明原因的影响，细胞可能发生自发转化。标志之一，是细胞获得不死性即持久性增殖能力，这样的细胞群体称“无限细胞系”。核型大多变成异倍体，接触抑制消失。
19.干细胞研究的主要内容与问题
1.主要内容
1）干细胞的分离与鉴定
2）干细胞的自我更新
3）干细胞的定向分化
4）干细胞的临床应用
2.问题
1)胚胎干细胞建系及定向诱导成组织细胞的分子机制；
2)成体干细胞横向分化的条件；
3)各种组织的成体干细胞库的建立及临床治疗试验；
4)细胞移植的免疫排斥问题。
20.粘附生长型细胞根据形态分为几种类型，试述各型主要特点。
1）粘附型细胞（Monolayer cells）:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
a 成纤维细胞型：①形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则，三角形，胞质
向外伸出2—3个长短不等的片状伪足，中有卵圆形核。②生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。
b上皮细胞型：①形态：类似体内的上皮细胞，扁平、不规则多角形，中有圆形核。
②生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状生长时呈膜状移动，很
少脱离细胞群而单个活动。
c游走型细胞：培养需要支持物，分散生长，不连接成片，在培养皿中生长位置不定，处于活跃的游走或变形运动，因此外形不规则且不断变化, 密度大连接成片呈多角形不易与其他类型的细胞区别。
d 多型性细胞：无规律的形态，细胞分胞体和胞突。胞突细长形，似丝状伪足，胞体略呈多
角形。
21.试述“克隆”的基本概念并举例说明其在细胞培养工作中的实际意义。
1）克隆：指通过一定方法获得由单个细胞无性繁殖形成的细胞集落。
2）实际意义：
a 检验医学诊断试剂：单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。目前，单克隆抗体商品化试剂盒广泛应用于：①病原微生物抗原、抗体的检测；②
细胞工程试题及答案
专题2细胞工程 一、选择题 1.运用下列各种细胞工程技术培育生物新品种,操作过程中能形成愈伤组织的是( )。 ①植物组织培养②植物体细胞杂交③动物细胞培养 ④转基因植物的培育 A.①②③ B.①②④ C.①③④ D.①②③④ 2.生物技术的发展速度很快,已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡,以下较易成功“复生”野驴的方法是( )。 A.将野驴的体细胞取出,利用组织培养技术,经脱分化、再分化,培育成新个体 B.将野驴的体细胞两两融合,再经组织培养培育成新个体 C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中,经孕育培育成新个体 D.将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体 3.下列关于细胞工程的叙述,错误的是( )。 A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D.某种植物甲、乙两品种的体细胞杂种与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目相同 4.用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织,下列叙述错误的是( )。 A.该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的 B.该愈伤组织的细胞没有全能性 C.该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成的 D.该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构 5.名为“我的皮肤”的生物活性绷带自从在英国诞生后,给皮肤烧伤病人带来了福音。该活性绷带的原理是先采集一些细胞样本,再让其在特殊的膜片上增殖。5~7天后,将膜片敷在患者的伤口上,膜片会将细胞逐渐“释放”到伤口,并促进新生皮肤层生长,达到加速伤口愈合的目的。下列有关叙述中,不正确的是( )。 A.“我的皮肤”的获得技术属于动物细胞工程 B.人的皮肤烧伤后会因人体第二道防线的破坏而导致免疫力下降 C.种植在膜片上的细胞样本最好选自患者本人 D.膜片能否把细胞顺利“释放”到伤口,加速患者自身皮肤愈合与细胞膜上的糖蛋白有关 6.既可用于DNA重组技术又可用于细胞融合技术的是( )。 A.病毒 B.纤维素酶 C.聚乙二醇 D.质粒 7.培育农作物新品种的过程中,常利用植物组织培养技术。下列叙述正确的是( )。 A.培育转基因的外植体得到的新个体属于基因突变个体 B.在植物组织培养过程中用理化因素诱导可获得大量有益突变体 C.单倍体育种中经减数分裂和组织培养两个过程能获得纯合二倍体 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 8.下列与细胞工程技术相关的表述中,不正确的是( )。 A.植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍 B.动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基成分基本相同 C.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 9.经植物组织培养技术培养出来的植物一般很少有植物病毒危害,其原因在于( )。 A.在组织培养过程中经过了脱分化和再分化,进行的是快速分裂和分化
细胞培养复习题
名称解释 细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。 组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。有时泛指所有的体外培养。 器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。 合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。 无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。 完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。 接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。 无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。 不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。原因：培养条件变化使分化发生阻抑 细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量 细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
动物细胞培养技术思考题
《动物细胞培养技术》复习思考题 动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。你认为精确配制各种溶液？ 答： 配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答：L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质； b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源； d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
大学细胞工程试题及答案
细胞模拟试题及答案 一、填空（每空一分，共25分） 1.实验室的物理防护是由隔离的设备、实验室的设计、实验实施等三个方面组成，根据其密 封程度的不同，分为P1、P2、P3、P4四个生物安全等级。典型的P4实验室由更衣区、过滤区、缓冲区、消毒区、核心区组成。 2.细胞系是原代培养经初步纯化获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一细胞 群体。 3.细胞株是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细 胞增殖形成的细胞群。 4.干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。干细胞的增殖特性为缓慢性和自稳性。 5.培养细胞的生长特点为贴附、接触抑制和密度抑制。 6.植物细胞培养的原理是基于动物细胞的全能性。 7.植物细胞悬浮培养的方法为分批培养法、连续培养法和半连续培养。 8.植物组织培养中培养材料的消毒过程中，消毒的基本原则是既要杀死附着其上的微生物又 不损伤材料。 9.细胞生长测定的一般方法为：细胞计数、测定细胞密实体积、细胞鲜重或干重。 10.体外培养的细胞根据其生长方式主要分为贴附型细胞和非贴附型细胞。 11.人工种子的组分包括胚状体、人工胚乳和人工种皮。 12.细胞融合主要经过了两原生质体或细胞互相靠近、细胞桥形成、胞质渗透、细胞核融合几 个步骤。其中细胞桥形成是最关键的一步。 13.花粉单倍体植株的鉴定方法有形态鉴定、细胞学鉴定、杂交鉴定、分子标记鉴定。 14.胚胎工程主要是对哺乳类动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育， 获得人们所需要的成体动物。 15.人工诱导单倍体形成的方法包括：远缘杂交、延迟授粉、核置换、射线照射、花药培养等。 二、单项选择题（每题1分，共10分） 1.人参皂甙粉是人参中重要的药用成分，以前只能从人参中提取产量极低，因而价格昂贵。 目前人参皂甙粉可以通过下列哪项技术迅速大量获取（B） A．基因工程 B．植物组织培养 C．植物体细胞杂交 D．发酵工程
高中生物细胞工程试题
阶段质量检测(二) 细胞工程 (时间:4５分钟,满分:10０分) 一、选择题(每小题3分,共45分) 1、下列生物工程技术中,不属于细胞工程得就是( ) A.通过试管动物大量繁殖优良动物 Ｂ.利用含有人胰岛素基因得大肠杆菌生产胰岛素 C.通过体细胞克隆技术培养出克隆羊 D、将某人得肝癌细胞在实验室中繁殖成一个细胞系 2。下列关于植物体细胞杂交技术得叙述,错误得就是( ) A.获得原生质体得过程需要用到纤维素酶与果胶酶 B.利用植物体细胞杂交可以获得某种多倍体植株 C.植物体细胞杂交过程就就是原生质体融合得过程 Ｄ。可根据细胞中染色体数目与形态得差异来鉴定杂种细胞 3.植物体细胞杂交制备原生质体与动物细胞培养配制一定浓度得细胞悬浮液,所需要得酶依次就是( ) Ａ.淀粉酶与磷脂酶 B.纤维素酶与胰蛋白酶 C.脂肪酶与二肽酶 Ｄ。过氧化氢酶与半乳糖苷酶 ４.下列有关单克隆抗体制备得叙述,正确得就是( ) A.先利用特定得抗原蛋白饲喂小鼠,再从小鼠脾脏中分离B淋巴细胞 B。为避免病毒感染,只能用聚乙二醇、电激等处理来诱导骨髓瘤细胞与已免疫得B淋巴细胞融合 Ｃ.体外培养杂交瘤细胞需要在培养液中添加动物血清与抗生素 D.经过选择培养基初次筛选得杂交瘤细胞即可进行体内或体外培养 5。(全国高考)关于动物细胞培养与植物组织培养得叙述,错误得就是( ) A.动物细胞培养与植物组织培养所用培养基不同 Ｂ.动物细胞培养与植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶 C、烟草叶片离体培养能产生新个体,小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖 D。动物细胞培养可用于检测有毒物质,茎尖培养可用于植物脱除病毒 ６。细胞工程中,选择合适得生物材料就是成功得关键、下列选择不合理得就是( ) A、选择高度分化得动物体细胞进行培养有利于获得大量细胞 Ｂ。选择胚胎细胞作为核供体进行核移植可提高克隆动物得成功率 Ｃ、选择一定大小得植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗
生物技术概论试题
生技28、查找阅读有关生物技术的英文文献并翻译成中文一、名词解释 Plasmid 目的基因 单克隆抗体技术 细胞融合 基因库 问答题：
1.疾病基因治疗有哪四大策略，肿瘤的基因治疗主要有哪两种策略？ 2.从cDNA文库和基因文库中获得目的基因有什么不同？ 3.如何从一片嫩叶经组织培养培育出众多的完整植株？ 4.开展干细胞研究对人类有何积极的意义？ 5.为什么说干细胞的应用将具有广泛的前景？ 6.人类基因组计划任务是什么？将解决什么问题？它对医学的发展有什么影响？ 7.生物法处理污水或废水有哪几种常见方法？污水治理的意义何在？ 8.空气污染治理与水污染治理有什么关系，常见的方法有哪几种 9.什么事生物修复技术，方法，举例说明其应用价值 10. 生物技术对经济社会发展的影响，试举例说明。
第二部分综合练习 一、单项选择题 4. 下面哪个不是生物技术包括的基本内容？ 细胞工程基因工程遗传工程酶工程 1、现代生物技术是一项高新技术，它具有高新技术的“六高”特征，下面哪个不属于“六高”？ A、高效益 B、高风险 C、高势能 D、高效率 2、生物技术是以下面哪个为核心？ A、基因工程 B、细胞工程 C、酶工程 D、发酵工程 3、分子克隆主要是指 A、DNA的大量复制 B、DNA的大量转录 C、DNA的大量剪切 D、RNA的大量反转录 4、多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为 A、平头末端 B、3突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端 5、设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的 A、5…端特定序列互补 B、5?端任章序列互补 C、3…端特定序列互补 D、3?端任意序列互补 6、用于鉴定转化于细胞是否含重组DNA的最常用方法是 A、抗药性选择 B、分于杂交选择 C、RNA反转录 D、免疫学方法 7、下列哪些是发酵技术独有的特点 A、多个反应不能在发酵设备中一次完成 B、条件温和、能耗少、设备简单 C、不容易产生高分子化合物 D、发酵过程中不需要防止杂菌污染 8、不是工业生产上常用的微生物为 A、担子菌 B、细菌 C、酵母菌 D、霉菌 9、机械搅拌发酵罐与通风搅拌发酵罐相比，下列不属于前者特点的是 A、发酵罐内没有搅拌装置，结构简单 B、发酵罐内有搅拌装置，混合速度快 C、耗能少，利于生产 D、发酵罐内没有搅拌装置，结构复杂 10、从微生物细胞制备酶的流程一般包括破碎细胞、溶剂抽提、离心、过滤、干燥这几 个步骤。
最新细胞工程练习题(附答案)
细胞工程练习题 一．选择题 1. 在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需 要的 A．消毒灭菌B．适宜的温度C．充足的光照D．适宜的养料和激素 2. 下列关于植物组织培养的叙述中，错误 ．．的是 A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 3．我国科学工作者曾成功地将分别属于两个科的植物----烟草和菠菜杂交成功，从而获得一种新型的烟草品种。在此过程中，下列操作不．是必需的是 A．杂交前要除去两种细胞的细胞壁 B．原生质体融合前要先脱分化 C．原生质体融合后，要选出烟草----菠菜融合细胞加以培养 D．要诱导愈伤组织进行再分化 4．下图是“白菜—甘蓝”杂种植株的培育过程。下列说法正确的是 A．所得到的“白菜—甘蓝”植株不能结籽 B．愈伤组织是已高度分化的细胞 C．上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程 D．诱导原生质体融合时可用聚乙二醇 5．下面是将四倍体兰花的叶片通过植物组织培养形成植株的示意图，相关叙述中正确的是 A．②阶段会发生减数分裂过程B．①阶段需生长素而③阶段需细胞分裂素C．此过程体现植物细胞具有全能性D．此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体6．下图为将胡萝卜的离体组织在一定条件下培育形成试管苗的过程示意图。有关叙述正确的是 A. 利用此过程获得的试管苗可能为杂合子 B．①②过程中都会发生细胞的增殖和分化 C. 多倍体植株的培育需经过如图所示过程 D．此过程依据的生物学原理是细胞膜具有流动性 7. 各项培育植物新品种的过程中，不经过愈伤组织阶段的是 A．通过植物体细胞杂交培育白菜——甘蓝杂种植株 B．通过多倍体育种培育无子西瓜 C．通过单倍体育种培育优质小麦 D．通过基因工程培育转基因抗虫水稻 8. 作物新品种的过程中，常利用植物组织培养技术。下列叙述正确的是 A.培育转基因的外植体得到的新个体属于基因突变个体 ③ ② ① 四倍体兰花叶片愈伤组织胚状体植株
细胞工程学相关考试题及答案
细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程（cytotechnology或cell engineering）：它是以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状，生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养（nursing culture）：用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交（cell hybridization）：指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕：从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子：是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养（anther culture）：将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，放在无菌的条件下，使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。（指离体培养花粉和花药，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，并从中鉴定出单倍体植株，使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium)：培养过程中，有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中，这种培养过某种细胞以后，含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒：由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除，以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系：指从机体中取出而直接培养的细胞，从一代到十代的细胞培养是原代培养，形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交：指在人工控制条件下，不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养：是指胚或具胚器官（如子房、胚珠等）在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择：是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征，在特定培养条件下，具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存：是指液体转变为非晶态（玻璃态）的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition)：当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合（aymmetric fusion）：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合（symmetric fusion）：两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞）。 21、永久细胞系：大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。
细胞培养技术和培养箱习题
第十章细胞培养技术和培养箱 首页习题习题参考答案 习题名词解释选择题简答题 一、名词解释 1. 细胞培养 2. 细胞培养传代 3. 原代细胞培养 4. 无限细胞系 5. 细胞融合 6. 细胞治疗 7. 培养箱 8. 缓冲室 9．手套操作箱 二、选择题 【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。 1.体外培养细胞的分类（贴附型或悬浮型）是根据（） A．细胞为上皮样或成纤维细胞样 B．能否贴附在支持物上生长 C．呈密度抑止特性 D．肿瘤细胞 E．细胞可多次传代 2. 下述细胞传代的概念中，正确的是（） A．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器的过程 B．从体内取出细胞接种到培养容器，细胞继续增殖的过程 C．培养细胞期间更新培养液的过程
D．当细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞接种到其他容器并及时更新培养液使细胞增殖继续的过程 E．细胞倍增的过程 3. 细胞生长维持液，需添加的血清量的百分比为（） A．1％～2％ B．2％～5％ C．5％～10％ D．10％～20％ E．20％～25％ 4．培养细胞传代时，通常是（） A．根据不同细胞采取不同的方法 B．常用二乙烯四乙酸二钠（EDTA） C．EDTA与胰蛋白酶按不同比例混合使用 D．悬浮生长的细胞直接添加胰蛋白酶” E．贴壁生长的细胞添加新鲜培养液 5. 二氧化碳培养箱结构的核心部分，主要是 A．湿度调节装置 B．湿润的含水托盘 C．温度调节器 D．CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置 E．气体保护器装置 6. 二氧化碳培养箱调节CO2浓度范围为（） A．0％～20％ B．20％～40％ C．10％～20％ D．20％～30％ E．30％～40％ 7. 厌氧培养箱通过自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态，其换气过程是（） A．①气体排空→②净化→③气体排空→④N2净化→⑤气压平衡 B．①气体排空→②N2净化→③气压平衡
专题2-细胞工程练习题(含答案解析)
第I卷（选择题） 1．利用植物组织培养技术将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株，培育的过程中不需要 A. 导入外源基因 B.离体状态 C. 具有完整细胞核的细胞 D.一定的营养物质和激素 2．通过植物体细胞杂交可以获得“烟草—菠菜”——一种新型的烟草品种。下图为培育杂种植株过程的示意图,下列操作不是必需的是( ) A.在融合之前除去两种细胞的细胞壁 B.原生质体先进行脱分化处理再融合 C.原生质体融合后筛选杂种细胞继续培养 D.诱导杂种细胞形成愈伤组织再分化成植株 3．能克服远缘杂交不亲和技术的是( ) A．组织培养 B．细胞融合 C．动物胚胎移植 D．单倍体育种 4．下列有关现代生物科技的叙述中，错误的是（） A．植物体细胞杂交技术克服了不同生物远缘杂交不亲和的障碍 B．动物细胞融合技术开辟了制备单克隆抗体的新途径 C．利用基因工程技术可以使哺乳动物生产人类所需的药品 D．胚胎移植技术的优势是可以充分发挥雄性优良个体的繁殖潜力 5．关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是 A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同 B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶 C.给予适宜的条件，有的植物可在愈伤组织的基础上直接发育出花器官 D.细胞培养产生出变异的新植株，为选择有益性状的新作物创造了条件 6．利用生物工程技术能够实现对良种种畜的快速大量繁殖，以下哪项技术不具备此优点？ A．基因工程技术 B．细胞核移植技术 C．胚胎分割技术 D．试管动物技术 7．在细胞工程——植物体细胞杂交中，需要将营养细胞的细胞壁除去，通常是采用纤维素酶和果胶酶的酶解破壁法处理。如将去掉了细胞壁的成熟植物细胞置于清水中，细胞将（） A．皱缩 B．胀破 C．呈球形 D．保持原状 8．在生物体内，细胞没有表现出全能性而是分化为不同的器官，其原因是 A. 细胞丧失了全能性 B. 不同细胞中遗传信息的执行情况不同 C. 不同的细胞中遗传信息不完全相同 D. 在个体发育的不同时期，细胞内的遗传物质发生了变化 9．下列有关植物组织培养的叙述，正确的是（） A．植物组织培养没有体现植物细胞的全能性 B．二倍体植株的花药经植物组织培养后得到稳定遗传的植株 C．用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子 D．植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得
细胞培养技术原理与应用
细胞培养技术原理及应用研究进展 ：鹏学号：158033038 专业：流行病与卫生统计学 摘要：细胞培养是指将采集体组织的细胞模拟体生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术，已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法。文章对细胞培养技术的应用作一综述。 关键词：细胞培养；应用；研究进展 细胞是构成机体的基本单位，是生命活动的基本单位。一切有机体（除病毒）都是由细胞组成的。细胞具有独立的、有序的自控代体系。因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、征服疾病的关键。细胞培养是指将采集体组织的细胞模拟体生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术。细胞培养技术的优点是可以直接观察活细胞的形态结构、生命活动及其变化；提供大量生物性状相似的试验对象，特别是研究大型动物（奶牛）时具有耗资少的优点。但模拟体环境仍与实际有很大的差异，因此利用细胞培养技术的试验结果不可以轻易做出与体等同的结论。 动物组织（细胞）培养开始于20世纪初，现已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法[1 ]。随着细胞培养技术的不断发展，现在也广泛应用于动物生产研究。 20 世纪60 年代，该技术应用于水产动物的病毒分离和纯化，对于鱼类疾病的防治具有重要作用。近年来研究发现单一种子细胞难以完成构建复杂组织的需要，因此产生了联合培养细胞技术。联合培养下的细胞之间存在着精细的相互调控关系，因而更符合仿生学的原理且更有利于种子细胞的增殖与分化，为复杂的细胞诱导分化以及体外组织构建提供了新思路、新方法[2 ]。 1 细胞培养
细胞培养基本操作技能
细胞培养基本操作技能 无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目： 5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力 5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。 5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。 实验用品 1. 种类︰ 1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。 1.2. TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有Tflask, plates, dishes, roller bottle 等，依实验需要使用。 1.3. plastic sterile pipet: 1 ml, 2 ml,5 ml, 10 ml, 25 ml 1.4. 塑料离心管: 15 ml, 50 ml，均有2 种不同材质，其中polypropylene (PP) 为不透 明材质，polystyrene (PS) 为透明材质，可依实验需要而选择适合材质之离心管。 1.5. glass pastuer pipet: 9 inch，用以抽掉废弃培养液等。 1.6. 玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware)：100 ml, 250 ml,500 ml,1000 ml 2. 清洗︰ 2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡数小时，洗净后才开始使用。 2.2. 用过之玻璃血清瓶，以高压蒸汽灭菌，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净，勿加清洁剂清洗。 3. 灭菌︰ 3.1. 实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121 oC, 15 lb, 20 分钟，置于
细胞培养考试题
细胞培养试题 1、体外培养包括几类？什么是组织培养技术？ 体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养三类；组织培养技术是指：从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 2、进行细胞培养的基本条件包括哪些？ （1）无污染的环境。无毒和无菌培养环境是保证培养细胞生存的首要条件。（2）适宜温度。人体细胞的适宜温度为36.5℃+0.5℃，偏离时，会影响细胞代谢，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力比对高温强。（3）气体和pH值。开放培养时（碟皿或培养瓶松盖培养），一般置于95%的空气加5%CO2混合气体环境中。O2参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。多数细胞缺氧不能生存。CO2既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，作用是维持培养基的pH值，细胞要求7.2-7.4。（4）营养物质。包括糖，无机盐，氨基酸，维生素，促细胞生长因子等。牛血清是提供生长因子和细胞所需物质的来源。（5）渗透压。260-320 m Osm/L 培养基 3、原代培养、传代培养、二倍体细胞、克隆细胞株的概念。 原代细胞：直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。传代细胞：初代培养细胞从第一次传代培养后具有增殖能力的细胞群。二倍体细胞：细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同的细胞群。克隆细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单个细胞增殖形成的
细胞群。 4、制备单细胞悬液的方法主要有哪些？ （1）悬浮细胞的分离方法是离心法，最简单方法是采用1000r/min 的低速离心10min。 （2）实体组织材料的分离方法有机械分离法和消化分离法，机械分离法包括切割分离法（组织培养法）和机械挤压分离法；消化分离法包括胰蛋白酶消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和胶原酶协同用法、EDTA消化法。 5、简述细胞冻存、复苏和运送的方法。 （1）细胞冻存方法：预先配制冻存液（含20%血清培养基、10%DMSO）；取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入新鲜培养液，低速离心5分钟；弃上清液，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液，分装至冻存管中。密封后标记冻存细胞名称，日期，细胞状态也可标记，冻存者姓名。（细胞冻存是慢冻的过程：4℃1小时，-20℃1小时，-80℃过夜，液氮中保存） （2）细胞复苏方法（快融）：从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。低速离心10分钟。去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 （3）细胞运送方法：①冻存运送：液氮中；②充液法：细胞传代后贴壁，瓶内充满培养液，密闭封口，保温携带。 6、细胞培养的基本方法有哪几种？
动物细胞培养技术 思考题
《动物细胞培养技术》复习思考题 1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果 器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 2.叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 3.正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。 你认为精确配制各种溶液？ 答： 5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 8.HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 10.营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
细胞培养考试题目
细胞培养特性：分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞）体外培养细胞生长特点：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。 原代培养（原代细胞）：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。 传代培养：细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定浓度之后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。 细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。 有限细胞系：一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。 无限细胞系：传代中极少的后代发生转化，通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。 细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。 克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始，其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体，这种纯化的细胞群称为细胞株，他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。 杂交瘤技术：主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。 杂交瘤：由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。 细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。 杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等. 显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则σ值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小σ值，提高分辨率可采取以下措施: （1）降低波长λ值，使用短波长光源。（2）增大介质n值以提高NA值（NA=nsin(u)/2）。（3）增大孔径角u值以提高NA值。（4）增加明暗反差。 体外培养过程：原代培养或初代培养、传代期、衰老期。 每代细胞生长过程：滞留期（潜伏期）、指数生长期、平台期 培养细胞生长条件：①营养需要：基本营养物质（氨基酸、维生素、碳水化合物及无机离子）和促生长因子等物质。②生存环境：温度（35—37）、气相（CO2和O2）、pH值（）及渗透压③无污染及无毒：防止交叉污染、有害物质污染。 细胞冻存及复苏： 基本原则：慢冻快融，以最大限度的保存细胞活力。 原理：细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，
细胞培养技术原理考试
细胞培养技术原理考试 科室：__________________ 姓名：_________ 1、单选题，只有一个答案是对的，多选少选不给分（10题×5分）。1）、玻璃器皿泡酸时间一般为（） A、4h B、过夜(14h) C、30分钟 D 、1个月 2）高温蒸汽灭菌时，消毒物品的时间和温度为（） A、1h，121℃ B、30分钟，121℃ C、30分钟，100℃ D 、10分钟，127℃ 3)通常实验室使用的次氯酸钠浓度为（），用于处理重度污染和血液溅出物可以用（），甚至（）的次氯酸盐。 A、0.1%，1%，10% B、1%，2%，10% C、0.05%，1%，20% D 、0.05%, 1%，10% 4) 细胞培养的最佳PH值为（） A、7.10~7.40 B、7.30~7.40 C、7.40~7.50 D 、7.40~7.60 5）293T细胞培养，其胎牛血清浓度一般为（） A、1% B、25% C、10% D 、20% 6）B958细胞培养，其胎牛血清浓度一般为（） A、10% B、25% C、1% D 、20% 7）为了预防细胞培养细菌污染，培养基一般加入（）浓度的青链霉素 A、10% B、25% C、1% D 、20% 8）保存细胞用的液氮的温度为（）
A、-190℃ B、-180℃ C、-100 ℃ D 、-170℃ 9）CO2培养箱的CO2浓度为（），温度为（），起缓冲和PH和恒温恒湿的作用 A、4%，37℃ B、5%，40℃ C、5%，37℃ D 、10% ，37℃10）倒置荧光显微镜，一般开了以后连续使用不要超过（），关了（）内最好不要开，以达到保护仪器的作用。 A、2h，30分钟 B、4h，30分钟 C、30分钟，20分钟 D 、24h, 20分钟 2、多选题，只有多个答案是对的，多选少选不给分（10题×5分）。1）、细胞培养的基本培养基类型有（） A、DMEM B、IMDM C、1640 D 、MEM 2) 细胞对营养的需求包括以下几个方面（） A、氨基酸 B、单糖 C、维生素 D 、无机离子与微量元素3）细胞渗透性冷冻保护剂有哪几种（） A、甘油 B、乙醇 C、DMSO D 、丙二醇 4）细胞培养的微生物的污染种类包括（） A、细菌 B、真菌 C、支原体 D 、病毒 5）细胞培养中支原体污染的判断方法有（） A、DNA荧光染色法 B、PCR法 C、直接培养法 D 、免疫学法 6）以下操作能有效预防细胞培养污染的是（）
MDCK细胞培养基本技术方法 -2011本
MDCK细胞培养 一、目的MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。 二、适用范围适用于疾控中心所有技术人员。 三、程序 （一）生物安全要求实验室生物安全级别：BSL-1所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。 （二）材料 1.生长成片的MDCK细胞 2.无菌的T25细胞培养瓶 3.D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺） 4.青、链霉素母液（10000U/mL青霉素G；10000μg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃ 5.HEPES缓冲液，1M母液 6.胎牛血清 7.EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mMEDTA-4Na），分装后保存于-20℃8.7.5%牛血清白蛋白组分V9.1mL、10mL无菌移液管10.70％～75％的酒精注意事项：经常检查试剂使用的有效期。 （三）实验步骤这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。 1.D-MEM培养液的准备 500mLD-MEM液中加入：青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100μg/mL链霉素），HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ12.5mL 2.细胞生长液的准备 胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。 3.首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。 4.温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
5.重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。 6.加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。 7.加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。 8.取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞） 9.每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。 10.于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。