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广谱高效微生物防腐剂产生菌的筛选及应用_硕士研究生毕业论文

硕士学位论文

广谱高效微生物防腐剂

产生菌的筛选及应用

学科门类理学

学科专业微生物学

培养单位生物工程学院

Screening of Broad-spectrum Biocontrol Substance Producing Strain and Application

A Dissertation Submitted for the Degree of Master

Candidate：

Supervisor：Prof.

Associate Prof.

College of Bioengineering

Henan University of Technology, Zhengzhou, China

关于学位论文的独创性声明

本人郑重声明：所呈交的论文是本人在指导教师指导下独立进行研究工作所取得的成果，论文中有关资料和数据是实事求是的。尽我所知，除文中已经加以标注和致谢外，本论文不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得河南工业大学或其它教育机构的学位或学历证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对研究所做的任何贡献均已在论文中做出了明确的说明。

若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。

学位论文作者签名：日期：年月日

学位论文使用授权书

本人完全同意河南工业大学有权使用本学位论文（包括但不限于其印刷版和电子版），使用方式包括但不限于：保留学位论文，按规定向国家有关部门（机构）送交学位论文，以学术交流为目的赠送和交换学位论文，允许学位论文被查阅、借阅和复印，将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，采用影印、缩印或其他复制手段保存学位论文。

保密学位论文在解密后的使用授权同上。

学位论文作者签名：日期：年月日

指导教师签名：日期：年月日

摘要

微生物导致食品的腐败变质不仅会造成巨大经济损失，还会引起严重的食品安全问题。而现有的食品防腐保鲜方法在实际生产应用中具有一定的局限性，迫切需要寻求更安全有效的防腐保鲜新技术，将微生物及其代谢产物应用于食品防腐保鲜的生物防治方法是现阶段研究的热点。

从轮马热泉、北海温泉、大塘热泉等腾冲温泉附近采集土壤样品23种，采用稀释分离法分离纯化得到细菌菌株142株。以大肠杆菌、黑曲霉、禾谷镰刀菌等为指示菌，采用滤纸片法或平板对峙法从142株细菌菌株中初步筛选得到具有广谱抑菌效果的菌株7株，其中菌株LM2303广谱抑菌效果最好。通过形态特征分析、生理生化特性分析和16S rDNA序列比对，菌株LM2303应为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

采用紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变和微波诱变对菌株LM2303进行选育。其中，经硫酸二乙酯诱变处理得到突变菌株D59，其抑菌效果较原始菌株提高了11.4%。以抑菌物质产量为指标，从8种基础培养基中筛选出菌株D59最佳发酵培养基M2。采用单因素实验和响应面分析对菌株D59进行发酵条件优化。单因素试验结果表明培养时间、温度和转速对菌株D59抑菌物质产量有显著影响(p<0.05)。利用响应面确定菌株D59的最佳培养条件为：接种量5%、装液量100mL/250mL、培养时间43h、温度33℃、转速177rpm。在上述发酵条件下培养，100mL发酵液可得到抑菌物质粗提物2.8560 g(湿重)，是原发酵条件下的1.4倍，有效提高了抑菌物质产量。

采用盐酸沉淀、甲醇萃取，从拮抗菌株发酵液中得到抑菌物质粗提物。利用薄层色谱对抑菌物质进行分析和初步纯化，紫外及茚三酮显色结果表明抑菌物质含有苯环和闭合肽键。红外光谱扫描结果表明菌株LM2303抑菌物质为环状脂肽类物质。该脂肽类物质理化性质稳定，抑菌谱广，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌和黑曲霉、黄曲霉、扩展青霉、禾谷镰刀菌等真菌均有较强的抑制作用。

从不同腐烂病症的冬枣上分离得到根菌索菌、细极链格孢、橄榄色盾壳霉、扩展青霉四种致腐真菌。平板对峙试验结果表明菌株LM2303可有效抑制上述四种真菌的生长，菌株LM2303具有冬枣贮藏期致腐真菌的生物防控应用潜力。

…………………

关键词：枯草芽孢杆菌；拮抗；抑菌物质；诱变选育；发酵条件优化

ABSTRACT

Food spoilage caused by pathogenic microorganisms not only results in great financial losses, but also serious food safety problems. And existing food antisepsis method in practical application has certain limitations, to explore an obvious safe and effective anticorrosion technology is particularly important. Microorganisms and their metabolites work for food conservation is a research focus of biological control at the present stage.

142 strains of bacteria were isolated from 23 soil samples which collected form Tengchong hot spring, such as Lun-ma hot spring, Bei-hai hot spring, Da-tang hot spring and so on. Filtering paper method and dual culture technique were employed to test antagonistic effect of bacteria strains, and seven of them showed efficient inhibitory, strain LM2303 has the most obvious inhibitory effect. Strain LM2303 was identified as Bacillus subtilis through the analyses of morphological and biochemical properties and 16S rDNA sequencing.

Bacillus subtilis LM2303 was used as the start strain and the mutation breeding was carried out through UV light, DES and microwave radiation. Inhibition ratio of strain D59 isolated following DES mutagenesis enhance 11.4%.The production of biocontrol bubstance was taken as indexes, M2 medium was used for fermentation screened from 8 different medium. The factors and its levels influencing the production of biocontrol bubstance produced by strain D59, was determined by using single-factor test, and the optimization of fermentation conditions was approached by RSM. The optimum fermentation conditions were as follows: temperature was 32.6℃, inoculation was 5%, medium volume was 100mL/250mL, rotary speed was 176.9 rpm and fermentation time was 43.02 h. Under the new fermentation condition, 2.8560 g biocontrol bubstance can be obtained from 100 mL fermentation broth and is the 1.4 times of original fermentation conditions.

Biocontrol bubstance were obtained with hydrochloric acid precipitate and methanol extraction method from fermentation broth, and purified by thin layer chromatography. Purified biocontrol bubstance was detected by FT-IR. The results

showed that the biocontrol bubstance contained lipopeptides. Biocontrol bubstance produced by strain LM2303 has stable physical and chemical properties and wide antibacterial spectrum, exhibit strong inhibitory effect on a number of bacteria and multiple pathogenic fungi.

Four putrefying fungi were isolated from the decayed tissues of Winter Jujube and identified as Rhizomorpha Roth.ex Fr, Alternaria tenuissima, Coniothyrium olivaceum and Penicillium expansum. Strain LM2303’s prominent inhibition on four putrefying fungi lay the foundation for putrefying fungi biocontrol of Winter Jujube.

…………………

Key words:Bacillus subtilis; antagonistic action; biocontrol bubstance;

mutation breeding; optimization of fermentation conditions

第一章前言 (1)

1.1 研究背景 (1)

1.2 生防微生物概况 (2)

1.2.1 用于生物防治的微生物种类 (2)

1.2.2 生防微生物的作用机制 (2)

1.3 生防芽孢杆菌 (4)

1.4 芽孢杆菌抑菌物质研究概况 (4)

1.5 本研究的目的和意义 (6)

第二章广谱拮抗菌株的筛选及其鉴定 (8)

2.1 材料 (8)

2.1.1 样品 (8)

2.1.2 试剂 (9)

2.1.3 仪器 (10)

2.1.4 培养基 (10)

2.1.5 供试有害微生物 (11)

2.2 方法 (11)

2.2.1 微生物培养 (11)

2.2.2 细菌菌株分离纯化 (11)

2.2.3 菌悬液制备 (11)

2.2.4 拮抗菌株初筛 (12)

2.2.5 拮抗菌株无细胞培养滤液制备 (12)

2.2.6 拮抗菌株的复筛 (12)

2.2.7 拮抗菌株形态特征观察 (13)

2.2.8 拮抗菌株生理生化特性分析 (13)

2.2.9 拮抗菌株16S rDNA序列分析 (13)

2.3 结果与分析 (14)

2.3.1 细菌菌株的分离纯化 (14)

2.3.2 拮抗菌株初筛 (15)

2.3.3 拮抗菌株复筛 (15)

2.3.4 拮抗菌株LM2303鉴定结果 (17)

2.4 结论与讨论 (19)

第三章菌株LM2303诱变选育 (21)

3.1 材料 (21)

3.1.1 微生物菌株 (21)

3.1.2 试剂 (21)

3.1.3 培养基 (21)

3.1.4 仪器设备 (22)

3.2 方法 (22)

3.2.1 菌悬液制备 (22)

3.2.2 紫外线诱变 (22)

3.2.3 硫酸二乙酯(DES)诱变 (22)

3.2.4 微波诱变 (23)

3.2.5 正突变株筛选 (23)

3.2.6 突变株遗传稳定性 (24)

3.3 结果与分析 (24)

3.3.1 紫外线(UV)诱变 (24)

3.3.2 硫酸二乙酯(DES)诱变 (25)

3.3.3 微波诱变 (26)

3.3.4 突变菌株的遗传稳定性 (27)

3.4 结论与讨论 (27)

第四章拮抗菌株发酵条件优化 (29)

4.1 材料 (29)

4.1.1 微生物菌株 (29)

4.1.2 试剂 (29)

4.1.3 仪器 (30)

4.1.4 培养基 (30)

4.2 方法 (31)

4.2.1 种子液制备 (31)

4.2.2 生物量测定 (31)

4.2.3 抑菌物质粗提物制备 (31)

4.2.4 基础发酵培养基筛选 (31)

4.2.5 菌株D59生长曲线测定 (32)

4.2.6 单因素试验 (32)

4.2.7 响应面优化 (33)

4.3 结果与分析 (33)

4.3.1 菌株D59生长曲线 (33)

4.3.2 基础发酵培养基筛选结果 (33)

4.3.3 单因素试验结果 (34)

4.3.4 响应面优化 (36)

4.4 结论与讨论 (39)

第五章菌株LM2303抑菌作用研究 (41)

5.1 材料 (41)

5.1.1 微生物菌株 (41)

5.1.2 试剂 (41)

5.1.3 仪器 (42)

5.1.4 培养基 (42)

5.2 方法 (43)

5.2.1 菌悬液制备 (43)

5.2.2 菌株LM2303对有害微生物生长的影响 (43)

5.2.3 抑菌物质粗提物制备 (43)

5.2.4 抑菌物质抑菌谱测定 (44)

5.2.5 真菌孢子悬液制备 (44)

5.2.6 抑菌物质对真菌孢子萌发的影响 (44)

5.2.7 抑菌物质对真菌菌丝形态的影响 (44)

5.2.8 抑菌物质稳定性研究 (45)

5.2.9 抑菌物质分离纯化及定性研究 (45)

5.3 结果与分析 (47)

5.3.1 菌株LM2303对有害微生物的抑制作用 (47)

5.3.2 菌株LM2303抑菌物质抑菌谱 (48)

5.3.3 对真菌菌丝形态的影响 (49)

5.3.4 对真菌孢子萌发的抑制作用 (50)

5.3.5 抑菌物质的稳定性研究结果 (51)

5.3.6 抑菌物质分离纯化及鉴定 (52)

5.4 结论与讨论 (55)

第六章生防菌株在冬枣贮藏中的应用 (56)

6.1 材料 (56)

6.1.1 菌株 (56)

6.1.2 培养基 (56)

6.1.3 试剂 (57)

6.1.4 仪器 (57)

6.2 方法 (57)

6.2.1 冬枣贮藏期致腐真菌的分离 (57)

6.2.2 回接验证试验 (58)

6.2.3 冬枣致腐真菌的种属鉴定 (58)

6.2.4 冬枣致腐真菌拮抗菌株的筛选 (58)

6.3 结果与分析 (58)

6.3.1 冬枣致腐真菌的分离鉴定 (58)

6.3.2 冬枣致腐真菌拮抗菌株的筛选结果 (60)

6.4 结论与讨论 (61)

第七章结论 (62)

参考文献 (63)

致谢 (70)

作者简介 (71)

广谱高效微生物防腐剂产生菌的筛选及应用

第一章前言

1.1 研究背景

在食品工业中，粮食、果蔬及加工类食品的防腐保鲜始终是一个亟待解决的重要问题，据FDA统计，全世界每年约有10% ~ 20% 的食物损失于各种腐败，其中微生物侵染是导致食物腐败变质的主要因素。各类食物的腐败变质不仅会导致其丧失营养和食用价值，造成巨大的经济损失，而且由于许多微生物在生长繁殖过程中产生的有毒次级代谢产物，还会引起食品安全问题，严重危害人类健康(石立三等, 2008)。据WHO统计，全世界每年数以亿计的食源性疾病患者中，70%是由病原微生物污染的食物引起的。因此，防止微生物侵染是食品工业面临重大问题，也是保证食品安全的首要任务。

目前，用于各类食品防腐保鲜的方法主要有物理和化学的方法。(1)物理方法：主要是采用热处理、气调、辐照及低温贮藏等方法来防止食品腐败变质，其中热处理和紫外线辐照处理的方法在葡萄、梨、苹果、西红柿等多种果蔬的防腐保鲜应用中取得较好效果(赵明慧等, 2011)。但低温贮藏、辐照处理等物理方法均需要特定的专业设备，难以大面积的普及推广应用(吕劳富和何勇, 2003)。(2)化学方法：主要是运用化学合成药剂来控制病原微生物的侵染，化学方法具有效价高、效果稳定、作用机理明确等显著优点，但长期的研究表明，化学合成药剂对人体不同程度存在一定的毒性，其中一些具有诱癌性和致畸性，在超标使用的情况下甚至会引起食物中毒，而且化学合成药剂长期大量使用会导致病原微生物产生抗性和造成环境污染(刘钟栋, 2005)。

由于物理和化学方法在实际生产应用中存在一定局限性，迫切需要寻求更安全有效的防腐保鲜新技术。近年来越来越多的人把目光投向天然防腐剂的开发利用，天然来源的防腐剂分为动植物源和微生物源防腐剂，相对于动植物来源的防腐剂，微生物因为具有生长繁殖快、生长条件简单、易于培养等特点而成为天然防腐剂的重要来源。利用微生物菌株及其代谢产物进行生物防治的研究开发已引起国内外学者的广泛关注，它主要是利用微生物及其代谢产物来抑制病原微生物的生长繁殖从而达到防腐保鲜的目的，生物防治方法是现阶段各类食品防腐保鲜研究的热点(贾士儒, 2009)。目前，世界上公认的、采用微生物发酵法生产并已经投入使用的安全生物防腐剂有：乳酸链球菌素(Nisin)、纳他霉素(Natamycin)和ε-聚赖氨酸(ε-polylysine)。

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1.2生防微生物概况

1.2.1 用于生物防治的微生物种类

利用微生物进行各类食品的防腐保鲜就是选取不会对食品造成危害的微生物来抑制病原微生物的生长繁殖，从而达到防止食品腐败变质或降低食品腐败变质程度的目的，目前研究较多的生防微生物主要有芽孢杆菌(Sharma et al, 2009)、乳酸菌(Jiang et al, 2012)、放线菌(Subramaniam et al, 2011)、酵母菌(Droby et al, 2002)及霉菌(Ippolito A et al, 2000)等，如表1-1所示。

表1-1 用于生物防治的微生物

微生物种类微生物菌株

芽孢杆菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)

乳酸菌双歧杆菌(Bifidobacterium)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、乳酸链球菌(Lactic streptococci)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)

放线菌白色链霉菌(Streptomyces albus)、球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)、褐黄孢链霉菌(Streptomyces gilvosporeus)、纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)、恰塔努加链霉菌(Streptomyces chattanoogensis)

酵母菌酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、假丝酵母(Candida guilliermondii)、毕赤酵母(Pichia pastoris)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)、梅奇酵母(Metschnikowia)

霉菌

哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、绿色木霉(Trichoderma viride)、出芽短梗

霉(Aureobasidium pullulans)

其他荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)

1.2.2生防微生物的作用机制

明确生防微生物的作用机制对该生防菌株的成功应用及技术的推广至关重要。生防微生物的作用机制非常复杂，某一生防菌株的作用机制是单一的还是几种机制协同作用也比较难以断定，而且有些作用机制可能还尚未被发现。随着国

广谱高效微生物防腐剂产生菌的筛选及应用

内外学者对生物防治研究的不断深入，我们对生防菌株作用机制的认识也在逐步加深。现有的研究结果表明，生防微生物菌株对有害微生物的作用方式主要有拮抗作用、寄生作用、竞争作用和诱导抗性等。

(1)拮抗作用

拮抗作用指生防菌株通过分泌胞外活性物质的方式来抑制有害微生物的生长繁殖甚至杀死有害微生物的现象，它是生防菌株发挥作用的一个重要机制。生防菌株分泌的胞外活性物质通常在极低的浓度下就能对有害微生物的生长代谢活动产生抑制作用，如荧光假单胞菌产生的吩嗪类抗生素(朱栋华, 2003)、枯草芽孢杆菌产生的脂肽类抗生素(陈华等, 2008)、明串珠菌产生的细菌素(李曼等, 2008)、木霉产生的木霉素(申屠旭萍等, 2009)等。纪兆林等研究发现地衣芽孢杆菌产生的抗菌蛋白对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的菌丝生长和孢子萌发具有显著的抑制作用，可以有效防治苹果贮藏期的轮纹病病害(纪兆林等, 2008)。范青等的研究表明枯草芽孢杆菌B-912对柑橘采后青霉病和绿霉病具有较好的抑制效果，菌株B-912的抑菌机理主要是产生抗菌素(范青等, 2000)。

(2)寄生作用

寄生作用指生防菌株通过吸附生长、侵入等方式抑制有害微生物生长的现象。寄生作用是拮抗真菌菌株发挥生防作用的重要机制之一，如哈茨木霉(Benhamou and chet, 1993)的菌丝定向生长扩展伸向有害真菌，当接触到病原真菌后，它的菌丝吸附于于病原真菌菌丝体周围，通过分泌蛋白酶、几丁质酶和葡聚糖酶等可以降解有害真菌细胞壁的酶类来破坏其细胞骨架，致使其消解死亡，从而表现出抗真菌活性。

(3)竞争作用

竞争作用是生防微生物发挥作用的重要机制之一，微生物间的竞争作用主要包括营养竞争和空间位点竞争，指生防菌株通过争夺同一生态环境内的营养和空间位点的方式来抑制病原微生物的生长繁殖。王亮等的研究表明梅奇酵母XY201在冬枣表皮具有很强的定殖能力，在人工气调条件下贮藏，梅奇酵母XY201 能有效抑制冬枣黑斑病的发生，使发病率降低52.5%-59.2%(王亮等, 2010)。Charles 等发现玉米内生芽孢杆菌能在玉米体内迅速生长繁殖，占领生态位点，从而达到抑制病原真菌生长的效果(Charles et al, 2001)。

(4)诱导抗性

近年来，拮抗菌株诱导采后果蔬产生抗性成为了果蔬采后贮藏期病害生物防治的研究热点(李淼, 2010)。已有的大量研究表明，有些生防菌株或其代谢产物能引起果蔬发生一些生理生化反应，提高果蔬自身某些酶的活性，从而使果蔬产

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生对多种病原微生物的抗性，这种现象称为诱导系统抗性。研究发现，出芽短梗霉(Ippolito A et al, 2000)、毕赤酵母(Fan et al, 2000)、假丝酵母(Ghaouth et al, 2003 )、枯草芽孢杆菌(Ongena, 2007)等均能诱导多种果蔬发生生理生化反应，提高果蔬自身的抗性，减少其在采后贮藏期的腐烂。

1.3生防芽孢杆菌

芽孢杆菌(Bacillus)是一类嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，具有抗逆性强，易于分离培养，生理特征丰富多样，能够代谢产生多种具有抑菌活性的胞外物质，抑菌谱广等显著优点，且该菌在自然界中广泛存在，对环境无污染，对人畜无毒无害，是理想的生防微生物菌株。近年来，国内外学者对芽孢杆菌在生物防治中的应用开展了大量研究，用于生物防治的芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)、短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)等。范青等分离筛选得到的枯草芽孢杆菌B-912对柑桔青霉病、绿霉病均具有较好的防治效果(范青等, 2000)。杨震等的研究结果表明采用1×108 CFU/mL的枯草芽孢杆菌BS-331菌悬液浸泡油桃可达到与纳他霉素(300 mg/L)相当的防治油桃采后病害的效果(杨震等, 2008)。纪兆林等研究发现地衣芽孢杆菌产生的抗菌蛋白对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的菌丝生长和孢子萌发具有显著的抑制作用，可以有效防治苹果贮藏期的轮纹病病害(纪兆林等, 2008)。陈莉等从棉花根际土壤中分离得到短短芽孢杆菌A57，平板对峙培养试验中菌株A57对棉花立枯病菌、枯萎病菌和黄萎病菌的平均抑制率分别达到33.15%、39.15%、29.15%，具有良好的生防应用潜力(陈莉等, 2007)。王奕文等从甜瓜果皮分离得到一株解淀粉芽孢杆菌EXWB3-03，对峙培养试验结果表明菌株EXWB3-03对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、链格孢(Alternaria alternata)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑曲霉(Aspegillus niger)和粉红单端孢霉(Trichothecium roseum)等8种果蔬采后病原真菌均具有显著的拮抗作用(王奕文等, 2008)。赵德立等研究发现多粘芽孢杆菌JW2725对柑橘青霉菌具有很强的拮抗作用(赵德立等, 2006)。

1.4芽孢杆菌抑菌物质研究概况

1952年，Babard等首次从枯草芽孢杆菌发酵液中分离出抗真菌肽，至今国内外学者已从枯草芽孢杆菌的不同菌株中发现60多种具有抑菌活性的物质。研究发现枯草芽孢杆菌可以通过核糖体合成途径和非核糖体合成途径产生抑菌物质，核糖体合成途径产生的抑菌物质主要有细菌素类(罗秀针等, 2008)、细胞壁

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注：1、评审教师应结合学院评审办法作出客观的评审意见；2、本表附在学生毕业论文或设计后面，关键词及以上部分由学生填写，要求字迹清楚整洁；3、该表将装入学生毕业档案中。4、该表一式两份。目录内容摘要 (1) 关键词 (1) 一、树立所有学生都能教好的观念 (1) 二、实施“低、多、勤、快”的教学模式 (3) 三、辩证施教，掌握学习方法 (4)

四、高度重视数学实践操作，切实培养学生主体探索能力 (6) 五、重视数学教学“思”的过程，抓实探索数学知识的脉络 (7) 大纲参考文献 (8) 浅谈农村小学数学困难生的辩证施教内容摘要：目前小学生数学学业不良学生的比例很大,如何转化数学学业不良学生便成为教师普遍关注的紧迫课题。结合教学实践，提出了要转化数学学业不良现象必须做好的几个方面。关键词：困难生；改革模式；辩证施教；学法指导农村的孩子，由于地理条件及诸多因素的影响，基本上都没有进入学前教育，就直接进入小学学习，他们基础差，特别是数学这门学科基础更差。如何转化数学学业的不良学生便成为了我们教师普遍关注的紧迫课题。这些农村学生由于缺乏良好学习习惯，不能认真地、持续地听课，有意注意的时间相当短；缺乏正确的数学学习方法，仅仅是简单的模仿、识记；上课时，学习思维跟不上教师的思路，造成不再思维，不再学习的倾向；平时学习中对基础知识掌握欠佳，从而导致在解题时，缺乏条理和依据，造成解题思路的“乱”和“怪”；心理压力较大，不敢请教，怕被老师认为是“笨小孩”。

微生物实验室现场检查

微生物实验室要求微生物检验实验室操作技术要求第一节实验室管理制度一、实验室管理制度 1 ．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2 ．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3 ．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修 , 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4 ．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5 ．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6 ．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。二、仪器配备、管理使用制度 1 ．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH 计、高速离心机。 2 ．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。 3 ．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。

硕士研究生毕业论文的撰写

硕士研究生毕业论文的撰写社会、文化与田野是民族学专业（编者注：作者就读专业）最令我着迷的地方，读书、走路和写作随之分配了我读研三年中的大部分时间。我经历了从转行到入门再到沉淀这一系列困顿而又渐进的过程，同时也于毕业论文的调研与写作中践行了学术生涯里不可或缺的一场成人仪式。虽然我的毕业论文说不上多么优秀，也犯了许多错误，但我把自己的错误看得珍贵无比，希望能在写下一篇20万字的论文之前汲取一点经验教训，如果侥幸惠及他人，不胜荣幸。前期的知识储备摘抄笔记既然选择了读研，不管出于何种目的，毕业论文肯定就不能像本科论文一样草草了事，不求写得如何出众，但起码要对得起这三年的光阴。刚一进校，导师就语重心长地的对我们说，三年不读够一百本书，想写出一篇好论文就不容易，研三挤牙膏似的写作应验了什么叫书到用时方恨少，船到江心补漏迟。由于我并不是民族学科班出身，本人系天天论文网就职11年的资深论文编辑；工作中与各大医学期刊杂志社进行学术交流过程中建立了稳定的编辑朋友圈，系多家医学杂志社的特约编辑，常年为医学期刊杂志供稿，负责天天论文网医学论文·分检·编校·推送·指导等工作！工作企鹅1:1550116010工作企鹅2：766085044所以在步入研一时，上课感觉非常吃力，仅凭考研时急功近利的复习是无法应对课堂上老师层出不穷的提问以及接纳源源不断的新知识。迷茫和心急的情绪让我感到了胸无点墨的焦躁，于是我开始疯狂恶补，一方面旁听宗教学和历史学的课程，希望充实与民族学相关领域的知识，另一方面大量看本专业的经典著作，即使第一遍不能完全领会主旨要义，起码先装出个顿学累功的模样。这一阶段读书不成体系，走的是条野路子，仅凭借兴趣爱好、难易程度和不同课程的要求到处涉猎，并没有从民族学的理论脉络中构建起自己的知识框架。因此，我当时看书

乳酸菌的筛选

乳酸菌的筛选（初筛）一、实验目的对采集的仔猪粪便进行梯度稀释和平板涂布，对猪粪中的肠源菌进行初步的筛选。二、实验材料 PBS、2mL离心管、MRS肉汤、琼脂、冰袋、保温盒、封口膜、200μL 枪头等。三、实验步骤 1、实验前准备：用MRS肉汤配置MRS固体培养基（内含有1.5%琼脂，1%CaCO3），121℃灭菌15min后倒平板，备后面涂布使用，2mL 离心管中加入1mLPBS备后面实验使用。 2、采样：使用已灭菌的200μL枪头挑取仔猪猪粪适量，放入事先准备好的2mL加有PBS的离心管中，取样标准为每窝仔猪取5个样品，采完样品后，用封口膜将离心管口封住，并放入准备好的装有冰袋的保温盒中保存。 3、涂布：将采好的样品用螺旋振荡器混匀，取100μL样品混匀液，加入900mL的离心管中进行梯度稀释，取10- 4、10-5梯度菌液进行平板涂布。 4、培养：将涂布好的平板依次标好时间、稀释浓度和样品编号后，置于厌氧培养箱中37℃培养24h。 5、培养完成后，对所涂布的平板进行拍照留底。

乳酸菌的筛选一、实验目的利用平板划线的原理，对涂布出的单菌落进行划线纯化。二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。四、实验步骤 1、MRS培养基的配置：用MRS肉汤按每升48g计算配置，向其中加入1.5%的比例加入琼脂，按1%的比例加入CaCO3后，121℃灭菌15min。 2、倒平板：培养皿灭菌，烘干后，取灭菌的MRS固体培养基倒平板（每个平板倒10mL左右），放入4℃冰箱备用。 3、划线：于超净工作台中，将涂布平板中的单菌落用接种环挑取，按图1中所示的方法与平板上划线。 4、将接种好的平板置于37℃厌氧培养箱中培养24h。 5、培养期间，注意观察菌的生长情况，培养结束后，拍照留底。

数字媒体艺术设计专业毕业设计任务书

数字媒体艺术设计专业毕业设计任务书一、综述数字媒体艺术设计专业毕业设计包括三个大的部分： ①毕业论文（打印稿，并装订成册）及英文翻译（正式文本2本：导师1本，档案1本，）； ②作品（电子文档，并发布成互动多媒体光盘） ③作品展示版面（80×120cm KT板装裱喷绘效果版面）其设计方向分为以下几类： 1.短片类（①动画作品；②录影作品；③视频广告作品） 2.互动媒体类（①多媒体作品；②互动游戏作品；③虚拟/仿真作品） 3.静帧产品类（①视觉传达作品；②图形界面作品）二、毕业设计内容说明 (一)毕业论文要求毕业论文包括以下内容： 1)封面 2)扉页 3)毕业论文任务书 4)论文摘要，中文（400-800字） 5)论文摘要，英文 6)目录 7)图目录 8)表目录 9)正文 10)参考文献（≥20篇，必须有一篇以上外文参考资料） 11)附录 12)毕业设计翻译其中正文部分必须包括以下几个部分：第一章绪论第一节. 研究目的及方法第二节. 论文内容介绍第二章设计背景及必要性分析第一节. 设计背景分析第二节. 必要性分析第三章作品方案设计过程第一节. 设计概念阐述第二节. 设计过程阐述第四章作品制作过程第一节. 制作过程阐述第二节. 产品测试（互动媒体类必须有此节内容）第五章结论论文格式及打印要求：详见《毕业设计.论文样本》翻译格式及打印要求：详见《毕业设计.翻译样本》 (二)作品要求无论哪一类，所有作品都必须制作成互动多媒体光盘。光盘内容包括三大部分： ①最终作品展示 ②创作及制作过程展示 ③论文 (三)最终作品展示内容 1.动画 1)故事梗概 2)角色设定（所有正式出场角色的彩色静帧效果图）≥1页 3)场景设定（所有场景的彩色静帧效果图）≥3页 4)道具设定（所有重要道具的彩色静帧效果图）≥1页 5)动画（视频文件）播放2.录影 1)内容概述 2)短片（视频文件）播放 3.视频广告 1)广告目的简述

硕士生毕业论文经典范文.doc

硕士生毕业论文范文论文最好能建立在平日比较注意探索的问题的基础上，写论文主要是反映学生对问题的思考，详细内容请看下文硕士生毕业论文。现代智库是国家治理体系的重要组成部分，也是国家软实力的重要体现，是政府决策体制的外脑和科学决策的重要环节。近年来，xx多次对智库建设做出重要批示，其中特别对"中国特色新型智库"做出重要批示。加强新型智库建设还写进了党中央的报告，去年还专门提出《关于加强中国特色新型智库建设的意见》。江西省委省政府高度重视、积极探索江西新型智库特色转型的组织结构和管理方式。江西的发展正处于经济持续增长的转型期与全面深化改革的攻坚期，智库的发展正迎来史上最好的机遇，但是江西新型智库特色转型还是处于摸着石头过河的阶段，其中面临的困难和问题还很多，笔者撰写此文旨在抛砖引玉以引起学术界对江西新型智库特色转型建设的关注和思考。 (1)新型智库的基本特征在分析新型智库的内涵定义之前，我们首先了解一些智库的一般含义。目前学术界还没有形成对智库的统一、规范和权威的定义。美国著名智库兰德公司的创始人弗兰克ț科尔博莫指出，智库是思想工厂，敢于提出挑战目前权威和超越目前智慧的战略思想，这是一个追求独立的、无拘无束和异想天开的战略

思想机构和头脑风暴中心[1]。美国知名智库专家詹姆斯ț麦甘的智库定义是参与公共政策研究分析的机构，智库能就国内和国际问题产生政策导向[2]。新型智库就是以法律或制度的形式将智库纳入公共决策体系之中。新型智库具有政策分析、解读和评估等功能，按照新型管理体制运行新型智库，新型智库必须坚持开放和国际化转型[3]。武汉大学教授顾海良指出，新型智库必须尽显思想的力量，构建中国学派、彰显中国意识、突出中国话语权，形成中国方案[4]。笔者赞同李国强归纳出新型智库的基本特征：坚持中国共产党领导，坚持中国特色社会主义制度;旨在为各级党委政府提供有效适用的决策服务;政府智库因为与决策层接近，尽显体制的优越性;新型智库应该发挥民间智库的作用，政府智库、高校智库与民间智库必须合法有序地发展[3]。 (2)江西新型智库特色转型的主要特征江西新型智库的特色转型是个新生事物，目前江西的政府部门和学术界还没有形成统一的认识和规范的标准。江西省各家智库都在积极摸索智库发展的新模式。所谓"江西新型智库特色转型"就是要以调查研究江西的经济发展和社会实践为基础，突出解决江西出现的热点难点问题，形成江西特色风格的公共政策机构，从而建立起符合江西地域特色、解决江西问题现象、开拓秀美江西道路的新型智库。江西省副省长朱虹指出江西省新型智库要以决策咨询为重点，按照"资政启民、研判趋势、推动改革、促进发展"的基本思路，为江西经济社会科学发展提供高质量的

耐盐乳酸菌的筛选和鉴定

摘要：本实验从酱油厂提供的酱油原醅中分离筛选出耐盐乳酸菌，该菌在18%以上NaCl 浓度的条件下能够正常生长代谢，初步鉴定其为四联球菌属，可用于高盐稀醪酱油酿造目前国内尚无耐盐度达18%的乳酸菌种, 该菌种的成功选育为国内首创。关键词乳酸菌耐盐筛选鉴定酱油采用高盐稀醪发酵工艺生产时能有更好的质量和香味。其工艺上需要在酱醅发酵过程中添加酵母菌和乳酸菌。然而酱油的含盐度高达18%，这就需要选育出耐盐菌种。关于耐盐酵母的应用报道已有很多。而乳酸菌方面，目前在国内菌种库内尚无耐盐度达18%的菌种。我们作为酱油大国，筛选出耐盐度达18%的嗜盐乳酸菌的意义则显得十分重大。本实验主要对高盐稀态发酵工艺酱醅中嗜盐乳酸菌进行分离筛选及鉴定。 1 材料与方法 1.1 材料酱醅、草酸铵结晶紫液（革兰氏A液）、路哥尔氏碘液（革兰氏B液）、蕃红花红（沙黄）、生理盐水。 1.2 实验方法 1.2.1 分离筛选流程(如图1)

1.2.2 筛选方法十倍稀释法、平板涂布法、斜面之字划线法、平板四分法划线。1.2.3 鉴定方法 1.2.3.1 革兰氏染色法 1.2.3.2 过氧化氢酶接触酶测定取一环琼脂斜面的培养物，涂于干净载玻片上，然后加1 滴3% -15% H2O2，若有气泡产生则为阳性反应，无气泡为阴性反应。或将3%-15% H2O2加到斜面的菌苔上观察是否有气泡的产生。 1.2.3.3 生化鉴定管使用方法挑取待检菌革兰氏染色镜检，将新鲜菌苔接种于普通肉汤中，37摄氏度培养18-24h。各吸取0.05-0.08ml（约1-2滴）的肉汤培养物或菌悬液加入每种微量生化管内，将已接种生化管套上无菌塑料帽直立于三折吸塑短架内，于35-37摄氏度培养箱中培养。 1.2.3.4 高效液相色谱HPLC 测量乳酸含量(图2)

乳酸菌菌种的分离筛选方法

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养

硕士研究生毕业论文规范2016版

硕士学位论文撰写要求一、结构模板（分章节撰写）摘要（中文、英文）【包含四方面的内容：选题的背景（简要说明）；要解决的问题(简要说明)；所使用的方法的说明；主要结果。不少于半页。特别注意：摘要中不要大篇幅地写背景、问题的重要性等内容（该部分不能超过摘要篇幅的四分之一）。英文题目不要加“Research on”或“Study on”这样的中式英语；英语摘要中，“本文”不要用this paper，而要用this thesis 或this dissertation】目录【一般到三级目录即可。】第1章引言【第1.1节：研究背景与研究意义【科学、技术、应用、工程、政策等面临的新形式、新需求、新问题，现有研究存在的主要不足；研究解决其的理论意义（建立什么新理论、新方法）或/和应用价值（提出什么新技术、新工艺、新系统，满足什么应用需求，解决什么现实问题）】第1.2节：本文的研究内容（或本文所要解决的问题）第1.3节：本文的结果与创新第1.4节：本文的组织结构（介绍所研究内容之间的关系，不是简单地罗列章节。可用图形表示）】第2章相关研究进展（根据具体内容，给出适当的标题）【可以分节介绍与论文内容相关的国内外研究进展，参考文献的引用主要在这一章。参考文献按引用的顺序编号。最后一节为“现有研究工作的不足”（借此表明你的工作的必要性、意义和价值）。参考文献引用时，用作者等[1]提出了…的形式引用，原则上应逐篇应用，不要一次引用多篇如[1-7]】本章一般不超过5页。第3章自己的研究工作介绍（根据具体内容，给出适当的标题。可以分成几章分开写）【第3.1节问题定义与描述第3.2节用到的主要定义、数据结构或硬件（如芯片）的有关说明第3.3节XXXX（解决方案）的总体思路第3.4节XXXX（解决方案）的具体介绍第3.5节举例说明（可以没有）第3.6节理论分析（如果提出新的算法，需要证明算法的正确性（不能证明时，至少是说明）、分析复杂性。给出新方法的理论效果，并与别人成果的理论值进行比较）注意：不要采用夹叙夹议的方法，即不要边叙述自己的方案，边举例、穿插进行，边评价。】第4章模拟/实验结果及分析【给出实验环境、实验方案、实现的条件及实验结果（可以用图、表、定理），并对结果给出必要的对比分析与说明。注意：论文必须有设计和实现的过程及相关结果，必须有实现或模拟实验结果，并与别人的结果进行

雏鸡肠粘膜乳酸菌的筛选及其应用.

雏鸡肠粘膜乳酸菌的筛选及其应用本研究的目的是分离筛选出专门适用于雏鸡生产、具有抗逆性和抑菌特性的乳酸菌,同时探讨该乳酸菌对雏鸡生长性能、盲肠菌群和免疫功能的影响以及人工感染大肠杆菌情况下对雏鸡的保护力,为乳酸菌在雏鸡生产中的应用提供理论依据。由21日龄雏鸡盲肠粘膜上分离筛选得到20株乳酸菌,应用体外法筛选出在pH3.0处理2h后存活率达60%以上,对0.1%-0.3%胆盐有良好耐受性的6株菌。6株菌对大肠杆菌和沙门氏菌均有良好抑制作用,其中以菌株R5、R9、R19抑菌性能最好。传统的碳水化合物发酵方法鉴定这3株菌分别属于嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、卷曲乳杆菌。通过测定3株乳酸菌的生长曲线、发酵液pH值的变化和稳定期各时间点抑菌圈直径,结果表明:R5菌株生长性能和产酸性能优于其他两株菌,最佳发酵时间为培养18h。最终选定R5菌株用作雏鸡生产的益生素菌种。R5菌株pH3.0接种2小时后存活率为68.15%,0.3%胆盐接种2小时后存活率为42.06%,对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌直径分别为21.17mm和 23.2mm。选用120只体重相近1日龄健康的AA肉仔鸡,分成4组,即对照组、抗生素组、商业菌组和试验菌组,每组3个重复,每个重复10只鸡,公母各半。试验期21天。对照组饲喂基础日粮,饮用清水;抗生素组饲喂基础日粮+20mg/kg 土霉素,饮用清水;商业菌组饲喂基础日粮,饮用清水+商业乳酸菌菌液(10~8个活菌/只·日);试验菌组饲喂基础日粮,饮用清水+试验乳酸菌菌液(10~8个活菌/只·日)。试验测定乳酸菌对雏鸡生长性能、盲肠菌群及免疫功能的影响。试验结果表明:整个试验期,对照组、抗生素组、商业菌组和试验菌组肉仔鸡平均日增重分别为27.60g、29.22g、28.71g和29.61g,试验菌组显著高于对照组(p ＜0.05);各组料重比分别为1.55、1.46、1.47和1.48,商业菌组显著低于对照组(p＜0.05)但与试验菌组无显著差异;试验菌组与抗生素组各周龄雏鸡采食量、日增重和料重比无显著差异(p＞0.05);饲喂试验菌、商业菌和土霉素均能不同程度地降低雏鸡的死淘率和腹泻率;21日龄时,试验菌组较对照组盲肠中乳酸菌数量明显增加(p＜0.05),大肠杆菌的数量显著降低(p＜0.05);与对照组和抗生素组相比,饲喂试验菌和商业菌能显著提高雏鸡胸腺指数(p＜0.05);脾脏指数,试验菌组显著高于对照组(p＜0.05),其它各组间差异不显著;试验菌组血清IgA显著高于对照组(p＜0.05),试验菌组、商业菌组和抗生素组血清IgG均显著高于对照组(p＜0.05)。选用60只1日龄健康的AA肉仔鸡,分成3组,即对照组、抗生素组和试验菌组。对照组饲喂基础日粮,饮用清水;抗生素组饲喂基础日粮+0.02%土霉素,饮用清水;试验菌组饲喂基础日粮,饮用清水+乳酸菌液(10~8个活菌/只·日)。试验第15天对所有鸡进行致病性大肠杆菌攻毒试验,每只鸡灌服1ml大肠杆菌菌液(10~9CFU/ml)连续观察一周。结果表明,攻毒后一周对照组、抗生素组和试验菌组死亡率分别为20%、5%和0%。攻毒前(14日龄)试验菌组体重较对照组提高了3.96%,攻毒后一周(21日龄)试验菌组体重较对照组提高了9.13%;料重比方面,抗生素组和试验菌组较对照组分别降低了8.95%和 7.89%。【相似文献】【关键词相关文档搜索】：动物营养与饲料科学; 【作者相关信息搜索】：东北农业大学;动物营养与饲料科学;许丽;王晶;

微生物实验室技术操作规范

实验室技术操作规范一、无菌操作要求食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 1．灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。

硕士研究生毕业论文答辩稿二

各位老师、同学，大家早上好! 我来自管理系XX级(2)班，我叫于涌，我的论文题目是《A市公安局警员工作满意度调查研究》，本篇论文是在王群副教授的指导完成的。在此，我十分感谢他长期以来对我的精心指导和大力帮助，同时也感谢各位评审老师从百忙之中抽出宝贵的时间一同参与对我这篇论文的审阅并出席本次答辩，以下是本篇论文的选题背景、意义，资料收集准备工作以及文章结构。一、选题背景、意义。在新型城镇化建设过程中，警员在维护国家安全方面发挥着重要作用。在日常工作中，警员不断坚持“为人民服务”的宗旨，保卫人民群众的生命财产安全，维护社会安定，创造和谐稳定的生活环境。在现代管理中，警员的工作满意度作为一项重要内容，越来越被公安机关重视。作为行政执法机关，公安机关不断坚持依法治国战略，保护人民群众的生命财产安全。在实际工作中，警员在处理暴力冲突事件中，危险性比较高，其身心健康面临较大的威胁。据研究表明，相对其他职业，警员出现心理问题的机率比较大。2012年，为促进公安机关公正执法，维护人民群众的基本权益，公安机关出台《公安机关执法公开规定》，自觉实行政务公开制度，自觉接受人民群众和社会各界的监督，维护人民群众的各项权利。2013年，为规范公安机关的纪律，树立公安机关的形象，公安机关制定警员的行为准则。该准则指出，一旦群众面临危难，警员必须勇于相救;公安机关工作人员禁止酗酒;禁止在娱乐场所休闲娱乐。2014年，公安部修改一些法律文件，更加规范公安机关的行政执法行为，不断提高警员工作要求，不断完善相关的规章制度。在我国社会转型的关键时期，各种矛盾凸显，而警员是处理各类矛盾的中坚力量。他们的工作条件差，工资低，一如既往的风险大，面临各种社会矛盾和各种复杂问题，其身心健康面临各种威胁。在公安机关的日常管理中，比较侧重对警员的绩效考核以及警员的思想政治教育，不断约束警员的执法行为，往往忽视警员的心理机制建设和警员的基本利益，对警员的相关诉求处理不及时。因此，警员在工作中心理压力较重，工作积极性不高，严重影响人民群众对警员的工作认同。为提高公安机关的工作效率，变革公安机关的管理方式，维护公安机关的形象，必须加强警员工作满意度的研究。本文通过对A市公安局警员工作满意度的研究，找出A市公安局警员工作满意度的现状及存在问题，通过问卷调查获取相应的数据，并对数据进行相关分析，提出相应的对策建议。随着社会的转型，组织管理发生翻天覆地的变化。作为一种现代管理的理念，“以人为本、高满意度”逐步被人们所熟知。不断提高组织成员工作满意度，使A市公安局警务工作效率最大化，是A市公安局工作的重中之重。工作满意度直接影响警员的工作积极性。如果警员工作满意度的高则警员的工作积极性就高，工作满意度低则警员的工作积极性低，其直接影响警员的工作行为，不利于公安机关的日常管理工作。本研究将工作满意度的相关理论综合运用于A市警察队伍现状调查的研究，来探讨A市警员工作满意度现状及存在问题，重点分析A市警员管理的瓶颈问题，有利于充实警员工作满意度的研究理论，进一步拓展A市公安局警员工作满意度的研究空间。本文通过重点剖析警员心理机制建设和制约警员个人发展的相关因素，探究警员工作压力，促进公安机关的有效管理，使得心理学不断得到各组织的重视和发展，充分考虑心理学对组织成员的影响，不断完善心理学的相关理论。本文通过探究A市公安局警员工作满意度的现状、队伍管理中存在问题，不断探索其深层次原因，探讨影响A市公安局警员工作满意度的因素构成。通过借鉴国内外针对警员的工作满意度方面的研究，撰写警员工作满意度的调查问卷，了解警员的工作满意度，有利

数学与应用数学本科毕业论文

学号：20090430２2 TONGREN UNIVERSITY 本科毕业论文浅谈回归分析在葡萄酒等级评估的应用何继铭系别:数学与计算机科学系学科：理学专业：数学与应用数学专业指导教师：夏林丽贵州●铜仁２013年０6月

Tongren university 数学与应用数学专业本科毕业论文贵州●铜仁 2013年06月

目录（理科) 1。引言?错误!未定义书签。 2．问题描述............................. 错误!未定义书签。 3.问题分析?错误!未定义书签。４。模型的建立与求解.................... 错误!未定义书签。 4。１建立模型?错误!未定义书签。 4。2 模型求解........................ 错误!未定义书签。5．小结.............................. 错误!未定义书签。 6.参考文献.............................. 错误!未定义书签。 7．感谢信?错误!未定义书签。

浅谈回归分析在葡萄酒等级评估的应用数学与计算机科学系数学与应用数学专业何继铭摘要葡萄酒和酿酒葡萄检测的理化指标在一定程度上反应葡萄酒和葡萄的质量,针对这类问题，通过分析酿酒葡萄和葡萄酒成分之间关系的原理及对所给样本数据进行分析和处理，建立相应的回归模型，进而得到酿酒葡萄的好坏直接影响葡萄酒的等级的结论。关键词：葡萄酒回归分析理化指标

Dｉｓcuｓｓion oｎ the applicａｔion of reｇ ression aｎalysis ｉn Winｅ Assessｍｅｎt Mathematics anｄ Cｏmｐuｔer SｃieｎcｅDepartment Mathematｉcs ａnd Ａｐpｌｉed Maｔhｅmaｔicｓ Hｅ Jiｍing ABSＴRACT P hysical and cｈeｍicａl inｄicａｔｏrs oｆ wine anｄ winｅ grape ｄeteｃｔion rｅaction tｏａ certaiｎ eｘteｎt thｅ qualitｙｏf wine and grapes, foｒ sｕch probleｍs bｙａnaｌyｚing ｔhe pｒinciple ｏf ｔｈｅ relａtｉｏnshｉp between wine ｇｒape and winｅ comｐｏsitio ｎｔo ｔhe samｐｌe ｄata anａlｙsis and pｒocｅssinｇ, to estabｌish the apprｏｐriateregrｅssiｏn model， and then geｔ the wｉne grａpes diｒect iｍpａct oｎthｅ level of tｈe concｌusions oｆ thｅwｉne。 Keyｗords：ｍodｅl wｉne regｒessｉｏn ａnａlｙsiｓｐhysicocheｍiｃal iｎdex

乳酸菌菌种的分离筛选办法

精心整理乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。时，SL 培养基、MS 对乳酸菌无害。一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH 。筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h →挑选产生溶

钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。 2.溴甲酚绿指示剂法：培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液）筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。二.菌种的分离筛选 1.培养基： ★1.1麦芽汁碳酸钙培养基：麦芽汁（10BX）1L预先灭菌碳酸钙5-10g/LPH自然（分离用） ★★1.2吐温 ★1.3 酵母膏（分离用） 1.4 1.5 MgSO 4 1.6 ★★1.7 蛋白胨葡萄糖、琼脂18.0g 酸钙, 1.8BCP 乳糖5.0g蛋白胨5.0g酵母膏3.0g0.5℅溴甲酚紫10ml自来水1000ml pH6.5-7.0（分离用） 1.9BCG牛乳营养琼脂：脱脂奶粉10g，溶于50ml水中，加入1.6℅溴甲酚绿酒精溶液0.07ml，0.075Mpa20min。另取琼脂2.0g，溶于50ml水中，加酵母膏 1.0g溶解后调pH6.5-6.8，0.1Mpa20min.趁热在无菌操作下两者混合均匀，倒平板，37℃培养24h，检查是否有杂菌。

硕士毕业论文怎么写(很全哦)

根据我国学位条理规定，硕士研究生修满一定的学分，通过论文答辩后，方可授予硕士学位。因此，硕士论文对于硕士研究生来说，是最重要的工作，一般要经过至少一年的专门研究和撰写过程：首先是研究题目的选择，再通过艰苦的研究，最后将论文撰写出来，经同行专家评审后参加答辩，答辩通过后，经学校学术委员会审批后，方可授予硕士学位。硕士论文不仅是研究生研究工作的总结，而且反映了作者对本专业领域了解的程度和基础知识掌握的深度，反映了作者外语水平、阅读能力、科研能力，写作能力等综合能力，所以，硕士论文可以比较全面的反映研究生的状况。不少研究生学习不错，课题作的也不错，但写不出来，常见的论文缺陷是重点不突出、条理不清楚、逻辑不严密、写法不规范，说不清楚要说的内容，影响了论文的质量，也不能全面反映作者的水平。研究生一定要重视论文的写作质量，准确如实的将自己的研究工作反映出来。根据长期以来指导硕士论文的经验，我总结出来撰写硕士论文的基本要求，供研究生同学参考。一、硕士论文的目标研究生在写论文前应该明确两个问题，一是为什么要写论文？二是写给谁看？前边我们已经简略的说明了硕士论文是自己所从事的研究工作的总结，不仅将自己的成果公布于众，而且要全面反映自己的基础知识和科研能力。既然硕士论文是公开的，阅读论文读者群基本是对主题感兴趣者，当然会包括三部分人：一部分是稍微有一点该专业知识的读者，他们可能是想泛泛的了解这方面的研究动态，只是

当作学习对待；第二部分读者是对该专业领域比较熟悉，或许希望得到一些启发和借鉴，作为参考资料来对待，不会深究；第三部分读者是对该研究领域非常熟悉，或许希望继续这方面的研究，这部分读者会对论文的细节非常注意，通常会深究，甚至会重复推导原理和实验过程。明确了硕士论文的两个作用，作者在构思论文框架时，就要考虑使论文的确能满足这两个需要。 1．论文的内容要能将自己所作的研究工作，特别是创新点和创造性成果确切反映出来。要说的清楚，且实事求是，还要能反映出作者对本学科领域了解的程度，包括基础知识、专门知识、国内外水平和状况等，通过条理性、逻辑性、思路等反映自己的科研能力等。硕士论文不同于在杂志上发表的论文，要有一定的篇幅，否则，难以全面反映作者的水平和能力。因此，作者在写论文的过程中要刻意的将水平和能力充分显露出来。 2．论文既然要面对不同层次的读者，所以，作者在写论文时，要注意最好从简单和容易理解处入手，逐渐进入复杂的原理和公式推导，要将问题用简明的语言叙述清楚，条理性要强，可以多采用通俗的词语，容易理解的图表。所有这些的目的就是要让三部分读者都能看懂，并有所收获。特别是有关应用技术研究的论文，要兼顾不同的读者，不要故意将简单问题复杂化，让大部分人看不懂。有人也许以为，越是别人看不懂，说明水平越高，实际上，能将复杂问题用简单语言描述清楚，才说明作者自己确实弄清楚了，心中是有数的。对于

数字媒体艺术设计-毕业设计要求

数字媒体艺术设计（电艺）专业： (一)广告策划与设计：选择一种品牌或产品，以服务为内容进行其自身、环境、受众、竞争品牌等方面的市场调查分析，确定其品牌形象内容及广告定位、广告策略和媒介策略，进行以广告创意表现为主的视觉传播设计。设计内容及具体要求： 1、选题操作性要强，有明确的诉求和品牌概念。撰写广告设计策划书，要求策划书具备系统性、全面性。有特殊要求的学生必须经过指导教师同意（如概念策划） 2、创作作品形式为以下两种： A、产品宣传系列广告或企业形象宣传系列广告媒体设计。要具有组合媒体形态，符合所宣传品牌形象的特点和要求，具有较好的展示效果(主题画面应体现于实际媒体之上，或以展示等空间形式表现主题)。媒介形式如：报纸杂志广告、招贴、网络广告、户外广告、实物展示等，根据传播策略及诉求需要自定。创作作品数量为不少于3张， B、宣传样本设计产品宣传或企业形象宣传均可；不少于20P；开本自定，但不得小于A4； 3、图形设计必须原创，若为图像效果，必须自行拍摄，禁止网络下载； 4、提交喷绘或印刷成品或电子文件刻录光盘（存储为JPG或TIFF格式，150像素，CMYK 模式）；（二）画册设计 A、主题概念画册设计，从观念、文本、图像、文字及制作手段都必须有独创性，不能大量使用现成资料。选题观念独特，经过指导教师同意，可以独立作为毕业设计选题。 B、以系列画册为题材进行书籍整体设计，包括环衬、内页、正文版式、扉页、目录页、封面、护封等，要求整体结构合理和风格统一。设计内容及具体要求： 1、自选类别, 依不同选题采取合适的装帧装潢方式，创意要符合画册主题，提倡创新的书籍形式与装帧工艺，设计精装书籍一套或一个系列（三本以上）。 2、画册必须有封面、扉页、目录、版权页齐全，每本画册正文部分至少二十页并带有页码（其他页可用白页替代）。 3、实物制作完毕后，将每本画册的封面设计、立体展示效果及实物从不同角度和摆放方法拍摄的照片排版制成展板2张，附简短书籍的创意思路与装帧形式的设计说明。 7、提交形式为实物，并提交电子文件，刻录光盘（存储为JPG或TIFF格式，150像素）；（三）企业形象设计（VI设计）自选一个企业品牌，依据其企业理念（MI）、市场调查等进行视觉形象之别系统的设计（VI 设计）不少于40P，打印不小于A4，装订方式自定。设计内容及具体要求：市场调研报告，包括企业文化背景分析、产品具体情况分析、消费者具体情况分析、市场运营情况分析、总结定位。市场调研报告不得少于1200字，装订于VI手册中。企业形象设计手册，包括封面、书脊、扉页、目录、市场调研报告、基础设计部分、应用部分、封底。

硕士研究生毕业论文致谢

硕士研究生毕业论文致谢刚刚过去的研究生答辩让博主感慨颇多，尤其是论文已经过严禁审查，貌似还不错。由于致谢部分未经审查，许多同学出现了十分“雷人”的段子。我自己带的学生也对我说论文后的致谢是否可不要，博主回答当然可以不要，因为致谢不是必须的。但当我指导的研究生论文完成之后心中没有一丝感激之情时博主还是有一点伤感。不感谢导师，也应该感谢党和毛主席多年的教导吧。另一个十分严重的问题是致谢中出现严重雷同，有两位同学竟然是完全一样的，可能采用了相同模版吧。这里转发20XX级XX同学的论文致谢，写得不能算十分出彩，但表达的感情却是真挚的，当然博主也没有她说的那么好，“那只是一个传说”。苏醒同学是我校首批4+2全日制硕士毕业生，2021年由我校初阳学院保送成为我的门徒。苏醒同学读研期间品学兼优，多才多艺，深受师生爱戴，学位论文“基于历史发生原理的新课程高中概率教学研究”获2021年校优秀硕士学位论文，现供职于浙江一所党校。致谢此刻的窗外淅淅沥沥地下着小雨，昨天还烈日当空高温30度，今天却温度骤降，天色大变。来金华六年，早已习惯了这反复多变的气候，也习惯了许多原来的不良习惯。然而至今却仍没有养成轻松地表达自己情感的习惯，正如此刻的自己，直视电脑屏幕上那简简单单的“致谢”二字良久，却始终没有键下一个字。我己经能够深切体味鲁迅“说不出话来”的境地，只不过他是被太多的愤懑压抑胸口，而我却是因太多的谢意感动而哽咽。感谢我的恩师——张维忠教授。清楚地记得二年前的那个秋天，一个电话，五分钟考虑时间，我做下了有生以来最有意义的抉择，放弃区域经济的保研机会，选择了数学课程与教学论。于是，我得以有机会投在张老师门下，开始走上了一条饶有趣味又不失深度的学术之路。张老师常吝于言敏于行，寥寥数语却总能醍醐灌顶，用无声的行动来展示治学为人的五彩哲学，他用严谨治学扎实研究的实践来诠释靛青般深厚的学术态度，用火红热情的赤诚之心来教育我们待人接物之道，用黄色雏菊般温暖关爱的教学方式让给予我们有了家庭式的幸福感，用有如蓝天般广褒宽容的胸襟来提点我们如何笑面生活，正视挫败，用青春活力积极乐观的绿色生活来告诉我们快乐其实可以随时随地。张老师用他那特有的人格魅力感染着我们、激励着我们，从最初不知道自己、不知道的迷茫到今日知道自己、不知道的觉醒，从彼时的搜肠刮肚、生搬硬套堆砌文字，到此刻为这四万余字的毕业论文点击保存，是张老师引领着我一路成长。在我为前途担忧迷茫，为论文焦灼困顿时，又是张老师一次次无私给予慈父般的关爱——让我挺过了那些难关。在这短短的两年间，我曾在心里无数次的默念谢谢，但是今天，在面对着这从选题伊始到最终定稿都饱浸张老师无数心血的四万余字时，却发现这简单二字已经无法负荷内心那无限的感激，我想唯有用更加努力地追求卓越才是对张老师最为真切的回报。