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用AFLP技术分析四川核桃资源的遗传多样性_陈良华

植物生态学报 2008, 32 (6) 1362~1372 Journal of Plant Ecology (Chinese V ersion )

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收稿日期: 2007-02-08 接受日期: 2007-06-09

基金项目: 四川省作物育种攻关重点项目林竹新品种选育课题(2006YZGG-10)和四川省林业厅科技先导计划(2005-5) 在实验过程中得到了万雪琴博士的支持, 吴元奇老师对数据分析给予了帮助,在此表示感谢 * 通讯作者 Author for correspondence E-mail: hutx001@https://www.wendangku.net/doc/ba11866027.html, E-mail of the first author: chlhua2001@https://www.wendangku.net/doc/ba11866027.html,

用AFLP 技术分析四川核桃资源的遗传多样性

陈良华胡庭兴* 张帆李国和

(四川农业大学林学园艺学院, 四川雅安 625014)

摘要利用AFLP 分子标记技术, 运用EcoR /ⅠMse Ⅰ双酶切组合, 选用多态性高、分辨力强的4对选择性扩增引物组合E32/M48、E33/M61、E35/M61、E33/M62分别对四川省3个野生核桃(Juglans regia )种群和1个野生铁核桃(J. sigillata )种群共46个样品进行遗传多样性分析、居群遗传结构分析及种属关系探讨。结果表明: 1)共扩增出244个遗传位点, 其中146个多态位点, 多态率为59.84%; 核桃群体组和铁核桃群体的多态性百分率分别为55.33%和52.05%, 两个物种遗传多态性水平相当; 核桃群体组所检出的位点平均有效等位基因数A e 、Nei’s 基因多样度H 、平均Shannon 信息指数I 分别为1.322 9、0.190 8和0.286 3, 而铁核桃群体分别为1.339 9、0.196 1和0.289 8, 铁核桃群体遗传多样性水平略高于核桃群体。2)群体间特异带及群体间共有带占总扩增带数的15.16%, 其中铁核桃群体特异谱带最多, 群体特异谱带揭示了群体间的遗传差异及相似性。3) Shannon 信息指数(I )、Nei’s 基因多样性指数(H )和分子方差分析(AMOVA)表明核桃遗传多样性在群体间和群体内的分布分别为14.36%和85.64%、12.6%和87.4%、11.07%和88.93%, 表明群体内的遗传多样性大于群体间的遗传多样性; 核桃群体组与铁核桃群体的变异主要存在于群体组内, 组间的遗传变异仅占总变异的9.35%, 两者间的遗传分化系数G st 为0.093 5, 与AMOVA 分析结果一致。

4) 4个群体的Nei’s 遗传距离在0.038 2～0.069 2之间, 遗传一致度在0.933 2～0.962 5之间, 表现出较高的遗传相似性; 运用Nei’s 遗传一致度对供试种群进行了UPGMA 聚类, 结果表明核桃的3个群体优先聚类, 大渡河流域群体与甘南地区群体聚类最近。

AFLP 所检测出的结果既是核桃与铁核桃生物学特性的反映, 又是其各自生态学特性的反映, 该研究结果对核桃种质资源的保护和育种提供一定的理论依据。关键词核桃铁核桃 AFLP 遗传多样性种群遗传结构

GENETIC DIVERSITIES OF FOUR JUGLANS POPULATIONS REVEALED BY AFLP IN SICHUAN PROVINCE, CHINA

CHEN Liang-Hua, HU Ting-Xing *, ZHANG Fan, and LI Guo-He

Forestry and Horticulture College of Sichuan Agricultural University, Yaan, Sichuan 625014, China

Abstract Aims Juglans regia and J. sigillata are important economic nut trees and are widespread in Sichuan Province. Accurate evaluation of genetic diversity and relationships between species is essen-tial for effective preservation of germplasm resources and breeding. Traditional methods for assessment of genetic diversity in walnut, based on morphological, physiological and biochemical studies such as isozyme analysis or RAPD makers, are sensitive to environment so results are not reliable. AFLP has been applied extensively and effectively in population molecular ecology research and population ge-netic studies. Our aims were to identify genetic structure among populations and to examine genetic re-lationships between the two species.

Methods We compared three wild J. regia populations occurring at Qingba Mountain, Daduhe Valley, and southern Ganzhi District in Sichuan Province, and one wild J. sigillata population at Panzhihua District in southeastern Sichuan Province. We selected 46 samples to analyze by AFLP molecular maker technology using 4 pairs of primer combinations screened.

Important findings We obtained 244 bands including 146 polymorphic bands. The percentage of polymorphic bands (P ) was 59.84%. For the J. sigillata population, percentage of polymorphic bands

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lymorphic bands (P) was 59.84%. For the J. sigillata population, percentage of polymorphic bands (P)

was 52.05%, effective number of alleles per locus (A e) was 1.339 9, and Nei’s gene diversity index (H)

was 0.196 1, Shannon’s information index (I) was 0.289 8. For J. regia populations at species level, es-

timates were P=55.33%, A e=1.322 9, H=0.190 8, and I=0.286 3. Although these findings showed that

genetic diversity of J. sigillata was slightly higher than the other species, genetic diversity level was

generally equivalent. Shannon information index, Nei’s genetic diversity coefficient and analysis of

molecular variance showed that 85.64%, 87.4%, 88.93% genetic diversities, respectively, distributed

within populations at the species level. Most variation (80.65%) consistently originated from the interior

of groups. The population of J. sigillata possessed the greatest amount of unique bands, accounting for

4.5% of the total amplified bands, which indicated genetic variation between two species. The genetic

differentiation coefficient (G st=0.093 5) between two species is very low. Juglans regia showed high

genetic affinity to J. sigillata. Nei’s Genetic distances between populations varied from 0.038 2 to

0.069 2 and genetic similarities ranged from 0.933 2 to 0.962 5, which indicated there were high simi-

larities among populations.UPGMA analysis revealed that three J. regia populations clustered first, and

genetic distance was closest between the Daduhe Valley and southern Ganzhi District populations.

Key words walnut, Juglans regia, Juglans sigillata, AFLP, genetic diversity, population, genetic structure

DOI: 10.3773/j.issn.1005-264x.2008.06.017

核桃(Juglans regia)和铁核桃(J. sigillata)均属于胡桃科核桃属(郗荣庭和张毅萍, 1992), 是我国栽培历史悠久、分布广泛的重要干果和经济树种, 其种仁除含脂肪、蛋白质、碳水化合物外, 还含钙、磷、铁、胡萝卜素、硫胺素、核黄素和尼克酸等多种成分(高焕章等, 2000), 具有很高的营养价值、药用价值和经济价值。核桃在四川自然分布极为广泛, 遍及全省各地, 同时也是该省的主要经济树种之一; 而四川省地形复杂、气候条件多样, 在生态环境多样性条件下, 核桃经长期的异花授粉和自然选择, 其遗传背景比较复杂。核桃遗传多样性研究是核桃种质资源保护及开发利用的基础, 对当前核桃种质资源的遗传多样性进行准确的评价可以为亲本选配、后代遗传变异程度及杂种优势水平的预测提供预见性的指导, 这是关系到育种目标能否成功实现的关键(高翔等, 2002)。准确认识四川省核桃种质资源的遗传多样性及亲缘关系, 对该地区种质资源的分类、人工选育优良品种及杂交育种, 改造核桃低产区具有重要意义。

目前, 分子标记技术在我国核桃遗传多样性及品种鉴定研究中的应用, 主要是运用同功酶(杨自湘和奚声珂, 1989)和RAPD技术来对核桃种群进行地理生态型评价(吴燕民, 2000a)、遗传结构评价(张日清等, 2001; 郭传友等, 2006; 王正加等, 2006)、种属鉴定(吴燕民等, 2000b; 黄坚钦等, 2003; 郝艳宾等, 2006)以及寻找与核桃目标性状连锁的遗传基因(杨克强等, 2002; 王国安等, 2004)。国外分子标记在核桃上的应用主要有品种(基因型)鉴定、系谱分析、遗传结构和遗传多样性评价、分子标记辅助育种等方面, 主要包括同功酶(Ninot & Aleta, 2003), RFLPs (Fjellstrom et al., 2002), RAPDs (Nicese et al., 1998; Conner & wood, 2001), ISSRs (Potter et al., 2002), SSRs (Woeste et al., 2002; Dangl et al., 2005; Foroni et al., 2007)和AFLP (Kafkas et al., 2005; Bayazit et al., 2007)等。

由于RAPD分子标记的稳定性差, 且对核桃与铁核桃的种属关系存在着较大的争议, 对于核桃种群和铁核桃种群的研究更是少见, 基于AFLP分子标记技术实验结果稳定可靠, 重复性强, 目前国内并没有应用该分子标记技术研究核桃和铁核桃的遗传多样性, 所以本研究尝试用该技术对四川省野生的核桃种群和铁核桃种群进行种群遗传结构的研究及种属鉴定, 为核桃种质资源的保护和利用及生物分子进化提供理论基础和实验依据。AFLP是一种新近运用于群体分子生态、群体遗传研究的有效方法, 特别是近几年在种群生态、作物品系鉴别、基因定位作图、遗传多样性研究等方面表现出广泛的应用价值(李文英等, 2003)。AFLP是显性和共显性共存的一种标记(彭建营等, 2001), 且按典型的孟德尔方式遗传(孙庆磊等, 2004), 该技术不但具备了其它DNA 分子标记, 如RFLP、SSR、RAPD等所具有的优

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点, 而且还具有带纹丰富、DNA用量少、灵敏度高、快速高效、不受环境影响等特点, 一次分析可获得基因组大量的遗传信息, 并表现大量的多态性条带, 特别是对亲缘关系及遗传上区别不大的种类来说是比较合适的分子标记方法。

1材料与方法

1.1材料

根据赵安玖等(2004)研究的四川核桃主产区的生态区划, 于2005年9月选取四川核桃主产区秦巴山与龙门山区、邛崃山系及大渡河流域、甘孜州南部地区(甘南地区), 铁核桃主产区攀枝花及大小凉山地区等4个天然种群内的46株优良母树, 母树树龄40～80年。秦巴山与龙门山区采自广元市朝天区、市中区、青川县、平武县、南江县、通江县; 邛崃山系及大渡河流域采自汶川县、茂县、泸定县、小金县、石棉县、汉源县、宝兴县; 甘南地区采自巴塘县、乡城县、九龙县、得荣县; 攀枝花及大小凉山地区采自盐边县、米易县、仁和县、冕宁县、德昌县、盐源县(采样地基本状况见表1)。每个县采收两棵母树的种子各50颗, 母树间的距离在150 m以上, 带回实验室, 于当年10月经沙藏出芽后移入大棚栽植, 以来年核桃实生苗的幼叶作为供试材料。

表1供试材料来源及基本气候物征

Table 1 Origin and basic climatic characteristics of the materials in the study

群体名称及编号Name of the population and the code 秦巴山与龙门山区

(核桃群体)

Qingba Moutain

(POP1)

邛崃山系及大渡河

流域

(核桃群体)

Daduhe vally (POP2)

甘南地区

(核桃群体)

Gannan district

(POP3)

攀枝花及大小凉山地区

(铁核桃群体)

Panzhihua district

(POP4)

经纬度范围

The range of longitude and lati-tude 108°24′～102°25′ E

32°59′～29°92′ N

102°25′～103°89′ E

29°04′～31°67′ N

99°00′～101°53′ E

28°71′～30°00′ N

101°52′～102°68′ E

26°30′～28°72′ N

海拔高度范围

The range of altitude (m) 507～970 1

440～2 463 2 100～2 869 976～1 944

采样地及编号

Site of the material and the code 朝天区(1, 2), 市中

区(3, 4), 青川县(5,

6) 平武县(7, 8),

南江县(45, 46), 通

江县(47, 48)

汶川县(21, 22), 茂县(23,

24), 泸定(25, 26), 小金

县(27, 28), 石棉县(29,

30, 汉源县(31, 32), 宝

兴县(33, 34)

巴塘县(36, 38)、乡

城县(39, 40)、九龙

县(41, 42)、得荣县

(43, 44)

盐边县(9, 10), 米易县

(11, 12), 仁和区(13,

14), 冕宁县(15, 16), 德

昌县(17, 18), 盐源县

(19, 20)

年平均气温

Annual average temperature (℃)

15.7 14.4 11.5 15.9 1月平均气温

The average temperature in Janu-

ary (℃)

4.4 4.8 2.9 8.1

7月平均气温

The average temperature in July

(℃)

25.4 23.1 18.6 22.03

无霜期

The frost-free period (d)

254 268.4 201.2 260.5 大于10 ℃积温

Accumulative temperature over 10 degree

℃ (℃) 4 949.1 4

471.3 3

230.9 5

137.03

年降水量

Annual precipitation (mm) 1 086.9 683.9 559.4 1

015.3

日照时数

Annual sunshine time (h) 1 399.8 1

445.4 2

073.6 2

271.6

日照百分率

Annual sunshine percentage (%)

31.7 32.9 46.8 51.5 年平均相对湿度

Average annual relative humidity

(%)

73.2 65.1 51.8 64.3

1.2DNA的提取

采用核沉淀法(总DNA制备法), 方法如下: 采摘10～15株同一母树实生苗幼叶混合样5 g, 放入研钵中, 加入3%的PVP40, 加入液氮, 迅速研磨成细粉状; 并迅速将粉末转移至10 ml离心管中, 加入30 μl β-巯基乙醇, 混合均匀后于4 ℃冰箱中放置10～30 min。然后4 ,

℃ 000 r·min–1离心12 min后, 弃上清液。以后步骤及质量检测参照

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陈静和王文江(2004)的方法进行。将纯度符合要求的DNA样品稀释成250 ng·μl–1, 备用。

AFLP分析反应体系参照李文英等(2003)的方法进行, 从56对AFLP引物中筛选出能获得清晰条带、多态性高、反应稳定的4对引物组合(E32/M48、E33/M61、E35/M61、E33/M62)进行AFLP选择性扩增。扩增产物采用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染法检测, 银染参照Bassam 等(1991)方法进行。

1.3数据分析

AFLP扩增产物以0、1统计, 建立由“0、1”组成的原始数据矩阵。对非常清晰, 在相同迁移位置上有带的记为1, 无带的记为0, 形成二元数据。用POPGENE version 1.32 软件计算以下遗传多样性参数: 1)多态带数AP (Number of polymorphic loci)和多态带百分率P(Percentage of polymorphic loci); 2)等位基因平均数A (Average number of alleles per loci); 3)有效等位基因数A e (Effective number of alleles per loci); 4) Nei’s基因多样性指数H (Gene diversity), Shannon信息指数I (Shan-non’s information index); 5) Nei’s遗传距离D (Ge-netic distances)和遗传一致度I N (Genetic identity), 并采用Nei’s遗传一致度I N进行非加权算术平均聚类分析(Unweighted pair group with arithmetic av-erage, UPGMA); 6)应用Nei’s (1973)基因多度法计算遗传分化度G st (The coefficient of gene differen-tiation among populations within species), 其关系式为G st=D st/H T, 其中H T=H s+ D st, H T为总遗传多样性, H s为群体内的遗传多样性, D st为群体间遗传多样性; 7)按照Wright(1951)的方法计算反映基因流强度的群体每代迁移数(N m), 其关系式为: F st=1/(1+4 N m), N m =(1– F st)/4 F st, 在此, F st值等同于G st。参照张富民和葛颂(2002)的方法, 利用ＤＣＦＡ1.1软件和AMOVA version 1.55软件进行分子方差分析(AMOVA), 计算反映群体结构及变化的平方和、均方、方差分量以及遗传距离Фst。

2结果与分析

2.1供试材料的AFLP扩增结果

本试验采用分辨能力强的4对选择性扩增引物, 分别对供试材料的基因组DNA进行扩增, 共扩增出244条带, 其中多态性条带146条。平均每对引物扩增的总带数为61条, 多态性位点百分率为59.84%(表2)。图1为引物E35/M61对46个样品的扩增结果。

表2 AFLP选择性扩增引物产生的条带多态性

Table 2 Polymorphism of AFLP bands obtained by selective amplification based on the four primer-combinations

引物组合Primer pairs

总条带数

Total number of AFLP bands

带长范围

Range of band (bp)

多态性带

No. of polymorphic bands

多态百分率

Percentage of polymorphic

bands (%)

E32/M48

E33/M61

E35/M61

E33/M62

合计 Total 平均 Average 74

244

1 700~80

1 650~75

1 850~60

1 700~60

146

36.5

56.75

58.33

64.91

59.84

AFLP扩增片段在不同群体中出现的频率有差异, 如位点E32/M48-780在POP1中基因频率为1, 而在POP2、POP3、POP4中的基因频率分别为0.537 1、0.5和0.354 5; E33/M62-1010在POP4的基因频率为1, 而其余均为0; 又如E33/M62-240在POP1, POP4的基因频率为1, 而其余两个群体均为0。根据不同群体在同一位点频率的差异, 统计了4个群体的特有带数及群体间共有带数。由表3可以看出4个群体所具有的特有扩增带(37条)占总带数的15.16%, 4个群体的共有带为207, 占总带数的84.84%, 群体特异带及群体间共有带的不同提示了各群体间的遗传差异及遗传相似性(李文英等, 2003), 可以为核桃种质资源的种属鉴定及利用提供依据。

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图1 利用E35/M61引物组合对野生核桃与铁核桃的AFLP扩增图谱

Fig. 1 AFLP fingerprinting patterns of Juglans regia and J. sigillata using the primer combination E35/M61 样品9~20为铁核桃样品, 其余为核桃样品No. 9-20 are individuals of J. sigillata; Rest are J. regia detected by AFLP

2.2遗传多样性参数

多态位点百分率(P)是分子标记中应用较为广泛的多样性指标。4个群体的多样性指标及大小关系为POP3 (P = 44.21%) < POP2 (P = 44.26%) < POP1 (P = 47.13%)

Shannon信息指数(I)分析结果显示, 甘南地区(POP3)群体最低, 攀枝花地区(POP4)群体最高, 4个群体的排序为甘南地区群体(POP3 I=0.230 6)﹤秦巴地区群体(POP1 I=0.249 2)﹤大渡河流域群体(POP2I=0.255 9)﹤攀枝花地区群体(POP4 I=0.289 8)。核桃种级水平上的I为0.286 3, 核桃群体内平均I为0.245 2, 群体间的遗传多样性和群体内遗传多样性分别占总遗传多样性的14.36%和85.64%, 群体内遗传多样性大于群体间遗传多样性。从总体上来看,核桃群体组和铁核桃群体I 为0.311 8, 4个群体平均I为0.256 4, 组内遗传多样性和组间遗传多样性分别占82.23%和17.77%, 核桃与铁核桃遗传多样性主要存在于群体组内。

Nei’s基因多样性指数(H)既是衡量种群遗传多样性的重要参数, 又可以通过关系式G st=D st/H T间接估算种群遗传分化系数G st, G st是衡量种群遗传变异最常用的指标, 表示在总的遗传变异中群体间变异所占的比例。本研究结果显示, 甘南地区(POP3)群体H最低, 攀枝花地区(POP4)群体H最高, 4个群体的排序为甘南地区群体(POP3, H=0.154 7)<秦巴地区群体(POP1, H= 0.167 2)<大渡河流域群体(POP2, H=0.175 2)<攀枝花地区群体(POP4, H=0.196 1)。核桃在种级水平上的H T为0.189 6, 群体内的H S为0.165 7, 群体间的遗传分化系数G st为0.126, 基因流N m为3.468 1, 即群体间的遗传变异占总变异的12.6%。由此可见, 经AFLP统计结果分析而得出的Shannon信息指数和Nei’s基因多样性指数, 均表明核桃遗传多样性主要存在于群体内。从总体上来看, 核桃

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群体组与铁核桃H T为0.218, 群体组内的H S为0.197 6, 同样说明核桃群体组内的遗传多样性大于组间的遗传多样性; 两者之间的遗传分化系数G st为0.093 5, 核桃群体组内的变异大于组间的变异, 遗传分化较低。

表3 4个群体AFLP特有扩增带统计结果

Table 3 Statistics of the specific AFLP bands of the four populations

只出现在1个群体的谱带为该群体特异带; 同时在2个群体出现的谱带为2个群体共有带, 以此类推 Specific band represents the

only band detected in one population, shared bands between 2 populations representing bands detected simultaneously in 2 populations, and

soon 特有带编号E32/M48-1540表示E32/M48引物产生1 540 bp的谱带, 以此类推The code of the specific band E32/M48-1540 means

a band with length of 1 540 bp produced by amplification using primer E32/M48, and so on.

表4 AFLP检测的核桃、铁核桃4个群体的遗传多样性水平

Table 4 Genetic diversity of the four populations detected by AFLP

群体 Population N AP P A A e H I 野生核桃

Juglans regia

种级水平Species level POP1

POP2

POP3

铁核桃J. sigillata

POP4

合计 In total 34

135

115

108

103

127

146

55.33%

47.13%

44.26%

42.21%

52.05%

59.84%

1.553 3 (0.498 2)

1.471 3 (0.500 2)

1.442 6 (0.497 7)

1.422 1 (0.494 9)

1.520 5 (0.500 6)

1.598 4 (0.491 2)

1.322 9 (0.363 1)

1.288 2 (0.368 4)

1.310 4 (0.389 4)

1.263 5 (0.354 2)

1.339 9 (0.380 4)

1.356 3 (0.370 7)

0.190 8 (0.197 6)

0.167 2 (0.200 2)

0.175 2 (0.210 1)

0.154 7 (0.195 1)

0.196 1 (0.205 9)

0.208 7 (0.200 7)

0.286 3 (0.284 2)

0.249 2 (0.287 2)

0.255 9 (0.300 5)

0.230 6 (0.283 0)

0.289 8 (0.295 5)

0.311 8 (0.286 8)

括号内数值为标准差The value in the bracket is SD N: 样本数Number of samples AP: 多态带数Number of polymorphic loci P: 多态带百分率Percentage of polymorphic loci A: 等位基因平均数Average number of alleles per loci A e: 有效等位基因数 Ef-fective number of alleles per loci H: Nei’s 基因多样性指数 Nei’s gene diversity I: Shannon信息指数 Shannon’s information index

核桃种级水平的AFLP检测表明, 每个位点的等位基因数(A)为1.553 3, 多态位点(P)为55.33%, Shannon信息指数(I)为0.286 3。而在核桃的各个群体水平上, POP 1、POP2、 POP3的A、P、I分别为: 1.471 3、47.13%、0.249 2, 1.442 6、44.26%、0.255 9, 1.422 1、42.21%、0.230 6, 由此

群体Population

特异带数(特有带编号)

(占总位点百分比)

No. of specific bands

(The band code) (Percentage in

the total bands)

2群体共有带数

(占总带数百分比)

No. of shared bands between 2

populations (Percentage in the

total bands)

3群体共有带数

(占总带数百分比)

No. of shared bands among 3 populations

(Percentage in the total bands)

POP1 POP2

POP3 POP4

合计Total E32/M48-1540

E33/M61-1600

E33/M61-380

E33/M62-1380

E33/M62-540

E35/M61-1320

E32/M48-1620 E32/M48-1300

E32/M48-1180 E32/M48-970

E32/M48-540

E33/M61-720 E33/M61-640

E33/M62-1410 E33/M62-980

E33/M62-720 E33/M62-1010

17 (6.97%)

E32/M48-440 (POP2, POP3 shared)

E32/M48-870 (POP2, POP3 shared)

E35/M61-690 (POP3, POP4 shared)

E35/M61-510 (POP1, POP4 shared)

E33/M61-1160 (POP2, POP4 shared)

E33/M62-240 (POP1, POP2 shared)

E33/M62-390 (POP2, POP3 shared)

E33/M62-380 (POP1, POP2 shared)

8 (3.28%)

E32/M48-1650 (POP1, POP2, POP3 shared)

E32/M48-1470 (POP2, POP3, POP4 shared)

E32/M48-630 (POP1, POP3, POP4 shared)

E32/M48-430 (POP1, POP3, POP4 shared)

E32/M48-280 (POP1, POP3, POP4 shared)

E35/M61-1630 (POP1, POP2, POP3 shared)

E35/M61-1170 (POP1, POP3, POP4 shared)

E35/M61-650 (POP1, POP2, POP4 shared)

E33/M62-1330 (POP1, POP3, POP4 shared)

E33/M62-770 (POP1, POP2, POP4 shared)

E33/M62-530 (POP1, POP2, POP3 shared)

E33/M62-450 (POP1, POP2, POP4 shared)

12 (4.92%)

1368 植物生态学报

www. https://www.wendangku.net/doc/ba11866027.html, 32卷

可以看出, 在核桃种级水平上的A 、P 、I 均略高于核桃内部各群体, 而在各群体之间, 这三个指标相差不大。铁核桃群体的遗传变异水平为: P 、A 、A e 、H 分别为52.05%、1.520 5、1.339 9和0.196 1, 铁核桃的AFLP 各项遗传多样性参数与核桃相近, 在DNA 水平检测过程中未发现明显的遗传差异。 2.3 群体遗传变异的AMOVA 分析

群体遗传变异的方差分析(AMOVA)表明(表5), 群体间的p 值均小于0.001, 差异极显著。研究结果表明群体的遗传多样性主要分布于群体内, 占变异成分的88.93%, 而只有11.07%的变异分布于不同群体间; 从种级水平上来看, 核桃群体组

与铁核桃组在种间的遗传变异成分占12.4%, 而在组内占了87.6%。3个不同核桃群体与铁核桃群体两两间的Phist 遗传分化系数(Фst )也不大(表6)。从4个不同群体间的AMOVA 遗传多样性及遗传分化系数Фst 值的比较来看, 秦巴地区群体(POP1)与攀枝花地区群体(POP4)的遗传结构关系最远(Фst 值最大), 大渡河流域群体(POP2)与甘南地区群体(POP3)的遗传结构关系最近(Фst 值最小), 秦巴地区群体(POP1)与大渡河流域群体(POP2)间、秦巴地区群体(POP1)与甘南地区群体(POP3)间的遗传结构关系介于两者间。

表5 运用方差分析(AMOVA)所得结果如下表所示

Table 5 Analysis of molecular variance (AMOVA) of four populations

变异来源 Source of variation 自由度

df 方差 SS 均方差Ms 变异成分 Variance component 变异百分率Percentage of variance component

(%)

Phist 系数 Фst 显著度检测p -value 群体间 Among populations 群体内 Within populations 组间 Among groups 组内 Within groups

3 42 1 44

168.58 977.70284.689 1 061.59

56.19323.27984.68924.127

2.897 2

3.279 3.414 2

4.127

11.07% 88.93% 12.4% 87.6%

0.111 0.124

﹤0.001

表6 两两群体间的Phist 遗传分化系数(Фst )

Table 6 Genetic differentiation of Phist analysis between

pairs of populations (ФSt ) detected by AFLP

POP1 POP2 POP3 POP4 POP2 0.087 4 * POP3 0.081 7 0.0472 *

POP4

0.154 6

0.139 1

0.117 8

两两群体间遗传分化显著性检验p-value 均小于0.001 All of the p-value between two populations is less than 0.001

表7 AFLP 所检测的核桃4个种群间的遗传距离及遗

传一致度

Table 7 Nei’s genetic identity and genetic distance be-tween two populations detected by AFLP

POP1 POP2 POP3 POP4 POP2 0.044 3 * 0.962 5 0.933 7POP3 0.049 1 0.038 2 * 0.934 1POP4

0.069 2

0.068 6

0.068 2

右上三角为为遗传一致度, 左下三角为遗传距离 The upper triplet on the right indicates Nei’s genetic iden-tity and the lower triplet on the left indicates genetic dis-tance

2.4 群体间的遗传一致度和遗传距离以及UPGMA 聚类分析

为了进一步分析群体间的遗传分化程度, 计

算了Nei’s 遗传一致度I N 和遗传距离D , 群体的遗

传一致度在0.933 2～0.962 5之间(表7), 遗传距离在0.038 2～0.069 2之间, 说明群体间的相似程度较高, 遗传距离小。其中, 大渡河流域群体(POP2)与甘南地区群体(POP3)的遗传相似性最高 (0.962 5), 遗传距离最小0.038 2; 秦巴地区群体(POP1)与攀枝花地区群体(POP4)的遗传距离最大(0.069 2), 遗传分化程度最高。根据4个群体间的Nei’s 遗传一致度进行的UPGMA 聚类分析结果显示(见图2) , 从总体上看, 核桃群体(POP1、POP2和POP3)与铁核桃群体(POP4)分开, 秦巴地区群

体(POP1)与攀枝花地区群体(POP4)的遗传距离最大, 大渡河流域群体(POP2)与甘南地区群体(POP3)的遗传距离最小, 秦巴地区群体(POP1)与大渡河流域群体(POP2)间、秦巴地区群体(POP1)与甘南地区群体(POP3)间的遗传距离介于两者间。

6期陈良华等: 用AFLP 技术分析四川核桃资源的遗传多样性 DOI: 10.3773/j.issn.1005-264x.2008.06.017

1369

图2 4个群体基于AFLP 分析的UPGMA 聚类结果

Fig. 2 Dendrogram of UPGMA analysis of the four

populations of Juglans regia and J. sigillata based on AFLP makers

3 讨论与结论

3.1 核桃与铁核桃种属关系探讨

核桃和铁核桃是四川省核桃属主要的两个种, 核桃与铁核桃种属分类鉴定经历了由形态学、细胞学到同功酶及分子标记分类鉴定过程, 匡可任和路安民(1979)根据形态学等特征, 将铁核桃作为核桃属的1个种, 归为核桃组Sect. Jug-lans ; 杨自湘和奚声珂(1989)通过同功酶酶谱分析认为两者之间主要酶谱均为第1种酶谱, 由此推断铁核桃与核桃生态型平行, 不宜划为另一个种; 吴燕民等(2000b)运用RAPD 技术对核桃属内9个种及近缘属的2个种进行标记, 找到了铁核桃自身特征性标记带OPA01-259, 认为铁核桃为核桃属中一个独立种; 梅秀英等(1998)通过对核桃与铁核桃包括角质层厚度等6项叶片旱生结构指标的方差分析表明, 每项指标差异极显著, 这说明铁核桃形成了对干旱干热河谷的适应性; Orel 等(2003)通过对核桃与铁核桃的叶绿体DNA 的研究表明, 两者显示出了非常近的亲缘关系。种群特异带及种群间共有带的差异与分布揭示了各群体的遗传差异及相似性, 总的说来, 种群遗传分化越大, 在AFLP 分子标记中群体在酶切位点上的变异就越大, 具有的特有谱带更多, 本研究对4个种群AFLP 扩增特异性谱带及种群间共有谱带进行了统计, 铁核桃种群的特异性带最多(11条, 占总带数的4.5%), 铁核桃种群与3个核桃群体之间的遗传变异显然要比核桃内部群体之间的遗传变异高, 这与分子方差分析的结果相一致。但从种级水平来看, AFLP 检测过程中也没有发现明显的遗传差异, 与郝艳宾等(2006)的实验检测过程

中发现“核桃与铁核桃共享条带多, 差异不明显”的实验结果一致, 所以本试验得出的结论更支持杨自湘和奚声珂(1989)的观点, 认为铁核桃不宜划为另一个种。 3.2 遗传多样性

从核桃3个群体AFLP 检测结果来看, 用4对引物共扩增多态性条带135条, 平均每对引物检

测到33.75条多态性条带, 多态性条带比率(P )为

55.33%, 而对于铁核桃群体, 4对引物所检测的多

态性条带为127条, 平均每对引物检测到31.75, 多态性条带比率为52.05%, 两者之间多态性比例

基本相当; 本研究结果显示核桃及铁核桃遗传多样性较丰富, 核桃3个种群的Shannon 多样性指数(I )和平均Nei’s 遗传多样性(H )分别在0.230 6～0.255 9之间和0.154 7～0.175 2之间, 而铁核桃种群分别为0.289 8和0.196 1, 铁核桃群体的遗传多样性略高于核桃群体; 陈少瑜等(2006)、Nicese 等(1998)和Bayazit 等(2007)研究的核桃遗传多样性百分率分别为60.78%、25%和10%, 与之相比, 本研究的多态性百分率较高; 与已有研究报道的胡桃科其它物种相比, 如与近缘异属的山核桃属植物山核桃(Carya cathayensis )相比, 郭传友等(2006) 所作山核桃群体的Shannon 多样性指数(I )和平均Nei’s 遗传多样性指数(H )分别为0.199 2~ 0.28和0.129 7~0.205 1, 王正加等(2006) Shannon 多样性指数(I )和Nei’s 遗传多样性指数(H )分别为0.476 1和0.186 5, 从这两项指标来看, 本研究比郭传友所做研究群体的遗传多样性更丰富, 但比王正加的略低。造成遗传多样性水平差异的原因, 可能与本试验材料的取材范围, 群落生态环境(生境多样性、种群的分布格局)差异及核桃与铁核桃特有的生物学特性, 如孤雌生殖、天然杂交亲和力、基因流状况(Nicese et al ., 1998)等有关。 3.3 遗传结构与基因流

从聚类图分析来看, 各种群的亲缘关系与赵安玖等(2004)的生态区划聚类基本一致, 秦巴山种群与大渡河流域种群在地理位置上最近, 自然气候条件也较为一致, 遗传结构关系上非常接近, 而前3个种群均是核桃种群, 聚在了一起; 铁核桃作为另一个种, 在四川多生长在金沙江流域干热河谷地带, 表现出特有的地理生态型, 因此该种群与前三者的亲缘关系最远。

核桃属植物为雌雄花同株异位, 异花授粉,

1370 植物生态学报 www. https://www.wendangku.net/doc/ba11866027.html, 32卷

且为“雌雄异熟”型, 而“雌雄异熟”是异花授粉植物的有利特性, 同时也是核桃具有稳定遗传性的原因之一(郗荣庭和张毅萍, 1992)。群体遗传结构的形成与基因流(N m)密切相关, N m水平一方面可能主要与种子传播方式、地理隔离有关, 另一方面, 群体间的基因流可能由于环境恶化和强烈的人为干扰活动(如采收果实)等造成的生境片段化而降低, 生态环境片段化使各群体在空间上相对隔离, 在个体、种子、花粉等的迁移能力不变的情况下, 隔离距离越大, 群体间的基因流越小, 从而导致群体间的遗传分化增大(周连第等, 2006)。本研究中AFLP标记检测表明核桃遗传多样性主要存在于群体内, 群体间占11.07%, 3个核桃群体间基因流N m为3.47, 说明核桃不同群体间有一定的基因交流, 但是四川省地形复杂, 山体高大, 群体间遗传分化系数(G st=0.126)相对较大; 而从总体上看, 4个群体间的遗传分化系数(G st)为0.165 3, 基因流N m为2.56, Nei的的遗传多样性分析方法与分子方差分析(AMOVA)得出的研究结果一致, 群体内遗传变异大于群体间遗传变异, 这与郭传友等(2006), 王正加等(2006)的研究结论一致。分子方差分析中的Фst相当于遗传分化系数, Wright (1951)认为分化指数介于0～0.05之间说明种群间分化很弱, 0.05～0.15之间表示中等分化, 0.15～0.25之间表示分化大, 大于0.25表明分化极大, 本研究中总的Фst为0.111, 大致说明各种群间属于中等分化, 但是由表6可以看出, 凡是核桃种群之间的遗传分化系数均小于0.1, 而核桃种群与铁核桃种群之间的遗传分化系数Фst均大于0.1, 最大的POP1～POP4之间为0.168, 这两者之间的遗传分化大, 总的说来, 核桃种群与铁核桃种群之间的遗传分化要大于核桃内部种群的分化, 但是核桃种群与铁核桃的分化仅达到中等水平, 这与在DNA检测过程中未发现明显的不一致相符。POP1和POP4, POP2和POP4, POP3和POP4的遗传分化系数(G st)和基因流N m分别为0.131 1和3.314 7, 0.127和3.436 3, 0.134 6和3.21, 可见核桃种群与铁核桃种群间有一定的基因交流, 但是并不频繁, 这可能与核桃存在孤雌生殖现象(郗荣庭和张毅萍, 1992; 高绍棠等, 1999)以及核桃与铁核桃的天然杂交有关。

本实验采用的是混合样品, 它可以作为样品母树的代表, 又可以更准确地代表该地区整个居群的遗传结构及变化(黎裕等, 2003)。对于核桃属植物而言, 花系风媒花, 虽然雌雄花同株, 但雌雄异熟, 多异交(郭传友等, 2006), 与许多开放授粉群体(如野生稻(Oryza meyericana), 玉米(Zea mays))有相似之处(钱韦等, 2000; 黎裕等, 2003), 因为样品母本即为所采母树, 父本则不能确定, 可能是邻近的, 也可能是来至其它地区的基因流, 所以本研究认为混合样品更适合评价该地区种群遗传结构的变化。

综上所述, 首先, 核桃种群与铁核桃种群的AFLP分析可以较好地反映群体遗传结构及群体间的遗传分化, 对于指导核桃种质资源的保护和育种有一定的参考价值; 其次, 在探讨核桃与铁核桃种间关系时, 其种群之间遗传分化不大, DNA检测过程中并没有发现明显的遗传差异, 两者的种属关系值得进一步研究。

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责任编委: 葛颂责任编辑: 李敏

作物种质资源保存现状及发展方向

作物种质资源保存现状及发展方向我国是世界上最古老的农业国之一，，有丰富的栽培和野生植物资源，被认为是栽培植物遗传多样性中心之一。据初步统计，我国重要栽培作物有600 多种，其中粮食作物30 多种，经济作物约90 种，蔬菜120 余种，花卉140 余种，果树约150 种，牧草约50 种，绿肥约20 种。在现有作物中起源于我国或在史前已栽培的有237 种。但由于人口迅速增长等原因，我国农业植物资源遭到严重的人为破坏和侵蚀，如野生稻、野生大豆及小麦近缘野生植物在原生长地已很难找到；外来种侵袭使土生土长的植物物种数减少，加上大量病虫天敌的减少，使作物病虫害加重；农业机械化和良种的大面积推广种植导致了大量地方品种被淘汰。在生产上种植的许多作物的骨干品种种质基础日趋狭窄，存在遗传脆弱性和突发毁灭性病害的隐患。为此，近20 年来，作为拓宽育种遗传基础的源头，种质资源的收集、保存及研究一直受到有关部门的高度重视，并取得令人瞩目的成就。种质资源保存过程中需要使用到的仪器有自动数粒仪。如今，作物种质资源保存利用体系已初步建立，根据作物繁殖方式等生物学特性，实行种质资源原生境保存与非原生境保存相结合的保存策略。原生境保存是指在植物原来的生态环境中建立保护区或保护地，使重要作物野生种及野

生近缘植物就地进行自我繁殖以保存种质。非原生境保存，即将种质保存于该植物原产地以外的地方，包括在低温种质库中进行的种子体保存、在种质圃中的植株保存、在试管苗种质库中的组织培养物保存等。种子保存技术有好多种，如低温储存技术。利用低温种质库保存种子，除贮藏温度较低外，作为种质保存的种子，还须经过生活力检测、干燥脱水、密封包装等一系列入库保存前处理。还有离体种质保存技术，许多植物种质资源无法通过种子贮藏达到资源保存的目的，如椰子、油棕、咖啡等是顽拗型种子，它们或不耐干燥脱水和低温贮藏，或作物不产生种子，这种植物不能采用低温库种子贮藏的方式，只能通过种质圃，以植株或块根、块茎等活体方式在田间保存。它包括试管苗组织培养技术和超低温保存技术。随着人们对种质资源保护的不断认识，国家对种质资源的研究也不断深入，从“七五”以来，作物种质资源收集保存一直被列入国家科技攻关项目，在1984 年建成我国自行设计建设的国家种质库1 号库（后改为国家种质分发交换库），又在在1986 年和1992 年建成了国家长期库和青海复份长期库。可见国家对种质资源保存的重视。通过国家的科技攻关，我国种质资保存技术研究已进入一个新的阶段，在国家库已建立一套先进的管理和种子入库前处理技术。通过系统地研究，解决了各种作物的安全有效干燥条件

核桃仁去皮研究方法

1：优化试剂实验方法 1.1核桃预处理 1.1.1核桃去壳手动去掉核桃木质壳，尽量保证核桃仁大而整。 1.1.2核桃仁去皮将处理好的核桃仁加入到煮沸的去皮剂中进行热汤脱皮处理2min，然后用冷水冲洗，用镊子进一步把核桃仁凹回中的残皮去掉。 1.2陪试剂 1.2.1陪去皮剂用天平称取30g氢氧化钙和10g氢氧化钠，放入100ml烧杯中，加入蒸馏水溶解，玻璃棒搅拌冷却，完全移入500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即可得3：1的氢氧化钙和氢氧化钠的去皮剂。 1.2.2陪防褐变试剂用万分之一天平分别称取0.05g、0.1g、0.15g、0.2g柠檬酸钠，分别倒入50ml小烧杯中，贴上标签，用蒸馏水将其溶解，分别转移到100ml的容量瓶中，蒸馏水定容至刻，即可得到0.05%0.10% 0.15% 0.20%的柠檬酸钠溶液。用万分之一天平分别称取0.005g、0.010g、0.015g、 0.020g抗坏血酸，分别倒入50ml小烧杯中，贴上标签，用蒸馏水将其溶解，分别转移到100ml的容量瓶中，蒸馏水定容至刻，即可得到0.005% 0.010% 0.015% 0.020%的抗坏血酸溶液。用万分之一天平分别称取0.005g、0.010g、0.015g、 0.020g亚硫酸氢钠，分别倒入50ml小烧杯中，贴上标签，用蒸馏水将其溶解，分别转移到100ml的容量瓶中，蒸馏水定容至刻，即可得到0.005% 0.010% 0.015% 0.020%的亚硫酸氢钠溶液。用万分之一天平分别称取0.005g、0.010g、0.015g、 0.020g抗坏血酸和0.05g、0.1g、0.15g、0.2g柠檬酸钠，分别倒入50ml小烧杯中，贴上标签，用蒸馏水将其溶解，分别转移到100ml的容量瓶中，蒸馏水定容至刻，即可得到0.05% 0.10% 0.15% 0.20%的柠檬酸钠和0.005% 0.010% 0.015% 0.020%的抗坏血酸的10：1混合溶液。

广西地方稻种资源核心种质构建和遗传多样性分析

李丹婷等：广西地方稻种资源核心种质构建和遗传多样性分析９７ＪＩＩ、融安、融水、罗城、天峨、隆林、西林、靖西、德保、那坡和桂林市郊区１７个县市；高寒山区稻作区包括龙胜、资源、三江、金秀、南丹、乐业和融水县部分山区北部海拔在５００ｍ以上的稻田（图１）。表２３４对ＳＳＲ标记所在的染色体及在４１４份广西地方稻核心种质中的遗传多样性信息Ｔａｂｌｅ２Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｌｏｃａｔｉｏｎ，ｎｕｍｂｅｒｏｆａｌｌｅｌｅｓ（Ｎａ），ａｎｄＮｅｉ’ｓｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｈ）ｉｎｄｅｘａｔ３４ＳＳＲｌｏｃｉｉｎ４１４ＧｕａｎｇｘｉｌａｎｄｒａｃｅｒｉｃｅｃｏｒｅｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎＲＭ９ＲＭｌ２８ＲＭ２６２ＲＭｌ０６ＲＭ２４０ＲＭｌ７５ＲＭｌ６ＲＭ４７１ＲＭ２７３ＲＭｌ５３ＲＭｌ６９ＲＭ３０５ＲＭ２７４ＲＭ５８６ＲＭ３１４ＲＭ３０ＲＭｌｌＲＭ３８２６ＲＭ２３４ＲＭｌ３４ＲＭ４０８ＲＭｌ２７０ＲＭ２８４ＲＭｌ０５ＲＭ４３４ＲＭ２０１ＲＭ２０５ＲＭ２１６ＲＭ８２０１ＲＭ４６７ＲＭ６９０１ＲＭ２０６ＲＭｌ９０．７３３２０．５８６９Ｏ．６５５４０．４８８３０．７５３２０．８００４Ｏ．５７３８Ｏ．６３０９Ｏ．０５４２０．５４９０Ｏ．７１４２０．３０４９０．１７４６Ｏ．６１５４０．５６１００．５３４６０．３２９９０．５９９９０．５０９４０．１７６００．６５０７０．２８２３Ｏ．６５２００．４８６７０．６７２１Ｏ．６５２７Ｏ．４５５６Ｏ．７１８９Ｏ．５２４４０．０９７８０．５２０００．８０７５０．５７７６０．７２６９０．６３８５０．６１５６０．４９９００．８０８２０．７５９９０．４３５４０．４４９８０．０７７６０．５６８６０．２７１９０．４２８５０．４３８１０．５７３４Ｏ．２４３００．１４１６０．４４５６Ｏ．５９７３Ｏ．６６３５０．４６１２０．５７９２０．４５９２０．７６４０Ｏ．５９１６０．５３３２Ｏ．６５８４０．３６０９０．６２３５Ｏ．６９７５Ｏ．６９６５０．４６２６０．８３４３０．６８３１Ｏ．７３９３０．６０７１０．７０７６Ｏ．４９１６Ｏ．７８９３Ｏ．７９５３Ｏ．６６６２Ｏ．６６６３０．０５９４０．５６０００．７５４７０．４１６００．２４９７０．６０７５０．５４２９Ｏ．４７６９Ｏ．３６２５０．５９９５Ｏ．６３２３Ｏ．２５８５０．６６１１０．３２５８Ｏ．７２４１０．５５１４０．６８５３０．７３５９０．５７７３０．７４３６０．６４０３０．３０７２０．５３７７０．８２４６０．６６３１墨坚！！！！！！！！：！！！！！：！！！！！：！！ｉ！将四个稻作区的人选初级核心种质资源等位基因数与Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数进行多重比较。如表４，等位基因数最丰富的为桂南稻作区，与桂北稻作区与高寒山区稻区呈显著性差异，与桂中稻作区无显著差异；广西四个稻区的Ｎｅｉ’Ｓ遗传多样性丰富度排序为：桂中＞桂北＞桂南＞高寒山区；但它们之问无显著性差异，说明桂中稻作区地方栽培稻最为丰富，其次是桂北和桂南，最低是高寒山区稻作区。２．３聚类分析及核心种质压缩２．３．１聚类分析对４１４份初级核心种质的ＳＳＲ检测结果进行主成分分析，并利用前三个主成分数据进行ＰＣＡ作图分析。图２显示，核心种质明显分为籼粳两大类群，但仍有少部分籼粳稻分类与表型性状的籼粳稻分类存在差异，这与ＳＳＲ标记表现的是ＤＮＡ水平上的变异，形态性状是环境和ＤＮＡ变异互作的结果有关。籼稻３２５份和粳稻８９份分别占初级核心种质数量的７９％和２１％。籼早型稻和籼晚型稻分别占籼稻总量的３０％和７０％，粳稻８９份全部为晚稻类型，无粳早型稻。籼稻中以粘稻为主，粘稻占７９％，而粳稻中却以糯稻为主，粘稻仅占２２％。陆稻比例在初级核心种质中占比例较小，为２２％。糯稻占初级核心种质的３３％，籼型糯稻与粳８４８２９８５６３４５２３３４６４４７４３４６３６５６４４４６８５７４６２７７５５３４４２３３４４３４５４３４６３４５３４４４４８５７４７２９８５６３４５２３３３６４４７４３４６３６５６４４３６８４１１２２２３３４４５５５５６６６７７７７８８８９９９９ｍ№加ｕｎ他

核桃仁的23种吃法精编版

核桃仁的23种吃法原料：黑芝麻100克，核桃肉100克，蜂蜜200克。制作：将黑芝麻、核桃肉先用文火炒黄（切忌炒焦），凉后一同研碎，放于器皿内。加入蜂蜜调成糊状即可服用。用法：每次服2匙，每日服2-3次。效用：散结，宽肠，下气，用于便秘等症。五仁粥原料：芝麻、松子仁、胡桃仁、桃仁（去皮、尖，炒）、甜杏仁各10克，粳米200克。制作：将五仁混和碾碎，入粳米共煮稀粥。用法：食用时，加白糖适量，每日早、晚服用。效用：滋养肝肾，润燥滑肠。适用于中老年气血亏虚引起的习惯性便秘。健脑粥原料：粳米100克，核桃仁25克，干百合10克，黑芝麻20克。制作：粳米用水淘净，与核桃仁、干百合、黑芝麻一起放入沙锅中，加水用小火炖煮，熟透成粥即可用法：每食适量。效用：补虚滋阴，健脑益智。核桃仁炖牛血核桃仁做法2：原料：核桃肉100-150克，蚕蛹（略炒过）50克。制作：将核桃肉与蚕蛹同放盅中，隔水炖熟。用法：隔日1次。效用：补脾益肾。适用于阳痿、滑精、小儿疳积、胃下垂等。猪腰核桃核桃仁做法3：原料：核桃仁50克，大米100克。

制作：将核桃仁捣碎后和大米一起下锅，加水适量煮成粥。用法：当早餐食用。效用：健脑补肾，养血益智。核桃酪原料：核桃仁150克，大米60克，小枣45克，白糖240克制作：核桃仁用开水稍泡片刻，剥去外皮，用刀切碎，同淘净的大米用500毫升清水泡上。小枣洗净，上笼蒸熟，取出，去掉皮核，也和核桃仁泡在一起。将核桃仁、大米、小枣一同用石磨磨成细浆，用洁布过滤去渣。锅洗净，上火，注入清水500毫升，把核桃仁浆倒入锅内，搅动，在即将烧开时，加入白糖（锅不能大开），待煮熟后即成。用法：可供早晚作点心食用。效用：补肾助阳，养血补肺。适用于腰膝冷痛、小便频数、健忘，健康人食用更能增强记忆力、消除疲劳、防病延年，并有防癌作用。芝麻核桃蜜核桃仁做法4：原料：桃仁12克，鲜牛血（已凝固者）200克，食盐少许。制作：将已经凝固的牛血切块，与桃仁、食盐同置锅中，加水适量，煮至血熟，取血食之。用法：每日1次，佐餐用。连服5-7天。效用：养血活血，止痛。适用于正气不足、瘀血内阻所致的痛经。核桃芡实粥原料：胡桃仁30克，芡实30克，粳米50克。制作：将以上三味入锅，煮成粥即可。用法：每晚温热服食。效用：补脾肾，填精益智，主治脾肾两虚之健忘。脾肾两虚、智力日渐减退者常食效果更佳。乌发粥核桃仁做法4：原料：核桃仁250克，黑芝麻250克，红糖500克。制作：1、将红糖放入铝锅内，加水适量，用武火烧开，移文火上煎熬至稠厚时，加炒香的黑芝麻、核桃仁搅拌均匀，停火即成乌发糖。2、将乌发糖倒入涂有熟菜油的搪瓷盘中摊平、晾凉，用刀划成小埠，装糖盒内备用。

谷子遗传资源多样性研究进展_杨天育

西北农业学报　2003,12(1):43～47 Acta Agricultur ae Bo r ea li-occidentalis Sinica 谷子遗传资源多样性研究进展杨天育1,2,黄相国1,何继红2,沈裕琥1,吴国忠2 (1.中科院西北高原生物所,西宁　810001; 2.甘肃省农科院粮作所,兰州　730070) 摘　要:谷子形态水平、染色体水平、生化水平及DN A水平上遗传多样性的研究进展表明,谷子在不同生态环境下栽培,适应性结果导致了形态学性状和农艺性状的较大变异;染色体核型和带型的分析显示不同谷子品种在核型组成、核型分类方面存在分化;生化水平上,谷子的品质含量表现了丰富的多样性,蛋白质标记的指纹图谱也存在一定的差异;分子水平上,谷子种内存在一定的遗传多样性,分子标记是研究谷子遗传差异最有效方法。本文也对谷子育种如何有效利用遗传多样性研究的信息进行了探讨。关键词:谷子;遗传多样性中图分类号:S515 文献标识码:A 文章编号:1004-1389(2003)01-0043-05 Advance in Diversity of Genetic Resource of Foxtail Millet Y AN G Tian-yu1,2,HU AN G Xiang-guo1,HE J i-hong2, S HEN Yu-hu1,W U Guo-zho ng2 (1.Northw es t Plateau Institute of Biology,Academia Sinica,Xining　810001,China; 2.Crop Institute of Gans u Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou　730070,China) Abstract:In this paper,study adv ances in genetic div ersity o f fox tall millet w ere summ arized from different aspects co ncluding m orpho log y,chrom oso me,biochemistry and DN A.Results show ed that there w ere la rg e v ariatio n in mo rphologic and ag rono mic cha racters with cultiv ating in different eco-logical enviro nm ents,there were differentiatio n in chrom oso me analysis,there w ere diversity in quali-ty and pro tein fingerprint,there were also div ersity in DN A and DN A analysis w as the m ost available m ethod in g enetic div ersity study.In the paper,some problems how to use the info rmation o f study o n genetic div ersity in fo x tail millet breeding were also a nalysed. Key words:Fox tail millet;Genetic div ersity 遗传多样性,狭义地是指种内的遗传变异,它是作物遗传改良的基础,要选育产量高、品质优、抗性强、适应性广的农作物优良品种,必须要有丰富的基础材料和亲本资源。因此,加强对资源材料的鉴定和遗传多样性的研究及评价,有利于育种工作者深入了解种质资源的全貌,开阔育种取材的思路,从而正确地选择利用资源材料。谷子是我国北方地区重要的粮食作物之一,由于其抗旱耐瘠、稳产丰产、营养丰富等特点,成为具有区位优势和比较优势的小杂粮作物,在我国北方旱作农业和食品消费多元化需求方面占有重要地位。了解谷子遗传资源多样性的研究进展,对于了解谷子种内遗传变异的大小、时空分布及其与环境的关系,加深对谷子进化和分类的认识,尤其对于确定谷子育种方案进行遗传改良都有重要意义。本文从谷子形态水平、染色体水平、生化水平及DN A水平上介绍了谷子遗传多样性的研究进展,并对谷子育种工作如何有效利用遗传多样性的研收稿日期:2002-08-24 基金项目:甘肃省自然科学基金项目(ZS011-Α25-038-N)资助。作者简介:杨天育(1968-),男,副研究员,硕士,主要从事谷子遗传育种研究工作。电话:(0931)7618917。E-mail:yang1968 tian10yu@https://www.wendangku.net/doc/ba11866027.html,.

核桃仁的23种吃法

核桃仁的23种吃法 □作者：天府饮食网‖来源：天府饮食网2010-04-18 11:32:18核桃仁做法1：原料：黑芝麻100克，核桃肉100克，蜂蜜200克。制作：将黑芝麻、核桃肉先用文火炒黄（切忌炒焦），凉后一同研碎，放于器皿内。加入蜂蜜调成糊状即可服用。用法：每次服2匙，每日服2-3次。效用：散结，宽肠，下气，用于便秘等症。五仁粥原料：芝麻、松子仁、胡桃仁、桃仁（去皮、尖，炒）、甜杏仁各10克，粳米200克。制作：将五仁混和碾碎，入粳米共煮稀粥。用法：食用时，加白糖适量，每日早、晚服用。效用：滋养肝肾，润燥滑肠。适用于中老年气血亏虚引起的习惯性便秘。健脑粥原料：粳米100克，核桃仁25克，干百合10克，黑芝麻20克。制作：粳米用水淘净，与核桃仁、干百合、黑芝麻一起放入沙锅中，加水用小火炖煮，熟透成粥即可用法：每食适量。效用：补虚滋阴，健脑益智。核桃仁炖牛血核桃仁做法2：原料：核桃肉100-150克，蚕蛹（略炒过）50克。制作：将核桃肉与蚕蛹同放盅中，隔水炖熟。用法：隔日1次。效用：补脾益肾。适用于阳痿、滑精、小儿疳积、胃下垂等。猪腰核桃核桃仁做法3：

原料：核桃仁50克，大米100克。制作：将核桃仁捣碎后和大米一起下锅，加水适量煮成粥。用法：当早餐食用。效用：健脑补肾，养血益智。核桃酪原料：核桃仁150克，大米60克，小枣45克，白糖240克制作：核桃仁用开水稍泡片刻，剥去外皮，用刀切碎，同淘净的大米用500毫升清水泡上。小枣洗净，上笼蒸熟，取出，去掉皮核，也和核桃仁泡在一起。将核桃仁、大米、小枣一同用石磨磨成细浆，用洁布过滤去渣。锅洗净，上火，注入清水500毫升，把核桃仁浆倒入锅内，搅动，在即将烧开时，加入白糖（锅不能大开），待煮熟后即成。用法：可供早晚作点心食用。效用：补肾助阳，养血补肺。适用于腰膝冷痛、小便频数、健忘，健康人食用更能增强记忆力、消除疲劳、防病延年，并有防癌作用。芝麻核桃蜜核桃仁做法4：原料：桃仁12克，鲜牛血（已凝固者）200克，食盐少许。制作：将已经凝固的牛血切块，与桃仁、食盐同置锅中，加水适量，煮至血熟，取血食之。用法：每日1次，佐餐用。连服5-7天。效用：养血活血，止痛。适用于正气不足、瘀血内阻所致的痛经。核桃芡实粥原料：胡桃仁30克，芡实30克，粳米50克。制作：将以上三味入锅，煮成粥即可。用法：每晚温热服食。效用：补脾肾，填精益智，主治脾肾两虚之健忘。脾肾两虚、智力日渐减退者常食效果更佳。乌发粥核桃仁做法4：原料：核桃仁250克，黑芝麻250克，红糖500克。制作：1、将红糖放入铝锅内，加水适量，用武火烧开，移文火上煎熬至稠厚时，加炒香的

核桃优良品种简介

二、主要良种核桃简介我国各地有记载的品种和类型约有500余个,按其来源,结实早晚,核壳厚薄和出仁率高低等,将其划分为2个种群,2大类型和4个品种群。我国各地有记载的品种和类型约有500余个。按其来源、结实早晚、核壳厚薄和出仁率高低等，将其划分为2个种群、2大类型和4个品种群。首先按来源将核桃品种分为核桃和铁核桃(漾濞核桃)两大种群;每个种群再按开始结果早晚分为早实类型,晚实类型两大类群;最后再按核壳厚薄等经济形状将每个类群划分为纸皮核桃,薄壳核桃,中壳核桃,厚壳核桃,4个品种群. 我国核桃栽培历史悠久，品种较杂，各地选育的良种约40余种，经林业科研单位栽植试验，在我市表现较好的有以下品种：（一）、早实品种 1香铃树势中庸，树姿直立树冠半圆形，分枝力较强。雄先型，中熟品种。该品种适应性强，盛果期产量较高，大小年不明显。坚果光滑美观，品质上等，尤宜带壳销售或作生食用。较抗寒、耐旱，抗病性较差。适宜在山丘土层较深厚和平原林粮间作。 2鲁光山东省果树研究所杂交育成的早实核桃良种。果型大，外观美，坚果品质上等。树势较强是其优点。坚果圆球形，平均单果重14.9-18.5g，每千克60~70个，壳厚0.8 -1.0毫米，出仁率56.2%-62.0%。种仁饱满，内种皮无涩味，脂肪含量66.4%，蛋白质

含量19.9%。雄先型品种、以中、长枝结果为主，多双果，侧芽结果率达80.8%。果实8月下旬成熟。 3 中林5号树势中庸，树姿较开张，树冠长椭圆至圆头形，分枝力较强。枝条节间短而粗，丰产性好。雌先型，早熟品种。该品种适应性强，特丰产，品质优良，核壳较薄，不耐挤压，贮藏运输时注意包装。适宜密植栽培。 4 辽宁3号树势中庸，树姿开张，树冠半圆形，分枝力强，枝条多密集。抗病、抗风性强。雄先型，，中晚熟品种。核仁饱满，浅黄色，味佳。该品种树势中等，果枝率及坐果率高，抗病性很强，适宜在我国北方栽培。 5 辽宁4号树势中庸，树姿直立或半张开，，树冠头圆，分枝力强。雄先型，晚熟品种。核仁充实饱满，白黄色，风味好，品质佳。该品种果枝率及坐果率高，连续丰产性强。坚果品质优良。适应性强，抗寒、耐旱，适宜在北方栽培。 6 西扶1号树势中庸，树姿较开张，树冠圆头形，分枝力中等，丰产性及抗病性均强。雄先型，晚熟品种。核仁充实饱满，味甜香，易取仁。该品种适应性强，早期丰产性强，有较强的抗性，适宜在华北、西北及秦巴山区等地栽培。 7西林2号树势强健，树姿开张，树冠呈自然开心形，分枝力强，节间短。雄先型，早熟品种。核仁充实饱满，呈乳黄色，脆而甜香，易取仁。该品种生长势强，早实丰产，适应性较强。坚果个大均匀，品质优良，宜做生食。适宜华北、西北及平原地区栽培。

动物遗传多样性保护的意义

动物遗传多样性保护的意义随着时空的演变，社会经济和科学技术的飞速发展，特别是改革开放以来，我国畜牧生产持续20年的快速增长，畜牧业生产的集约化、规模化程度越来越高，为了适应这种生产模式，培育和引进了大量品种，少数培育和引进品种在生产中占了主导地位，使我国畜禽遗传资源发生了一定的变化。外来品种的侵蚀和生境条件的恶化，我国畜禽遗传多样性的保护正受到巨大的压力，遗传多样性迅速缩小的趋势以致消失的严重现实。目前34%的牛，71%的猪，44%的马驴，20%的家禽，15%的绵羊等遗传资源受到不同程度的威胁。无论是从保护我国古老文明遗产和保护畜禽遗传资源特有基因，还是保存满足未来需求基因的角度，我国特有动物（畜禽）遗传多样性的保护都是一项紧迫的工作，具有十分重要的经济、科学和历史文化意义。 1.保护动物遗传资源多样性，实现可持续发展战略动物遗传资源多样性具有不可再生性，一旦丧失，就很难恢复。目前，180多个国家和地区在《生物多样性公约》签字，说明了动物遗传资源多样性是维持人类生存的物质基础，是实现可持续发展战略资源；随着社会经济的发展，难以预测未来变化的性质和程度，人类社会对动物产品的消费将提出新的要求。因此，仅凭少数畜禽品种维系的畜牧业不可能持续发展，只有保持畜禽品种遗传的多样性，才能满足人类社会经济和自然发展的需要。 2.培育畜禽新品种，有利于提高畜牧生产水平，具有重要的经

济意义畜禽良种是建设现代畜牧业，提高畜产品市场竞争力的基础。畜禽良种的培育依赖于畜禽遗传资源的优良基因。现代畜牧生产表明，畜禽遗传资源对食物和农业的贡献率达30%～40%。目前，生产上普遍使用的少数畜禽品种是人工培育和改良的品种，通常是使用闭锁繁育、级进杂交，高强度的人工选择而形成，都是为了满足目前人类生产的需要，使某些有利基因纯化程度较高，而控制其它性状的未知基因消失殆尽，特别是随着人工授精、胚胎移植等技术的广泛应用，只有数量很有限的公畜在繁殖后代，导致遗传背景贫乏，使畜禽遗传基础越来越窄，品种进一步改进的潜力减小。 3.科学研究意义生物在发展和繁衍后代的过程中，其遗传信息DNA能准确地复制并传递给后代，以保持遗传性状的相对稳定。遗传多样性的存在是自然选择和生物体自发突变动态平衡的结果，对于一个生物群体（种、亚种）在时间上是延续不断的，才是进化的基本单位，随着遗传变异的不断积累，遗传多样性不断得到丰富，遗传多样性变异越丰富，群体对环境变化的适应能力越强，进化潜力越大。大量研究表明，生物群体遗传变异的大小与其进化速率成正比。因此，保护生物遗传多样性对于合理而有效的利用生物资源以及保护生物遗传资源具有十分重要的现实意义。 4.历史、文化和美学意义动物遗传资源是伴随着人类文明发展史——动物驯化史和自然选择双重作用的结果，是人类的科学文化遗产，祖先留下的宝贵财富。我国地域辽阔、气候类型多样、地貌类型丰富，西南部有青藏高原的隆起，为各种生物种类的产生和繁衍提供

核桃去皮方法

最新核桃仁去皮技术最新核桃仁去皮技术核桃仁去皮后有着有很高的营养价值，所以一直以来都是人们最喜爱的干果之一。核桃主要产自我国的西部、西南及西北地区。又称胡桃、羌桃，与扁桃、腰果、榛子并称为世界著名的“四大干果”。既可生食、炒食，也可以榨油、配制糕点、糖果等，不仅味美，而且营养价值也很高，被誉为“万岁子”、“长寿果”。去皮后的核桃仁含有丰富的维生素B和E，可防止细胞老化，能分健脑、增强记忆力及延缓衰老。核桃仁含有大量维生素E和亚麻油酸，是人体理想的肌肤美容剂，经常食用有润肌肤、乌须发的作用。当感到疲劳时，嚼些核桃仁，有缓解疲劳和压力的作用。核桃仁去皮后还有着补肾固精、润肠通便、壮实身体的保健养生价值。核桃仁有如此高的营养价值，固成为人们一向比较喜爱的干果。但核桃不仅有层坚硬的外壳，还有层涩涩的种皮，大多数人不喜欢这层涩涩的味道，完全改变了核桃仁的美味。核桃仁脱皮一向成为人们比较头疼的事情。因为核桃仁这层涩涩的种皮，不仅薄而且和果肉紧密结合。传统的核桃仁脱皮技术采用高温冷冻等物理处理方法，然后再手工脱皮，劳动强度大，效果差。现在我们就给大家介绍一种非常实用核桃仁脱皮技术，帮你轻松去掉核桃仁种皮，在这简要给大家介绍一下，我们采用一种无毒无害生物化学的脱衣技术，教你轻松去除核桃仁种皮。 1.本项技术的摘要：核桃仁去皮技术是一种无毒无害生物化学的脱衣技术，通过试剂的配制，在不影响核桃仁原有营养成分的基础上，去掉了外衣的苦涩味并保证了核桃大人的完整性。 2.本项技术与传统核桃仁去皮技术相比的优点：与传统的手工剥皮方法相比，手工核桃仁去皮的方法可以是少、慢、差、费，该技术是多、快、好、生.而且手工剥皮人工费用高，劳动强度大，效果差，每人每天最多只能剥5公斤，但采用此种核桃仁脱皮技术人工少，1-2人即可操作，每天至少脱衣上千斤，而且脱皮率达到99%，完整率达99%。不破坏核桃内在品质、营养成分保持不变，不烂，不碎，不损坏外形，完整率高，且消毒杀菌。脱衣后色泽成象牙色，完成可以提供保质保量的出口产品。 3.核桃仁去皮技术的脱皮原理分析：

优良核桃品种简介

良种核桃一、【品种名称】：香玲【品种类型】：属雄先型，早、中熟品种【果实性状】：坚果光滑美观，品质上等，尤宜带壳销售或作生食用。坚果卵圆形，基部平，果顶微尖。壳面刻沟浅，浅黄色，结合紧密，壳厚1.0-1.1mm，内褶壁退化，横膈膜膜质，易取整仁。【坚果品质】核仁充实饱满，重7.8克，出仁率65.4%。种仁脂肪含量65.48%，蛋白质含量21.63%。碳水化合物9.8%，Vb1 0.5mg ，Vb2 0.08mg ，核仁乳黄色，味香而不涩。【果树性状】：树势较旺，树姿较直立，树冠半圆形，分枝力较强。树体中等大小，树姿半开张，幼树时生长较旺，结果后树势稳定。高接树第二年开花结果，坐果率85%以上。新栽植的嫁接苗第二年开花株率60%以上，第三年开花株率100%，盛果期亩产300-400公斤。4月上旬萌芽展叶，中旬雄花盛期，4月中、下旬雌花盛期，9月中旬果实成熟，11月初落叶。在土层薄、干旱地区和结实量太多时，坚果变小。【品种优势】：丰产性强的品种，有大小年但不明显，该品种开花晚，抗晚霜，抗旱耐瘠薄，对土壤要求不严，适宜在山丘土层较深厚和平原林粮间作栽培。可以上山下滩，对炭疽病、黑斑病及干旱、干热风的抵御能力很强，在华北、西北、西南、东北南部均可大面积发展。【香玲核桃苗栽培习性】：香玲核桃品种分枝力较强，枝条髓心小。混合芽近圆形，大而离生，有芽座。侧生混合芽比率81.7%，香玲核桃品种雌花多双生，坐果率60%。结果早，香玲核桃嫁接成活率高，香玲核桃嫁接后第二年开始结果，3～4年出现雄花，雄先型，香玲核桃品种有大小年。适宜树形为主干疏层形，修剪上应注意下垂枝和结果母枝的回缩处理。果粮间作适宜密度为4米×8米，园艺栽培适宜密度为4米×4米。3月下旬发芽，雄花期4月中旬，雌花期4月下旬。香玲核桃8月下旬坚果成熟，适宜在土肥水条件较好的青石山区栽培香玲核桃苗。

遗传多样性与起源研究

西北农林科技大学 2009级硕博连读研究生学位论文开题报告黄牛、水牛和牦牛Y染色体分子遗传多样性与起源研究Y-chromosome Molecular Genetic Diversity and Origins in Cattle, Buffalo and Yak 学院：动物科技学院学科、专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：动物遗传学研究生：XX 指导教师：雷初朝教授

黄牛、水牛和牦牛Y染色体分子遗传多样性与起源研究一、选题的目的与意义黄牛、水牛和牦牛是我国3个重要的牛种，具有对周围环境的高度适应性、耐粗放管理、抗病力强、繁殖力高、肉质好等特点。这些地方牛种本身就是一座天然的基因库，正是进行杂种优势利用和进一步培育高产品种的良好原始材料。在当今世界畜禽品种资源日趋匮乏，品种逐步单一化的情况下，对我国这些牛种遗传资源的保护将对今后的育种工作产生很大的影响，起到难以估量的作用[1]。中国黄牛的起源进化与遗传多样性一直是国内外动物遗传学家感兴趣的课题之一。一般认为，中国黄牛是多元起源的，并主要受普通牛和瘤牛的影响，但究竟起源于哪几个牛种，观点不一[2, 3]。在黄牛遗传多样性方面，自二十世纪八十年代以来，众多研究者分析了中国地方黄牛的核型，发现不同黄牛品种的Y 染色体形态具有明显的多态性，普通牛为中着丝粒或亚中着丝粒，瘤牛为近端着丝粒[4-6]。常振华等发现中国黄牛Y染色体主要属于Y2（普通牛）和Y3（瘤牛）单倍群[7]，但事实上黄牛的每种Y染色体单倍群下都可细分为多种单倍型，而中国黄牛由哪些Y染色体单倍型组成，有无优势单倍型以及单倍型的品种分布有无地理特点，与国外黄牛品种有何不同，这些问题都亟待阐明，以期为黄牛品种资源保护和杂交育种工作提供参考依据。中国也拥有丰富的水牛资源。水牛的驯化时间，地点尚无定论，国内一些学者在形态学和考古学方面进行了一些研究，给中国水牛的驯化历史提供了一些参考[8, 9]，但仅靠形态学和考古学的研究是远远不够的，还需要分子遗传学的更多证据。目前国内外对水牛的起源研究主要是在线粒体DNA的母系起源方面，认为水牛有两个母系起源（A支系和B支系）[10-12]，近年来，也有中国学者对水牛的常染色体微卫星多态性进行了研究，其结果都表明中国水牛的遗传多样度丰富，倾向于支持中国水牛的本土起源假说[13, 14]。对Y染色体遗传多样性的研究，将提供更多的分子遗传学信息，会有助于评估水牛的遗传资源状况，也有助于阐明中国水牛的驯化历史。牦牛主要分布于我国的青藏高原，俗称“万能种”，通常皆为兼用，如乳、肉、毛、皮、役力，是经济价值极高的珍贵畜种[1]。家牦牛是在青藏高原驯化的，藏族自古以来生息于西藏，是驯化牦牛之主，因此牦牛的驯化始终与藏族文化的发展休戚相关，是当地人民不可分离的生产和生活资料[15]。从牦牛生活的特定气候地带的适应性和生态地理、生理特征的表现看，牦牛是地球之巅特有的高寒环境中生存的一个宝贵的特化种，牦牛的驯化与繁衍有着与其他牛种极其不同的种类特点，牦牛对高寒山区的气候和贫瘠的草地所具有的特殊的适应性也是世界

四个最新培育的核桃品种

四个最新培育的核桃品种-园林四个最新培育的核桃品种李好先，赵弟广，张杰，牛娟，张富红，曹尚银（中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009）我国核桃长期以来采用种子繁殖，造成核桃结果晚、产量低、品质良莠不齐，优少劣多，产品优劣混杂（壳厚，取仁难度，核仁品质等均不一致），优质产品只占产量的30%~40%，出口商品常因优劣混杂而严重影响声誉，大大降低了市场竞争力。美国核桃平均亩产高、品质优良，规格整齐，因而近年来占据了国际主要核桃市场。其原因就是因为美国在20世纪70年代就实行了栽培良种化，管理标准化。为了更好地指导我国核桃生产，提高我国核桃的产量、品质和效益，尽快赶上世界发达国家，全面普及核桃栽培良种化、良砧化、标准化，加速新技术、新成果的转化，特介绍如下最新核桃品种。 1 中核短枝由中国农业科学院郑州果树研究所选育而成，2012年通过河南省林木良种品种委员会审定。树冠长椭圆形至圆头形，枝条节间短而粗。一年生枝条绿色，树干灰褐色，皮目小且稀，平均母枝抽生结果枝数2.1个，结果母枝平均长度7.72厘米，粗度0.787厘米，结果枝长6.85 厘米，结果枝粗度0.64 厘米，节间长1.31厘米，每果枝平均坐果1.86个，单枝结果以双果和三果为主。先端叶片较大，长卵圆形，颜色浓绿，小叶数7～9 片，长椭圆形。雌先型，雄花花量中等。果实近圆柱形，较大，果壳较光滑，浅褐色，缝合线较窄而平，结合紧密。果基和果顶较平，平均坚果质量15.1克，壳厚0.9厘米，三径平均4.09厘米，

内褶壁膜质，横隔膜膜质，易取整仁。出仁率65.8％，核仁充实饱满，仁乳黄色，无斑点，纹理不明显，核仁香而不涩，品质上等（图1、2）。在河南省荥阳市3 月下旬萌芽，雌花盛开于4 月15—20 日，雄花盛开期为4月21—22日，果实9月初成熟；果实生育期125 天，10月下旬开始落叶，全年生育期约210天左右。2年生苗定植当年即可开花，4年进入丰产期。高接大树第2年平均每株结果60个，第3年平均株产3.2千克；第4年进入盛果期，平均单株结果450个。适应性强，对黑斑病和炭疽病均有较强的抗性。在河南郑州、洛阳和焦作等地区生长结果情况均表现优良。抗寒、抗旱、抗病、耐瘠薄。 2 极早丰由中国农业科学院郑州果树研究所选育而成，2012年通过河南省林木良种品种委员会审定。自然生长树冠长椭圆形，树姿开张，以短果枝结果为主，占66.7%，每果枝平均坐果1.73个，单枝结果以双果和三果为主。先端叶片较大，长卵圆形，平均长18.5厘米，宽11.9厘米，颜色浓绿，小叶5~9片，长椭圆

中国主要东方蜜蜂种群的遗传多样性分析

中国主要东方蜜蜂种群的遗传多样性分析任勤1，曹联飞2，赵红霞3,，王瑞生1，程尚1，罗文华1,曹兰1，姬聪慧*1 （1.重庆市畜牧科学院，重庆 402460；2.浙江省农业科学院，浙江杭州 310021；3. 广东省生物资源应用研究所，广东广州 510260）摘要：对中国具代表性的东方蜜蜂遗传资源中7个种群的线粒体DNA tRNA leu～ CO Ⅱ基因进行扩增和测序,并进行遗传多样性比较及亲缘关系分析。结果表明，共发现43个单倍型，其中10个单倍型在GenBank数据库对比确认属于新发现单倍型；7个群体中，阿坝中蜂、滇南中蜂和海南中蜂遗传多样性水平较高，长白山中蜂遗传多样性水平较低，其他群体遗传多样性居中；不同种群间遗传距离变化较大，其中海南中蜂与滇南中蜂、阿坝中蜂间的遗传距离最大，长白山中蜂与云贵中蜂、北方中蜂、华南中蜂间的遗传距离最小；聚类分析显示7个种群可聚为4个类群。关键词：东方蜜蜂；遗传多样性；线粒体DNA 中图分类号：文献标志码：A Analysis of genetic diversity of Apis cerana populations in China REN Qin1, CAO Lianfei2,ZHAO Hongxia3,WANG Ruisheng1,CHENG Shang1,LUO Wenhua1,CAO Lan1, JI Conghui*1 （1.Chong Qing Academy of Animal Science，Chongqing 402460，China；2.Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Zhejiang 310021，China; 3.Guangdong Institute of Applied Biological Resources, Guangdong 510260, China） Abstract:The mitochondrial DNA tRNA leu～CO II genes in 7 populations of Apis cerana Fabricius in China were amplified and sequenced, and their genetic diversity and phylogenetic relationships were analyzed. The results showed that a total of 43 haplotypes were identified, of which 10 haplotypes were identified new haplotypes in the GenBank database, Among 7 populations, Aba bee, Hainan bee and Yunnan bee have higher level of genetic diversity, Changbai Mountain bee has lower level of genetic diversity, other populationswere intermediate; The genetic distances between different populations varied greatly, of which Hainan bee andhave maximum genetic distance with Yunnan bee and Aba bee, The genetic distances between Changbai mountain bee and Yunnan bee, Middle China bee, Northern bee and Southern bee were small.; Cluster analysis showed that the 7 populations could be clustered into 4 taxa. Key words:Apis cerana Fabricius; genetic diversity; mitochondrial DNA 收稿日期：基金项目:国家蜂产业技术体系基金项目（CARS-45SYZ15）;重庆市畜牧科学院基金项目(16421). 作者简介：任勤(1979-), 男, 宁夏固原人，助理研究员, 硕士研究生，主要从事蜜蜂方面的研究。通信作者：姬聪慧(1980-)，女，河南平顶山人，助理研究员，硕士研究生。

植物遗传资源的保存与利用研究(一)

植物遗传资源的保存与利用研究(一) 摘要:植物遗传资源是人类赖以生存和发展的物质基础,是人类开展栽培、育种和生物学研究的基础材料。植物遗传资源的保存对生物多样性、生态平衡、农业未来的发展具有十分重要意义。本文主要就利用原生境和非原生境的方式保存植物遗传资源,从高产、优质、抗病虫、抗旱、高肥效等方面进行了系统研究,它对于植物遗传基因的挖掘和利用研究具有一定的参考。关键词:植物遗传资源;保存;利用植物遗传资源是生物多样性的重要组成部分,是地球上极为重要的财富,是人类生存和发展的重要物质基础。作物遗传资源也称种质资源,是具有特定种质或基因,可用于栽培、育种和生物学研究的各种生物类型的总称。长期以来,人类对作物遗传资源的保存缺乏足够的认识和重视,遗传资源流失加速,遗传多样性减少和一致性增强,其后果是导致作物遗传脆弱性和病虫害的暴发而造成农业损失,并影响农业的可持续发展。 1.植物遗传资源保存的紧迫性 1.1人类活动的加剧,加速了植物遗传资源的流失随着人类认识自然、改造自然能力的不断增强,人口增长,对资源的需求增多,特别是对资源不合理的过度开发与利用,加速了作物遗传资源的流失。N.Meuers(1988)估计在过去2亿年间,大约每27年有一种高等植物灭绝,而现在的灭绝速度是自然灭绝速度的1000倍(E.O.Wilson1988)。我国云南景洪原有野生稻分布点26个(1968年),现仅剩1处;江西东乡原有野生稻分布点7～8个(1978年),现仅有2处。这些种质的消失,是难以用任何现代生物技术重新创造的。 1.2遗传多样性的减少,导致遗传脆弱性和病虫害的暴发造成农业损失 20世纪以来,随着新品种的大量推广,少数品种成为优质品种,品种遗传的多样性减少,遗传基础越来越狭窄,现代品种基因的等位性变异愈来愈少。建国初期,我国有1万个小麦品种(主要是农家品种)在种植使用,到20世纪70年代仅存1000个品种。我国育成的小麦品种数百个,其亲本大都离不开14个骨干亲本。贾继增等用分子检测方法证明现代选育品种遗传多样性最差,地方品种较好,野生种遗传多样性最丰富。用RFLP标记在14个普通小麦品种各条染色体的472个位点进行遗传多样性检测,发现283个位点有多态性,其中硬粒小麦与粗山羊草杂交后染色体加倍育成的Synthetic持有等位变异175个,10个品种间杂交育成的品种只有0～7个。美国在过去100年间,玉米品种丧失91%,西红柿品种丧失81%。作物品种单一化和遗传基础狭窄,增加了作物对病虫害抵抗能力的遗传脆弱性。19世纪40年代,爱尔兰马铃薯晚疫病流行,造成200万人移居美国,50万人死亡。 1.3作物遗传资源的保存,关系到农业的可持续发展农业的发展历史,充分证明植物遗传资源在农业发展中具有不可替代的重要作用。洲际引种开创了高产作物引种,使农业总产量提高1倍;石油农业虽使作物产量进一步提高,但也带来了环境污染、作物倒伏等问题的出现。1960年左右小麦、水稻等矮秆基因的开发和利用,标志着第三次农业发展“绿色革命”开始了。杂交水稻之父袁隆平发明的“水稻野败型雄性不育株转育成不育系”,开创了我国“三系”配套杂交水稻生产的新局面。农业未来的发展取决于人类对植物遗传资源的保存和广泛利用,用一种生产效益型、资源节约型、环境保护型、食物安全型的可持续发展农业方式代替传统的农业运作方式。 1.4遗传资源是人类赖以生存和发展的物质基础,应进行科学分析和客观评价对植物遗传资源的科学分析和评价是推广利用的前提,特别是利用现代生物技术从分子水平上研究遗传多样性。随着生产发展,人民生活水平的提高,对品种的要求越来越高,也越来越多,而任何一个品种和类型都不可能具有与社会发展需要完全相适应的性状(基因),必须通过育种途径来实现这一需要。育种工作就是要按人类的意图对植物遗传资源进行加工、改造、选

核桃仁脱种皮技术

核桃仁脱种皮技术摘要：用鲜核桃、半干或干核桃经挑选、脱青皮、去硬壳、干核桃仁复水、脱种皮、保鲜护色、调整含水量、产品类型控制等，可制成甜脆型、鲜脆型、香脆型和浓香型等系列鲜食核桃仁产品。产品保持了核桃仁的营养价值，口感好，无涩味，外观漂亮，无污染，－20℃条件下可保鲜12个月；－5℃条件下货架期20天左右。关键词：鲜食核桃仁；保鲜加工技术我国核桃栽培历史悠久。核桃仁具有很高的营养价值。目前，核桃仁产品都是干品和干核桃仁的加工产品，如干核桃仁、核桃糖制品、核桃炒货制品、核桃仁罐头等。但干核桃仁和诸多加工品在干制和加工过程中核桃仁的营养成分都有不同程度的流失，而且干核桃仁多带皮食用，食之味涩，也影响口感。另外，在加工过程中会添加防腐剂或其他一些食品添加剂，不符合无公害产品的要求。随着人们生活水平的提高和保健意识的增强，核桃仁干品及其加工品已不能满足市场要求，市场迫切需要营养成分流失少、口感好、无公害的鲜核桃仁及其加工产品。因此，笔者进行了鲜食核桃仁系列产品的保鲜加工技术试验，现将试验结果总结如下。 1材料和方法 1.1试验材料与仪器设备试验所用的鲜核桃、半干核桃和核桃干品购自泰安市麻塔村和果品市场。试验设施和设备有冰柜、冷库冻结间、低温冷库、烘箱、不锈钢池、不锈钢桶和真空包装机等。 1.2试验方法 1.2.1鲜核桃加工方法将采摘后的鲜核桃进行挑选，剔除病烂果，用冻融法脱去青皮，去壳，取出核桃仁后脱去种皮，将脱去种皮的核桃仁用不同浓度的维生素c溶液浸泡，进行保鲜护色，将不同成熟度的核桃仁控制其含水量在20％左右，加工成4种不同类型的鲜核桃仁产品，然后进行真空或惰性气体包装，冷冻保鲜至销售。 1.2.2半干带壳核桃加工方法对半干带壳核桃，通过人工或机械方法去壳取仁，挑选好仁，用冻融法脱除核桃仁的种皮，再用不同浓度的维生素c溶液浸泡护色，并对其进行半干品复水，使半干核桃仁的含水量达到鲜核桃仁的含水量要求，最后按鲜核桃仁的要求加工成4种类型的核桃仁产品，进行真空或惰性气体包装，冷冻保鲜直至销售。