当前位置：文档库 › ISO11737初始污染菌翻译版

ISO11737初始污染菌翻译版

医疗器械的灭菌微生物方法第一部分：产品上微生物总数的估计

前言…………·…………………………………………·

引言………………………………··……………………

1范围………………………………………·…………

2规范性引用文件……………………………………-

3术语和定义…………………………··……………··

4总则…·……··………………………………………·

5产品单元的选择……………………………………·

6技术的选择…………………………………………·

7技术选择……………………………………………·

8技术的使用…………··……………………………··

附录A(资料性附录) 产品上微生物总量的估计指南

附录B(资料性附录) 微生物学技术确认方法指南-·

附录c(资料性附录)参考文献………………···……

医疗器械的灭菌微生物学方法

第1部分：产品上微生物总数的估计

1范围

ISO11737的本部分说明了应用于估计医疗器械、半成品或包装上活的微生物总数的一般标

准。这种估计包括两个方面：微生物的计算和定性。

注1：微生物特性的本质和限度以生物负载的预期使用目的为基础。

本部分没有规定计算和鉴定病毒性或原生动物污染的要求。

注2：此外，本部分不用于对海绵状脑病的起因进行切除或检测，如：疯牛病、羊搔痒症及CJD。

本部分不适用于对生产医疗器械的环境中微生物的监控。

2.规范性引用文件

下列文件是应用本部分不可缺少的，中的条款通过GB／T 19973的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其现行版本版适用于本部分，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。ISO10012,测量管理系统.测量方法和测量设备的要求

ISO13485:2003,医疗器械质量管理体系用于法规的要求

ISO/IEC17025:2005,检测和校准实验室资格的一般要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本部分。

3．1

生物负载bioburden

一件产品和／或无菌阻隔系统上存活微生物的总数。

[ISO/TS11139:2006, 定义2.2]

3.2

纠正 Correction

消除已发现的不合格所采取的措施。

注：纠正可连同纠正措施一起实施(3.4).

[ISO9000:2005,定义 3.6.6]

3.3

correction factor 修正系数

补尝从产品和/或培养基上无法完全洗脱的微生物的数值

3.4

纠正措施 corrective action

为消除已发现的不合格或其他不期望情况的原因所采取的措施。

注 2 采取纠正措施是为了防止再发生，而采取预防措施(3.9)是为了防止发生。

注3 纠正(3.2)和纠正措施是有区别的

[ISO/TS11139:2006,定义 2.8]

3.5

培养条件 culture conditions

促进微生物发芽、生长和/或繁殖所采用的生长培养基和培养方法的组合。

注培养方法可包括温度、时间和其他规定用于培养的条件。

[ISO/TS11139:2006,定义2.10]

3.6

设定 establish

通过理论评价确定，并经实验工作证实。

[ISO/TS11139:2006,定义 2.17]

3.7

医疗器械 medical device

制造商的预期用途是为下列一个或多个特定目的用于人类的，不论单独使用或组合使用的仪器、设备、器具、及其、用具、植入物、体外试剂或校准物、软件、材料或其他相似或相关物品。这些目的是：

↓疾病的诊断、预防、监护、治疗或者缓解；

↓损伤的诊断、监护、治疗、缓解或者补偿；

↓解剖或生理过程的研究、替代、调节或者支持；

↓支持或维持生命；

↓妊娠控制；

↓医疗器械的消毒

↓通过对取自人体的样本进行体外检查的方式来提供医疗信息。

其作用于人体体表或体内的主要设计作用不是用药理学、免疫学或代谢的手段获得，但有可能有这些手段参与并起一定辅助作用。

注：本定义由全球协调工作组制定（GHTF）。

[ISO13485:2003]

3.8

微生物表征 microbial characterization

把微生物归类成主要类型的一般方法。

注：列如：可根据采用的选择性培养基、菌落或细胞结构形态，染色特性或其他特性，组合成各个类型。[ISO/TS11139:2006,定义 2.25]

3.9

预防措施 preventive action

为消除潜在的不合格或其他潜在不期望情况的原因所采取的措施。

注 1 一个潜在不合格可以有若干个原因。.

NOTE 2 采取预防措施是为了防止发生，采取纠正措施(3.4) 是为了防止再发生。

[ISO9000:2005,定义3.6.4]

3.10

产品 product

过程的结果

注用于灭菌的产品是实际的，是指原材料、半成品、部件和医疗保健产品。

[ISO9000:2005,定义 3.4.2]

3.11

公认的菌种保存库 recognized culture collection

根据“国际公认微生物菌种保存专利与法规”布达佩斯公约建立的国际菌种保存机构。

[ISO/TS11139:2006,定义 2.38]

3.12

回收率recovery efficiency

对某一特定的技术从产品或/和培养基上获取微生物的能力的测定值。

3.13

样品分额 sample item portion SIP

医疗器械用于试验的部分。

3.14

规定 specify

在批准件范围内详细约定的内容。

[ISO/TS11139:2006,定义 2.42]

3.15

确认 validation

为设定某可持续生产出符合预定技术规格的产品的工艺，获得、记录和整理结果的文件化程序。

注5：在生物负载判定中，“过程”是试验方法，“产品”是试验结果。对生物判定技术的确认包括一系列调查，来测定试验方法的有效性和重现性。

[ISO/TS11139:2006,定义 2.55]

4质量管理体系基础

4.1文件

4.1.1 应规定生物负载的判定程序。

4.1.2 ISO11737本部分使用的文件和记录应经制定人员审核及批准(see4.2.1)。文件和记录应按ISO13485 或ISO/IEC17025要求进行受控.

4.1.3应保存原始观察的记录、导出数据和最终报告。记录应包括取样、制备和试验人员的识别。

4.1.4计算和数据转化应进行适当的校核。

4.2 管理职责

4.2.1 ISO 11737本部分描述的贯彻和执行的职责和职权应该规定。按照ISO13485 或 ISO/IEC17025要求将责任分派给能胜任的人员。

4.2.2如果ISO 11737的这部分的要求由几个独立的质量管理系统组织承担，应规定每部分的职责和职权。

4.2.3 应具备规定试验的校核和测量所需设备的所有项目。

4.3 产品的实现

4.3.1 应规定采购程序。这些程序应符合ISO13485或 ISO/IEC17025要求。

4.3.2 符合ISO13485或 ISO/IEC17025 或ISO10012的要求建立的文件体系，应规定按照ISO 11737本部分的要求所使用的设备，包括用于检测的仪器的校核。

4.3.3应规定生物负载判定(包括适宜的质量试验)所用的材料制备和灭菌方法。

4.4 测量、分析和改进－不合格品控制

应规定检验不合格结果调查、纠正、纠正措施和玉兔方措施的程序，这些程序应符合ISO13485或ISO/IEC1702要求。

5. 产品的选择

5.1总则

5.1.1 应建立选择和处理判定生物负载产品的程序，以保证这些产品包括包装材料和过程对常规生产具有代表性。

5.1.2 如果确定生物负载所用产品是成组的，在一组中产品内含物的基本原理应该被记录(见4.1.2)，基本原理包括确认的标准来自某一组群中选择的一个产品的确定的生物负载，这一组群在整个组群中是有代表性的

5.1.3 应考虑做生物负载判定的采样时间，因为生物负载判定会随时间而改变。

5．2样品份额(SIP)

假如生物负载被证明均匀地分布在产品上或/和产品内，SIP可以从产品的任意部分挑选。否则SIP应由产品的多部分组成，随便地选择，其制成产品的每种材料适当的代表。如果生物负载的分布已知，那么SIP可以选择产品的一部分，该部分对灭菌过程具有挑战性，SIP能以长度、质量、体积或表面积计算出。

表 1 — SIP计算举例

注：如适用，规定灭菌过程的确认和常规控制要求的标准应提供样品份额的适宜性指标。

6.1.2 Removal of microorganisms 微生物的消除

6.1.2.1 For an identified product where removal of viable microorganisms is part of the method,the efficiency of removal shall be considered and the outcomes of this consideration recorded(see 4.1.3). Consideration shall,at least,be given to:

对于确定的产品消除存活的微生物是一部分方法，应考滤消除的效率和记录的考虑的结果，至少应考虑：

a)ability of the technique to remove microorganisms;（见4。1。3），

消除微生物技术的能力

b)possible type(s)of microorganism and their location(s)on product;

微生物的可能类型和在产品上的位置

c)effect(s)of the removal technique on the viability of microorganisms;

对于存活微生物消除技术的效果

d)the physical or chemical nature of product under test.

在试验状态下产品的物理和化学性质

6.1.2.2 For an identified product for which removal of viable microorganisms is not part of the method,the efficiency of enumeration of microorganisms shall be considered and the outcomes of this consideration recorded(see4.1.3).Consideration shall,at least,be given to:对于确定的产品消除产品上的存活微生物的方法不包括在本部分中，列举微生物的效率应考虑，并且记录考虑的结果（见4。1。3）至少应考虑以下方面：

a)possible type(s)of microorganism and their location(s)on product;

微生物的类型和在产品上的位置

b)the physical or chemical nature of the product to be tested;

试验产品的物理、化学性能

c)aggregates of cells forming single colonies due to in-situ culturing.

在原处培养的单克隆细胞合计

6.1.2.3 If the physical or chemical nature of product is such that substances can be released that adversely affect either the number or the types of microorganism found,then a system shall be used to neutralize,remove or,if this is not possible,minimize the effect of any such released substance.The effectiveness of such a system shall be demonstrated.

如果产品的物理和化学状态其物质能被释放出来，反作用在发现的一个或一种类型的微生物上，那么使用中和、消除系统，如果这些是不可能的，那么这种释放的物质的作用应降低到最小化

NOTE Annex B describes techniques that may be used to assess the release of microbicidal or microbiostatic substances.

附录B描述了用于评定微生物或微生物物质释放的技术

6.1.3 Culturing of microorganisms

微生物的培养

Culture conditions shall be selected after consideration of the types of microorganism likely to be present.The results of this consideration and the rationale for the decisions reached shall be recorded(see 4.1.2).

选择培养条件然后考虑微生物可能存在的类型，考虑的结果和达到结果的基本原理应该纪录（见4.1.2).

6.1.4 Enumeration of microorganisms微生物列举

The technique for enumeration shall be selected after consideration of the types of microorganism likely to be present.The results of this consideration and the rationale for the decisions reached shall be recorded(see 4.1.2).选择列举的技术然后考虑微生物的类型。考虑的结果和达到结果的基本原理应该纪录（见4.1.2).

6.2 Microbial characterization of bioburden生物负载的微生物特征

6.2.1 Appropriate techniques for microbial characterization of bioburden shall be selected.

选择生物负载的微生物描述的适当的技术

NOTE Microbial characterization is necessary to detect a change to product microflora that might affect some aspect of the use of the bioburden data (e.g. establishing a sterilization process). 微生物的描述是必要的对于发现产品的一个变化的微生物群，那可能影响一些表面的生物负载资料的使用（建立一个灭菌过程）

6.2.2 Microbial characterization shall be accomplished using one or more of the following:

微生物描述应用一下一个或更多个完成

a)staining properties;

着色性

b)cell morphology;

细胞形态

c)colony morphology;

群体形态

d)use of selective culturing;

使用的培养方法

e)biochemical properties;

生物化学性质

遗传序列资料，对此有适当的资料库

7 Validation of method for determining bioburden确定生物负载方法的确认

7.1 The method for determining of bioburden shall be validated and documented.

生物负载的确定方法应被确认和文件化

7.2 Validation shall consist of the following:

确认有以下内容组成

a)assessment of the adequacy of the technique for removal of microorganisms from product,if removal

is part of the method;从产品上消除微生物的适当的技术评估，如果消除是方法的一部分。。

b)determination of the recovery efficiency in order that a correction factor be derived;

回收率的测定以便于推断纠正因子

c)assessment of the adequacy of the enumeration of microorganisms,including culture

conditions and microbiological counting techniques;

适当的微生物列举评估，包括培养条件和微生物计算技术。

d)assessment of the suitability of the technique(s)of microbial characterization.

微生物表述技术的适宜性评估

8 Routine determination of bioburden and interpretation of data生物负载的确定程序和数据资料

8.1 Routine determination of bioburden shall be performed employing documented sampling plan(s)defining sample size and sampling frequency.生物负载的确定程序应文件规定采样计划，定义样品规格和采样频率。

8.2 Determination of bioburden shall be performed using a method specified for a product or group of products(see 5.1.2).对于一个产品或一组产品使用规定的方法进行生物负载的确定。

8.3 Microbial characterization of bioburden shall be performed to a degree dependent on the purpose for which the data derived from the determination of bioburden are to be used(see 6.2).

进行生物负载的微生物描述度量依赖于来源于使用生物负载的确定的推断数据

If,on microbial characterization,isolates are recovered that are not part of the normal microflora, consideration should be given to assessing the properties of these isolates.

假如，涉及微生物描述，隔离种群被恢复，那不是普通的生物群，应考虑这些隔离种群的性质评估。

8.4 If bioburden data are to be used to establish the extent of treatment of a sterilization process,any requirements applicable to the use of bioburden data, specified in the appropriate standard for the development,validation and routine control of the sterilization process,shall be met.若生物负载的资料用于建立灭菌程序涉及的程度，一些必要的条件应用于使用的生物负载数据，在适当的标准中规定灭菌过程的发展、确认和常规控制，应满足.

8.5 Acceptable limits for bioburden on or in a medical device shall be specified.This specification shall be based on previously generated data.If these limits are exceeded,action shall be taken (see 4.4).

可接受的在医疗器械上或内的生物负载的限度应规定，这个规定基于前期产生的资料。如果这些限度超标，应采取措施（见4.4）

8.6 Data derived from determination of bioburden obtained over a period of time shall be used to identify trends.Acceptable limits shall be reviewed and revised as necessary.

8.7 The application of statistical methods to define sample size,sampling frequency

and/or acceptable limits shall conform to ISO13485.

应用统计方法说明样品大小，取样频度或/和接受限度符合ISO13485.。

9 Maintenance of the method of determination of bioburden

生物负载确定方法的维护

9.1 Changes to the product and/or manufacturing process

产品和/或生产流程的改变

Changes to product and/or manufacturing processes shall be reviewed to determine whether they are likely to alter bioburden.The results of the review shall be recorded(see 4.1.2).If there is potential for alteration of bioburden,specific determinations of bioburden shall be performed to evaluate the extent and nature of any change.评价产品和/或生产流程的改变，确定是否可能是变化的生物负载。评价的结果应记录（见4.1.2），如果有可能改变生物负载，进行明确的生物负载确定，并估计变化的程度和种类。

9.2 Changes to the method of determination of bioburden

生物负载确定方法的变化

Any change to a routine method of bioburden determination shall be assessed.This assessment shall include:

生物负载确定的常规方法的任何改变应评定，这种评定包括：

a)evaluation of the effect of the change on the outcome of determination;

评价于确定结果的改变的影响

b)establishment of the recovery efficiency of the method following the change.

建立以下变化方法的回收率

NOTE The assessment of the change could indicate that the previous validation and recovery efficiency are still applicable.变化的评价指出先前的确认和回收率仍然适用。

9.3 Revalidation of the method of determination of bioburden

生物负载确定方法的再确认

The original validation data(see7.2)and any subsequent revalidation data shall be reviewed at specified intervals in accordance with a documented procedure.The extent to which revalidation is to be undertaken shall be determined.The outcome of the review and any revalidation undertaken shall be recorded(see 4.1.3).

确认的原始资料（见7.2)和一些后来再确认资料应按照文件规定的时间间隔再评价。进行再评价的范围应确定，评价的结果和进行得再确认应记录（见4。1。3)

Annex A

(informative)

Guidance on determination of a population of microorganisms on

product

确定产品上微生物数量的指南

of ISO 11737.为了参考简单，本附录的编号与ISO 11737用于本部分的相符合

A.1 Scope概述

This annex contains guidance on the implementation of the requirements specified in this part of ISO11737. The guidance given is not intended to be exhaustive,but to highlight important aspects to which attention should be given.

本附录包含ISO 11737本部分规定要求的执行，所给指南没有规定是详尽的，但关心的最重要的方面应给出。

Methods other than those given in this annex may be used,but these alternative methods should be demonstrated as being effective in achieving compliance with the requirements of this part of ISO 11737.除了本附录给出的方法被使用外，对于其他可供选择的方法应被论证

This annex is not intended as a checklist for assessing compliance with the requirements of this part of ISO11737.本附录不包含评价符合本部分ISO11737要求的清单。

A.2 Normative references参考标准

The requirements of documents included as normative references are requirements of this part of ISO11737 only to the extent that they are cited in a normative part of this part of ISO11737;the citation may be to an entire standard or limited to specific clauses.

参考文件包含参考标准作为本部分ISO11737要求，只是本部分ISO11737标准引用的程度；该引用可能是标准的全部也可能限于规定的条款

A.3 Definitions定义

No guidance offered.没有指南提供

A.4 Quality management system elements质量管理体系要素

NOTE It is not a requirement of this part of ISO 11737 to have a full quality management system, but the elements of

a quality management system that are the minimum necessary to control the determination of bioburden as used in the validation and monitoring of medical devices to be sterilized are normatively referenced at appropriate places in the text (see, in particular, Clause 4). Attention is drawn to the standards for quality management systems (see ISO 13485) that control all stages of production or reprocessing of medical devices. National and/or regional regulations for the provision of medical devices might require a complete implementation of a full quality management system and the assessment of that system by a third party.

A.4.1 Documentation文件

In ISO13485,the requirements in the documentation section relate to the generation and control of documentation(including specifications and procedures)and records.

Computers may be used in laboratories for direct and indirect collection,processing and/or storage of data. Both the hardware and software used for such applications should be controlled.

ISO 11737-1:2006(E)

The computer system in use should be identified,both in terms of hardware and software,and any changes in either of these aspects should be documented and subject to appropriate approval.

If calculations are performed by electronic data processing techniques,the software(e.g., spreadsheet calculations)should be validated prior to use and records of this validation should be retained.

For software,there should be documentation describing:

↓ applications software run on the computer system;

↓ operations software;

↓ data packages in use.

All software should be acceptance tested before being put into service.

If computer software is developed in-house,suitable procedures should be developed to ensure that:

↓ documentation on development,including the source code,is retained;

↓ records of acceptance testing are retained;

↓ modifications to programs are documented;

↓ changes in equipment are documented and formally tested before being put into use.

These controls should also be applied to any modification or customizing of commercial software packages.

There should be procedures to detect or prevent unauthorized changes to software programs.

Software programs that organize,tabulate and/or subject data to statistical or other mathematical procedures,

or which otherwise manipulate or analyse the electronically stored data,should permit retrieval of original data entries.Special procedures for archiving computer data are likely to be required and these procedures should

be documented.

Requirements for control of documents and records are specified in4.2.3and4.2.4of ISO13485:2003,or4.3

and4.13of ISO/IEC17025:2005.

Requirements for technical records are specified in4.13.2and5.4of ISO/IEC17025:2005.

See also ISO90003for guidance of the application of quality management systems to computer software.

A.4.2 Management responsibility管理职责

In ISO13485,the requirements in the management responsibility section relate to management commitment, customer focus,quality policy,planning,responsibility,authority and communication,and management review.

In order that the data obtained from performing bioburden determinations are reliable and reproducible,it is important that the determinations be performed under controlled conditions.Therefore,the laboratory facilities used for the determinations,whether on the site of the manufacturer of the medical device or located

at a remote location should be managed and operated in accordance with a documented quality system.

The determination of bioburden can involve separate parties,each of whom is responsible for certain elements of the method or procedure.This part of ISO11737requires that the party accepting particular responsibilities be defined and that this definition of responsibilities be documented.This definition of authority and responsibility is documented within the quality management system(s)of the identified parties.The party accepting responsibilities for defined elements is required to assign these elements to competent personnel, with competence demonstrated through appropriate training and qualification.

If bioburden determinations are performed in a laboratory under the direct management of the manufacturer of

the medical device,the operation of the laboratory resides within the manufacturer's quality management system.If an external laboratory is used,the laboratory should be formally certified against an appropriate International Standard(e.g.ISO/IEC17025).

Any laboratory should be committed to providing a quality service and this commitment should be documented

as a quality policy.The lines of authority and responsibility within the laboratory organization should be formally established and documented.An individual should be nominated to be responsible for the establishment of the laboratory quality system and should have the authority to ensure that the system is implemented.

The operation of the laboratory should be subject to regular internal audits.The results of the audit should be documented and reviewed by the laboratory management.See4.14of ISO/IEC17025:2005.

Requirements for responsibility and authority are specified in 5.5of ISO13485:2003and requirements for human resources are specified in6.2of ISO13485:2003.

Requirements for provision of resources are specified in ISO13485and requirements for equipment are specified in5.5of ISO/IEC17025:2005.

A.4.3 Product realization产品实现

In ISO13485,the requirements in the product realization section relate to the product lifecycle from the determination of customer requirements,design and development,purchasing,control of production,and calibration of monitoring and measuring devices.

There should be a system for identifying the maintenance requirements for each piece of laboratory equipment.

Equipment that does not require calibration should be clearly identified.

Any equipment,or parts thereof,that comes into contact with product,eluent,media,etc.,during testing should be sterile.All microbiological media and eluents used to remove microorganisms from product should be prepared in a manner that ensures their sterility.

Appropriate quality tests should include growth promotion tests.Generally,growth promotion tests are performed on each batch of medium using an inoculum of low numbers[between10and100 colony-forming units(CFUs)]of selected microorganisms.Growth promotion tests are described in pharmacopoeial monographs that detail suitable microorganisms.Other recognised quantitative and semi-quantitative methods

for media quality control are also acceptable.

Requirements for purchasing are specified in7.4of ISO13485:2003.In particular,it should be noted that the requirements in7.4.3of ISO13485:2003for verification of purchased product apply to all product and services received from outside the organization.

Requirements for calibration of monitoring and measuring devices are specified in7.6of ISO 13485:2003. Requirements for equipment and measurement traceability requirements are specified

in 5.5and 5.6of ISO/IEC17025:2005.

A.4.4 Measurement, analysis and improvement — Control of nonconforming product测量、分析和改进-不合格品的控制

In ISO13485,the requirements in the measurement,analysis and improvement section relate to in-process monitoring,control of nonconforming product,analysis of data and improvement(including corrective and preventive actions).

All bioburden results that exceed specification and that indicate an adverse trend require investigation.The initial phase of the investigation should involve assessing if the results are a true finding or are in error.The following can contribute to an error and should be addressed:

↓ inappropriate samples(e.g.non-representative,non-homogeneous rejected materials);

↓ inappropriate sampling materials(e.g.swabs,containers,packages);

↓ unsuitable conditions of transport/handling/storage;

↓ inappropriate test materials(e.g.storage,pipettes,filtration apparatus);

↓ incorrect handling or test method(s);

↓ inappropriate media or diluents;

↓ inappropriate laboratory environment;

↓ inappropriate incubation environment;

↓ errors of calculation or transcription.

If the results are due to an error,the bioburden result that exceeds the specified limit should be verified by the performance of a repeat determination employing samples from the same batch of product.If product supports microbial growth or if the same batch is no longer available,a new batch may be used.

If the original result is confirmed as a true finding,at least the following should be considered in the second phase of the investigation:

a)the implication of the result in relation to the effectiveness of the sterilization process;

c)the outcome of an assessment of manufacturing processes;in such an assessment,the following should

be addressed:

1)raw materials/components(vendors,changes);

2)cleaning/lubrication/manufacturing liquid;

3)transport/holding containers;

4)work surfaces;

5)personnel attire/hygiene/practices;

6)handling/assembly;

7)environmental conditions and monitoring results(including seasonal factors,if any);

8)packaging materials and procedures;

9)storage conditions;

d)microbial characterization of organism(s)recovered,including

1)potential sources;

2)comparison with previous isolates.

A.5 产品的选择

A.5.1 总则

A.5.1.1取样和处理样品时应避免因疏忽而引起的污染和对样品中微生物数量和性质有较大改变。取样系统应具有一致性，以便在一段时间内具有可比性。

取样进行生物负载判定时，无非有两种可能性：

a) 随机抽取样品；

b) 抽取不适于销售的产品，如废料或不合格品。I

此类样品的选择取决于众多因素，但是先决条件是所选样品能尽可能地具有生物负载代表性。如果是用不合格品，则宜选择那些已经过各个关键的生产过程阶段(包括清洗和包装过程)的产品。按以上a)抽取的产品是更为理想的样品。

为判定生物负载取样时，产品应装在其标准包装之中

A.5.1.2 在为生物负载产品进行编组过程中，应考虑以下内容：

a) 微生物数量;

b) 微生物类型;

c) 产品规格;

d) 部件数量;

e) 产品复杂性;

f) 生产过程中使用自动化的程度;

g) 生产环境.

从组中选出的用于生物负载判定的产品应按照计划时间表随机抽取或1）或2）。

A.5.1.3如果生物负载判定数据用于确定灭菌程序，,在产品样品选择和生物负载判定之间所用的时间应该反映

If data from bioburden determinations are to be used to establish a sterilization process, the period of time that elapses between the selection of product samples and the determination of bioburden should reflect the time period between completion of the last manufacturing step and sterilization of product.

A.5.2 样品份额(SIP)

生物负载判定宜尽可能使用整个产品，但这可能做不到，因为现有的实验室玻璃器皿不可能容纳整个产品。在这种情况下，选用的产品部分应尽可能大，通过对所用的产品部分的生物负载判定应能判定出整个产品的生物负载。因此在测试大型产品如手术衣或外用引流成套器械，必须认真选取产品的试验部分。

在准备和采集样品份额时，操作要小心。如果必须将试验部分从产品上分离下来，建议在受控环境的洁净条件

下进行(例如在层流柜中)，这样可以避免增加污染。

A.6 生物负载的判定方法和微生物表征

A.6.1 生物负载

A.6.1.1选择适当的方法

如果适当, 分子键入的方法, 譬如DNA 程序化, 可以用作补充培养方法。图A.1 是判定树一般用于最初阶段生

物负载判定方法选择。

图 A.1—生物负载方法判定树

产品

试验品是否是可滤性液体？

是否

使用过滤或平板试验品是否是固体，不可变形的？

是否

使用超声波/过滤

/平板搅动试验品是否是纤维/泡沫塑料/可变形的？

是否

袋蠕动或过滤

/平板搅动试验品是否是半固体或粉末？

是否

涡旋式混合或过滤

/平板搅动如果以上都不适用

A.6.1.2去除微生物

见附录B.

A.6.1.3微生物培养

在选择培养基和培养条件应考虑原材料性质、加工方法、加工条件等因素。如果是兼性微生物,非选择性培养基和培养条件适用。

在选择培养基和培养条件时，应考虑以下方面：

a) 一个培养基与培养条件的组合不能促进所有微生物的生长；

b) 确认时可能需要使用比常规检测更多的培养基和培养条件；

c) 在所选的培养基上直接涂抹可能会使微生物受到物理压力或损坏，而不能生长；

d) 很可能遇到微生物污染源和微生物的特性，记住, 一些污染源可能季节性地变化。

表 A.1—培养基和培养条件示例a

应该注意所有非选择性厌养菌培养方法同样允许兼性厌养生物体生长。

A.6.1.4微生物示例

见 B.6.

A.6.2 生物负载的微生物表征

产品生物负载所需的微生物表征程度以使用的数据的目的为基础。

很多方法可以用于医疗器械上微生物组成的生物负载的微生物表征。判定隔离种群可以使用传统试验，如形态学、革兰和孢子染色反应及简单的生物化学反应（如：过氧化氢酶、氧化酶、吲哚），通常提供一些关于微生物属于哪个科或种的指示。一些复杂的生物化学、血清学及分子检测可确定隔离种群的属及类的等级。

表 A.2普通生物负载分类方法相关信息.

Table A.2—普通生物负载分类方法

A.7 Validation of method for determining bioburden

A.7 对生物负载方法的确认

A.7.1In general,standard classical microbiological methods present a challenge to the user in the validation

of the determination of bioburden.It is not usually necessary to validate classical microbiological methods, other than to establish their applicability,to verify staff competence in their performance and,if applicable,to include appropriate positive and negative reference control microorganisms or chemicals.Such actions are usually sufficient to confirm the validity of the determination of bioburden.

一般来说，传统的标准微生物学方法会使使用者在确认生物负载的过程中受到障碍。因此，除非是为了要确认其适应性，核实员工在操作过程的能力以及，如适用，包括适当的阳性及阴性参考支配微生物或化学物质，否则，一般不需要确认传统的微生物学方法。

Laboratories are generally encouraged to use methods described in national and International Standards, such as those published by pharmacopoeias,ISO,AOAC,ASTM, etc.Recognised reference methods,as defined in standards or reference tests,have undergone interlaboratory comparison.A laboratory using such recognised methods should need only to verify their accuracy and reliability under its unique conditions of use.

通常，国家以及国际标准权威机构，例如药典，ISO,AOAC,ASTM等，会鼓励实验室使用其所规定的的方法。按照标准机构或参考测试的定义，被认可的参考方法已经经过了多个实验室的比较。因此，使用被认可的参考方法的实验室制需要根据自己特殊的情况对这些方法的正确性和可靠性即可。

All strains of test microorganisms used as controls during validation should be obtained from a recognised culture collection.

A.7.2There are essentially two approaches available for validation of the efficiency of removal of a test microorganism from medical devices.These approaches are:

本质上，有两个对医疗器械上测试微生物回收率进行确认的方法，这些方法是：

↓repetitive treatment of a sample product or

样品产品的重复处理或

↓product inoculation with known levels of

microorganism, followed by quantitative

assessment of the extent of recovery.

↓对接种已知微生物水平的产品进行某种程度的定量处

理使之达到某种程度的回收率

The first of these approaches has the advantage of utilizing the naturally occurring microorganisms but usually needs a relatively high initial bioburden.The second approach creates a model system for testing purposes. The use of such a system raises questions as to its applicability to the natural situation.However,this approach cannot be used for products with low levels of bioburden.

第一种方法的优势在于利用自然形成污染的微生物，但需要一相对较高的初始生物负载。第二种方法为

生物负载水平较低的产品。

The culture conditions(i.e.media and incubation conditions),selected for use in determination of bioburden cannot be expected to detect all potential microorganisms.In practice,therefore,it is inevitable that bioburden will be underestimated.Nevertheless,a decision on appropriate culture conditions must be made.

经过挑选的用来确定生物负载的培养条件（即媒介和孵化条件），不能够被用来检测所有的潜在的微生物。因此，在实践中，生物负载被低估是不可避免的。但是，对适当的培养条件的确认也是必须的。

One approach to the assessment of culture conditions consists of selecting the culture conditions based on a knowledge of the manufacturing process,environment and materials,and then comparing the microorganisms enumerated under these culture conditions with those detected by alternative combinations of medium and incubation conditions.If this approach indicates that a low proportion of the bioburden is being enumerated, the proposed culture conditions should be reconsidered in order to optimize the determination.However,this approach can be used for products with low levels of bioburden.

一种评估培养条件的方法包括根据制造过程，环境和原料选择培养条件，然后再将从这种培养条件下选出来的微生物与那些在随机结合的媒介和孵化条件下选出来的微生物进行比较。如果该方法的结果显示生物负载比例较低，那么，为了使测定达到最优化，应该重新考虑之前提议的培养条件。但是，这种方法可以用于生物负载水平较低的产品。

For further guidance on enumeration,see B.6.

对于列举的进一步指导，请参考B.6

A determination of bioburden can only be an estimate of the bioburden on product.In improving the percentage recovery for a particular technique,the accuracy of the determination of bioburden can be increased.Since there are a variety of techniques that can be used to remove microorganisms,the percentage recovery obtained using a particular technique is a factor in deciding the technique to be used.If the percentage recovery is found to be less than50%,improvements to the technique or the use of alternative techniques should be considered.It is noted that there can be certain circumstances where it is not possible to have a recovery above50%.

对生物负载的确认只能是对产品的生物负载的一个估计值。在改善某一项特殊技术的恢复百分比时，生物负载决定的准确性也应该相应地增加。既然有很多可以被用来移除微生物的技术，使用某种特殊技术后所获得的恢复百分比应该作为决定该技术是否被使用的一个因素。如果恢复百分比低于50%，就应该考虑对该项技术进行改善或使用其他的技术。但是，也应该注意，在某些特定情况下，恢复率不可能达到50%以上。

When selecting techniques for use in the microbial characterization of environmental and industrial microorganisms,laboratory personnel should be mindful of:

在选择用来描述环境和工业微生物的特征的技术时，也应该将实验室的工作人员考虑在内。

↓ the appropriateness of tests and kits,which have been developed primarily for use in clinical settings;

实验和所用工具的妥帖性已经在临床设置中得到了开发

↓ the ability of laboratory staff to interpret results for microorganisms displaying minimal metabolic activity in biochemical tests(e.g.non-fermentative gram-negative bacteria).

实验室工作人员解释生化测试的结果中微生物所显示出的最小的新陈代谢活动的能力（例如没有发酵力的革兰氏阴性细菌）

A.8 Routine determination of bioburden and interpretation of data

生物负载确认和数据解释的惯例

A.8.1In order to demonstrate that effective control of microbiological quality has been implemented and maintained,a programme of monitoring product and/or components should be developed.为了证明对微生物的有效控制已经实现并得到了维持，应当开发一种监控产品和/或其组成成分的程序。

It is common practice to use a sample size of between3to10items for routine monitoring of bioburden levels.

普遍做法是使用一3到10个项目大小的样本作生物负载水平的定期监控。

a)the change in bioburden to be detected;

a) 被监控样本的生物负载的变化；

NOTE This will depend upon the consequences associated with a change (either increase or decrease) in bioburden level and how the bioburden information is being applied.

For early detection of a small change in the mean bioburden level, a large sample size could be needed.

注意这将取决于与生物负载水平的变化（或增加或减弱）以及生物负载信息是如何被应用这两个方面相关的结果。若早期检测结果显示生物负载的平均水平变化很小，则需要较大的样本。

b)the variation in estimates of the number of viable microorganisms present on individual items.

b) 各个项目中的可成活的微生物数量估计上的变化

NOTE The degree of this variability will determine the sample size necessary to detect a given change. Small item-to-item variation in such estimates will require a smaller sample size to detect a change than that required for large item-to-item variation.

注意这种变化的程度将会决定样本的大小以便于监测事先设定的变化。这种估计上小的项目对项目的变化所需的样本要比那种大的项目对项目的变化所需的样本更小。

Table A.3(provided as an illustration only)demonstrates how sample size and variability of bioburden affects the ability to detect a given change in the magnitude of bioburden.Clearly, large sample sizes provide increased confidence in detecting significant changes.

表A.3（仅作为例证）揭示了样本大小和生物负载的变化性如何影响对生物负载数量假定变化的监测能力。显然，较大的样本为检测出更明显的变化提供了更多的可能性。

It should be recognized that the manner in which bioburden data are used could influence the desired level of confidence in detecting a change of a given magnitude.A rational choice of the magnitude of change to be detected and the probability of achieving that detection should be made.

此外，生物负载数据的使用方式也会影响对生物负载数量假定变化的监测能力。因此，应合理选择要监测的变化数量和实现监测的可能性。

A rational choice for the frequency of monitoring should be made,taking into account a variety of factors including:

考虑到以下几个因素，还应合理选择监控的频率：

↓ the availability of historical data;

历史数据的有效性；

↓ the purpose for generating the data;

产生这些数据的目的；

↓ the nature of the manufacturing process;

制造过程的本质；

↓ the production frequency for the product;

产品的生产周期；

↓ the criticality of detecting bioburden changes in a timely fashion;

适时监测生物负载变化的危险程度；

↓ seasonal and environmental variations.

季节性和环境性变化

Sampling may be performed at a frequency based on time(e.g.monthly),or on production volume(e.g. alternate batches).However,in order to establish baseline levels,it is common practice to determine bioburden at a higher frequency during the initial production of a new product and for this frequency to be reduced as a knowledge of bioburden develops.

采样可以以时间为周期（如一月一次），或以生产容量为周期（如产品批次替换）。但是，为了建立基础线水平，普遍的做法是，在生产新产品的初始阶段在高频率下确定生物负载，然后随着生物负载的发展不断降低这

The frequency of determinations of bioburden should allow detection of changes in bioburden,for example, due to seasonal variations,manufacturing changes or changes in materials.

确定生物负载的频率应当允许监测生物负载的变化，例如，由于季节性变化，生产变化或原料变化而引起的生物负载变化。

A.8.2The selection of a method for determination of bioburden should consider the possible occurrence of biofilm on or in product.Medical devices incorporating tissue have a potential for biofilm occurrence.Biofilm could form on or in product in contact with liquids.

挑选确定生物负载的方法应当考虑产品中或上的生物薄膜可能出现的情况。医疗器械合成组织可能出现生物薄膜。与液体接触的产品中或上回形成生物薄膜。

A.8.3See A.6.2

参照A.6.2

A.8.4No guidance offered.

未提供指南

A.8.5A predetermined course of action must be taken when specified limits are exceeded.If corrective actions lead to changes to the process that affect the bioburden,new data should be obtained and new limits established for product.

当发生超过指定限度的情况时，必须采取预先设定的一系列措施。如果补救措施导致过程发生变化以致影响了生物负载，应该将新的数据记录下来并为生产建立新的限度。

The limits used for bioburden are based upon historical data for product.In the absence of such historical data, tentative limits can be set upon evaluating the first three batches of a given product.Based upon successive test results,these should be re-evaluated after a period of time to verify whether the original limits are appropriate.

生物负载的这种限度的依据是产品的历史数据。在没有这样的历史数据时，可以通过评估指定产品的前三个批次建立实验性限度。在连续测验结果的基础上，并在一段时间内对初始限度是否合适进行验证之后，再对这些限度进行重新评估。

Data derived from bioburden determinations for a given product might not precisely follow a well-recognized mathematical distribution.In particular,some data exhibit many zero counts with a few high counts and a histogram representing such bioburden data will exhibit a long tail to the right.If a mathematical distribution can be fitted to a given set of data,upper limits for the data may then be set accordingly.Thus,an upper probability limit can be chosen(perhaps the95%or 99%probability limit)for the bioburden that should not be exceeded if the production process continues

to operate in the same manner as that used to obtain the historical data.

来自某一指定产品生物负载确定的数据不会完全遵循公认的数学分布。尤其是，一些数据列出很多零计数而只有很少的较大的计数，并且这些生物负载数据的柱状图呈现向右倾斜的尾状曲线。如果数学分布适合某一组指定数据，那么可以相应地设置该组数据的上限。因此，如果生产过程依旧按照所获得的历史数据的方式运行，就不能超过为生物负载所选择的可能性上限（也许是可能性极限的95%或99%）。

In the absence of a fit to a mathematical distribution,it is possible to apply the principle of control charting

to data derived from bioburden determinations and set limits accordingly.The preparation of control charts does not strictly depend upon any underlying assumed distribution.The quantities that are plotted on control charts are the mean and standard deviation(or range).Means will tend to have a more symmetrical distribution than individual values.Transformation of raw data may further improve the applicability of a standard Shewhart control chart.Experience gained in fitting empirical distributions to such data sets suggests that the following two transformations of individual counts might be suitable.

在没有数据适合数学分布时，可以将控制图表的原理应用于来自生物负载确定的数据，并相应地设置限度。控制图表的准备不必严格依照任何潜在的假设分布。控制图表上的数都是平均数和

方法也倾向于更加对称的分布而不是单独的评估。对原始数据进行转换将会进一步提高Shewhart控制图表的适用性。根据在使以往的数学分布适合这些数据的过程中所获得经验，以下两种单个计数转化方法可以适用：

a)For product with an overall average bioburden of less than10CFU per unit,the suggested transformation to improve symmetry is:

对平均生物负载低于每单位10CFU的产品，建议改善对称的转化是：

where

其中

Y is the transformed count;

Y代表转化了的计数；

x is the original untransformed count;

X代表原始的未转化的计数；

N is a scaling factor based upon variance and is equal to mean2/(variance mean).

N代表根据变化的缩放比例，等于平均数2/(变化平均数)。

For those cases where the historical mean exceeds the historical (within group)

variance, ignore the transformation since the constant N will be undefined.

在历史平均数低于历史变化（在数剧组内部）的情况下，由于恒数N是不确定的，可以不转化。

b)For product with an overall average bioburden exceeding10CFU per unit,the distribution could again

tend to be skewed with a long tail to the right.In practice,such data can be best approximated by a lognormal distribution.In practice,taking logarithms of the individual counts will make the data approximate to a normal distribution.Since bioburden counts of zero may be observed,a positive constant of0,1should be added to all counts before taking logarithms.The suggested transformation then becomes: b) 对于平均生物负载超过每单位10CFU的产品，数学分布又会呈现为向右倾斜的尾状曲线。在实践中，这样

的数据最接近对数正态的分布。在实践中，对各个计数取对数将会使该组数据接近正常的分布。由于生物负载零计数可以观测到，因此在取对数之前应该将所有的计数加上0，1。那么，建议转化应变为：Y= log10 ( x+ 0,1)

where

其中

Y is the transformed count;

Y代表转化了的计数；

x is original untransformed count.

X代表原始的未转化的计数；

Control limits for a standard Shewhart control chart of the average bioburden can

be established after a sufficient number of historical counts have been collected for a product. (See ISO 8258 and ISO 7871 for control charting procedures). If a sufficient number of historical data is not available for a given product, conditional control

limits may be established with fewer values. The limits can be revised when more

data become available. Where appropriate, seasonal variation should be taken into account when setting limits. Any data identified as outliers should be discarded in setting limits.

在为某一产品搜集了足够数量的历史计数之后，就可以为平均生物负载的标准Shewhart控制图表设置控

制限度（参考ISO 8258和ISO 7871的控制图表程序）。如果某一指定产品没有足够数量的历史数据，可

以用较少的估值建立有条件的控制限度。当有了足够的数据之后，可以修正该限度。如果适当，在设置

限度的时候还应将季节性变化考虑在内。任何外部数据都被摈弃在限度设置之外。

Data identified as unusually large or small should be investigated. If they are

thought to be other than laboratory error or the occasional high values found in the

manufacturing process, the data may be considered an outlier and can be omitted from calculations in setting the limits for bioburden monitoring. When bioburden data are analysed for use in a

quality-related decision, individual test outcomes such as “no growth” or “too numerous to count (TNTC),” are included in the analysis.

对于异常的大或小的数据要进行调查。如果他们仅仅是实验错误或制造过程中偶然发现的较大的估值，

该数据可被视为外部数据而不被列入设置生物负载监控限度的范围之内。当生物负载数据分析被用于一

个与质量有关的决定时，个别测试结果如“没有增长”或“数量太多无法计算”也要包含在分析的范围

内。

A.8.6Graphical representation of data collected over time can be useful in distinguishing actual

trends from sampling variability. Graphical representation can also indicate that a significant change in the microbiological population has occurred even though the bioburden values reside

within the preset limits.

将某段时间内搜集的数据绘制成图有助于区分样本可变性和实际的趋势。即使生物负载估值保持在事先

Before statistical calculations can be performed on data derived from bioburden determinations, especially where many observations are recorded, it can be necessary to manipulate the data in such a way that the significant features are revealed. This can be done in a qualitative manner by grouping the measurements to form frequency tables and charts. Upon completion, the data can be examined for trends.

在对来自生物负载确认的数据进行统计学计算之前，有必要用这种方法对那些显示出重大特征的数据进行处理，尤其是在很多观察资料中都有记录的地方。

There is a number of techniques for trending which can be applied to bioburden. These trending techniques can be, but are not limited to, Shewhart control charts, control based on range (BOR), or cumulative sum charts (ISO 7871). Each of these different techniques can be used to establish a possible shift from the usual random spread of results and to highlight out-of-specification results.

有很多可以用于生物负载的趋势技术，这些趋势技术可以是，但不仅限于，Shewhart 控制图表，以范围为基础的控制（BOR），或渐增总和图(ISO 7871)。这些不同技术中的任何一种都可以用于建立普通任意延伸的结果的一个可能的变化以及突出超出规格的结果。

In some instances, it can be appropriate to utilize more than one of these techniques to determine whether or not action is to be taken based upon the available data set or whether additional data are required.

在某些情况下，可以使用一种以上的这种技术来确定要采取的行动是否依据了有用的数据或是否需要其他的数据。

A.8.7Subclause 8.1 of ISO 13485:2003 requires the planning and implementation of appropriate methods

of measurement and analysis, including selecting suitable statistical techniques. The examination of data derived from determinations of bioburden for a wide range of products illustrates the variability of such data. Determinations from a group will vary within the group of items, and, therefore, analyses of data generally use means. Clearly, these means can take high, intermediate or low values, and mean values will vary over time. Furthermore, the types of microorganism that comprise the bioburden can also vary.

ISO 13485:2003的第8.1条要求，计划编制和实施适当的测量和分析方法，包括选择合适的统计方法。核查来自更大范围的产品的生物负载确定数据显示出这些数据的变化。而同一组数据中不同单位的确定数据会变化，因此，分析数据通常采用平均值。显然，这些平均值可以采取高值，中间值或低值，而且平均值也会随着时间的改变而改变，此外，包括生物负载的微生物品种也会改变。

A commonly observed characteristic of the frequency distributions of data derived from determinations of bioburden is that distributions are extremely skewed and frequently show extremely long tails. For low or intermediate data, the modal value is zero. In these circumstances, the bioburden is generally low but there may be occasional high values, even though the control measures are effectively applied.

通过观察发现，来自生物负载确定的数据分布频率有一个共同的特点——分布图的倾斜度很大而且经常显示为很长的尾状曲线。对于较低或中间的数据，形势估计值为零。在这些情况下，即使使用控制测量法，生物负载通常也会较低但是会偶尔出现较高的估计值。

The extreme asymmetry of these skewed frequency distributions means that the established techniques of quality control based on symmetrical distributions are not always appropriate.Special statistical techniques may have to be developed for individual cases,either:

这些极端不对称的倾斜的分布频率意味着以对称的分布图为基础确定的质量控制方法不总是正确的。也应该为个别数据建立特殊的统计方法。

a)using transformational techniques to make the distribution of the data symmetrical and applying

standard techniques

使用转化技术使数据分布图对称并且应用标准技术

或

b)developing a new technique specifically suited to a skewed distribution.

开发一种特别适应倾斜的分布图的新技术。

A.9 Maintenance of method of determination of bioburden

生物负载确认方法的维持

未提供指导

Table A.3—Probability of a Shewhart control chart for bioburden data detecting a tenfold

change in bioburden level with changing sample size and within sample variability

表A.3 Shewhart生物负载数据控制图表对监测生物负载水平随着样本大小和样本内变化而发生十倍的变化的可能性

Annex B

(informative)

Guidance on methods of determination of bioburden

生物负载确认方法指南

B.1 General概要

B.1.1Bioburden determinations can be employed in a variety of situations.The indvidual responsible for the conduct of such determinations should take account of the particular circumstances unde which the determinations are made in deciding the sampling rate,the nature of culture media and the incubation conditions,together with the extent of method development and validation.

生物负载的测定受变化的环境的影响。个体是造成如此测定的原因应考虑特殊环境下，所做的测定在取样的速率，培养基的状态、培养条件和发育、确认方法的适用范围等的条件下得出的。

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案 1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案 1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请： 3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据：《中国药典》2015版 5.验证计划： 5.1实验操作人员确认； 5.2实验室实验设备及器材的确认； 5.3产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1菌种和菌液制备 6.1.1 菌种

试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2计数培养基适用性检查 6.2.1需氧菌的计数分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2霉菌和酵母菌的计数分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2结果判定被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 6.2.3试验结果见表1 6.3计数方法验证 6.3.1供试液的制备：

初始污染菌实验方法验证(文件模板)

初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：…………医疗器械股份限有限公司

目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容

初始污染菌实验方法验证方案 1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。 2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。 3.职责与验证申请： 3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。 3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据：《中国药典》2015版 5.验证计划： 5.1实验操作人员确认； 5.2实验室实验设备及器材的确认； 5.3产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1菌种和菌液制备验证组姓名职务单位黄燕组长质量管理部经理 …………医疗器械股份有限公司龙章宏组员化验员苏俊组员化验员胡梓鹏组员化验员批准经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方法进行验证。批准人：年月日

6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上， 20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2计数培养基适用性检查 6.2.1需氧菌的计数分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2霉菌和酵母菌的计数分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在 20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 6.2.2结果判定被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 6.2.3试验结果见表1 6.3计数方法验证 6.3.1供试液的制备：洗脱液用0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进行。 6.3.2 接种和稀释

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1.?目的? 检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。? 2.?适用范围? 适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。? 3.职责? 由质检部负责执行实施。 4.技术要求产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g 5.引用标准 GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典（2015版） GB/T 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法 6.试剂和培养基洗脱液 %Nacl 称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。胰蛋白胨大豆琼脂培养基取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为±，灭菌分装。玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为±，灭菌分装。 7.仪器设备锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球

8.操作方法样品处理无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。? 对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。接种需厌氧菌取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。霉菌取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。培养需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d 9.观察计数达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数 10.结果计算与报告公式污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重菌落计数基本规则? 选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。??菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100 时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。? 如果样品菌落总数超过标准的规定，则按10N逐批稀释?

初始污染菌实验方法验证审批稿

初始污染菌实验方法验证 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司

目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述 2．验证目的 3．职责与验证申请 4．验证依据 5．验证计划 6．验证内容

实验室实验设备及器材的确认；产品取样及方法确认。 6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。计数培养基适用性检查需氧菌的计数分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。霉菌和酵母菌的计数分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果判定被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基

初始污染回收率及检测记录

初始污染回收率测定记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号空白对照阴性对照平均菌落数（cfu/ml）初始污染菌（cfu/件）（平均菌落数÷SIP）回收率1 2 3 4 5 1-1 1-2 1-3 1-4 1-5 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 3-1 3-2 3-3 3-4 3-5

4-1 4-2 4-3 4-4 4-5 5-1 5-2 5-3 5-4 5-5 平均回收率修正系数

初始污染菌检测原始记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号阴性对照空白对照平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

17 18 19 20 平均初始污染菌各样品平均菌落 ——————数总和÷样品数校正后初始污染菌 ————（平均初始污染菌*校正因子）注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌 2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。

初始污染检测记录文件编号：样品名称：生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号空白对照阳性对照培养皿编号平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件） 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均初始污染菌（cfu/件）校正后初始污染菌注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌 2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。

初始污染菌方法验证

初始污染菌方法验证-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。无菌操作台必需定期进行洁净度检测?试验前提前开紫外灯15min 后方可进行实验操作。过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌?使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 %无菌氯化钠溶液。培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学

初始污染菌检验标准操作规程

1 目的：建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。 2 责任：质量检验人员负责执行此规程。 3 范围：适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。 4 内容： 4.1 初始污染菌检测 4.1.1 器材与试剂 4.1.1.1 器材（1）生化培养箱、霉菌培养箱（2）立式灭菌柜（3）超净工作台（4）无菌过滤装置（5）无菌镊子、无菌剪子（6）电子天平（7）移液器（8）接种环 4.1.1.2 稀释液、冲洗液 pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液 4.1.1.3 培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。 4.1.2 检验方法：平皿法 4.1.2.1 供试液的制备供试品是纱布可用无菌手续称取10g,放入100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。供试品是液体取样10ml加至100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。 4.1.2.2 供试液操作方法每个稀释级各吸取1ml至直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每个稀释级注2个平皿。 4.1.2.3 阴性对照取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。 4.1.2.6 培养条件将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。 4.1.2.7 计数

将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。 4.1.2.7.1 菌落计数基本规则 ①选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。 ②如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数比值=———————————————————— 低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值>2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 ③如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。 ④如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。 ⑤如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为<10个/g或ml。 ⑥如有3个稀释级平均菌落数均在30～300之间，则以后2级计算级间比值报告。 ⑦菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。 4.1.3 清场检验完毕，将使用的试剂归位，清理台面，并将用过的工具进行清洗。检测人员应及时填写《初始污染菌数检测记录》，并对检验结果进行判定。 4.1.4 注意事项 4.1.4.1 产品取样应在完成整个灌装或包装过程以后，而又在灭菌前取样； 4.1.4.2 本操作应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 4.1.4.3 无菌操作台必需定期进行洁净度检测，试验前提前开紫外灯15min后方可进行实验操作。 4.1.4.4 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备使用前应进行灭菌，使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。 5 依据标准及相关文件 2010版《中华人民共和国药典（二部）》附录Ⅺ J微生物限度检查法 GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分：产品中微生物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》

初始污染菌方法验证精编版

初始污染菌方法验证公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]

1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。无菌操作台必需定期进行洁净度检测?试验前提前开紫外灯15min 后方可进行实验操作。过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌?使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 %无菌氯化钠溶液。培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

初始污染菌方法验证修订稿

初始污染菌方法验证 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-

2015初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证方案产品名称:一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核: 日期：批准: 日期：江西狼与医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案 1。概述 2。验证目得３.职责与验证申请 4.验证依据 5．验证计划 6。验证内容初始污染菌实验方法验证方案 1、概述：初始污染菌得数量可以反映出车间环境卫生得清洁度,与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系,故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性,从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品得安全性. 2、目得:?通过实验验证检测方法得适用性及计数用培养基得适用性。 3、职责与验证申请: ３、1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。３、2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表

４、依据: 《中国药典》2０15版 5、验证计划： 5、１实验操作人员确认； 5、2实验室实验设备及器材得确认; ５、３产品取样及方法确认。 6、验证内容: 6、1菌种与菌液制备 6、1、1 菌种试验用菌株得传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0 代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性. 6、１、２菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌得培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,３0?35℃培养18?２4小时;接种白色念珠菌得培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,20?25℃培养2—３天，上述培养后得新鲜培养物用PH7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或０、9％无菌化钠溶液制成每ｌｍl菌数小于１0０cfu（菌落形成)得菌悬液.接种黑曲霉得培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上,20?2５℃培养5?7天,加人３?５ml 0、05%（ml/ml) 聚山梨酯80得pH7、０无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后,采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0、0５％（ml／mｌ)聚山梨醋80得pＨ7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成每lｍl孢子数量小于1０0cfｕ得孢子悬液. 菌悬液若在室温下放置,应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在２4h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?８℃,在验证过得贮存期内用.

初始污染菌方法验证[参考内容]

1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。 2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。 3.职责质量检验人员负责执行此规程。 4.依据标准及相关文件 2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录Ⅺ J 微生物限度检查法 GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分产品中微生物数量的估计》 GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》 5.试验产品 6.注意事项 6.1 本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。 6.2 无菌操作台必需定期进行洁净度检测验前提前开紫外灯15min 后方可进行实验操作。 6.3 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。 7.器材与试剂 7.1 器材 35℃恒温培养箱、23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环 7.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。 pH 7.0 无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液 0.9%无菌氯化钠溶液。 7.3 培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。 8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 8.1 菌种

初始污染菌数检测

一、目的：为测试灭菌前以及内包装袋的初始污染菌是否符合标准。二、适用范围：本厂产品以及包装袋。三、引用标准：GB15980-1995 四、所用的仪器和设备 1、高压消毒锅：使用时严格按照仪器说明书操作。 2、恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 3、培养皿：一般采用90mm×15mm的硼酸玻璃培养皿。 4、生理盐水：浓度为0.9% 5、灭菌规格板：5×5cm；玻璃试管：13×150mm 6、培养基：普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见试剂说明书五、、操作步骤 1、对敷料类可用无菌手续取10g，放入100mL灭菌生理盐水中，充分震荡80次后。取各管洗液进行检测。 2、对导管类:选取三套新制备的样品，在净化操作台上，将每套样品用无菌的剪刀剪成大约1厘米长的段，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加50毫升生理盐水，加塞，充分震荡，使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱，然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。将每一样本洗液充分均匀后，接种2个平皿，每个平皿加入1ml 洗液。当估计含菌量过高时（每个平板生长菌落数超过300个），应对洗液进行稀释倍数再接种，一般需2-3个不同稀释度，每吸取一个稀释度洗液，更换一支无菌吸管。 3、将凉至45℃普通琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿约15-20ml培养基。 4、将培养基与样液小心摇匀，待琼脂凝固后倒置平皿，置37℃培养箱内培养48h，计算最终结果菌落数。六、采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。

七、结果计算计算公式为：菌数/每件次（或g）= 平均菌数×稀释倍数---------------------(C2) 件次或重量（g）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、细菌数测定（37±1℃，3天）

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1. 目的检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。 2. 适用范围适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。 3.职责由质检部负责执行实施。 4.技术要求产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g 5.引用标准 GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典（2015版） GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法 6.试剂和培养基 6.1洗脱液0.9%Nacl 称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。 6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH 为7.3±0.2，灭菌分装。 6.3玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为6.0±0.2，灭菌分装。 7.仪器设备锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球 8.操作方法 8.1样品处理 8.1.1无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。 8.1.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。 8.2接种 8.2.1需厌氧菌取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。 8.2.1霉菌取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。 8.3培养需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证 Revised by Jack on December 14,2020

质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表 4.依据：《中国药典》2015版 5.验证计划：实验操作人员确认；实验室实验设备及器材的确认；产品取样及方法确认。 6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035℃培养1824小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，2025℃培养57 天，加人35 ml %(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1、准备工作 1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。 2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品. 3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。 4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。 2、试验步骤： 1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。 2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。 3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。制备2个平板均不得有菌生长。 3、注意事项： 1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。 2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。编制：审核：批准：

ZC-14-8 初始污染菌监测操作规程 1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。 2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。 3生物负载测定方法 A.1概要 A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。负责进行测定的人员应运用原材料、部件、生产环境、生产过程和产品的特性方面的知识为每一步选择适当的方法。 A.1.2图A.1给出了生物负载测定程序主要步骤和顺序。建议负责人员在决定取样率、培养基范围和培养条件以及方法开发和确认水平时要根据情况而定。样品选择试验样品的收集送人实验室处理(如果需要)TREATMENT TEBHNIQUES 移人培养基

初始污染菌实验方法验证

初始污染菌实验方法验证标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]

4.依据：《中国药典》2015版 5.验证计划： 5.1实验操作人员确认； 5.2实验室实验设备及器材的确认； 5.3产品取样及方法确认。 6.验证内容： 6.1菌种和菌液制备 6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 6.1.2菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠- 蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。 6.2计数培养基适用性检查

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程 1。目的检测产品、原料、辅料实际带菌(活的微生物群）的数目。２．适用范围适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。 3．职责由质检部负责执行实施。 4.技术要求产品、原料初始污染菌数:≤100ｃfu/ｇ５。引用标准 GB 1５979—200２＿一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典（２015版） GB/T142３３。２-２０0５医用输液、输血、注射器具检验方法第２部分:生物学试验方法 6。试剂和培养基 6。1洗脱液0．9%Nacl 称好９gNaCｌ溶于1000mｌ蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解,灭菌备用。 6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基取胰蛋白胨大豆琼脂培养基３8g,加入1000ｍl蒸馏水中,微温溶解后,调节PH为7。3±0。2, 灭菌分装。 6.3玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基３1。5 g,加入1000ｍl蒸馏水中，微温溶解后,调节PH为6．0±0。2，灭菌分装。 7.仪器设备

锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球 8.操作方法 8．1样品处理 8.１。１无菌称取１0g可以破坏性类供试品，放入10０mｌ灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中５~10miｎ,作为1:10供试液。 8。1。2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样,被采表面积100cm２.加入灭菌生理盐水10０mｌ。保温于4５℃水浴中５～1０min，不时振摇，作为1：10的供试液。 8。2接种 8.2.1需厌氧菌取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ｍl供试液,接种３支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照. 8。２。1霉菌取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中,每支平皿接种1mｌ供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。８.3培养需厌氧培养基置于３7℃培养3ｄ,霉菌培养置于28℃培养５d 9。观察计数达到培养时间后,观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数,记录每个平皿菌落数 10.结果计算与报告 10.１公式污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数／克重 10。２菌落计数基本规则选取平均菌落数在30～30０之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。菌落计数的报告,菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时,采用二位有效数字,在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算．在报