彗星图片

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篇一：彗星实验原理和方法

彗星实验原理

彗星实验方法步骤

威斯腾生物400-675-6758

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篇二：彗星实验要点

1、凋亡细胞的观察：看过国外此法作出的凋亡细胞彗星图像，很漂亮，用CASP软件分析后，其曲线呈典型的双峰，而正常细胞为单峰。我的一些教训：观察凋亡细胞最好把电压、电流、和电泳时间均调低，否则，凋亡细胞中的DNA片断跑的太块，荧光下根本看不到凋亡细胞的尾巴。注：我用的是中性条件，20V，200mA,20min, 凋亡细胞观察宜选用10V,100mA,10min。朋友们如果有异议，请不吝赐教，也对我有所帮助。

2、

解旋20分钟应该没问题，但是我认为您的电泳时间过长，当然我不知道您的电泳条件（电压、电流、），我认为20分钟足够了，时间长了一是浪费时间，二是彗星图像不好，不利于分析。您的裂解时间有点短了，文献报道，最好不要少于1.5小时

3、一般100ul0.5％低熔点胶中含400个细胞就足够了

4、本版【图片仓库】子版有我做的彗星图像，感兴趣可以看看

5、注意，CASP只读.tif扩展名的图像，如果你的相机拍摄的图像可以有.tif格式，就更好了，如果是.jpg格式，那还要在计算机中转换一下，不过很简单

6、首先，荧光染色的东西最好马上看，否则影响结果。

其次，您的染色液量我觉得多了点，我用2ug/ml，1ml注射器1滴就可以。第三，要忠于实验结果，图象内容不能更改，可以用ACDSEE或PHOTOSHOP转换图象格式或大小，所以，作出来的实验图象质量要好

7、。背景的选择问题，如果图片质量好的话，背景大小不同，对结果影响不是很大，如果图片背景乱七八糟，那背景框的选择肯定对结果产生很大影响。我的建议：背景框不要太大，参考我贴的那个图。注意，背景框可以在细胞的上面或下面，如果背景框在上面时，分析后的图像（分析后出现一个头、尾分明的图像，是基本重合在细胞上的）质量很差，很不规则，那再把背景框调到下面试试，如果还是不好，那只能说你的结果质量不好了。背景框的选择关键在于分析同一批细胞，背景框要相同，才能保持资料的可比性。

结果的保存，记得好像使用说明里提到了，如果没有提到，那就是我原创的！！！呵呵，先卖个关子。FILE菜单下有一个EXPORT RESULTS（输出结果）的按钮，点击以后，默认是.TXT 文本文件，好了，给你的输出文件起个名字，选择保存位置，点击确定就OK了，回到你保存的输出结果文件，发现它是一个不可识别的文件，那就直接把它的扩展名改成.TXT，打开它，看看你的结果，包括13个指标，很好，这个.TXT的结果文件可以被SPSS统计软件直接识别，不是很方便吗？？（如果你愿意把数据一个一个地输入统计软件，我也没意见，呵呵）。这里还有一个小窍门，在用SPSS读取之前，最好把你的结果文件调整一下，这也是我发现的。把所有的指标都排列到第一行，下面的结果要和指标一一对应，每个数据之间留空格（默认的），行与行之间不要用回车，就是不要有空行，其实调整起来很简单，主要是调节.TXT文本文件阅读框的宽度。调好后，SPSS软件直接识别，很方便，为你节省很大

工作量，不信就试试。

8、我用双层铺胶法，自制微电泳槽，第一层:0.75％正常熔点胶，100μl，

第二层：0.75％低熔点胶，75μl+25μl淋巴细胞悬液，用枪直接把凝胶吹到自制的微电泳槽中，铺平即可。第二层以相同的方法铺到第一层上面，不必担心脱胶的问题。

9、盖玻片用普通的就可以了，但是可以自做的，普通的盖玻片其实有点小了，如果胶很多的话，第二层胶非常厚，这样不利于观察细胞，而且不利于电泳。

3。染色后要用双蒸水冲洗，据我的经验，冲要冲的非常干净，否则背景太亮了，拍照后不容易分析。但是又不能使劲的冲，否则胶很容易掉下来。

4。电泳的时间一般是20分钟，电压各个细胞是不同的，你可以查查有关资料，自己做做预试验。一般情况下，对照组的细胞的tail DNA%应为10%左右，不超过20%，如果尾巴太短了，也不好。

5。分析要用荧光显微镜的，具体的染液，有不同的激发波长。casp软件在前面的帖子中就有。很好用的，在推荐一次哦。最好用显微镜自带的相机，如果你的技术好的话，可以在目镜照相，洗出来扫描后可以分析的。

6.把EB滴加在胶上就可以了。观察时要在暗室里。

我是用EB的，电泳后，直接在胶板上滴上一滴，然后用水冲洗，用滤纸吸去多余水分，荧光显微镜观察

10、SCGE技术的原理：

细胞核中的DNA为负超螺旋结构，而且很致密，通常DNA双链以组蛋白为核心，盘旋而形成核小体。一般情况下，偶然的DNA单链断裂对核酸分子双股结构的连续性影响不大，而且不易释放出来，但是，如果用去污剂破坏细胞膜和核膜，用高浓度盐提取组蛋白，DNA 残留而形成类核。如果类核中的DNA有断裂，断裂点将引起DNA致密的超螺旋结构松散，在类核外形成一个DNA晕圈。将类核置于电场中电泳，DNA断片可从类核部位向阳极迁移，经荧光染色后，在阳极方向可见形似彗星的特征性图像，故称“彗星试验”。彗星尾部即为迁移出类核的DNA片段。此时彗星尾部有可能还与头部以单链或双链的形式相连。DNA损伤越严重，导致DNA超螺旋结构越松散，产生的断裂点越多，DNA片段越小，从而在彗星尾部出现的DNA断片越多，则慧尾的长度、面积和荧光强度越大。通过测量彗星尾部的长度、面积或荧光强度等指标，可以对DNA的损伤程度进行定量分析。

随着SCGE技术的发展，可测量的指标也越来越多，而且更准确。目前，用于SCGE分析的指标主要分为四类，包括形状指标、距离指标、强度指标和矩类指标。其中形状指标有彗星细胞率；距离指标包括彗星尾长、彗星全长、彗星头部半径、尾部半径；强度指标包括头部DNA百分含量、尾部DNA百分含量、头部面积、尾部面积等；矩类指标包括尾矩、Olive尾矩等。

11、H2O2是作为阳性对照的吧？它是标准的断裂剂。但是不同的细胞对它的敏感程度是不同的，我觉得前几个数据有必要删掉，30微摩尔以下的浓度应该是会造成断裂的。．PI 染色我见过，染出来的效果也是很不错，是蓝色的。不一定用EB染色呀，毒性又大。12、单细胞琼脂糖凝胶电泳（comet assay）

Single Cell Agarose Gel Electrophoresis (SCGE)

步骤：

一、细胞悬液的制备：

1. 吸弃旧培养基，D-Hanks冲洗2遍

2. 0.25%胰酶消化，待细胞变圆，间隙增大，立即终止消化，用弯头吸管轻轻吹打细胞，使成细胞悬液，加入离心管，1000rpm，离心10min，弃上清，以1mlD-Hanks悬浮细胞，以上应在暗室及较低温度下进行。各组收集细胞2~3×106个，必须分散成单个。悬浮于

1mlPh7.4PBS中，此步在暗室及较低温度下进行。

二、玻片制备：

1. 玻片磨砂。

2. 制备0.5%正常熔点琼脂糖(NMPA)和0.5%低熔点琼脂糖(LMPA)各20ml。用pH7.4 PBS 配制。称0.1g溶于20mlPBS，如NMA与玻片附着不紧，可升高其浓度至0.65%。

铺第一层胶：0.5%NMPA 100μl于磨砂玻片面，迅速盖上盖玻片，室温>5min使其固化，即为第一层胶；

第二层胶：37℃0.5%LMPA 100μl+30-50μl（1-2x106）细胞悬液(10:1)混匀，迅速铺于第一层胶上，盖新盖玻片，移入冰箱>5min，使其固化。

* 余下的细胞1000g×10min离心，于0.1-0.2ml悬浮缓冲液中混匀，做Western-blot。

三、细胞溶解：

1. 玻片缓缓浸入新鲜配制的冰凉细胞溶解液中，4℃>1小时或过夜。玻片在细胞消化液中可至少存放4周。

细胞溶解液配制

NaCl 146.1 g

Na2EDTA 37.2 g

Tris base 1.2 g

用约12克NaOH调节pH至10。

用去离子水定容至890ml。过滤除菌，为贮备液。室温保存。

应用液

加入Triton X-100 至1%

DMSO 至10%（消除血液或动物组织中血红蛋白释放的铁产生的自由基）应用前冷藏30~60分钟。

4、碱化处理及电泳：取出玻片，放入水平电泳槽中(正极端)，并列放置，不留空隙。倒入新鲜配制的冰冷电泳缓冲应用液，高于胶2mm，无气泡。放置10~30分钟，本室一般采用15min，使DNA解链。25V, 300mA电泳20分钟。通过调节液面来调电压。(电压先调到最大，电流300mA然后通过液面来调节电压) 电泳缓冲应用液：

10N NaOH 30.0 ml（12克）

200mM EDTA 5.0 ml （二钠为0.372g）

(附言：电泳缓冲液储备液：

10N NaOH 200g/500ml水，两周内用。

200mM EDTA 14.89g/200ml水，pH=10,室温保存。）

定容至1000ml，混匀，电泳前新鲜配制。

可通过改变液面高度来调节电压。

5、中和：

切断电源，取出玻片，置染缸，中和缓冲液浸洗，3次×5min。

中和缓冲液：

Tris base 48.5 g

去离子水定容至1000ml

用>10 N HCl调节pH至7.5。室温保存。

6、染色

呈中性后，凉干玻片，50μl EB应用液染色，盖上新盖玻片。

EB染色液(10×贮备液)

EB 1 mg 去离子水20 ml 室温避光保存。临用时将贮备液稀释10倍。使终浓度为5μg/ml 以上除中和及染色外，各步均应在暗处进行，以避免额外的DNA损伤。

7、镜检及结果评价

EB染色后的DNA样品应尽快在荧光显微镜下观察。未受损细胞表现为以圆形荧光核心，即彗星头部，没有尾巴。受损细胞则有彗尾伸向阳极，形成一个亮的头部和尾部。用目镜测微尺或拍摄×400倍照片再作判断。每个样品中至少随机挑选25个细胞测定。彗星尾长度<35μm为未损伤，35-70μm为中度损伤，>70μm为重度损伤

裂解液中，最难溶解的是SLS,它在中性的时候不易溶于水，所以你把其他的药品加进去后，先不要加SLS，这里需要磁力搅拌器搅拌，但是时间不会很长。溶解后，用NaoH把PH调到10，这里调PH值要用NaoH固体，然后把SLS加进去，在用磁力搅拌器搅拌，一般需要加热，50度左右就可以了。大约搅拌1个小时就可以溶解。这时，溶液应该是透明的，不是乳白色的。加热溶解的过程中，可能会损失一定的水分，等搅拌完了后，你要把溶液的量补充到你最后需要的体积。当你从冰箱中取出裂解液后，裂解液如果有沉淀，你就把它放在37度水浴中让它充分溶解，然后把DMSO和Triton-100加进去，这时，还是乳白色的，你把他放在37度中放一会就可以了。注意，溶液的颜色是透明清亮的，浑浊的话，不能起到裂解的效果，最后跑不出彗星来。

中性条件跑出来的是DNA的双链，单链断裂不会出来，而强碱性条件下，破坏了断裂部位连接碱基的氢键，这样，双链断裂也就成了单链形式，可以说碱性检测的是“双链和单链断裂的综合损伤”，两种电泳条件的最大区别是适用于不同的实验需求。碱性条件的SCGE 的建立也是为了满足不同实验需要。实践中要根据DNA致伤因素选择实验条件，如：电离辐射对DNA的损伤以双链断裂为主，应该选择中性SCGE，而且可以排除环境因素对DNA 损伤的影响（因为DNA很容易受到环境因素的影响而断裂－－单链为主），如果用碱性的话，就不能区分哪些是实验因素引起的断裂，哪些是其它影响因素引起的断裂。如果实验致伤因素是以DNA单链为主，那就应该选择碱性SCGE了。

有一点需要说明一下，碱性SCGE确实增加了检测的敏感性（中性SCGE达不到），但牺牲了特异性，DNA很容易受许多因素的影响而产生断裂，如吸烟、饮酒等不良生活习惯、环境污染等因素。所以碱性条件很难从实验结果中剔除哪些是非实验致伤因素造成的，对实验结果会或多或少有点影响。所以说SCGE条件的选择主要还要根据实验的需要来定。

我在下面这个帖子里说的“碱性SCGE在大剂量照射时的各项指标容易形成平台”这句话是相对中性SCGE而言的，因为碱性SCGE的检测敏感范围要比中性SCGE的敏感范围低，即碱性在小剂量范围敏感（灵敏到0.05Gy），中性SCGE在较大剂量范围敏感。（我已经在这个帖子里做了相应的强调修改），科研工作者非常需要littlesheep04这样一丝不苟的精神（钦佩！），在科研中甚至要作到“斤斤计较”，这样才容易发现问题，许多没有结果的实验找不到问题那岂不是很悲哀？呵呵，看来对某一句话的理解还要考虑语境啊，“碱性SCGE 在大剂量照射时的各项指标容易形成平台”这句话如果单拿出来的话，它本身的描述不够准确，应该是某些指标（如长度指标TL、CL）容易形成平台，中性SCGE也有这个问题，而矩类指标不会出现平台（当然，哪个指标都会有它的敏感检测范围），这样，这句话的目的就是说明矩类指标优于长度指标的。呵呵，脱离了语境，某句话的目的也就大不相同了。我做彗星的几点体会：

1 正常熔点琼脂糖我用的0.6%，低熔点我用的0.7%。

2 把普通载玻片拿去玻璃厂磨成磨砂玻片，也不贵。磨几百张肯定够用了。

3 我通常在烧杯里配100ml左右的正常熔点琼脂糖，煮沸之后把磨砂玻片放进去，让胶液浸过磨砂面之后，捞出玻片，用布或者别的什么把光滑面擦干，然后把玻片水平放置，晾干。这样第一层胶就铺好了，玻片放多长时间都行。做彗星的时候直接往上铺第二层胶和细胞的混合液就行

了。可以一次处理很多玻片放着慢慢用，特别节约时间。

4 裂解很重要。裂解液最好每次新鲜配置，pH值要调得比较准确才行。我用人外周血淋巴细胞时，裂解1h就行了。有些细胞可能需要比较长的时间，我们实验室也有裂解过夜的。

5 不同的细胞用于彗星试验时，需要的电压可能不同，口腔颊黏膜细胞用18V电压比较合适，有很多细胞株需要20V或者25V。要做预试验摸一下条件。

6 用EB染色效果挺好，也便宜。只要注意防护就行了。

7 如果要保存，可以用乙醇进行脱水，观察前再染色。

篇三：天文组织公布十大夜空美图[组图]

天文组织公布十大夜空美图[组图]

美国“天文学家无国界”组织(AWB)目前正在推行一个名为“夜空下的世界”(TW AN)的项目。该项目通过拍摄并展览一系列夜色星空下的美丽照片，帮助人们重新认识人类在宇宙中的位置，进而激发他们的探索精神。

神奇的地球仪8字曲线：在本图中，那些亮点组成的图案，就是所谓的“地球仪8字曲线”(Analemma)。该曲线就是在一年中每一天的同一时间于同一地点所拍摄的太阳轨迹。

美国犹他州上空繁星点点：图片中显示的美国犹他州和亚利桑那州边境上空的美丽夜景，明亮的星星照亮了整个夜空，给荒芜的山谷蒙上了一层神秘的浪漫色彩。目前，国际天文学联合会正在联合多个组织，如“捍卫夜间星光”、“国际暗夜周”、“国际路边天文夜”、“天文学家无国界”以及“夜间世界”等，共同在这一地区拍摄各种极具启发性夜色照片。上述组织向参加摄影师提供的帮助包括胶片、主题景点的描述、相关历史、文化或者环境方面的介绍，同时还摄影师们灌输环保理念，以及相关的类似于和平、生态和光污染等全球性问题。

满月映衬下的世界四大著名景点：本图显示的是夜晚升起于世界四大著名景点上空的满月。从左上图起按顺时针方向看，四幅子图分别是：印度阿格拉市郊的泰姬陵、希腊苏尼翁海岬的海王波塞冬神殿、伊朗设拉子市的波斯波利斯古城遗址以及亚利桑那州的仙人掌国家公园。泰姬陵是印度知名度最高的古迹之一，位于距印度新德里约200多公里外的阿格拉城内，是莫卧儿王朝第5代皇帝沙贾汗为了纪念已故皇后而修建的陵墓，被誉为“完美建筑”。仙人掌国家公园位于美国亚利桑那州南部，靠近墨西哥边境。景区总面积约369平方公里，主要分为两部分，一部分位于东郊，另外一部分位于西郊。这是一个以欣赏仙人掌和沙漠风光为特色的国家公园。

彗星从英国巨石阵上空划过：本图是1997年海尔-波普彗星飞越巨石阵上空时被摄影师拍下来的照片。西蒙斯认为，这幅图也许可以将人类的现在与过去和将来联系到一起。该彗星上次出现于巨石阵上空大约是4000千年前。当它再一次回来时，预计是在2000年后。英国巨石阵大约建于公元前3100年。关于巨石阵的用途，至今颇具争议。有人认为这是一种典型的古代葬礼或祭祀遗址，同时也有人认为它还是一种天文观测站。一圈高大的石块与一些竖立的巨石形成了一个半开口形状的阵列。开口方向恰好指向夏至日太阳升起的方向。矗立在英国南部索尔兹伯里平原上的巨石阵，是英国最重要、最神秘的历史遗迹之一。多数考古学家认为，它既是天文观测站，也是古代宗教遗迹。

麦克诺特彗星飞越智利上空：2007年，麦克诺特彗星飞越智利上空。它的出现也成就了本图摄影师作为世界最优秀摄影师的名声，本图拍摄于安第斯山脉上一处海拔很高的地点。从图中看，该彗星正扫过智利圣地亚哥上空。麦克诺特彗星是麦克诺特于2006年发现的，它来自于奥尔特星云，并首次接近太阳。麦克诺特彗星的彗核迅速汽化后，宇宙尘埃形成的彗尾长达几万公里。与其他彗星不同的是，麦克诺特彗星不会周期性地光临地球，在这次露面之后，它将缓慢地回归奥尔特星云。麦克诺特彗星的亮度超过金星，在智利境内未来数月都能观测到，但随着它离太阳越来越远，其亮度和能量都会逐渐减弱。