高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

实验室应用案例高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

2018年3月

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1摘要

本文建立了一种根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片黄芪中黄芪甲苷苷含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁苷保留时间RSD%在0.17%，峰面积RSD%为1.64%。

关键词：中药饮片黄芪黄芪甲苷 E800型蒸发光散射检测器高效液相色谱黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物，有“超级黄芪多糖”之称。黄芪甲苷能增强

机体免疫力、提高机体的抗病能力。

黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。

图1 黄芪甲苷结构式

2检测部分

2.1仪器

本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。

2.2 分析条件

色谱柱：岛津WondaSil C18 Superb 5um

流动相：乙腈：水=32:68（V/V）

流速：1ml/min

柱温：35℃

气体流量：2.8L/min

蒸发温度：75℃

进样量：10μL

等度洗脱

2.3 标准品溶液的配制和样品处理

标准品品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

样品溶液的制备取干燥的黄芪切片，粉碎后，取中粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得黄芪样品溶液。

3结果

3.1 标样的色谱图

图2 0.5mg/ml标准品色谱图

3.2 线性关系

将配制浓度为0.5mg/ml的标准溶液，分别精密吸取对照品溶液2.5μL、5μL、10μL、15μL、20μL，供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积对数为横坐标，已进样量对数为纵坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。标准品的浓度及峰

面积的结果见表1。

图3 黄芪甲苷的标准曲线表1 黄芪甲苷进样量及峰面积

3.3 精密度试验

50mg/ml的苦杏仁苷标准品连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果

如表2所示：

序号保留峰面积

1 11.591 142152

2 11.542 145212

3 11.458 144879

4 11.523 148721

5 11.542 148524

6 11.554 144258

平均11.535 145624

RSD% 0.381 1.750

表2 黄芪甲苷重复性数据（n=6）

3.4 样品测试

使用2.3配制好的黄芪甲苷样品溶液得出图4图谱：

图4 黄芪样品图谱

表3 黄芪中黄芪甲苷测定结果

4结论

经方法有效性测试，本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好，保留时间RSD%=0.38%（n=6），小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.75%（n=6），小于国家要求2.0%以内。并且峰形完好，拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测黄芪中黄芪甲苷的含量。

5客户现场照片

黄芪甲苷的测定方法

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较 黄芪甲苷为黄芪的主要活性成分之一。能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。现代药理研究表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。近年来，对黄芪甲苷的含量测定方法的研究很多。本人就几种常用方法作一比较。 1高效液相色谱法(I-R_C法) HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。 1．1 HPLC—uv法黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收f max200．8 nm)。紫外检测灵敏度低，干扰因素多，目前HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。苏瑞强Ⅲ等采用HPLC法测定黄芪甲苷的含量，色谱柱为YWG—C18柱0．9 mm x250 mm，5 m)，流动相为乙腈一水(1：2．3)，检测波长为203nm，结果线性范围为0．86—5．27 I,L g／mL，加样回收率为97．52％，RSD为3．10％。 1．2 HPLC一示差折光检测法由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精12I服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersi|ODS 2(4．6ram X 200ram，5 I,Lm)，流动相为甲醇一水(67：33)，结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g／ml，回收率为98．1％，RSD为2．02％。该法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确、可靠。 1．3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量。色谱柱为Nova—PakC18柱0．9ram xl5Omm，4la,m)，流动相为乙腈一水一磷酸(1：2：O．1)，检测波长为203nm，柱温为40％。实验中将样品蒸干，采用水饱和的正丁醇溶解，用氨试液洗涤后蒸干，残渣用甲醇溶解。结果加样回收率为94．7％，RSD为2．6％。该法简便、稳定性好、重珊陆好、灵敏度高，且由于在流动相中加入磷酸，可使基线平稳，样品峰与其他峰达到基线分离。郑志仁等H将药材置索氏提取器提取1 h后采用RP—HPLC法测定提取液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Nueleosil c 18柱，流动相为乙腈一水(1：2)，检测波长为205rim。结果黄芪甲苷线性范围是l0．64～53．20I．L g／mL，加样回收率为92．66％。 1．4 HPLC—ELSD法蒸发光散射检测原理是使流动相溶剂喷雾汽化，进入加热管后溶剂挥发；被分析检测的物质颗粒经镭射光产生散射，散射光由光电倍增管收集得到响应，光散射检测器的响应大小决定由被分析物质的颗粒的数量和大小，而不受流动相溶剂的干扰；不要求被检测组分有特定的化学结构。赵灵芝等15]采用HPLC—ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量，以Blite—ODS柱为色谱柱，乙腈一水(36：64)为流动相，流速为0．8ml／rain；ELSD参数中漂移管温度为100℃，N 流速为2．74ml／min。结果黄芪甲苷线性范围是2．016～12．096g，加样回收率为97．43％，RSD为1．57％。该法灵敏度高，分离度好，干扰少，前处理简便，回收率高，重现性好。周春玲等对甲醇一水(4o：6o)、四氢呋喃一水(25：75)及乙腈一水(1：21等不同流动相进行了试验，并考察了黄芪甲苷的分离情况及检测灵敏度，同时通过观察峰面积、基线噪音和信噪比，研究了漂移管温度和气体流速等ELSD参数条件。结果表明，采用乙腈一水(1：2)为流动相时，分离情况最好；最佳的测定参数是漂移管温度为105 oC，气体流速为2．96L／rain；样品加样回收率为100．5％，RSD为3．23％。该法分离度好，精密度和重珊性俱佳，回收率高。 1．5 HPLC—MS法高效液相一质谱(HPLC—Ms)联用仪是当前天然药物的成分、药理与临床研究中最重要的联用仪器，能解决复杂成分样品的定性、定量问题。顾泳川等[61建立HPLC—MS法测定大鼠尿中黄芪甲苷的含量，并对其尿药动力学进行研究。采用Diamonsil TMC18柱为色谱柱；乙腈一水(40：60)为流动相；电喷雾离子化接口的四级质谱检测器，内标为地高辛，选择性离子检测(sIM1。实验中尿样加入地高辛混匀离心后，上清液通过已活化的固相萃取小柱，用3ml水淋洗，残渣用2ml甲醇洗脱，N：吹干后用流动相溶解。该法专属性好，方法灵敏度高，最低检测限为lOng／ml，杂质干扰小，操作简便，是检测体内黄芪甲苷的一种新型有效的分析方法。 2 薄层扫描法fLcs法) TLCS法多采用双波长扫描法，能消除有机成分的干扰及操作误差，使测定的灵敏度和准确度提高，一般有内标法和外标法。 2．1普通TLCS法实验中样品用氢氧化钾液提取除去酸性成分，以正丁醇萃取使背景干扰少，用大孔树脂分离皂苷除去样品中糖类等水溶性杂质，并在层析缸中放一小杯氨水，使斑点分离明显；采用硅胶G板，以氯仿一甲醇一水(65：35：lO) 为展开剂，在氨饱和蒸气环境下展开，喷以10％硫酸乙醇溶液后加热显色。加样回收率为97．39％，RSD为1．4％。将样品超声提取后，在硅胶GF254板上以氯仿一醋酸乙酯一甲醇(8：

黄芪叶中黄芪甲苷含量测定论文

黄芪叶中黄芪甲苷含量测定论文 黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿托毒等功效.黄芪药用价值很高，临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一，它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆CAMP含量，促进小鼠再生肝DNA合成和增强免疫功能等多种作用.因此在研究黄芪过程中，我们对其成分黄芪甲苷进行了含量测定方法研究，本文用HPLC法测定黄芪甲苷的含量，其样品浓度的范围在0.01～0.2mg/ml之间与峰面积呈线性，该法灵敏度高，重现性好，可准确地测定黄芪甲苷的含量。 1仪器与试剂 Waters高效液相色谱仪：包括510型泵，991光电二极管阵列型检测器，U6K 型进样器；NECPowerMate型计算机，黄芪甲苷标准品购自辽宁省药品检验所。甲醇、正丁醇为分析纯，乙腈为色谱纯、水为去离子水。试验用黄芪叶6月份采自沈阳医学院草药园。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为NucleosilC18柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相为乙腈-水＝1∶2；流速为0.8ml/min；检测波长为205nm；速度为0.4mm/min。 2.2标准曲线制作精密称取黄芪甲苷标准品2.128mg，加流动相定容至2ml，配制成1.064mg/ml的标准品溶液，分别以10、20、30、40、50μl进样测定，以峰面积对进样量作线性回归，得回归方程为Y＝－5.6×10-5＋6.9365×10-4X(Y为峰面积，X为黄芪甲苷量)，r＝0.9994，黄芪甲苷标准品在10.64～5 3.20μg范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.3提取方法的选择用3种不同提取方法(索氏提取器提取1h；80℃温浸提取1h和超声波提取1h)提取样品，后2种提取方法测得黄氏甲苷含量略低，故选索氏提取器提取方法。 2.4流动相的选择实验试用多种溶剂系统，最后确定以乙腈-水＝1∶2为流动相，黄芪甲苷分离效果最好，保留时间也较适宜。色谱图见上图2(ABC)。 2.5样品液制备将黄芪叶阴干后研成粉过40目筛，然后精密称取5.00g，放置索氏提取器中，用100ml80%甲醇加热提取2h，提取液减压蒸去甲醇，用20ml

黄芪甲苷的测定方法

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较 为黄芪的主要活性成分之一。能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。现代药理研究表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。近年来，对的含量测定方法的研究很多。本人就几种常用方法作一比较。 1高效液相色谱法(I-R_C法) HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。 1．1 HPLC—uv法属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收f max200．8 nm)。紫外检测灵敏度低，干扰因素多，目前 HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。苏瑞强Ⅲ等采用 HPLC法测定黄芪甲苷的含量，色谱柱为YWG—C18柱0．9 mm x250 mm，5 m)，流动相为乙腈一水(1：2．3)，检测波长为 203nm，结果线性范围为0．86—5．27 I,L g／mL，加样回收率为 97．52％，RSD为3．10％。 1．2 HPLC一示差折光检测法由于在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精 12I服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersi|ODS 2(4．6ram X 200ram，5 I,Lm)，流动相为甲醇一水(67：33)，结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g／ml，回收率为98．1％，RSD为2．02％。该法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确、可靠。 1．3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中的含量。色谱柱为Nova—PakC18柱0．9ram xl5Omm，4la,m)，流动相为乙腈一水一磷酸(1：2：O．1)，检测波长为203nm，柱温为40％。实验中将样品蒸干，采用水饱和的正丁醇溶解，用氨试液洗涤后蒸干，残渣用甲醇溶解。结果加样回收率为94．7％，RSD为2．6％。该法简便、稳定性好、重珊陆好、灵敏度高，且由于在流动相中加入磷酸，可使基线平稳，样品峰与其他峰达到基线分离。郑志仁等H将药材置索氏提取器提取1 h后采用RP—HPLC法测定提取液中的含量，色谱柱为Nueleosil c 18柱，流动相为乙腈一水(1：2)，检测波长为205rim。结果黄芪甲苷线性范围是l0．64～ 53．20I．L g／mL，加样回收率为92．66％。 1．4 HPLC—ELSD法蒸发光散射检测原理是使流动相溶剂喷雾汽化，进入加热管后溶剂挥发；被分析检测的物质颗粒经镭射光产生散射，散射光由光电倍增管收集得到响应，光散射检测器的响应大小决定由被分析物质的颗粒的数量和大小，而不受流动相溶剂的干扰；不要求被检测组分有特定的化学结构。赵灵芝等15]采用HPLC—ELSD法测定黄芪中的含量，以Blite—ODS柱为色谱柱，乙腈一水(36：64)为流动相，流速为0．8ml ／rain；ELSD参数中漂移管温度为100℃，N 流速为2．74ml／min。结果黄芪甲苷线性范围是2．016～ 12．096g，加样回收率为97．43％，RSD 为1．57％。该法灵敏度高，分离度好，干扰少，前处理简便，回收率高，重现性好。周春玲等对甲醇一水(4o：6o)、四氢呋喃一水(25：75)及乙腈一水 (1：21等不同流动相进行了试验，并考察了的分离情况及检测灵敏度，同时通过观察峰面积、基线噪音和信噪比，研究了漂移管温度和气体流速等ELSD参数条件。结果表明，采用乙腈一水(1：2)为流动相时，分离情况最好；最佳的测定参数是漂移管温度为105 oC，气体流速为2．96L／rain；样品加样回收率为100．5％，RSD为3．23％。该法分离度好，精密度和重珊性俱佳，回收率高。 1．5 HPLC—MS法高效液相一质谱(HPLC—Ms)联用仪是当前天然药物的成分、药理与临床研究中最重要的联用仪器，能解决复杂成分样品的定性、定量问题。顾泳川等[61建立 HPLC—MS法测定大鼠尿中黄芪甲苷的含量，并对其尿药动力学进行研究。采用Diamonsil TMC18柱为色谱柱；乙腈一水 (40：60)为流动相；电喷雾离子化接口的四级质谱检测器，内标为地高辛，选择性离子检测(sIM1。实验中尿样加入地高辛混匀离心后，上清液通过已活化的固相萃取小柱，用3ml水淋洗，残渣用2ml甲醇洗脱，N：吹干后用流动相溶解。该法专属性好，方法灵敏度高，最低检测限为lOng／ml，杂质干扰小，操作简便，是检测体内的一种新型有效的分析方法。 2 薄层扫描法fLcs法) TLCS法多采用双波长扫描法，能消除有机成分的干扰及操作误差，使测定的灵敏度和准确度提高，一般有内标法和外标法。 2．1普通TLCS法实验中样品用氢氧化钾液提取除去酸性成分，以正丁醇萃取使背景干扰少，用大孔树脂分离皂苷除去样品中糖类等水溶性杂质，并在层析缸中放一小杯氨水，使斑点分离明显；采用硅胶G板，以氯仿一甲醇一水(65：35：lO) 为展开剂，在氨饱和蒸气环境下展开，喷以10％硫酸乙醇溶液后加热显色。加样回收率为97．39％，RSD为1．4％。将样品超声提取后，在硅胶GF254板上以氯仿一醋酸乙酯一甲醇 (8：6：0．8)展开，254 BITI紫外光灯下定位，双波长( s=228 nm， It=370 nm)反射式锯齿扫描测定，平均加样回收率为 99．5％，RSD为2．5％。

HPLC法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量

HPLC法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量 【摘要】目的建立一种准确、简便测定黄芪甲苷含量的分析方法。方法色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水＝1∶2；流速为0.8ml/min；检测波长为205 nm；速度为0.4mm/min。灵敏度为0.1 AUFS,测定了黄芪甲苷的含量，平均回收率为96.1%，RSD为2.15%。结果样品浓度在0.01～0.2mg/ml之间与峰面积成良好的线性关系。结论本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。 【关键词】 HPLC 黄芪叶黄芪叶中黄芪甲苷 【Abstract】 0bjective: Establishes one kind accurately, easily to determine Astragaloside the content the analysis method. Method: The chromatographic column is Nucleosil the C18 column (4.6mm×250mm,5μm); Flowing for methyl cyanide - water =1∶2; The speed of flow is 0.8ml/min; The examination wave length is 205 nm; The speed is 0.4mm/min. The sensitivity is 0.1 AUFS, has determined the Astragaloside content. The average returns-ratio is 96.1%, RSD is 2.15%. Result:Sample density in 0.01～0.2mg/ml becomes the good linear relationship with the peak area.Conclusion: This method's duplication is good, accuracy high, stable. 【Key words】 HPLC Leaf of the Astragalus Astragaloside 黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿

黄芪甲苷

黄芪甲苷 黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ，其中生物活性最好的是黄芪苷IV，即黄芪甲苷。黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。我公司以高纯度黄芪多糖为原料，经过高科技分离技术而得到黄芪苷，并通过水解、活化等一系列先进工艺把黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ转化为更具活性的黄芪甲苷。 1、增强机体免疫力、提高机体的抗病能力。可特异性和非特异性的 排除侵入肌体的异物，对特异、免疫和非特异性免疫均有促进作用，提高机体的抗病能力。能促进机体抗体的生成，可使抗体形成细胞数和溶血测定值显著增强。黄芪甲苷能显著提高球虫免疫鸡的淋巴细胞转化水平和E—玫瑰花环形成率，是单核—巨噬细胞系统的有效激活剂。黄芪甲苷还可以提高氧化作用，提高免疫器官中GSH-PX、SOD活性，提高免疫防御和免疫监视功能。2、抗病毒作用。其抗病毒原理：刺激巨噬细胞和T细胞的功能，使 E环形成细胞数增加，诱生细胞因子，促进白细胞介素诱生，而

使动物机体产生内源性干扰素，从而达到抗病毒的目的。试验证明黄芪甲苷对IBD总保护率可达98.33%，可以有效地预防和治疗IBD，与高免蛋黄液防治效果比较差异不显著；黄芪甲苷可以增强机体体内抗氧化酶系统的功能，降低LP0含量，减少活性氧自由基对机体的损伤，从而降低MD的发病率和死亡率。可改善机体因肿瘤而致的免疫功能低下，促进免疫细胞活化释放内源因子，防止过氧化作用造成对肿瘤细胞的杀伤和抑制；黄芪甲苷具有抑制流感病毒生长及抑制唾液酸酶活性的作用，对流感病毒胞膜功能及影响病毒对敏感细胞的吸附和穿入有明显作用。大大降低禽类的死亡率和产蛋率下降的幅度，且在产蛋率和蛋壳质量恢复方面明显优于仅用金刚烷胺对照组（黄芪多糖的作用不明显）； 黄芪甲苷对ND病毒有较强的杀灭和抑制作用。前提是使用黄芪甲苷先于发现感染ND病毒，因此最好长期使用黄芪甲苷；禽成髓细胞性白血病（AMB）：3日龄AA肉鸡在感染AMB的病毒的同时给予黄芪甲苷，可降低AMB的发病率和死亡率，提高脾和胸腺等免疫器官中的LPO含量，显著加强脾和胸腺等免疫器官对髓源性肿瘤细胞的清除作用；其次，黄芪甲苷对鸡传染性喉气管炎等呼吸道疾病亦具有明显的预防和治疗作用。 3、抗应激功效 黄芪甲苷可阻止应激反应警戒期的肾上腺增生和胸腺萎缩，阻止应激反应抵抗期和衰竭期出现的异常变化从而起到抗应激作用，特别对营养物质代谢过程中酶的双向调节效果显著，在一定程度上减轻和消除

黄芪中黄芪甲苷的含量测定技术

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/bb11033499.html, 黄芪中黄芪甲苷的含量测定技术 作者：刘伟 来源：《中国科技博览》2013年第33期 论文摘要：目的建立荧光分析法测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量方法。方法利用大茴香 酸在硫酸介质中与黄芪甲苷反应产生强烈荧光的特性进行测定黄芪中黄芪甲苷含量。结果最大激发波长Ex为320 nm，最大发射波长Em为387nm。测定样品的平均回收率为97.22%，RSD=2.31%（n=5）。结论该方法灵敏度高，选择性好，结果无干扰，可广泛应用于黄芪药材的质量控制。 主题词：黄芪黄芪甲苷 中图分类号：R927.2 黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicu（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪A.membranaceus（Fisch.）Bge的干燥根，具有补气固表、利尿脱毒，排脓，敛疮生肌等功效。黄芪为常用中药，在中药制剂中以黄芪为君药的产品非常多，因此如何控制黄芪的质量至关重要。黄芪甲苷是黄芪主要有效成分之一，也是黄芪皂苷中具有代表性的单体，在抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等多方面具有显著作用。黄芪甲苷仅在200 nm处有末端吸收，对HPLC色谱法紫外检测器检测不利，噪音对结果影响较大，灵敏度 也较低。2005年版《中国药典》采用蒸发光散射检测器测定，具有分离度好，应用范围宽， 流动相无干扰等优点，但操作繁琐，价格昂贵，不利于制药公司及基层医疗单位普及。本文根据浓硫酸条件下黄芪甲苷与大茴香酸反应产物具有荧光的特性，采用荧光分光光度法测定不同产地、不同生长年限黄芪药材中黄芪甲苷的含量，以期为黄芪的质量控制提供客观的定量评价依据。 1 仪器与试药 Perkin Elmer instruments LS45 Luminesence Spectrometer（美国PerkinElmer 公司LS45型荧光分光光度计），HX-200A型高速中药粉碎机，万分之一电子天平 FA/JA 1004型。72%的硫酸溶液，2%大茴香酸的无水乙醇溶液，石油醚、氯仿、正丁醇（三者均为天津市东丽区天大化学试剂厂产品），甲醇（天津市科密欧化学试剂开发中心产品），无水乙醇（天津市耀华化学试剂有限责任公司产品），以上试剂均为分析纯。 黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所（批号110781-200613）。黄芪药材采集或购于山西，内蒙两省，经山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍副教授鉴定为蒙古黄芪。 2 方法和结果

高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量

实验室应用案例高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量 2018年3月 版权所有? sainaer Corporation 保留所有权利

1摘要 本文建立了一种根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片黄芪中黄芪甲苷苷含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁苷保留时间RSD%在0.17%，峰面积RSD%为1.64%。 关键词：中药饮片黄芪黄芪甲苷 E800型蒸发光散射检测器高效液相色谱黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物，有“超级黄芪多糖”之称。黄芪甲苷能增强 机体免疫力、提高机体的抗病能力。 黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。 图1 黄芪甲苷结构式 2检测部分 2.1仪器 本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。 2.2 分析条件 色谱柱：岛津WondaSil C18 Superb 5um 流动相：乙腈：水=32:68（V/V） 流速：1ml/min 柱温：35℃ 气体流量：2.8L/min 蒸发温度：75℃ 进样量：10μL 等度洗脱

2.3 标准品溶液的配制和样品处理 标准品品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。 样品溶液的制备取干燥的黄芪切片，粉碎后，取中粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得黄芪样品溶液。 3结果 3.1 标样的色谱图 图2 0.5mg/ml标准品色谱图

黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法概述

酌减。(2)对照组:聚肌胞2mg肌注,1次/2d,共10次。儿童酌减。 2　结　果 211　疗效标准　痊愈:皮损全部消退;显效:皮损消退7510%以上;有效:皮损消退2510～7510%;无效:皮损无变化或消退<2510%。 212　疗效比较(见表1)。 表1　两组疗效对照〔例(%)〕 分组总例数痊愈显效有效无效总有效率中药组5223(4412)①9(1713)7(1315)13(2510)39(7510)②对照组326(1818)5(1516)3(914)18(5612)14(4318) 注:与对照组比较,①P<0101;②P<0105 213　副反应　中药组未出现任何不良反应;对照组有1例出现轻微发热,但不影响治疗。两组均未出现面部发红、脱屑等副反应。 214　随访观察　中药组中有28例痊愈患者接受随访1～3个月,有1例在1个月后复发,2例2个月后复发,1例3个月后复发。再次口服中药10剂后又获痊愈。对照组6例痊愈患者接受随访1～3个月,有1例1个月后复发,1例3个月后复发。再次口服中药10剂后又获痊愈。 3　讨　论 扁平疣中医谓之“扁瘊”,认为本病的发生多因气血失和、腠理不密、复感外邪、凝聚皮肤而致病〔1〕,与现代医学认为本病由于机体免疫力低下,病毒感染的观点相吻合。近几年来供治疗用的多种抗病毒及免疫增强新药给患者带来了许多方便,但价格较贵,疗程长。中药治疗以清热解毒、散风平肝为主〔2〕,方中板兰根、紫苏、生苡仁、大青叶、青藤香清热、凉血、解毒、利湿,川木香理气,赤芍活血化淤,诸药合用,共凑清热除湿、活血化瘀、平肝散结之功,而达到扶正祛邪、疣体消退的目的。 此法疗效明显好于肌注聚肌胞,其疗效与患病年龄、病程,以及既往接受治疗与否无明显关系,而且疗程短,未观察到明显副作用,病人乐意接受。 参考文献 〔1]　刘辅仁.实用皮肤科学.北京:人民卫生出版社, 1997∶130 〔2]　杨国亮,王侠生.现代皮肤病学.上海:上海医科大学出版社,1998∶305 收稿日期:2003-09-19 黄芪制剂中黄芪甲苷测定方法概述 唐　斌1,杨　扬2,尚北城1,高　玮1,徐贵丽1 (11成都军区昆明总医院药剂科,云南昆明　650032;21昆明医学院药学99级实习生) 摘要　目的:评价黄芪甲苷测定方法。方法:检索有关黄芪甲苷测定方法的文献并进行比较。结果:黄芪甲苷测定方法有定性鉴别和定量测定两种方法,定性鉴别包括理化鉴别和薄层层析法;定量测定包括分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法。结论:高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HP LC-E LS D法)分离度好,重现性好,回收率高,是一种值得推广的测定方法。 关键词　黄芪制剂;黄芪甲苷;测定方法 中图分类号　R94 文献标识码　B 文章编号　1004-0188(2004)02-0175-03 中药黄芪为豆科植物蒙古黄芪(Astragalus m ongholicus,Bge)或膜荚黄芪 A.membranaceus (Fisch)的干燥根,主产于山西、黑龙江、内蒙古等地,以栽培的蒙古黄芪质量为佳。主要成分有黄芪皂苷、多糖、黄酮、氨基酸、微量元素等。黄芪甲苷为黄芪中的十多种皂苷的主要成分,为黄芪制剂质量检验的指标成分,结构为三萜皂苷。药理实验表明:黄芪甲苷具有补气固表、利尿、托毒排脓、生肌之功效。黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂质量的重要指标,而且许多中成药也以黄芪甲苷作为该品种的指示成分。但黄芪甲苷在黄芪中含量很低,提取分离比较困难。现将近年来有关黄芪甲苷测定方法概述如下: 1　定性鉴别 111　理化鉴别　(1)取黄芪粉末3g,加水30ml,浸渍过夜,滤过,取滤液1ml,加012%茚三酮液2滴,在沸水中加热5min,冷后呈紫红色。(2)取水溶液1ml,于60℃水浴中加热10min,加5%a-萘酚乙醇溶液5滴,摇匀,沿管壁缓缓加入浓硫酸