微生物
临床微生物学和微生物学检验 1
绪论
简答题
1.简述临床微生物检验的思路与原则。
2.简述临床微生物学的性质与任务。
[参考答案]
问答题
1.答：（1）确保临床标本可靠；（2）全面了解机体正常菌群；（3）保证检验质量、快速准确提供信息；（4）微生物学定性、定量和定位分析，并结合病情（三定一结合）；（5）加强与临床联系。
2.答：（1）研究感染性疾病的病原体特征；（2）提供快速、准确的病原学诊断；（3）指导临床合理使用抗生素；（4）对医院感染进行监控。
第三章细菌感染的病原学诊断
名词解释
1.培养基
2.吲哚试验
3. 菌落
4.MR试验
5. 脲酶试验
6. O/F试验
7. 氧化酶试验
8. 悉生动物
9.无菌动物
问答题
1.简述革兰染色原理、方法及意义。
2.简述培养基的概念及种类。
3.简述L型细菌的概念、鉴定要点。
4.简述临床感染性疾病实验诊断的要求包括哪些？
5.简述临床感染性疾病诊断试验的选择原则？
6.简述临床标本的采集的一般原则。
[参考答案]
名词解释
1.培养基：是适合于细菌需要的各种营养物质配置而成的营养基质。
2.吲哚试验：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，当加入吲哚试剂后则生成红色的玫瑰吲哚，为阳性。
3.菌落：是指单个细菌在固定点上生长繁殖所形成的细菌集团。
4.MR试验：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步分解产生甲酸、乙酸、乳酸等小分子酸，使培养基的pH下降至4.5以下，当培养基中加入甲基红试剂时则成红色，为甲基红试验阳性，如大肠埃希菌。
5.脲酶试验：是指某些细菌具有尿素分解酶，能够分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性，可用于变形杆菌的鉴定。
6.O/F试验：细菌在分解糖过程中需要分子氧参加的为氧化型。发酵型细菌在有氧与无氧条件下均能分解葡萄糖。不分解糖的细菌为产碱型。利用此试验区分细菌的代谢类型。
7.氧化酶试验：是细菌细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C氧化对苯二胺，生成有色的醌类化合物。
8.无菌动物：是通过剖腹产取出后立即转入到无菌、恒温、恒湿条件下，用无菌饲料饲养的动物。
9.悉生动物：给无菌动物引入已知5~17种正常肠道菌丛培育而成的动物。是研究传染病的重要动物模型，也是研究肠道微生态及其他生理功能的动物模型。
问答题
1.答：原理：（1）复合物学说：G+菌细胞壁比G-菌肽聚糖层数多；而G-菌细胞壁脂类比G+菌含量多；（2）等电点学说：G+菌pI（2~3）低于G-菌pI（4~5）。G+菌与结晶紫染料结合牢固；（3）化学通透性学说。
方法：标本涂片、干燥、固定→结晶紫初染1min→碘液媒染1min→95％乙醇脱色30s至1min→稀释的石炭酸复红或沙黄复染1min。
结果：G+菌呈紫色，G-菌呈红色。
意义：（1）鉴别细菌；（2）指导临床用药；（3）了解细菌致病性。
2.答：概念：培养基是人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。可用于细菌的分离纯化培养、传代、菌种保存及细菌的生理、生化特性的研究。
种类：（1）根据用途分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。（2）根据物理性状分为：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
3.答：L型细菌是细胞壁缺陷，而使其生物学特性发生改变的细菌、真菌等微生物的总称，是在不利环境下种系保存的一种形式。
鉴定要点：（1）形态与染色特点：具有明显的多形性。细胞壁染色可见缺壁浓染的细菌。（2）生长情况：分离培养需用高渗低琼脂培养基（200g/L蔗糖溶液、10g/L琼脂，pH
为7.6~7.8）；增菌培养可呈微浑浊或呈颗粒状沉淀和沿壁生长。分离培养的血平板无菌生长，L型培养基颗粒型、油煎蛋样菌落或丝状菌落。（3）返祖试验：牛肉汤琼脂或L
型平板传代。
临床微生物学和微生物学检验 3
4.答：（1）诊断对象和诊断目的；（2）诊断试验选择；（3）常用诊断流程。
5.答：（1）选择有鉴定价值的试验；（2）选择简易、快速、方便的试验；（3）综合考虑试验的敏感性和特异性。
6.答：（1）早期采集；（2）无菌采集；（3）根据目的菌的特性用不同的方法采集；（4）采集适量标本；（5）安全采集。
第六、七章球菌
名词解释
1.SPA
2.MRS
3.血浆凝固酶
4.抗链“O”试验
5.CRP
6.CONS
问答题
1.试述血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。
2.一份脓汁标本中疑有金黄色葡萄球菌应怎样进行微生物学检验？
3.一份血液标本中疑有A群链球菌，应怎样进行微生物学检验？
4.怎样进行淋病奈瑟菌的微生物学检查？
5.如何快速诊断流脑和淋病?
6.男女淋病患者在症状、诊断方面有何异同?
[参考答案]
名词解释
1.SPA：即葡萄球菌A蛋白（StapHylococal Protein A），是葡萄球菌细胞壁的一种蛋白成分，可与人IgG（IgG1、 IgG2、 IgG4）的Fc段非特异性结合而不影响Fab段的结合活性，具有抗吞噬作用。可用作协同凝集试验试剂。
2.MRS：耐甲氧西林葡萄球菌，它是携带mecA基因、编码低亲和力青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢菌素、碳青酶烯类、青霉素类+青霉素酶抑制剂抗生素的葡萄球菌。
3.血浆凝固酶：是金黄色葡萄球菌产生的一种侵袭性酶，其作用是使血浆凝固，分为结合型和游离型两种。
4.抗链“O”试验：ASO试验是测定病人血清中抗链球菌溶血素“O”抗体的效价，作为风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病的辅助诊断。常用溶血抑制试验测此抗体。效价在1:500以上或逐步升高即有诊断参考价值。
5.C反应蛋白（C-Reactive Protein,CRP）：是人血清中所含的一种蛋白质，可与肺炎链球菌的菌体多糖抗原（C物质）发生沉淀反应，它不是抗体，在炎症活动期（如风湿热病人）CRP含量增多。
6.CONS：为血浆凝固酶试验阴性的葡萄球菌。
问答题
1.答：原理：金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，其作用是使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而使血液凝固。血浆凝固酶分为结合型和游离型两种。
（1）结合型血浆凝固酶结合在细胞壁上，直接作用于纤维蛋白原使之转化为纤维蛋白，环绕菌体形成凝块，可用玻片法检测；（2）游离型血浆凝固酶被分泌到菌体外，可激活血浆凝血酶原，使之转化为凝血酶，后者作用于纤维蛋白原使之转化为纤维蛋白，导致血浆凝固，可用试管法检测。
方法：（1）玻片法:取未稀释的兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，挑取菌落分别与它们混合，立即观察结果。细菌在血浆中凝集成块，生理盐水中均匀浑浊为试验阳性，两者均浑浊为试验阴性；（2）试管法:取3支试管各加入0.5ml 1:4稀释的新鲜兔血浆，再分别加入0.5ml待检菌、阳性对照菌、阴性对照菌的肉汤培养物，35℃孵育，每30min观察1次，观察3h。检测菌试管内血浆凝固呈胶冻状为试验阳性，反之不凝固为阴性。
2.答：标本采集：注意无菌采集、用药前采集。
检验程序：参见教材
检验方法：（1）取脓汁标本做直接涂片革兰染色；（2）同时接种血平板进行分离培养；（3）经35℃ 18~24h培养，观察菌落特点，挑取菌落做革兰染色、生化鉴定试验、血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验；（4）根据试验结果报告。
注意：加做试验：葡萄球菌耐热核酸酶试验阳性；与链球菌区别可做触酶试验，葡萄球菌阳性，链球菌阴性。
鉴定依据：（1）直接涂片革兰染色为G+葡萄状排列球菌；（2）血平板上形成透明溶血环；（3）血平板上产生脂溶性的金黄色色素；（4）血浆凝固酶试验阳性；（5）甘露醇发酵试验阳性。
报告方式：“培养出金黄色葡萄球菌”。
3.答：标本采集：注意无菌及用药前采集，如已用药需加入抗菌药物拮抗剂。进行微生物学检查的血液标本一般不加入抗凝剂，需尽快接种以防止血液凝固。通常血液标本中细菌含量少不做直接涂片染色。
检验程序：参见教材。
检查方法：（1）取血液标本接种酚红葡萄糖肉汤进行增菌培养；（2）经35℃培养每天观察一次连续7天。如发生变化,涂片、革兰染色，并接种血平板进行分离培养；（3）经35℃
临床微生物学和微生物学检验 5
18～24h培养，观察菌落特点，挑取可疑菌落做革兰染色和生化鉴定试验。最后根据试验
结果进行报告。
主要鉴定试验：杆菌肽敏感试验、链激酶试验、血清学分类鉴定试验。
试验结果：（1）酚红葡萄糖肉汤进行增菌肉汤变黄（分解葡萄糖产酸），上面澄清下面沉
淀，有溶血；（2）涂片染色见G+链状排列球菌；（3）血平板上形成透明溶血环；（4）杆
菌肽敏感试验阳性；链激酶试验阳性。
报告方式：“经**天培养出A群链球菌”。
4.答：标本采集：注意尽快接种，保温、保湿。
检验程序：见教材
检查方法：（1）直接涂片检查男性尿道分泌物如发现脓细胞内有G-双球菌结合临床即可
作出早期诊断。女性则需进一步鉴定；（2）分离培养：常用巧克力色血平板或MTM、ML、
NYC等培养基37℃ 5%～10% CO
环境下培养18～24h形成灰褐色、光滑、半透明、露滴
2
状的、圆形、凸起菌落；（3）鉴定试验：氧化酶试验、触酶试验阳性；发酵葡萄糖产酸，
不发酵其他糖类。
5.答：（1）直接涂片检查发现白细胞内有G-双球菌有一定意义；（2）免疫学检查方法有
直接凝集试验、免疫荧光法等；（3）分子生物学检查方法有核酸杂交和PCR法等。
6.答：在症状方面：男性表现急性尿道炎，症状明显；女性表现急性宫颈炎，症状不明
显，若出现急性尿道炎则症状明显。
在诊断方面：男性患者尿道脓汁涂片镜检见中性粒细胞内有G-双球菌有诊断价值；而女
性则需进一步鉴定。
第八章肠杆菌科
名词解释
1.ETEC
2.EIEC
3.EHEC
4.EAggEC
5.EPEC
6.LT
7.ST
8.Vi抗原
9.V-W变异 10.Widal test 11.Vero毒素 12.鼠毒素
13.Weil-Felix reaction 14.迁徙生长现象 15.SS琼脂
16.KIA 17.MIU
问答题
1.一患者腹泻、血便、腹痛，便中白细胞少见，如疑为大肠埃希菌O157H7感染，
应该如何进行微生物学检查？
2.疑为乙型副伤寒沙门菌引起的肠热症患者，应该如何对其进行微生物学检查？
3.一疑为变形杆菌尿路感染的患者，应该如何对其进行微生物学检查？
4.试比较大肠埃希菌、福氏志贺菌、丙型副伤寒沙门菌在KIA上35℃ 18h培养产生的现象并解释原因。
5.有一疑为福氏2a志贺菌感染的腹泻患者，应如何对其进行微生物学检查？
6.简述肠杆菌科共同特征。
7.试述大肠埃希菌、痢疾志贺菌在麦康凯（MAC）培养基、中国蓝培养基、伊红美蓝培养基上的菌落特点，并说明原因。
[参考答案]
名词解释
1.ETEC：肠产毒型大肠埃希菌，在发展中国家引起儿童和旅行者腹泻。该菌能产生由质粒编码的肠毒素即ST和LT。
2.EIEC：肠侵袭型大肠埃希菌，引起的腹泻症状类似于志贺菌，主要侵入肠粘膜,在肠粘膜上皮细胞内繁殖，并破坏上皮细胞。
3.EHEC：肠出血型大肠埃希菌，可产生由噬菌体编码的两种毒素(SLT1和SLT2)。如大肠埃希菌O157H7。
4.EaggEC：肠凝集型大肠埃希菌，不产生ST、LT，没有侵袭力，不能用O:H血清分型，可粘附于Hep2和Hela细胞的大肠埃希菌菌株。
5.EPEC：肠致病型大肠埃希菌，是世界各地婴儿腹泻的重要病原菌。
6.LT： heat labile toxin,不耐热肠毒素，加热65℃ 30min被破坏。
7.ST： heat stable toxin,耐热肠毒素，100℃ 10～20min不被破坏。
8.Vi抗原：即毒力抗原，是一种不耐热的酸性多糖聚合物，加热60℃ 30min或经石炭酸处理即被破坏,经人工培养易丧失。如伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌常带有此抗原。
9.V-W变异：沙门菌失去Vi抗原的变异。
10.Widal test：是用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原检测受检血清中有无相应抗体的半定量试管内凝集试验。用于辅助诊断伤寒、副伤寒引起的肠热症。
11.Vero毒素：志贺毒素因对Vero细胞有毒性作用，因而得名。
12.鼠毒素（murine toxin）：鼠疫耶尔森菌产生的一种称为T抗原的可溶性蛋白，对小鼠和大鼠有剧烈毒性。主要作用于心血管系统（抑制心肌细胞线粒体的呼吸作用）引起不可逆性休克与死亡。
临床微生物学和微生物学检验 7
13.外斐反应：变形杆菌属的某些菌株如OX
19、OX
2
、OX
k
与某些立克次体有共同抗原，可
出现交叉凝集反应。因此可用变形杆菌代替立克次体与患者血清做凝集试验，以辅助诊断立克次体病。此试验称为外斐（Weil-Felix）反应。
14.迁徙生长现象：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株在普通琼脂平板上可蔓延成波纹状薄膜布满整个培养基表面。
15.SS琼脂：志贺菌、沙门菌强选择性培养基。此两种菌在此培养基上形成无色、半透明的中等大小的菌落。可与肠道非致病菌及球菌相区别。
16.KIA：克氏双糖铁培养基，主要鉴别细菌对葡萄糖和乳糖的发酵情况、产气、产生H
2
S 情况,是肠杆菌科细菌鉴定中重要的试验。
17.MIU：是检测动力、吲哚及脲酶的试验，为肠杆菌科主要的鉴定试验。
问答题
1.答：标本采集：腹泻患者粪便。
检验程序：见教材
检验方法：（1）分离培养：粪便标本直接接种在山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）上。35℃ 18~24h；（2）挑取无色的可疑菌落→革兰染色、生化反应、血清学鉴定和药敏试验。
试验结果：（1）G-杆菌；（2）在SMAC上的菌落特点为无色菌落；（3）生化反应：氧化酶试验阴性；硝酸盐还原试验阳性；KIA：A A- -；MIU：动力-、吲哚 +、脲酶 -；MR+；V-P -；枸橼酸盐 -，初步鉴定为大肠埃希菌；（4）血清学试验：做试探性玻片凝集或乳胶凝集试验检测O157H7抗原最后鉴定。
2.答：标本采集：（1）做细菌培养：第一周采血、第二周取粪便或尿液、全程取脑脊液；（2）做肥达反应：血清标本。
检验程序：见教材。
检验方法：（1）增菌培养：血液标本可接种于胆汁葡萄糖肉汤；（2）分离培养：麦康凯琼脂（MAC）、SSA等肠道选择性培养基上。35℃18~24h后→取可疑菌落→革兰染色、生化反应、血清学鉴定试验及药敏试验。
试验结果：（1）G-杆菌；（2）MAC：无色的菌落；（3）氧化酶试验阴性、触酶试验阳性、硝酸盐试验 +、KIA：KA-+、MR+、V-P-、枸橼酸盐利用试验+；（4）用O、H诊断血清作最后鉴定。
血清学检查：肥达反应（Widal test）
3.答：标本采集：常采用中段尿法
检验程序：取尿液沉淀或3000r/min 15min离心后用沉淀接种于血琼脂平板分离培养；35℃ 18~24h后挑取可疑菌落进行生化反应和血清学鉴定。有必要时需做菌落计数。
检验方法：（1）在血平板上可见迁徙生长现象；（2）取菌落做革兰染色，镜检见到G-杆菌；（3）主要鉴定试验：氧化酶试验 -、硝酸盐还原试验 +、触酶试验 +、KIA：KA-+、脲酶 +、苯丙氨酸脱氨酶试验 +、 MR +、V-P -、枸橼酸盐利用试验 -。
4.答：试验现象
大肠埃希菌福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌
斜面黄红红
底层黄有气泡黄黄有气泡并变黑
H
2
S - - +
动力 + - +
试验结果：大肠埃希菌AA- -；福氏志贺菌KA- -；乙型副伤寒沙门菌KA- +
分析：KIA的成分：葡萄糖：乳糖=1：10，指示剂为酚红；主要成分为FeSO
4
。
（1）有动力的细菌沿穿刺线向周围扩散生长。
（2）有气泡产生是因为细菌在分解糖时产气。
（3）只分解葡萄糖，不分解乳糖细菌：斜面变红、底层变黄。原因：分解葡萄糖产生的少量酸使pH下降使培养基指示剂酚红变黄。但斜面部分因接触空气，微量的酸被氧化，同时细菌利用培养基中的含氮物质产生氨类等碱性物质中和了斜面部分的少量酸类而使斜面pH呈碱性，酚红指示剂呈红色。底层部分不与氧气接触而不被氧化仍呈黄色。（4）分解葡萄糖也分解乳糖的细菌：斜面、底层全为黄色。原因：细菌产生大量的酸，斜面部分氧化及细菌代谢过程中产生的碱不足以使斜面变成碱性。
（5）产生H
2S的细菌：培养基变黑。原因：细菌分解蛋白质产生的H
2
S与培养基中的Fe2+
生成FeS黑色沉淀。
5.答：(1)标本采集：腹泻患者粪便，取脓血便;(2)检验程序：把标本直接在麦康凯琼脂（MAC）或SSA上分离培养。35℃ 18～24h 后挑取可疑菌落进行革兰染色、生化反应和血清学鉴定;(3)检验方法：在麦康凯琼脂（MAC）或SSA上挑选无色的菌落进行革兰染色，镜检见到G-杆菌。氧化酶试验阴性，触酶试验阳性，接种于双糖铁培养基上，底层黄产酸不产气斜面红色，H
2
S -，无动力，IMVC：- + - -，甘露醇 +，初步鉴定为志贺菌。再结合MAC或SSA上的菌落特点和临床表现。先用志贺菌属四种多价血清做试探性玻片凝集鉴定其为福氏志贺菌，之后选用单价因子血清检测福氏2a抗原做玻片凝集试验最后鉴定。
6.答：(1)形态染色性：革兰阴性杆菌，无芽胞；(2)培养特点：兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基和MAC培养基上生长良好；(3)生化反应：氧化酶试验-、触酶试验+、
临床微生物学和微生物学检验 9
葡萄糖：产酸或产酸产气、硝酸盐还原试验+；(4)抗原构造：主要包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原。O抗原、H抗原是肠杆菌科血清学分群、分型的依据；(5)抵抗力：抵抗力不强，对热及一般消毒剂敏感。对低温有耐受力，耐胆盐，并在一定程度内能抵抗染料的抑菌作用。
7.答：
麦康凯培养基中国蓝培养基伊红美蓝培养基
大肠埃希菌红蓝紫，金属光泽
痢疾志贺菌无色无色红色
原因：（1）大肠埃希菌分解乳糖产酸；痢疾志贺菌不分解乳糖；（2）这三种培养基中指示用糖为乳糖。指示剂分别为：中性红、中国蓝和玫瑰红酸、伊红和美蓝。中性红，在酸性条件下红色，碱性条件下无色；中国蓝和玫瑰红酸，酸性条件下中国蓝蓝色玫瑰红酸黄色而呈现蓝色，碱性条件下中国蓝无色或微蓝色玫瑰红酸红色而呈现出红色；伊红和美蓝，在酸性条件下伊红和美蓝相结合成紫黑色或紫红色化合物具有金属光泽，在碱性条件下伊红和美蓝不结合菌落无色。
第九章非发酵革兰阴性菌
名词解释
1.非发酵菌
2.BCYE
问答题
1.简述铜绿假单胞菌的鉴定依据。
2.简述不动杆菌的形态与染色特点、培养特点。
[参考答案]
名词解释
1.非发酵菌：指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌，多为条件致病菌。
2.BCYE：即活性炭-酵母浸液琼脂培养基，是军团菌的初次分离培养的选择性培养基。
问答题
1.答：(1)初步鉴定：① 革兰染色阴性、直或弯曲杆菌；②普通琼脂平板上特殊生姜味、产生绿脓色素；③氧化酶试验+。
特殊不产色素株：需做色素的鉴定,用改良King A、B培养基。
（2）最后鉴定
特征结果阳性率
单毛（<3根/端） + 97
动力 + 97
OF葡萄糖氧化型 98
OF乳糖、蔗糖 - 0
氧化酶 + 100
绿脓素 +/- 71
C-精氨酸水解酶 + 99
42℃生长 + 100
2.答：不动杆菌属是一群不发酵糖类、氧化酶试验阴性、不能运动的革兰阴性球杆菌。常成双排列。营养要求一般，能在麦康凯培养基上生长，但在SSA培养基上只有部分菌株生长。在血琼脂培养基上可形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径2~3mm的菌落。
第十章其他革兰阴性菌
名词解释
1.卫星现象
2.嗜血杆菌
问答题
简述流感嗜血杆菌鉴定依据。
[参考答案]
名词解释
1.卫星现象:流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在同一血琼脂平板上培养，葡萄球菌能合成V因子，可促进流感嗜血杆菌生长。在葡萄球菌周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，距离葡萄球菌较远的流感嗜血杆菌菌落较小。
2.嗜血杆菌：为一群无动力、无芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，营养要求较高，在人工培养时需新鲜血液才能生长。
问答题
临床微生物学和微生物学检验 11
答：⑴根据菌落特点，革兰染色阴性小细菌；⑵分离培养：“卫星现象”阳性，对X、V 因子的需求。巧克力琼脂培养基上18~24h的菌落特点；⑶荚膜肿胀试验；⑷根据产生吲哚、脲酶的存在情况及鸟氨酸脱羧酶试验分型。
第十一章弧菌科
名词解释
1.霍乱红试验
2.神奈川现象
3.霍乱肠毒素
4.TCBS培养基
问答题
1.如何进行霍乱弧菌的培养、分离和鉴定？
[参考答案]
名词解释
1.霍乱红试验：霍乱弧菌含色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，霍乱弧菌也能将硝酸盐还原成亚硝酸盐，当霍乱弧菌培养于含硝酸盐的蛋白胨水中，所产生的两种产物亚硝酸盐和吲哚可结合成亚硝酸盐吲哚，滴加浓硫酸后即出现产色反应而呈现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性。
2.神奈川现象：副溶血弧菌在一种特殊的我妻培养基（Wagatsuma Agar）上出现的溶血现象。
3.霍乱肠毒素：为一聚合蛋白，由A和B两个亚单位构成，B亚单位是结合亚单位，能与小肠粘膜上皮细胞受体结合，A亚单位激活细胞内的腺苷酸环化酶，使ATP转化成cAMP，细胞cAMP浓度升高，肠液分泌增加，产生严重的腹泻和呕吐。
4.TCBS培养基：是霍乱弧菌的选择性培养基，霍乱弧菌由于分解蔗糖在培养基上形成黄色的菌落，而副溶血性弧菌形成蓝绿色的菌落。
问答题
1.答：检验程序见教材
检验方法：（1）形态与染色特点：G-弧菌、鱼群状；动力试验与制动试验阳性；（2）增菌培养：碱性蛋白胨水35℃ 6~8h，见菌膜进一步分离培养；（3）分离培养：TCBS培养基
上呈黄色菌落；（4）血清学试验：O
1群抗血清及O
139
群霍乱弧菌多价或单价抗血清进行凝
集确定；（5）鉴别试验：霍乱红试验、粘丝试验、O/129敏感试验、鸡红细胞凝集试验、多粘菌素B敏感试验、第Ⅳ和Ⅴ组噬菌体裂解试验、耐盐培养试验。
第十二章弯曲菌属和幽门螺杆菌属及检验
名词解释
1.格林巴利综合征（Guillain-barre syndrome；GBS）
2.弯曲菌属
问答题
1.简述幽门螺杆菌的鉴定要点。
2.简述弯曲菌属细菌的鉴定要点。
3.幽门螺杆菌的快速诊断试验有哪些？
[参考答案]
名词解释
1.空肠弯曲菌的某些特殊的血清型（O:19）与人的神经组织有共同抗原，可引起交叉免疫反应而导致急性感染性多发性神经根神经病，即格林巴利综合征（Guillain-barre syndrome；GBS）。
2.弯曲菌属是一类氧化酶试验阳性、动力阳性、革兰阴性弯曲、微需氧的细菌。
问答题
1.答：（1）依靠典型的形态；（2）37℃生长，43℃、25℃不生长；（3）氧化酶和过氧化氢酶试验均阳性、脲酶试验强阳性；（4）对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感；（5）在1%甘油和1%胆盐中均不生长。
2.答：（1）氧化酶试验阳性，革兰阴性，菌体弯曲或呈S形；（2）鉴定试验有生长温度（37℃、42℃、25℃）试验、过氧化氢酶试验、马尿酸盐水解试验、醋酸吲哚水解试验、硝酸盐和亚硝酸盐水解试验、硫化氢产生试验、对萘啶酸、头孢噻吩的敏感试验等。
3.答：（1）直接染色镜检；（2）快速脲酶分解试验；（3）碳标记呼吸试验；（4）血清学试验；（5）分子生物学试验；用核酸探针和PCR检测幽门螺杆菌。
第十三章需氧革兰阳性杆菌
名词解释
1.串珠试验
2.Ascoli热沉淀试验
3.炭疽毒素
问答题
1.试述炭疽芽胞杆菌的鉴定试验。
2.简述炭疽芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌的鉴别方法。
临床微生物学和微生物学检验 13
3.试述非特异性阴道炎（BV）主要诊断标准。
[参考答案]
名词解释
1.串珠试验：将炭疽芽胞杆菌接种于含0.05~0.5IU/ml青霉素的培养基经37℃培养6h 后，可发生形态变化，形成大而均匀成串的圆球状菌体。
2.Ascoli热沉淀试验: 炭疽芽胞杆菌的菌体多糖抗原耐热耐腐败，在病畜脏器或毛皮中经长时间煮沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应。此试验可作追溯性诊断。
3.炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子和水肿因子三种蛋白质形成的复合物，后两者都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。若三种因子混合注射实验动物会出现炭疽病典型中毒症状。具有抗吞噬作用和免疫原性。
问答题
1.答：（1）噬菌体裂解试验；（2）串珠试验；（3）青霉素抑制试验；（4）串珠和青霉素抑制联合试验；（5）重碳酸盐生长毒力试验；（6）毒素动物试验；（7）植物凝集素试验。
2.答：
鉴别项目炭疽芽胞杆菌枯草芽胞杆菌
形态菌体两端平整或凹陷两端钝圆
荚膜 + -
动力 - +
菌落有小突起，边缘呈卷锯齿状粗糙菌落
毛状，粘稠菌落
肉汤液絮状沉淀，上层清晰均匀浑浊有菌膜
Ascoli沉淀试验 + -
溶血不溶血或微溶血 +
串珠试验 + -
3.答：（1）阴道分泌物增多，稀薄均质灰白色，有恶臭味；（2）分泌物pH>
4.5～4.7；（3）分泌物胺试验阳性；（4）镜检有线索细胞。
第十四章棒状杆菌属
[
一、名词解释
1.异染颗粒
2.Elek平板毒力试验
3.吕氏血清斜面
问答题
答：（1）琼脂平板毒力试验；（2）SPA协同凝集试验；（3）对流电泳；（4）动物实验。
第十五章分枝杆菌属
名词解释
1.BCG
2.抗酸菌
3.索状因子
4.结核菌素试验
5.麻风细胞
问答题
1.试述结核菌素试验原理、方法、结果分析。
2.简述结核分枝杆菌的培养特点。
[参考答案]
名词解释
1.BCG：卡介苗是由Calmette和Guerin二氏1908年将有毒力的牛型结核分枝杆菌在含有甘油、胆汁和马铃薯的培养基上经13年传230代后，得到毒力减弱而抗原性稳定的菌株,可用于结核病的预防。
2.抗酸菌：指分枝杆菌属的细菌一般染色不易着色，一旦着色能抵抗盐酸酒精的脱色作用，称为抗酸菌。
3.索状因子：是有毒力的结核分枝杆菌细胞壁中的6，6双分子海藻糖，它能使结核菌融合生长成索条状，与结核分枝杆菌的毒力有关，能作用于巨噬细胞的线粒体，影响细胞呼吸及氧化-磷酸化作用，并能抑制白细胞游走，使激活的巨噬细胞聚集，刺激慢性肉芽肿形成。
4.结核菌素试验：用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否有变态反应。
5.麻风细胞：麻风分枝杆菌为典型的胞内寄生菌有该菌存在的细胞呈泡沫状。
问答题
1.答：（1）原理结核菌素是结核分枝杆菌的菌体成分，受试者感染结核分枝杆菌，注入皮内的结核菌素与致敏淋巴细胞结合，在局部释放淋巴因子，形成超敏反应性炎症，出现红肿硬结；（2）试验方法取 OT或PPD注入前壁掌侧面皮内，48～72h后观察结果；（3）结果分析注射部位红肿硬结直径大于0.5cm时为阳性，表明机体对结核分枝杆菌有免疫力。红肿硬结直径大于1.5cm时为强阳性，表明机体可能有活动性结核，应进一步检查。红肿硬结直径小于0.5cm为阴性，表明机体对结核分枝杆菌无免疫力。
临床微生物学和微生物学检验 15
2.答：（1）需氧菌；（2）营养要求高，需用罗氏培养基培养，生长缓慢，一般18h繁殖一代，初次培养经过2~5周才能长出肉眼可见的菌落，菌落为粗糙型、菜花状。
第十六章放线菌属与诺卡菌属
名词解释
硫磺样颗粒
[参考答案]
名词解释
硫磺样颗粒：在衣氏放线菌感染的病灶组织和瘘管流出的脓样物质中，可找到肉眼可见的黄色颗粒，经压片在显微镜下观察呈菊花状。
第十七章厌氧性细菌及检验
名词解释
1.厌氧菌
2.汹涌发酵现象
3.Nagler反应
4.泡沫肝
5.庖肉培养基
问答题
1.简述厌氧菌感染的临床及细菌学指征。
2.哪些标本不宜作厌氧菌培养?
3.简述用于厌氧菌培养的不同部位标本采集法。
4.简述用于厌氧菌培养的标本运送方法。
5.简述产气荚膜芽胞梭菌的鉴定依据。
6.简述肉毒芽胞梭菌的鉴定依据。
[参考答案]
一、名词解释
1.厌氧菌：指一大群在有氧的环境下不能生长，必须在无氧环境下才能生长的细菌。
2.产气荚膜梭菌在牛乳培养基中能分解乳糖产酸产气，产生的酸使酪蛋白凝固，产生的大量气体可将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势汹涌，称为汹涌发酵现象。
3.产气荚膜芽胞梭菌在卵黄琼脂平板上能产生卵磷脂酶分解卵黄中的卵磷脂，使菌落周围出现乳白色浑浊圈，这一现象可被特异的抗血清所中和，称为Nagler反应。
4.将产气荚膜芽胞梭菌培养物0.5~1.0ml注入家兔或小鼠静脉内，10s后杀死动物，置37℃培养5~8h，可见动物躯体膨胀，脏器和肌肉内有大量气泡，尤以肝最为明显，称泡沫肝。
5.庖肉培养基是培养厌氧菌的增菌培养基，主要用于判断厌氧芽胞梭菌对肉渣的消化程度。
问答题
1.答：凡有下列情况者应怀疑有厌氧菌感染：
（1）感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音；（2）发生粘膜附近的感染；（3）深部外伤、人或动物被咬伤后的继发感染；（4）分泌物有恶臭或为暗红血色，并在紫外灯下发出红色荧光；（5）分泌物涂片镜检有细菌而培养阴性者，或在液体及半固体培养基深部生长的细菌；（6）长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例；（7）最近有流产史或胃肠道手术后发生的感染。
2.答：（1）鼻咽拭子；（2）牙龈拭子；（3）痰和气管抽取物；（4）胃和肠道内容物、肛拭；（5）接近皮肤和粘膜的分泌物；（6）褥疮溃疡及粘膜层分泌物；（7）尿（导尿）；（8）阴道或子宫拭子；（9）前列腺分泌物。
3.答：
标本来源收集方法
封闭性脓肿针管抽取
妇女生殖道后穹隆穿刺抽取
下呼吸道分泌物肺穿刺术
胸腔胸腔穿刺术
窦道、子宫腔、深部创伤用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽取
组织无菌外科切开
尿道膀胱穿刺术
4.答：（1）针筒运送法；（2）无菌小瓶运送法；（3）棉拭运送法；（4）大量液体标本运送法；（5）组织块运送法；（6）厌氧袋运送法。
5.答：（1）形态特征和缺少芽胞，有荚膜；（2）菌落特征和糖发酵反应，特别是汹涌发酵现象；（3）Nagler试验；（4）动物试验：泡沫肝现象。
6.答：（1）涂片镜检为革兰阳性近极端芽胞，呈汤匙状；（2）厌氧，消化肉渣且变黑，产生恶臭味；（3）菌落边缘有皱褶；（4）肉毒毒素检测试验阳性。
第十八章螺旋体
临床微生物学和微生物学检验 17
名词解释
螺旋体
问答题
1.常见的致病性螺旋体有哪些?简述其致病性。
2.今有一疑似梅毒患者，如何取材并进行微生物学检查?
3.如何对疑似钩体病患者进行微生物学检查？
[参考答案]
一、名词解释
螺旋体：是一类介于细菌与原虫之间，细长、柔软、弯曲呈螺旋状，运动活泼的原核细胞型微生物。
问答题
1．（1）钩端螺旋体①致病因素为溶血素，细胞毒因子，内毒素样物质；②猪、鼠是重要传染源；③钩体随尿排出；④经皮肤粘膜侵入机体；⑤孕妇可经过胎盘传染；⑥引起钩端螺旋体病。
（2）梅毒螺旋体①致病因素不清，可能与其粘附作用、降低机体免疫功能有关；②人是唯一传染源，病后不能获得有效的免疫力；③经性接触、胎盘、产道传播；④引起获得性梅毒、先天梅毒。
（3）伯氏疏螺旋体①致病因素尚不清楚。自身免疫反应可能参与致病作用，能粘附并侵入某些组织细胞；②以鼠及其他小型哺乳动物为储存宿主，以蜱为传播媒介；③引起莱姆病。
2．(1)检查梅毒螺旋体①取硬性下疳分泌物或梅毒疹渗出物或局部淋巴结穿刺物直接涂片染色镜检或直接涂片作暗视野检查。②动物接种分离螺旋体。
(2)血清学试验①非螺旋体抗原试验：国内常用VDRL、USR、RPR方法检测。此类试验以牛心磷脂、卵磷脂等为抗原，所以是非特异性抗原。某些疾病如红斑狼疮、类风湿性关节炎、孕妇等均可出现假阳性反应，分析结果时应注意。②螺旋体抗原试验：采用荧光密螺旋体抗体吸收试验、梅毒螺旋体制动试验等。
3．(l)发病一周内取血，二周后取尿，有脑膜刺激征者取脑脊液。标本经差速离心集菌后暗视野检查或用 Fontana镀银法染色镜检。也可用 Korthof培养基培养鉴定或采用动物实验分离钩端螺旋体，后者是敏感方法，动物实验常用幼龄豚鼠或地鼠。
(2)血清学试验取病人早、晚期双份血清，用显微凝集试验、补体结合试验或间接凝集试验检测特异性抗体及其含量。
常见的微生物检测方法
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
微生物专业词汇汇总
微生物学英语词汇 微生物学microbiology 病毒学virology 噬菌体学bacteriophagology 细菌学bacteriology 鉴定细菌学determinative bacteriology 系统细菌学systematic bacteriology 真菌学mycology 原生生物学protistology 原生动物学protozoology 普通微生物学general microbilogy 微生物分类学microbial taxonomy 微生物生理学microbial physiology 微生物生物化学microbial biochemistry 微生物遗传学microbial genetics 微生物生态学microbial ecology 古微生物学paleomicrobiology 土壤微生物学soil microbiology 水生微生物学aquatic microbiology 海洋微生物学marine microbiology 悉生生物学gnotobiology 医学微生物学medical microbiology 兽医微生物学veterinary microbiology 农业微生物学agricultural microbiology 工业微生物学industrial microbiology 石油微生物学petroleum microbiology 食品微生物学food microbiology 乳品微生物学diary microbiology 瘤胃微生物学rumen microbiology 诊断微生物学diagnostic microbiology 病原学etiology 国际微生物学会联合会International Union of Microbiological Societies, IUMS 中国微生物学会Chinese Society for Microbiology, CSM 世界培养物保藏协会World Federation for Culture Collection, WFCC 中国微生物菌种保藏管理委员会China Committee for Culture Collection of Microorganisms, CCCCM 美国模式培养物保藏所American Type Culture Collection, ATCC 自然发生说，无生源说spontaneous generation, abiogenesis 原界urkingdom 始祖生物progenote 古始生物界archetista 古细菌archaebacteria 原生生物protista 原生动物protozoan 原生植物protophyte 真核生物eukaryote 原核生物prokaryote 裂殖植物schizophyte 微生物microorganism 数值分类法numerical taxonomy 模式目type order 模式科type family 模式属type genus 模式种type species 模式株type strain 真菌fungi 捕食真菌predacious fungi 虫道真菌ambrosia fungi 地下真菌hypogeal fungi 虫生真菌entomogenous fungi 菌根真菌mycorrhizal fungi 木腐菌wood-decay fungi 霉菌mold, mould 半知菌imperfect fungi 子囊菌ascomycetes 粘菌slime mold, slime mould 壶菌chytrid 卵菌oomycetes 接合菌zygomycetes 担子菌basidiomycetes 核菌pyrenomycetes 盘菌cup fungi 块菌truffles 锈菌rust fungi 蘑菇mushrooms 毒蘑菇poisonous mushroom 酵母菌yeast 无孢子酵母菌asporogenous yeasts 有孢子酵母菌sporogenous yeasts 黑粉菌smut fungi
大学校园空气微生物污染调查
大学校园空气微生物污染调查 了解校园四季空气中微生物含量变化趋势与污染情况。方法采用撞击式采样器，在人员负荷最重、活动最频繁时，对某大学校园空气中细菌粒子和霉菌粒子含量进行检测。结果校园空气微生物含量在季节间有很大不同，细菌含量在夏季最高，霉菌含量高峰在夏秋两季。细菌浓度比较高的功能区有道路、寝室、食堂、超市、体育馆、微机室和教室。可吸入霉菌粒子占霉菌粒子总数的比例高于细菌粒子。结论校园空气微生物含量在多种因素的综合影响下，季节间和不同功能区之间均表现出明显的差异，存在一过性污染情况。 空气中的微生物往往吸附在颗粒物上形成生物粒子，随风飘荡，其中小粒径的生物粒子在疾病传播方面具有更大意义。研究表明，空气中微生物数量的多少与环境、清洁卫生状况、人员密度和活动情况、空气流通程度等因素有关[1，2]。高校校园是师生集中生活和学习的地方，普遍存在空气微生物污染问题[3，4]。加强对高校校园空气微生物的监测，对于了解校园卫生状况，加强环境卫生管理有着非常重要的参考意义。采用空气中生物粒子数(菌落总数，cfu)这一指示微生物指标对校园主要功能区空气质量进行生物学评价。 1.材料与方法 1.1 校园概况沈阳市内某高校，2001年新迁校址，主要建筑物距离城市南北向主干道约150～1000m。 1.2采样为全面反映校园内师生主要活动区域空气微生物状况，按功能不同将校园分成12个不同的功能区，即操场、道路、绿地、食堂、宿舍、教室、图书馆、微机室、实验室、超市、体育馆和办公室。参照《公共场所卫生监测技术规范》(GB/T 17220-1998)，共设采样点126个。于2008-12，2009-03、2009-06、2009-09采样，分别代表冬、春、夏和秋四季，在各功能区人员负荷最重、活动最频繁时采样。参照《公共场所空气微生物检验方法》(GB/T18204.1-2000)，采用撞击式采样。JWL-2型采样器有上、下两级，上级收集粒径 及以上的微生物粒子，下面级收集以下粒径的可吸入微生物粒子。采样高度为1.2～1.5m，采样时间1min，采样流量28.3L/min。细菌在37℃培养48h，霉菌在26℃培养72h 后，分别计数两级采样皿中的细菌菌落数和霉菌菌落数(cfu)，也即捕获在采样皿中的空气细菌粒子数和霉菌粒子数。全年共采样2016份。 1.3培养基营养琼脂培养基和高盐查氏培养基购自北京奥博星生物技术有限责任公司。按使用说明配置、灭菌。使用Φ9cm平皿，每平皿倾注20ml培养基，冷却备用。 1.4主要仪器JWL-2 两级筛孔型撞击式空气微生物采样器，北京检测仪器有限公司；DXC-280B型不锈钢手提式灭菌器，上海申安医疗器械厂；YLN-30A菌落计数器，北京市亚力恩机电技术研究所；SHP-250型生化培养箱和MJP-250型霉菌培养箱，上海精宏实验设备有限公司；DB-4A控温电热板，金坛市天竟实验仪器厂，环境温度在零度以下采样时使用。 1.5 统计分析菌落计数后，按照公式n=N×1000/(Q×t)计算受检空气中微生物含量。式中：N—平皿菌落计数，个；Q—空气流量，L/min；t—采样时间，min。 1.6质量评价我国《室内空气质量标准》(GB/T18883-2002)规定，室内细菌菌落总数≤2500cfu/m3为合格。 2.结果 2.1空气中细菌粒子浓度及其变化趋势结果见表1，图1。 由表2可见，同样在冬季，室外空气中霉菌粒子含量明显低于其它三个季节，而在室内
土壤微生物生物量的测定方法
土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法） 基本原理 新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生 物生物量碳，用一定体积的LK 2SO 4 溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微 生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。 实验仪器 自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。 实验试剂 1）无乙醇氯仿（CHCL 3 ）； 2）L硫酸钾溶液：称取87g K 2SO 4 溶于1L蒸馏水中 3）工作曲线的配制：用L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、 70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下， 仪器会自带的标曲，一般不用自己做的） 操作步骤 土壤的前处理（过筛和水分调节略） 熏蒸 称取新鲜（相当于干土，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO 2 ，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。 抽真空处理 熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完
全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。同时，另称等量的3份土壤，置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。（注意：熏蒸后不可久放，应该快速浸提）※ 浸提过滤 从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样完全转移到80ml聚乙烯离心管中，加入40ml L硫酸钾溶液（土水比为1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g，即，4g土：16ml的硫酸钾溶液，当然这个加入量要根据TOC仪器的进入量决定）300r/min振荡30min，用中速定量滤纸过滤。同时作3个无土壤基质空白。土壤提取液最好立即分析，或—20℃冷冻保存（但使用前需解冻摇匀）（注意这部分很重要，有研究结果表明：提取液如果不立即分析，请保存在—20℃，否则将影响浸提液的效果，其次，过滤时不要用普通的定性或定量滤纸，以免长久杂质会堵塞仪器的管路，建议使用那种一次性塑料注射器，配一个的滤头，一个才1元）。 TOC仪器测定 吸取上述土壤提取液10ul（这个要根据仪器自己的性能决定，但是一般情况下，在测定土壤滤液时候，要对其进行稀释，如果不稀释，一方面超过原来仪器的标曲，另一方面可能堵塞仪器。）注入自动总有机碳（TOC）分析仪上，测定提取液有机碳含量。由于总有机碳分析仪型号较多，不同的型号则操作程序存在较大差异，这里以本实验室使用的有机碳分析仪（Shimadzu Model TOC---500,JAPAN）为例。 计算 SMBC=(E C CHCL3—E C CK)*TOC仪器的稀释倍数*原来的水土比/ 2 土壤微生物生物量氮（茚三酮比色法） 土壤微生物生物氮一般占土壤全氮的2%—7%，是土壤中有机—无机态氮转化的一个重要环节，关于土壤微生物氮的测定常见的熏蒸浸提法有两种，一是全氮测定法，另一个是茚三酮比色法，如下 基本原理（茚三酮比色法）
微生物计数方法
微生物的显微直接计数法 一、实验目的 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。 二、实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3 所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d） 三、实验器材 1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。 2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 四、实验方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
K-e湍流模型
K是紊流脉动动能（J）, &是紊流脉动动能的耗散率（% ） K越大表明湍流脉动长度和时间尺度越大，￡越大意味着湍流脉动长度和时间 尺度越小，它们是两个量制约着湍流脉动。 但是由于湍流脉动的尺度范围很大，计算的实际问题可能并不会如上所说的那样存在一个确切的正比和反比的关系。在多尺度湍流模式中，湍流由各种尺度的涡动结构组成，大涡携带并传递能量，小涡则将能量耗散为内能。 在入口界面上设置的K 和湍动能尺度对计算的结果影响大， 至于k 是怎么设定see fluent manual "turbulence modelling" 作一个简单的平板间充分发展的湍流流动， 基于k-e 模型。 确定压力梯度有两种方案，一是给定压力梯度，二是对速度采用周期边界条 件，压力不管！ k-epsiloi n 湍流模型参数设置：k —动能能量；epsilo n —耗散率； 在运用两方程湍流模型时这个k 值是怎么设置的呢？epsilon 可以这样计算吗？Mepsilo n = Cu*k*k/Vt% 这些在软件里有详细介绍。陶的书中有类似的处理，假定了进口的湍流雷诺 数。 fluent 帮助里说，用给出的公式计算就行。 k—e 模型的收敛问题！ 应用k—e 模型计算圆筒内湍流流动时，网格比较粗的时计算结果能收敛，但是当网格比较密的时候，湍流好散率就只能收敛到10 的—2 次方，请问大侠有没有解决的办法？ 用粗网格的结果做初场网格加密不是根本原因，更本的原因是在加密过程中，部分网格质量差注意改进网格质量，应该就会好转. 在求解标准k-e 双方程湍流模型时（采用涡粘假设，求湍流粘性系数，然后 和N—S 方程耦
微生物检验手册(中文)
1、实验材料 2、试剂 氯化钠(Sigma) 平板计数琼脂PCA(DIFCO) 3次超纯水 3、试剂配制方法 （1）0.85%NaCl (250 ?) (2)Plate Count Agar （100 ?） Plate Count Agar(DIFCO) 2.35 g3次超纯水100 ?，121 ℃15分钟灭菌。 (3) 0.85% NaCl (100 ?) 4、实验步骤 所有微生物实验中，除均质在无菌室进行，其余的操作都要在超净工作台内。 （1）无菌操作取25g或25ml样品，加入225 ?灭菌生理盐水；均质2分钟。 （2）取1?样液加入到9 ?生理盐水试管中。 （3）依次做10倍梯度稀释。 （4）从合适的梯度中取1 ?加到无菌平板中（做2个平板），加入20 ?平板计数琼脂，混匀。
（5）冷凝后放到35±1℃培养箱中培养24~48h。 （6）菌落计数 ★菌落总数试验方法 ↓ ↓ 4．菌落计数(所有菌落定量实验都采取这种方法) 韩国方法中要求每个平板中30－300内的计数 参照GB/T 4789.2-2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定
定性实验： 1. 实验材料 2. 试剂 3. 试剂配制方法 (1) 0.85% NaCl (250 ?) (2) Brilliant Green Lactose Broth (100? ) (3) EMB Agar (DIFCO) (100? ) NaCl Brilliant Green Lactose Broth (DIFCO) EMB Agar (DIFCO) 营养琼脂 (DIFCO) 3次超纯水 革兰氏染色试剂条 (MERCK)
微生物大小与数量的测定实验报告
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
几种湍流模型
解决湍流的模型总计就是那几个方程，Flue nt又从工程和数值的角度进行了整理，下面就是这些湍流模型的详细说明。 FLUENT提供了以下湍流模型： ?Spalart-Allmaras 模型 ?k-e模型 —标准k-e模型 —Ren ormalizatio n-group （RNG^e 模型 —带旋流修正k-e模型 ?k-3模型 —标准k- 3模型 —压力修正k- 3模型雷诺兹压力模型大漩涡模拟模型 几个湍流模型的比较： 从计算的角度看Spalart-Allmaras模型在FLUENT中是最经济的湍流模型，虽然只有一种方程可以解。由于要解额外的方程，标准ke模型比Spalart-Allmaras模型耗费更多的计算机资 源。带旋流修正的k-e模型比标准ke模型稍微多一点。由于控制方程中额外的功能和非线性，RN&七模型比标准k-e模型多消耗10?15%的CPU时间。就像k七模型，k-3模型也是两个方程的模型，所以计算时间相同。 比较一下k◎莫型和k-3模型，RSM模型因为考虑了雷诺压力而需要更多的CPU时间。然而高效的程序大大的节约了CPU时间。RSM模型比k-e模型和k-3模型要多耗费50?60%的CPU 时间，还有15?20%的内存。 除了时间，湍流模型的选择也影响FLUENT勺计算。比如标准k-e模型是专为轻微的扩散 设计的，然而RNGk-e模型是为高张力引起的湍流粘度降低而设计的。这就是RNG莫型的缺点。同样的，RSM模型需要比k-e模型和k-3模型更多的时间因为它要联合雷诺压力和层流。 概念：1?雷诺平均：在雷诺平均中，在瞬态N-S方程中要求的变量已经分解为时均常量和变量。 相似的，像压力和其它的标量 ；（10.2-2） i「 这里??表示一个标量如压力，动能，或粒子浓度。 2. Boussinesq逼近从雷诺压力转化模型：禾U用Bouss in esq假设把雷诺压力和平均速度梯度 联系起来： +茁飞（肚+川亦）也（10 2-O） Boussinesq假设使用在Spalart-Allmaras模型、k-e模型和k- 3模型中。这种逼近方法好处是对计算机的要求不高。在Spalart-Allmaras模型中只有一个额外的方程要解。k-e模型和k-3模型 中又两个方程要解。Bouss inesq假设的不足之处是假设u t是个等方性标量，这是不严格的。
微生物的分类
第十一章微生物的分类习题 一、填空题 1、以进化论为指导思想的分类学，其目的已不仅是物种的识别和归类，而主要是通过分类追溯系统发生，推断进化谱系，这样的分类学也称。（生物系统学） 2、大量资料表明：功能重要的大分子或功能重要的大分子区域比功能不重要的分子或分子区域进化变化的。（速率低） 3、微量多项试验鉴定系统，实际上是一类专门设计制作的特征检测卡。（生理生化） 4、《伯杰氏系统细菌学手册》第一版分卷出版，它将原核生物分成组。（4、 33） 5、微生物种的学名由和两部分构成。（属名种名加词） 6、分类学的内容涉及3个互相依存又有区别的组成部分，即、命名和。（分类，鉴定） 7、如果相似性系数（S ）等于1，说明所比较的两菌株rRNA序列， AB 值小于0.1，则表明两菌株亲缘关系。（相同，很远） 若S AB 8、API/ATB是微量多项试验鉴定系统，它包括众多的，共计有几百种生理生化反应，可鉴定几乎所有常见的。（鉴定系统，细菌）9、微孔滤膜菌落计数板是一种可携带的检测水中大肠菌数的大肠菌测试卡，因可以放在人体内衣口袋中培养，而适于工作和使用。（野外，家庭） 10、伍斯用寡核苷酸序列编目分析法对微生物的16S?rRNA序列进行比较后，提出将生物分成三界（域）：、、和。（古细菌真细菌真核生物） 11、伍斯为了避免把古细菌也看作是细菌的一类，他又把三界（域）改称为：、、和。并构建了三界（域）生物的系统树。（细菌古细菌真核生物） 二、选择题 1、《伯杰氏系统细菌学手册》第二版把葡萄球菌属和微球菌属分别放在不同的门中，最可能的原因是（ 4 ）。 （1）生理生化特征不同（2）DNA—DNA杂交同源性不同
空气中微生物检测
空气中微生物检测 空气中微生物的检测 1。实验目的 本实验中使用的灭菌培养皿在空气中取样并培养一段时间以测定空气中的微生物。其实验意义在于: (1)了解空气中微生物的分布 (2)比较了普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和类型 (3)验证微生物实验中无菌操作的重要性二。实验原理 空气是人类维持正常活动的物质条件，与人类健康有着非常密切的关系。随着社会进入信息时代，空气微生物的采样和检测也得到了迅速发展。已经开发了各种快速、灵敏、特异和高度自动化的仪器。为了保持高质量的空气环境，应该使用正确和先进的空气监测方法。在我们周围环境中有大量的微生物空气也不例外。尽管空气不是微生物的良好栖息地然而，由于气流、灰尘和水滴的流动、人类和动物活动等原因，仍然存在相当数量的微生物。 中空气微生物的采集方法很多，主要采用空气微生物采样器采样监测，自然沉降采样法采样。本文介绍了各种采样方法的性能，以便正确选择各种采样方法。空气微生物采样主要涉及四个方面:采样器、采样介质、采样方法和检测程度。空气微生物采样器主要包括:冲击采样器、过滤空气采样器、离心空气采样器、旋风采样器、静电沉降采样器等 当空气中的单个微生物落在适合其生长和繁殖的固体培养基表面
时，在适当温度下培养一段时间后，每个分散的菌体或孢子将形成一个肉眼可见的细胞群体或菌落。通过观察不同大小和形状的菌落，可以大致识别空气中存在的微生物类型。本实验通过检测普通实验室和无菌间空气中存在的微生物，来判断无菌间的消毒效果，了解空气中常见的微生物群。三。实验装置和仪器 1。实验仪器 (1)无菌板，组数(2)酒精灯，恒温箱数×1 (3)，数量×2 (4)高压釜(5)干热灭菌器(6)冰箱 (7)板(直径9厘米)(8)量筒(9)烧瓶(10)酸度计2。实验所需试剂 (1)蛋白胨，量10g (2)牛肉膏，量3g (3)氯化钠5g (4)琼脂15-20g (5)蒸馏水1000毫升 4，实验步骤 1。琼脂培养基制备方法:将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合，加热溶解 ，调至7.4，过滤分装，高压灭菌121℃和20min，用自然沉降法测定时，将约15mL倒入灭菌板中，制成营养琼脂板2.倒置板:培养基按常规方法制备，分成三角瓶，高压灭菌备用使用 前，将培养基融化，冷却至50℃左右，倒入几个盘子备用。 3。检测:首先打开无菌室内的紫外线灯，照射15分钟后关闭。打开上面浓缩了 的无菌平板的皿盖，将皿盖暴露在无菌室空间和普通实验室空间中，分别不移动5min和30min后盖上皿盖每个培养基的平板要求在每个
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定 一、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 ----测定方法--平皿沉降法 二、测定原理 空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。 三、试剂 营养琼脂 1、成分 A蛋白胨 1g B牛肉膏 0.3g
微生物大小测定
微生物的大小测定 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.了解显微镜测定微生物大小的原理。 2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微 尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。 【实验原理】 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 1.目镜测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分（如图1所示）。 图1 目镜测微尺 测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校
正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2.镜台测微尺 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的（如图2所示）。 图2 镜台测微尺 校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 【实验材料】 1.菌株 酵母菌液， 枯草芽孢杆菌斜面培养物
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法摘要：本文使用了目镜测微尺和镜台测微尺来测量野生酵母的细胞大小，得到的结果是宽在5.78~11之间，长在8.25~20之间。然后用血细胞计数板对酵母菌进行计数，并绘制其生长曲线，有四个时期，分别是延滞期、对数期、稳定期和衰亡期。 关键词：细胞大小血细胞计数板酵母菌生长曲线 前言 生产生活中利用微生物时，需要了解微生物的一些基本物理属性，如菌体的大小形状等。本实验利用显微测微尺对野生酵母进行测量，并用血球计数板对酵母菌进行其生长曲线的测定，了解去生长规律。通过此综合性实验加深对无菌操作的印象，并将其掌握。 1实验材料与仪器 1．1实验材料与试剂 麦芽汁培养基、生理盐水、果汁（自制）、活化的酵母菌、酒精 1．2实验仪器 锥形瓶、试管、接种环、移液枪、显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、血细胞计数板、吸水纸、酒精灯 2实验方法 2．1预准备 2.1.1培养基的制备 麦芽汁培养基（130.1g/L）200ml*4瓶 麦芽汁琼脂培养基（145.1g/L）5ml*2支试管150ml*1瓶 生理盐水9ml*20支 （制备后高压蒸汽灭菌121℃，20min） 2.1.2酵母分离纯化 平板划线分离：先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释, 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少, 并逐步分散开
来。经培养后,可在平板表面形成分散的单 个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细 胞形成的，需再重复划线1-2次, 并结合显 微镜检测个体形态特征, 才可获得真正的 纯培养物。 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上 挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。点燃酒精灯。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。 简述如下：1)手持试管：将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞：先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。3)取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。4)拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。5)接种环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。6)取菌：待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。8)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
空气中微生物检测1
一、空气中微生物的检测 一、实验目的 1了解空气中微生物的分布状况，学习空气采样方法 2掌握空气中微生物的检测方法 二实验原理 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成“气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中。 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。 在本次实验中测量空气中微生物含量，主要是利用空气的自然沉降法，也有其它方法，如撞击法，过滤法等。 三实验器材 电炉，培养基，培养箱，无菌台 四实验步骤
微生物大小及数量地测定
微生物大小及数量的测定 一、实验目的： 1、学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法 2、掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细 胞大小的感性认识 3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法 二、实验器材 1、菌种： 枯草芽孢杆菌、酿酒酵母 2、溶液和试剂 香柏油、二甲苯、美兰染液 3、仪器和其他用品 目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、软布、血细胞计数 板、凹载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、试管、吸管、移液枪 三、实验原理 1、测微尺： 微生物大小的测定，需要借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括 目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。 镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为是10个小格，共100个小格，每个小格长度为0.01mm，即10μm。刻线外有一直径为φ3，粗线为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久
用而不受损伤。。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜 测微尺每一格的相对长度。 目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻 度，一般有等分为50个小格和100个小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度 也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 球菌用直径表示大小，杆菌用长和宽来表示大小 2、显微镜计数： 显微镜计数是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载 玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。目前国内外常用的 计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。其中血细胞 计数板较厚，不能用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等的计数，
微生物专业术语
杂色曲霉素 A versicolorin A [孢子]切落abjunction 抑殖素ablastin 流产菌素abortin [孢子]缢断abstriction 分生孢子盘acervulus 醋化作用acetification 产乙酸菌acetogen 消色差透镜achromatic lens 抗酸细菌染色法acid-fast staining 酸化作用acidification 嗜酸菌acidophilic bacteria 拉霉素aclacinomycin 顶生孢子acrospore 放线酮actidione, cycloheximide 放线菌actinomycetes 放线菌素actinomycin 活性污泥activated sludge 活性干酵母active dry yeast 腺伴随病毒adeno associated virus 腺病毒adenovirus 粘附素adhesin 阿霉素adriamycin 锈孢子aeciospore 锈子器aecium 气生菌丝体aerial mycelium 需氧菌aerobe 需氧培养aerobic cultivation 需氧呼吸aerobic respiration 需氧生活aerobiosis 产气菌aerogen 趋氧性aerotaxis 耐氧菌aerotorelant bacteria 粘菌体aethalium 黄曲霉毒素aflatoxin 琼脂agar 琼脂平板agar plate 琼脂斜面agar slant 伞菌氨酸agarfitine 蘑菇素agaricin 蘑菇酸agaricinic acid 攻击素aggressin 攻击力aggressivity 陈酿化aging 农业微生物学agricultural microbiology
空气细菌总数的测定教案资料
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定 一、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 ----测定方法--平皿沉降法 二、测定原理 空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露 5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。 三、试剂 营养琼脂 1、成分 A蛋白胨 1g