实验室常用培养基讲课讲稿

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1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）

牛肉膏3g ，蛋白胨10g ，NaCl 5g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.6

2. 高氏1 号培养基( 用于放线菌培养)

可溶性淀粉20g ，KNO 3 1g ，NaCl 0.5g ，K 2 HPO 4- · 3H 2 O 0.5g ，MgSO

4 · 7H 2 O 0.5g, ，FeSO4 · 7H 2 O 0.01g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.6 。

配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。

3 ．马丁氏（Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌）

K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g ，蛋白胨5g ，葡萄糖10g ，1/3000 孟

加拉红水溶液100mL, 水900mL ，自然pH ，121 ℃湿热灭菌30min 。

待培养基融化后冷却55 ～60 ℃时加入链霉素( 链霉素含量为30 μ g/mL).

4. 马铃薯培养基(PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养)

马铃薯( 去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖) 20g, 水1000mL

配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧

杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液

加糖, 再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖.

5. 察氏培养基( 蔗糖硝酸钠培养基)( 用于霉菌培养)

蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 · 7H

2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ～7.2

6. Hayflik 培养基( 用于支原体培养)

牛心消化液( 或浸出液)1000mL, 蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼脂15g, pH7.8 ～

8.0,

分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊是极毒的药品, 需特别注意安全操作.

7 ．麦氏(McCLary) 培养基( 醋酸钠培养基)

葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g ，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ，蒸馏水

l00mL 。溶解后分装试管，1l5 ℃湿热灭菌15min 。

8 ．葡萄糖蛋白胨水培养基( 用于V.P ．反应和甲基红试验)

蛋白胨0.5g ，葡萄糖0.5g ，K 2 HPO 4 0.2g ，水100mL, pH7.2, 1l5 ℃湿热灭菌20min 。

9 ．蛋白胨水培养基( 用于吲哚试验)

蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL ，pH7.2 ～7.4, 121 ℃湿热灭菌20min 。

10 ．糖发酵培养基( 用于细菌糖发酵试验)

蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ，水100mL ，溴麝香草酚蓝( 质量分数1% 水溶液) 0.3mL ，糖类lg 。分别称取蛋白胨和NaCl 溶于热水中，调pH 至7.4 ，再加入溴麝香草酚蓝( 先用少量质量分数95% 乙醇溶解后，再加水配成质量分数1% 水溶液) ，加入糖类，分装试管，装量4 ～5cm 高，并倒放入一杜氏小管( 管口向下，管内充满培养液) 。115 ℃湿热灭菌

20min 。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等( 后两种糖的用量常加大为质量分数1.5%) 。

11. RCM 培养基( 强化梭菌培养基) ( 用于厌氧菌培养)

酵母膏3g ，牛肉膏l0g ，蛋白胨10g ，可溶性淀粉lg ，葡萄糖5g, 半胱氨酸盐酸盐0.5g ，NaCl 3g ，NaAc 3g, 水l000mL, pH8.5 ，刃天青3mg/L,

l2l ℃湿热灭菌30min 。

12. TYA 培养基( 用于厌氧菌培养)

葡萄糖40g ，牛肉膏2g ，酵母膏2g ，胰蛋白胨(bacto-typetone)6g ，醋酸

铵3g, KH 2 PO 4 0.5g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.2g ，FeSO 4 · 7H 2 O 0.01g ，水1000mL, pH6.5, 121 ℃湿热灭菌30min 。

13 ．玉米醪培养基( 用于厌氧菌培养)

玉米粉65g ，自来水1000mL ，混匀，煮10min 成糊状，自然pH, 121 ℃湿热灭菌30min 。

14 ．中性红培养基( 用于厌氧菌培养)

葡萄糖40g ，胰蛋白胨6g ，酵母膏2g ，牛肉膏2g ，醋酸铵3g ，KH 2 PO 4 5g ，中性红0.2g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.2g ，FeSO 4 · 7H 2 O 0.01g, 水1000ml, pH6.2, 121 ℃湿热灭菌30min 。

15 ．CaCO3 明胶麦芽汁培养基( 用于厌氧菌培养)

麦芽汁(6 波美)1000mL ，水1000mL ，CaCO 3 10g, 明胶10g ，pH6.8, 121 ℃湿热灭菌30min 。

16 ．BCG 牛乳培养基( 用于乳酸发酵)

(A) 溶液：脱脂乳粉100g ，水500mL ，加入质量分数1.6% 溴甲酚绿(B.C.G) 乙醇溶液1mL ，80 ℃灭菌20min 。

(B) 溶液：酵母膏10g ，水500mL ，琼脂20g , pH6.8, 121 ℃湿热灭菌

20min 。

以无菌操作趁热将(A) 、(B) 溶液混合均匀后倒平板。

17 ．乳酸菌培养基( 用于乳酸发酵)

牛肉膏5g ，酵母膏5g ，蛋白胨10g ，葡萄糖10g ，乳糖5g, NaCl 5g ，水1000mL, pH6.8, 121 ℃湿热灭菌20min 。

18 ．酒精发酵培养基( 用于酒精发酵)

蔗糖10g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, NH 4 NO 3 0.5g, 质量分数20% 豆芽汁2mL, KH 2 PO 4 0.5g ，水100mL ，自然pH 。

19. 柯索夫培养基( 用于钩端螺旋体培养)

优质蛋白胨0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO 3 0.01g ，CaCl 0.02g, KH 2 PO

4 0.09g, NaH 2 PO 4 0.48g, 蒸馏水500 mL ，无菌兔血清40mL 。

制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调pH 至7.2, 121 ℃湿热灭菌20min ，待冷却后，加入无菌兔血清，制成8% 血清溶液，然后分装试管（5 ～10mL/ 管）, 56 ℃水浴灭活lh 后备用。

20 ．豆芽汁培养基

黄豆芽500g ，加水1000mL ，煮沸lh ，过滤后补足水分，121 ℃湿热灭菌后存放备用，此即质量分数为50% 的豆芽汁，

用于细菌培养：质量分数10% 豆芽汁200mL ，葡萄糖( 或蔗糖)50g ，水800mL, pH7.2 ～7.4 。

用于霉菌或酵母菌培养：质量分数10% 豆芽汁200mL ，糖50g ，水800mL ，自然pH 。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

21 ．LB(Luria—Bertani) 培养基( 细菌培养，常在分子生物学中应用)

双蒸馏水950mL ，胰蛋白胨l0g, NaCl l0g ，酵母提取物(bacto- yeast extract)5g ，用lmol/L NaOH ( 约l mL) 调节pH 值至7.0 ，加双蒸馏水至总体积为1L ，121 ℃湿热灭菌30min 。

含氨苄青霉素LB 培养基: 待LB 培养基灭菌后冷至50 ℃左右加入抗生素，至终浓度为80 ～100mg/L 。

22 ．复红亚硫酸钠培养基( 远藤氏培养基) ( 用于水体中大肠菌群测定)

蛋白胨10g ，牛肉浸膏5g ，酵母浸膏5g ，琼脂20g ，乳糖10g, K 2 HPO 4 0.5g ，无水亚硫酸钠5g, 5% 碱性复红乙醇溶液20mL ，蒸馏水1000mL 。

制作过程：先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL 水中，加热溶解，再加入K 2 PO 4 ，溶解后补充水至l000mL ，调pH 至7.2 ～7.4 。随后加入乳糖，混匀溶解后，于115 ℃湿热灭菌20min 。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min 后，立即滴加于20mL 质量分数5% 碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再用。

23 ．乳糖蛋白胨半固体培养基( 用于水体中大肠菌群测定)

蛋白胨10g ，牛肉浸膏5g ，酵母膏5g ，乳糖10g ，琼脂5g ，蒸馏水1000mL ，pH7.2 ～7.4 ，分装试管(l0mL/ 管), 115 ℃湿热灭菌20min 。

24 ．乳糖蛋白胨培养液( 用于多管发酵法检测水体中大肠菌群)

蛋白胨10g ，牛肉膏3g ，乳糖5g ，NaCl 5g ，蒸馏水l000mL ，质量分数1.6% 溴甲酚紫乙醇溶液lmL 。调pH 至7.2 ，分装试管(l0mL/ 管) ，并放入倒置杜氏小管，l15 ℃湿热灭菌20min 。

25 ．三倍浓乳糖蛋白胨培养液( 用于水体中大肠菌群测定)

将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大3 倍加入到l000mL 水中，制法同上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中，每管5mL ，1l5 ℃湿热灭菌20min 。

26 ．伊红美蓝培养基(EMB 培养基)( 用于水体中大肠菌群测定和细菌转导)

蛋白胨l0g, 乳糖10g, K 2 HPO 4 2g ，琼脂25g, 质量分数2%/ 伊红Y( 曙红) 水溶液20mL, 质量分数0.5% 美蓝( 亚甲蓝) 水溶液l3mL ，pH7.4 。

制作过程：先将蛋白胨、乳糖、K 2 HPO 4 和琼脂混匀，加热溶解后，调pH 至7.4, 1l5 ℃湿热灭菌20min ，然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，充分混匀，防止产生气泡。待培养基冷却到50 ℃左右倒平皿。如培养基太热会产生过多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖，其余成分不变。

27 ．加倍肉汤培养基( 用于细菌转导)

牛肉膏6g ，蛋白胨20g, NaCL 10g ，水1000mL, pH7.4 ～7.6 。

28 ．半固体素琼脂( 用于细菌转导)

琼脂1g ，水100mL, 121 ℃湿热灭菌30min 。

29 ．豆饼斜面培养基( 用于产蛋白酶霉菌菌株筛选)

豆饼100g 加水5 ～ 6 倍，煮出滤汁100mL ，汁内加入KH 2 PO 4 质量分数为0.1%, MgSO 4 质量分数为0.05%, (NH 4 ) 2 SO 4 质量分数为0.05% ，可溶性淀粉质量分数为2%, pH6 ，琼脂质量分数为2% ～ 2.5% 。

30 ．酪素培养基( 用于蛋白酶菌株筛选) 分别配制A 液和B 液。

A 液：称取Na 2 HPO 4 · 7H 2 O 1.07g 。干酪素4g ，加适量蒸馏水，并加热

溶解。

B 液：称取KH 2 PO 4 0.36g ，加水溶解。

A 、

B 液混合后，加入酪素水解液0.3 mL, 加琼脂20g ，最后用蒸馏水定容至1000mL 。

酪素水解液的配制：1g 酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入质量分数1% 的枯草芽孢杆菌蛋白酶25mL 加水至100mL, 30 ℃水解lh 。用于配制培养基时，其用量为1000mL 培养基中加入100mL 以上水解液。

31 ．细菌基本培养基( 用于筛选营养缺陷型)

Na 2 HPO 4 · 7H 2 O 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.2g , 葡萄糖5g , NaCl 5g , K 2 HPO 4 lg ，水l000mL, pH7.0, 1l 5 ℃湿热灭菌30min 。

32. YEPD 培养基( 用于酵母原生质体融合)

酵母粉10g, 蛋白胨20g ，葡萄糖20g ，蒸馏水1000mL, pH6.0 ，115 ℃湿热灭菌20min 。

33. YEPD 高渗培养基( 用于酵母原生质体融合)

在YEPD 培养基中加入0.6mol/L 的NaCL ，质量分数3% 琼脂。

34. YNB 基本培养基( 用于酵母原生质体融合)

质量分数0.67% 酵母氮碱基(YNB, 不含氨基酸，Difco), 质量分数2% 葡萄糖，质量分数3% 琼脂，pH6.2 。另一配方为：葡萄糖10g (NH 4 ) 2 SO 4 1g ，K 2 HPO 4 0.125g ，KHPO 4 0.875g, KI 0.0001g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, CaCl 2 · 2H 2 O 0.lg, NaCl0.1g ，维量元素母液lmL, 维生素母液lmL( 母液均按常规配制) ，水1000mL, pH5.8 ～ 6.0 。

35. YNB 高渗基本培养基( 用于原生质体融合)

在YNB 基本培养基中加入0.6mol/LNaCl 。

36 ．酚红半固体柱状培养基( 用于检查氧与菌生长的关系)

蛋白胨1g ，葡萄糖10g, 玉米浆10g ，琼脂7g, 水1000mL ，pH7.2 。在调好pH 后，加入质量分数 1.6% 酚红溶液数滴，至培养基变为深红色，分装于大试管中，装量约为试管高度的1/2 ，1l5 ℃灭菌20min 。细菌在此培养

基中利用葡萄糖生长产酸，使酚红从红色变成黄色，在不同部位生长的细菌，可使培养基的相应部位颜色改变。但注意培养时间太长，酸可扩散以致不能正确判断结果。

以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态，只需改变琼脂用量即可，前者质量分数为 1.5% ～ 2.0% ，后者质量分数为0.3% ～0.8% 。

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

培养基的配置和灭菌

培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制1000ml培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上

细胞培养基种类

细胞培养基的选择及常用数据库 日期：2012-04-13来源：未知作者：网友点击：次细胞实验技术 经典的培养基有很多种，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 ◆MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及 浓度。 ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于 贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。 ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细 胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。 ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于 克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞 的培养。 以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，也很好用。选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。Sigma网站上也有一个Media Expert，包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等，它还

常用细菌培养基配方

常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

实验室常用培养基的配制方法

五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后，4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin

第五章 微生物的营养和培养基习题整理

第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%

实验室常用培养基大全

表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/bc10895350.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/bc10895350.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟

嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/bc10895350.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装

实验室常用培养基配方

031*-2./4,+ 5 86779\_V_[_PUY\RQTXYWYS^QO\OWYS YXWUXR:bkkiNIIlllHk_d_j_H`hfH`g Ofic`ceecg EKJJ faIfeF rqq 74p 76z 7:5256658vq 76 ro Jf v 4z 7:5256658-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA UZ\S ELM faIfeF su 74p 76*./}vq 76 ro Jf ros 4*./}-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA ]GS_e ELJ faIfeF nsq BIVGMA r + ro Jlwgt\E -} r +rH .A so ]q~yqq 76Nme 0uEKR_FoaA to O]v ,,1-~C~qos 76@EP`:~+,xoq A uo ]me 0u^j{[Qp ,r +A vo TvTzicYEdn ,svA wo ]q r 76z 7:5256658C rqq 74p 76DYb *ZXA xo u BGMA

031*-2./4,+ 5 9678 :UWPWTW JOSULKNRSQSMV KIUIQSM SRQORL;Y``^HGGaaaF`WZW_WFX][FX\ i x if ]wZjnOFp>hfio y wv j |{l @hfoj y w j v|{l ?ihh 21< aU jfki /wv j |{l M ijfml /w j v|{l r qh 21I_Xyix@TAaUN@R_Xy iJbu ihh 21@LkLm[V

实验室常用培养基

实验用培养基配制 > 1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）7.6 ～1000mL ，pH7.4 10g ，NaCl 5g ，水牛肉膏3g ，蛋白胨) 用于放线菌培养号培养基 ( 2. 高氏 1 可溶性淀粉20g ，KNO 3 1g ，NaCl 0.5g ，K 2 HPO 4-·3H 2 O 0.5g ，MgSO 。～7.6 ，水1000mL ，pH7.4 7H 2 O 0.5g, 4 ·，FeSO4 ·7H 2 O 0.01g 配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。）培养基（用于从土壤中分离真菌）．马丁氏（ Martin 3 K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g ，蛋白胨5g ，葡萄糖10g ，1/3000 孟。30min 121 ℃湿热灭菌100mL, 水900mL ，自然pH ，加拉红水溶液 30 μg/mL). 链霉素含量为时加入链霉素( 待培养基融化后冷却55 ～60 ℃) 用于霉菌或酵母菌培养马铃薯培养基(PDA)( 4. 1000mL ) 20g, 水去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖马铃薯( 配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液. 酵母菌用葡萄糖霉菌用蔗糖, 1000mL, 加糖, 再补足至自然pH. ) )( 用于霉菌培养 5. 察氏培养基 ( 蔗糖硝酸钠培养基蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 ·7H 7.2 ～2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ) ( 用于支原体培养培养基6. Hayflik ～15g, pH7.8 琼脂10g, NaCl 5g, 蛋白胨)1000mL, 或浸出液( 牛心消化液． 8.0, 分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清 20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素 G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊. , 需特别注意安全操作是极毒的药品 ) 醋酸钠培养基培养基 (McCLary) ( 7 ．麦氏葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g ，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ，蒸馏水 15min 。℃湿热灭菌l00mL 。溶解后分装试管，1l5 ) ．反应和甲基红试验用于 V.P 8 ．葡萄糖蛋白胨水培养基 ( 蛋白胨0.5g ，葡萄糖0.5g ，K 2 HPO 4 0.2g ，水100mL, pH7.2, 1l5 ℃湿热20min 。灭菌 ) ( 用于吲哚试验9 ．蛋白胨水培养基。湿热灭菌20min ～7.4, 121 ℃蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL ，pH7.2 ) ( 用于细菌糖发酵试验10 ．糖发酵培养基蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ，水100mL ，溴麝香草酚蓝( 质量分数1% 水溶液) 0.3mL ，糖类lg 。分别称取蛋白胨和NaCl 溶于热水中，调pH 至7.4 ，再加入溴麝香草酚蓝( 先用少量质量分数95% 乙醇溶解后，再加水配成质量分数1% 水溶液) ，加入糖类，分装试管，装量 4 ～5cm 高，并倒放入一杜氏

微生物实验室常用仪器设备清单 (1)

微生物实验室常用仪器设备清单 微生物学实验室是生物学领域的一个基本实验室，对于一个完备的微生物学实验室，我们需要配置哪些仪器呢? 1、超净工作台 微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。 2、培养箱? 培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。生化培养箱只能控制温度，可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度，可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 ES5000-6S型智能配平仪 3、天平 天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。 4、微生物均质器 用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理，不需洗刷器皿等特点，是微生物实验中使用较为方便的仪器。 5、菌落计数器 菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大，拍照，计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 6、微波炉/电炉? 用于溶液的快速加热，微生物固体培养基的加热溶化。 7、高压灭菌锅? 微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。 8、移液器? 液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。? 9、低温冰箱? 冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存，有些要求是负20度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。? 10、生物安全柜? 微生物实验中涉及的试剂和样品微生物有些是有毒的，对于操作人员来说伤害较大。为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散，可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。? 11、摇床? 摇床是实验室常用的一种仪器，在微生物实验操作过程中，液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。 12、纯水装置? 超纯水器，制造出各精密检测无杂质、无污染的纯水，

实验室常用培养基

实验用培养基配制> 1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g，蛋白胨10g , NaCI 5g，水1000mL , pH7.4 ?7.6 2. 高氏1 号培养基（用于放线菌培养） 可溶性淀粉20g , KNO 3 1g , NaCI 0.5g , K 2 HPO 4- 3H 2 O 0.5g , MgSO 4 7H 2 O 0.5g, , FeSO4 -7H 2 O 0.01g，水1000mL , pH7.4 ?7.6。 配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3 ．马丁氏（Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌） K 2 HPO 4 1g , MgSO 4 -7H 2 O 0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g , 1/3000 孟加拉红水 溶液100mL,水900mL，自然pH , 121 C 湿热灭菌30min 。 待培养基融化后冷却55?60 C时加入链霉素（链霉素含量为30卩g/mL）. 4. 马铃薯培养基（PDA）（用于霉菌或酵母菌培养） 马铃薯（去皮）200g, 蔗糖（或葡萄糖） 20g, 水1000mL 配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸 30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖, 再补足至 1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖. 5. 察氏培养基（蔗糖硝酸钠培养基）（用于霉菌培养） 蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 7H 2 O 0.5g, KCI 0.5g, FeSO4 7H 2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ?7.2 6. HayfIik 培养基（用于支原体培养）

培养基配制、分装和灭菌

一、实验目的 1了解并掌握培养基的配制、分装方法； 2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。

微生物实验室常见20种培养基配方大全

微生物实验室培养基配方大全 一、糖发酵管 成分： 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g 氯化钠 3g 磷酸氢二钠2g 0.2％滇麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL PH 7.4 制法 1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。 2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶1000 mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。 注： 蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。 试验方法：

从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14~30d。 二、乳糖胆盐发酵管 成分： 蛋白胨 20g 猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g 乳糖 10g 0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL 制法：将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。 注： 双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。 三、5％乳糖发酵管 成分： 蛋白胨 0.2g 氯化钠 0.5g 乳糖 5g 2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL

蒸馏水 100mL pH 7.4 制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121 ℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。 注： 在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。 四、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用） 成分： 磷酸氢二钾 5g 多胨 7g 葡萄糖 5g 蒸馏水 1000mL 制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL ，121℃高压灭菌15min。 甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，

常用微生物培养基配方大全

常用微生物培养基配方 大全 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】

（1）分离细菌时，在培养基中加入浓度为50U/ml制霉菌素，可以抑制霉菌和菌的生长。 （2）（2）分离放线菌时，在样品中加入%十二烷基磺酸钠（SDS）不仅可以抑制细菌的生长，还能 激活放线菌孢子的萌发。加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（L）也可以有效地抑 制细菌和真菌，而不影响放线菌的生长。 （3）（3）分离霉菌和菌时，在培养基中加入青霉素、链霉素和四环素各30U/ml，可以抑制细菌和 放线菌生长。 （4）（4）分离根霉和毛霉时，由于这些微生物的菌丝易蔓延成片，难以得到纯化的菌落，通常在 培养基中添加%去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延，使菌落长得小而紧密。 （5）一般用于分离单一目的微生物的培养基中均含有抑制其他微生物的抑制剂，这些专用的抑制剂 在小型实验室配制较麻烦，现已有成品供应，只要直接加入基础培养基即可。如氨苄西林，主要用 于分离亲水气单孢菌。 （6） 1、细菌培养基 配方一牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏克，蛋白胨克，氯化钠克，琼脂克， 水 1000毫升 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到～,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。

常用微生物培养基手册大全

1、营养琼脂（普通琼脂） 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定） 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA） 制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1． 一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基 （肉膏汤BB） 成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克 氯化钠 5克 水 1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶， 1

121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基） 成份：1 新鲜牛肉浸液 1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕） 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠 0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。 2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂） 成份： 蛋白胨 10克 乳糖 10克 氯化钠 5克 琼脂 25（22）克 水 1000毫升 2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液 20毫升 2

生物实验室常用培养基和溶液配制

#1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)# 组份浓度：1MTris-HCl 配制量：1L 配制方法： 1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl 调节pH值至所需值。 pH 7.4 HCl 70ml; pH 7.6 HCl 60ml; pH 8.0 HCl 42ml 4.加水将溶液定容至1L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 #10&timeTEBuffer(pH7.4,7.6,8.0) 组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA 配制量：1L 配制方法： 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。 3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。 4.室温保存。 #1.5MTris-HCl(pH8.8) 组份浓度：1.5MTris-HCl 配制量：1L 配制方法： 1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。 2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.用浓盐酸调节pH值至8.8。 4.将溶液定容至1L。 5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 #3M醋酸钠(pH5.2)# 组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml 配制方法： 1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节pH值至5.2 3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。#Tris-HCl平衡苯酚# 配制方法： 1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH 值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1) 配制方法： 1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

常用25种培养基详细配方

一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用) 牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000ml pH 7．0—7．2 1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 二、淀粉琼脂培养基(高氏1号培养基，培养放线菌用) 可溶性淀粉20g KNO31g NaCl 0．5g K2HPO40．5g MgSO40．5g FeSO40．01g 琼脂20g 水1000ml pH 7．2—7．4 配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 三、查氏培养基(培养霉菌用，实验16) NaNO32g K2HPO41g KCl 0．5g MgSO40．5g FeSO40．01g 蔗糖30g 琼脂15—20g 水1000ml pH 自然 1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用) 葡萄糖10g 蛋白胨5g KH2PO41g MgSO4·7H2O 0．5g 1/3000孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液) 100ml 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800ml 0．56kg/cm2(8磅/英寸2)，112．6℃灭菌30分钟。 临用前加入0．03%链霉素稀释液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 五、马铃薯培养基(实验16)

马铃薯200g 蔗糖(或葡萄糖) 20g 琼脂15—20g 水1000ml pH 自然 马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000ml。1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 六、麦芽汁琼脂培养基(实验15) 1．取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，置15℃阴暗处发芽，上盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 2．将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴锅中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。 3．将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20ml，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 4．将滤液稀释到5—6波美度，pH约6．4，加入2%琼脂即成。 1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 七、葡萄糖-醋酸盐培养基(实验15) 葡萄糖1g 酵母浸膏2．5g 醋酸钠8．2g 琼脂15g 蒸馏水1000ml pH 4．8 分装试管，0．70kg/cm2(10磅/英寸2)，115．2℃灭菌20分钟后制成斜面。 八、半固体肉膏蛋白胨培养基(实验26) 肉膏蛋白胨液体培养基100ml 琼脂0．35—0．4g pH 7．6 1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 九、合成培养基(实验36，39) (NH4)2PO41g KCl 0．2g MgSO4·7H2O 0．2g 豆芽汁10ml 琼脂20g 蒸馏水1000ml pH 7．0 加12ml0．04%的溴甲酚紫(pH5．2—6．8，颜色由黄色变紫色，作指示剂)。1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟。 十、豆芽汁蔗糖(或葡萄糖)培养基(实验37，38) 黄豆芽100g 蔗糖(或葡萄糖) 50g 水1000ml

分子实验室、细胞实验室常用配方

（一）WB相关试剂及常用缓冲液 ● ●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度） AP粉末 1g ddH20 10ml ●10％SDS（十二烷基硫酸钠）： SDS粉末 10g ddH20定容到 100ml 注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡 ●6X蛋白质sample buffer Tris-HCl(1M,pH6.8) 30mL SDS 10g 甘油 30mL DTT（154.25） 9.3g 溴酚蓝 0.06g dd H20 定容至100mL ●10XPBS缓冲液的配制： NaCl 80g KCl 2g Na2HPO4 14.4g（十二水合36g） KH2PO40 2.4g 加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到7.4，调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度 ●PBST(1X) PBS(1X) 500ml Tween 20 500μl ●50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量 Tris粉末 242g 冰醋酸 57.1ml Na2EDTA·2H2O 37.2g ddH20定容到 1L ●封闭液

脱脂奶粉 5g 叠氮钠 0.02g(现配现用时可不加) PBS 定容到100mL ●脱色液：(室温) 甲醇 165mL 乙酸 50 mL H20 785 mL

ddH20 定容至1L ●TBST(1X) TBS(1X) 500ml Tween 20 500μl ●Stripping buffer(可反复利用)温老师组配方 10%SDS 10ml Β-巯基乙醇 350 l Tris-HCI（pH6.8） 6.25ml（6.06加到50mL水） 加入ddH2O 至50mL ●Stripping buffer(可反复利用)郭老师给配方 甘氨酸 15g SDS 1g Tween20 1ml dd ddH2O 1L 作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。