pGEM-T载体
(完整版)分子生物学试题及答案(整理版)
分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开
病毒载体的应用
病毒载体的应用 关键词：病毒标准物质标准物质网北京标准物质网 随着病毒载体的发展，病毒载体的应用也越来越广泛，尤其在人类疾病的基因治疗中发挥着重要作用。 1.在肿瘤基因治疗中的应用 根据肿瘤的类型和分布，可采用多种技术来抑制和消除肿瘤细胞。复制缺陷型和条件复制型腺病毒载体已经应用于肿瘤的生物治疗，这主要是通过病毒载体将肿瘤抑制基因、免疫激活基因或凋亡基因导入靶细胞中来实现的。例如腺病毒载体ONYX-015已经应用于多种肿瘤的治疗中，并已经用于Ⅰ期和Ⅱ期临床试验。疱疹病毒(HSV)胸苷激酶(TK)基因缺失的病毒载体能够在动物肿瘤模型和肿瘤组织中抑制肿瘤的生长。痘苗病毒载体可以传递很多的肿瘤特异性抗原，并诱导机体产生很强的针对该肿瘤抗原的细胞免疫。 慢病毒介导的RNA干扰、免疫基因的激活也应用于肿瘤的基因治疗中。 2.在疫苗中的应用 腺病毒载体可以迅速刺激机体产生高水平的免疫反应，故常应用于HIVH5N1等病原体疫苗的研制中。如腺病毒载体Ad5就应用于研制HIV疫苗。 美国Merck公司开发的HIV疫苗(MRK Ad5)即采用了Ad5腺病毒载体。虽然Ad5疫苗最终失败，但是为后续的HIV疫苗研制积累了宝贵的经验。现在又开发出了DNA-腺病毒联合免疫的方法，它将腺病毒载体与其他载体联合起来，以实现持久、有效的免疫保护。将外源基因插入疱疹病毒的非必需基因的位置，构建出来的疱疹病毒载体可用于疫苗的研制。HSV最早应用于构建乙肝(HBV)表面抗原的表达，并成功研制出HBV的疫苗。 3.在神经生物学中的应用 疱疹病毒是一种嗜神经性病毒，它在感染外周神经后可逆行进入中枢神经系统，并可建立无细胞毒性的隐性潜伏感染，然后高效、长期地表达外源基因，而不影响神经细胞的功能，所以可利用疱疹病毒载体将外源基因导入中枢和外周神经系统柬治疗神经紊乱和神经疾病。此外，慢病毒载体可以转染非分裂细胞并可以长期表达外源基因。慢病毒载体也被用于神经疾病病理模型的建立，以及表达神经生长因子以促进神经损伤后的修复治疗等。
谈企业文化的几种载体选择
谈企业文化的几种载体选择 最近和很多企业主的一次座谈中，说起企业文化，众多管理者、决策者的一致反映是企业文化是虚无缥缈的东西，根本不是一个企业的重心。可是当我们谈到可口可乐与音乐、百事可乐和足球（体育）、力帆和足球、肯德基（麦当劳）和儿童玩具……时，很多企业主立刻产生了兴趣，也表示要建立自己的企业文化体系。那企业文化应该如何和市场接轨，如何变抽象为具体，如何选择最合适的文化载体呢？ 旅游（文化） 把企业经营和旅游结合，并且使旅游文化成为一个企业的特色，这并不是旅游公司的专利。实际上，目前企业的很多销售行为，都会自觉不自觉的和旅游靠拢，特别是购买产品中旅游大奖现象十分普遍。一般来说，销售到最终产生大奖的周期较长——这样做的好处一是对实际销售的直接刺激，又迎合了新世纪的旅游热，另外组团旅游的方式企业付出的实际成本并不高，还有就是企业实力和品牌的无形宣传。 如果把旅游作为企业文化的支撑，首先要建立全球的旅游关系网络，使组团旅游的成本降到冰点。然后在销售和服务过程中始终和旅游紧密结合，甚至旅游也是一个再次销售的过程——比如保健品行业的科普体验式营销，家电行业的工业园参观等，都是一种无形的销售方式。旅游文化的建立还有一个重要因素就是针对不同产品、不同人群的线路确立，确保旅游旺季对顾客的全心服务，使顾客在最好的季节看到最美丽的风景。 旅游文化还可以推出“故地重游”、“新婚游”、“生产基地参观”、“焦点追踪”（和重大事件结合——比如世界杯或者飞黄等事件）等项目，使企业真正成为旅游产业的代言人，长期的旅游行动对企业的宣传作用也是不言而喻的，关键是把服务做到无微不至，增强企业的知名度和美誉度。 知青（文化） 知青可以说是中国特色，也是可以借用的一股重要力量。 当年的知青如今年龄一般在50岁——60岁左右，大部分回城以后已经退休，是保健品行业、超市消费的准顾客。如何把知青文化加以发掘，是很多企业应该思考的问题。 青岛，南山百盛超市，一个面积不到3000米的小超市，按规模按位置都不占优势，竟然使沃尔玛、家乐福等企业感到无可奈何，其主要原因就是对文化的挖掘——特别是创立了堪称中国第一个“知青节”，给广大的知青一个交流的舞台，聚会的场所，许多失去音讯多年的知青在超市前抱头痛哭，同时把百倍的感谢回报给了企业，创造了中国超市的许多奇迹（包括单位面积盈利全国第一等），这就是文化的力量，策划的力量！ 中国有近千万知青，他们有知识、有阅历、有涵养，属于能够自主消费的群体，也是不可忽视的重要社会组织。如果哪个企业把知青文化做到深处，调动中国最优势的消费主题——特别是保健品医药行业，企业的发达是必然的。
质粒的分子生物学与质粒载体
第三章质粒的分子生物学与质粒载体 一、填空题 1．基因工程中有3种主要类型的载体：——-------、------------一、-----------. 2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度—----------—，OC DNA泳动速度—---------—，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。 3.质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点区开始的。然而，质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。在杂种质粒中，每个复制子的起点都可以有效地加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。 4.就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：—-----—、—---------—、—----------------—。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 5.如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于—---------—群，这是因为它们的——————————所致。 6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。 7.复制子由三部分组成：(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。 8.酵母的2μm质粒有------------，可以配对形成哑铃结构。 9.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫----------------。 10.pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于----——，它的四环素抗性基因来自于—-----------—，它的氨苄青霉素抗性基因来自于—---------—。 11.质粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过—------—恢复该基因的性状。 12.ColEl质粒复制的起始需要三种酶，即—-----------—、一------------和一------。 13．YAC的最大容载能力是—-----------—，BAC载体的最大容载能力是—---------—。 14．pSCl01是一种---------——复制的质粒。 15．把那些没有可检测表型的质粒称为—--------------—。 16．转座子主要由下列部分组成：(1)—-----————————(2)---------------—— (3)—----------------—。
三四章分子克隆载体---答案_完_
第三章分子克隆载体（Molecular cloning vectors） 一、名词解析 1.质粒：质粒是染色体外的遗传因子，能进行自我复制（但依赖于宿主编码的 酶和蛋白质）；大多数为超螺旋的双链共价闭合环状DNA分子（covalently closed circle , cccDNA），少数为线性；大小一般为1～200Kb，有的更大。2.质粒拷贝数：质粒拷贝数(plasmid copy numbers)是指细胞中单一质粒的份数 同染色体数之比值,常用质粒数/每染色体来表示。不同的质粒在宿主细胞中的拷贝数不同。 3.质粒的不相容性：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容 性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及DNA 限制系统时出现的现象。 不相容的质粒一般都利用同一复制系统，从而导致不能共存于同一宿主中。 4.质粒的转移性：质粒具转移性。它是指在自然条件下，很多质粒可以通过称 为细菌接合的作用转移到新宿主内。它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因子 bom 及其内部的转移缺口位点 nic。 5.穿梭质粒：既能在真核细胞中繁殖又能在原核细胞中繁殖的载体。这类载体 必须既有细菌的复制原点或质粒的复制原点，又含有真核生物的复制原点，还具备酶切位点和合适的筛选指标。它用来转化细菌，又可以用于转化真核细胞。 6.α-互补：α-互补是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完 整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的 7.温和噬菌体：既能进入溶菌生命周期又能进入溶源生命周期的噬菌体。 8.溶源性细菌：具有一套完整的噬菌体基因组的细菌叫溶源性细菌。 9.整合：如果噬菌体的DNA是被包容在寄主细菌染色体DNA中，便叫做已整合 的噬菌体DNA。这中细菌提DNA组入细菌染色体DNA的过程，叫做噬菌体DNA 的整合或插入。 10.溶源化：用温和的噬菌体感染细菌培养物使之形成溶源性细菌的过程叫做溶 源化。
浅议部队教育管理中有效载体运用
浅议部队教育管理中有效载体运用 ] 载体是工作落实的承载和依托，具有形式丰富、手段灵活、途径便捷、短小易用等特点，可事半功倍地推进各项工作落到实处。坚持把运用有效载体，是高标准完成各项工作任务与提高分队全面建设水平的“助推器”，是保持官兵持久战斗热情的“调节器”。 一、强化“抓手”意识，坚定运用信心。 （一）强化教育，增强运用的重要性。当前，部分单位在抓工作时不能很好的将载体与当前各项工作有机结合，存有看低载体推动工作落实的作用，就载体抓载体，把工作与载体割裂开来的实际，解决这一误区，理应针对性地开展“如何运用有效载体”专题教育，讲明运用载体和不用载体的最终效果，帮助官兵正确理解载体的含义，弄清每一个载体的作用，每一项工作该使用什么样的载体，明白运用载体与促进工作落实之间的关系，使运用载体紧紧围绕部队各项工作任务运转，以此统一官兵自觉运用载体推动工作落实的思想认识，确保运用载体完成任务和推进部队建设同步发展。 （二）端正思想，增强运用的自觉性。在基层一些单位，运用有效载体依然还存有重形式，轻内容，方法简单，效果
不实的倾向。增强运用的自觉性，须较正运用载体的指导思想，把运用载体推进工作情况落实作为基层召开形势分析会、连务会、排务会、班务会的重要内容来分析，积极研究探讨发挥载体作用的措施和手段，来切实端正官兵运用载体推动工作落实的指导思想。在不固定专门时间，不搞登记的情况下，把检验成效的标准放在官兵思想是否稳定、管理是否严格、部队战备秩序是否正规、任务完成是否圆满上。 （三）借签学习，增强运用的坚定性。为了把载体运用到经常性工作中，发挥其应有作战功能与服务保障作用，可通过组织运用“三互”推进工作落实的好传统，结合年度各阶段工作重点，大力开展“载体怎么用才能推动各项工作任务完成”的讨论，有效增强官兵高度的职能使命意识和完成各项工作任务的坚定信心。确实把官兵的思想随时统一到上级党委的决心意图上来，真正做到使官兵认识到运用载体抓工作的重要作用。 二、拓展定义外延，明确主体内容。 （一）拓宽范畴。有效运用载体的实践告诉我们，要想使载体焕发活力、发挥作用，必须首先给思维松绑、打开官兵的视野，不把载体局限于三互、双四一上，还应把有效载
为什么要先构建克隆载体再用表达载体
为什么要先构建克隆载体再用表达载体 构建克隆载体是大量扩增DNA片段，用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作，构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。 为什么要先构建克隆载体，再用表达载体，我猜是因为： ①得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。 ②测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。 先构建克隆载体再构建表达载体并不是一个必须的选择，如果你的扩增PCR目的条带很亮，而且单一性很好，我建议你可以直接克隆进入表达载体。 很多人选择先构建克隆载体，是因为在扩增基因时目的条带模糊，特异性不好，这样将基因连接到克隆载体上就可以便于挑去单克隆进行测序，增加测序的准确度，从而确认自己克隆基因序列的正确性。单纯的PCR产物往往是一些各种PCR片段的混合物，直接送过去测序，往往导致测序信号峰很杂，有时候并不能测出想要的信号序列。同时保存的PCR片段比较容易降解，而构建好克隆载体后形成的质粒是很容易扩增和保存的。 先构建克隆载体，一是为了便于测序，确认克隆序列正确，二是为了便于基因PCR片段的保存。 怎么构建克隆载体和表达载体？ 首先根据你的实验需要选择相应的载体。 其次分析你的基因序列以及载体序列上的酶切位点，切记在载体上所选择的酶切位点要和你
载体选择
1、pCMVp-NEO-BAN载体 特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。 插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。 2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector) 特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。 亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。 3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体 特点: pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。 用途: pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融合蛋白，该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白，因而在活细胞和固定细胞中观察到细胞内含肌动蛋白的亚细胞结构。 4、pSV2表达载体 特点：该表达质粒是以病责SV40启动子驱动在真核细胞目的基因进行表达的，克隆位点为Hind111。SV40启动子具有组织/细胞的选择特异性。此载体不含neo基因，故不能用来筛选、建立稳定的表达细胞株。 5、CMV4 表达载体 特点:该真核细胞表达载体由CMV启动子驱动，多克隆区域酶切位点选择性较多。含有氨苄青霉素抗性基因和生长基因片段以及SV40复制原点和fl单链复制原点。但值得注意的是，该表达载体不含有neo基因，转染細胞后不能用G418筛选稳定的表达细胞株。 其他常用克隆Vector： pBluscript II KS DNA 15 ug pUC18 DNA 25 ug pUC19 DNA 25 ug 说明: pBluescript II kS、pUC18 & Puc19载体适合于DNA片段的克隆、DNA测序和对外源基因进行表达等。这些载体由于在lacZ基因中含有多克隆位点，当外源DNA片段扦入，转化lacZ基因缺乏细胞，并在含有IPTG和X-gal的培养基上培养时，含有外源DNA载体的细胞将为白色菌落，而无外源DNA片段载体的细胞则为兰色菌落，由此易于筛选有无外源DNA片段的载体。此外，这些载体中有便于测序的M13、T7和T3的通用引物进行DNA测序。 保存液: TE Buffer TE Buffer组成: 10mM Tris.HCL(Ph 8.0) 1mM EDTA 用途: 克隆外源DNA片断. 进行基因表达. 使用M13、T7和T3引物进行测序.
活动载体实施方案
榆中县柳沟店小学 群众路线教育实践活动载体实施方案 为深入开展第二批党的群众路线教育实践活动，集中解决“四风”问题。柳沟店小学把活动与实践结合起来，突出实践特色，通过行之有效的载体，以实实在在的行动、作风、效果取信于群众。特制定群众路线教育实践活 动载体实施方案，具体内容如下： 一、指导思想 坚持以十八大精神为指导，扎实有效地开展党的群众路线教育实践活动。紧紧围绕“转变作风、为民服务”的主题，按照“照镜子、正衣冠、洗洗澡、治治病”的要求，创新活动载体，始终保持同群众的血肉联系，充分发挥党密切联系群众的优势，为开展党的群众路线教育实践活动奠定坚实的 工作基础和政治保证。 二、活动载体要求 （一）树立群众观点。通过开展教育实践活动，牢固树立为人民服务和立党为公、执政为民的观点，虚心向群众学习，坚持职群众利益无小事， 始终站稳为群众服务的立场，坚持人民的利益高于一切，把群众满意作为 检验工作的第一标准，切实增强贯彻党的群众路线的自觉性和坚定性。 （二）解决突出问题。重点解决学校工作与党的群众路线要求不适应不符合的问题，解决党员干部队伍中存在的思想上漠视群众、感情上疏远群众、工作上脱离群众的问题，从而推动学校工作向前更好的发展，为实现“办人民满意的教育”打下坚实的基础。
（三）改进工作作风。把深入基层、走进群众作为行政理念，感受群众的喜怒哀乐，了解掌握群众最关心、最迫切的现实需求；把教育实践活动 作为学习的课堂，拜群众为师，从群众工作生活中汲取智慧和营养，改进 学风、作风和政风，不断促进学校各项工作向前发展。 （四）建立长效机制。认真总结推广深入基层、服务群众的好经验好做法，着力构建富有针对性、科学性、实效性服务群众的长效机制，不断巩固、深化和拓展教育实践活动成果，让党员干部特别是领导干部经常受教育，始终把群众放在心上、把为群众服务落到实处。 三、载体的具体内容 根据学校的实际情况结合本次群众路线教育实践活动的具体要求，我 们将确定活动载体的具体内容是“1124”即：“一个中心”以提高学校教 育质量为中心。“一个目标”以办好人民满意的教育为目标。“两个突出”一是突出学校自我管理二是突出工作的实效性。“四建设”一是抓好师德 建设二是抓好教师队伍建设三是抓好班子建设四是搞好学校文化建设。 四、具体形式 1、认真开展好“五个活动” （1）领导进班子活动。校长要及时召开班子会议，主动征求班子成员 对学校工作的意见建议，积极听取班子成员的心声。 （2）党员进教师活动。学校党员教师进行具体分工，将学校教师按年龄、年级段分组，分别由五位党员负责征求教师对学校领导班子在“四风”方面的问题、征求广大教师对学校各方面工作的意见、建议。 （3）教师进学生活动。将教师按年级班分组，一个教师负责一个班级，负责教师进入负责班级征求学生对学校、对教师的意见或建议。
如何选择质粒
一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 P/E 启动子/增强子 Terms 终止信号 加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AA TAAA 的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AA TAAA的保守序列，此位点down－stream 有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。 回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上. 三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写） 1. 什么是载体
pUCm-T载体使用说明
pUCm-T载体 编号载体名称 北京华越洋VECT76509pUCm-T载体 pUCm-T载体基本信息： pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。 很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。 pUCm-T载体的主要信息如下： Basepairs2773 Lac Z promoter142-171 M13/pUC Sequencing Primer204-221 LacZ222-534 Multiple cloning region233-376 M13/pUC Reverse Primer378-395 Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region972-1832 ColE1origin of replication(rep)1987-2606 pUCm-T载体图谱：
pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)： 201ACACAGGAAA CAGCTATGAC CATGATTACG CCAAGCTTGC ATGCCTGCAG TGTGTCCTTT GTCGATACTG GTACTAATGC GGTTCGAACG TACGGACGTC Xba I Xho I BamH I Bgl II 251GTCGACTCTA GACTCGAGGG ATCCAGATCT CCAGTCT T GA CCTGGTCTGC CAGCTGAGAT CTGAGCTCCC TAGGTCTAGA GGTCAGA T CT GGACCAGACG Pst INot I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7promoter 301AGGCGGCCGC CCATGGGATA TCATCGATCA TATGTCGCCC TATAGTGAGT TCCGCCGGCG GGTACCCTAT AGTAGCTAGT ATACAGCGGG ATATCACTCA Kpn I Sac I EcoR I 351CGTATTACGG TACCGAGCTC GAATTCACTG GCCGTCGTTT TACAACGTCG GCATAATGCC ATGGCTCGAG CTTAAGTGAC CGGCAGCAAA ATGTTGCAGC pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T) 包括： Afl II Age I Apa I Asc I Avr II Bbs I Bbv II Bcl I Blp I BsaA I BseR I Bsg I BsiC I BsiW I Bsm I BsmF I Bsp120I BspM II BsrG I BssH II Bst1107I BstB I BstE II BstX I Bsu36I Dra III Eco47III Eco72I Esp I Fse I Hpa I Mlu I Msc I Mun I Nae I NgoM I Nhe I Nru I Nsi I PflM I Pme I Pml I PpuM I PspA I Rsr II Sac II Sfi I Sma I SnaB I Spe I Spl I Srf I Stu I Xca I Xma I pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括： HinD III A`AGCT,T234 BspM I ACCTGC10/14239 Sph I G,CATG`C244 Sal I G`TCGA,C252 Acc I GT`MK,AC253 HinC II GTY|RAC254 Hind II GTY|RAC254 Xba I T`CTAG,A258 Ava I C`YCGR,G264 PaeR7I C`TCGA,G264 Xho I C`TCGA,G264 BamH I G`GATC,C270 BsaB I GATNN|NNATC275 Bgl II A`GATC,T276 Xcm I CCANNNN,N`NNNNTGG289 Tth111I GACN`N,NGTC293 Not I GC`GGCC,GC305Acc65I G`GTAC,C360 Asp718G`GTAC,C360 Kpn I G,GTAC`C364 Ban II G,RGCY`C370 Sac I G,AGCT`C370 Apo I R`AATT,Y372 EcoR I G`AATT,C372 Kas I G`GCGC,C533 Nar I GG`CG,CC534 Ehe I GGC|GCC535 Bbe I G,GCGC`C537 EcoO109I RG`GNC,CY780 Aat II G,ACGT`C841 Ssp I AAT|ATT955 Xmn I GAANN|NNTTC1160 Bsp1286I G,DGCH`C1177 Sca I AGT|ACT1279
党建创新载体及实施方案
锹峪第一小学党支部“三联三为”活动实施方案 锹峪一小党支部为了充分发挥党员干部和党员教师的先锋模范作用，积极开展以“党员联系困难群众，联系身边群众，联系普通群众；党员为群众代言，为群众排忧，为群众服务”为主要内容的党员“三联三为”活动，并将2015年确定为党组织服务党员、党员服务群众的“党建服务年”，并现结合教育系统工作实际，制定如下实施方案。 一、指导思想 以党的十八大精神为指导，严格执行中央八项规定，引导全校党员深入群众，弘扬党的优良作风，了解群众疾苦、倾听群众呼声，反映群众的合理诉求，反映群众的实际困难，反映群众的热切期盼，着力解决群众反映强烈的突出问题和存在的实际困难；创新服务方法，提高服务质量，落实服务措施，为建设教育强区、办好人民满意教育提供坚强有力的组织保证。 二、活动内容 本着实事求是、量力而行的原则，精心组织、统筹安排、务求实效，着力实施“铸师魂、扬师德”凝心工程，大力开展“三联系三服务”行动，通过问卷和走访的形式了解教职工对学校管理、家长对教师师德师风的建议或意见，畅通意见表达的渠道，进一步融洽党群关系，解决师德突出问题，完善监督机制，树立良好的师表形象，建设更加和谐的天心教育。 “三联系三服务”行动，即“机关联系基层党组织，帮创建；单位班子成员联系教职工，帮排忧；教师联系学生，帮解难”，实现“上级党组织为基层党组织服务，基层党组织为党员服务，党员和党组织为群众服务”。活动关注每一个单位，关爱每一位教职工，关心每一个学生，做到“知百家情、解千家愁、暖万家心”，用责任铸就师魂，用爱心弘扬师德。 三、具体做法及安排 1、支部书记带领支委和行政班子成员走访本单位在职和退休党员。在走访之前，先探讨出谈心方法，形成共识，即支委与党员访谈的过程中，既要了解党员的困难、要求，又要征求党员对学校工作的意见和建议。
生物载体的应用现状与发展综述
生物载体的应用现状与发展 姓名：朱泽敏学号：02130111 专业：市政工程摘要：生物载体填料在生物膜工艺中起着关键作用，近年来，国内外学者对生物载体填料从多方面做了深入的研究开发工作并取得了相应的成果。本文结合近年来国内外学者的研究成果概述了生物载体填料的应用现状，并就其发展方向给出一些见解。 关键词：生物膜技术；生物载体；活性炭；海绵铁；多孔陶瓷 前言 目前最常用的污水的生物处理方法是活性污泥法和生物膜法。活性污泥法与1914年在英国曼彻斯特建成试验场开创以来，已有将近90年的历史，它是污水生物处理领域内使用最早、最为成熟的工艺。但是活性污泥工艺在使用过程中存在诸多问题，如：占地面积大、剩余污泥量大、脱氮效果差、管理费用高、易发生污泥膨胀和污泥流失等。而生物膜法有机负荷较高，接触停留时间短，减少占地面积，节省投资。此外，运行管理时没有污泥膨胀和污泥回流问题，且耐冲击负荷。因此在我国受到了广泛重视。 生物载体填料是生物膜处理工艺的的关键，它直接影响生物反应的处理效果，而且，填料的费用在生物反应处理系统的建设投资中也占较大的比重，所以，填料的选择决定了污水的处理效果及工程的运行管理等问题。 一、生物载体的概念和历史概况 为生物膜提供附着生长固定表面的材料成为生物载体（或填料）。
在生物膜法的发展和性能特征方面生物载体有着重要影响。最早采用的生物膜法构筑物是以碎石为填料的滴滤池，碎石的比表面积小，能够为微生物附着生长的表面积小，因而滴滤池的负荷也不大，导致其占地面积较大，加之废水以喷洒方式在滴滤池表面布水，卫生状况也不好。所以，在20世纪50年代以前，生物膜法一直未被重视。随着塑料工业的发展以及塑料填料被引入生物膜处理系统，生物膜法得到了进一步的发展。 早在十九世纪二、三十年代，英国就有人以碎石、卵石为填料建造生物滤池来处理生活污水。十九世纪末和本世纪初，韦林(Waring ),迪特(Ditter)等人先后以碎石、炉渣为填料进行了生物接触氧化法的试验。其后德国的韦加得(Weigand)以烧结渣为填料发明了旋转生物接触器。本世纪二十年代，德国的贝奇(Bach)和美国的布斯维尔(Buswell)又对生物接触氧化法进行了应用化试验。布斯维尔等人在1929年以栅网胶合板为生物载体填料，在容积为7.72m3，进水BOD浓度为112.0mg/L，日平均处理水量为74 m3的条件下进行试验，结果BOD 出水浓度为69.5mg/L，去除率为41.4%。当时，美国和德国若干地方都采用以碎石、卵石、焦炭、软木塞、木片、木板、波形铝板等为填料的生物接触氧化法处理废水，BOD去除率最高为69%，低的只有28%，效果不太理想。1951年，德国化学工程师舒尔兹应用气体洗涤塔原理，以炉渣、瓷环等为填料，创立了塔式生物滤池。1954年前后，美国学者应用基本的化学工程原理(物料平衡和一级反应动力学)建立了生物载体填料的数学模型以解释污水的净化过程。生物滤池的
分子生物学名词解释
2.基因(gene) 是一段携带功能产物（多肽，蛋白质，tRNA和rRNA和某些小分子RNA）信息的DNA片段，是控制某种性状的的遗传单位。 3.密码子偏爱（codon bias ）:指在不同物种的基因中经常为某种氨基酸编码的只是其中的一个密码子。 4.基因的剪接位点（splice sites）:一般有特定的序列特征，计算机程序利用这种序列特征可预测将近50%的外显子及20%的完整基因。 值佯谬（C value paradox）：生物体的进化程度与基因组大小之间不完全成比例的现象。N值佯谬（N value paradox）：基因组中基因数目与生物进化程度或复杂程度的不对称性 6.基因组（genome）：是指一个细胞或生物体的一套完整的单倍体遗传物质.（） 7.基因家族(genefamily):指核苷酸序列或编码产物的结构具有一定同源性的一些基因。（04） 8.基因超家族（ gene superfamily）：结构上具有一定的相似性，但功能不一定相似，且进化上的亲缘关系较远。如免疫球蛋白基因超家族、丝氨酸蛋白酶基因超家族等（05） 9.基因组学(genomics)：发展和应用基因作图、 DNA测序、基因定位等新技术以及计算机程序，分析生命体（包括人类）全部基因组结构及功能 10.微卫星DNA（microsatellite DNA）：或称简短串连重复，由2~6个核苷酸的重复顺序组成，如(CA)n、(GA)n、(TA)n，n为15~30具有多态性，卫星长度常小于100bp，大量分布每条染色体 11.小卫星DNA（minisatellite DNA）：由6~12个核酸的重复顺序组成，位于染色体端粒及其附近，长度数十~数千bp 12.大卫星DNA（macrosatellite DNA）：即经典的卫星DNA，由数十个核苷酸的重复单位构成，主要存在于异染色区和着丝粒。 13.蛋白质组(proteome)是指细胞或组织表达的全部蛋白质 14.蛋白质组学(proteomics):是从整体上采取高通量/大规模手段研究所有蛋白组成及其活动规律. 15.单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）:指发生在基因组序列中单个碱基的改变引起的DNA序列的变化
病毒载体的应用与检测
病毒载体的应用与检测 关键词：细胞菌种保藏中心标准物质北京标准物质网 随着病毒载体的发展，病毒载体的应用也越来越广泛，尤其在人类疾病的基因治疗中发挥着重要作用。 1.在肿瘤基因治疗中的应用根据肿瘤的类型和分布，可采用多种技术来抑制和消除肿瘤细胞。复制缺陷型和条件复制型腺病毒载体已经应用于肿瘤的生物治疗，这主要是通过病毒载体将肿瘤抑制基因、免疫激活基因或凋亡基因导入靶细胞中来实现的。例如腺病毒载体ONYX-015已经应用于多种肿瘤的治疗中，并已经用于Ⅰ期和Ⅱ期临床试验。疱疹病毒(HSV)胸苷激酶(TK)基因缺失的病毒载体能够在动物肿瘤模型和肿瘤组织中抑制肿瘤的生长。痘苗病毒载体可以传递很多的肿瘤特异性抗原，并诱导机体产生很强的针对该肿瘤抗原的细胞免疫。慢病毒介导的RNA干扰、免疫基因的激活也应用于肿瘤的基因治疗中。 2.在疫苗中的应用腺病毒载体可以迅速刺激机体产生高水平的免疫反应，故常应用于HIVH5N1等病原体疫苗的研制中。如腺病毒载体Ad5就应用于研制HIV疫苗。美国Merck公司开发的HIV疫苗(MRK Ad5)即采用了Ad5腺病毒载体。虽然Ad5疫苗最终失败，但是为后续的HIV疫苗研制积累了宝贵的经验。现在又开发出了DNA-腺病毒联合免疫的方法，它将腺病毒载体与其他载体联合起来，以实现持久、有效的免疫保护。将外源基因插入疱疹病毒的非必需基因的位置，构建出来的疱疹病毒载体可用于疫苗的研制。HSV最早应用于构建乙肝(HBV)表面抗原的表达，并成功研制出HBV的疫苗。 3.在神经生物学中的应用疱疹病毒是一种嗜神经性病毒，它在感染外周神经后可逆行进入中枢神经系统，并可建立无细胞毒性的隐性潜伏感染，然后高效、长期地表达外源基因，而不影响神经细胞的功能，所以可利用疱疹病毒载体将外源基因导入中枢和外周神经系统柬治疗神经紊乱和神经疾病。此外，慢病毒载体可以转染非分裂细胞并可以长期表达外源基因。慢病毒载体也被用于神经疾病病理模型的建立，以及表达神经生长因子以促进神经损伤后的修复治疗等。 在基因转移过程中，病毒载体的成员很多。本节仅仅介绍了人和其他哺乳动物中最常用的几种病毒载体及其应用。除此以外，还有其他的一些诸如噬菌体、杆状病毒和植物病毒也都被用作病毒载体，也常被用于细菌、昆虫或植物的基因转移研究中。在以后的实验技术发展过程中，病毒载体还将被广泛地应用于体内或体外的基因转移中。此外，一些病毒载体很可能会作为疫苗或药物载体用来治疗各种疾病。