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western weddings customs

White

Western brides often wear a traditional white wedding dress. Although white attire has come to be seen as a symbol of purity, the tradition actually began in 1840 when Queen Victoria wore white to her wedding in lieu of the customary royal silver. Most Western brides also wear a veil on their heads, often with a piece of material covering their face. The origins of the veil are unknown, yet several sources suggest it was worn as a sign of purity and virginity.

'Somethings'

It is a common tradition for Western brides to wear “something old, something new, something borrowed and something blue” on their wedding day. The “something old”symbolizes the bride’s continuity with her past and her family while the “something new” symbolizes hope and optimism for her new life. “Something borrowed”--which is often from a happily married friend or family member--is meant to pass on good luck and “something blue” symbolizes purity and fidelity.

代谢相关疾病基因功能研究介绍

代谢相关疾病基因功能研究介绍代谢是生物体内所发生的用于维持生命的一系列有序的化学反应的总称。常见的代谢性疾病有糖尿病、肥胖症、骨质疏松、痛风、脂质代谢紊乱以及甲状腺、垂体、肾上腺、性腺、甲状旁腺等疾病。一、疾病模型 (一)糖尿病模型。糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。在对糖尿病的研究中，常见的模型包括： 1.一型糖尿病模型 A药剂诱导型：①STZ (streptozocin), 链脲菌；②Alloxan,四氧嘧啶 B自发型：①NOD (non-obese diabetes)小鼠；②AKITA小鼠 2.二型糖尿病模型 A肥胖二型糖尿病模型 ①db/db小鼠 ②ob/ob 小鼠 ③Zucker fatty大鼠 ④ZDF (Zucker diabetic fatty) 大鼠 ⑤果糖（fructose）长期饮食的二型糖尿病动物模型 ⑥果糖短期饮食+低剂量STZ一次投药 B瘦型二型糖尿病模型 GK(Goto-Kakizaki )大鼠 (二)肥胖症模型。肥胖症是一组常见的，古老的代谢症群。当人体进食热量多于消耗热量时，多余热量以脂肪形式储存于体内，其量超过正常生理需要量，且达一定值时遂演变为肥胖症。在对肥胖的研究中，常见的模型有： 1.谷氨酸钠(MSG)诱导的肥胖动物模型新生小鼠或大鼠皮下注射MSG可诱导其产生肥胖。脂肪堆积是MSG肥胖动物的主要表现,其体脂在2周龄时即显著增加,一直增加到4月龄时。在30～90d时即已形成脂肪肝。 2.金硫葡萄糖(GTG)致肥胖模型给成年小鼠腹腔注射GTG可诱导其产生肥胖, GTG所诱导的肥胖,被人们普遍认为系下

高二英语知识运用与词汇期末复习题

高二英语知识运用与词汇期末复习题单项选择 1 Had you listened to the doctor, you _______ all right now. A. are B. were C. would be D. would have been 2 Important people don't have muchfree time as their work ____________ all their time. A takes away B takes over C takes up D takes in 3 In the eyes of the newly-elected prime minister, there is never too small a thing as far as the farmers _______ . A. are concerning B. concern C. are concerned D. concerned 4 If you go for a long ride in a friend ' s car, it ' s the __________ to offer to pay some of the _____ . A. habit; expenses B. custom; expense C. custom; expenses D. habit; expense 5 _______ you know, the UN touches the lives of people everywhere. A. With B. For C. As D. What 6 I'm afraid my coming will ____________ your trouble. A. add B. add up C. add to D. add up to 7 My suggestion is that the meeting _______ off till next Sunday. A. be put B. put C. should put D. had been put 8 A new hospital will be _______ here to help people in the area. A. set up B. set out C. set off D. set down 9 Computers are now _______ to every teacher in our school. A. popular B. useful C. available D. enjoyable 10 The problem just _______ is a very important one.

汉恒生物荧光素酶实验原理

汉恒生物荧光素酶检测服务汉恒生物科技（上海）有限公司地址：上海浦东新区蔡伦路150号1号楼

psiCHECK2---miRN A与其靶点相关分析,包括miRNA靶基因验证(参考案例二A和B)、lncRNA (参考案例三)与circRNA (参考案例四)吸附miRNA 验证等。需要把miRNA 潜在结合靶点克隆到R-Luciferase (hRLuc) 3’UTR区域，然后与待测miRNA共同转染细胞内测定R-Luciferase活性高低，F-Luciferase （hLuc+）作为校正内参校正不同样品之间转染的转染效率。 pGL3-Basic---用于转录因子结合位点与启动子活性分析。把待分析启动子区段构建到F-Luciferase上游，和转录因子共转染分析F-Luciferase活性即可反应启动子的活性高低。该质粒通常需要结合持续性表达R-Luciferase的载体作为内参以校正不同样品之间转染的转染效率(参考案例一)。两种常用载体类型极其应用场景技术线路学术、技术团队根据顶级学术论文真实案例协助方案设计根据实验目的确定设计方案采用汉恒HB-Infusion TM 无缝克隆策略，提高载体构建效率根据实验目的确定设计方案独家定制的转染试剂和病毒转导系统确保基因转导效率根据实验目的确定设计方案顶级商品化检测试剂盒和强大高效的检测仪器根据实验目的确定设计方案详实的原始数据，细致的结果分析，清晰的实验结论根据实验目的确定设计方案

LncRNA转录因子结合位点与启动子活性分析论文来源: Wang, P ., et al. (2014). "The STAT3-binding long noncoding RNA lnc-DC controls human dendritic cell differentiation." Science 344(6181): 310-313. 本文是曹雪涛实验室在2014年发表在Science上一篇研究性论文。作者通过芯片鉴定出DC (树突状细胞)发育相关的一个lncRNA，命名为lnc-DC。同时高通量测序也发现了这条差异lncRNA的存在。进而作者通过Northern Blot验证了这条lnc-DC。由于lnc-DC极其特异和稳定地高表达在DC发育过程的某一时期，所以作者假设lnc-DC可能是和表观遗传学调控事件相关的。为了验证这一假设，作者通过染色体免疫沉淀结合测序的技术-CHIP-seq和qPCR发现lnc-DC的转录起始位点（TSS）附近富集了Pol II、H3K4me3和H3K27ac等蛋白（下图A），提示DC发育过程中表观遗传学变化与lnc-DC的转录增强事件相对应。进而作者通过序列分析发现在lnc-DC的转录起始位点附近（+44-+50）存在一个经典的PU.1结合位点。作者假设PU.1参与了lnc-DC的特异性表达。于是作者设计了如下实验进行了进一步的验证（下图B）。作者把lnc-DC的启动子区段（-1447-+223）及其不同的突变体版本分别克隆到F-Luciferase表达框上游，然后和转录因子PU.1表达质粒或者空载体（Vector）共同转染到模式细胞系HEK-293T，通过测量荧光强度的变化间接反应转录活性的高低。最终证明转录因子PU.1通过经典结合位点（+44-+50）介导了lnc-DC在DC发育过程中的特异表达。 LncRNA通过吸附miRNA调控靶基因mRNA的表达 (ceRNA) 论文来源: Cesana, M., et al. (2011). "A long noncoding RNA controls muscle differentiation by functioning as a competing endogenous RNA." Cell 147(2): 358-369. 作者通过表达分析发现了一条肌肉发育相关的lncRNA---lnc-MD1.前期功能研究发现lnc-MD1可以调控肌肉分化的时间。信息学分析发现这条肌肉特异的lncRNA上包含36个miRNA的结合位点。如果只考虑肌肉发育相关的miRNA和基因，36个候选miRNA里面只剩下miR-133和miR-135。作者通过荧光素酶实验进行了验证。首先作者把野生型及其缺失miR-133和miR-135结合位点的Lnc-DC1克隆到进R-Luc的3’UTR，然后分别与表达miR-133和miR-135前体的质粒共同转染到细胞进行荧光素酶活性检测（下图A和B）。证明lnc-MD1缺失存在miR-133和miR-135的结合位点。进一步的信息学预测，miR-133和miR-135分别靶向两个基因- MAML1 和 MEF2C。同样，作者还是通过荧光素酶实验进行验证。研究者把MAML1 和 MEF2C的3’UTR （WT）和miRNA结合位点缺失突变体（-mut）分别克隆在RLuc表达框的下游，然后和miRNA过表达载体共转染细胞进行酶活测定。结果显示miR-133和miR-135确实分别靶向了MAML1 和 MEF2C两个基因（下图C）。最后的模型是lnc-MD1通过ceRNA机制吸附miR-133和135，正向调控了MAML1 和 MEF2C的表达，参与调控肌肉发育。经典应用案例二

高频高考英语常见词区别复习(四)

高频高考英语常见词区别复习（四） 56. considerable, considerate considerable相当多的，可观的。如：He met a considerable amount of trouble.(他遇到了许多麻烦。) considerate 考虑周到的，体谅的。如：It was considerate of you not to trouble us.(你真体贴人，不打扰我们。) 57. consistent, constant, continual, continuous consistent一致的，符合的。如：His action is always consistent with his words. constant不断的，表示持续和惯常的重现，往往没有变化。如：He attributes his health to his constant exercise. continual频频的，不停的，时断时续，中间可有间歇。如：Continual smoking is bad for health. continuous不断延伸的，连续不断的，强调中间无间断。如：Everything in the universe undergoes continuous development and change. 58. crack, crash crack(使)破裂，砸开。如：I can crack it, but I can’t break it. (我能把它弄裂，但不能把它弄破。) crash摔坏，坠毁。如：The plane crashed shortly after the take-off.(飞机起飞不久就坠毁了。) 59. crawl, creep crawl多指蛇，虫类等身体沿地面或其他表面的动作。如：There is an insect crawling up your back. (有一虫子正在你的背上往上爬。) creep多指哺乳动物或人等用四肢爬行的动物偷偷摸摸无声缓慢的前行动作。如：They arrived late and crept into the classroom.(我们迟到了，便悄悄地溜进教室。) 60. cure, treat cure治愈，医治。如：The medicine will cure of your disease.(这药能治好你的病。) cure表示治好，treat只表示“给……治病”。 61. current, present 均可表“现在”，“目前”。 current强调在现阶段正在流行，通用，但不一定是最新的。如：current English (当代英语) present为常用词，指现在正在通用的，在时间上比current的范围更窄。如：What’s your present address?(你现住址是哪里？) 62. custom, habit 均可表习惯。 custom为正式用词，多指社团或人们的习惯行为方式。 habit为常用词，多指个人因多次重复而形成做某事的趋势或意愿。如：He has the bad habit of biting his nails.(他有咬手指的坏习惯。) 63. damage, destroy, harm, ruin 均可表“破坏”，“损坏”。 damage一般指部分性的破坏，含可修复使用。 destroy指十分彻底的毁坏，破坏。如：The whole city was destroyed in the earthquake.(地震中整个城市被毁了。) harm多指带来悲痛，产生恶果的伤害，可以是肉体的也可是精神的。如：Doctors say

westernblot原理及步骤

westernblot原理及步骤 1.western blot 即蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。 2.原理简单来说就是原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息 3.步骤（一）蛋白样品制备培养的细胞（定性） 1.去培养液后用温的PBS冲洗2~3遍（冷的PBS有可能使细胞脱落）。 2.对于6孔板来说每孔加200~300uL，60~80℃的1×loading buffer。 3.刮下的细胞在EP管中煮沸10min，期间vortex 2~3次。 4.用干净的针尖挑丝，将团块弃掉，如果没有团块但有拉丝现象，可将EP管置于0℃后在 5.14000~16000g离心2min，再次挑丝。若无团块也无丝状物但溶液有些粘稠，可使用1ml注射器反 6.复抽吸来降低溶液粘滞度，便于上样。 7.待样品恢复到室温后上样。培养的细胞（定量） 1.去培养液后用温的PBS冲洗2~3遍（冷的PBS有可能使细胞脱落）。

2.加入适量的冰预冷的裂解液后置于冰上10~20min。 3.刮下的细胞收集在EP管后超声（100~200w）3s，2次。 4.12000g离心，4℃，2min。 5.取少量上清进行定量。 6.将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀后加loading buffer后直接上样最好，剩余溶液（溶于1×loading buffer）可以低温储存，-70℃一个月，-20℃一周，4℃1~2天，每次上样前98℃，3min。（二）SDS－PAGE电泳（1）清洗玻璃板（2）灌胶与上样（3）电泳（三）转膜（四）免疫反应（五）化学发光，显影，定影（六）凝胶图象分析将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。

自噬监测——LC3双标腺病毒(完整版)

自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南 1 自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）使用指南背景：自噬是细胞内的一种“自食（Self-eating ）”的现象，凋亡是“自杀（Self-killing ）”的现象，二者共用相同的刺激因素和调节蛋白，但是诱发阈值和门槛不同，如何转换和协调目前还不清楚. 自噬是指膜（目前来源还有争议，大部分表现为双层膜，有时多层或单层）包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体，最后与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞稳态和细胞器的更新。目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有：通过western blot 检测LC3的剪切；通过电镜观测自噬体的形成；在荧光显微镜下采用GFP （-RFP ）-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多，针对于此我们汉恒生物科技（上海）有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流) 的mRFP-GFP-LC3腺病毒，mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。这种串联的荧光蛋白表达载体系统直观清晰的指示了细胞自噬流的水平，是我们自噬研究尤其是自噬流研究不可或缺的利器。

mRFP-GFP-LC3腺病毒的操作收到病毒后的处理（一）、腺病毒的储存 1、腺病毒采用冰袋运输。（1）、收到病毒液后如未融化请置于-80℃冰箱，下次使用时再进行分装；（2）、如客户收到时腺病毒已融化，请直接分装后置于-80℃冰箱保存；若短期内用于实验，可分装部分于4℃保存（尽量一周内用完）。 2、尽量避免反复冻融，否则会降低病毒滴度（每次冻融会降低病毒滴度10%）。建议不要在-20℃下长期保存。如果病毒储存时间超过6个月，应该重新测定病毒滴度。 3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的小包装病毒产品（购买时请提出）。（二）、腺病毒的稀释需要稀释病毒时，将病毒取出后置于冰上融解，使用培养目的细胞用PBS 或培养基稀释到所需浓度后混匀分装后4℃保存，并尽快用于实验（尽量一周内用完），动物实验建议使用注射用平衡液来稀释，并尽快用完。感染目的细胞 2

逆转录病毒试用装操作手册

汉恒逆转录病毒操作手册一、逆转录病毒的试用装分装与储存 1.收到汉恒生物逆转录病毒产品后，请先对逆转录病毒产品进行分装处理，建议20-50μl/管。如1-2天内使用，则留足够量病毒4℃保存，余下逆转录病毒置于-80℃长期保存。 2.病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前重新测定病毒滴度。 3.反复冻融会降低逆转录病毒滴度：逆转录病毒滴度越低，冻融对滴度的影响越大，108IU/ml的逆转录病毒冻融2次滴度没有显著性差异，第3次冻融开始，每冻融一次滴度降低约10%；滴度107IU/ml滴度逆转录病毒，从第2次冻融开始，每次冻融病毒滴度下降10%-15%。二、逆转录病毒试用装实验策略与关键知识点 1.逆转录病毒感染策略：逆转录病毒本身的病毒滴度不高，感染细胞时病毒消耗量较大，试用装体积较小，建议使用96孔板进行MOI梯度感染测试。逆转录病毒感染细胞后会反转录并插入基因组形成稳转，因此逆转录病毒感染一般采用感染少量细胞，然后将细胞放大化培养。而不是直接大量感染。注意：对于一些传代能力较差的原代细胞，比如BMSC等，建议采用腺病毒感染。 2.逆转录病毒感染关键知识点 1）细胞准备：由于试用装体积有限，请使用96孔板准备细胞，逆转录病毒感染细胞前，请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。逆转录病毒感染的时候细胞汇合率为40%～60%间为宜。 2）感染细胞最佳MOI的测定：MOI（感染复数）是指每个细胞感染的病毒数。逆转录病毒对于不同种类不同来源的细胞，其最适MOI各有差别，原则上最适MOI是感染效率较好的最低MOI。MOI一般以3：10：30：100的比例递增进行梯度摸索，一般的细胞基础逆转录病毒感染MOI 可从3为开始，即设立4个常规的MOI摸索，即3，10，30，100。 3)助转剂polybrene的选择：实验证明，polybrene可提高逆转录病毒对大部分细胞的感染效率，但polybrene 有一定的细胞毒性，不同细胞对polybrene的敏感度不同，polybrene最常用的工作浓度为5～8μg/ml。 4）MOI对应病毒体积的换算（非常重要）感染时细胞数（一般以传代计数细胞数×2计算）×MOI=病毒个数；则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度。

200个相近单词的区别

1.clothes, cloth, clothing clothes统指各种衣服，谓语动词永远是复数；cloth指布，为不可数名词；clothing 则指服装的总称。指一件衣服用a piece of,an article of 2. incident, accident incident表示某事件的变数、插曲；accident指不幸的事故，但是happy accident表示意外收获。eg：He was killed in the accident. 3. amount, number amount后接不可数名词，number后接可数名词。eg：a number of students 4. family, house, home home指家，包括住处和家人；house房子，住宅；family家庭成员。eg：My family is a happy one. 5. sound, voice, noise sound自然界各种各样的声音；voice人的嗓音；noise噪音。I hate the loud noise outside. 6. photo, picture, drawing photo用照相机拍摄的照片；picture可指相片，图片，电影片；drawing指画的画eg：Let's go and see a good picture. 7. vocabulary, word vocabulary词汇，一个人拥有的单词量；word具体的单词。eg：He has a large vocabulary. 8. population, people population人口，人数；people具体的人。eg：China has a large population. 9. weather, climate weather一天内具体的天气状况；climate长期的气候状况。eg：The climate here is not good for you. 10. road, street, path, way road具体的公路，马路，street街道，path小路，小径，way道路，途径 eg：take this road; in the street, show me the way to the museum 11. course, subject course课程（可包括多门科目），subject科目（具体的学科）a summer course 12. custom, habit custom传统风俗，习俗，也可指生活习惯，后接to do；habit生活习惯，习惯成自然，后接of doing. eg：I've got the habit of drinking a lot. 13. cause, reason cause 指造成某一事实或现象的直接原因，后接of sth./doing sth；reason用来解释某种现象或结果的理由，后接for sth./doing sth. the reason for being late 14. exercise, exercises, practice exercise运动，锻炼（不可数），exercises练习（可数），practice（反复做的）练习eg：Practice makes perfect. 15. class, lesson 作"课"解时,两者可以替换.指课文用lesson；指班级或全体学生用class。eg：lesson 6; class 5 16. speech, talk, lecture speech指在公共场所所做的经过准备的较正式的演说；talk日常生活中的一般的谈话，

WesternBlot原理和操作方法(全)讲解

Western Blot 原理和操作方法（全） Western Blot 工作原理蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出10-9-10-12mol 的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广旱挠τ? SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量. PAGE能有效的分离蛋白质,主要依据其分子量和电荷的差异,而SDS-PAGE(SDS 变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳)的分离原理则仅根据蛋白质的分子量的差异,因为SDS-PAGE的样品处理液是在要跑电泳的样品中假如含有SDS和巯基乙醇(2-ME)或二巯基赤藓醇(DTT),其可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构,SDS是一种阴离子表面活性剂即去污剂,它可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级及三级结构,并与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,电泳样品假如样品缓冲液后,要在沸水中煮3-5分钟使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物,SDS-蛋白质复合物在强还原剂巯基乙醇存在时,蛋白质分子内的二硫键被打开而不被氧化,蛋白质也完全变性和解聚,并形成榛状结构,稳定的存在于均一的溶液中,SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷,平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子,这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖,远远超过其原来所带的电荷,从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计,消除了不同分子之间原有的电荷差别,其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小,这样分离出的谱带也为蛋白质的亚基. 样品处理液中通常加入溴酚蓝染料, 溴酚蓝指示剂是一个较小的分子,可以自由通过凝胶孔径,所以它显示着电泳的前沿位置,当指示剂到达凝胶底部时,即可停止电泳. 另外样品处理液中也可加入适量的甘油或蔗糖以增大溶液密度,使加样时样品溶液可以沉入样品加样槽底部. 重要参数 ①聚丙烯酰胺凝胶(PAG)制备原则:由于孔径的大小取决于单体和双体丙烯酰胺在凝胶中的总浓度(T)以及双体占总浓度的百分含量即交联度(C)决定的,因而制胶之前必须首先知道这两个参数.一般可以由下述公式计算: T%=(a+b)/m*100%; 和C%=a/(a+b)*100% 其中: a=双体(bis)的重量;b=单体(arc)的重量;m=溶液的体积(ml) ②当分析一个未知样品时,常常先用7.5%的标准凝胶制成4-10的梯度凝胶进行试验,以便选择理想的胶浓度.如果蛋白质的分子量已知,可参考下表选择所需凝胶浓度: 蛋白质分子量范围(Da) 适宜的凝胶浓度(%) <104 20-30

westernblot原理及步骤

westernblot原理及步骤 Western blot基本原理：在电场的作用下将电泳分离的多肽从SDS-PAGE凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。 Western blot应用：目的蛋白的表达特性分析；目的蛋白与其他蛋白的互作；目的蛋白的组织定位；目的蛋白的表达量分析；蛋白样品的制备： 1 水溶液提取法：稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大，是提取蛋白质最常用的的溶剂，操作相对麻烦，重复性一般； 2 有机溶剂提取法； 3 离心管柱提取法：超快速，易用，高产及重复性强； 4 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白。 Western blot注意事项和常见问题：

1 我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？答：有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长；也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲液即可。 2 我做的蛋白质分子量很小（10 KD），请问怎么做WB？答：可以选择0.2 μm的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。 3 最后显色时用DAB好还是ECM好？答：DAB 有毒，但是比较灵敏，是HRP 最敏感的底物；ECM结果容易控制，但被催化时灵敏度差一点，但如果达到阀值，就特别灵敏，可以检测pg 级蛋白，具体可以根据你实验的情况。 4 要验证某个细胞上有无该蛋白的存在，需要做免疫组化和western blot试验吗？做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗？答：①免疫组化可以用来进行定位，但是不能精确定量，而且有时会有假阳性，不易与背景区分；Western blot可以特异性检测某个蛋白质分子，进行定量，但是不能定位。

汉恒生物-micorRNA研究整体策略

microRNA整体解决方案汉恒Th物技术服务手册

microRNA研究总体策略功能模型芯片筛选芯片结果的QPCR验证过表达和抑制miRNA实验及功能分析靶基因Th物信息学预测及内源性分析靶标蛋白的内源性和外源性验证 3’UTR靶标回复实验（rescue实验）研究实例 8

选用有功能差异对比的样本，进行mir 芯片筛选（mir-array ），筛选出变化明显的mir 。现在主流的芯片平台是 Agilent 和Affymetrix ， Agilent 只检出成熟体，而 Affy 的芯片前体和成熟体皆检出，假阳性率较高，但 Affy 的容量相比 Agilent 的大很多。汉恒Th 物（Hanbio ）提供Agilent 和 Affymetrix 平台的 mirarray 筛选服务及后续的芯片数据分析及靶基因聚类分析。 mir 进行 QPCR 验证，挑选出丰度高且变化显著的mir （以下简称mir- X ）。 Mir 的QPCR 验证最首选的当然是Life 的Taqman 系列探针和kit 权威，但价格极其昂贵。与之相比，特定引物SYBR 法检测mir 价格适中，但误差率较高。 1

汉恒Th物（Hanbio）特有一步反转技术，特异性好，简单易用。汉恒已开发出针对不同种属mir的miRNA快速检测技术 MiRQeasy，与市面一般的mir引物相比，信号更单一，且操作极其简便。汉恒独有MiRTeasy一步法反转录试剂，一次性转录，兼顾了专一性和通用性。过表达和封闭miRNA实验及功能验证原则：与mir变化相反的处理是否取缔功能表型的变化，而同向mir变化处理是否能模拟出功能表型变化。比如我们发现mir-X在细胞某种诱导分化后升高，则诱导时取缔这种升高是否会抑制分化，而单单升高该mir 能否模拟出细胞分化表型。 1）初筛选：选取出若干芯片与QPCR验证变化一致，且组织表达丰度较高的Mir，运用Mimics（过表达）和inhibitor（封闭）分别在细胞中过表达和封闭特定的mir，观察细胞功能的变化。注：Mimics和inhibitor表达时程很短，一般72-96小时，所以一般只作为初筛。 2）m i r与A n t i-m i r的克隆高表达：Mir过表达：从miRbase上调出pri-mir序列，直接克隆pri- mir至表达载体。

汉恒生物实例分享-一步法构建同源重组载体

一步法构建同源重组载体王海艳（中国农业大学）同源重组载体构建需要分别克隆目的片段两端的同源臂（长度~1kb），并与Marker基因进行连接。传统的构建方法是两段同源臂分别克隆构建到目的载体，费时费力。在本例中，本人已经成功应用汉恒生物科技（上海）有限公司的HB-Infusion TM无缝克隆试剂盒，将同源臂及Marker基因一步成功构建到载体上，现将实验过程及结果分享如下： 1. 目的片段引物的设计用NEBbuilder（https://https://www.wendangku.net/doc/b414675876.html,/watch?v=8_-t5xtJ3y8），或snapgene，genomecompiler等软件，将三个目的片段的基因序列、线性化载体的基因序列按照软件使用说明依次填入，将自动生成所需要的引物序列（如下表）。将引物提交华大基因进行合成。引物序列列表 2. 目的片段的扩增反应体系 DNA(248ng/uL) 1uL Forward Primer (10uM) 2uL Reverse Primer(10uM) 2uL

ExTaq premix 25uL DDW 20uL Total 50uL （注：此步反应中的酶最好用高保真酶，以免产物出现错配）PCR反应程序 95℃4min 95℃30s 65℃30s 72℃1~2.5min 72℃10min 将扩增到的PCR产物，用1%琼脂糖凝胶电泳后，进行胶回收并用Nanodrop 测量核酸浓度。图1. 三个目的片段凝胶电泳结果 3. 载体的线性化酶切： Plasmid 2ug 34cycles

SacI 2uL XbaI 2uL 10×M buffer 5uL DDW39uL Total 50uL 37℃酶切4h后，用1%凝胶电泳进行分析，并用Axygen凝胶回收试剂盒进行胶回收。图2. 载体酶切及胶回收实验结果 A：质粒；B：质粒酶切产物；C：目的片段胶回收产物。 4. 冰上融化并且充分混匀HB-infusion TM Master mix，配制反应体系将各个片段按照说明书的要求计算用量并配制反应体系，如下表所示：片段碱基对数（bp）浓度（ng/uL) OD260/280 所需mol数所需质量（ng）所需体积 (uL) 3'-flank 1000 129.5 1.84 0.2 130.00 1.00 5’-flank 1000 141.4 1.89 0.2 130.00 0.92 Marker fragment 2518 184.9 1.88 0.2 327.34 1.77 Lineared vector 2875 95.2 1.85 0.1 186.88 1.96 HB-infusion MIX 10 DDW 4.34 Total 20

DIFFERENCES BETWEEN CHINESE MARRIAGE CUSTOM AND WESTERN MARRIAGE CUSTOM 中西方婚俗的差异

DIFFERENCES BETWEEN CHINESE MARRIAGE CUSTOM AND WESTERN MARRIAGE CUSTOM 中西方婚俗的差异 1 Introduction Marriage is formed in a long historical evolution of the marriage custom in a nation. It is the regularity of the activities that restrains people's awareness of marriage and marriage. Marriage custom’s binding does not depend on the law, and it cannot rely on science tests neither, but on the force of habit, traditional culture and national psychology. During the development of human history, the institution of marriage and family system has experienced different processes of development. Human have experienced group marriage, the dual system of marriage and individual marriage system (monogamy). 2 Chinese Marriage Custom Like other folk, marriage custom has the same development and evolving process. In the early days of humanity, the human relationship in a very long period of time still carried the irregular relations like the animal world. There was no marriage at all, if suggest some, the only "arbitrary marriage."

wb原理步骤及总结

实验原理蛋白质印迹是把电泳分离的蛋白质转移到固定基质上，然后利用抗原抗体反应来检测特异性的蛋白分子的技术，包括三个部分：SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳转移，免疫印迹分析。 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于测定蛋白质相对分子质量，SDS是阴离子去污剂，能断裂蛋白质分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏其高级结构。SDS与大多数蛋白质的结合比为1.4:1，由于SDS带有大量的负电荷，与蛋白质结合时掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别，使各种蛋白质带有相同密度的负电荷，形似长椭圆棒，蛋白迁移率与蛋白质相对分子质量的对数呈线性关系。因此，利用相对分子质量标准蛋白所作的标准曲线，可以求得未知蛋白的相对分子质量。电泳后蛋白质分子嵌在凝胶介质中，探针分子很难通过凝胶孔，将蛋白质从凝胶转移到固定基质上可以对蛋白质进行免疫检测分析。方法有两种：①水平半干式转移即将凝胶和固定基质似三明治样夹在缓冲液浸湿的滤纸中间，通电10~30min可完成②垂直湿式转移即将凝胶和固定基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电2~4h或过夜可完成。固定基质通常有硝酸纤维素膜、聚偏二氟乙烯膜和尼龙膜。蛋白质转移到固定化膜上之后，通过蛋白质染料如丽春红S检测膜上的总蛋白，或用考马斯亮蓝检测凝胶上的蛋白剩余量，以验证转移是否成功。用抗体作为探针进行特异性的免疫反应检测抗原蛋白，分为4步：①用非特异性、非反应活性分子封阻固定化膜上未吸附蛋白的自由结合区，以防止作为探针的抗体结合到膜上，出现检测时的高背景②固定化膜用专一性的一抗温育，使一抗与膜上的抗原蛋白分子特异性结合③酶标二抗与一抗特异结合④加入酶底物，适当保温，膜上便可见到颜色反应，检测出抗原蛋白区带。主要溶液 10%分离胶水 3.3mL、30% 丙烯酰胺混合液 4.0mL、1.0mol/L Tris（pH8.8）2.5mL、10% SDS 0.1mL、10%过硫酸铵0.1mL、TEMED 0.004mL 5%浓缩胶水 2.7mL、30%丙烯酰胺混合液0.67mL、1.0mol/LTris0.5mL、10%SDS0.04Ml/10%过硫酸铵0.04mL、TEMED0.004mL 1×Tris –甘氨酸电泳缓冲液 Tris碱3.03g、甘氨酸18.77g、SDS 1g，用去离子水定容至1L 2×SDS凝胶加样缓冲液 Tris-HCl（pH6.8） 100mmol/L，β-巯基乙醇10%，10%甘油，0.01%溴酚蓝，10%SDS 转移缓冲液 Tris 2.45g，甘氨酸11.25g，甲醇100mL，加去离子水至1L TBST Tris 1.21g NaCl 8.77g，Tween-20 1mL，加去离子水至1L Stripping 1.3mL Tris （pH 6.8），4mL10%SDS，140μlβ-巯基乙醇，用水定容到20mL 实验步骤 1 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 ⑴凝胶配置 ①分离胶的配置：将配置好的分离胶液混匀后迅速倒入胶槽中，至距离短玻璃板顶端约2cm 处，停止灌胶。检查是否有气泡，若有用滤纸条吸出。然后在胶液界面上加蒸馏水进行水封。15~30min后，凝胶和水封层界面清晰，说明胶已经聚合完全，然后用滤纸吸取水封层，滤纸切勿接触到凝胶面。（使蛋白样品分离） ②浓缩胶的配置：将配置好的浓缩胶灌注在分离胶之上，直至短玻璃板的顶端，然后插入样品

汉恒生物无缝克隆试剂盒使用说明(附原理)

HB-infusion TM无缝克隆试剂盒使用说明（附原理说明）一、产品简介 HB-infusion TM无缝克隆试剂盒是一种新型、快速并且高效的Gibson Assembly DNA定向克隆技术，可以在任意载体的任意位置一次插入多个目的基因片段。HB-infusion TM无缝克隆试剂盒操作极其简单，仅需在载体的克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物的5’端引入与载体克隆位点两端完全一致的15~25 bp同源序列（图1，图3）。将上述线性化的克隆载体和带有同源序列的PCR片段按合适比例混合，并加入HB-infusion TM Master mix，通过反应体系中DNA外切酶、DNA聚合酶以及连接酶的在50℃反应20 min即可快速完成定向克隆，阳性率几近100%。图1. HB-infusion TM快速克隆试剂盒原理示意图。1. 线性化目的载体（左上）；2. PCR获取目的片段。设计的引物５’需要和线性化载体末端有15~25 bp的重叠（图中蓝色和黄色片段，细节可参考图3）；3. 按照一定比例把二者混合在HB-infusion TM的2?预混液内，50?C反应20 min后直接转化E.coli即可。二、HB-infusionTM试剂盒的优点 1. 相比于传统的同源重组的无缝克隆方法进行，HB-infusion TM试剂盒更高效，操作更简单，只需要一次反应即可完成定向克隆； 2. 对酶切位点无要求，可以把目的片段插入到任意载体的任意位点；

3. 连接片段之间不会引入任何其他序列； 4. 可以同时克隆多个片段。三、产品包装四、使用说明汉恒生物建议2-3个片段连接时，DNA片段的使用总量为0.02~0.5 pmols，4~6片段连接时加入的DNA总量为0.2~1.0 pmols。DNA拼接效率随着拼接片段的数量增加或者拼接片段长度的增加逐渐降低。附：片段摩尔数量计算公式： pmols=片段质量(ng)?1000/(碱基对数?650 daltons)（碱基数越多，pmols越少；质量越大，pmols越多），举例如下：注：50 ng的5000 bp（0.015 pmols）的线性化dsDNA和10~25 ng（0.03~0.075 pmols）500 bp的PCR产物体系（PCR产物和线性化载体的摩尔比=2：1~5：1）。五、操作步骤 1. 制备线性化载体和插入片段 1.1. 载体制备---线性化处理 A.质粒酶切法在目标载体质粒上选取合适的位点进行单酶切或双酶切，对酶切后的载体进行割胶纯化。

高考常见词汇辨析(3

高考常见词汇辨析(三) H habit, practice, custom, convention这组名词一般含义为“习惯”。 habit指个人的“习惯”，通常用于表示做事、思考问题或行为举止的不自觉的方式方法 That proved to be my undoing, for I soon got back to my old bad habit of dozing off in front of the screen. 这证明是我的失败，因为我不久就回到在电视屏幕前打瞌睡的坏习惯去了。 practice 既可表示个人的也可表示社会的“习惯”，这种“习惯”从性质上看是一种反复不断的或是有选择性的行为或者方法 On the other hand, your stomach would turn at the idea of frying potatoes in animal fat——the normally accepted practice in many northern countries. 在另一方面，一想到用动物油煎马铃薯，你便会作呕。然而在许多北欧国家里，这是为大家接受的通常习惯。 She walked slowly into the hall and at once noticed that all the room doors were open,yet following her general practice she had shut them before going out. 她慢慢地走进厅堂，并且立刻发现所有的房门都是开着的。但是按照她自己的一般习惯，她在外出前总是把门全部关好的。 custom 具有habit 和practice 的一切含义，此外，custom 还包含这样一层意思：长期而广泛采用的行为或方法，即风俗习惯，按照某地区人们共同生活及其行为的准则或规范，它不仅有指导意义，而且具有必须遵循的意义 Don't be a slave to custom. 不要做风俗习惯的奴隶。 From the moment of his birth the customs into which he is born shape his experience and behaviour. 一个人从诞生的那一时刻起，他降生后所处的风俗习惯便给他的阅历和行为定型。 convention 其实是其他3个词的近义词，它的含义为：固定的或公众一致承认的行事或表达思想的方法They disregard social conventions without being conscious that they are doing anything extraordinary. 他们不顾社会习俗，并未意识到自己在做些与众不同的事。 hand down；hand in；hand over；hand out ；by hand ；hands up hand down作“把……传下来”解。例如： …knowledge，customs and memories were handed down by the elders of the race． ……他们的知识，生活习惯以及人们所怀念的事情，都是由他们的祖先传下来的。 The story was handed down from one generation to another．这个故事世代相传。 hand in为“把……交上来”、“交给”、“递交”之意。例如： Time is up．Hand in your examination papers．时间到了，请把试卷交上来。 hand over作“转交”或“移送”解。例如： Please hand over this money to XiaoZhou．请将这笔钱转交小周。 The thief was handed over to the police．小偷已被移送到公安机关了。 hand out为“散发”之意。例如： When I got to the classroom the teacher had already begun handing out the test papers．我赶到教室时，老师已开始分发试卷了。 hands up表示“举起手来”； by hand表示“用手”、“手工”，是介词短语，作方式状语。 [EXERCISES] ①This toy was made ． ②After class，you must your homework． ③If you have any questions to ask，please ．（Keys：①by hand ②hand in ③hands up）

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