脑脊液蛋白检测方法学评价

脑脊液详解(内容清晰)

脑脊液详解 脑脊液蛋白定量 脑脊液蛋白定量介绍： 脑脊液蛋白定量有助于反映中枢神经系统不同疾病时蛋白质含量变化的特点。脑脊液蛋白定量正常值： 成人：腰池150～450mg／L，小脑延髓池150～250mg／L，脑室内50～150mg／L； 新生儿：400～1200mg／L； 老年人：300～600mg／L。 脑脊液蛋白定量临床意义： 脑脊液蛋白质含量增高可提示不同类型的中枢神经系统疾病。 各类中枢神经疾病的脑脊液蛋白质含量： 疾病蛋白质（mg／L）； 细菌性脑膜炎 800～5000 ； 隐球菌性脑膜炎 250～2000； 病毒性脑膜炎 300～1000 ； 脑炎 150～1000； 肿瘤 150～2000（常正常）； 脊髓肿瘤 1000～2000； 脑出血 300～1500 ； 神经梅毒500～1500； 多发性硬化症 250～500 ； 结核性脑膜炎 500～3000；

脑脓肿 200～1200 ； 脊髓病后炎症反应轻度增加。 脑脊液蛋白定量注意事项： 脑脊液标本采集后立即送检，放置过久将影响检验结果：如细胞变性，破坏，导致计数和分类不准; 有些化学物质如葡萄糖等将分解含量减少;细菌发生自溶影响细菌的检出率。脑脊液抽取后一般分装三个无菌管，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查，三管的顺序不宜颠倒。因标本采集较难，全部送检和检测过程应注意安全。 脑脊液蛋白定量检查过程： 暂无相关信息 脑脊液常规检验（CSF） 脑脊液常规检验（CSF）介绍： 脑脊液是一种包绕并循环于神经系统脑组织和脊髓周围的特殊体液，对于脑的保护、营养、代谢等起着至关重要。 脑脊液常规检验（CSF）正常值： 颜色和透明度：无色、透明。凝固性：12～24h内不凝固（无凝块或薄膜）。 脑脊液常规检验（CSF）临床意义： 脑脊液一般性状检查主要用于神经系统疾病的诊断。 1．颜色无色：虽是正常脑脊液特点，但也见于病毒性脑炎、神经梅毒等。红色：见于各种原因的出血。应区别脑脊液穿刺时可能损伤血管而出血。病理性出血见于脑出血、蛛网膜下腔出血。黄色：见于蛛网膜下腔和脑室出血、椎管梗阻、吉兰-巴雷综合征（又称格林-巴利综合征）、化脓性脑膜炎、重症结核性脑膜炎、重症黄疽、新生儿溶血症。乳白色：常见于化脓性细菌性脑膜炎。褐色／黑色：见于脑膜黑色素瘤。 2．透明度脑脊液中如有细胞、细菌、真菌等增多时可变为混浊。结核性脑膜炎呈毛玻璃样混浊；化脓性脑膜炎呈明显脓样混浊；轻度混浊或仍保持透明可见于病毒性脑膜炎和脑炎。 3．凝固性脑脊液中蛋白质（引起凝固的主要蛋白质是纤维蛋白原）增多时（大于10g／L），常出现凝固。1～2h内出现凝块或沉淀物，见于化脓性脑膜炎；12～24h后才出现薄膜状，见于结核性脑膜炎；出现胶样凝固，见于蛛网膜下腔梗阻；出现絮状物，见于神经梅毒等。 脑脊液常规检验（CSF）注意事项： 脑脊液标本采集后立即送检，放置过久将影响检验结果：如细胞变性，破坏，导致计数和分类不准;

结核性脑膜炎脑脊液细胞学分析

学号： HEBEI UNITED UNIVERSITY 毕业论文 G RADUATE T HESIS 设计题目：结核性脑膜炎脑脊液细胞学分析 学生姓名： 专业班级： 学院： 指导教师： 2014年5月4日

结核性脑膜炎脑脊液细胞学分析 摘要 目的：分析结核性脑膜炎脑脊液细胞分布情况，探讨脑脊液细胞学动态观察对结核性脑膜炎早期诊断及其预后评价的临床价值。 方法：收集30例结核性脑膜炎患者不同时期的脑脊液细胞学分类特点，并对其抗结核治疗前、治疗后进行细胞学动态分析。 结果：结核性脑膜炎患者脑脊液白细胞总数升高，多数患者早期呈典型的以嗜中性粒细胞为主的混合细胞学反应，经过有效抗结核治疗后，嗜中性粒细胞比例减少，淋巴细胞、单核细胞比例增多，呈以淋巴细胞为主的混合细胞学反应和淋巴细胞样反应，随着病情的好转，嗜中性粒细胞逐渐下降。 结论：脑脊液呈混合细胞学反应对结核性脑膜炎早期诊断有一定的价值，嗜中性粒细胞比例下降，淋巴细胞、单核细胞比例升高，提示抗结核治疗有效，脑脊液细胞学动态监测对结核性脑膜炎的预后评价有重要的临床意义。 关键词：结核性；脑膜炎；细胞学；脑脊液

A nalysis of cerebrospinal fluid cytology of tuberculous meningitis Abstract Objective: To analyze the classification features of cerebrospinal fluid cytology of tuberculous meningitis; to explore the clinical value of cerebrospinal fluid cytology dynamic observation on early diagnosis and its evaluation of prognosis of tuberculous meningitis. Methods: A retrospective analysis of different stages of cerebrospinal fluid cytology classification characteristics of 30 patients who suffer from tuberculous meningitis; and cytologically analyze the patients’ cerebrospinal fluid cell before and after they receive the treatment of anti tuberculosis. Results: T he number of cerebrospinal fluid leukocyte of the patients with tuberculosis meningitis increased ; in early stage most of the patients have mixed cellular reaction based on neutrophil , after effective anti TB treatment, the proportion of neutrophils decreased, and lymphocytes, monocytes ratio increased, with mixed cytology reaction mainly lymphocytes and lymphocyte reaction ; with the improvement of the disease, neutrophil decreased. Conclusion: Cerebrospinal fluid with mixed cytology reaction is of great value to early diagnosis of tuberculous meningitis; the percentage of neutrophils decreased, and the proportion of lymphocytes, mononuclear cells increased, this suggests that the effective anti tuberculosis treatment , and these have an important clinical significance in the evaluation of prognosis of tuberculous meningitis. Key words: tuberculous; meningitis; cytology; cerebrospinal fluid

脑脊液检查正常指标

脑脊液检验正常值及临床意义一、常规检验： 1、(CSF)颜色检查 [正常参考值] 无色水样液体。 [临床意义] 1．红色：常见于蛛网膜下腔出血、脑出血、硬膜下血肿等。如腰椎穿刺时观察到流出的脑脊液先红后转无色，为穿刺损伤性出血。 2．黄色：见于陈旧性蛛网膜下腔出血及脑出血、包囊性硬膜下血肿、化脓性脑膜炎、脑膜粘连、脑栓塞；椎管梗阻；脑、脊髓肿瘤及严重的结核性脑膜炎；各种原因引起的重症黄疽；心功能不全、含铁血黄素沉着症、胡萝卜素血症、早产儿等。 3．乳白色：见于化脓性脑膜炎。 4．微绿色：见于绿脓假单胞菌性脑膜炎、甲型链球菌性脑膜炎。 5．褐色或黑色：见于中枢神经系统的黑色素瘤、黑色素肉瘤等。2、透明度检查 [正常参考值] 清晰透明。 [临床意义] 1．微混：常见于乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑脓肿(未破裂者)。 2．混浊：常见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎等。 3．毛玻璃状：常见于结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎等。 4．凝块：见于化脓性脑膜炎、脑梅毒、脊髓灰质炎等。 5．薄膜：常见于结核性脑膜炎等。3、细胞计数 [正常参考值] 成人：(0-8)×106/L； 儿童：(0-15)×106/L；新生儿：(0-30)×106/L。 [临床意义] 1．细胞数明显增高(＞200×106/L)：常见于化脓性脑膜炎、流行性脑脊髓膜炎。 2．中度增高(＜200×106/L)：常见于结核性脑膜炎。 3．正常或轻度增高：常见于浆液性脑膜炎、流行性脑炎(病毒性脑炎)、脑水肿等。4、蛋白定性试验 [正常参考值] 阴性。 [临床意义] 1．脑脊液蛋白明显增高(++以上)：常见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、脊髓腔等中枢神经系统恶性肿瘤及其转移癌、脑出血、蛛网膜下腔出血及梗阻等。 2．脑脊液蛋白轻度增高(+ -- ++)：常见于病毒性脑膜炎、霉菌性脑膜性、乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑膜血管梅毒、麻痹性痴呆、脑血栓形成等。5、葡萄糖半定量试验 [正常参考值]1-5管或2-5管阳性。 [临床意义] 1．脑脊液葡萄糖增高：常见于饱餐或静脉注射葡萄糖后、血性脑脊液、糖尿病、脑干急性外伤或中毒、早产儿或新生儿等。 2．脑脊液葡萄糖降低：常见于急性化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、霉菌性脑膜炎、神经梅毒、脑瘤、低血糖等。6、细菌及寄生虫检查 [正常参考值] 阴性。

(完整版)泛素化蛋白检测方法

泛素化蛋白检测方法 蛋白质泛素化简介蛋白质泛素化修饰过程在人体免疫系统调节过程中起到了关键性的作用。与磷酸化修饰过程一样，泛素化修饰过程也是一种可逆的共价修饰过程，它能够调节被修饰蛋白的稳定性、功能活性状态以及细胞内定位等情况。 泛素蛋白是一个由76 个氨基酸残基组成的非常保守的多肽，它能在E1、E2、E3 酶等一系列酶促反应催化下与细胞内靶蛋白上的一个或多个赖氨酸残基发生共价连接。泛素蛋白本身也含有7 个赖氨酸残基，因此它们之间也可以通过这些位点互相连接，形成多泛素蛋白链（polyubiquitin chain）。目前研究显示，如果多泛素蛋白链与被修饰蛋白上的第48 位赖氨酸残基相连，会介导靶蛋白进入蛋白酶体而被降解；如果与被修饰蛋白上其它位点，比如第63 位赖氨酸残基相连，则靶蛋白可以发挥信号通路功能而不会被降解。 与磷酸化修饰途径一样，泛素化修饰途径也是可逆的，即可以通过去泛素化酶（DUB ）将泛素蛋白修饰物去除掉。靶蛋白经泛素化途径修饰之后，连接在靶蛋白上的泛素蛋白单体或多聚体可以被各种泛素蛋白结合结构域（UBD ）所 识别和结合。人类蛋白质组中含有两种E1酶、50种E2酶、600种E3酶、90 种DUB 酶和20 种UBD ，这说明泛素修饰途径在细胞调控中起到了多么重要的作用。E3 酶是泛素修饰途径中决定底物特异性的关键酶，它可以分为两大类，即含有HECT 结构域的E3 酶和其它含有RING 结构域或RING 样结构域（比如U-box 或PHD 结构域）的E3 酶。这两种E3 酶都在免疫调控过程中起到了关键性的作用。 蛋白质泛素化的检测方法研究蛋白质的泛素化首先需要明确的三个基本点：哪些蛋白发生了泛素化；发生了泛素化的蛋白质，具体是哪个位点的赖氨酸残基发生了泛素化；进行定量。 明确了上述几点后，进一步需要弄清楚的是，我们感兴趣的泛素化蛋白，是 如何发生泛素化的，影响这一泛素化过程的关键分子是什么？或者说这一过程中的E3 酶是什么？ 然后需要研究的是，这一蛋白质发生泛素化之后可以产生那些分子效应？对下游

6种方法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量 [ 文章来源： | 文章作者： | 发布时间：2006-12-25| 字体： [大 中 小] 一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nh 2ch 2cooh+3h 2so 4——2co 2+3so 2+4h 2o+nh 3 (1) 2nh 3+h 2so 4——(nh 4)2so 4 (2) (nh 4)2so 4+2naoh ——2h 2o+na 2so 4+2nh 3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret 法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg 蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris 缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材

脑脊液常规详细

常规检验 颜色检查 (CSF) [正常参考值] 无色水样液体。 [临床意义] 1．红色：常见于蛛网膜下腔出血、脑出血、硬膜下血肿等。如腰椎穿刺时观察到流出的脑脊液先红后转无色，为穿刺损伤性出血。 2．黄色：见于陈旧性蛛网膜下腔出血及脑出血、包囊性硬膜下血肿、化脓性脑膜炎、脑膜粘连、脑栓塞；椎管梗阻；脑、脊髓肿瘤及严重的结核性脑膜炎；各种原因引起的重症黄疽；心功能不全、含铁血黄素沉着症、胡萝卜素血症、早产儿等。 3．乳白色：见于化脓性脑膜炎。 4．微绿色：见于绿脓假单胞菌性脑膜炎、甲型链球菌性脑膜炎。 5．褐色或黑色：见于中枢神经系统的黑色素瘤、黑色素肉瘤等。 透明度检查 [正常参考值] 清晰透明。 [临床意义] 1．微混：常见于乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑脓肿(未破裂者)。 2．混浊：常见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎等。 3．毛玻璃状：常见于结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎等。 4．凝块：见于化脓性脑膜炎、脑梅毒、脊髓灰质炎等。 5．薄膜：常见于结核性脑膜炎等。 细胞计数 [正常参考值] 成人：(0-8)×106/L； 儿童：(0-15)×106/L；新生儿：(0-30)×106/L。 [临床意义] 1．细胞数明显增高(＞200×106/L)：常见于化脓性脑膜炎、流行性脑脊髓膜炎。 2．中度增高(＜200×106/L)：常见于结核性脑膜炎。 3．正常或轻度增高：常见于浆液性脑膜炎、流行性脑炎(病毒性脑炎)、脑水肿等。

蛋白定性试验 [正常参考值] 阴性。 [临床意义] 1．脑脊液蛋白明显增高(++以上)：常见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、脊髓腔等中枢神经系统恶性肿瘤及其转移癌、脑出血、蛛网膜下腔出血及梗阻等。 2．脑脊液蛋白轻度增高(+ -- ++)：常见于病毒性脑膜炎、霉菌性脑膜性、乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑膜血管梅毒、麻痹性痴呆、脑血栓形成等。 葡萄糖半定量试验 [正常参考值]1-5管或2-5管阳性。 [临床意义] 1．脑脊液葡萄糖增高：常见于饱餐或静脉注射葡萄糖后、血性脑脊液、糖尿病、脑干 急性外伤或中毒、早产儿或新生儿等。 2．脑脊液葡萄糖降低：常见于急性化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、霉菌性脑膜炎、神 经梅毒、脑瘤、低血糖等。 细菌及寄生虫检查 [正常参考值] 阴性。 [临床意义] 1．脑脊液中有细菌，可引起细菌性脑膜炎。如急性化脓性脑膜炎常由脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌、葡萄球菌等引起；病程较慢的脑膜炎常由结核杆菌、新型隐球 菌等引起。 2．脑脊液中若发现血吸虫卵或肺吸虫卵等，可诊断为脑型血吸虫病或脑型肺吸虫病等。 细胞分类 (DC) [正常参考值] 红细胞：无或少量；淋巴及单核细胞：少量； 间皮细胞：偶见；其他细胞：无。 [临床意义] 1．红细胞增多：常见于脑出血、蛛网膜下腔出血、脑血栓、硬膜下血肿等。

食品中蛋白质的测定方法

食品中蛋白质的测定方法 蛋白质的测定方法分为两大类：一类是利用蛋白质的共性，即含氮量，肽链和折射率测定蛋白质含量，另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定蛋白质含量。但是食品种类很多，食品中蛋白质含量又不同，特别是其他成分，如碳水化合物，脂肪和维生素的干扰成分很多，因此蛋白质的测定通常利用经典的剀氏定氮法是由样品消化成铵盐蒸馏，用标准酸 液吸收，用标准酸或碱液滴定，由样品中含氮量计算出蛋白质的含量。由于食品中蛋白质含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它们的基本原理都是一样的。 一凯氏定氮法 我们在检验食品中蛋白质时，往往只限于测定总氮量，然后乘以蛋白质核算系数，得到蛋白质含量，实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物，故称为粗蛋白质。 (一) 、常量凯氏定氮法 衡量食品的营养成分时，要测定蛋白质含量，但由于蛋白质组成及其性质的复杂性，在食品分析中，通常用食品的总氮量表示，蛋白质是食品含氮物质的主要形式，每一蛋白质都有其恒定的含氮量，用实验方法求得某样品中的含氮量后，通过一定的换算系数。即可计算该样品的蛋白质含量。 一般食品蛋白质含氮量为l6 ％，即1份氮素相当于6.25 分蛋白质,以此为换算系数6.25 ，不同类的食物其蛋白质的换算系数不同. 如玉米、高梁、荞麦, 肉与肉制品取6.25 ，大米取 5.95 、小麦粉取 5.7, 乳制品取 6.38 、大豆及其制品取5.17 ，动物胶 5.55 。 测定原理： 食品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素以氨的形式与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收形成硼酸铵，再用盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定，根据盐酸消耗量计算出总氮量，再乘以一定的数值即为蛋白质含量，其化学反应式如下。 ⑴消化反应：有机物(含C、N、H、0、P、S等元素)+H2S04 -T(NH4)2SO4+CO0 +S02f +S03+H3PO4+C02 (2) 蒸馏反应：(NH4)2SO4+2NAOH—2NH3T +2H2O+NA2SO4 2NH3+4H3B04 (NH4)2B4O7+5H2O (3) 滴定反应：(NH4)2B4O7+2HCH+5H2O T2NH4CH+4H3BC或(NH4)2B407+H2S04+5H20- (NH4)9SO4+4H2BO2 试剂与仪器： 1、硫酸钾； 2、硫酸铜；

脑脊液教案

课程名称：临床检验基础NO：34 授课班级授课日期授课教师 学习任务三十四模块四第六章脑脊液检查（概述和常用化学检查）【学习目标】 1、掌握脑脊液一般性状检查 2、掌握脑脊液常用化学检查的方法及临床意义 3、了解脑脊液常用化学检查的原理 【教学重难点】 重点：脑脊液一般性状和脑脊液常用化学检查的方法及临床意义 难点：脑脊液常用化学检查的方法及原理 【教学方法】讲授+自学 【新课导入】 脑脊液的性状和压力受多种因素的影响，若中枢神经系统发生病变，神经细胞的代谢紊乱，将使脑脊液的性状和成分发生改变；若脑脊液的循环路径受阻，颅内压力将增高。因此，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段之一。 【课程内容】 第一节概述 一、脑脊液的生成与功能 脑脊液(CSF) 脑脊液为无色透明的液体，充满在各脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内。脑脊液由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似，略带粘性。 正常成年人的脑脊液约100－150毫升，其比重为1，呈弱碱性，不含红细胞，但每立方毫米中约含5个淋巴细胞。正常脑脊液具有一定的化学成分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用。患中枢神经系统疾病时，常常要作腰椎穿刺吸取脑脊液检查，以协助诊断。脑脊液的性状和压力受多种因素的影响，若中枢神经系统发生病变，神经细胞的代谢紊乱，将使脑脊液的性状和成分发生改变；若脑脊液的循环路径受阻，颅内压力将增高。因此，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段之一。 脑脊液的产生：在中枢神经系统内，脑脊液产生的速率为0.3ml/min，日分泌量在400-500ml。 脑脊液的流动具有一定的方向性。两个侧脑室脉络丛最丰富，产生的脑脊液最多。如果脑脊液产生过多，或循环通路受阻，均可导致颅内压升高。 脑脊液的作用：脑脊液不断产生又不断被吸收回流至静脉，在中枢神经系统起着淋巴液的作用，它供应脑细胞一定的营养，运走脑组织的代谢产物，调节着中枢

脑脊液细胞学检查在诊断中枢神经系统白血病中的应用

脑脊液细胞学检查在诊断中枢神经系统白血病中的应用 目的研究中枢神经系统白血病应用脑脊液细胞学检查实施诊断的临床价值。方法在我院接受治疗80例脑脊液标本的临床资料，本组患者均应用细胞玻片离心法实施细胞学检查。结果33例淋巴瘤患者中有1例检查结果为阳性，阳性份数为6，标本份数为57；29例急性淋巴细胞白血病患者中有3例检查结果为阳性，阳性份数为15，标本份数为102；18例急性髓细胞白血病患者中有2例检查结果为阳性，阳性份数为4，标本份数为35。结论中枢神经系统白血病患者应用脑脊液细胞学检查实施诊断具有良好的成效，这对于该病的临床诊治来说至关重要的作用与意义。 标签：中枢神经系统白血病；脑脊液细胞学检查；诊断 白血病在血液内科中是一种克隆性恶性疾病，其主要临床表现为头晕、乏力、嗜睡、贫血、易疲劳和冒冷汗等；而淋巴瘤在肿瘤内科中则是一种极为常见的恶性肿瘤，其主要临床表现为发热、盗汗、进行性肿大和淋巴结无痛性等；二者均会对机体中枢神经系统造成严重性危害，这也是导致患者病情复发或死亡的关键因素之一。因为中枢神经系统白血病的形态学具有多变性和复杂性特征，所以必须采取鉴别措施，与不同种类的白血病细胞进行审察辨别[1-2]。而形态学检验具有操作简单、经济实用和特异性强等诸多优点，目前已成为诸多疾病的标准诊断方法，也就是说脑脊液细胞学检查现已是临床诊断中枢神经系统白血病的最佳手段。笔者就中枢神经系统白血病患者的临床症状展开研究讨论，并详细分析其脑脊液细胞学检查得出的最终诊断结果，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 回顾性分析2009年2月～2012年10月在我院接受治疗80例脑脊液标本的临床资料，其中7例为门诊部患者，73例为住院部患者。47例患者合并有阳性脑膜白血病，其中男30例，女17例，最大年龄为55岁，最小年龄为9岁，中位年龄为32岁。26例患者为淋巴瘤，20例患者为急性淋巴细胞白血病，15例患者为急性髓细胞白血病，9例急性粒细胞白血病，7例急性单核细胞白血病，3例急性早幼粒细胞白血病。36例患者伴随着中枢神经系统症状，例如恶心、呕吐、头痛、抽搐、昏睡和视乳头水肿等，其中20例患者并发高颅压症状，11例患者并发颅神经损害，5例患者并发脑膜刺激征。密切观察脑脊液变化，发现颅高压升高至0.02kPa以上，白细胞计数升高至10×106/L以上，蛋白升高至450mg/L 以上，通过细胞学检查发掘白血病细胞。本组患者中有10例没有明显的临床症状，病情得到有效缓解后采用脑脊液细胞学检查找到白血病细胞。因此，在病程的每个阶段都有可能发现脑膜白血病。 1.2 检查方法

脑脊液检验

第四节脑脊液检验（cerebrospinal fluid examination ）一、脑脊液采集及检查适应证和禁忌证（一）定义（二）适应证及禁忌证indication and contraindication 适应证： a有脑膜刺激症状 b疑有颅内出血 c中枢神经系统恶性肿瘤 d 脱髓鞘疾病 e 有剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪而疑为中枢神经系统疾病者。 f 中枢神经系统疾病需椎管内给药治疗者。禁忌证： a对疑有颅内压升高者须先做眼底检查，如有明显乳头水肿，忌做腰椎穿刺，以免诱发脑疝。如非做不可，应先行降颅压处理，然后缓慢滴出少许脑脊液。 b病人处于休克、衰竭或频危状态以及局部皮肤有炎症者亦不宜做腰椎穿刺。（三）标本采集specimen collection 1、采集部位：脑脊液标本通过腰椎穿刺1umber puncture采集，特殊情况下可由小脑延髓池posterior cistern或侧脑室1ateral ventricle穿刺获取。 2、注意事项： 穿刺成功后先作压力测定，正常人脑脊液压力为 80180mmH2O，超过200mmH2O表明颅内压增高，此时放出脑 脊液的量应控制在2ml以内。若压力低于80mmH2O，表明颅 内压降低，可作动力试验以了解蛛网膜下腔有无阻塞。 3、收集的量： 待测定压力后将脑脊液分别收集于3支无菌试管中，每管1—2m1。 第1管作细菌培养，第2管作化学检查和免疫学检查，第3管作理学及显微镜检查，如疑有恶性肿瘤，可再留1管作脱落细胞检查。 脑脊液标本采集后应立即送检，放置过久可因细胞破坏或细胞包裹于纤维蛋白凝块中导致细胞数降低及分类不准；脑脊液标本中葡萄糖的分解使葡萄糖测定结果偏低；脑脊液标本中细菌自溶或死亡影响细菌检出率二、检验项目（一）一般性状检查1、颜色color：正常脑脊液为无色水样液体。病理情况下颜色改变： i. 红色 ii. 黄色 iii. 乳白色 iv. 微绿色 v. 褐色或黑色白色或灰白色 常见于化脓性脑膜炎，多由于白细胞增加所致。褐色或黑色见于脑膜黑色素瘤。 2、透明度transparency 脑脊液混浊主要由于感染或出血导致脑脊液中细胞成分增多所致，混浊程度与细胞数量有关，脑脊液中细胞数大于300X106／L时，可出现混浊。蛋白质含量增加或含有大量微生物也可产生混浊。 脑脊液透明度可用“清晰clear透明（transparent”“微浊slightly cloudy”、“混浊cloudy”描述。正常——清晰透明化脓性脑膜炎：乳白色混浊 结核性脑膜炎：毛玻璃样混浊 病毒性脑膜炎：清晰透明或微浊3、凝固物coagulum：脑脊液的凝固状况表现为薄膜形成pellicle formation、凝块clot或沉淀物形成。脑脊液的凝固状况可用“无凝块”、“有凝块”、“有薄膜”、“胶胨状”描述。正常脑脊液标本静置1224h不形成薄膜、凝块或沉淀物。在炎症情况下，脑脊液中蛋白质包括纤维蛋白原含量增高。当含量高于10g／L时，可形成凝块。化脓性脑膜炎：静置12h 形成凝块或沉淀物结核性脑膜炎：静置1224h后表面有纤细的网膜形成病毒性脑膜炎：不凝固蛛网膜下腔梗阻：由于脑脊液循环受阻，梗阻远端脑脊液蛋白质含量可高达15g／L，此时脑脊液可呈黄色胶胨状。 （二）化学检查1、蛋白质检查1蛋白质定性试验Pandy试验Pandy test脑脊液中蛋白质与苯酚结合成不溶性的蛋白盐而产生白色浑浊。Pandy试验所需脑脊液标本量少，检测灵敏度高，结果易于观察，沉淀物的多少与标本中蛋白质含量成正比。由于Pandy试验灵敏度高，故部分正常脑脊液可出现极弱的阳性结果。2蛋白质定量试验参考值成人：腰池 200400mg／L 小脑延髓池 100250mg／L 脑室

蛋白质定量检测方法

Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ） Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250 shifts from 465 nm to 595 nm when binding to protein occurs. Both hydrophobic and ionic interactions stabilize the anionic form of the dye, causing a visible color change. Within the linear range of the assay (~5-25 mcg/mL), the more protein present, the more Coomassie binds. Reference Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. (1976) 72, 248-254. 考马斯亮蓝染色法(Bradford法)测定蛋白质含量 原理 1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的原理，迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法。染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加。蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子，如K+，Na+，Mg2+，(NH4)2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。 操作 一、标准方法 取含10～100μg蛋白质溶液于小试管中，用双蒸水或缓冲液调体积到0.1mL，然后加入5mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值。以0.1mL 双蒸水或缓冲液及5mL蛋白试剂作为空白对照。 二、微量蛋白分析法 取含1～10μg蛋白质溶液，用双蒸水调体积到0.8mL，加0.2mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值，以0.8mL双蒸水及0.2mL蛋白试剂作为空白对照。用不同浓度的蛋白质溶液作标准曲线，以蛋白质浓度为横坐

蛋白质含量测定方法及其比较资料2

蛋白质含量测定法（一） 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩脲法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 五种蛋白质测定方法比较

值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。 考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+NH3 (1) 2NH3+H2SO4——(NH4)2SO4 (2) (NH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2NH3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（Biuret法） （一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材

脑脊液免疫球蛋白定量测定的临床意义

脑脊液免疫球蛋白定量测定的临床意义 中枢神经系统内可以产生很强的免疫应答，这是某些自身免疫性神经系统疾病发生、发展的病理学基础。因此脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）检验，特别是其中免疫球蛋白成分及其含量的检测，对某些中枢神经系统疾病的诊断、疗效观察和预后判断具有重要意义。 生理情况下，血中Ig通过通透性正常的血－脑屏障（blood－brain barrier，BBB），而进入CSF 内。IgG分子量略低于IgA，较易通过BBB，而IgA略难，IgM分子量大，更难通过BBB。所以IgG、IgA、Ig M在CSF中的浓度依此递减。当脑组织或脑膜有病变时，脉络丛的通透性增加，BBB发生破坏，或自病变组织产生病理性产物进入脑脊液，使脑脊液组分发生改变。 1948 年由Kabat 等用免疫化学方法定量测定脑脊液免疫球蛋白，发现多发性硬化症病人脑脊液中γ－球蛋白与总蛋白比值增高，并由他首先提出脑脊液IgG鞘内合成假说，认为脑脊液γ－球蛋白的增高是不依赖其血清内Ig水平而变化。后由Delpech设计了脑脊液IgG指数（IgGindex）公式： 许多学者认为IgG指数是鞘内合成IgG的指标。进一步研究发现，当血－脑屏障通透性正常且血清Ig 水平在正常范围时，CSF中Ig水平很少受血清Ig水平变化的影响，CSF 中Ig水平主要与鞘内合成率相关，即在正常状态下，其含量与反映血－脑屏障通透性指标—白蛋白商值（A1b Quotient）相关。 白蛋白商值＝Albcsf／Albs×1000 此外，由中枢局部合成的免疫球蛋白常有异质性，但其IgG 定量可呈现正常，现采用高分辨率琼脂糖凝胶电泳能分离出“寡克隆区带”（oligoclonal band，OCB），在多

蛋白质含量测定方法汇总

实验七蛋白质含量测定 测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。 [目的要求] 1．掌握测定蛋白质的含量基本方法。 2．了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。 一、染料法 [实验原理] 在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。 该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 [器材] 吸量管；试管；721型分光光度计 [试剂] 1.标准牛血清白蛋白溶液：配成0.1mg/ml的溶液。 2.待测蛋白质溶液。 3.染料溶液：称取考马斯亮蓝G-250 0.1g溶于95%的酒精50ml，再加入85%的浓磷酸100ml，用水稀释至1000ml,混匀备用。

[操作步骤] 1．标准曲线的绘制： 按上表分别向各支试管内加入各种试剂，充分混匀，5min后在595nm波长处以0号管调零,测定各管吸光度值（A）。以吸光度值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。 2．样品测定： 取1ml样品溶液（约含25～250微克蛋白质），加入染料溶液5ml混匀，5min后测定其595nm吸光度值，对照标准曲线求得蛋白质浓度。 二、双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量 [实验原理] 在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量

脑脊液常规和生化检测

脑脊液常规和生化检测 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】

脑脊液常规和生化检测 （一）一般性状检查， 1.颜色正常脑脊液为无色透明液体。 （1）红色；：常因出血引起，主要见于穿刺损伤、蛛网膜下腔或脑室出血。 （2）黄色：常因脑脊液中含有变性血红蛋白、胆红素或蛋白量异常增高引起，见于蛛网膜下腔出血，血清中胆红素超过256/μmol/L或脑脊液中胆红素超过μmol/L时，可使脑脊液黄染；椎管阻塞（如髓外肿瘤）、多神经炎和脑膜炎时，脑脊液中蛋白质含量升高（>L）而呈黄变症。 （3）乳白色；多因白细胞增多所致，常见于各种化脓菌引起的化脓性脑膜炎。 （4）微绿色；见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎等。 （5）褐色或黑色；见于脑膜黑色素瘤等。 2.透明度正常脑脊液清晰透明。病毒性脑膜炎、流行性乙型脑膜炎、中枢神经系统梅毒等由于脑脊液中细胞数仅轻度增加，脑脊液仍清晰透明或微浊；结核性脑膜炎时细胞数中度增加，呈毛玻璃样混浊；化脓性脑膜炎时，脑脊液中细胞数极度增加，呈乳白色混浊。 3.凝固物正常脑脊液不含有纤维蛋白原，放置24h后不会形成薄膜及凝块。当有炎症渗出时，因纤维蛋白原及细胞数增加。可使脑脊液形成薄膜及凝块。急性化脓性脑膜炎时，脑脊液静置1～2h 即可出现凝块或沉淀物；结核性脑膜炎的脑脊液静置12～24h后，可见液面有纤细的薄膜形成。蛛网膜下腔阻塞时，由于阻塞远端脑脊液蛋白质含量常高达15g/L，使脑脊液呈黄色胶胨状。医学教育网搜集整理 4.压力正常成人卧位时脑脊液压力为～（80～180mmH20）或40～50滴/min，随呼吸波动在10mmH20之内。儿童压力为～（40～100mmH2O）。若压力超过200mmH2O，放出脑脊液量不应该超过2ml，若压力低于正常低限可做动力试验，以了解蛛网膜下腔有无阻塞。脑脊液压力增高见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎等颅内各种炎症性病变；脑肿瘤、脑出血、脑积水等颅内非炎症性病变；高血压、动脉硬化等颅外因素；还有其他如咳嗽、哭泣，低渗溶液的静脉注射等。脑脊液压力减低主要见于脑脊液循环受阻；脑脊液流失过多；脑脊液分泌减少等因素。 （二）化学检查 1.蛋白质测定 （1）蛋白定性试验（Pandy试验） 【参考值】 阴性或弱阳性。 （2）蛋白定量试验 【参考值】 腰椎穿刺儿童为～L；成人为～L. 【临床意义】 蛋白含量增加见于：①脑神经系统病变：常见于脑膜炎（化脓性脑膜炎时显着增加，结核性脑膜炎时中度增加，病毒性脑膜炎时轻度增加）、出血（蛛网膜下腔出血和脑出血等）、或代谢性疾病（糖尿病性神经病变，甲状腺及甲状旁腺功能减退，尿毒症及脱水等）、药物中毒（乙醇、酚噻嗪、苯妥英钠中毒等）。②脑脊液循环障碍：如脑部肿瘤或椎管内梗阻（脊髓肿瘤、蛛网膜下腔粘连等）。③鞘内免疫球蛋白合成增加伴血脑屏障通透性增加：如GuiUain-Barre综合征、胶原血管疾病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经根病等。 2.葡萄糖测定 【参考值】 ～L.

脑脊液蛋白定性(潘氏试验)标准操作规程

脑脊液蛋白定性（潘氏试验）标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：脑脊液蛋白定性（潘氏试验）；脑脊液生化测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2．采集与处理 2.1 受检者的准备： 脑脊液：采用腰椎穿刺。要严格掌握禁忌证、凡疑有颅内压升高者必须做眼底检查，如有明显视乳头水肿或有脑疝先兆者，禁忌穿刺。凡病人处于休克、衷竭或濒危状态以及局部皮肤有炎症、颅后窝有占位性病变或伴有脑干症状者均禁忌穿刺。 2.2 样本准备： 脑脊液由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。穿刺后应由医师用压力测定，正常人脑脊液压力卧位为0.78-1.76kpa(80-180mmH2O)，儿童为0.4-1.0kpa(40-100mmH2O)。任何病变使脑组织体积或脑脊液量增加时，脑脊液压力均可升高。待压力测定后将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过外将影响检验结果，是细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。存放中的脑脊液葡萄糖会分解，使之含量降低；细菌自溶或残废可影响细菌检出率等。 2.3 抗凝剂： 不使用抗凝剂。 2.4 标本处理： 脑脊液样品中不能有溶血。储存在2-8℃可稳定数天。 3 方法原理 脑脊液中的蛋白质遇饱和苯酚溶液，生成不溶性蛋白盐而形成浑浊或沉淀。 4 试剂及其他用品 饱和苯酚溶液:取苯酚（分析纯）10毫升（有结晶时，先放入56度水浴箱中加热融化），加蒸馏水至100毫升，充分混匀，置入37度温箱中数小时，见底层有苯酚析出，上层为饱

蛋白质检测方法

蛋白质的检测（参考GB/T6432-94） 一、原理 凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氮溢出，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。 二、试剂 （1）硫酸化学纯，含量为98%，无氮； （2）混合催化剂 0.4g硫酸铜，含5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀； （3）氢氧化钠化学纯，40%水溶液（m/V）； （4）硼酸化学纯，2%水溶液（m/V）； （5）混合指示剂甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月； （6）盐酸标准溶液基准无水碳酸钠法标定； a)0.1mol/l盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。 b)0.02mol/l盐酸标准溶液：1.67mL盐酸注入1000mL蒸馏水中。（7）蔗糖分析纯； （8）硫酸铵分析纯，干燥； （9）硼酸吸收液 1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。

三、仪器设备 （1）实验室用样品粉碎机或研钵； （2）分样筛孔径0.45mm（40目）； （3）分析天平感重0.0001g； （4）消煮炉或电炉； （5）滴定管酸式，10、25mL； （6）凯氏烧瓶 250mL； （7）凯氏蒸馏装置常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式； （8）锥形瓶 150、250mL； （9）容量瓶 100mL； （10）消煮管 250mL； （11）定氮仪以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。 四、分析步骤 （一）仲裁法 1.试样的消煮称取试样0.5-1g（含氮量5-80mg）（精确至0.0002g）， 放入凯式烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯式烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化、泡沫消失后，再加强活力（360-410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，消化全过程至少2h。 2.氨的蒸馏 （1）常量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入60-100mL蒸馏水，摇匀，