鸭肝卵黄抗体滴度检测方法
鸭肝卵黄抗体滴度检测方法
（固定病毒或血清滴度中和试验法）
1. 根据质量标准，将卵黄抗体做2倍倍比稀释，比如，稀释至128倍或者512倍等。
2. 将病毒稀释至单位滴度为100~200ELD50。
3. 将稀释好的病毒和待检样品进行等比例稀释，37℃温育1h。另外做对照组，即取200ELD50的病毒和同体积的生理盐水混合，置37℃温育1h。
4. 将每个稀释度的孵育液按照0.2mL/只蛋（或0.1mL）的剂量经尿囊腔接种到培养9~10天的SPF鸡蛋上。
5. 接种后于37℃条件下培养168h后判断结果。
6. 按照Reed-Muench方法计算半数保护两（PD50），能够保护50%的鸡胚的最高稀释倍数为该样品的最高抗体滴度。
表中显示的是经Reed-Muench方法计算后的PD50在10-2.41~10-2.71间的结果
根据公式计算，log（小于50%死亡量的血清稀释度）+线性标度×log（稀释因子）=-2.41+0.192×log1/2=-2.41-0.0576=-2.4675
抗体滴度的对数-2.4675=0.00341（1:293），表明血清进行1:293稀释后可以保护50%的鸡胚。
卵黄抗体作用机理
卵黄抗体 科技名词定义 中文名称：卵黄抗体 英文名称：vitelline antibody 定义：从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。 所属学科：免疫学（一级学科）；畜牧免疫（二级学科） 概述 卵黄抗体（yolk antibody, IgY）：通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。 IgY的性质 IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。IgY 与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。IgY 在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。IgY 对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h 后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育8h，活性分别保持39%和41%。 IgY的作用机理 特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽(Fab)部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区(Fe部分)留在肠内。 IgY在动物疾病防治方面的应用
抗核抗体检测试剂注册技术审查指导原则
抗核抗体检测试剂注册技术审查指导原则 (征求意见稿) 本指导原则旨在指导注册申请人对抗核抗体( Antinuclear antibody ，ANA )检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审 评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对抗核抗体检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 抗核抗体作为自身免疫病( autoimmune diseases ，AID ) 重要的生物学标志，是临床应用中最广泛、最基础的一组自身抗体。临床常见于系统性红斑狼疮 ( Systemic Lupus Erythematosus ，SLE )、干燥综合征、系统性硬化病、混合结缔组织病及多发性肌炎/皮肌炎等系统性(非器官特异性) AID 患者。同时，ANA 可见于器官特异性AID 患者，如自身 免疫性肝病、自身免疫性甲状腺炎等。除此之外，ANA 也可见于慢性 感染性疾病及健康人群中 细胞核是ANA 靶抗原所在的最重要的结构部位，因此传统意义上的
ANA 是指抗细胞核抗原成分的自身抗体总称。随着检测技术的改进，尤其是培养细胞抗原基质（如HEp-2 细胞）的广泛应用，ANA 的定义扩展到以真核细胞各种成分（包括细胞核、细胞浆、细胞骨架蛋白及细胞分裂周期蛋白等）为靶抗原的自身抗体的总称。 目前，ANA 检测分成ANA 总抗体的检测和针对靶抗原的特异性自身抗体检测。其中，ANA 总抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence,IIF ）、酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ，ELISA ）等。ANA特异性自身抗体检测方法主要包括ELISA法、线性免 疫印迹法（line immunoassay,LIA ）、化学发光免疫分析法（c hemiluminescence immunoassay,CLIA ）等。 本指导原则所述抗核抗体检测试剂是指利用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、化学发光法、线性免疫印迹法等基于抗原抗体反应原理，针对人血清、血浆样本中总抗核抗体或针对靶抗原的特异性自身抗体进行体外定性和/ 或半定量和/或定量检测的试剂。同时，本指导原则是针对抗核抗体检测试剂的通用指导原则，申请人应结合具体产品的特点进行申报。如果申报产品有具体指导原则，应参照执行。 本指导原则适用于进行注册申请和相关许可事项变更的产品。依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5 号）（以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管 2013 〕242 号），抗核抗体及针对靶抗原的特异性自身抗体检 测试剂属于自身抗体检测试剂，管理类别为□类6840。 二、注册申报资料要求注册申报资料的撰写应符合《办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014 年第44 号）（以下简称44 号公告）
精制与粗制卵黄抗体的优劣势分析
精制与粗制卵黄抗体的优劣势分析随着养殖业的发展，疾病种类越来越多，某些病原体的变异也越来越快，疾病互传的可能性也越来越大，迫切需要有相应的快速有效的对策来控制疾病的发展，降低死亡，减小损失。毋庸置疑，外源性的特异性抗体是治疗某些特定传染病的最直接最快速最有效的方法。卵黄抗体作为一种价廉易得的外源性特异性抗体，其使用效果已经在临床兽医学上得到了验证和认同。但在畜牧生产实践中，越来越多的人却对卵黄抗体的使用效果产生了怀疑，到底出现了什么问题？ 本文试从精制和粗制卵黄抗体的优劣势分析来探讨这一问题的根源。 鸡、鸭、鹅等禽类的蛋在营养成分上大致相同，主要由蛋黄、蛋清（即蛋白）和蛋壳构成。其中蛋黄约占32%，蛋清约占57%，其余11%为蛋壳。其中蛋黄又由如下图所示的成分所构成： 抗体(免疫球蛋白，Ig)是机体受到外来抗原物质刺激后，机体免疫系统细胞产生的可以特异性地识别和结合外来抗原并使之失活的一类球蛋白。家禽经特定抗原免疫后，可产生相应的特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体在卵细胞中逐渐蓄积，并储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk，IgY)，它是卵黄中唯一的免疫球蛋白，具有特异性和针对性，无毒副作用。下图为抗体结构：
从图中可以看出，在治疗疾病使用卵黄抗体时，起到关键作用的是卵黄中的免疫球蛋白（IgY)，IgY的作用非常广泛，其中最主要的作用有以下几种： 特定的卵黄抗体能黏附于特定病毒的衣壳上，直接抑制病毒的生长繁殖（抑制作用）； 黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于粘膜上皮细胞，失去感染能力（阻滞作用）； 能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用）； 中和细菌、霉菌等毒素的毒性（中和毒素）； 与病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）。 但大量调查发现，目前市面上可见的家禽用粗制卵黄抗体几乎都是地下作坊生产的“三无”产品，生产环境及产品质量令人堪忧。这些粗制抗体不仅抗体效价难以保证，而且通常会污染禽呼肠孤病毒、禽淋巴白血病病毒、网状内皮增生因子、大肠杆菌、沙门氏菌、支原体等外源性致病原。在注射抗体预防或者治疗疾病时，极有可能造成垂直传播病原或其他一些细菌、病毒的扩散甚至疾病的爆发，带来严重的经济损失。 此外，由于粗抗生产者往往试图通过添加大剂量的甲醛，青、链霉素等措施来延长其产品的保质期，增加所谓的使用安全性，但结果往往是造成更大的应激和严重的药物残留。这就是粗制抗体的购买者和使用者对粗制抗体的使用效果产生疑问的重要原因之一。 精制就是将蛋黄中的免疫球蛋白进行分离纯化的过程。已知蛋黄是由水溶相（Water soluble fraction, WSF）和水不溶相（Water insoluble fraction, WIF）构成的乳浊液。WIF主要为脂蛋白构成，而蛋黄抗体存在于蛋黄的WSF中。WSF中的脂蛋白类含量甚微，
氯仿法、水解法、卡拉胶法提取鸡蛋中卵黄抗体
氯仿法、水解法、卡拉胶法提取鸡蛋中卵黄抗体 【摘要】卵黄抗体（egg-yolk antibody，IgY）具有一些IgG所没有的优良特性，与哺乳动物的IgG相比，IgY 的提取具有方法简单，提取率高且方法多样等优点。本文旨在对当前条件下卵黄抗体的提取方法进行比较。选取水溶法（Water Dilution，WD）、氯仿法（Chloroform，CHL）和卡拉胶法（Carrageenan，CAR）制备IgY，根据电泳结果，比较三种方法得率高低。SDS-PAGE结果表明，氯仿法的得率较其他两种方法高一些。 【关键词】卵黄抗体；提取；电泳 1.1 卵黄抗体的发现和命名 1893年，Klemperer首次报道了鸡蛋中存在抗体，发现蛋黄中抗体以IgG占优势，而IgM和IgA的含量很少，现已证明了免疫鸡的蛋是提供特异性IgG抗体最方便，最廉价的来源[1]。由于鸡蛋黄的英文名称是“Yolk”，故将鸡蛋黄中的免疫球蛋白IgG称为IgY。 1.2 卵黄抗体的一般性质 卵黄抗体相对分子量约为180kDa，有两条轻链和两条重链组成（2H+2L）。其中轻链（L）相对分子量约为22～30kDa，重链（H）相对分子量约为67～70kDa，等电点接近5.2，含氮量为14.8%，IgY的氨基酸组成与鸡血清IgG和牛IgG不同。此外，还具有以下优点： （1）鸡卵黄中IgY纯度高，含量大。 （2）特异性高。 （3）稳定性好。在室温保存半年，其抗体活性不变，在4℃冰箱贮存6-7年，经免疫扩散法测定其活性降低不超过5%[2]。 （4）产量高。 （5）IgY不激活补体。 （6）IgY能耐酸耐热。 （7）安全。服用安全可靠，王泽中等用治疗剂量（80-300mg/kg）的10-40倍进行试验，没有发现毒性反应。 1.3 IgY的分离、提纯方法
抗核抗体谱项检测项目收费标准及临床意义
抗核抗体谱（ANAs）检测项目及项目物价收费： 注明：项目编号3-2抗核提取物抗体测定，其中包含检测抗体（抗SSA、抗SSB、抗JO
－1、抗Sm、抗nRNP、抗ScL-70、抗着丝点抗体的测定） 该表中湛江及附院收费是参考2011年版的湛江物价局医疗收费及附院0212年收费，请核对并完善。 抗核抗体谱17s亚辉龙中标编号：3179998，中标价：T, 优惠价：T ，抗核抗体谱12S亚辉龙中标编号：3179999, 中标价格：T, 优惠价：T，抗核抗体谱8S亚辉龙中标编号：3180000 ，中标价格：T, 优惠价：T 项目的临床意义如下： 1.高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志， 阳性率为95-100％，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40％的系统性红斑狼疮患 者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。 2.抗SmD1抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA抗体一起，是系统性 红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10％。 3.抗SS-A（Ro60）抗体最常见于干燥综合征（40-80％）、也见于系统性红斑狼疮 （30-40％）和原发性胆汁性肝硬化（20％）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外， 在100％的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起 炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。 4.抗SS-A（Ro52）抗体在自身免疫性疾病中是一个非特异性指标，与多种自 身免疫性疾病都有相关性，在很多疾病处于稳定期、控制好的情况下会 显示阴性；如果阳性会提示复发或者优先于其它指标预警，起到预防提 示作用。此指标合并其它指标阳性，常会提示预后不好。 5.抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80％）和系统性红斑狼疮（10-20％）的 女性患者中，男女比例为29:1。在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同 时出现。 6.抗Scl-70抗体见于25-75％的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法 和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化症中不出现。 7.抗Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为25-35％。常与合并肺间质纤维化相关。 8.1977年，Wolfe及其同事首先在多肌炎病人中描述了抗PM-Scl抗体，并把该抗体 叫做抗PM抗体。在1984年，Reichlin与其同事经过研究，发现了抗PM-1抗体的 更准确的特征和命名（抗PM-Scl抗体）。在50-70%的所谓的重叠综合征患者中可 检出这些抗体，在这些患者中可合并出现多肌炎（PM）、皮肌炎（DM）和进行性 系统性硬化症（Scl）。抗PM-Scl抗体在进行性系统性硬化症（弥散型）中的阳性 率为3%，在多肌炎和皮肌炎中的阳性率为8%。 9.抗着丝点抗体与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud’s 病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。 10.抗PCNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性，但其阳性率仅为3％ 11.抗dsDNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外，抗dsDNA 抗体也可作为该病的一个血清学指标，阳性率为40-90%。
抗核抗体介绍
抗核抗体介绍 抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮（SLE，95% ~100%）、类风湿性（RA，10%~20%）、混合性结缔组织病（MCTD，80%~100%）、干燥综合症（SjS,10%~40%）、全身性硬皮病（85%~90%）、狼疮性（95%~100%）、原发性胆汁性肝硬化（95%~100%）等，但经皮质激素治疗后，阳性率可降低。抗核抗体在类人中约有20％～50％IgG型ANA呈阳性，小儿类风湿ANA的阳性率约19％～35％，伴发虹膜睫状体炎者阳性率高（505~90%），故ANA阳性预示类风湿有发生慢性睫状体炎的可能。已发现75％类风湿病人有多形核白细胞的特异性ANA或抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）可使白细胞核受到破坏。 抗核抗体是一组对细胞核内的DNA，RNA，蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体。按其核内各个分子的性能不同可将各ANA区分开来，如(一)抗DNA抗体，（二）抗组蛋白抗体，（三）抗非组蛋白抗体，（四）抗核仁抗体等。每一大类又因不同抗原特性而再分为许多种类。因此ANA在广义上是一组各有不同临床意义的自身抗体，更确切的名称应为抗核抗体谱。ANA 主要存在于IgG，也见于IgM、IgA，甚至LgD及LgE中。 常见的核免疫荧光杭核抗体试验有以下几种图形：（1）均质型：核质染色均匀一致，这种染色型常与抗组蛋白和抗DNA抗体有关；（2）斑点型：核质染色呈斑点状，抗可提取性核抗原（ENA）抗体常呈这种染色型；（3）周边型：荧光染色围绕在核膜周围，它与抗DNA抗体有关；（4）核仁型：仅有核仁染色，具有抗4-6sRNA抗体呈现这种染色型；（5）着丝点型：在体外培养的细胞株（喉癌细胞）在核分裂相期时，可见到荧光染色的着丝点排列成特殊图型，而在鼠肝做底物中看不到此类图型，而被遗漏。 抗核抗体的分类，由于核抗原不同，有多种不同的ANA 。 抗DNA抗体 抗DNA抗体有抗双链DNA（ds DNA）和抗单链(ss DNA)抗体之分。抗ds DNA抗体与S LE的关系密切，且随疾病的活动度而升降，病情好转者其滴度多下降甚或转阴。抗ss DN
卵黄抗体的研究进展
文献综述 卵黄抗体的研究进展 郑译 西南大学荣昌校区动物医学系，重庆，荣昌402460 摘要：抗体（免疫球蛋白，Ig）是指机体受到外来抗原物质刺激后，B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白。 关键词：卵黄抗体；免疫程序；研究进展 卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk，IgY）经特定抗原免疫后的母鸡可产生相应的特异性抗体，有研究证实[1]，产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用，使其不断储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体。 1 卵黄抗体的概念 卵黄抗体，英文名（vitelline antibody） 定义：从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。 卵黄抗体是用特定抗原多次免疫产蛋母鸡，使机体产生相应的特异性抗体，并转移、贮存在卵黄中，经提取纯化的免疫球蛋白 卵黄抗体（Egg yolk antibodies eyAb），也称卵黄免疫球蛋白(Egg yolkimmunogbhin，IgY)。科学家在鸟类的血液循环壁发现三种免疫球蛋白(IgG、IgA 与IgM)，母鸡在细胞分裂产蛋的过程中，会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋，母鸡血浆中之IgA与IgM，会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白的部分。 IgG：免疫球蛋白G (Immunoglobulin G，IgG)的缩写。IgG是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。其中40～50％分布于血清中，其余分布在组织中。 IGA：一种免疫球蛋白。异常情况下，在肾脏受到各种炎症反应刺激等因素下，导致IGA过度沉积在肾脏肾小球系膜区等部位，与抗原一起形成免疫复合物，造成肾脏结构病理损害，引起的一系列临床症状，称为IGA肾病。 IGM：免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)的缩写。根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种，IgM是三种免疫球蛋白之一，其他还有lgA、lgG、IgD和lgE.。
临床医学检验基础知识讲解：抗核抗体检测方法
ANA的检测方法 由于ANA的复杂性及多样性，故测定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。 1.免疫荧光法检测血清总ANA最常用的方法是荧光免疫组化法。多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，结果比较稳定可靠，在荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性反应。如将患者血清先进行不同比例的稀释，可以做大致的定量试验，在1：80稀释仍然虽阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。在油镜下观察结果，可以将ANA阳性的荧光现象分成4种主要的荧光核型，核型的确定对临床诊断有进一步的参考价值。①周边型表示抗DNA抗体存在；②均质型表示有抗DNP抗体；③斑点（颗粒）型多为抗ENA抗体；④核仁型多为抗核小体抗体。SLE患者常出现周边型、匀质型或混合型，斑点型多见于混合结缔组织病，而硬皮病多为核仁型；周边型对SLE有较高的特异性。 近年有人用锥虫或血鞭毛虫（例如绿蝇短膜虫试验）作基质测定抗dsDNA抗体，因为这些血寄生虫的动基体内含大量的纯dsNDA，无其他抗原干扰；在阳性结果时，可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。因此该试验用于测定抗dsDNA抗体具有特异性强和敏感性高的优点。另外，短膜虫对人畜无害，可以人工养殖，来源方便，值得推广。 2.放射免疫法常用检测抗DNA抗体，有Farr法及过滤法。①Farr法的原理为用同位素标记DNA，被标记的DNA和被检血清的抗DNA抗体结合，经50%硫酸铵饱和液沉淀，然后比较沉淀物和上清液中的放射活性，从而得出DNA结合活性，一般结合率大于20%为阳性。②过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器（孔径为0.45μm）进行过滤，游离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。 3.ELISA临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体，其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。目前已有试剂盒供应。 4.免疫印迹（immunoblotting）先将混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后将这些带转印到硝酸纤维素膜上，最后用酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析（方法见第十五章）。由于该试验不需纯化的单个抗原，可在同一固相上作多项分析检测，灵敏度高，特异性强。故目前已广泛用于自身免疫病患者血清中多种自身抗体的检测，如检测抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SS-A抗体及SS-B抗体等。 另外，还可用传统的琼脂双向扩散法、对流免疫电泳法、间接血凝法和补体结合试验等。这些试验要求的实验条件比较低，但敏感性也比较低。 1 2 下页
卵黄抗体的制作
卵黄抗体的制作 This manuscript was revised by the office on December 10, 2020.
卵黄抗体的制作 卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。沉淀系数7S，分子量，含糖%。现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。强阳性反应时，24小时后就可见到沉淀线，即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。治疗作用：当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时，可立即皮下注射卵黄抗体1-2毫升，肉鸡可口服卵黄抗体2毫升/只，能阻止病毒进入细胞，形成再感染，中和病毒数量，经2小时就可发现鸡群精神好转，食欲增加，粪便恢复正常。目前，是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。 预防作用：卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。应用方法解冻：一般包装有500毫升、250毫升、100毫升瓶装。要把药瓶放在新鲜井水中，浸泡2小时~4小时以上，反复振摇。用肉眼观察，瓶内无冰碴为宜。注射：可将解冻后的卵黄抗体，在室温下放置半小时，接近室温时（15℃~20℃），再皮下注射1毫升~2毫升。先注射健康鸡群，再注射假定健康群，最后注射病鸡群。注射1只鸡要换1个针头。口服：将解冻后的卵黄抗体以1∶10的比例，加入凉开水或新鲜井水及适量的抗生素，制成混悬液，让鸡在半小时内饮完，并要备足饮水器，让鸡都有位置饮水。注意事项卵黄抗体是生物制品，高温会失效，为方便生产与使用，须冷冻保存和运输，一般在-18℃条件下保存，运输时应特别注意温度变化，冷藏包装运输。使用卵黄抗体前，一定要了解鸡群是否接种过同种疫苗，并要注意间隔时间；同时，应测定其效价，计算使用量和保护期。卵黄抗体兑
卵黄抗体的制作和应用
卵黄杭体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病(IBD）的一种特效药。 卵黄抗体的作用 诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时～72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。强阳性反应时,24小时后就可见到沉淀线，即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。https://www.wendangku.net/doc/b616300853.html, 治疗作用：当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时，可立即皮下注射卵黄抗体1～2毫升，肉鸡可口服卵黄抗体2毫升／只，能阻止病毒进入细胞，形成再感染，中和病毒数量，经2小时就可发现鸡群精神好转，食欲增加，粪便恢复正常。目前，是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。 预防作用：卵黄抗体的使用，在免疫学理论中可成为被动免疫。当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时，可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种，发挥抗病作用。 制作方法：将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌术取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1:20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。 卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体,IgG抗体。是母体血液中小分子抗体IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig,由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。沉淀系数7S，分子量160000 ～180000，含糖2.5%。现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。 卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1:64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周～4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。中国禽病网 应用方法 解冻．：一般包装有500毫升,250毫升、100毫升瓶装。要把药瓶放在新鲜井水中，浸泡2小时～4小时以上，反复振摇。用肉眼观察，瓶内无冰碴为宜。 注射：可将解冻后的卵黄抗体，在室温下放置半小时，接近室温时（15℃～20℃），再皮下注射1毫升～2毫升。先注射健康鸡群，再注射假定健康群，最后注射病鸡群。注射1只鸡要换1个针头。 注意事项卵黄抗体是生物制品，高温会失效，为方便生产与使用，须冷冻保存和运输，一般在-18℃条件下保存，运输时应特别注意温度变化，冷藏包装运输。 使用卵黄抗体前，一定要了解鸡群是否接种过同种疫苗，并要注意间隔时间；同时，应测定其效价，计算使用量和保护期。 在使用卵黄抗体防治鸡新城疫或传染性法氏囊病时，不得产生依赖思想，同时还要做好卫生、饲养管理和消毒工作，采取综合的防治措施，才能收到满意的效果。
抗核抗体谱17项检测项目收费标准及临床意义
抗核抗体谱(ANAs)检测项目及项目物价收费: 注明:项目编号250402003-2抗核提取物抗体测定,其中包含检测抗体(抗SSA、抗SSB、抗JO－1、抗Sm、抗nRNP、抗ScL-70、抗着丝点抗体得测定) 该表中湛江及附院收费就是参考2011年版得湛江物价局医疗收费及附院0212年收费,请核
对并完善。 抗核抗体谱17s亚辉龙中标编号:,中标价:133、00/T, 优惠价:120、00/T , 抗核抗体谱12S亚辉龙中标编号:, 中标价格:120、83/T, 优惠价:96、00/T,抗核抗体谱8S亚辉龙中标编号: ,中标价格:99、00/T, 优惠价:70、00/T 项目得临床意义如下: 1.高滴度得抗U1-nRNP抗体就是混合性结缔组织病(MCTD,夏普综合征)得标志,阳性 率为95-100％,抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40％得系统性红斑狼疮患者中也 可检出抗U1-nRNP抗体,但几乎总伴有抗Sm抗体。 2.抗SmD1抗体就是系统性红斑狼疮得特异性标志,与抗dsDNA抗体一起,就是系统性 红斑狼疮得诊断指标,但阳性率仅为5-10％。 3.抗SS-A(Ro60)抗体最常见于干燥综合征(40-80％)、也见于系统性红斑狼疮(30-40％) 与原发性胆汁性肝硬化(20％)中,偶见于慢性活动性肝炎。此外,在100％得新生儿红 斑狼疮中可出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应与新生儿先 天性心脏传导阻滞。 4.抗SS-A(Ro52)抗体在自身免疫性疾病中就是一个非特异性指标,与多种自 身免疫性疾病都有相关性,在很多疾病处于稳定期、控制好得情况下会显 示阴性;如果阳性会提示复发或者优先于其它指标预警,起到预防提示作 用。此指标合并其它指标阳性,常会提示预后不好。 5.抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征(40-80％)与系统性红斑狼疮(10-20％)得女性患 者中,男女比例为29:1。在干燥综合征中抗SS-A抗体与抗SS-B抗体常同时出现。 6.抗Scl-70抗体见于25-75％得进行性系统性硬化症(弥散型)患者中,因实验方法与疾 病活动性而异(Scl=硬化症)。在局限型硬化症中不出现。 7.抗Jo-1抗体见于多肌炎,阳性率为25-35％。常与合并肺间质纤维化相关。 8.1977年,Wolfe及其同事首先在多肌炎病人中描述了抗PM-Scl抗体,并把该抗体叫做 抗PM抗体。在1984年,Reichlin与其同事经过研究,发现了抗PM-1抗体得更准确 得特征与命名(抗PM-Scl抗体)。在50-70%得所谓得重叠综合征患者中可检出这些 抗体,在这些患者中可合并出现多肌炎(PM)、皮肌炎(DM)与进行性系统性硬化症 (Scl)。抗PM-Scl抗体在进行性系统性硬化症(弥散型)中得阳性率为3%,在多肌炎与 皮肌炎中得阳性率为8%。 9.抗着丝点抗体与局限型进行性系统性硬化症(CREST综合征:钙质沉着、Raynaud’s 病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张)有关,阳性率为70-90%。 10.抗PCNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高得特异性,但其阳性率仅为3％ 11.抗dsDNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高得特异性。除抗Sm抗体外,抗dsDNA抗 体也可作为该病得一个血清学指标,阳性率为40-90%。 12.在系统性红斑狼疮患者血清中可检出抗核小体抗体,但就是,由于用传统得核小体制
2013年全国229家实验室抗核抗体谱结果比对分析_宋宁
2013年全国229家实验室抗核抗体谱结果比对分析* 宋宁，胡朝军，张蜀澜，邓垂文，李萍，白依娜，李丽君，董晓娟，吴子燕，甘晓丹，史艳萍，李永哲，张奉春（中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院风湿免疫科，风湿免疫病学教育部重点实验室，北京100730） 摘要：目的调查全国抗核抗体谱（ANAs）的检测现状，以改进和提高其检测水平与质量。方法由卫生公益性行业科研专项“风湿免疫病诊疗关键技术临床推广及转化应用研究”项目组向全国229家自愿报名参加ANAs检测的实验室发放比对品。比对品可检测抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（dsDNA）抗体、抗可提取性核抗原（ENA）抗体，共计一组5支血清。由项目组统一寄送至各实验室。各实验室在规定日期内使用常规方法检测，并将结果上传至项目组比对网站。采用Excel软件对检测结果进行统计及描述性评价。结果参加ANA、抗dsDNA抗体及抗ENA抗体检测的实验室数目分别为217家、219家和223家。ANA、抗dsDNA抗体检测定性结果阳性符合率分别为98．9%和89．5%，阴性符合率分别为97．2%和98．8%。间接免疫荧光法（IIF）是检测ANA的主要方法，核型回报正确率高于89．5%，滴度回报结果在可接收范围内的正确率高于81．8%。抗dsDNA抗体应用免疫印迹法检测结果阴性符合率高于96%，但阳性符合率仅为76%，明显低于IIF法95．4%及ELISA法97．9%。抗ENA抗体检测结果阳性符合率高于94%。结论2013年全国参与ANAs质评实验室的数量较以往明显增加。比对品的定性结果符合率理想，核型符合率较为理想，滴度和定量结果符合率有待提高。 关键词：抗核抗体；抗dsDNA抗体；抗ENA抗体；质量检测；比对分析 中图分类号：Ｒ446．6文献标志码：A Comparative analysis of the results of antinuclear antibody spectrum from229laboratories in China during2013 SONG Ning，HU Chao-jun，ZHANG Shu-lan，DENG Chui-wen，LI Ping，BAI Yi-na，LI Li-jun，DONG Xiao-juan，WU Zi-yan，GAN Xiao-dan，SHI Yan-ping，LI Yong-zhe，ZHANG Feng-chun（Department ofＲheumatology and Clinical Immunology，Peking Union Medical College Hospital，Peking Union Medical College，Chinese Academy of Medical Sciences，Key Laboratory ofＲheumatology and Clinical Immunology，Ministry of Education，Beijing100730，China） Abstract：Objective To investigate the current situation of antinuclear antibody（ANA）spectrum detection in China so as to improve and enhance its detection quality．Methods Five serum samples for the detection of ANA，anti-dsDNA antibody，and anti-ENA anti-bodies were distributed to229laboratories which volunteered to participate in the ANA-testing project-AppliedＲesearch of Key Clini-cal Technology Promotion and Transformation for the Diagnosis and Treatment ofＲheumatic Autoimmune Diseases launched by the Health Public Welfare Project．Then，the titers of ANA，anti-dsDNA antibody，and anti-ENA antibodies in these samples were detec-ted by routine methods，and the results were uploaded to the website of the project within the set time．All the results were written into the Excel and performed statistical analysis and descriptive evaluation．Ｒesults There were217，219and223laboratories which de-tected the ANA，anti-dsDNA antibody and anti-ENA antibodies，respectively．The positive coincidence rates for ANA and anti-dsDNA antibody were98．9%and89．5%，respectively，while the negative coincidence rates were97．2%and98．8%，respectively．The main method detected ANA was indirect immunofluorescence（IIF），and the accuracy rates were above89．5%and81．8%for the dis-tribution of nuclear fluorescence and the titers，respectively．The negative coincidence rate of anti-dsDNA antibody detected by immu-noblotting was above96%，but the positive coincidence rate was only76%，which was significantly lower than those from IIF （95．4%）and ELISA（97．9%）．The positive coincidence rate of anti-ENA antibody was above94%．Conclusion In2013，the number of laboratories participated in the ANA-testing project increased obviously．The coincidence rates of qualitative results and the nuclear fluorescence distribution results are high，while those of quantitative results need to be improved． Key words：antinuclear antibody；anti-dsDNA antibody；anti-ENA antibody；quality testing；comparative analysis 抗核抗体谱（ANAs）是自身免疫性疾病诊疗中非常重要的一组自身抗体。目前，越来越多的实验室开展了ANAs的检测，但受限于检测方法和检测试剂众多以及实验室仪器设备和操作人员等因素的影响，不同实验室间的结果存在一定差异。开展室间质评活动对不断推进各实验室检测水平具有重要意义［1］。此次室间质评开展的ANAs检测项目包括抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（dsDNA）抗体和抗可 本文由医药前沿杂志提供https://www.wendangku.net/doc/b616300853.html,
抗核抗体测定方法
抗核抗体测定方法 抗核抗体测定无疑是现在人们讨论的一大焦点，我们可能很多女性朋友都会或多或少的出现这种疾病，这种问题无疑是一个敏感的话题，成为很多女性朋友的难言之隐，这种疾病给我们的生活带来了巨大的苦痛和折磨，让很多的人饱受着苦难，为此很多人也四处求医问诊，但是都没有得到很好的治疗效果，但是我们不能放弃治疗，我们需要提前进行抗核抗体测定，下面就让我们一起来了解一下抗核抗体测定相关内容吧。 方法： 1．免疫荧光法检测血清总ANA最常用的方法是荧光免疫组化法。多用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，结果比较稳定可靠，在荧光显微镜下见到的细胞核有荧光着色为阳性反应。如将患者血清先进行不同比例的稀释，可以做大致的定量试验，在1:80稀释仍然虽阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。在油镜下观察结果，可以将ANA阳性的荧光现象分成4种主要的荧光核型，核型的确定对临床诊断有进一步的参考价值。①周边型表示抗DNA抗体存在；②均质型表示有抗DNP抗体；③斑点（颗粒）型多为抗ENA抗体；④核仁型多为抗核小体抗体。SLE患者
常出现周边型、匀质型或混合型，斑点型多见于混合结缔组织病，而硬皮病多为核仁型；周边型对SLE有较高的特异性。 有人用锥虫或血鞭毛虫（例如绿蝇短膜虫试验）作基质测定抗dsDNA抗体，因为这些血寄生虫的动基体内含大量的纯dsNDA，无其他抗原干扰；在阳性结果时，可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。因此该试验用于测定抗dsDNA抗体具有特异性强和敏感性高的优点。另外，短膜虫对人畜无害，可以人工养殖，来源方便，值得推广。 2．放射免疫法常用检测抗DNA抗体，有Farr法及过滤法。 ①Farr法的原理为用同位素标记DNA，被标记的DNA和被检血清的抗DNA抗体结合，经50%硫酸铵饱和液沉淀，然后比较沉淀物和上清液中的放射活性，从而得出DNA结合活性，一般结合率大于20%为阳性。②过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器（孔径为0.45μm）进行过滤，游离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。 3．ELISA临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体，其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。已有试剂盒供应。
第三章 病例分析——系统性红斑狼疮
第三章病例分析——系统性红斑狼疮 概述 系统性红斑狼疮（SLE）是自身免疫介导的，以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。血清中出现以抗核抗体为代表的多种自身抗体和多系统累及是SLE的两个主要临床特征。SLE好发于生育年龄女性，临床表现复杂多样。病因未明，可能与遗传、环境和性激素有关。 临床表现 多隐匿起病，缓慢进展，病情的加重与缓解交替。 1.全身表现如发热、乏力等。 2.皮肤与粘膜蝶形红斑、光敏感、脱发、盘状红斑、结节性红斑、网状青斑、雷诺现象等。
3.关节和肌肉常出现对称性多关节疼痛、肿胀，可出现肌痛和肌无力。 4.肾脏损害又称狼疮性肾炎（LN），表现为蛋白尿、血尿、管型尿甚至肾衰竭。免疫荧光检查表现为“满堂亮”。 5.神经系统损害轻者仅有偏头痛、记忆力减退；重者可表现为脑血管意外、昏迷、癫痫持续状态等。 6.血液系统表现常出现贫血和/或白细胞减少和/或血小板减少。 7.肺部表现常出现胸膜炎，亦可出现肺实质浸润，肺脏间质性病变，肺动脉高压，肺梗死，肺萎缩综合征等。 8.心脏表现常出现心包炎，表现为心包积液，还可有心肌炎，心律失常等。疣状心内膜炎为其特征性病理表现之一。 9.消化系统表现可出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻或便秘，其中以腹泻较常见。 10.其他 SLE可合并眼部受累，包括结膜炎、葡萄膜炎、眼底改变、视神经病变等。SLE 常伴有继发性干燥综合征。 实验室和辅助检查 1.常规检查 血常规：一系或多系减少。 尿常规：尿蛋白、尿红细胞、白细胞、管型（临床肾损害的指标） ESR：活动期增高。 补体C3、C4：活动期下降。 高γ球蛋白血症
2.抗核抗体谱（ANAs）和其他自身抗体 ANAs：ds-DNA，敏感性较高，特异性很高，与疾病活动性及预后有关；抗Sm抗体的特异性非常高，但敏感性低，与活动性无明显关系；抗单链DNA、抗组蛋白、抗RNP、抗SSA、抗SSB等抗体也可出现，但特异性低。 抗磷脂抗体：包括抗心磷脂抗体和狼疮抗凝物。 抗红细胞抗体 抗血小板抗体 抗神经元抗体 类风湿因子可阳性 诊断标准 有多系统受累表现和有自身免疫的证据，应警惕SLE。美国风湿病学会（ACR）1997年推荐的SLE分类标准（见下表）。11项中符合4项或4项以上者，在除外感染、肿瘤和其他结缔组织病后，可诊断SLE。