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叶绿素法生产力实验报告

叶绿素法生产力实验报告
叶绿素法生产力实验报告

华南师范大学实验报告学生姓名:谭晓东学号:20102501024

专业:生物科学年级、班级:10科四

课程名称:生态学实验实验项目:水生生态系统初级生产力的测定实验类型:验证实验时间:2013年5月20日

实验指导老师:周先叶实验评分:

一、实验目的

通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a(Chla)含量的测定,了解浮游植物数量和生物量的表示方法,并对不同粒径浮游植物加以比较。

学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法,掌握叶绿素a的测定方法。

二、实验原理

叶绿素a是植物光合作用的重要光和色素。在一定的光照强度下,叶绿素a的含量与光合作用强度之间存在密切关系,因此叶绿素a的含量是水生生态系统初级生产力的重要指标。同时叶绿素a的含量的测定,也可用于水体富营养化水平的评价,是水质检测的常规项目。浮游植物叶绿素的测定方法常用分光光度法。初级生产力Ps=Ca·Q(Q=3.7)。

三、仪器、工具

透明度盘、水样瓶

四、实验方法

1、水体透明度的观测:透明度盘

2、水样采集与保存:采集华南师范大学情人湖的表层水样(1m以内)注入水样瓶中。马上带回实验室进行抽滤。

3、抽滤:在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜,倒入定量体积(500mL)的水样进行抽滤。水样抽完后,继续抽1-2min,以减少滤膜上的水分。

4、提取:将载有浮游植物样品的滤膜放入研钵中,加入少量碳酸镁粉末及2-3mL90%丙酮,充分研磨,提取叶绿素a 。将研磨后的匀浆物移入离心管中,用离心机(3000r/min)离心10min。将上清液移入10mL的容量瓶中。再用2-3mL90%丙酮,继续研磨提取,离心10min,并将上清液转入容量瓶中。重复1-2次后,在用90%丙酮定容为10mL,摇匀。

5、光密度测定:将上清液在分光光度计上,用1cm光程的比色皿,分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度,并以90%丙酮作空白吸光度测定,对样品吸光度进行校正。其中,750nm的光密度用作校正样品的浑浊度,而663nm、645nm、630nm吸光度则用以测定叶绿素a

6、 计算

(1) 叶绿素a 含量的计算

D 为吸光度;V1为提取液定容后的体积(V1=10mL );V 为抽滤水样体积(V=0.5L );δ为比色皿光程(δ=10mm )

(2) 初级生产力的估算

根据表层水叶绿素a 的含量计算: Ps (mg/m ?h )= 1000Ca ·Q

式中,Ca 为表层叶绿素a 的含量(mg/m );Q 为同化系数(mgC/mgChla ·h ),表层水的同化系数为3.7。

五、实验结果

表1 湖水OD 值测定

湖水叶绿素a 的含量(V=1L):a=1.6549mg/m -3

情人湖水生生态系统的初级生产力大小:Ps = 6.1223 mgCm-3h-1

六、分析与讨论

生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。浮游植物是海洋生态系统的初级生产者,而初级生产水平与叶绿素a 含量存在密切关系,因而往往用叶绿素a 含量来表示浮游植物的生物量。水体中叶绿素a 的含量是水中浮游植物生物量的指标,直接反映水体富营养化的程度。湖泊的富营养化是由于氮、磷等营养物质过多的排入而导致藻类大量繁殖,从而减少到达其他植物的光,降低了溶氧水平,而且致使鱼类及其它生物大量死亡的现象。

通过与标准表的比较可知,华南师范大学情人湖湖水的叶绿素a 含量较低,初步断定情人湖营养度属于贫营养型,水中藻类较少,鱼类或其他水生动物可以存活。

从叶绿素a 浓度测定的计算公式以及实验操作两个方面上看,为保证测定结果的准确性,需要注意:1、分光光度计测定的准确性;2、离心水样体积要准确;3、玻璃仪器是否清洗干净,实验操作是否引入杂质或者其他物质与叶绿素发生反应等,如玻璃仪器没有清洗干净,最终可能造成叶绿素a 有所损失,使实验结果偏低;4、实验过程中多次移液,可能造成叶绿素a 的损失;4、实验仪器本身带来的误差

OD750

OD663 OD645 OD630 0.0035 0.0195

0.0134 0.0098

叶绿素的提取和分离实验报告

陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告 报告题目叶绿素的提取和分离 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心

叶绿素的提取和分离 一、实验目的 1. 学习叶绿体色素的提取、分离方法。 2. 通过叶绿体色素提取、分离方法的学习了解叶绿体色素的相关理化性质。 3. 为进一步研究各叶绿体色素性质、功能等奠定基础。 二、原理 叶绿体中含有绿色素(包括叶绿素a和叶绿素b)和黄色素(包括胡萝卜素和叶黄素)两大类。它们与类囊体膜蛋白相结合成为色素蛋白复合体。它们的化学结构不同,所以它们的物化性质(如极性、吸收光谱)和在光合作用中的地位和作用也不一样。这两类色素是酯类化合物,都不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇、丙醇等有机溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同,当用适当的溶剂推动时,混合物中各种成分在两相(固定相和流动相)间具有不同的分配系数,所以移动速度不同,经过一定时间后,可将各种色素分开。 三、材料、仪器设备和试剂 1. 绿色植物如菠菜等的叶片。 2. 研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康维皿、圆形滤纸(直径11cm)。 3. 试剂:95%乙醇,石英砂,碳酸钙粉,推动剂:按石油醚:丙酮:苯=10:2:1比例配制(v/v) 四、试验步骤 1. 叶绿体色素的提取 (1)取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片(4g左右),洗净,擦干,去掉中脉剪碎,放入研钵中。 (2)研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉,加2-3ml 95%乙醇,研磨至糊状,再加10ml 95%乙醇,然后以漏斗过滤之,残渣用10ml 95%乙醇冲洗,一同过滤于三角瓶中。 2. 叶绿体色素的分离 (1)将11cm的滤纸的一端剪去二侧,中间留一长约1.5cm、宽约0.5cm窄条。 (2)用毛细管取叶绿体色素浓溶液点于窄条上端,用电吹风吹干,如一次点样量不足可反复在色点处点样数次,使色点上有较多的叶绿体色素。 (3)在大试管中加入四氯化碳3-5ml及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上,插入试管内,使窄端浸入溶剂中,而色点略高于液面,滤纸条边缘不可碰到试管壁,软木塞盖紧,直立于阴暗处层析。 0.5-1小时后,观察色素带分布:最上端橙黄色(胡萝卜素),其次黄色(叶黄素),再崐次 蓝绿素(叶绿素a),最后是黄绿色(叶绿素b)。(4)当展层剂前沿接近滤纸边缘时便可结束实 验,此时可看到不同色素的同心圆环,各色素由内往外的顺序为:叶绿素b(黄绿色)、叶 绿素a(蓝绿色)、叶黄素(鲜黄色)、胡萝卜素(橙黄色),再用铅笔标出各种色素的位置 和名称。

MAAB计算方法迭代法牛顿法二分法实验报告

姓名 实验报告成绩 评语: 指导教师(签名) 年 月 日 说明:指导教师评分后,实验报告交院(系)办公室保存。 实验一 方程求根 一、 实验目的 用各种方法求任意实函数方程0)(=x f 在自变量区间[a ,b]上,或某一点附近的实根。并比较方法的优劣。 二、 实验原理 (1)、二分法 对方程0)(=x f 在[a ,b]内求根。将所给区间二分,在分点 2a b x -=判断是否0)(=x f ;若是,则有根2a b x -=。否则,继续判断是否0)()(

+)(0x f 0))(('0=-x x x f 设0)('0≠x f ,则=x -0x )(') (00x f x f 。取x 作为原方程新的近似根1x ,然后将1x 作为0x 代入上式。迭代公式为:=+1 k x -0x )(')(k k x f x f 。 三、 实验设备:MATLAB 软件 四、 结果预测 (1)11x = (2)5x = (3)2x =0,09052 五、 实验内容 (1)、在区间[0,1]上用二分法求方程0210=-+x e x 的近似根,要求误差不超 过3105.0-?。 (2)、取初值00=x ,用迭代公式=+1 k x -0x )(') (k k x f x f ,求方程0210=-+x e x 的近似根。要求误差不超过3105.0-?。 (3)、取初值00=x ,用牛顿迭代法求方程0210=-+x e x 的近似根。要求误差 不超过3105.0-?。 六、 实验步骤与实验程序 (1) 二分法 第一步:在MATLAB 软件,建立一个实现二分法的MATLAB 函数文件如下: function x=agui_bisect(fname,a,b,e) %fname 为函数名,a,b 为区间端点,e 为精度 fa=feval(fname,a); %把a 端点代入函数,求fa fb=feval(fname,b); %把b 端点代入函数,求fb if fa*fb>0 error('两端函数值为同号'); end

YSI(多参数水质检测仪)测定叶绿素a浓度的准确性及误差探讨解析

上肠ksd.(湖泊科学),2010,22(6):965-968 http:∥www.jlakes.org.E-mail:jhk∞@IligIas.ac.cn @20lOby如£册耐矿kksc泐鲫 YSI(多参数水质检测仪)测定叶绿素a浓度的准确性及误差探讨‘刘苑1”,陈宇炜H。,邓建明1’2 (1:中国科学院南京地理与湖泊研究所湖泊与环境国家重点实验室,南京210008) (2:中国科学院研究生院,北京lo0049) 摘要:Ysl(多参数水质检测仪)由于其快速、轻便的特点,已广泛应用于野外水体中时绿素a的测定.通过将Y跚溯得的叶绿素a值与分光光度法测定值进行比较,对Ysl6600水质测定的准确性和数据采集进行评估.结果显示,Ysl测定值多数偏低。且与分光光度法测定值之间存在显著性差异;时间上,冬季比夏季具有更大的线性相关性.分段同归结果显示,随着叶绿素a浓度不断增大.两组数据的差值也不断增大.YsI测定误差产生于3个方面:(1)测定前YsI校准方法的不同;(2)其它种类具有荧光特性色素的存在;(3)YsI自身结构. 关键词:叶绿素a浓度;YSI;分光光度法;误差 DisCussiOn0naccuracyanderrOrSforphytopIanI∞nchlorophy¨-aconcentra埘0nanaIySiSusingYSl(MuItI-parameterwateranalyzer) U[UYu觚1r,C胍NYhweil&DENGJi柚min91.2 巧scie,lces.Nn嘲i他2、000s.P.Rcht舱)(1:胁把研k幻加fo秽巧上4妇&妇懈4耐勖佃研珊跏f,觑l咖g肺咄姚可&珊,印砂研d肠彻咖,劭加甜PAc扭娜(2:G,眦妇纪&幻Dz盯cJ咖e卵A棚d唧矿&£伽,&驴f,增l(-D049,P.尼西f,埘) Abst陀ct:YsI(Mlllti?pa强ln曲盱waler锄aly蹭r)is诵delyusedto山把皿i肿phytlDm锄kton 6eIdschl啪phyll-aconcentr撕加inm蛐ybec舢卵0fitsrapidne睇锄dportablene鹄.Tbepu叩∞e0ftllis咖由i8t0evalu砒etIlee伍c卵y0ft王leYSIEn“姒蛐entalMo_Ili试ngsye锄hw栅qIlalityⅡ地a棚他眦“tsanddalacouectionbycompfariItgtw0group邑0fdala憾illg蚰啪ltory耐}

普通高中叶绿素提取和分离实验

植物叶绿体中色素的提取与分离实验报告 用具:剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml 量筒一只,天平一只,试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片 试剂:丙酮、无水乙醇、层吸液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成)、白沙(二氧化硅)、碳酸钙、碳酸钠 材料:新鲜的紫茎泽兰叶、其他野生植物叶片 背景资料: 1、叶绿素等是脂溶性的有机分子,根据相似相溶的原理,叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。 2、叶绿素分布于基粒的片层薄膜上,加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成,使色素溶解于丙酮中。 3、破碎的细胞中含有草酸等有机酸,叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合太,镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合,减少镁离子的转移,防止研磨时叶绿体色素的破坏。所以在研磨时加入适量的碳酸钙,同时加入碳酸钠的道理亦如此。 4、在过滤时选用脱脂棉或纱布,而不用滤纸。原因主要有下:(1)色素分子比较大,不容易透过滤纸;(2)滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上,从而降低色素浓度,影响实验效果;(3)叶绿素是脂溶性,根据相似相容的原理,脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失,增强实验效果。 5、根据物理学中的毛细现象,画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理,是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。但如果用火烤的话,会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管,而影响层析液的扩散。 6、由于液面的不同位置表面张力不同,纸条接近液面时,其边缘的表面的张力较大,层析液沿滤纸边缘扩散过快,而导致色素带分离不整齐的现象。故而,在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。 7、为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。同时,防止因液体表面张力引起层析液沿滤纸条向上的“壁流”而导致色素溶解。 8、色素分离的原理:纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法,其原理主要是利用混合物中各组分在;流动相和固定相的分配比(溶解度)的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相(滤纸纤维常能吸20%左右的水),有机溶剂如乙醇等为流动相,色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上,当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下,连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时,试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动,并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快,移动距离较远;分配比较小的物质移动较慢,移动距离较近,试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上,从而达到分离的目的。符合我国的资源友好型社会。 操作步骤 1.称取新鲜叶子2g,放入研钵中加丙酮5ml,少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏)和石英砂(帮助研磨),研磨成匀浆,再加丙酮5ml,然后以漏斗过滤之,即为色素提取液。

叶绿素a测定实验报告

叶绿素a测定实验报告 (一)实验目的及意义 水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现,其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的,因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。 (二)水样的采集与保存 1.确定具体采样点的位置 2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍 3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L 4.在采样瓶中加保存试剂,每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL 5.将采样瓶拧上并编号 6.用GPS同步定位采样点的位置 (三)仪器及试剂 仪器: 1.分光光度计 2.比色池:10mm 3.过滤装置:过滤器、微孔滤膜(孔径0.45μm,直径60mm) 4.研钵 5.常用实验设备 试剂: 1.碳酸镁悬浮液:1%。称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。每次使用时要充分摇匀 2.乙醇溶液 (四)实验原理 将一定量的试样用微孔滤膜过滤,叶绿素会留在滤膜上,可用乙醇溶液提取。 将提取液离心分离后,测定750、663、645、630mm的吸光度,计算叶绿素的浓度。 (五)实验步骤 1.浓缩:在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液,充分搅匀后,用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。 2. 提取:将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中,加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液,把滤膜完全研碎,然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中,使离心管内提取液的总体积不超过10mL,盖上管塞,置于的暗处浸泡24h。 3.离心:将离心管放入离心机中,以4000r/min速度离心分离20min。将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中,加少量乙醇于原提取液的离心管中,再次悬浮沉淀物并离心,合并上清液。此操作重复2-3次,直至沉淀不含色素为止,最后将上清液定容至10mL。 4.测定:取上清液于10mm的比色池中,以乙醇溶液为对照溶液,读取波长750,663,645和630mm的吸光度。

叶绿素a的测定(B)

叶绿素a的测定(B) 叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。通过测定浮游植物叶绿素,可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中,可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。 1.水样的采集与保存 可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。湖泊,水库采样500ml,池塘300ml,采样量视浮游植物的分布量而定,若浮游植物数量较少,也可采样1000ml。采样点及采样时间同“浮游植物”。 水样采集后应放置在阴凉处,避免日光直射。最好立即进行测定的预处理,如需经过一段时间(4~48h)方可进行预处理,则应将水样保存在低温(0~4℃)避光处。在每升水样中加入1%碳酸镁悬浊液1ml,以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻情况下(-20℃)最长可保存30d。 2.仪器设备 (1)分光光度计 (2)真空泵 (3)离心机 (4)乙酸纤维滤膜(孔径0.45um) (5)抽滤器 (6)组织研磨器或其他细胞破碎器 (7)碳酸镁粉末 (8)90%丙酮

3.试验程序 (1)以离心或过滤浓缩水样,在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤,抽滤时负压不能过大(约为50kpa)。水样抽完后,继续抽1~2min,以减少滤膜上的水分。如需短时期保存1~2d时,可放入普通冰箱冷冻,如需长期保存(30d),则应放入低温冰箱(-20℃)保存。 (2)取出带有浮游植物的滤膜,在冰箱内低温干燥6~8h后放入组织研磨器中,加入少量碳酸镁粉末及2~3ml90%的丙酮,充分研磨,提取液绿色a。用离心机(3000~4000r/min)离心10min。将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。 (3)再用2~3ml的90%的丙酮,继续研磨提取,离心10min,并将上清液再转入容量瓶中。重复1~2次,用90%的丙酮定容为5ml或10ml,摇匀。 (4)将上清液在分光光度计上,用1cm光程的比色皿,分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度,并以90%的丙酮做空白吸光度测定,对样品吸光度进行校正。 4.计算方法 叶绿素a的含量按如下公式计算 [11.64×(D663-D750)—2.16×(D645-D750)+0.10×(D630-D750)].V1叶绿素a(mg/m3)= ----------——-—————————————-----------------------———V.δ 式中:V——水样体积(L) D——吸光度 V1——提取液定容后的体积(ml) δ——比色皿光程(cm)

2-4叶绿素a测定

实验题目: 湖塘水体叶绿素a测定 姓名:学号: 班级:组别:第一组 指导教师: 1.实验概述 1.1实验目的及要求 (1)初步了解叶绿素a测定的原理和常规测定方法; (2)通过实验,掌握叶绿素。的测定方法及富营养化水样的前处理方法; (3)熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用。 1.2实验原理 浮游植物的主要光合色素是叶绿素((Chlorophyll),常见的有叶绿素a、b和c。叶绿素a (chl-a >存在于所有的浮游植物中,大约占有机物干重的1-2%,是估算浮游植物生物量的重要指标,因此浮游植物叶绿素a含量的测定成为浮游植物生物量的重要指标而被广泛应用。 浮游植物叶绿素a的测定方法有许多种,根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法

萃取效率比较低,使得甲醇和乙醇成为替代丙酮的色素萃取剂。不过,甲醇对人体毒害性大,且在酸化过程中容易产生误差,于是,乙醇成为现在广泛应用的叶绿素a的萃取剂。超声破碎法因快速、提取效率高等特点也被研究者所青睐。 本实验介绍一种以热乙醇为萃取溶剂,结合超声细胞破碎法为基础的叶绿素a含量侧定方法。 2.实验内容 2.1实验方案设计 每组选择一个池塘,实地取水样,测定水样的叶绿素a含量。 2.2实验条件 2.2.1实验仪器: 1) 幼分光光度计1台; 2)抽滤装置(砂芯过滤器、负压表、真空泵等)1台; 3)4000r/min离心机1台; 4) 15mL带刻度及螺旋盖的离心分离试管6个; 5)恒温水浴锅1台; 6)直径47 mm的醋酸纤维滤膜; 8)超声细胞破碎仪 9 ) icm玻璃比色皿2个 10)表面皿若干 11)10mL比色管7个; 2.2.2实验材料 1)90%乙醇 2)1mol/L盐酸 2.3实验过程(实验步骤、记录、数据、分析) 2.3.1实验步骤

叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定

实验报告 植物生理学及实验(甲)实验类型:课程 名称:实验名称:叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶 绿素含量的测定姓名:专业:学 号:指导老师:同组学生姓名: 实验日期:实验地点: 二、实验内容和原理一、实验目的和要求装 四、操作方法与实验步骤三、主要仪器设备订 六、实验结果与分析五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得一、实验目的和要求、掌握植物中叶绿体色素的分离和 性质鉴定、定量分析的原理和方法。1 和b的方法及其计算。a2、熟悉在 未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素二、实验内容和原理以青菜为 材料,提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。 原理如下:80%的乙醇或95%叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂,1、常用的丙酮提取。、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯,与强碱反应, 形成绿色的可溶性叶绿素2. 盐,就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。- COOCHCOO3 Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH

HONC43230+C20H39OH 、3H+可依次被在酸性或加温条件下,叶-COOCOOCH39 20 绿素卟啉环中的Mg++取代反应。Mg2+, Cu2+ 取代Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。(H+和H+ ) 取代(Zn2+) 绿色褐色 、叶绿素受光激发,可发出红色荧光,反射光下可见红色荧光。4645其中叶绿素吸收红光和兰紫光,红光区可用于定量分析,5、定量分析。 652可直接用于总量分析。663用于定量叶绿素a,b及总量,而和C最大吸收光谱不同的两个组分的混合液,它们的浓度根据朗伯-比尔定律, *k+C*kOD=Ca*k与吸光值之间有如下的关系: OD=Ca*k+C b2 1g/L和b的80查阅文献得,2b1 b1a1a2b时,比吸收系%丙酮溶液,当浓度为 叶绿素a 值如下。数k k 比吸收系数波长/nm b 叶绿素a 叶绿素 9.27 82.04 663 45.60 645 16.75

迭代法实验报告

迭代法实验报告 一. 实验目的:掌握迭代方法的用处 二. 实验环境:Cfree5.0 三. 实验时间:2013年6月20日 四. 实验地点:电子信息楼1201教室 五. 实验内容:运用编程实现迭代方法可以更好的解线性方程组,得到线性方程的解。 六. 实验理论依据: 高斯-赛德尔(Gauss-Seidel )迭代公式 我们注意到在雅可比迭代法中并没有对新算出的分量11k x +,12k x +, , 11k i x +-进行充分利用.不妨设想,在迭代收敛的条件下,我们把 (1)()()()11211331111(1)()()()22112332222(1)()()()1122,111()1(1(k k k k n n k k k k n n k k k k n n n n n n nn x a x a x a x b a x a x a x a x b a x a x a x a x b a +++--?=---+???=---+?????=---+?? 式中第一个方程算出的11k x +立即投入到第二个方程中,代替()1k x 进行计算,当12 k x +算出后代替()2k x 马上投入到第三个方程中计算,依次进行下去,这样也许会得到 更好的收敛效果.根据这种思路建立的一种新的迭代格式,我们称为高斯-赛德尔(Gauss-Seidel )迭代公式, 高斯=赛德尔迭代法的分量形式:

(1)()()()11211331111(1)(1)()()22112332222(1)(1)(1)(1)1122,111()1(1(k k k k n n k k k k n n k k k k n n n n n n nn x a x a x a x b a x a x a x a x b a x a x a x a x b a +++++++--?=---+???=---+?????=---+?? 高斯-赛德尔迭代法的矩阵形式: (1)(),(0,1,2,)k k x Bx f k +=+= 其中 1()B D L U -=- ,1()f D L b -=- B 称为高斯-赛德尔迭代矩阵,f 称为高斯-赛德尔迭代常量.. 七. 运行代码如下: #include"stdio.h" #include"math.h" int main() { bool pan1=true; int n,n1,n2=0,k=0; double num[100][100],L[100][100],U[100][100],x[100],y[100],num1=0,b[100],D[100][100],x1[200][200],x2[200][200]; printf("\n"); printf("*******************************高斯迭代法解如下********************************"); printf("输入要输入矩阵的阶数为(按Enter 输入矩阵数字):");//

叶绿体色素实验报告

叶绿体色素实验报告 ●实验名称 叶绿体色素的提取分离和理化性质测定 ●实验原理 叶绿体是光合作用的细胞器。叶绿体中叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。这些色素可以溶解于乙醇等有机溶剂提取。 薄纸层析色谱法是将吸附剂均匀涂在玻璃板上成一薄层,将此吸附剂薄层作为固定相,把带分离的样品溶液点在薄层板下端,然后用一定量溶剂作流动相,将薄层板下端浸入展开剂中。由于吸附剂对不同物质的吸附能力不同,吸附力强的物质相对移得慢些,吸附力弱的物质相对移得快些,从而使各组分有不同的移动速度而分开。 叶绿素是一种由叶绿酸和叶绿酯形成的复杂酯,故可以与碱起皂化反应而生成甲醇和叶绿酯及叶绿酸盐,盐可溶于水,继而可以分离叶绿素和类胡萝卜素。叶绿素吸收光子转变为激发态,激发态的叶绿素分子很不稳定,当变回基态时可发出红光量子,产生荧光。叶绿体不稳定,容易受强光破坏,特别是当叶绿体与蛋白质分离后,破坏更快,而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中Mg2+可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素,之后遇铜生成铜代叶绿素。 ●实验材料和工具 1.新鲜的菠菜叶 2.体积分数为95%的乙醇,碳酸钙粉末,展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1,体积比) 3.天平,研钵,漏斗,三角瓶,剪刀,点样毛细管,层析缸,硅胶预制板,滤纸 4.刻度试管,小试管,试管架,水浴锅,10ml移液管 5.苯,醋酸铜粉末,质量分数为5%的稀盐酸,醋酸—醋酸铜溶液,氢氧化钾—甲醇溶液 ●实验步骤

(一)色素提取液的制备 1.取新鲜叶片4~5片(2g左右),洗净,擦干叶表面,去中脉剪碎,放入研钵中 2.研钵中加入少量CaCO3,加2~3ml体积分数为95%的乙醇,研磨至糊状,再加10~15ml体积分数为95%的乙醇,上清液用漏斗过滤,残渣再用10ml 体积分数为95%的乙醇冲洗一次,一同过滤于三角瓶中,即制成叶绿体色素提取液,避免阳光直射 (二)叶绿色素的分离 1.取硅胶板一个,用点样毛细管吸取上述提取液,平行与硅胶板短边,据下边缘1cm处划线,风干后再划3~4次 2.干净的层析缸中加适量展开剂,高度约0.5cm,将硅胶板有色素一端放入,使其下端浸入展开剂。迅速盖好 当各种色素得到较好分离时,展开剂前沿接近硅胶板上边缘时,取出并迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带位置 (三)理化性质的测定 ①光对叶绿色素的破坏 取2支小试管,各加入2.5ml叶绿体色素乙醇提取液,并用体积分数95%的乙醇稀释1倍。其中1支放在直射阳光下,另外1支放到暗处或用锡箔纸包严,40分钟后对比观察颜色变化 ②皂化作用 1.取1支10ml刻度试管加入3ml浓的叶绿素乙醇提取液,加入1ml氢氧化钾—甲醇溶液,充分摇匀 2.片刻后,加入3ml苯,摇匀,再沿管壁慢慢加入1ml左右蒸馏水,轻轻混匀,然后置于试管架上静置分层。 ③H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg+的取代作用 1.取两支试管,第一支加叶绿色素提取液5ml作为对照。第二支试管加叶绿体色素提取液5ml后,再加质量分数为5%的HCl数滴,摇匀,观察溶液颜色变化。当溶液变褐后,再加入少量醋酸铜粉末,60℃水浴加热。 2.取新鲜植物叶两片,放入试管中,加醋酸—醋酸铜溶液,使之没过叶片,60℃水浴,观察颜色 ④荧光现象的观察 取一支小试管加入3ml浓的叶绿体色素乙醇提取液,在直射光照射下,比较溶液透射光和反射光颜色有何不同 实验结果 提取与分离 计算方法Rf=斑点中心到原点的距离 溶液前沿至原点的距离R f(叶绿素a)=60.5/84.5=0.716 R f(叶绿素b)=56.0/84.5=0.663 R f(叶黄素)=53.5/84.5=0.633

叶绿素a测定

实验三 富营养化湖中藻量的测定(叶绿素 a 法) 、实验目的 富营养化湖由于水体受到污染,尤以氮磷为甚,致使其中 10微克 /升。 本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素 a 浓度,以考查其富营 养化情况。 二、器材与用品 分光光度计(波长选择大于 750nm ,精度为0.5— 2nm )。 蔡氏滤器;滤膜( 0.45 微克,直径 47mm )。 的藻类旺盛生长。此类水体中代表藻类的叶绿素 a 浓度常大于 1、 2、 比色杯( 1cm ; 4cm )。 3、 台式离心机( 3500r/min ) 4、 离心管( 15ml 具刻度和塞子) ;冰箱 5、 匀浆器或小研钵。 6、 7、 真空泵(最大压力不超过 300kpa )。

MgC03悬液:Ig MgC03细粉悬于100ml 蒸馏水中。 90%的丙酮溶液: 90 份丙酮+ 10 份蒸馏水。 10、水样:两种不同污染程度的湖水水样各 2L. 三、方法和步骤 8、 9、

1、按浮游植物采样方法,湖泊、水库采样500ml ,池塘 300ml 。采样点及采水时间同“浮游植物” 2、清洗玻璃仪器:整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤 剂清洗干净,尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素 a 分解。 3、过滤水样;在蔡氏滤器上装好滤膜,每种测定水样取 500ml 减压过滤。待水样剩余若干毫升之前加入 0.2ml MgCO 3 悬液、摇匀直至抽干水样。加入 MgCO 3 可增进藻细胞滞留在滤 膜上,同时还可防止提取过程中叶绿素 a 被分解。如过滤后的 载藻滤膜不能马上进行提取处理,应将其置于干燥器内,放冷 (4C )暗处保存,放置时间最多不能超过 48小时。 4、提取;将滤膜放于匀浆器或小研钵内,加 2 - 3ml90 %的丙 酮溶液,匀浆,以破碎藻细胞。然后用移液管将匀浆液移入刻 度离心管中,用 5ml90%丙酮冲洗2次,最后向离心管中补加 90%丙酮,使管内总体积为 10ml 。塞紧塞子并在管子外部罩上 遮光物,充分振荡,放冰箱避光提取 18-24小时。 离心10min ,取出离心管,用移液管将上清液移入刻度离心管 中,塞上塞子,3500r/min 在离心10min 。正确记录提取液的体 积。 6、测定光 密度:藻 类叶绿素 a 具有其 独特的吸 收光谱 (663nm ),因此可以用分光光度法测其含量。用移液管将提取 液移入 1cm 比色杯中,以 90%的丙酮溶液作为空白,分别在 750、663、645、630nm 波长下测提取液的光密度值( OD )。注 意:样品提取的 O D 663值要求在 0.2与 1.0 之间,如不在此范围 50- 5、离心:提取完毕后,置离心管于台式离心机上 3500r/min ,

叶绿素实验报告

一、实验目的: 1、了解植物组织中叶绿素分布及性质。 2、掌握测定叶绿素含量的原理和方法。 3、了解紫外分光光度计的用法。 4、了解一阶导数的含义。 5、了解如何如何排除互相干扰。 二、实验原理: 叶绿体中的色素都能够溶解于有机溶剂丙酮中,所以,可以用丙酮提取叶绿体中的色素。 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。根据叶绿体中的四种色素在层析液中的溶解度不同来进行分离,溶解度高的在滤纸上扩散的快,溶解度低的扩散地慢。溶解度最高的是胡萝卜素,它随层析液在滤纸上扩散得最快,叶黄素和叶绿素a的溶解度次之;叶绿素b的溶解度最低,扩散速度最慢。这样,四种色素就在扩散过程中分离开来。 叶绿素a和叶绿素b的分子结构相似,它们的吸收光谱、荧光激发光谱和发射光谱重叠,用常规分光光度法和荧光方法难以实现其同时测定。但利用一阶导数光谱技术和同步荧光技术,消除了叶绿素a和叶绿素b的光谱干扰,可以同时测定它们的含量。 在600~700之间胡萝卜素一阶导数为零,没有吸收,在某个特定波长下,叶绿素a有一定的导数值,而叶绿素b的导数为零;同理,在另一个特定波长下,叶绿素b有一定的导数值,而叶绿素a的导数值为零。这样可以实现叶绿素b和叶绿素b的同时测定,又不受胡萝卜素的干扰。 三、实验材料: 1、仪器 干燥的定性滤纸、烧杯(100ml)、研钵、玻璃漏斗、分液漏斗、剪刀、小试管、试剂瓶、药勺、量筒(10ml)、天平、试管架、载玻片、铅笔、 直尺、棉花、移液管、洗耳球、毛细吸管、铁架台、胶头滴管、紫外分光 光度计。 2、药品 新鲜的菠菜叶、石英砂、碱式碳酸镁、90%丙酮、层析液(石油醚:丙酮:苯=20:2:1) 四、实验方法与步骤: 1.提取叶绿素中的色素 (1)取几片绿叶,去掉主脉,用天平称取20g叶片,剪碎,放入研钵。 (2)向研钵中加入少许二氧化硅和碳酸钙,进行充分的研磨。用量筒量取15ml丙酮。倒入研钵中,迅速充分研磨。 (3)将研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中进行过滤。将滤液收集到一个小试管中,及时用棉塞将试管塞紧。 2.制备过滤纸 取一块预先干燥处理过的定性滤纸,将滤纸剪成长6cm,宽1cm的滤纸条,

牛顿迭代法实验报告

用牛顿迭代法求非线性方程的根 一、 实验题目 求方程()013=--=x x x f 在5.1附近的根。 二、 实验引言 (1)实验目的 1. 用牛顿迭代法求解方程的根 2. 了解迭代法的原理 3. 改进和修缮迭代法 (2)实验意义 牛顿迭代法就是众多解非线性方程迭代法中比较普遍的一种,求解方便实用。 三、 算法设计 (1)基本原理 给定初始值0x ,ε为根的容许误差,η为()x f 的容许误差,N 为迭代次数的容许值。 1.如果()0='x f 或迭带次数大于N ,则算法失败,结束;否则执行2. 2.计算()() 0001x f x f x x '-=. 3.若ε<-21x x 或()η<1x f ,则输出1x ,程序结束;否则执行4. 4.令10x x =,转向1. (2)流程图

四、程序设计program nndd01 implicit none real,parameter::e=0.005 real,parameter::n=9 real::x1 real::x0=1.5 integer::k real,external::f,y do k=1,9 if (y(x0)==0) then write(*,*)"失败" else x1=x0-f(x0)/y(x0) if (abs(x1-x0)

else x0=x1 end if end if end do end function f(x) implicit none real::f real::x f=x*x*x-x-1 return end function function y(x) implicit none real::y real::x y=3*x*x-1 return end function 五、求解结果 3 1.324718 4 1.324718 5 1.324718 6 1.324718 7 1.324718 8 1.324718 9 1.324718 六、算法评价及讨论 1.在求解在1.5处附近的根,不难发现在输入区间左端值为1时 需要迭代6次,而输入区间左端值为1.5时,却只要4次。初

叶绿素的提取实验报告

叶绿素的提取及叶绿素铜钠的合成及测定生物资源系食卫101 韦琪(20102023) 指导老师:张倩、刘新梅 一、实验目的 1.从蚕沙中提取叶绿素并计算提取率; 2.研究用叶绿素合成叶绿素铜钠的工艺条件; 3.分析叶绿素铜钠产品的纯度,计算产率; 4.通过试验提高综合能力及练习巩固各种相关操作。 二、实验原理 蚕沙是桑蚕的排泄物,由蚕沙制取天然色素——叶绿素酮钠盐,是国外普遍采用的最佳途径。叶绿素是一种酯,因此不溶于水,而溶于乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂。 叶绿素是植物吸收太阳能进行光合作用的主要色素,叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素,在叶绿素的结构中,含有一个由四个吡咯环和四个次甲基交替相联形成的卟吩环.卟吩环闭合的共轭体系提供了包围镁离子(或其它相似离子)的刚性平面.高等植物中含有叶绿素a和叶绿素b分子式如下: 蚕沙中含有丰富的叶绿素,其纯含量达0.8—1.0%,居所有天然色素之首,故可用蚕沙来提取叶绿素,由于叶绿素易溶于乙醚、苯、丙酮、乙醇的脂性溶剂,故可用乙醇、丙酮混合液来提取。所得的叶绿素由于遇热、光、酸、碱等易分解,且又不溶于水。110度左右会分解,故把叶绿素制备成叶绿素铜钠,其性质更稳定溶解性也会有所提高。 叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合,环上是双羧酸的酯,一个被四所酯化,另一个被叶醇基所酯化,故可以发生皂化反应生成钠盐:

C55H72MgN4O5 + 2 NaOH →C34H30O5N4MgNa2 + CH3OH + C20H39OH 在酸性介质中,叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿素酸: C34H30O5N4MgNa2+ 4 H+→C34H34O5N4 + Mg2+ + 2 Na+ 叶绿素酸可与铜盐加热条件下生成叶绿素铜酸析出,将叶绿素铜酸溶于丙酮,再与碱反应就生成叶绿素铜钠盐: C34H34O5N4 + Cu2+→C34H34O5N4Cu + 2 H+ C34H34O5N4Cu + 2 NaOH →C34H34O5N4CuNa2 + 2 H2O 由叶绿素转化成叶绿素铜钠的过程也可用化学反应方程表示: (1)皂化: COOCH3COONa C32H30ON4Mg + 2NaOH → C32H30ON4Mg + CH3OH + C20H39OH COOC20H39 COONa (2)酸化: COONa COOH C32H30ON4Mg + 2H2SO4 → C32H30ON4H2 + MgSO4 + NaSO4 COONa COOH (3)铜代: COOH COOH C32H30ON4H2 + CuSO4 → C32H30ON4Cu + H2SO4 COOH COOH (4)成盐: COOH COONa C32H30ON4Cu + 2NaO H → C32H30ON4Cu + 2H2O COOH COONa 三、实验仪器和试剂 1.仪器:(一个),分液漏斗(2个),250mL锥形瓶(1个),烧杯(100ml、250 mL、 500mL )各1个,容量瓶(100mL、250mL)各1个,蒸馏装置,减 压过滤装置,玻璃棒,电子天平,圆底烧瓶(250mL)2个,酸度计, 分光光度仪(一台)。 2.试剂:(50g)、95%乙醇,丙酮,石油醚,2%~5%NaOH乙醇溶液,硫酸铜溶

水体叶绿素a测定方法

叶绿素a的测定方法一一乙醇+分光光度法 1、水样的保存 水样注入水样瓶后,应放置在阴凉处,并避免阳光直射。若水样的进一步处理需要较长时间(大于12h),则应置于0°C?4 °C低温下保存。水样量视水体中浮游植物多少而定,一般应采0.5~2L 。 2、抽滤 在抽滤装置的滤器中放入GF/C滤膜。抽滤时负压应不大于50kPa。抽滤完毕后,用镊子小心地取下滤膜,将其对折(有藻类样品的一面向里),再用普通滤纸吸压,尽量去除滤纸上的水分。如不立即提取,应将滤膜放在黑暗低温条件下保存。在普通冰箱冷冻室中可存放几天,在-20C低温冰箱中可保存30天。 3、提取 研磨可用玻璃研钵。将滤膜剪碎放入研钵,加入90%乙醇溶液7?8ml,研磨3~5分钟直至变为匀浆。将研磨后的匀浆移入具塞带刻度的离心管中。用少量提取液冲洗研钵或匀浆器,冲洗液并入离心管中,使终容积略小于10ml o盖上关塞,摇动后置于黑暗低温处进行提取至少6-24h 。 4、离心 将装有提取液的离心管放入离心机中,转速3500?4000rpm,离心10?15min。将上层叶绿素提取液移入定量试管中,再用少量提取液清洗、离心二次取得提取液。最后将提取液定容到10ml。如果大批样品需同步操作时,可减少离心步骤,直接在提取液中浸泡滤膜6-24h ,取其清液即可。 5、测定 用90%乙醇溶液作为参照液(参照比色皿中盛放90%乙醇溶液,并用90%乙醇调分光光度

计零点)。测定定容后的提取液在665nm和750nm处的吸光度,并计算两个吸光度的差记为A; 然后向比色皿中加入1滴1mol/L的盐酸酸化,酸化5—10min(可以用不同时间实验再进行调整)后再次测定酸化后的提取液在665和750nn处的吸光度,并且把酸化后的两个吸光度的差记为A 则提取液中叶绿素a的浓度为: Chla=27.9 x( A- A) x V是取液/V 脱镁叶绿素浓度为: Chla=27.9 x( 1.7 A 2-A) x V是取液/V 其中Chla为水样中的叶绿素a含量,单位为ug/L ; V提取液为提取液的最终定容体积,单位为 mL; V为抽滤水样的体积,单位为L。

叶绿素的提取和分离实验报告

叶绿素的提取和分离实 验报告 Company number:【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】

陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目叶绿素的提取和分离 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心 叶绿素的提取和分离 一、实验目的 1. 学习叶绿体色素的提取、分离方法。 2. 通过叶绿体色素提取、分离方法的学习了解叶绿体色素的相关理化性质。 3. 为进一步研究各叶绿体色素性质、功能等奠定基础。 二、原理 叶绿体中含有绿色素(包括叶绿素a和叶绿素b)和黄色素(包括胡萝卜素和叶黄素)两大类。它们与类囊体膜蛋白相结合成为色素蛋白复合体。它们的化学结构不同,所以它们的物化性质(如极性、吸收光谱)和在光合作用中的地位和作用也不一样。这两类色素是酯类化合物,都不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇、丙醇等有机溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同,当用适当的溶剂推动时,混合物中各种成分在两相(固定相和流动相)间具有不同的分配系数,所以移动速度不同,经过一定时间后,可将各种色素分开。 三、材料、仪器设备和试剂 1. 绿色植物如菠菜等的叶片。 2. 研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康维皿、圆形滤纸(直径11cm)。 3. 试剂:95%乙醇,石英砂,碳酸钙粉,推动剂:按石油醚:丙酮:苯=10:2:1比例配制(v/v) 四、试验步骤 1. 叶绿体色素的提取 (1)取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片(4g左右),洗净,擦干,去掉中脉剪碎,放入研钵中。 (2)研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉,加2-3ml 95%乙醇,研磨至糊状,再加10ml 95%乙醇,然后以漏斗过滤之,残渣用10ml 95%乙醇冲洗,一同过滤于三角瓶中。

牛顿迭代法的实验报告

牛顿迭代法实验报告 1.功能 本程序采用牛顿法,求实系数高次代数方程 f(x)=a0x n+a1x n-1+…+a n-1x+a n=0(a n≠0)(1) 的在初始值x0附近的一个根。 2.使用说明 (1)函数语句 Y=NEWTON_1(A,N,X0,NN,EPS1) 调用M文件newton_1.m。 (2)参数说明 A n+1元素的一维实数组,输入参数,按升幂存放方程系数。 N整变量,输入参数,方程阶数。 X0 实变量,输入参数,初始迭代值。 NN整变量,输入参数,允许的最大迭代次数。 EPS1实变量,输入参数,控制根的精度。 3.方法简介 解非线性议程f(x)=0的牛顿法是把非线性方程线性化的一种近似方法。把f(x)在x0点附近展开成泰勒级数 f(x)=f(x0)+(x-x0)fˊ(x0)+(x-x0)2 !2) (0x f'' +… 取其线性部分,作为非线性方程f(x)=0的近似方程,则有 f(x0)+fˊ(x0)(x-x0)=0 设fˊ(x0)≠0则其解为 x1=x0-f(x0)/fˊ(x0) 再把f(x)在x1附近展开成泰勒级数,也取其线性部分作f(x)=0的近似方程。若f(x1)≠0,则得 x2=x1-f(x1)/fˊ(x1) 这样,得到牛顿法的一个迭代序列 x n+1=x n-f(x n)/fˊ(x n) 4.newton_1.m程序

function y=newton_1(a,n,x0,nn,eps1) x(1)=x0; b=1; i=1; while(abs(b)>eps1*x(i)) i=i+1; x(i)=x(i-1)-n_f(a,n,x(i-1))/n_df(a,n,x(i-1)); b=x(i)-x(i-1); if(i>nn)error(ˊnn is fullˊ); return; end end y=x(i); i 5.程序附注 (1)程序中调用n_f.m和n_df.m文件。n_f.m是待求根的实数代数方程的函数,n_df.m 是方程一阶导数的函数。由使用者自己编写。 (2)牛顿迭代法的收敛速度:如果f(x)在零点附近存在连续的二阶微商,ξ是f(x)的一个重零点,且初始值x0充分接近于ξ,那么牛顿迭代是收敛的,其收敛速度是二阶的,即平方收敛速度。 6.例题 用牛顿法求下面方程的根 f(x)=x3+2x2+10x-20 7.运行结果 >>a=[1,2,10,-20] ; >>n=3; >>x0=1; >>nn=1000; >>eps1=1e-8; >>y=newton_1(a,n,x0,nn,eps1)

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