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膜片钳简介

膜片钳记录和分析技术

介绍

细胞是动物和人体的基本组成单元,细胞与细胞内的通信,是依靠其膜上的离子通道进行的,离子和离子通道是细胞兴奋的基础,亦即产生生物电信号的基础,生物电信号通常用电学或电子学方法进行测量,形成了一门细胞电生理学(electrophysiology)学科。用电生理方法记录电活动,早期的研究多使用双电极电压钳技术作细胞内电活动的记录。

膜片钳技术是在电压钳技术的基础上发展起来的。

1976年德国马普生物物理化学研究所Neher和Sakmann首次在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时,记录到乙酰胆碱(Acetylcholine, ACh)激活的单通道离子电流,从而产生了膜片钳技术。1980年Sigworth等在记录电极内施加5-50cm H2O的负压吸引,得到10-100G?的高阻封接(Giga-seal),大大降低了记录时的噪声水平,实现了单根电极既钳制膜片电位又记录单通道电流的突破。1981年Hamill和Neher等对该技术进行了改进,引进了膜片游离技术和全细胞记录技术,从而使该技术更趋完善,具有1pA的电流灵敏度、1μm的空间分辨率和10μs的时间分辨率。1983年10月,《Single-Channel Recording》一书的问世,奠定了膜片钳技术的里程碑。为细胞生理的研究带来了一场革命性的变化,膜片钳技术象基因克隆技术一样,给生命科学研究带来了巨大的动力。Sakmann 和Neher也因其杰出的工作和突出贡献,荣获1991年诺贝尔医学和生理学奖。

膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来,由于电极尖端与细胞膜的高阻封接,在电极尖端笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离,因此,此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管,用一个极为敏感的电流监视器(膜片钳放大器)测量此电流强度,就代表单一离子通道电流。

从所使用的标本来看,已从肌细胞(心肌、平滑肌、骨骼肌)、神经元发展到内分泌细胞、血细胞、肝细胞等其它多种细胞;从急性分散细胞和培养细胞(包括细胞株)发展到脑片乃至整体动物。从蜗牛、青蛙、蝾螈、爪蟾卵母细胞发展到大鼠、人等等。另外也有在植物细胞(如蚕豆保卫细胞)上进行膜片钳研究的报道。

膜片钳技术发展至今,已经成为现代细胞电生理的常规方法,它不仅可以作为基础生物医学研究的工具,而且直接或间接为临床医学研究服务,目前膜片钳技术广泛的应用于神经科学,脑科学,心肌细胞,心血管,药物学,药理学,生理学,细胞生物学,生殖生理,病理生理,中药学,植物细胞生理学等领域的研究,并可作为细胞生物学与分子生物学研究的桥梁。

随着全自动膜片钳技术(Automatic patch clamp technology)的出现,膜片钳技术因其具有的自动化、高通量特性,在药物研发、药物筛选中显示了强劲的生命力。

膜片钳技术的核心部分是膜片钳放大器系统,包括:膜片钳放大器(Amplifier)、数模/模数转换器(Digitizer)和数据采样和分析软件(Software)三个部分,共同完成离子通道电流的采集、处理和分析。由于离子通道电流的大小通常是在pA到nA范围内,要记录如此微弱的通道电流信号,就需要特殊电路设计的膜片钳放大器和高精度、低噪声的数模/模数转换器。

在膜片放大器系统领域,美国MDC公司生产的AXON系列膜片钳放大器系统占有主导地位,无论从产品的技术含量还是从产品的应用领域上来看,在膜片钳技术中始终处于领先的地位,代表着膜片钳技术发展的方向,是国内外膜片钳实验室首选实验仪器,这可以从下面几个方面得到体现:

1.专业的生产厂家。AXON是最早生产膜片钳放大器的厂家,从早期的1D到200A,200B,

700A,700B等传统膜片钳放大器,到今天的全自动膜片钳系统的开发和应用,始终引领着膜片钳技术的发展方向。其pClamp10记录分析软件是一款功能全面强大的软件,可以满足膜片钳和电生理所有的需要。系列的膜片钳放大器系统被认为是膜片钳技术应用的标准系统。

2.产品种类齐全。AXON系列放大器(传统的的膜片钳放大器,全自动膜片钳系统)覆盖

了膜片钳技术上所需的所有放大器种类,产品丰富。

3.应用广泛。AXON既有应用于传统的膜片钳技术的放大器系统外,也有应用于高通量药

物筛选的全自动膜片钳系统,应用面广。

4.客户最多。无论是在国内还是在国外,超过80%的用户使用AXON系列产品,被很多

实验室选用。

5.完善的售后服务体系。AXON在上海设有办事处,提供强大的技术支持和售后服务。

马普科学仪器有限公司

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