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苯酚的基本资料

苯酚的基本资料
苯酚的基本资料

苯酚基本资料

本文由南通润丰石油化工提供别名:石碳酸、羟基苯

外观:常温下是一种无色或白色针状晶体

化学式:C6H5OH

分子量:94.11

物理性质:熔点:40.5℃

密度:1.07g/cm2,有特殊气味

溶解度:微溶于冷水,试问下溶解度为8.28g/100ML。可在水中形成白色浑浊;但其易溶于65℃以上的热水,页易溶于醇、米等有机溶剂

苯酚的稳定性

苯酚分子是由一个羟基直接连在苯环上构成,为烯醇式结构(如下图左)。但由于苯环的稳定性,这样的结构几乎不会经由电子或化学键的转化为酮式结构(如下图右)。

苯酚的制备

1.熔融苯磺酸法(最早用于制取苯酚的方法)

(1)苯与浓硫酸经磺化反应后制得苯磺酸

(2)苯磺酸与氢氧化钠进行熔融反应后产生苯酚钠与硫酸纳

(3)苯酚钠加酸处理后即得到苯酚

反应流程如下:

2.异丙苯法

(1)苯与丙烯经加成反应后产生异丙苯

(2)异丙苯氧化后制得苯酚

[优点]苯和丙烯属于廉价的原料,转化后的苯酚与丙酮则属较高价值物质。反应式及流程图如下:

C6H6+H2C=CHCH3→C6H5CH(CH3)2

C6H5CH(CH3)2+O2→C6H5OH+CH3COCH3

3.氯苯水解法

氯苯在氢氧化钠水溶液中的水解制得苯酚。

反应流程图如下:

[困难]由于氯苯的氯原子参与苯环的共轭,这个水解过程十分困难,需要在高压(28MPa)、高温(300℃)、以铜作催化剂的条件下进行。

4.苯胺水解法

苯酚的化学性质及应用

1.苯酚的解离:

此阴离子团可以存在多种共振结构:

因此苯酚的-OH基的H+是可以解离出来的(Ka仅10-10),与醇类的-OH性质不相同。譬如苯酚可与强碱进行酸硷中和反应:

但也由于苯酚酸性太弱,故无法使蓝色石蕊试纸变红,也无法与碳酸氢钠反应产生CO2

2.苯酚可进行取代反应,依取代不同位置氢原子,可分成两类:

(1)苯环上进行硝化或卤化反应,形成溴苯酚等产物,反应流程如下:

(2)取代反应发生在羟基上,即羟基上之氢原子被碳鍊取代,生成醚类或酯类。

3.苯酚于空气中会氧化,形成粉红色的苯醌。

4.大量制备苯酚与甲醛在酸或硷的催化下会发生缩合反应,产生网状聚合物,俗称电木的酚醛树脂(Phenolic resin)。这种合成塑料的耐热性、耐燃性、耐水

性和绝缘性优良且易于切割,若在制程中加入不同的材料,还可以得到功能各异

的改性酚醛树脂。

5.苯酚与Fe3+可形成紫色错离子,这也是检验苯酚的方法之一。

Fe3++6C6H5OH→H3[Fe(OC6H5)6]+3H+

6.苯酚可作杀菌剂、麻醉剂、防腐剂、外科整型手术之脱皮剂;

7.苯酚经加工后可合成的化合物:

(1)阿斯匹灵(Aspirin):是目前常见的头痛药,还具有抗凝血的作用可防止中

风。

阿斯匹灵结构:

(2)强力炸药三硝酚:在战争中不可或缺的武器

三硝酚结构:

苯酚的毒性

1.苯酚具有强烈毒性,若吸入将刺激鼻咽,甚至影响中枢神经系统

2.食入则会造成口及咽严重的灼伤、腹痛、发绀、肌肉虚弱、颤抖、痉挛、肾及

肝损害、昏迷及死亡。

3.苯酚及其浓溶液对皮肤有强烈的刺激作用,若不慎将苯酚沾到皮肤上,应用酒

精或聚乙二醇清洗;若量较大或者混有氯仿,则需要进行急救。沾到衣服上需用大量水冲洗。

4.由于苯酚的高反应性,酚污染对生态环境伤害很大。

本文由南通润丰石油化工提供

酚氯仿法提取DNA的原理

作者: 渭水凡夫(站内联系TA)发布: 2013-04-06 最近在博客上看到的一篇可以作为入门级《分子生物学十万个为什么》 和大家分享一下 用酚抽提细胞DNA时,有什么作用? 使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA 溶于水相。 使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。 缺点:1. 能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。 氯仿的作用? 氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中) 用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么? 异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子? 用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。 原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L氯化钠),但在L氯化钠盐溶液中溶解度最低,而核酸核蛋白(RNP)则在L氯化钠中溶解度最大,利用这一性质可将其分开。 将沉淀物溶解于生理盐水,加入去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)溶液,使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L,使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质,也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。 溶解:将离心后除去RNA的沉淀,用30ml生理盐水溶解,充分搅拌后,匀浆一次。加4毫升10%SDS溶液,使溶液的SDS浓度达到1%左右,边加边搅拌,放置60 ℃水浴保温10 分钟(不停搅拌),冷却。加固体氯化钠,使溶液氯化钠浓度达到1mol/L,充分搅拌10分

酚、苯学案,酚、苯酚知识总结

酚 1.酚:羟基与苯环直接相连而形成的化合物。官能团为酚羟基。如(苯酚), (邻甲基苯酚)等。 2.苯酚的物理性质:无色晶体,有特殊气味的晶体,常温下微溶于水,65℃以上与水混溶,有毒,有腐蚀性,若皮肤上沾到苯酚,可用酒精洗涤。 苯酚是重要的化工原料,广泛用于制造酚醛树脂、染料、医药、农药等。苯酚的稀溶液可以直接杀菌消毒,如日常药皂中常加入少量的苯酚。 3.苯酚的化学性质: (1)燃烧反应:C 6H 6O+7O 2――→点燃6CO 2+3H 2O 。 (2)取代反应:向盛有少量稀苯酚溶液的试管中滴入过量的浓溴水,生成2,4,6-三溴苯酚(白色沉淀),反应的化学方程式为。 苯酚易发生取代反应,且发生在-OH 的邻、对位上,说明-OH 对苯环上的H 原子有活化作用。 写出与溴水反应的化学方程式:__________________________。 注意:2,4,6-三溴苯酚易溶于苯等有机溶剂,不能用溴水除去苯中混有的苯酚杂质。可以用NaOH 溶液除去苯中的少量苯酚。具体实验过程为:向混合物中加入NaOH 溶液,充分振荡后静置,用分液漏斗分离出上层液体。 (3)显色反应:酚羟基与FeCl 3溶液作用溶液显紫色,利用此性质也可以检验酚羟基的存在。 (不作要求) (4)弱酸性:苯酚俗称石炭酸,显弱酸性,其电离方程式为。 与Na 反应:。 与NaOH 溶液反应:。 苯酚有酸性,而甲醇没有酸性,说明苯环对-OH 上的H 原子有活化作用。 写出 与NaOH 溶液反应的化学方程式:__________________。

苯酚酸性强弱的探究,比较CH3COOH、H2CO3、C6H5OH、HCO-3的酸性强弱: A中的试剂是CH3COOH和碳酸钠,B中试剂是饱和NaHCO3,C中试剂是苯酚钠溶液。 A中的反应是:2CH3COOH+Na2CO3=2CH3COONa+CO2↑+H2O。 B中NaHCO3溶液的作用是除去CO2中混有的CH3COOH。 C中溶液变浑浊,反应为。 由此可判断酸性强弱:CH3COOH>H2CO3>C6H5OH>HCO3-。 注意: a.苯酚酸性很弱,不能使酸碱指示剂变色。 b.苯酚钠与CO2的反应,无论二氧化碳是否过量,都生成NaHCO3。 c.苯酚能与Na2CO3反应但不会生成CO2,反应为。(5)氧化反应: a.苯酚在空气中会慢慢被氧化呈粉红色:+O2→(C℃H℃O℃,对苯醌) +H℃O。 b.苯酚可以使酸性高锰酸钾溶液褪色:3+4KMnO℃→3(C℃H℃O℃,对苯醌) +4MnO℃+4KOH+H℃O。 补充: 酚醛树脂的合成:。 反应原理:在浓盐酸的作用下,甲醛中的氧原子和苯酚中羟基邻位的两个H原子会脱去结合成水,这样甲醛就变成-CH2-,而苯酚则变成,这两个结构交替连接就形成了线性酚醛树 脂。 酚醛树脂的应用:制造各种涂料、胶粘剂及隔热保温材料等。

探究苯酚和溴水的反应探究

探究苯酚和溴水的反应 一、苯酚溶液和溴水实验成功的关键 实验室经常可能出现的状况 1、当苯酚溶液浓度比较大时(不可能很高),当饱和溴水滴到苯酚溶液中先出现沉淀然后消失或甚至无法出现白色沉淀,原因是即便生成了三溴苯酚又可以溶于过量的苯酚溶液中。 讨论:这里是否可能会有第二个原因:溴水和苯酚并没有得到三溴苯酚,也许得到一溴苯酚或二溴苯酚,而一溴苯酚或二溴苯酚都不是白色沉淀。 2、当苯酚与浓溴水反应生成白色沉淀之后,继续加入浓溴水,就会发生如下反应: 生成了黄色的2,4,4,6—四溴环己二烯酮,故析出的白色淀淀转变为黄色沉淀,这里显然溴水氧化了三溴苯酚。 3、显然,为了很好地完成该实验,溴水一定要逐渐滴入,苯酚的浓度不能太高。 4、成功的实际经验操作:把米粒大小的苯酚固体放入试管中,然后加水使之溶解→把试管中的苯酚溶液“完全”倒入到另一试管中(待用)→往原试管中注入蒸馏水5mL左右,振荡→逐滴滴入浓溴水→看到白色沉淀。

二、苯酚溶液中加溴水溶液的PH的变化情况 在苯酚溶液中加溴水发生反应如下:从中可以看出,在苯酚溶液中加溴水,溶液的酸性大大增强,得到了氢溴酸这强酸和三溴苯酚,因此酸性大为增强。另外三溴苯酚的酸性也大于苯酚的酸性。 三、一道04年浙江省化学竞赛题的解析 某同学在做实验时,将少量溴水滴入苯酚溶液中,结果没有发生沉淀现象,他又继续在反应混合液中滴入足量的氢氧化钠溶液,此时他发现 A仍无沉淀 B产生白色沉淀 C先产生沉淀后溶解 D溶液呈橙色 这是2004年浙江省高中学生化学竞赛试题第4题,在苯酚的性质实验中,加溴水后未发现沉淀的情况常常发生,而此处给出的是少量溴水,容易使考生认为是过量的苯酚溶液溶解了三溴苯酚沉淀,于是想到用足量的氢氧化钠溶液来中和过量的苯酚,假如苯酚不存在了,就应该看到有白色沉淀了,于是这样大多考生便选了答案B。 那么实际情况怎样呢?事实上溶液中仍无沉淀!该题的参考答案应是A。 【解析】当加入氢氧化钠溶液时,通俗的讲法就是氢氧化钠溶液首先和先前得到的氢溴酸反应得到溴化钠和水,然后可以和三溴苯酚作用得到三溴苯酚钠和水,因此得不到白色沉淀的三溴苯酚,当然这里我们必须知道三溴苯酚钠不是白色沉淀的。 四、进一步的思考 事实上,情况真的是这么简单吗?

对羟基苯甲醛

对羟基苯甲醛的合成技术 [摘要]本文介绍了对羟基苯甲醛的一些性质及应用,并讲述其应用发展。叙述了对羟基苯甲醛的合成方法与技术,并对方法的优缺点作了简要对比。其合成方法较多,以苯酚、对氨基苯甲醛、对硝基甲苯和对甲酚为原料均可合成对羟基苯甲醛。本文对其合成方法进行了探讨,当反应时间为6h,碱用量140g,反应压力19.6~24.5Pa为最佳。 [关键词]对羟基苯甲醛;应用;发展;合成; Synthesis of p-hydroxybenzaldehyde Abstract:This paper introduces some properties of hydroxyl benzene formaldehyde and its application, and describes its application and development. Narrated on the synthesis methods and technology, and the advantages and disadvantages of the methods are compared briefly. The synthesis method is more, phenol, amino benzaldehyde, p-nitrotoluene and p-cresol as raw material can be the synthesis of p-hydroxybenzaldehyde. In this paper, the synthesis method is discussed, when the reaction time was 6h,140g alkali dosage, reaction pressure is 19.6 ~24.5Pa is the best. Key words:P-hydroxybenzaldehyde; application; development; synthesis 一、绪论 1.1 对羟基苯甲醛的主要性质 对羟基苯甲醛又称对甲醛苯酚,4一羟基苯甲醛(简称PHBA),分子式CH6O2,为白色结晶性粉末,有芳香味。微溶于冷水,易溶于热水、醇和醚。熔点116℃,密度:1.129。在常压下升华而不分解。半数致死量(小鼠,腹腔)500mg/kg。有刺激性。水蒸气中不挥发。与氯化铁作用生成淡紫色;与钠汞齐作用生成4,4′-二羟基苯偶姻;与锌和盐酸作用生成对甲苯酚。它以苷的形式存在于多种植物中,经水解,从水中得针状体;或由苯酚与氯仿及吡啶反应获得。其合成方法较多,以苯酚、对氨基苯甲醛、对硝基甲苯和对甲酚为原料均可合成对羟基苯甲醛。以其为原料可以合成香兰素、丁香醛、茴香醇、茴香醛和覆盆子酮等香料。在医药工业中用于合成羟氨苄胺嘧啶、三甲氧基苯甲醛、对羟基苯甲醇葡萄糖、对羟基甘氨酸、祛痰药杜鹃素、人造天麻、艾司洛尔等。还用于杀菌剂、照像乳化剂、

[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理

[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤: 1.将动物组织放在1.5ml的离心管中,分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min 2.将组织放入研钵中,加入适量DNA裂解液(300μl),研磨后再加入 300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。 3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管,在管中加10μl蛋白酶K, 用封口带将离心管封口,放入摇床(56?,5h)。 4.加入等体积的Tris饱和酚(500μl),摇匀(10min)。 5.离心:12000R, 7min,4?。离心后分成上中下三层,上层为DNA,中层为蛋白质,下层为有机质。 6.吸取上层液体加入新的离心管。 7.配制Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。 8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl, 摇匀10min。 9.离心:12000R,7min,4?。 10.吸取上清液加到新的离心管,加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl(氯仿:异戊醇=24:1)。 11.离心:12000R,7min,4?。 12.吸取上清液加入新的离心管,加入2.5倍经过-20?冷冻的100%的酒精。-20?过夜。 13.将样品取出,12000R,7min,4?离心。 14.弃上清,留白色沉淀(DNA),加400μl的75%的经过-20?冷冻的酒精,反复吹打溶解。

15.重复第14步骤2次(用75%酒精洗三次)。 16.提取DNA完成。 溴氯仿法提取DNA的原理: 用酚抽提细胞DNA时,有什么作用, 使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。 使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。缺点:1. 能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。 氯仿的作用, 氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中) 用酚,氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么, 异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子, 用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。 原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L 氯化钠),但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低,而核酸核蛋白(RNP)则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大,利用这一性质可将其分开。

能使溴水褪色的物质

能使溴水褪色的物质 常温下单质溴是深红棕色液体,又称液溴。液溴溶于水形成的溶液叫溴水,溶解的溴只有极小部分与水反应,大部分以分子形式存在而使溴水呈橙色,当溴水中分子浓度减小时,溴水就褪色或变色。下面对使溴水褪色的物质总结如下:的Br 2 一、有机物 1.①不饱和烃(烯烃、炔烃、二烯烃、苯乙烯等); ②不饱和烃的衍生物(烯醇、烯醛、烯酸、烯酯、卤代烯烃、油酸、油酸盐、油酸酯、油等); ③石油产品(裂化气、裂解气、裂化汽油等); 发生加成反应而使 ④天然橡胶(聚异戊二烯)以及二烯烃的加聚产物能与Br 2 溴水褪色。 2.苯酚及其同系物、苯胺能与Br2发生取代反应而使溴水褪色。 3.含醛基的有机物(醛类、甲酸、甲酸酯、葡萄糖、麦芽糖等水溶液)能与Br 2发生氧化反应而使溴水褪色。 、直馏汽油、煤油、苯及苯的同系物、4.卤代烃(氯仿、溴苯、四氯化碳)、CS 2 液态环烷烃、低级酯、液态饱和烃等有机溶剂能萃取溴水中的溴而使水层接近无色,有机层颜色变深(一般为橙红色)。 二、无机物 1.还原性较强的无机化合物(如H2S及硫化物、SO2及亚硫酸盐、KI、FeSO4等)与溴发生氧化反应而使溴水褪色。 2.Zn、Mg等金属单质与溴发生氧化反应而使溴水褪色。 3.NaOH、碳酸钠、氨水等碱性溶液与溴发生岐化反应而使溴水褪色。 4.K、Ca、Na等金属单质先和水反应生成碱,生成的碱再与溴发生岐化反应而使溴水褪色。 能使KMn04褪色的物质 ①与烯烃、炔烃、二烯烃等不饱和烃类反应,使高锰酸钾溶液褪色;与苯的同系物(甲苯、乙苯、二甲苯等)反应,使酸性高锰酸钾溶液褪色。 ②与苯酚发生氧化还原反应,使高锰酸钾溶液褪色 ③与醛类等有醛基的有机物发生氧化还原反应,使高锰酸钾溶液褪色 ④与具有还原性的无机还原剂(如H2S、SO2、FeSO4、KI、HCl等)反应,使高锰酸钾溶液褪色。 既使高锰酸钾溶液褪色,又使溴水褪色的物质 既能使酸性高锰酸钾溶液褪色,又能使溴水褪色的物质包括分子结构中有C=C 双键、C≡C叁键、醛基(—CHO)的有机物;苯酚和无机还原剂(如H2S、SO2、FeSO4、KI、HCl等)。 苯的同系物只能使其中的酸性高锰酸钾溶液褪色;有机萃取剂只能使其中的溴水褪色。

核酸提取常见试剂的作用原理

异硫氰酸胍 强用力的蛋白质变性剂,能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂,在通常使用的蛋白质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍,它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态。含有强力的阴离子和阳离子基团,它们可以形成较强的氢键。在还原剂存在的情况下,异硫氰酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如SDS存在的情况下,可以破坏疏水作用。 盐酸胍、尿素 盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂,它并不是一种足够强的变性剂,可以允许完整的RNA 从富含RNase的组织中提取出来。 4-8M可断裂氢键,有两种可能机制:1变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合,形成变性蛋白-变性剂复合物,当复合物被除去,从而引起N-D反应平衡向右移动,随着变性剂浓度增加,天然状态的蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;2盐酸胍、尿素对氨基酸的增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水的氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为非极性残基的较好溶剂,使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强,盐酸胍、尿素引起的变性往往是不可逆的。 高浓度尿素使蛋白质变性并抑制Rnase活性 十二烷基肌氨酸钠 使蛋白质解体变性 巯基试剂

1防止蛋白质或酶等(如辅酶A)分子中SH基团氧化成二硫键,2在某些酶反应过程中维持体系的还原环境。DTT,DDTE、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于他是生物体内的还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放。DNA提取中,常使用巯基乙醇,维持缓冲液的还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定的毒性,浓度不应高于2%。 巯基乙醇 β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键(肽和蛋白质分子中的半胱氨酸残基中的键)。 1 还原蛋白质二硫键,使Rna酶变性 2 抑制酚类氧化,若氧化,核酸会变成灰黑色,苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联 3 保护蛋白质的巯基蛋白质提取中需要 巯基乙醇还原二硫键,使RNA酶失活 化学变性剂SDS、尿素、盐酸胍能破坏疏水键、盐键、氢键、范德华力使蛋白质变性但不影响肽键和二硫键,不能使蛋白质彻底变性 加上还原剂巯基乙醇或DTT,能还原二硫键,使RNA彻底变性 DTT二硫苏糖醇 刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近,但DTT价格略高一些。由于容易被空气氧化,因此DTT的稳定性较差;但

高中化学与溴水、高锰酸钾反应的有机物

与溴水、高锰酸钾反应的有机物 在有机反应中常有一些物质与溴水、KMnO4反应。溴水、KMnO4一般是作为氧化剂参与反应的,通常这两种物质用于区别不易被氧化的烷烃、苯和易被氧化的烯烃、炔烃等。氧化剂很多,为什么要选择着这两种呢?主要是这两种氧化剂都有颜色,溴水为橙色,K MnO4为紫红色,反应后两种物质均变成无色,便于检验反应是否发生。 下面就这两种物质与一些烃发生反应归纳一下: 溴水溶液中溶剂为水,溶质为溴单质(还有少量溴与水反应生成的物质);KMnO4溶液中溶剂为水,溶质为KMnO4,为使其氧化性增强,常在其溶液中加些稀硫酸,称为酸性高锰酸钾溶液。 当溴水、KMnO4与一些烃反应时,则首先要搞清楚以下4方面的问题: (1)溶液分层问题: 上述两种物质均为水溶液,与液态烃混合后都要分层,因为烃不溶与水。 (2)液体密度问题: 上述两种水溶液的密度均大于液态烃。因为烃密度小于水,所以分层后,液态烃都在上层。 (3)溶液反应问题: 上述两种物质到底可以和那些烃发生反应呢,应该说烷烃、苯与这两种物质都不反应;烯烃、炔烃与这两种物质都要反应;苯的同系物则与溴水不反应,与酸性高锰酸钾溶液要反应。 (4)溶液萃取问题: 萃取就是用一种溶剂将一种溶液中的溶质从其原来的溶剂中分离出来的过程。所用到的该溶剂成为萃取剂,一般要有以下几个条件:一是被萃取的溶液与其互不相溶,二

是与被萃取的溶液不发生任何反应,三是溶质在萃取剂中的溶解度要远远大于原来溶剂中的溶解度,四是萃取剂一般是易挥发的物质。 在上述溶液混合中烃要与溴水发生萃取过程,但与高锰酸钾溶液不发生萃取,理由是:溴水中的溶质溴单质易溶于有机溶解剂,其在有机溶剂中的溶解度远远大于在水中的溶解度。而高锰酸钾溶液的溶质高锰酸钾是离子化合物,其不溶于有机溶剂,所以也就没有萃取过程的发生。 如果搞清楚上述四个问题后,就不难解决以下问题了。 [例] 溴水、KMnO4溶液分别与己烷、己烯、己炔、苯、甲苯反应的现象 先讨论溴水与上述五中烃反应的现象: (1)溴水与己烷:两溶液混合后,首先是分层,无色己烷在上橙色溴水在下,振荡后,不反应,但要发生萃取,结果因溴单质的转移,己烷呈红棕色,而溴水则几乎为无色。如图1 (2)溴水与己烯:两溶液混合后,首先是分层,无色己烯在上橙色溴水在下,振荡 后,发生反应,就不存在萃取问题。溴与己烯发生加成反应后,溴水层和己烯层均 为无色,但还是出现分层,如图2

碱性环境下苯酚-尿素-甲醛共缩聚树脂结构形成研究

第29卷第3期林产化学与工业V01.29No.32009年6月ChemistryandIndustryofForestProductsJune2009碱性环境下苯酚一尿素一甲醛共缩聚 LEIHongDUGuan—ben树脂结构形成研究 雷洪1,杜官本P,PIZZIAntoni02,赵伟刚1, 李琴3,方群1,赵超超1 (1.西南林学院木质科学与装饰工程学院。云南昆明650224; 2.ENSTIB,UniversityofNancyl,Epinal88000,France; 3.浙江省林业科学研究院,浙江杭州310023) 摘要:为了了解碱性环境中苯酚一尿素一甲醛(PUF)共缩聚树脂结构形成规律,为PUF树脂结构控制提供依据,使用1℃NMR表征,采用分次加入苯酚、甲醛 和尿素的技术路线,定量分析了PUF树脂合成过程中各种官能团的变化和聚合物分子链的构成。结果表明,碱性环境中各种加料方式合成的PUF树脂初聚物具有十分相近的化学结构,PUF树脂也具有十分相近的化学结构,但结构组分存在差异,在原料物质的量之比一定的条件下,最终反应进程基本接近。甲醛分次加入,减少了醚类的生成,有利于简化反应进程。初聚物的热机械性能分析表明不同加料方式对酚醛树脂固化性能无显著影响。 关键词:苯酚一尿素一甲醛共缩聚树脂;碱性环境;结构 中图分类号:TQ32文献标识码:A文章编号:0253—2417(2009)03—0063一06 StructuralProgressingofPhenol?-urea-?formaldehyde ResinunderAlkalineCondition LEI Hon91,DUGuan-benl,PIZZIAntoni02,ZHAOWei.gan91,LIQin,FANGQunl,ZHAOChao—cha01 (1.DepartmentofWoodScienceandInteriorDecoration,SouthwestForestryColege,Kunming650224,China; 2.ENSTIB,University0fNancy1,Epihal88(130,Frame;3.ForestryResearch0fzhejiansProvince,Htmgzhou310023,China) Abstract:Tofindtheruleofstructuralprogressingofphenol-ur阻-formaldehyde(PUF)resinpreparedunderalkalineconditionandtoprovidetheoreticalbasisforPUFpreparation.quantificationofmainfunctiongroupsandidentificationofdifferenthnkagesformedinPuFprepolymerswereanalyzedby13CNMRspectroscopywhenphenol,formaldehydeandureawereebbedbyseveraltin抡¥duringthepreparationofPUF.ResultsshowedthatPUFprepolymemobtainedbydifferentchargingmethodsshowedsimilarchemicalstructurewithahn略t斛mttype0flh[1lcagebutshoweddifferenceinStrl删constitution.Underdefinitematerials’ ratiointhisexperiment.thefinalreaction progressesofsynthesizingPUFresinswerealmostsimilar.The char觑0fformalde?hydebyseveraltimescoulddecreasetheformationofetherandWaSinfavorofsimplifyingthereaction.Resultsof thermo-mechanicalanalysis(TMA)exhibitedthatcuringperformanceofPUFprepolymerswerenotmuchaffectedbydifferentcharsingmethods. Keywords:phenol-m'e咀-formaldehyde(PUF)resin;alkalinecondition;structure 人造板工业是一个先分后合的工艺流程,加工过程依赖木材胶黏剂完成,胶合环节通常决定产品的质量和生产线效率,因此木材胶黏剂从来就是人造板工业技术进步的标志之一。通过共缩聚途径实现传统甲醛系列树脂(酚醛树脂、脲醛树脂和三聚氰胺甲醛树脂)性能与成本的平衡是进入新世纪以来木 。收稿日期:2008—06—10 基金项目:教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET一06一os25);云南省应用基础研究重点基仓-(2008CC014) 作者简介:雷洪(1980一),女,湖jE新洲人,博士生,主要从事木材胶黏剂研究工作 ?通讯作者:杜官本,教授,博士生导师,主要研究方向:木材胶黏剂化学及木质复合材料;E.哪n:gmmben@州fc.edu.衄。

酚氯仿法提取DNA的原理

荧光原位杂交(FISH)探针的制备及其应用 概述 1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征 2、染色体异常常见的类型 3、染色体异常的检测方法 二、荧光原位杂交及其探针 1、荧光原位杂交的原理 2、荧光原位杂交的探针 三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交(按试验流程介绍) 一、概述 1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征 1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关,然而这还仅仅只是一个假说;1960年Nowell和Hungerford在7例慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的患者中发现后来被称为费城染色体(Philadelphia chromosome)的微小染色体;1973年Rowley证实了Ph染色体是9号和22号染色体易位所致,这是人们在肿瘤中认识到的第一个染色体易位;目前,已经有11,500篇文献报道了55,600多种克隆性细胞遗传学异常。这些染色体畸变,尤其是染色体易位及其相应的融合基因在肿瘤致病的起始阶段有着重要的作用,无不说明克隆性细胞遗传学异常是肿瘤的特征,在肿瘤起源中起重要作用。

下图是各种疾病报告的克隆性染色体异常病例数

2、染色体异常的常见类型 染色体异常指数目异常和结构异常两类:前者包括整条染色体数目的扩增和缺失;后者包括染色体易位、插入、倒置、区带的缺失或扩增等。 下图是染色体数目异常

染色体结构异常 3、染色体异常的检测方法 染色体异常的识别得益于二十世纪六十年代后发展起来的胰蛋白酶-姬姆萨染色和常规显带技术,使得常规筛查全基因组染色体异常和检测染色体核型改变成为可能。染色体显带是细胞遗传学分析技术中标准和常用的方法,但耗时且依赖于获得良好的分裂相,还难于分析复杂和隐匿的异常。

松香与甲醛和苯酚的聚合物等8种

松香与甲醛和苯酚的聚合物等8种 食品相关产品新品种 一、食品接触材料及制品用添加剂新品种 (一)松香与甲醛和苯酚的聚合物 产品名称 中文 松香与甲醛和苯酚的聚合物 英文 Rosin, polymer with formaldehyde and phenol CAS 号 67700-45-2 使用范围 涂料及涂层 最大使用量/ % 5 特定迁移限量(SML )/ (mg/kg ) 15(以甲醛计) 最大残留量(QM )/ (mg/kg ) — 备注 添加了该物质的涂料及涂层使用温度不 得超过121℃

(二)甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯与甲基丙烯酸3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-十三氟辛酯共聚物-N-氧化物乙酸盐 产品名称中文 甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯与甲基丙烯 酸3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-十三氟辛酯共聚 物-N-氧化物乙酸盐 英文 Copolymer of 2-(dimethylamino) ethyl methacrylate with 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl methacrylate, N-oxide, acetate CAS号1440528-04-0使用范围纸和纸板 最大使用量 4 mg/dm2 特定迁移限量(SML) /(mg/kg) — 最大残留量(QM)/ (mg/kg) — 备注该物质中氟含量不得超过45%;添加了该物质的纸和纸板材料及制品使用温度不得超过100℃,不得用于接触婴幼儿食品和母乳

(三)C.I.颜料橙79

能使溴水褪色的物质

能使溴水褪色的物质 常温下液溴是深红棕色液体。液溴溶于水形成的溶液叫溴水,溶解的溴只有极小部分与水反应:Br2+H2O HBr+HBrO,大部分以分子形式存在而使溴水呈橙色,当溴水中的Br2分子浓度减小时,溴水就褪色或变色。下面对使溴水褪色的物质总结如下: 一、有机物 ①a烯烃、炔烃、二烯烃、苯乙烯等不饱和烃类反应,使溴水褪色 b不饱和烃的衍生物(烯醇、烯醛、烯酸、烯酯、卤代烯烃、油酸、油酸盐、油酸酯、油等); c石油产品(裂化气、裂解气、裂化汽油等); d天然橡胶(聚异戊二烯)以及二烯烃的加聚产物能与Br2发生加成反应而使溴水褪色。 ②与苯酚反应生成白色沉淀(苯酚及其同系物、苯胺能与Br2发生取代反应而使溴水褪色。) ③含醛基的有机物(醛类、甲酸、甲酸酯、葡萄糖、麦芽糖等水溶液)能与Br2发生氧化反应而使溴水褪色 ④与苯、甲苯、四氯化碳等有机溶液混合振荡,因萃取作用使溴水褪色,有机溶剂溶解溴呈橙色(或棕红色)。 ⑤卤代烃(氯仿、溴苯、四氯化碳)、CS2、直馏汽油、煤油、苯及苯的同系物、液态环烷烃、低级酯、液态饱和烃等有机溶剂能萃取溴水中的溴而使水层接近无色,有机层颜色变深(一般为橙红色)。 二、无机物 ①与碱性溶液(如NaOH溶液、Na2CO3溶液,氨水等)发生岐化反应,使溴水褪色。 Br2+2NaOH=NaBr+NaBrO+H2O (或3Br2+6NaOH=5NaBr+NaBrO3+3H2O) Br2+Na2CO3=NaBr+NaBrO+CO2 ②还原性较强的无机化合物(如H2S及硫化物、SO2及亚硫酸盐、KI、FeSO4等)与溴发生氧化反应而使溴水褪色。 Br2+H2S=2HBr+S↓(浅黄色沉淀) Br2+SO2+2H2O=2HBr+H2SO4 3Br2+6FeSO4=2Fe2(SO4)3+2FeBr3 Br2+2KI=2KBr+I2(溶液变为棕色) ③Zn、Mg等金属单质与溴发生氧化反应而使溴水褪色。 ④K、Ca、Na等金属单质先和水反应生成碱,生成的碱再与溴发生岐化反应而使溴水褪色。 ⑤可溶性银盐、铅盐与溴水中的Br—反应生成沉淀,使Br2+H2O HBr+HBrO这样一个动态平衡右移,从而使溴水褪色。

酚氯仿法提取DNA实验报告

酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告 一、实验目的 实验原理:酚氯仿法:先从全血中分离白细胞,再通过蛋白酶K 消化,通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白 质成分分开,在RNase作用下,降解RNA以纯化 DNA。 蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在 下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体 系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白 与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性 而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸 晶使DNA分子完整地分离出来。氯仿-异戊醇溶 液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出 来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析 出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化 研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶 氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层 异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。而 DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙 醇沉淀来纯化和浓缩DNA 二、实验用品 试剂:

1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA(pH8.0),5M NaCl TES(15mM Tris, 15mM EDTA,15mM NaCl) Tris饱和酚(PH8.0) 氯仿/异戊醇(V/V=24/1) 10%SDS 5mg/ml Protease K 70%乙醇、无水乙醇 TE缓冲液(pH8.0):10mM T ris-Cl(PH8.0) 1mM E DTA(PH8.0) 10mg/mL 溴化乙锭(EB) 耗材: 仪器:低温离心机、移液枪一套,低温冰箱,恒温水浴锅、紫外分光光度计(Eppendorf)。 三、实验步骤 4.1取血样:实验人员相互取血样5ml.(用品:采血管、采 血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸) 4.2血液样品的预处理:分取2ml 血样加入到离心管A中 用于酚氯仿法提取DNA。 1) 破除RBC:

一种由苯直接羟基化制备苯酚及二酚的方法

苯直接羟基化制备苯酚及二酚的方法 本文由南通润丰润丰石油化工整理本办法的目的是提供一种绿色环保的制备苯酚及二酚的方法,能在较短的反应时间内获得较高的产率和选择性。 本办法的技术方案是以自制特种分子筛为催化剂,苯为原料,30%的过氧化氢为氧化剂,水为溶剂,反应在玻璃圆底烧瓶内密闭环境里搅拌下进行,苯与过氧化氢的摩尔比为1:0.8-1:2,苯与水的体积比为1:50-1:90,苯与催化剂的质量比为1:0.4-1:0.25,反应温度为30-90°C,反应时间为30-70分钟。 本办法中苯与催化剂的最优质量比为1:0.34,最佳反应温度为60-70 °C,最佳反应时间是45-65min。 本办法的具体步骤: 第一步,特种催化剂的制备,以正硅酸乙酯作为硅源,三氯化钛溶液作为钛源,其中制备过程中加入的钛硅摩尔比为0.01-0.03,四丙基氢氧化铵溶液作为模板剂,其与正硅酸乙酯的质量比为1.4:1,混合溶液采用水热合成法,高压釜内反应,制得具有MFI拓扑结构的特种催化剂。 第二步,将催化剂、苯、过氧化氢、水加入玻璃圆底烧瓶,圆底烧瓶上接球形冷凝管,反应过程中全程通入冷凝水并保持磁力搅拌,使用磨口玻璃塞与封口膜使体系处于密闭状态。反应结束后,自然冷却至室温,过滤分离产物和催化剂,得到苯酚,对苯二酚,邻苯二酚和对苯醌的混合产物,反应液使用乙醚萃取后,

采用气相色谱法对产物进行定量分析。苯酚及二酚的收率基于初始加入苯的摩尔量进行计算,选择性基于所有产物的摩尔总量进行计算。 本办法与已有技术相比有如下特点: ①本办法可以得到较好的结果:苯酚与二酚的收率可以达到53.4%,其选择性可以达到95%,苯的转化率可以达到56.3%。 ②自制的特种催化剂可以在反应后通过减压抽滤分离,焙烧后重复使用,其仍具有较好的催化效果。 ③反应使用绿色的氧化剂双氧水,反应过程中不使用高毒性的物质,符合绿色发展的要求。 ④反应使用水作为溶剂,绿色环保,所有反应物在反应前全部加入,且反应时间较短,反应温度不高,因此反应易于操作,且耗能较少。 本文由南通润丰润丰石油化工整理

苯酚理化性质与质量指标

苯酚理化性质与质量指标 1.1 苯酚的基本概况 苯酚:又名石炭酸;酚;羟基苯; 英文名:Phenol;Hydroxybenzene; 分子式:C6H6O; C A S:108-95-2; 结构式: 图1.1苯酚分子结构式 苯酚(俗称石炭酸)是一种常见的化学品,是重要的有机化工原料,是丙烯的重要衍生物之一,是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物(如阿司匹林)的重要原料。也是一种电解质。 苯酚用途广泛,产量大,工业上主要由异丙苯制得。第一次世界大战前,苯酚的唯一来源是从煤焦油中提取。目前绝大部分是通过合成方法得到。有磺化法、氯苯法、异丙苯法等方法。 1.2 苯酚的物化性质 苯酚又名石炭酸、羟基苯,是最简单的酚类有机物,一种弱酸。 物理性质:常温下为一种无色或白色的晶体,有特殊气味(有令人作呕的甜和辣的气味)。苯酚密度比水大,常温下微溶于水,可在水中形成白色混浊。当温度高于65℃时,能跟水以任意比例互溶,其溶液沾到皮肤上用酒精洗涤。暴露在空气中呈粉红色。易溶于醇、醚等有机溶剂;在乙醇、氯仿、乙醚、醋酸酯、甲苯、甘油中可溶解50%以上,在矿物油中的溶解度小。

苯酚为无色针状结晶或白色结晶,有特殊气味,遇空气和光变红,遇碱变色更快。分子式C6H6O。分子量94.11。相对密度1.071。熔点40.85℃(超纯,含杂质熔点提高)。沸点181.9℃。闪点79.44℃(闭杯),85℃(开杯)。自燃点715℃。蒸气密度3.24。蒸气压0.13kPa(40.1℃)。蒸气与空气混合物燃烧限1.7~8.6% 。1克溶于约15ml水(0.67%,25℃加热后可以任何比例溶解),12ml苯。易溶于醇、氯仿、乙醚、丙三醇、二硫化碳、凡士林、碱金属氢氧化物水溶液,几乎不溶于石油醚。水溶液pH值约为6.0。 表1.1 苯酚基本物理性质表 苯酚石炭酸外观与性状白色结晶,有特殊气味。 分子式C6H6O 分子量94.11 pH值 6.0 熔点(℃) 40.6(超纯,含杂质熔点提高) 沸点(℃) 181.9 闪点(℃) 79.44℃(闭杯) 85℃(开杯) 相对密度(水=1) 1.07 引燃温度715℃相对蒸气密度(空气=1) 3.24 饱和蒸气压0.13(40.1℃) (kPa) 辛醇/水分配系数的对数值 1.46 临界压力 6.13(MPa) 燃烧热(kJ/mol) 3050.6 临界温度(℃) 419.2 爆炸上限%(V/V) 1.7 爆炸下限%(V/V) 8.6 溶解性:可混溶于乙醇、醚、氯仿、甘油。 主要用途:用作生产酚醛树脂、卡普隆和己二酸的原料,也用于塑料和医药工业。 苯酚为易燃易爆物,空气中混有3~10%的苯酚可引起爆炸,有毒。有腐蚀性。 苯酚能腐蚀橡胶和合金。与碱作用生成盐。遇热、明火、氧化剂、静电可燃。与三氯化铝+硝基苯、丁二烯、过二硫酸、过一硫酸发生剧烈反应,引起燃烧爆炸。能与氧化剂发生反应。 化学性质: 1、酸碱反应:苯酚是一种弱酸,能与碱反应: 2、显色反应:苯酚遇三氯化铁溶液显紫色,原因是苯酚根离子与Fe3+形成了有颜色的络合物。 (紫色)

苯酚甲醛制酚醛树脂 尿素甲醛制脲醛树脂

酚醛树脂反应--酚醛树脂与缩聚反应 酚醛树脂反应--酚醛树脂与缩聚反应酚醛树脂是世界上人工合成的第一类树脂材料,它具有良好的耐酸性能、力学性能、耐热性能,而且由于它原料易得,合成方便,目前仍被广泛应用 酚醛树脂反应--酚醛树脂与缩聚反应 酚醛树脂是世界上人工合成的第一类树脂材料,它具有良好的耐酸性能、力学性能、耐热性能,而且由于它原料易得,合成方便,目前仍被广泛应用。在高中教材里,酚醛树脂作为缩聚反应的典例,阐述了单体分子聚合成高分子的一种形式。与加聚反应不同,单体分子在发生缩聚反应时,生成的不仅仅是高分子化合物,还有小分子物质(如水)生成。也正是因为单体间缩去小分子物质,才成为有机物彼此连接成链状或体型的直接诱因。 一、酚醛树脂的生成和缩聚反应原理 缩聚反应是指单体间相互反应,生成高分子化合物同时生成小分子的聚合反应。酚醛树脂是由苯酚和甲醛在催化剂条件下缩聚而成。反应机理是苯酚羟基邻位上的两个氢原子比较活泼,与甲醛醛基上的氧原子结合为水分子,其余部分连接起来成为高分子化合物——酚醛树脂。反应的方程式可以表示为: 如果采用不同的催化剂,苯酚羟基对位上的氢原子也可以和甲醛进行缩聚,使分子链之间发生交联,生成体型酚醛树脂,如图: 体型酚醛树脂绝缘性很好,是用作电木的原料。另外,以玻璃纤维作骨架,以酚醛树脂为肌肉,组合固化制成复合材料即玻璃钢。 二、脲醛树脂的制备 在教材244页选做实验上,尿素晶体和甲醛溶液在盐酸做催化剂的条件下反应制取脲醛树脂。反应原理为:

反应中尿素分子中氨基上两个氢原子比较活泼,与甲醛醛基上氧原子结合生成水分子,其余部分相互连接为高分子化合物脲醛树脂,此反应原理与酚醛树脂的生成极为相似。 实验操作很简单,只需用力振荡试管3分钟(使尿素晶体和甲醛溶液充分接触发生反应),试管中即有白色粘稠固体生成,白色固体可溶于正丁醇等有机溶剂。 脲醛树脂通常可作为密度板的粘胶剂。

酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理

酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理 酚氯仿法提取DNA主要步骤: 1.将动物组织放在1.5ml的离心管中,分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min 2.将组织放入研钵中,加入适量DNA裂解液(300μl),研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。 3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管,在管中加10μl蛋白酶K,用封口带将离心管封口,放入摇床(56℃,5h)。 4.加入等体积的Tris饱和酚(500μl),摇匀(10min)。 5.离心:12000R,7min,4℃。离心后分成上中下三层,上层为DNA,中层为蛋白质,下层为有机质。 6.吸取上层液体加入新的离心管。 7.配制Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。 8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl,摇匀10min。 9.离心:12000R,7min,4℃。 10.吸取上清液加到新的离心管,加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl(氯仿:异戊醇=24:1)。 11.离心:12000R,7min,4℃。 12.吸取上清液加入新的离心管,加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。-20℃过夜。 13.将样品取出,12000R,7min,4℃离心。 14.弃上清,留白色沉淀(DNA),加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精,反复吹打溶解。 15.重复第14步骤2次(用75%酒精洗三次)。 16.提取DNA完成。 溴氯仿法提取DNA的原理:

用酚抽提细胞DNA时,有什么作用? 使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。 使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。 缺点:1. 能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA。2. 不能完全抑制RNase 的活性。 氯仿的作用? 氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中) 用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么? 异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子? 用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。 原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L氯化钠),但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低,而核酸核蛋白(RNP)则在 0.14mol/L氯化钠中溶解度最大,利用这一性质可将其分开。 将沉淀物溶解于生理盐水,加入去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)溶液,使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L,使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质,也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。 溶解:将离心后除去RNA的沉淀,用30ml生理盐水溶解,充分搅拌后,匀浆一次。加4毫升10%SDS溶液,使溶液的SDS浓度达到1%左右,边加边搅拌,放置60 ℃水浴保温10分钟(不停搅拌),冷却。加固体氯化钠,使溶液氯化钠浓度达到1mol/L,充分搅拌10分钟;

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