地衣体石果衣属共生菌的分离、培养与鉴定
地衣体石果衣属共生菌的分离、培养与鉴定
【摘要】：从陕西安塞采集石果衣属(Endocarpon sp.)地衣体标本并进行子囊孢子释放实验，成功分离出其共生菌，对此共生菌ITS序列进行分子鉴定后,将此菌转入液体培养液中培养,培养30天左右测定培养液中的总糖、还原糖和多糖含量。
【关键词】：地衣；石果衣属；共生菌；分离；培养；鉴定
地衣是由共生真菌和共生藻结合而成的稳定、自立的联合体。地衣化真菌约占真菌总数的五分之一，共525属，13500种，其中绝大多数的共生真菌是子囊菌，约占子囊菌半数以上，少数为担子菌和不完全菌类。地衣体组成形式通常可分为壳状、叶状和枝状三种生长型。其中壳状地衣通常是指形体上微小、呈水平扩展并分化程度很低的地衣体。石果衣属属于子囊地衣-瓶口衣目-瓶口衣科-瓶口衣亚科，其地衣体细鳞片状，散生或集生，常几近壳状，两面或仅上表面具假薄壁组织皮层。子囊壳埋生，子实层具共生藻，子囊1~6孢子，孢子砖壁型多胞，无色至暗褐色。为了对于地衣体菌、藻共生中的真菌进行单独研究或者用于菌、藻共生的人工重建，地衣共生真菌的分离及培养是不可缺少的。
1. 材料与方法
1.1 地衣标本
石果衣属(Endocarpon sp.) 地衣体标本采自陕西省安塞市墩滩山上。
1.2 培养基
琼脂水培养基：20克琼脂，1升无离子水；
PDA培养基：200克土豆，10克葡萄糖，20克琼脂，1升无离子水；
MY培养基：200克黄瓜，5克葡萄糖，600毫升麦芽汁，20克琼脂，400毫升无离子水；
DBD培养基：1克酵母提取物，2克大豆蛋白胨，20克葡萄糖，20克琼脂，1升无离子水；
LB培养基：10克右旋葡萄糖，1.1克硫酸锰,1克磷酸二氢钾,0.5克硫酸镁,0.2克氯化铁，0.2克硫酸锌, 100微克硫胺素，5微克生物素，1升无离子水。
1.3 石果衣属（Endocarpon sp.）共生菌的分离
第三节 奈瑟菌属
第三节奈瑟菌属(Neisseria) 致病菌脑膜炎奈瑟菌(N. meningitides) 淋病奈瑟菌(N. gonorrhoeae) 一、脑膜炎奈瑟菌(N. meningitides) （一）生物学性状形态与染色肾形，G-双球菌，有荚膜，菌毛培养特性专性需氧，培养基：巧克力培养基，5%CO2 菌落：光滑，透明，不溶血 1．抵抗力对干燥，热力，消毒剂均敏感 （二）致病性致病物质荚膜：菌毛：内毒素：主要致病物质 1．所致疾病流脑，人是其唯一易感宿主三种临床类型：普通型，爆发型，慢性败血病型 （三）免疫性：以体液免疫为主 （四）微生物学检查法标本采集涂片染色镜检分离培养与鉴定快速诊断法 （五）防治原则流脑荚膜多糖疫苗，治疗首选青霉素G ：1云南大学药学院(昆明650091)；2云南沃森生物技术有限公司(昆明6501l8 为制备四价脑膜炎球菌疫苗的需要2005 A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性研究上海生物制品研究所朱为2002 脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitides）感染是细菌性脑膜炎的常见病因，按荚膜多糖可将其分成12个血清群，其中A、B 和C 群感染占所有感染者的90%。全球由脑膜炎球菌引起的脑膜炎发病率在30-50万，病死率约10%，有相当一部分儿童因脑膜炎球菌严重感染而发生致聋等永久后遗症。在我国，A群脑膜炎球菌是主要致病菌群，95%的病例由A群引起。80 年代以来，我国进行了A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的大面积接种，有效地控制了发病率。该荚膜多糖是N-乙酰-3-O-乙酰甘露糖胺磷酸盐的线形共聚物，属T细胞非依赖性（TI）抗原，具有中等免疫原性和年龄相关的保护力，不能诱导免疫记忆。现已证实它对2岁以上儿童和成人在短期内有效，但随时间延续保护力下降，尤其在幼龄儿童中。因此有必要改进现有疫苗，提高其对各年龄组（包括婴儿）的免疫效果。近期的研究集中在开发多糖结合疫苗，即将多糖共价结合到蛋白质上，使其转化为T细胞依赖性（TD）抗原，以增强免疫原性和诱导免疫记忆。本文报道将! 群脑膜炎球菌多糖共价结合到精制破伤风类毒素(TT)上制备结合物，观察其在小鼠中的免疫原性。 A+C群脑膜炎球菌多糖一DT结合疫苗与多糖疫苗诱导的抗多糖抗体间的功能活性差异[英]2004 多糖蛋白结合疫苗对预防由一些有荚膜细菌(包括b型流感杆菌、肺炎球菌和C群脑膜炎球菌)引起的侵袭性疾病高度有效。与未结合多糖疫苗相比，多糖一蛋白结合疫苗能在婴幼儿体内诱导更高浓度的血清抗荚膜抗体。而且，结合疫苗诱导的抗体亲和力更高，补体介导的杀菌活性更强。 。在限定剂量时，多糖疫苗诱导的血清抗荚膜抗体预防C群脑膜炎球菌感染婴鼠发生菌血症的效力弱于结合疫苗。结合疫苗组的抗C群抗体的亲和力指数高于多糖疫苗组。两种疫苗在成人中诱导的抗荚膜抗体的功能活性差异，意味着各自激活了不同的B细胞群。 (兰州生物制品研究所崔萱林2001 流行性脑脊髓膜炎是由脑膜炎球菌(Meningococcus)引起的细菌性脑膜炎(简称流脑)，发病急，病死率高，且在各年龄组中都可发生，15岁以下儿童发病占75％以上。脑膜炎球菌根据荚膜多糖的结构可分为12个血清群，其中A、B、c群引发的流脑占90％以上。流脑的流行具有菌群漂移特点，如美国在1945年以前为A群流行，1960年以后以B群为主，1967年以后转为C群流行。我国以A群菌流行为主，B群和C群菌有少量病例，约占lO％左右。因此预防流脑的重点应是A、B、C群流脑球菌引起的疾病。由于流脑菌群的漂移现象，国外多采用多价多糖疫苗用于预防流行性脑脊髓膜炎，目前所使用的主要为A+C群二价疫苗(B群多糖对人体无效，主要研制外膜蛋白为基础的疫苗)，其次为A、C、Y及WI35四价疫苗，其它相关菌群引起的流脑病例已少见。国内目前主要使用A群流脑多糖疫苗，自80年代初使用至今效果很好；对于其它菌群的预防．目前尚未有疫苗出现，因此我们研制了A+C群流脑多糖疫苗，即在现有的A群流脑多糖疫苗中加入C群流脑多糖抗原，形成二价疫苗以预防A、C群流脑球菌引起的脑脊髓膜炎。 A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗的制造和检定均按照WHO(生物制品规程》的要求进行，C群流脑多糖原液的主要制造过程借鉴A群流脑多糖原液的生产工艺，在多糖纯化步骤另采用澄清过滤、苯酚抽提控制多糖浓度等措施，使得C群多糖原液的蛋白质和核酸含量符合要求。A群流脑多糖原液为选用的本所常规生产的原液制品。由于多糖原液在制备过程中未进行专门的除类毒素工艺，因而在原液检定中采用鲎试剂法对类毒素含量进行测定，以确保疫苗的安全性。 2岁以下年龄组儿童在接种A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗一个月后，虽然同组儿童的免前及免后的血清杀菌抗体滴度有显著差．但血清4倍阳转率较大年龄组儿童低，而且免后血清中的杀菌抗体滴度的整体水平也相对较低。提示低年龄组儿童对多糖疫苗的免疫应答水平较高年龄组儿童低，有关该疫苗人体接种后的安全性和免疫持久性的结果将另文报告。 A群脑膜炎球菌多糖疫苗自80年代在我国研制成功并广泛接种以来效果明显。我国A群带菌率和发病率大幅度下降，预防效果达90％以上。至今在我国引起流脑的脑膜炎球菌仍以A群为主，同时B群和C群的病例也开始出现。欧美国家主要流行菌群由A群转为B群和c群的事实。提示我们在A群脑膜炎被控制之后要防止B群和C群变迁。 1994年法国由法国巴斯德梅里厄血清疫苗研究所(PasteurMerreux)提供生产的A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗，申请在我国注册，中国药品生物制品检定所与河南省卫生防疫站协作，在河南省新县进行了人群安全性与免疫原性的现场考核，现将结果报告如下该疫苗较安全，免疫原性较强，且更具免疫持久性。2000 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制2000杨丽华 (长春生物制品研究所，长春130062)李风祥(中国药品生物制品检定所， 本试验制备的A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的理化特性及免疫特性与国内外文献报道结果一致。制备的结合疫苗可诱导出高水平的保护性A群脑膜炎球菌多糖抗体和TT抗体。结合疫苗具有很好的免疫原性和安全性。制备工艺稳定，重复性好，可批量生产。本试验为进一步临床评价结合疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。本试验选用Tr作为载体蛋白，因为这种蛋白目前已经标准化，作为载体蛋白的同时兼有预防伤风感染的作用，而用TT蛋白对于已经建立起的免疫程序和“自然”免疫并不产生干扰 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的制备熊慧玲成都生物制品研究所 预防A群脑膜炎球菌引起的脑脊髓膜炎，我国目前采用A群脑膜炎球菌多糖疫苗，而疫苗接种后，小于1岁的婴儿，即使加强接种产生的抗体只能维持1年，1～1．5岁半的婴幼儿，加强后只能维持2年，1．5～2岁的幼儿，接种1针维持不到1年_l1 。wHO指出，按目前的免疫程序，婴儿在出生后5年内至少需要免疫接种4次才可提供中度抗体水平一。说明A群脑膜炎球菌多糖疫苗在婴幼儿中，尤其在2岁以下，免疫原性低，即使产生抗体，抗体水平也不能长久保持。因而提高疫苗免疫原性，使它能对各年龄组，尤其2岁以下婴幼儿提供高水平的长期保护作用，有特别重要的意义。b型流感嗜血杆菌结合疫苗的成功研制和应用给我们以深刻的启示。和流感嗜血杆菌荚膜多糖一样，A群脑膜炎球菌多糖为半抗原，为非T细胞依赖性抗原，当与蛋白结合后，可转化为T细胞依赖性抗原，可刺激机体产生高水平的保护抗体，重复接种有记忆抗体产生因此，我们进行了A群脑膜球菌多糖结合疫苗的研制，并对经中国药品生物制品检定所检定合格的连续3批 2003 流行性脑脊髓膜炎(流脑)被发现并确认已有l00多年．尽管对此病已有有效的预防和治疗措施，但它仍是一种急性传染病．而且病死率高、继续威胁着人类，尤其是儿童的身体健康。我国目前使用的预防制品是A群脑膜炎球菌多糖疫苗，该疫苗对4岁以上儿童有很好免疫效果，对幼儿免疫效果较差，保护时问较短。而脑膜炎球菌多糖与一种蛋白载体连接构成结合疫苗．可增强其对幼儿的免疫回忆反应，提高预防效果?。卫生部成都生物制品研究所已研制成功“A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗”，并由中国药品生物制品检定所、卫生部成都生物制品研究所、江苏省疾病预防控制中心联合于2002年l0月～2003年1月在江苏省射阳县进行的“A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗临床研究”已圆满结束。现将婴幼儿接种A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性报告如下本次临床试验表明，3～4月婴幼儿接种A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的安全性，但由于该疫苗首次应用于人群，在大规模推广接种前，仍需对其安全性进一步进行观察 C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制与生产的科学挑战2004 世界卫生组织(WHO)生物制品标准化专家委员会于1976年通过了脑膜炎球菌多糖疫苗的建议，并于1978年和1981年进行了修订。在临床研究中，疫苗的有效率至少达9O% ，证明其在疫苗接种计划中高度有效。然而，不能在幼婴中诱生保护性应答或免疫记忆制约了其在英国婴儿免疫接种计划中的应用。随着b型流感杆菌(Hib)结合疫苗的成功引入，C群脑膜炎球菌(MenC)荚膜多糖结合疫苗的研究取得了显著的进展。临床对照试验已证实它们在所有年龄组中均可诱生针对MenC多糖的保护性水平的抗体，并且作为T细胞依赖性抗原，能诱导免疫记忆和抗荚膜抗体的亲和力成熟。英国引入MenC结合疫苗后，证实该疫苗可提供保护性免疫。WHO已经制定了有关这些新疫苗生产和检定的建议。 脑膜炎球菌是细菌性脑膜炎和败血病的重要病原。根据荚膜多糖在化学和血清学上的不同，脑膜炎球菌可分为若干群，其中A、B、C、Y、Wl35群对人致病。A群在
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵 第一部分酵母菌的分离纯化 一、实验目的 应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。 二、实验原理 酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。 三、器材和用品 1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。分装三角瓶；试管斜面1支/组 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。 4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。 四、实验方法 1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。 2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。 3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。 4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。 5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分
抗生素产生菌的分离与筛选
题目：抗生素产生菌的分离与筛选 (地衣孢杆菌产生菌的分离与筛选） 地衣类产生的物质被总称为地衣成分（德Fle－chtenstoff），但其中多为地衣所特有的有机酸类的成分特称为地衣酸。大致分为高级脂肪酸和芳香族酸。前者属于在冰岛衣中发现的原地衣甾酸（d－protolichesteric acid），约有数十种，后者是在石茸属（Gyrophora）、蓝藻衣属（CyanoPhila）等中的石茸酸，已知约有30种缩酚酸类，在睫毛苔中发现了水杨嗪酸（salazinic acid）并记载了包括水杨嗪酸在内共有12—13种缩酚酸环醚类（depsidones）。除扁枝衣属外，还广泛分布在如粉衣科（Calliciaceae）、粉果衣科（Crpheliaceae）、茶渍科（Lecanoraceae）、猿麻桛科等中已知有数种枕酸类。其他各种石蕊属（Cladonia）的红色子器的色素红石蕊酸（rhodocladonic acid）属于蒽醌类的约有10种。地衣是藻类和菌的共生体。一般认为是以藻类的同化产物为原料由菌类制造出地衣成分。在地衣的分类中，非常重视地衣成分，通过提取出来的成分即地衣酸对各种试剂的呈色反应的有无
来鉴定其类属。 种类： 地衣酸有多种类型。从1944年开始研究地衣抗菌物质，迄今已知的地衣酸有300多种。据估计50％以上地衣种类都具这类抗菌物质。如松萝酸(usnic acid)、地衣硬酸(liches terinic acid)、去甲环萝酸(evernic acid)、袋衣酸(physodic acid)、小红石蕊酸(didymicacid)、绵腹衣酸(anziaicacid)、柔扁枝衣酸(divaicatic acid)、石花酸(sekikaic acid)等。这些抗菌物质对革兰阳性细菌多具抗菌活性，对于抗结核杆菌有高度活性。地衣抗菌素在德国以“EV osin I”(包括松萝酸及去甲环萝酸)，“Evosin II”〔包括松萝酸、袋衣酸及袋衣甾酸(physodalic acid)]两种产品在医疗使用；在瑞士、奥地利、芬兰、前苏联等国则以松萝酸的多种剂型作为治疗新鲜创伤以及表面化脓性伤口的有效外用抗菌素。 实验目的： 1. 明确培养基的配制原理。
剖析地衣体的共生
地衣是一类很特殊的植物，它们是由一种藻类和一种真菌共生（少数种类为两种藻类和一种真菌共生）的复合有机体。构成地衣体的藻、菌之间紧密地结合，长期地共同生活，无论在形态、构造、生理功能和遗传上都形成一个独立的固定有机体，它既不同于一般的藻类，也不同于一般的真菌，而是一个特殊的植物新类型，这是长期历史发展进化的结果。 构成地衣的真菌绝大多数为子囊菌，少数为担子菌，还有极少数为半知菌和藻状菌；而地衣体中的藻类有原核的蓝藻和真核的绿藻。一般认为地衣体中这两种生物之间是一种“互惠共生”（ｍｕｔｕａｌｉｓｍ）的关系，其中真菌的菌丝缠绕着藻细胞，并从外面包围藻细胞，控制着藻类，并决定着地衣体的形态，它们靠菌丝从外界环境中吸收水分和无机盐，以供给藻类；而藻类进行光合作用制造的有机养料除供自身生长发育外，大部分供给共生的真菌。在这种共生体中，它们彼此的生存都是以对方的生存为前提，互相依赖，互惠互利。 但也有实验证明，若通过一定的方法将地衣体中的真菌和藻类分离，分别进行培养，则藻类能正常生长发育，而真菌则会死亡，这说明地衣体中两种生物之间的这种共生关系是不均衡的，真菌在某种程度上控制着藻类，使藻类成为它营养的来源，也就是说真菌的生存必须依赖于藻类；而失去“自由”的藻类要生活也不得不依赖于相应的真菌。对于这种特殊的共生关系，德国植物学家施文德奈尔把它比喻为“主奴共生”（ｈｅｌｏｔｉｓｍ），即真菌为“主”，藻类为“奴”。 关于藻、菌共生的本质，确实是个极为复杂的问题，迄今的实验证据还不足以全面回答这个难题。但是，根据研究进展，地衣体的共生菌是依赖于共生藻的光合作用提供碳源而生活。如果共生藻为念珠藻或称念珠蓝细菌，它还能从大气中固定氮素。在地衣体内共生菌伸出吸器从共生藻的生活细胞中获得有机营养（寄生现象）。有的进入吸器将部分藻细胞致死后继续吸收残余养分（腐生现象）。藻细胞膜的透性也被共生菌所改变，从而加强了藻细胞内养分的外渗，有利于共生菌的吸收利用。另一方面，藻细胞由于被交织的菌丝组织所包围而免遭外界的损伤；同时使光照强度适当减弱，这也有利于共生藻在弱光照下的生命活动；通过菌丝组织的吸水与失水过程，有利于矿物盐的积累供藻细胞光合作用之需。实验证明，参与地衣藻、菌共生的藻类在光合作用下所释放的碳化物类型因共生藻的类群不同而各异。通常念珠藻和伪枝藻释放葡萄糖，橘色藻释放赤藓醇，明球藻则释放山梨糖醇，而胶球藻及共球藻却释放核糖醇。至于氮素营养，地衣除了从其周围生境中吸收利用之外，其共生蓝藻还可直接从大气中固定。因此，长期以来，关于地衣中的藻、菌共生被理解为“互惠共生”。但是，也有人认为是“寄生”（ｐａｒａｓｉｔｉｓｍ）或“内腐生”（ｅｎｄｏｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｓｍ）。美国学者阿玛简以一种红头石蕊的实验结果为例，将地衣中的菌、藻共生解释为“有控寄生”（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｐａｒａ－ｓｉｔｉｓｍ），就像人类饲养家禽以提高人类营养水平。这一观点，实际上正是施文德奈尔“主奴共生”的现代解释，而“有控寄生”则为其科学术语。 由此看来，地衣实际上是一群专化性很强的真菌（其中绝大多数为子囊菌），基于此，有些学者主张地衣就是真菌门的一个类群。但是，它们在自然界必须要和藻类共生形成共生体才能生存，因此，地衣应为独立的一门植物，和真菌并归入真菌界。（ＢＦ） 剖析地衣体的共生 张晓丽武宇红（邢台学院生物系河北邢台０５４００１） 膜电位复极化的机制有别于静息电位的产生和维持 徐兆麟（上海师范大学附属中学上海２００２３４） 在中学生物学教材中，对于神经细胞静息膜电位的产生一般都叙述得比较详细而准确，对于动作电位的产生虽然也作了叙述，但是重点只讲了膜两侧电荷分布的去极化和反极化的原因，而对于复极化和超极化则往往一笔带过。但是在许多练习资料中，常常出现有关这方面的习题，如果按照中学课本的内容就无法解答，或得出错误解答。 试举一例： 当动作电位刚刚通过神经纤维，细胞膜又恢复为静息电位时，发生的离子移动主要是（）。 Ａ．Ｋ＋经主动转运出膜外 Ｂ．Ｎａ＋经主动转运出膜外 Ｃ．Ｋ＋经主动转运入膜内 Ｄ．Ｎａ＋经主动转运入膜内 ２４生物学通报２００５年第４０卷第６期
实验 酵母RNA的分离及组分鉴定
※实验六酵母RNA的分离及组分鉴定 【实验目的】 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 【实验原理】 酵母核酸种RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。 【实验器材】 150 ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管8、试管及试管架9、烧杯、离心机、漏斗 【试剂和材料】 1、0.04 mol/L氢氧化钠溶液； 2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中； 3、95%乙醇； 4、乙醚； 5、1.5 mol/L硫酸溶液； 6、浓氨水； 7、0.1 mol/L硝酸银溶液； 8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10% 三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400 ml浓盐酸中； 9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）； 10、定磷试剂：（1）17% 硫酸溶液：将19 ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 ml 水中（2）2.5% 钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10% 抗坏血酸溶液：10 g抗坏血酸溶于100 ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。17% 硫酸溶液：2.5%
酵母菌的分离筛选方法
酵母菌的分离筛选方法 酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条 件下，液体培养比霉菌快。菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明， 菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色， 圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。 含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。 1.培养基： 1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO4 2.5g/L Na2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加 拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用） ★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用 蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱 布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培 养用）（富集用） ★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过 滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤， 10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min （分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用） ★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/L KH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼 脂15g/L PH自然
（分离纯化用） ★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L 1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用 蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。 2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。若从样品中分离特定种类时先集菌。集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。 实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化 土壤是微生物生活的大本营，是寻早有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同图样中各类微生物的含量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。放线菌一般在较干燥、偏碱性、有机质较多的土壤中较多；霉菌在含有机质丰富、偏酸性、通气性较好的土壤中较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在酒曲、面肥、水果表皮、果园土壤中数量多些。（一）菌源 1土样用无菌的采样小铲在橘树果园中取土壤表层下1~10cm土壤10g，装入灭菌的牛皮纸袋内。封好袋口，记录取样地点、环境及日期。图样采集后应及时分离，饭不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥的条件下，以减少其中菌相的变化。 2面肥 （1）面粉500克，白酒100克，水250，和好静置发酵就可以了。冬季10个小时。（2）在温水中兑一点酒，倒入适量面粉拌匀后放入绝缘保温盛器（陶瓷，砂锅）中，用布将整个盛器盖好置于温度较高处，6小时后即成面肥。 *以上方法做出的面肥只能保存几天，不宜放置太久。 3水果果皮 桔子和葡萄等的果皮上含有数量较多的酵母菌，既可单独作为菌源也可以和果园土壤作为混合菌源。 （二）酵母菌的分离 1制备菌悬液 称取菌源1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。振荡20min，即成10-2的菌源悬液。再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。 2涂布法分离 取融化并冷却至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的豆芽汁葡萄糖培养基平板上。每个稀释度做2~3个平行皿。左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。3培养 接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养2~3天，观察结果。 4纯化 用接种环挑取单个单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。 酵母扩培方案 一、培养基制备 (一)麦芽汁培养基的配制 1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直
中药鉴定学,第九单元,藻菌地衣类中药
中药鉴定学——第九单元藻菌地衣类中药 植物界的分类 种：植物分类的基本单位——生殖隔离 一、藻菌地衣类中药概述 1.藻类 2.菌类——真菌 真菌的变态菌丝组织体 ①子实体：灵芝、马勃 高等真菌有性生殖时形成的具有一定形态和结构，并能产生孢子的菌丝体 ②子座 冬虫夏草——子座与幼虫尸体的复合体 由菌丝形成菌丝褥座，子实体褥座上产生孢子 ③菌核：茯苓、猪苓、雷丸 是一种坚硬的核，是渡过不良环境的菌丝休眠体，如茯苓 3.地衣——菌类和藻类的共生体。 菌类的菌丝包裹着藻细胞形成的，共生体由藻类进行光合作用制造有机物质供给全体，菌类主要吸收水分和无机盐。 如：松萝、雪茶、石耳、石蕊 二、常用菌藻地衣类中药 1.冬虫夏草* 【来源】麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫的子座和幼虫尸体的复合体。
【产地】四川、青海、西藏 【性状】虫体似蚕，表面深黄色至黄棕色，有环纹20～30个，头部红棕色，有足八对，中部4对最明显。气微腥，味微苦。 2.灵芝* 【来源】多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。 3.茯苓* VS猪苓 三、藻菌地衣类中药其他重点总结 主要成分 1.冬虫夏草：腺苷、虫草酸 2.灵芝：灵芝多糖 下列关于冬虫夏草的性状特征描述不正确的是 A.虫体与子座相连，头部红棕色 B.虫体似蚕，表面深黄色，有环纹20～30个 C.足8对，中部4对较明显 D.子座质脆，易折断，断面略平坦，淡黄白色 E.气微腥，味微苦 『正确答案』D 赤芝的性状鉴别特征不包括 A.外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形 B.皮壳紫黑色，有漆样光泽 C.菌肉白色至淡棕色
D.菌柄圆柱形，红褐色至紫褐色，光亮 E.气微香，味苦涩 『正确答案』B 呈不规则厚片，厚薄不一，白色，淡红色或淡棕色，气微，味淡，嚼之黏牙的药材是 A.白术 B.茯苓 C.猪苓 D.川芎 E.灵芝 『正确答案』B A.马尾藻科 B.多孔菌科 C.麦角菌科 D.松萝科 E.白蘑科 以下原植物的科属分别是 1.海藻 2.茯苓 3.冬虫夏草 4.灵芝 5.松萝 『正确答案』ABCBD A.海藻 B.冬虫夏草 C.松萝 D.马勃 E.雷丸 上述药材的药用部位分别是 1.藻体 2.菌核 3.子实体 4.地衣体 5.子座及幼虫尸体的复合体 『正确答案』AEDCB
中药鉴定学 答案
中药鉴定学 1.来源于子囊菌纲菌类植物的中药材是(C冬虫夏草) 2.冬虫夏草主产于(C四川、青海等地) 3.取不同的入药部位加工成板蓝根、大青叶、青黛的植物是(B菘蓝) 4.置火中易燃烧，发生爆鸣声且有闪光的中药材为(D海金沙) 5.冬虫夏草有足八对，其中(B中部四对较明显) 6.树脂多为植物体内哪一类成分经过复杂的化学变化而形成(D挥发油类) 7.含有松根的茯苓饮片称为(D茯神) 8.叶对生，茎方柱形、表面紫棕色或淡绿色，有特殊清凉香气的药材是(B薄荷) 9.青香薷的原植物是(A石香薷) 10.下列关于没药的描述，不正确的是(D主要含酯树脂) 11.为深蓝色粉末，微有草腥气，味淡的中药材是(E青黛) 12.下列为酯树脂类中药材的是(B血竭) 13.《中国药典》规定，天然冰片的来源是(D樟科植物樟的新鲜枝、叶中提取的右旋龙脑) 14.下列不是猪苓的性状特征的是(C体重质坚实，入水下沉) 15.来源于地衣类植物的中药材是(B松萝) 16.下列对儿茶的描述，不正确的是(B主产于四川、重庆等地) 17.下列对灵芝的描述不正确的是(B入药部位为菌核) 18.按化学组成分类，乳香属于(C油胶树脂类) 19.火烧时产生紫红色烟雾的中药材为(B青黛) 20.采收加工时必须经“发汗”处理的药材为(C茯苓)
21.金钱草的性状鉴别特征有(B茎表面棕色或暗棕红色，无毛或被疏柔毛C叶对生，多皱缩，展开后呈宽卵形或心彤D有的带花，花黄色，单生叶腋，具长梗E叶片水浸后对光透视，可见黑色或褐色条纹) 22.茵陈的特点为(B一至三回羽状分裂C全株密被灰白色茸毛，细软如绒D茎呈圆柱形，多分枝E秋季花蕾长成至花初开时采割的称“花茵陈”) 23.香薷的原植物有(A石香薷B江香薷) 24.下列与药用关系密切的藻类是(A褐藻门B绿藻门C红藻门) 25.茯苓的饮片包括以下哪些(A白茯苓B赤茯苓D茯神) 26.肉苁蓉的性状特征为(A扁圆柱形B表面密被覆瓦状排列的肉质鳞片C体重，质硬，不易折断D断面棕褐色，有点状维管柬排列成波状环纹) 27.药用部位为菌核的中药材为(A茯苓E猪苓) 28.赤芝的性状特征有(A菌盖半圆形或肾形B皮壳红褐色，具环状棱纹和辐射状皱纹E 菌柄侧生) 29.下列哪些特征是茯苓和猪苓的共同点(A来源于多孔菌科B菌核入药) 30.来源于担子菌纲植物的中药材为(B茯苓D猪苓E灵芝) 31.来源于菊科植物的药材有(B青蒿C茵陈D蒲公英) 32.肉苁蓉饮片的性状鉴别特征有(B表面棕褐色或灰棕色，有的可见肉质鳞叶D切面有点状维管束排列成不规则的波状环纹或成条状而散列E气微，味甜、微苦) 33.下列关于树脂的通性描述，正确的是(A通常为无定形固体B燃烧时有浓烟或明亮的火焰，并有特殊的香气或臭气C加热容易变软，最后熔融D易溶于乙醇、三氯甲烷等有机溶剂E不溶于水)
地衣
地衣 地衣是真菌和光合生物（绿藻或蓝细菌）之间稳定而又互利的共生联合体，真菌是主要成员，其形态及后代的繁殖均依靠真菌。也就是说地衣是一类专化性的特殊真菌。传统定义曾把地衣看作是真菌与藻类共生的特殊低等植物。1867年，德国植物学家施文德纳作出了地衣是由两种截然不同的生物共生的结论。在这以前，地衣一直被误认为是一类特殊而单一的绿色植物。全世界已描述的地衣有500多属，26000多种。从两极至赤道，由高山到平原，从森林到荒漠，到处都有地衣生长。 主要分类 在地衣中，光合生物分布在内部，形成光合生物层或均匀分布在疏松的髓层中，菌丝缠绕并包围藻类。在共生关系中，光合生物层进行光合作用为整个生物体制造有机养分，而菌类则吸收水分和无机盐，为光合生物提供光合作用的原料，并围裹光合生物细胞，以保持一定的形态和湿度。真菌和光合生物的共生不是对等的，受益多的是真菌，将它们分开培养，光合生物能生长繁殖，但菌类则“饿”死。故有人提出了地衣是寄生在光合生物上的特殊真菌。 ◆壳状地衣：植物体扁平成壳状，植物体紧附树皮、岩石或其他物体上。底面和基质紧密相连，难以分离，例如茶渍属、文字衣属。
异层地衣的内部分化为四个部分：最上面的部分是由垂直菌丝组成的，这些菌丝之间没有间隙或者充满着胶质物，叫做上皮层，在它的上面有的种类有一层由菌丝组成的表皮组织状的外皮；在上皮层的下方，由稍疏松交织的菌丝组成；其中混杂有藻细胞，叫做藻胞层；藻胞层下方是由紧密的菌丝组成，叫做髓层；髓层以下由紧密的菌丝组成，叫做下皮层。同层细胞没有藻胞层与髓层的分化藻细胞均匀分布在髓中。地衣下皮层的菌丝垂直或平行于基质表面，其中一部分菌丝成束或单一的深入基质内，起吸收和故着作用。 枝状地衣则不分上下皮层，整个皮层围着一层皮层，皮层内为一圈藻层，中央部分是髓层，也属异层地衣。 地衣的繁殖 地衣最常见的是营养繁殖。如地衣体的断裂，每个裂片都可发育为新个体。有的地衣表面由几根菌丝缠绕数个光合生物细胞所组成的粉芽，也可进行繁殖。 有性生殖是参与共生的真菌独立进行的，在担子衣中为子实层体，包括担子和担孢子；在子囊衣中为子囊果，包括子囊腔、子囊壳和子囊盘。在囊腔类子囊杂乱地堆积于囊腔中；在囊层类子囊整齐地排列在子囊壳或子囊盘内。这些特征与非地衣型真菌基本上是一致的。只有一种叫孢子囊果的繁殖体为某些地衣所独有。这种繁殖体最初是生抱子器，随后到生出子囊及侧丝，变为子囊果。 地衣型子囊盘包括以下4种类型。 ①茶渍型：有果托，果托是子囊盘周围的地衣体向上升起所形成
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化 ?实验目的 1.了解培养基的配置与灭菌技术； 2.无菌操作技术； 3.工业微生物的分离与纯化技术； 4.工业微生物的检测及保藏。 ?基本原理 1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。 2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。 3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。此次实验采用梯度稀释涂布平板法。 4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材 仪器设备 恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器 玻璃器皿 烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片 试剂与材料 苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液 其它 纱布、滤纸 实验内容及操作步骤 (一)、样品的选择 酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。（二）、样品的处理 制备苹果悬液 1.首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。 2.激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。 3.用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。 4.再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取 三次并混匀。 5.同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀释度的苹果悬液。
主管中药师题-藻、菌、地衣类中药
主管中药师题-藻、菌、地衣类中药 1、非猪苓药材特征的选项是 A.呈不规则条形,块状或者扁块状 B.体重质坚实，入水下沉 C.表面灰黑色或棕黑色，有瘤状突起 D.断面类白色或黄白色，粉末中菌丝团，大多无色 E.草酸钙结晶多呈双锥八面体或正方八面体 2、下列哪项不是猪苓的特征 A.表面灰黑色或棕黑色，有瘤状突起 B.体重质坚实，入水下沉 C.呈不规则条形,块状或者扁块状 D.断面类白色或黄白色，粉末中菌丝团，大多无色 E.草酸钙结晶多呈双锥八面体或正方八面体 3、下列哪项不是灵芝（赤芝）的性状特征 A.菌盖与菌柄表面紫黑色，有光泽，菌肉锈褐色 B.皮壳边缘薄，常向内卷曲 C.菌盖半圆形,肾形，具环状棱纹和放射状皱纹 D.气微香，味微苦涩 E.菌柄扁圆柱形，红褐色至紫褐色，有漆样光泽
4、下列哪项不是茯苓的性状特征 A.外皮棕褐色至黑褐色，粗糙，有明显皱纹 B.体轻，能浮于水面 C.呈类球形,椭圆形或不规则块状 D.断面内部白色，少数淡红色 E.无臭，味淡，嚼之粘牙 5、镜检可见不规则的菌丝团；菌丝细长，有分枝，无色或带棕色，可见八面形结晶体的药材是 A.灵芝 B.松萝 C.马勃 D.茯苓 E.猪苓 6、非冬虫夏草药材的性状特征是 A.虫体黄色 B.虫体环纹有20余条 C.子座侧生，多分枝 D.虫体质脆，易折断，断面略平坦，黄白色 E.腹面有足8对
7、地衣类药材是 A.灵芝 B.松萝 C.银耳 D.冬虫夏草 E.马勃 8、非茯苓性状特征的是 A.外皮棕褐色至黑褐色，粗糙，有明显皱纹 B.体轻，能浮于水面 C.呈类球形,椭圆形或不规则块状 D.无臭，味淡，嚼之粘牙 E.断面内部自色，少数淡红色 9、以菌核入药的药材是 A.灵芝 B.银耳 C.猪苓 D.冬虫夏草 E.马勃
奈瑟菌属详细介绍及防治原则
奈瑟菌属 奈瑟菌属（Neisseria）是一群革兰染色阴性双球菌，是β-变形菌类的一属无芽孢，无鞭毛，有菌毛，专性需氧，氧化酶阳性。奈瑟菌呈球形，成对排列，形似咖啡豆的革兰阴性球菌，通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外，新分离株有荚膜和菌毛。 此菌属包括脑膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）、淋病奈瑟菌（N. gonorrhoeae）、干燥奈瑟菌（N. sicca）、微黄奈瑟菌（N. subflava）、浅黄奈瑟菌（N. flavescens）、粘液奈瑟菌（N. mucosa）等。其中能引起人体发病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。典型的标本涂片，镜下在中性粒细胞内可见到成双排列的脑膜炎奈瑟菌或淋球菌。其他奈瑟菌多为人体呼吸道中寄生的正常菌群。镜下观察时多存在于细胞外。奈瑟菌属细菌常可发酵多种糖类，产酸不产气。糖发酵试验可用于鉴别此属细菌。 脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌遗传性上十分接近，DNA序列存在70%的同源性。主要不同点表现为：①脑膜炎球菌有多糖成分的荚膜，淋球菌分离初期有荚膜；②脑膜炎球菌菌体内很少有质粒，淋球菌可携带几种质粒；③脑膜炎球菌存在于呼吸道，引起脑膜炎，淋球菌引起泌尿生殖系统疾病。 脑膜炎奈瑟菌 生物学性状 1．形态与染色呈肾形或豆形，成双排列，两菌接触面平坦或略向内陷， 直径0.6-0.8 μm。人工培养后可成卵圆形或球形。革兰染色阴性。在 患者脑脊液中，多位于中性粒细胞内，形态典型。无鞭毛，无芽胞，新 分离菌株有荚膜。 2．培养特性营养要求较高，常用的培养基是血琼脂平板和巧克力色平板。专性需氧，初次分离培养须供给5%-10%的CO2。37℃孵育24 h后形成1.0-1.5 mm的无色、圆形、凸起、光滑、透明，似露滴状的菌落，无溶血现象。多数菌能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气。氧化酶试验阳性。
第十三章 藻、菌、地衣类中药
第十三章藻、菌、地衣类中药 学习要点： 1.概述中的内容。 2.各药材的来源及性状鉴别特征、部分药材的主产地及特殊的加工方法。 3.部分药材的成分类别及主要成分。 4.部分药材的理化鉴别方法及结果。 5.部分药材的含量测定方法及被测定成分。 6.冬虫夏草伪品及混淆品的来源及鉴定要点。 复习题 【A型题】（在每小题给出的A、B、C、D、E5个备选答案中，只有1项是最符合题目要求的） 1.藻类、菌类和地衣类属于D A.高等植物 B.被子植物 C.裸子植物 D.低等植物 E.蕨类植物 2.褐藻所含的无机元素主要是D A.钙 B.铁 C.钠钾 D.碘 E.镁 3.海带中含碘量高达A A.0.34% B.0.35% C.0.33% D.0.4% E.0.3% 4.真菌菌丝呈长形细胞，或多或少相互平行排列，称为B A.栅栏组织 B.疏丝组织 C.拟薄壁组织 D.海绵组织 E. 子实体 5.地衣中最特殊的成分是A A.地衣酸 B.地衣色素 C.地衣多糖 D.蒽醌类 E.地衣淀粉 6.海藻的原植物是C A.鹧鸪菜 B.海人草 C.海蒿子或羊栖菜 D.海蒿子或海人草 E.以上都不对 7.大叶海藻的性状鉴别特征之一是A A.初生叶披针形或倒卵形，全缘或具粗锯齿 B.叶条形或细匙形，先端膨大、中空 C.分枝互生，无刺状突起 D.次生叶卵状披针形，较宽
E.质硬，受潮不变软 8.小叶海藻的性状鉴别特征之一是B A.初生叶披针形或倒卵形，全缘或具粗锯齿 B. 叶条形或细匙形，先端膨大、中空 C.侧枝有刺状突起 D.次生叶卵状披针形，较宽 E.质脆，受潮变软 9.大叶海藻和小叶海藻最主要的区别是D A.颜色不同 B.大小不同 C.叶形不同 D.质地不同 E.气味不同 10.以身干、色黑褐、盐霜少、枝嫩、无杂质者为佳的药材是A A.海藻 B.冬虫夏草 C.松萝 D.猪苓 E.以上都不对 11.含藻胶酸、粗蛋白、甘露醇、钾、碘及马尾藻多糖等成分的药材是D A.灵芝 B.松萝 C.茯苓 D.海藻 E.冬虫夏草 12.冬虫夏草的入药部位是冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的干燥D A.子实体 B.菌核 C.子座 D.子座和幼虫尸体 E.幼虫尸体 13.冬虫夏草的药材拉丁名是E A.sargassum B.Lichenes C.Ganoderma D.Poria E.Cordyceps 14.冬虫夏草的最佳采收期是D A.春天未出土时 B.冬天 C.秋天长成后 D.夏初子座出土，孢子未发散时 E.夏天孢子成熟后 15.冬虫夏草的鉴别特征是A A.形如蚕，长3～5㎝，粗约3～8㎜；外表深黄色至黄棕色，头部黄红色至红棕色 B.长3～5㎝，粗约3～8㎜；外表淡黄色，头部黑色 C.长5～8㎝，外表土黄色至黄棕色，头部黄绿色 D.长5～8㎝，外表淡黄色，头部暗黄色 E.长3～5㎝，粗约3～8㎜；外表深棕色至棕红色，头部暗棕色
酵母菌的培养与分离
. . . 微生物学大实验 实验指导 编者： 生物技术教研室 2007.3
目录 实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27
耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究 实验一酵母菌的培养与分离 一、实验目的 学习培养和分离酵母菌的技术和方法 二、基本原理 大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。 利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。 三、实验主要内容和要求 （一）本次实验的方案由同学们自己制定，实验包括： 1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。 2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株。 3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。 4.用划线分离法对酵母菌进行纯化，要求每组挑取单个菌落，连续划线分离4代，镜下为单一纯菌株，每组扩繁10支斜面菌种，备用。 四、实验的准备 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。 配制方法： （1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。 （2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种。 （3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。