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ICH-免疫组化

Day1

1.按原位方法收集胚胎,固定。

2.MeOH : PBST梯度洗脱(3:1,1:1,1:3,最后PBST洗)

3.pronase K处理(1:1000 PBST,事先稀释好)(适用于过夜固定的

胚胎)

4.4%PFA 1ml 固定5min

5.PBST洗5次

6.用blocking solution 500ul洗一次,再加1 ml blocking solution 室温

2-3h

7.吸取液体,加入有抗体的blocking solution(1:1000),4度,摇晃

过夜。

Day2

1.PBST 洗3次,不用摇晃。再用PBST洗5min/次,洗30min

2.加blocking solution,室温摇晃1h

3.加入二抗(用blocking solution事先稀释,4度避光保存),室温避

光摇晃2h

4.PBST洗2次,摇晃,(适用于生物素标记的二抗)

Solution

PBST - PBS plus 0.1% Tween