1.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 4学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

预习内容：

1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页）

2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页）预习思考题：

1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？

2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？

3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？

4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?

一、实验目的与要求

1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；

2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；

3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；

4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理

1. 酵母菌

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）

三、实验设备及材料

1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。

2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。

3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。

四、实验步骤与内容

1．美蓝浸片的观察

（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下

使其盖在菌液上，用吸水纸吸取多余的液体。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态

和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞，绘图。

（4）染色约0.5h后再次观察并绘图，注意死细胞数量是否增加。

（5）用0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。

（6）清洗载玻片，整理实验台。

2．水-碘液浸片的观察(选做)

在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用碘液(卢戈氏碘液)，然后在其上加3 小滴

水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

五、实验结果

绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征、出芽情况及死活细胞数量变化。

图1：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×10）图2：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×40）

图3：酵母菌0.1%美蓝浸片观察30min（10×40）图4：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）

图5：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）图6：酵母菌0.05%美蓝浸片观察30min（10×40）注意：显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。

物镜倍数（低倍镜10倍，高倍镜40倍，油镜100倍）

六、思考题

1. 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？

试分析其原因。

美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。

原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时

间较长都会对细胞结构造成破坏。

2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？

要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别练习题

一、名词解释

1. 假菌丝：酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，

容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。

二、填空题

1. 高倍镜头的数值孔径通常为，放大倍数为。

2. 油镜头的数值孔径通常为，放大倍数为。

3. 低倍镜头的数值孔径通常是，放大倍数为。

4. 使用显微镜低倍镜观察时，聚光器应该，使用显微镜高倍镜观察时，

聚光器应该适当。

5. 显微镜的微动螺旋每转一圈升降距离为。

6. 显微镜的光学系统由、、和组成。

7. 显微镜的机械部分包括

等九部分组成。

8. 简单染色的操作程序是

9．酵母菌通过0.1%美兰染色1~2分钟后，活细胞呈色，死细胞呈色；

10. 在其它条件相同的情况下，物镜放大倍数越大，焦距，其工作距

离，所需光量。

11. 用日光灯作光源时，通常用反光镜，用自然光作光源时，通常用反

光镜。

12. 显微镜的倍数越大，焦深越，调焦应该越。

三、选择题

1. 对光学显微镜观察效果影响最大的是：（）

A 目镜

B 物镜

C 聚光器D总放大倍数

2. 目镜头上的"K"字母表示：（C ）

A.广视野目镜

B.惠更斯目镜

C.补偿目镜；

3. 目镜头上的"P"字母表示：（A ）

A.平场目镜

B.广视野目镜

C.平场补偿目镜

4. 物镜头上的"PL"字母表示：（A ）

A.正低相差物镜

B.正高相差物镜

C.负高相差物镜。

5. 物镜头上的"UVL"字母表示：（C ）

A.无荧光物镜

B.照相物镜

C.相差物镜。

6. 镜头上标有"对C"字母的镜头是：（A ）

A.相差调整望远镜

B.摄影目镜

C.相差目镜

7. 物镜头上的"APO"字母代表（B ）

A.消色差物镜

B.复消色差物镜

C.半消色差物镜

8．物镜头上的"Ach"字母表示（A ）

A.平场物镜

B.超平场物镜

C.消色差物镜

9．物镜头上的“NH”字母表示：（C ）

A.正相差物镜

B.负相差物镜

C.负高相差物镜

10．物镜头上的“0.17”表示：（A ）

A.要求的盖玻片厚度

B.要求的载玻片厚度

C.镜头浸油的深度11．镜头上标有“NK"字母的镜头是（A ）

A.照相目镜

B.荧光目镜

C.相差目镜

12．目镜头上的“PK”字母表示（C ）

A.平场目镜

B.补偿目镜

C.平场补偿目镜

13．物镜头上的"Splan"字母表示（A ）

A.超平场物镜

B.平场物镜

C.消色差物镜

14．物镜头上的"SplanApo"表示（A ）

A.超平场复消色差物镜

B.超平场半消色差物镜

C.超平场物镜

15.物镜头上的"Planapo"表示（C）

A.超平场物镜

B.平场物镜

C.平场复消色差物镜

16．物镜头上的"Plan"字母表示（A ）

A.平场物镜

B.消色差物镜

C.超平场物镜

17．目镜头上的"W"字母表示（C ）

A.广视野高眼点补偿目镜

B.高眼点目镜

C.广视野目镜18．目镜头上的"SWK"字母表示（A ）

A.超广视野目镜

B.高眼点补偿目镜

C.平场补偿目镜

19.目镜头上的"WHK"字母表示（B ）

A.超广视野目镜

B.广视野高眼点目镜

C.平场补偿目镜

20.物镜头上的"错.L"字母表示（B ）

A.消色差物镜

B.半消色差物镜

C.复消色差物镜

四、判断是非题

1. 显微镜的放大倍数越高，其视野越大。（）

2. 浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。( )

3. 为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后，直接用油镜观察。( )

4. 使用油镜的正确操作步骤是：低倍镜观察→高倍镜观察→转出高倍镜头，滴

加香柏油后用油镜观察。（）

5. 在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。（）

6. 显微镜镜头的放大倍数越大,它的数值孔径值越大,其镜口角也越大。（）

7. 用油镜镜检时应将聚光器升至最高。（）

8. 使用高倍镜时，可将聚光器升至最高。（）

9. 显微镜的放大倍数愈高，其视野面积愈大。（）

10. 光学显微镜的分辨率与介质折射率有关，由于香柏油的介质折射率（约1.5）

高于空气（1.0）。因此使用油镜的观察效果好于高倍镜，目前科学家正在寻找折射率比香柏油更高的介质以改进光学显微镜的观察效果。（）五．问答题

1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响? 试分析其原因。

美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。

原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏。

2. 显微镜下观察酵母菌的个体形态特征与细菌个体形态特征有何不同?

要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器

3. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?

4. 简述酵母菌死亡率测定的原理。

答：死亡率测定的原理：活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强。当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色。在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌。

方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。

计算公式：

酵母菌形态观察

微生物实验报告 酵母菌的形态观察 一、目的要求： 1、掌握普通光学显微镜的使用方法和注意事项 2、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别 3、学习鉴别死活酵母细胞的实验方法 二、器材和器皿： 1、酵母菌 2、生理盐水、美蓝染色液、 3、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种针、擦镜纸 三、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 四、操作步骤： （一）显微镜的主要构造： 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。（二）显微镜的使用方法 1．低倍镜的使用方法 （1）取镜和放置： 显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。 （2）调节光源 （3）低倍镜观察 先将标本玻片置于载物台上，并将标本部位处于物镜的正下方，以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。 然后，两眼同时睁开，左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。

实验三 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 实验时间：2019-9-19 星期三 一、目的要求 ⑴. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式, 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法 ⑵. 掌握酵母菌一般形态特征及其与细菌的区别 二、基本原理 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍，大 多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母的活细胞 进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型，因此具有还原能力的酵母活细胞是无色的而死细胞或代谢作用 微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞或活细胞进行鉴别，并可 计算其成活率。 三、实验器材 ⑴. 菌种：酿酒酵母培养约2d 的麦芽汁斜面培养物 ⑵溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 革兰染色用碘液 ⑶仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片接种环、洒精灯等 四、操作步骤 美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检水-碘浸片观察 1. 美蓝浸片的观察 ⑴在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中, 混合均匀。 ⑵用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 ⑶将制片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 4学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 预习内容： 1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页） 2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页）预习思考题： 1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？ 2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？ 3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？ 4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。 5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它? 一、实验目的与要求 1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法； 2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理 1. 酵母菌 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。 大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40） 三、实验设备及材料 1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。 2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。 3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。 四、实验步骤与内容 1．美蓝浸片的观察 （1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。 注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

酵母菌的形态观察

【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于蒸馏水中，混合均匀。 2)干燥固定。将载玻片在酒精灯上方来回移动，注意不要让载玻片距离火焰过近，以免烫死酵母菌细胞，可用手背反复试温度。 3)染色。孔雀绿染色 1-2min；水洗后用95%的乙醇溶液脱色30s；水洗后用番红染液复染1min；水洗后干燥。 4)镜检。将制好的装片放在显微镜下镜检，由低倍镜到高倍镜，最后用油镜观察。

酵母菌的形态观察

姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别3 【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于

新版酵母菌形态观察实验报告单课件.doc

酵母菌形态观察实验报告单 班级日期姓名 实验目的 认识酵母菌的形态结构，掌握其观察方法。 实验内容 1．酵母菌菌落特征的观察 2．酵母菌细胞形态及芽殖方式 3．液泡的活体染色观察 4．肝糖粒染色观察 5．脂肪粒染色观察 实验原理 酵母菌是单细胞真菌，通常呈圆形、椭圆形或卵圆形，其菌落较大而厚， 湿润，较光滑，颜色多为乳白、灰黄、淡黄、灰褐色，少见粉红或红色，偶见黑色。酵母菌个体比细菌大几倍到十几倍， 在高倍镜下即能观察清楚。细胞内常有明显的细胞核及其内含物。无性繁殖以芽殖为主，在细胞的一端初生小突起如芽，逐渐增大，芽缢裂而与母细胞分离，形成独立的菌体。发生的芽如不立即脱离母细胞并继续出芽，则多数芽细胞集聚成芽簇。在陈旧培养中，芽簇细胞伸长成丝状，称假菌丝。 酵母菌的有性生殖形成子囊袍子，其过程由两个菌休细胞结合后，其中配合的细胞核分裂，形成2个、4个或8个子囊孢子。 实验器材 酿酒酵母培养物 显微镜、载玻片、盖玻片、接种针 0.1％美蓝液、中性红染色液、碘液 实验步骤 1．菌落特征的观察 取少量酿酒酵母划线接种在土豆平板培养基上，28—30℃养3—5d。用肉眼观察菌落特征，项目包括菌落表面湿润或干燥、有无光泽、隆起形状、边缘形状、大小、颜色等。 2．酵母菌细胞形态及芽殖方式 在洁净载玻片上滴加一滴无菌水或0.1%美蓝液一滴，用接种环取酵母菌菌台少许与无菌水或美蓝液混匀，盖上盖玻片，即成为水浸片。用高倍镜观察酵母细胞形态及出芽情况。 染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡 而影响观察。盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察 3．液泡的活体染色观察 在洁净的载玻片上滴加一滴中性红染色液，用接种环取少量酿洒酵母与染液混匀，染色4—5min后，盖上盖玻片在显微镜下观察。中性红是液泡的活体

酵母菌分类

酵母菌分类 根据荷兰Lodder&Kreger-vanRij所着“TheYeasts,ATaxonomyStudy” 分类主要依据是 1.形态 2.对硝酸盐或碳源的利用 3.对糖的发酵性 形态与大小：因酵母种类不同而不同，同一种也会因培养条件或发育时期不同而有异，一般直径约在5μm，显微镜40X及100X接物镜下皆可观察到。 cerevisiae型：球形与卵形(如啤酒酵母Saccharomycescereviisiae) ellipsoideus型：椭圆形(如葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus) pastorianus型：香肠形 apiculatus型：柠檬形 trigonopsis型：三角形 增殖法：主要为营养增殖(即出芽生殖(budding))，偶而发生有性生殖时则行子囊胞子来增殖。 母细胞(mothercell)：原来的细胞 子细胞daughtercell)：增殖後的细胞 多极出芽(multilateralbudding)：同一个细胞上数个地方可以出芽者 两极出芽(bipolarbudding)：只有细胞两端才会出芽者(如Kloeckera spp.) 伪菌丝(pseudomycelium)：出芽後的细胞一直连成很长，呈菌丝状者(如Candida spp.) 真菌丝(truemycelium)：有些酵母会形成如同霉菌具有隔膜(septum)的真菌丝(如Endomycopsis spp.,Trichosporum spp.) 分裂酵母(fissionyeast)：非出芽，而是在细胞中央形成隔膜再分裂成两个细胞者(如Schizosaccharomyces spp.) 出芽分裂(budfission)：出芽後基部不缩小，在子细胞与母细胞之间直接分裂的酵母谓之(如Saccharomycodes spp.) 子囊孢子(ascospore)：在不利的环境下，在酵母的生活史中某一部分会形成子囊孢子 有孢子酵母(sporogenousyeasts)：能产生子囊孢子的酵母称之 无孢子酵母(asporogenousyeasts)：不形成子囊孢子之酵母 一倍体营养细胞(haploid)： 由二个一倍体细胞接合後再形成子囊胞子者(如Schizosaccharomyces) 出芽时分裂的二个核融合後在母细胞内形成子囊孢子者(如Debaryomyces) 母细胞与出芽细胞间融合後的核，移到另一个出芽细胞内形成子囊孢子者(如Nadsonia) 二倍体营养细胞(diploid)：环境不合适时，停止出芽生殖，直接减数分裂产生子囊胞子(如Saccharomycodes(孢子能在子囊内直接接合成两倍体)或Saccharomyces(发芽後的胞子间才接合成两倍体)) 子囊(ascus)内的孢子数，普通为2or4，多者可8or16，偶而会有奇数，其形状有：

微生实验报告 2012.10.31 实验四 酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别,微生物细胞大小的测定

微生实验报告 姓名：王晶晖 专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032 实验四酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别，微生物细胞大小的测定 一、实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 . 3．了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、实验原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 三、试剂与器材 1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。 2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。 3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。 四、实验内容 1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检 2.水-碘浸片观察 五、关键步骤及注意事项 1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。 六、思考题 1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。 2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微

实 验7 酵母菌的形态观察

实验7酵母菌的形态观察、大小测定和直接计数 一、实验目的 酵母菌的形态及出芽生殖，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；学习并掌握用测微尺测定微生物大小和使用血球计数板进行微生物计数的方法。 二、实验原理 1.酵母菌形态观察 酵母菌个体较大，常规涂片方法可能损伤细胞，因此用美蓝染液水浸片法观察其出芽生殖。美蓝染液的氧化形式蓝色，还原形式无色。活细胞由于新陈代谢，细胞内还原性物质还原美蓝而呈现无色，死细胞或代谢能力弱的细胞不能将美蓝还原呈现蓝色。 2.细胞大小测量 微生物大小的测定需借助测微尺：目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺用于矫正目镜测微尺，总长1mm，分100个小格，每小格10μm。目镜测微尺是一块可放入目镜的圆形玻片，有50小格和100小格2种。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，计算出细胞的实际大小。 3.细胞计数 血细胞计数板，大格1.0mm，体积0.1m3。 三、步骤 1.酵母菌观察 1)在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液 于染液中，混合均匀。 2)加盖玻片。 3)将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和 出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。 4)染色约0.5h后再次进行观察，观察死细胞数量是否增加。 5)形态记录，计算0.5h后酵母菌的死亡率。 2.细胞大小测量 1)装目镜测微尺：把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒 内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。 2)校正目镜测微尺：将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。校正：先 用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。换成高倍镜进行校正。计算：目镜测微尺每格长度（um）=两重合线间镜台测微尺格数x10 / 两重合线间目镜测微尺格数 3)菌体大小测定：目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上酵母菌染色 制片。先在低倍镜下找到标本，换高倍镜测定酵母菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出酵母菌的直径或宽和长所占目镜测

四酵母菌形态及菌落特征的观察

实验四酵母菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 1．观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。 2．观察酵母菌的菌落特征。 3. 学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。 二、基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。 三、器材 1.活材料：酿酒酵母（Saccharomyces calsbergensis）2-3d培养物； 2.染液：吕氏碱性美蓝染液 3.器材：显微镜，载玻片，盖玻片等。 四、操作步骤 1．酵母菌落形态观察并记录。 2.美蓝浸片观察 (1)在载玻片中央加一滴碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取斜面上培养2-3d的酿酒酵母少许，放在碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。 (2)取盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 (3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 2．水浸片观察 在载玻片中央滴一滴蒸馏水，取酿酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与水混匀，盖上盖玻片后镜检。可以适当将光圈缩小观察。 五、实验报告 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

微生物实验：酵母菌与霉菌的形态观察

实验四酵母菌与霉菌的形态观察一.实验目的 1. 2. 3. 4.观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。 观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。 观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。 进一步熟悉xx的使用。 二.实验原理 酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。 酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。 霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。 霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。 霉菌菌落由分枝状菌丝组成，较疏松，呈毛状、棉絮状、绒毛状或毡状。由于不同霉菌形成的孢子均有不同颜色、构造、性状，故菌落表面呈现出不同

的结构和色泽特征。菌丝一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌丝较老，先产生孢子，故常形成同心圆。 三.实验器材 1.菌种： 面包酵母、根霉、曲霉、青霉。 2.仪器： xx。 3.其它： 生理盐水、乳酸酚棉兰染液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、美兰、镊子、大头针。 四.步骤与方法 1.酵母菌细胞形态观察 （1）制片： 用接种环挑取一环面包酵母菌种于载玻片上的一滴美兰染液中混匀，盖上盖玻片静置4~5分钟。盖时先将盖玻片的一边与液滴接触，然后慢慢放下，避免产生气泡。 （2）镜检： 用高倍镜观察，光线弱些，绘图表示个体细胞的大小、形状、芽孢或裂殖情况，并观察死活酵母情况。 2.霉菌的形态观察 （1）制片方法： 在洁净的载玻片加一滴乳酸酚棉兰染液，用大头针或镊子从

实验四 酵母菌的形态观察

实验四酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术, 显微镜直接计数法 生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节 一实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 . 3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二实验原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把 10 mm长度刻成 100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。

酵母菌的培养和形态观察

酵母菌的培养和形态观察 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.了解酵母培养基的特点以及酵母的培养方法。 2.学习并掌握酵母制片方法，观察酵母的个体形态及死活细胞区分。 3.学习掌握观察酵母的出芽生殖方式。 4.学习掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。 5.学习和掌握酵母的菌落形态特征。 【实验原理】 1.酵母菌 酵母菌形态：是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。 酵母菌繁殖：繁殖方式也比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性生殖是通过质配、核配和减数分裂而产生的子囊孢子。 图1. 典型酵母（酿酒酵母）生活史

2.子囊孢子 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 3.美蓝染色 本实验通过美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。 美蓝为无 毒性染料，其 氧化型为蓝 色，而还原型 为无色。用它 对酵母菌染 色时，由于活 细胞的新陈 代谢作用，使 细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

1.菌株 表1. 菌株。 2.培养基 表2. 培养基配方 3.实验试剂 表3.实验试剂及其配方。 4.其他 普通光学显微镜、吸水纸、载玻片、酒精灯、接种环等。

实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别.

实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 一、目的要求 1.进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法； 2.观察并掌握酵母菌的个体形态及其子囊、子囊孢子和假菌丝的形态； 3.学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法； 4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。 二、实验材料 1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）、粟酒 裂殖酵母（Sachizosaccharomyces pombe） 2.染色液：0.1％美蓝染色液、孔雀绿染色液、沙黄染色液、95％乙醇等 3.其他：显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸等 三、基本原理 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，不必染色即可用显微镜观察其形态。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊孢子的方式进行有性生殖。酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。 美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝对酵母细胞进行染色时，活细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝由兰色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。 四、操作步骤 1。水浸片观察： 1）制片：在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵母液体培养物，从侧面盖上一片盖玻片（先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上），应避免产生气泡，并用吸水纸吸去多余的水分（菌液不宜过多或过少，否则，在盖盖玻片时，菌液会溢出或出现气泡而影响观察；盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡）。 2）镜检：将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，注意观察各种酵母的细胞形态和繁殖方式，并进行记录。 2。美蓝染色 1）染色：在干净的载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液，然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酿酒酵母液体培养物，混匀后从侧面盖上盖玻片，并吸去多余的水分和染色液（注意染色液和菌液不宜过多或过少，并应基本等量，而且要混匀）。 2）镜检：将制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约3min后进行镜检，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，根据细胞颜色区分死细胞（蓝色）和活细胞（无色），并进行记录。

微生物实验：酵母菌与霉菌的形态观察

实验四酵母菌与霉菌的形态观察 一.实验目的 1.观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。 2.观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。 3.观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。 4.进一步熟悉显微镜的使用。 二.实验原理 酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。 酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。 霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。 霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。 霉菌菌落由分枝状菌丝组成，较疏松，呈毛状、棉絮状、绒毛状或毡状。由于不同霉菌形成的孢子均有不同颜色、构造、性状，故菌落表面呈现出不同的结构和色泽特征。菌丝一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌丝较老，先产生孢子，故常形成同心圆。 三.实验器材 1.菌种：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。 2.仪器：显微镜。 3.其它：生理盐水、乳酸酚棉兰染液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、美 兰、镊子、大头针。 四.步骤与方法 1.酵母菌细胞形态观察 （1）制片：用接种环挑取一环面包酵母菌种于载玻片上的一滴美兰染液中混匀，盖上盖玻片静置4~5分钟。盖时先将盖玻片的一边与液滴接触，然后慢慢放下，避免产生气泡。 （2）镜检：用高倍镜观察，光线弱些，绘图表示个体细胞的大小、形状、芽孢或裂殖情况，并观察死活酵母情况。 2.霉菌的形态观察 （1）制片方法：在洁净的载玻片加一滴乳酸酚棉兰染液，用大头针或镊子从

酵母菌的形态观察

【实验题目】 酵母菌得形态观察 【实验目得】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌得区别 2.观察酵母菌得出芽生殖，区分酵母菌得死细胞与活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子得观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液与试剂: A） 0、1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95％得乙醇溶液、５％孔雀绿水溶液、0、5%番红水 溶液、蒸馏水 Ｂ）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品: 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶(内装香柏油与二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞得酵母菌个体就是常见细菌得几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖. 2、由于细胞个体大，采取涂片得方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式. ３、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌得活细胞与死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色,还原型无色,由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力,使美蓝由蓝色氧化型转变为无色得还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色,因此，用美兰染色后，活细胞呈无色,死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色-－美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴０、1％吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片,将盖玻片一边与菌液接触,缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3ｍin后,用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态与出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞与活细胞。 4)染色30ｍin后,再次观察，注意死活细胞得比例就是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子得观察 1）涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于蒸馏水中,混合均匀。 2)干燥固定。将载玻片在酒精灯上方来回移动，注意不要让载玻片距离火焰过近，以免烫死酵母菌细胞，可用手背反复试温度. 3）染色. 孔雀绿染色1-2ｍiｎ；水洗后用9５%得乙醇溶液脱色3０ｓ；水洗后用番红染液复染1min;水洗后干燥。 ４)镜检。将制好得装片放在显微镜下镜检，由低倍镜到高倍镜，最后用油镜观察。【实验结果】