对氨基水杨酸钠对染锰大鼠基底核G_省略_BA_AR及GAT_1表达的影响_欧超燕
［基金项目］国家自然科学基金资助项目（编号：81072320，30760210）
［作者简介］欧超燕（1976—），女，博士生，讲师；研究方向：神经毒理学；E -mail ：oak009@https://www.wendangku.net/doc/c72236342.html, ［通信作者］姜岳明教授，E -mail ：ymjiang@https://www.wendangku.net/doc/c72236342.html, ；邓祥发副教授，E -mail ：dengxfa@https://www.wendangku.net/doc/c72236342.html,
［作者单位］1.广西医科大学a.公共卫生学院卫生毒理学教研室，b.基础医学院人体解剖学教研室，广西 南宁 530021；2.桂林医学院公共卫生学
院，广西 桂林 541004
【论著】
对氨基水杨酸钠对染锰大鼠基底核GABA A R 及
GAT -1表达的影响
欧超燕1a ，2，罗海兰1a ，姜岳明1a ，王禅1a ，蒙浩洋1a ，姜力1a ，区仕燕1a ，邓祥发1b
摘要： ［目的］ 探讨对氨基水杨酸钠（PAS -Na ）对短期或亚慢性染锰大鼠基底核γ-氨基丁酸（gamma -aminobutryic acid ，GABA ）A 受体（GABA A receptor ，GABA A R ）及GABA 转运载体-1（GABA transporter -1，GAT -1）表达的影响。 ［方法］ 将短期实验大鼠分为染锰组、PAS 低（L -）、高（H -）剂量治疗组和对照组，观察期为7、10周；将亚慢性实验大鼠分为对照组、染锰组、PAS 预防组和PAS 低（L -）、中（M -）、高（H -）剂量治疗组，观察期为4、8、12、18周。用实时荧光定量聚合酶链反应（RT -PCR ）、免疫印迹法（Western blot ）检测大鼠脑基底核GABA A R 及GAT -1表达。 ［结果］ 短期实验中，观察期7周，染锰组GABA A R 蛋白表达较对照组高（P < 0.05）；观察期10周，染锰组GABA A R 和GAT -1 mRNA 表达较对照组低，L -PAS 、H -PAS 治疗组基底核GAT -1 mRNA 表达较染锰组高（P < 0.05）。亚慢性实验中，观察期4周，染锰组GABA A R mRNA 表达较对照组高（P < 0.05）；观察期8周，染锰组GABA A R mRNA 表达较对照组低，预防组GABA A R mRNA 表达较染锰组高（P < 0.05）。观察期12周，染锰组GABA A R 蛋白表达较对照组高，预防组GABA A R 蛋白表达较染锰组低（P < 0.05）。观察期18周，染锰组GABA A R mRNA 表达较对照组低，GAT -1 mRNA 表达较对照组高，H -PAS 治疗组GAT -1 mRNA 表达较染锰组低（P < 0.05）。 ［结论］ 短期或亚慢性锰暴露对大鼠基底核GABA A R 和GAT -1 mRNA 表达都有明显的毒性影响，PAS -Na 对亚慢性锰暴露致GABA A R mRNA 或蛋白表达改变有预防性干预作用，对锰致大鼠基底核GAT -1 mRNA 表达改变有治疗性干预作用。
关键词：对氨基水杨酸钠；锰中毒；基底核；γ-氨基丁酸A 受体；γ-氨基丁酸转运载体；实验治疗
Effect of PAS-Na on GABA A R and GAT-1 Protein and mRNA Levels in Basal Ganglia of Manganese-Exposed Rats OU Chao-yan 1a, 2, LUO Hai-lan 1a , JIANG Yue-ming 1a , WANG Chan 1a , MENG Hao-yang 1a ,
JIANG Li 1a , OU Shi-yan 1a , DENG Xiang-fa 1b (1.a Department of Toxicology , School of Public Health , b
Department of Anatomy , School of Basic Medicine , Guangxi Medical University , Nanning, Guangxi 530021, China ; 2.School of Public Health , Guilin Medical University , Guilin , Guangxi 541004, China ). Address correspondence to JIANG Yue-ming , E-mail: ymjiang@https://www.wendangku.net/doc/c72236342.html, ; DENG Xiang-fa , E-mail: dengxfa@https://www.wendangku.net/doc/c72236342.html, ?The authors declare they have no actual or potential competing ? nancial interests.
Abstract: ［Objective ］ To explore the effect of sodium para -aminosalicylate (PAS -Na) on the expression of gamma -aminobutryic acid type A receptor (GABA A R) and gamma -aminobutryic acid transporter (GAT -1) in short -term or subchronic manganese (Mn)-exposed rats. ［Methods ］ In the short -term experiment, rats were divided into control, Mn -exposed, low -dose PAS -Na (L -PAS) and high -dose PAS -Na (H -PAS) groups, each subgroup of 10 rats were necropsied at the end of week 7 and 10. In the subchronic experiment, rats were divided into control, Mn -exposed, PAS -Na prevention (P -PAS), and L -PAS, M -PAS (middle -dose PAS -Na) and H -PAS groups, and were observed at week 4, 8, 12 and 18. The mRNA and protein expression of GABA A R and GAT -1 in rat basal ganglia were examined by real -time fluorescence polymerase chain reaction (RT -PCR) and Western blot (WB). ［Results ］ In the short -term experiment, on observation week 7, GABA A R protein expression was significantly increased in Mn -exposed group (P < 0.05); on observation week 10, GABA A R and GAT -1 mRNA expression were significantly decreased in Mn -exposed rats (P < 0.05), and L -PAS and H -PAS treatment restored their GAT -1 mRNA expression (P < 0.05). In the subchronic experiment, on obervation week 4, GABA A R mRNA expression was greatly increased in Mn -exposed rats (P < 0.05); on observation week 8, GABA A R mRNA expression was greatly decreased in Mn -exposed rats vs controls (P < 0.05) and increased in P -PAS group vs Mn -exposed rats (P < 0.05); however, on obervation week 12, GABA A R protein expression was greatly increased in Mn -exposed rats vs controls (P < 0.05) and decreased in P -PAS vs Mn -exposed rats (P < 0.05); on observation week 18, GABA A R mRNA expression was
文章编号: 1006-3617(2012)05-0294-05 中图分类号: R114 文献标志码: A
greatly decreased in Mn-exposed rats vs controls (P<0.05), and GAT-1 mRNA expression was greatly increased in Mn-exposed rats vs controls (P<0.05) and decreased in H-PAS vs Mn-exposed rats (P<0.05). ［Conclusion］ Short-term and subchronic exposure of manganese exhibited obvious toxic effects in the expression of mRNA GABA A R and GAT-1 in basal ganglions of rats. PAS-Na played a preventive intervention role in the GABA A R mRNA or protein expression of subchronic Mn-exposed rats and a therapeutic intervention role in the GAT-1 mRNA expression.
Key Words: sodium para-aminosalicylate; manganese poisoning; basal ganglia; γ-aminobutyric acid A receptor; γ-aminobutyric acid transporter; experimental therapy
核磁共振波谱（MRS）检测显示，锰暴露男冶炼工组丘脑及其邻近基底核γ-氨基丁酸（gamma-aminobutryic acid，GABA）-感兴趣区（VOI）GABA水平升高和额叶皮质N-乙酰天冬氨酸（NAA）水平降低，表明非锰最初靶脑区的神经元功能障碍［1］。作者在前期研究中［2］观察到短期染锰对大鼠基底核谷氨酸（Glu）、谷氨酰胺（Gln）和甘氨酸（Gly）含量的毒性作用明显，以对Gly的毒性影响出现较早，脱离锰暴露后其毒性影响仍然继续发展。GABA是脑的抑制性神经递质，由神经细胞末端突触前膜释放，与突触后部GABA受体（GABA receptor，GABA A R）结合，抑制神经兴奋性，调节神经系统功能。GABA A R是抑制性神经递质受体，介导GABA大部分的生理学功能。从突触清除GABA主要依靠GABA转运蛋白（GABA transporter，GAT），它是一种主要位于神经元及其胶质膜上的糖蛋白，主要清除突触的GABA，其中GAT-1是神经系统中最重要的GABA转运蛋白，在GABA的代谢过程中发挥着重要作用。ANDERSON等研究显示，锰可引起多巴胺（dopamine，DA）和GABA的生物学改变。锰暴露会降低脑组织GABA水平和突触对3H-GABA的吸收，GABA载体及受体蛋白表达的改变可能使细胞外GABA含量增加。通过免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析发现，锰暴露使大鼠黑质GAT-1蛋白质表达下降约50%，mRNA表达升高约4倍，尾状核mRNA 表达降低，提示锰暴露通过改变载体和受体蛋白的表达，导致细胞外GABA浓度上升，可能是锰中毒神经病学特征的基础［3］。在锰中毒治疗研究中，对氨基水杨酸钠（PAS-Na）在临床研究和实验观察中治疗锰中毒效果较好［2，4-6］，其机制尚未完全清楚。本研究旨在探讨PAS-Na对短期或亚慢性锰暴露致GABA A R、GABA转运蛋白表达改变是否有干预作用，为阐明PAS-Na治疗锰中毒机制及其防治对策提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 动物及饲养条件
无特定病原体（SPF）级雄性SD大鼠，适应性喂养1周。大鼠和饲料由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物机构许可证号为SCXK桂2009-0002。动物饲养室温（24±1）℃，相对湿度（55±10）%，12h光照/12h黑暗周期。
1.2 主要试剂
氯化锰（MnCl2?4H2O，优级纯，天津市光复精细化工研究所）；PAS-Na（注射用粉剂，辽宁倍奇药业有限公司）；Trizol-A+总RNA提取试剂、RNA逆转录试剂盒、RT-PCR试剂盒（均来自北京天根生化科技有限公司）；荧光定量PCR反应板（美国Applied Biosystems 公司）；引物（上海Invitrogen公司合成）；实时荧光定量PCR仪（美国Applied Biosystems 公司）；GABA A R（抗体批号为ab48341，英国Abcam公司）；GAT-1（抗体批号为ab426，英国Abcam公司）。
1.3 动物分组、染锰及PAS-Na治疗
（1）40只大鼠，体重（153.9±12.6）g，随机分为染锰组、PAS-Na（L-PAS、H-PAS）低、高剂量治疗组和对照组，共4组。观察期为7周（染锰4周+PAS治疗3周）、10周（染锰4周+ PAS治疗6周），每期每组5只大鼠。染锰、PAS治疗组腹腔注射MnCl2?4H2O 15mg/kg，对照组腹腔注射等容量生理盐水，每日1次，每周5d，连续4周。4周后，PAS治疗组大鼠背部皮下注射PAS-Na100或200mg/kg，其余组背部皮下注射等容量生理盐水，每日1次，连续3周或6周。（2）65只大鼠，体重（127.5±6.7）g，随机分为对照组、染锰组、PAS-Na预防性干预（预防组）和PAS-Na（L-PAS、M-PAS、H-PAS）低、中、高剂量治疗组，观察期为4、8、12、18周，每期每组5只大鼠。染锰组、预防组、PAS治疗组腹腔注射MnCl2?4H2O 15mg/kg，对照组腹腔注射等容量生理盐水，每日1次，每周5d，连续4、8、12周，其中预防组在染锰的同时，每天背部皮下注射PAS-Na 200mg/kg（每周3d），连续8、12周。然后，给L-PAS、M-PAS、H-PAS治疗组分别皮下注射 PAS-Na 100、200、300mg/kg，其余组背部皮下注射等容量生理盐水，每日1次，连续6周。
1.4 RT-PCR和Western blot检测
大鼠断头，冰上取脑，参照大鼠脑解剖定位图分离基底核，迅速放入液氮中，48h后移入-80℃冻存直至检测。
1.4.1 RT-PCR检测GABA A R和GAT-1 mRNA表达 参照Trizol 说明书，提取基底核总RNA，用紫外分光光度计测定RNA样品的浓度和纯度。取100ng总RNA，参照天根cDNA逆转录试剂盒及RT-PCR试剂盒说明书进行逆转录及PCR反应。引物系列：GABA A R上游5’TCACCAAGAGAGGGGTATGCG 3’，下游5’GGCTTGACTTCTTTCGGGTTCTA 3’；GAT-1 上游5’CTCTCCCC TCTGGGCTATCC 3’，下游5’GAATTCACGGCGATTGCG 3’；GAPDH上游5’GTTCAACGGCACAGTCAAGG 3’，下游5’ CGCC AGTAGACTCCACGACA 3’。荧光PCR条件为：退火温度60℃，40个循环，68℃收集荧光。
mRNA相对表达量通过其Ct值来表示，其计算公式为：mRNA平均相对含量=2-平均ΔΔCt，ΔΔCt=ΔCt未知-ΔCt参照，ΔCt未知=Ct目的基因（实验组）-Ct内参基因（实验组），ΔCt 参照=Ct目的基因（参照基因组）- Ct内参基因（参照基因组）。
1.4.2 Western blot检测GABA A R和GAT-1蛋白表达 考马斯亮蓝进行蛋白定量。取预染蛋白2μL和50μg蛋白上样电泳［12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶］，电压140V。
转印至醋酸纤维素（NC）膜（200mV，2h），5%脱脂奶粉室温封闭40min，加入GABA A R一抗（1∶800）或GAT-1一抗（1∶800）或GAPDH一抗（1∶5000），4℃摇床孵育过夜，次日加入相应二抗（1∶2000）室温孵育1h，增强化学发光法（ECL）显色，结果经自动电泳凝胶成像分析系统仪采集，测得灰度值。
1.5 统计学分析
实验数据以x±s表示，用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析，多组间两两比较采用最小显著差数法（LSD），检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 PAS-Na对染锰大鼠体重的影响
实验过程中，各组大鼠无死亡现象。短期试验中，染锰1~4周组大鼠体重增加比对照组少，差异有统计学意义（P< 0.05）。PAS-Na治疗3周，未见实验组间体重差异有统计学意义。PAS-Na治疗第4~5周，L-PAS组大鼠体重均比染锰组轻，H-PAS组体重增加比L-PAS多，差异有统计学意义（P<0.05）。亚慢性实验中，观察期为1~3周的染锰组大鼠体重增加比对照组大鼠少，预防组大鼠体重增加比染锰组多，差异有统计学意义（P<0.05）。观察期为8、10周的染锰组大鼠体重比对照组大鼠轻（P<0.05）。其余观察期，未见实验组间体重增加差异有统计学意义（P>0.05）。
2.2 PAS-Na对染锰大鼠基底核GABA A R mRNA及蛋白表达的影响
在短期实验中，观察期7周，染锰组GABA A R蛋白表达比对照组高（P<0.05）。观察期10周，染锰组GABA A R mRNA表达比对照组低（P<0.05）。
在亚慢性实验中，观察期4周，染锰组GABA A R mRNA 表达比对照组高（P<0.05）。观察期8周，染锰组GABA A R mRNA表达比对照组低，预防组GABA A R mRNA 表达比染锰组高（P<0.05）。观察期12周，染锰组GABA A R 蛋白表达比对照组高，预防组GABA A R 蛋白表达比染锰组低（P<0.05）。观察期18周，染锰组GABA A R mRNA表达比对照组低（P<0.05），见表1和图1。
表1 PAS-Na治疗对染锰大鼠基底核GABA A R mRNA及
蛋白表达的影响（x±s，n=5）
Table 1 Effects of PAS-Na on the GABA A R mRNA and
protein expression in Mn-exposed rats
组别Group mRNA表达（2-△△Ct值）
mRNA expression
蛋白表达（灰度值）
Protein expression
短期实验（Short-term expriment）
观察期7周（Observation week 7）
对照组（Control） 1.0000.597±0.220染锰组（Mn-exposed） 1.314±0.628 1.134±0.281*低-PAS组（L-PAS）0.834±0.173 1.228±0.103高-PAS 组（H-PAS）0.952±0.379 1.266±0.244观察期10周（Observation week 10）
对照组（Control） 1.0000.639±0.119染锰组（Mn-exposed）0.615±0.308*0.605±0.055低-PAS 组（L-PAS）0.614±0.3250.775±0.097高-PAS 组（H-PAS）0.674±0.3860.639±0.136
组别
Group
mRNA表达（2-△△Ct值）
mRNA expression
蛋白表达（灰度值）
Protein expression
亚慢性实验（Subchronic experiment）
观察期4周（Observation week 4）
对照组（Control） 1.0000.276±0.125
染锰组（Mn-exposed） 2.391±0.991*0.293±0.117
观察期8周（Observation week 8）
对照组（Control） 1.0000.248±0.062
染锰组（Mn-exposed）0.355±0.186*0.388±0.118
PAS预防组（PAS-P）0.619±0.302△0.333±0.113
观察12周（Observation week 12）
对照组（Control） 1.0000.304±0.074
染锰组（Mn-exposed） 1.389±1.0030.563±0.212*
PAS预防组（PAS-P） 1.149±1.1140.357±0.121△观察期18周（Observation week 18）
对照组（Control） 1.0000.497±0.276
染锰组（Mn-exposed）0.483±0.156*0.565±0.216
低-PAS组（L-PAS）0.460±0.1170.530±0.293
中-PAS组（M-PAS）0.620±0.2130.685±0.178
高-PAS组（H-PAS）0.676±0.2400.554±0.271［注］*：与对照组比较（Compared with the controls），P<0.05；△：与染锰组比较（Compared with the Mn-exposed group），P<0.05。
［注］A1~8分别为：观察期7周对照、染锰、L-PAS、H-PAS，观察期10周对照、染锰、L-PAS、H-PAS；B1~9分别为观察期8周预防、染
锰1、染锰2、对照1、对照2，观察期4周染锰1、对照1、对照2、染锰2；C1~8分别为：观察期18周H-PAS、M-PAS、L-PAS、染锰、对照，观察期12周预防、染锰、对照（A1-8 represent the groups of control，Mn，L-PAS，H-PAS of observation week 7 and the groups of control，Mn，L-PAS，H-PAS of observation week 10，respectively.
B1-9 represent the groups of PAS-P，Mn-1，Mn-2，control-1，control-2 of observation week 8 and the groups of Mn-1，control-1，control-2，Mn-2 of observation week 4，respectively. C1-8 represent the groups of H-PAS，M-PAS，L-PAS，Mn，control of observation week 18 weeks and the groups of PAS-P，Mn，control of observation week 12，respectively）。
图1 GABA A R免疫印迹
Figure 1 GABA A
R by Western blot
GAPDH
GABA A R
GAPDH
GABA A R
GAPDH
GABA A R
续表1
A
C
B
2.3 PAS -Na 对染锰大鼠基底核GAT -1 mRNA 及蛋白表达的影响
在短期实验中，观察期10周，染锰组基底核GAT -1 mRNA 表达均值比对照组低，L -、H -PAS 治疗组基底核GAT -1 mRNA 表达比染锰组高（P < 0.05）。
在亚慢性实验中，观察期18周，染锰组GAT -1 mRNA 表达比对照组高，H -PAS 治疗组GAT -1 mRNA 表达比染锰组低（P < 0.05），见表2和图2。
表2 PAS-Na 治疗对染锰大鼠基底核GAT-1 mRNA 及
蛋白表达的影响（x ±s ，n =5）
Table 2 Effects of PAS -Na on the GAT -1 mRNA and
protein expression in Mn -
exposed rats
组别Group
mRNA 表达（2-△△Ct 值）mRNA expression 蛋白表达（灰度值）Protein expression
短期实验（Short -term expriment）观察期7周（Observation week 7）对照组（Control） 1.000 1.436±0.420染锰组（Mn -exposed）0.964±0.258 1.325±0.550低-PAS 组
（L -PAS）0.904±0.253 1.519±0.132高-PAS 组
（H -PAS）0.886±0.276
1.242±0.439
观察期10周（Observation week 10）对照组（Control） 1.000 1.191±0.256染锰组（Mn -exposed）0.570±0.316* 1.430±0.139低-PAS 组
（L -PAS）0.956±0.273△ 1.513±0.379高-PAS 组
（H -PAS）0.963±0.294
△
1.135±0.464
GAPDH GAT -
1
GAPDH
GAT -1
GAPDH
GAT -1
组别
mRNA 表达（2-△△Ct 值）蛋白表达（灰度值）
［注］*：与对照组比较（Compared with the controls ），P < 0.05；△：与染
锰组比较（Compared with the Mn -exposed group ）
，P < 0.05。［注］D1~8分别为：观察期7周对照、染锰、L -PAS 、
H -PAS ，观察期10周对照、染锰、L -PAS 、H -PAS ；E1~8分别为：观察期4周对照、染锰，观察期8周对照、染锰、预防，观察期12周对照、染锰、预防；F1~5分别为：观察期18周H -PAS 、M -PAS 、L -PAS 、染锰、对照（D1-8 represent groups of control ，Mn ，L -PAS ，H -PAS of observation week 7 and the groups of control ，Mn ，L -PAS ，H -PAS of observation week 10，respectively. E1-8 represent the groups of control and Mn of observation week 4，the groups of Mn ，control and PAS -P of observation week 8 weeks ，and the groups of Mn ，control and PAS -P of observation week 12 weeks ，respectively. F1-5 represent the groups of H -PAS ，M -PAS ，L -PAS ，Mn ，control of observation week 18，respectively.）。
图2 GAT-1免疫印迹Figure 2 GAT-1 by Western blot
续表2
3 讨论
短期或亚慢性染锰使大鼠体重增加明显减少，与前期研究［2］报道锰对大鼠基底核Glu、Gln 和Gly 的毒作用相一致，说明本研究所用的染锰剂量及时间达到中毒水平。
锰致兴奋性谷氨酸能和抑制性GABA 能神经递质紊乱可能是锰神经毒性机制之一［7］。经饮水锰暴露可引起大鼠纹状体细胞外GABA 浓度增高，GABA 受体和转运蛋白表达发生改变［8］。哺乳动物GABA A R 是分布于细胞膜上的跨膜糖蛋白，主要由α、β和γ亚基组成，是脑内最普遍的抑制性神经递质受体。人类焦虑症、抑郁症、记忆障碍等许多神经精神性疾病的发生发展与GABA A R 有关，尤其是α亚基。本研究显示，染锰4周大鼠基底核GABA A R mRNA 表达明显增高，停止染锰3周大鼠基底核GABA A R mRNA 表达恢复接近对照组水平，而GABA A R 蛋白表达明显增高，
停止染锰6周大鼠基底核GABA A R mRNA 表达明显降低，提示短期染锰可引起大鼠基底核GABA A R mRNA 表达异常，脱离暴露仍然出现进行性的神经毒性反应，尤其是对GABA A R mRNA 表达的影响较为明显。在亚慢性实验的动态观察中，染锰4、8和12周大鼠基底核GABA A R mRNA 表达出现升高-降低-接近对照组水平，停止染锰6周后其基底核GABA A R mRNA 表达明显下降，与亚急性毒性损害的趋势相似。锰的神经毒性进行性损害与锰中毒病人的临床表现相吻合，锰主要在脑蓄积，自然排出很慢，锰中毒病人尽管已脱离暴露环境，其病情仍然可以发展加重［4］。较早的研究显示，锰对大鼠纹状体多巴胺（DA）能系统的毒性作用有双相现象，长期经饮水染锰（MnCl 2?4H 2O 1 mg/mL，360 d）的大鼠纹状体DA、NE （去甲肾上腺素）含量出现“升高-对照组水平-降低”的趋势。对此现象作者认为染锰早期锰可能促进神经递质合成代谢加快，然后形成耐受性，晚期则由于基底核
神经元变性受损所致［9］。因此，推测染锰4、8、12周和停止染锰6周大鼠基底核GABA A R mRNA 表达出现“升高-降低-对照组水平-明显下降”的原因，可能是锰暴露使GABA能神经元出现“激活-轻度变性-耐受-严重变性或坏死”现象，此乃可部分解释锰中毒发生、发展不同时期的中枢GABA能神经元生化机制。
对氨基水杨酸（PAS）治疗3周，使亚急性染锰大鼠纹状体、脉络丛、脑脊液（CSF）、心、肝、睾丸、脾、胰腺和红细胞锰含量降低；治疗6周，使纹状体、海马、丘脑、运动神经皮质、脉络丛和红细胞锰含量降低［6］。大鼠腹腔注射MnCl2［MnCl2?4H2O15mg/（kg?d），每周5d］4周+PAS-Na治疗6周时，低、高剂量PAS-Na治疗组Glu、Gln和高剂量PAS-Na治疗组Gly含量比染锰组高，提示PAS-Na对锰的Glu、Gln和Gly毒性影响可能有拮抗作用［2］。对牡蛎鳃给予PAS预处理可阻断锰神经毒性。牡蛎连续染锰3d，引起DA能神经呈剂量依赖性损伤，同时给予PAS能减弱纤毛抑制系统作用，说明其可保护牡蛎免受锰神经毒性的影响［10］。PAS可使染锰大鼠血、脑锰浓度明显下降，脑前列腺素E2水平下降和谷胱甘肽水平增高，血浆催乳激素水平下降，活动度和进食量增加，表明PAS能有效地减轻染锰大鼠体内锰负荷、神经炎症、氧化应激和运动损伤［11］。本研究显示，无论是染锰8周还是12周，PAS-Na对亚慢性锰暴露致GABA A R mRNA或蛋白表达异常改变的预防性干预作用明显。
从突触清除GABA，主要依靠GABA转运蛋白。GAT是突触前膜、神经胶质细胞膜或囊泡膜上的糖蛋白，是第一个被确定的转运体家族成员，它可选择性地与突触间隙的GABA 结合，然后将其转运入细胞或囊泡内，终止GABA 的抑制作用，调控突触间信息的传递。GAT-1是有高亲和力的GABA转运体，也是神经系统中最重要的GABA转运蛋白，约占脑中GABA转运体的80%。ANDERSON等［3］研究发现，锰暴露使大鼠黑质、尾状核GAT-1 mRNA表达的改变，可能是锰与DNA发生交联反应，导致基因转录效能改变；大鼠黑质GAT-1蛋白质表达下降可能是锰促使GABA A R亚基通过苏氨酸蛋白激酶产生磷酸化所致。体外研究显示，染锰（500mmol/L Mn）可激活小胶质细胞苏氨酸蛋白激酶活性［12］。本研究发现，短期染锰停止暴露6周的大鼠基底核GAT-1 mRNA表达均值明显降低，低、中剂量PAS-Na治疗使其基底核GAT-1 mRNA表达明显增高，恢复接近对照组水平；亚慢性染锰停止暴露6周的大鼠基底核GAT-1 mRNA表达均值明显增高，高剂量PAS-Na治疗使其明显下降，尚未恢复接近对照组水平，提示无论是短期还是亚慢性染锰停止暴露6周后，锰对大鼠基底核GAT-1 mRNA表达的损害都呈进行性改变，PAS-Na对其有治疗性干预作用，尤以对亚急性损害的干预效果较好，这与锰中毒病人早期应用PAS-Na治疗效果较好相吻合，支持文献结论［4-5］。
·作者声明本文无实际或潜在的利益冲突。
参考文献：
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（收稿日期：2012-02-03）
（英文编审：薛寿征；编辑：郭薇薇；校对：张晶）