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邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸

茶叶科学 2011，31（3）：211~217 Journal of Tea Science

收稿日期：2010-12-13 修订日期：2011-02-28

基金项目：现代农业（茶叶）产业技术体系建设专项资金（农科教发[2008]10号）、国家标准化工作项目资助内容作者简介：杨卫（1984— ），男，安徽淮南人，硕士研究生，主要从事茶叶生物化学与综合利用的研究。?通讯作者

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法

测定茶叶中17种游离氨基酸

杨卫，鲜殊，李大祥*，宛晓春*

安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放实验室，安徽合肥 230036

摘要：采用邻苯二甲醛作为柱前衍生化试剂，结合反相高效液相色谱，优化了色谱条件，实现对茶汤中17种一级氨基酸的精确定性和定量分析。17种氨基酸的保留时间和峰面积的RSD 分别在0.02%~0.70%与0.11%~1.15%之间，经方法学考察，该方法具有良好的稳定性和重现性。关键词：HPLC ；柱前衍生化；邻苯二甲醛（OPA ）；游离氨基酸；茶叶

中图分类号：TS272；O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1000-369X （2011）03-211-07

RP-HPLC Determination of Seventeen Free Amino Acids in Tea with O -phthalaldehyde Precolumn Derivation

YANG Wei, XIAN Shu, LI Da-xiang *, WAN Xiao-chun *

Key Laboratory of Tea & Medicinal Plant and Product Safety of Ministry of Agriculture, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China

Abstract: In this paper, a reversed-phase high performance liquid chromatography combined with precolumn derivatization with O -phthalaldehyde and ?uorescence detection was set up for the qualitatively and quantitatively analysis of seventeen kinds of free amino acids in tea. The RSD of the retention time and peak area of the 17 kinds of free amino acids were 0.02%~0.70% and 0.11%~1.15%, respectively. With validation, this method was proved to be accurate, stable and reproducible for the analysis of free amino acids in tea.

Keywords: HPLC, pre-column derivation, O -phthaldialdehyde (OPA), free amino acid, tea

茶叶中的游离氨基酸与茶叶品质密切相关[1]，其组成、含量以及在加工过程中的降解产物和转化产物均直接影响茶叶的品质，其中占游离氨基酸总量50%~80%的茶氨酸与茶叶品质的相关系数可达0.787~0.876，为强正相关[2]。由于茶叶中游离氨基酸对茶叶品质有着重要作用，因此多年来茶叶中游离氨基酸的定性和定量方法是茶叶品质研究中的重点内容。

游离氨基酸检测方法主要有电化学分析

法、纸层析和薄层色谱法、气相色谱法、离子交换色谱法（IEC ）、高效液相色谱法和毛细管电泳法[3]，而当前检测方法则主要以离子交换色谱法中的柱后衍生高效阳离子交换色谱法（HPCEC ）为主。HPCEC 法是一种经典的氨基酸分析检测方法。该法是利用氨基酸在酸性条件下形成阳离子，而后在阳离子交换柱中进行分离，分离后的氨基酸用茚三酮等衍生化试剂衍生，经紫外可见分光光度检测器进行检

212 茶叶科学31卷

测。如20世纪60年代初面世的氨基酸自动分析仪利用的就是该原理[4]。但该方法在应用中存在分析柱易被样品组分污染，分析时间长且灵敏度较低的问题[5]。

随着高效液相色谱法（HPLC）的高速发展，特别是反相色谱填料的快速发展，使反相高效液相色谱法（RP-HPLC）逐渐成为游离氨基酸检测的主要方法。该法与柱前衍生技术相结合，大大提高了氨基酸分析的灵敏度，弥补了HPCEC法中柱后衍生的不足，使RP-HPLC 方法在氨基酸检测分析上的应用成为游离氨基酸检测方法发展的主流[4]。

常见的柱前氨基酸衍生化试剂有邻苯二甲醛（OPA）、异硫氰酸苯酯（PITC）、氯甲酸芴甲酯（FMOC-Cl）及丹酰氯（Dansyl-Cl）。其中，Dansyl-Cl衍生法存在着衍生后易生成干扰性副产物的问题。FMOC-Cl法中，为终止衍生反应和防止生成的衍生物自发水解，过量的反应剂必须用戌烷萃取除去[6]，这增加了实际操作上的繁琐度；OPA本身不发荧光，色谱分离中不会形成干扰峰，且检测灵敏度高。

本文采用OPA作为柱前衍生化试剂，结合反相高效液相色谱技术，优化了衍生化操作和色谱条件，对茶汤中的17种主要游离氨基酸进行了定性和定量分析，取得了较为理想的结果。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料

氨基酸标准样为购自Waters公司的氨基酸混合标准溶液（该氨基酸混合标准样含有17种水解氨基酸，除胱氨酸浓度为 1.25 mmol/L 外，其余氨基酸浓度均为 2.5 mmol/L）。其他主要试剂为：茶氨酸标准品（纯度99.27%，江苏省金坛市前制药原料厂）、OPA（色谱纯，TOKYO Chemical Industry Co. Ltd.）、β-巯基乙醇（Biotechnology Grade, 纯度≥99.0%）、四氢呋喃（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）、甲醇（色谱纯，美国TEDIA公司）、乙酸（色谱纯，美国TEDIA公司）、无水醋酸钠（分析纯，广东汕头市西陇化工厂）、硼酸（分析纯，上海中试化工总公司）、偏磷酸（分析纯）。两个白茶样均购于当地茶叶市场。

1.2 主要仪器

RP-HPLC系统：Waters 600双泵高效液相色谱仪、Waters empower色谱管理系统、Waters 2475荧光检测器；Sartorius AG PB-20酸度计。

1.3 试剂配制

OPA衍生化试剂：称取OPA 0.2014 g，10 mL甲醇充分溶解后转移至50 mL棕色容量瓶，加入10 mL β-巯基乙醇，最后用甲醇定容至50 mL（该试剂在4℃黑暗条件下可稳定存放1周）。

pH10.4硼酸盐缓冲液：称取6.194 g硼酸和6.524 g KOH溶于200 mL超纯水中，用偏磷酸调节pH至10.4（该缓冲液在室温下可稳定存放1个月）。

25 mmol/L醋酸钠缓冲液（pH5.8）：准确称取2.0525 g无水醋酸钠，超纯水溶解后定容至1 L，2%乙酸调pH至5.8即可获得RP-HPLC 流动相A的基准液。

流动相A的配制：使用前按醋酸钠缓冲液∶四氢呋喃=95∶5（V∶V）进行配制，现配现用。

1.4 茶汤制备

分别称取0.6000 g粉碎白茶样，于250 mL锥形瓶中，加沸水250 mL，沸水浴浸提45 min，抽滤，收集滤液并定容至250 mL，备用。

1.5 RP-HPLC色谱条件

色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A：pH5.8，25 mmol/L醋酸钠缓冲液∶四氢呋喃=95∶5（V∶V）；流动相B为甲醇；荧光检测：Em 340 nm，Ex 450 nm。柱温32℃，流速1 mL/min，进样量5 μL。梯度洗脱条件如表1，线性洗脱。

3期杨卫，等：邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸 213

表1 梯度洗脱条件

Table 1 The HPLC analysis condition

时间Time (min)

流速Flow (mL/min)

A(%)

B(%)

0 1 90 10 12 1 72 28 20 1 70 30 22 1 65 35 31 1 63 37

35 1 53 47 40 1 45 55

50 1 35 65

52 1 90 10 60 1

90 10

1.6 柱前衍生操作和HPLC 分析

取100 μL 茶汤于5 mL 离心管中，加入添加有β-巯基乙醇的OPA 衍生化试剂300 μL ，硼酸盐缓冲液600 μL ，涡旋后0.22 μm 有机滤膜过滤，静置15 min 后进样分析，进样量5 μL 。 1.7 标准溶液配制和标准曲线制作

茶氨酸（theanine ，简写Thea ）标准母液配制：称取茶氨酸标准品0.2176 g ，配制成浓度为12.5 mmol/L 的茶氨酸标准母液。

氨基酸混合标样标准母液配制：取Waters 氨基酸混合标样40 μL ，加入40 μL 浓度为12.5 mmol/L 的茶氨酸标准母液，用超纯水定容到

1 mL ，得到含茶氨酸的氨基酸混标的标准母液（其中，茶氨酸浓度500 pmol/μL 、胱氨酸50 pmol/μL ，其他氨基酸浓度均为100 pmol/μL ）。然后对母液进行系列稀释，得到系

列标准工作液。

标准曲线制作：取标准工作液，经柱前衍

生化后，分别进液相色谱分析，使用Waters

empower 色谱管理系统对各色谱峰进行积分，

获得各峰的峰面积，以各浓度对应的峰面积为纵坐标，以进样浓度为横坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程和R 2值。

2 结果与分析

2.1 衍生化产物稳定性考察

使用OPA 作为柱前衍生化试剂，有可能存在衍生化产物不稳定的现象[4]。考虑到衍生化产物稳定性对实验结果的影响，考察了对衍生化产物的稳定性。

取一份茶汤衍生化后分别放置5、10、15、20、30 min 后，分别进样分析，分析结果如图1。

从图中可以看出，衍生化产物的信号响应值呈现正态分布的规律。在15~20 min 之间为最大响应值，故选择衍生化操作后放置15 min 后进样，且进样操作在20 min 之前完成。

信号E U

时间Time(min)

图1 衍生化产物的稳定性

Fig. 1 HPLC chromatogram of the stability of the derivatives

214 茶叶科学 31卷

2.2 线性范围考察

对氨基酸混合标样的系列标准工作液，经柱前衍生化后，分别进样分析，建立了17种氨基酸标准曲线方程，如表2所示。相关系数R 2值除甲硫氨酸为0.9796，酪氨酸为0.9939外，其余15种氨基酸峰面积和浓度之间的线性相关系数R 2值均在0.9991~0.9999之间，在1~500 pmol/μL 的浓度范围内相关性良好。对混合标样的连续5次进样表明，方法的重现性高，5次进样的色谱图叠加如图2所示。

2.3 精密度考察

取茶汤，衍生化后进样分析，17种氨基酸的峰面积和保留时间RSD （n=5）分别在0.02%~0.70%与0.11%~1.15%之间，具体如表3所示，方法精密度较高。 2.4 回收试验

取茶汤一份，分别加入相当于50 pmol/μL 茶氨酸浓度的混合标准液，然后依次衍生化进样分析，得到各氨基酸加标回收率在71.33%~114.75%之间。加标回收率见表4。

表2 氨基酸标准曲线方程

Table 2 The standard curve of amino acids

游离氨基酸Free amino acid 线性方程Standard curve

实验4 室内空气中甲醛的测定详解

浙江海洋学院实验报告科目：环境监测实验时间： 2015-2016学年第1学期第十五周班级：A13环工学号： 130110235 姓名：邵明娇浙江海洋学院环境科学实验室编制二O一五年

实验四室内空气中甲醛的测定（酚试剂分光光度法）一、目的要求（一）掌握酚试剂分光光度法测定甲醛的原理。（二）熟悉甲醛测定的目的意义。（三）了解本次实验的操作步骤及注意事项。二、原理空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪（qin），嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。三、仪器 1、大气采样器：流量范围0～1 L/min，流量稳定可调，具有定时装置； 2、分光光度计：在630 nm测定吸光度； 3、10 ml大型气泡吸收管； 4、25 ml具塞比色管； 5、吸管若干支四、试剂本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水；所用的试剂纯度为分析纯。 1. 吸收液原液：称量0.10 g酚试剂[C6H4SN（CH3）C:NNH2?HCl，简称MBTH]，加水溶解，倾于100 ml具塞量筒中，加水到刻度。放冰箱中保存，可稳定3 d。 2. 吸收液：量取吸收原液5 ml，加95 ml水。临用前现配。 3. 1%硫酸铁铵溶液：称量1.0 g硫酸铁铵[NH4Fe （SO4）2?12 H2O]用0.1 mol/L盐酸溶解，并稀释至100 ml。 4. 0.1000 mol/L碘溶液：称量30 g碘化钾，溶于25 ml水中，加入12.7 g碘。待碘完全溶解后，用水定容至1000 ml。移入棕色瓶中，暗处贮存。 5. 1 mol/L氢氧化钠溶液：称量40 g氢氧化钠，溶于水中，并稀释至1000 ml。 6. 0.5 mol/L硫酸溶液：取28 ml浓硫酸缓慢加入水中，冷却后，稀释至1000 ml。 7. 0.1000 mol/L碘酸钾标准溶液：准确称量3.5667 g经105℃烘干2 h的碘酸钾（优级纯），溶解于水，移入1 L容量瓶中，再用水定溶至1000 ml。 8. 0.1 mol/L盐酸溶液：量取82 ml浓盐酸加水稀释至1000 ml。

空气中甲醛气体含量的简易测定

研究性学习实验的准备与实验教学研究 ——空气中甲醛气体含量的简易测定【实验计划】一：实验原理： 1.甲醛分子的结构是HCHO,含有醛基，因而甲醛与其他醛基一样易发生氧化反应，甲醛与强氧化剂高锰酸钾在酸性条件下，可以发生如下反应 2MnO4- +5HCHO +6H+2Mn2++5CO2+8H2O 反应时，可以利用MnO4-离子自身的颜色变化指示反应是否完成。二：实验计划：（一）实验步骤 1.按如下装置装好装置，注意将锥形瓶换成试管，针筒用50ml的。要使导管被溶液浸没，塞子要塞紧，这样气密性会好。 2.将配好的1×10 -3moL／L取出5ml放入试管中，加入2ml 2moL／L 硫酸溶液，移取时用1ml的针筒。用50ml的针筒从甲醛试剂的上方取出50ml的含有甲醛的蒸汽，将针筒插入橡皮管中，将甲醛蒸汽通过导入打进试管中，让其与高锰酸钾反应，直至高锰酸钾

溶液为无色。记下所用的蒸汽的体积。 3. 将配好的1×10 -4moL／L取出5ml放入试管中，加入2ml 2moL／L 硫酸溶液，移取时用1ml的针筒。用50ml的针筒从甲醛试剂的上方取出50ml的含有甲醛的蒸汽，将针筒插入橡皮管中，将甲醛蒸汽通过导入打进试管中，让其与高锰酸钾反应，直至高锰酸钾溶液为无色。记下所用的蒸汽的体积。 4. 将配好的1×10 -5moL／L取出5ml放入试管中，加入2ml 2moL／L 硫酸溶液，移取时用1ml的针筒。用50ml的针筒从甲醛试剂的上方取出50ml的含有甲醛的蒸汽，将针筒插入橡皮管中，将甲醛蒸汽通过导入打进试管中，让其与高锰酸钾反应，直至高锰酸钾溶液为无色。记下所用的蒸汽的体积。（二）实验结果（三）实验结论由以上的数据可得出最好的实验方案是用1×10 -4moL／L的高锰酸钾溶液，这样的实验操作比较好。现象较明显。1×10 -3moL／L的高锰酸钾所用的气体太多，太耗时，没那么多时间。二：【思考与讨论】

氨基酸检测

氨基酸检测氨基酸是构成蛋白质的基本单位，在食品、医药、饲料添加剂、化妆品及工农业等诸多方面有着广泛的应用。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为21 世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。科标检测中心在氨基酸检测方面具有资深经验，为广大客户提供专业、全面的检测服务，并出具权威的检测报告。 1、脂肪族氨基酸：丙、缬、亮、异亮、蛋、天冬、谷、赖、精、甘、丝、苏、半胱、天冬酰胺、谷氨酰胺 2、芳香族氨基酸：苯丙氨酸、酪氨酸 3、杂环族氨基酸：组氨酸、色氨酸 4、杂环亚氨基酸：脯氨酸检测对象豆类谷物、药材、鱼类、肉类、饲料、食用菌类、保健品、化妆品等等。检测项目甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸、胱氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺。相关标准标准代号标准名称 GB/T14924.10-2008实验动物配合饲料氨基酸的测定 GB/T15399-1994饲料中含硫氨基酸测定方法--离子交换色谱法 GB/T15400-1994饲料中色氨酸测定方法--分光光度法 GB/T17419-1998含氨基酸叶面肥料 GB/T18246-2000饲料中氨基酸的测定科标检测致力于推动检测行业的规范化、科学化发展，秉承“敢为人先、开拓创新、同心协力、勇承重载”

GB/T18654.11-2008 养殖鱼类种质检验第11部分：肌肉中主要氨基酸含量的测定 GB/T23296.12-2009 食品接触材料高分子材料食品模拟物中11-氨基十一酸的测定高效液相色谱法 GB/T28722-2012氨基酸中铁和铅的测定原子吸收光谱法GB/T5009.124-2003食品中氨基酸的测定 GB/T8314-2013茶游离氨基酸总量的测定 NY1429-2010含氨基酸水溶肥料 NY/T1618-2008鹿茸中氨基酸的测定氨基酸自动分析仪法NY39-1987饲料级L-赖氨酸盐酸盐 NY/T56-1987谷物籽粒氨基酸测定的前处理方法 QB/T2409-1998化妆品中氨基酸含量的测定 QB/T4356-2012黄酒中游离氨基酸的测定高效液相色谱法 SN/T0930-2000 进出口花粉中全氨基酸的测定方法氨基酸自动分析仪法 YC/T282-2009烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法 YC/T448-2012 烟草及烟草制品游离氨基酸测定离子色谱-积分脉冲安培法科标检测致力于推动检测行业的规范化、科学化发展，秉承“敢为人先、开拓创新、同心协力、勇承重载”

室内空气中甲醛的取样与测定AHMT分光光度法

. 实验三室内空气中甲醛的取样与测定——AHMT分光光度法一、实验提要甲醛（HCHO）无色气体，易溶于水和乙醇。甲醛对皮肤和粘膜有强烈的刺激作用，可使细胞中的蛋白质凝固变性，抑制一切细胞机能，由于甲醛在体内生成甲醇而对视丘及视网膜有较强的损害作用。甲醛对人体健康的影响主要表现在嗅觉异常、刺激、过敏、肺功能异常及免疫功能异常等方面。室内空气中甲醛主要来源于室内装饰的人造板材、人造板制造的家具、含有甲醛成分并有可能向外界散发的其他各类装饰材料及燃烧后会散发甲醛的材料。 3。0.10mg/m 室内空气质量标准规定甲醛的最高允许含量为空气中甲醛的测定方法主要有AHMT分光光度法、乙酰丙酮分光光度法、酚试剂分光光度法、气相色谱法、电化学传感器法等。 1.实验目的（1）了解和掌握室内空气中甲醛的采样方法；（2）了解室内空气中甲醛的测定方法，掌握AHMT分光光度法测定甲醛的方法。 2.实验原理空气中甲醛与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂在碱性条件下缩合，然后经高碘酸钾氧化成6-巯基-5-三氮杂茂[4，3-b]-S-四氮杂苯紫红色化合物，其色泽深浅与甲醛含量成正比。 AHMT分光光度法测定范围为2mL样品溶液中含 0.2～3.2 μg甲醛。若采样流量为1L/min，3。0.01~0.16 mg/m 采样体积为20L，则测定浓度范围为测定甲醛时，乙醛、丙醛、正丁醛、丙烯醛、丁烯醛、乙二醛、苯（甲）醛、甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、仲丁醇、异丁醇、异戊醇、乙酸乙酯无影响；二氧化硫共存时，使测定结果偏低。因此对二氧化硫干扰不可忽视，可将气样先通过硫酸锰滤纸过滤器，予以排除。二、仪器、试剂及材料 1.仪器材料（1）空气采样器：流量范围0～1 L/min；（2）多孔玻板吸收管：10 mL容量、棕色；（3）10mL具塞比色管；（4）可见光分光光度计。 2.试剂 (1) 吸收液：称取1g三乙醇胺、0.25g偏重亚硫酸钠和0.25g乙二胺四乙酸二钠溶于水中并稀释至1000mL。 1 / 7 . （2）0.5% 4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（简称AHMT）溶液：称取0.25gAHMT溶于0.5mol/L盐酸中，并稀释至50mL，此试剂置于棕色瓶中，可保存半年。（3）5mol/L氢氧化钾溶液：称取28.0g氢氧化钾溶于100mL水中。（4）1.5%高碘酸钾溶液：称取1.5g高碘酸钾溶于0.2mol/L氢氧化钾溶液中，并稀释至100mL，于水浴上加热溶解，备用。

实验一游离氨基酸测定

实验一：游离氨基酸测定实验学时：3学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的 1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。二、实验内容使用甲醛滴定法测定游离氨基酸三、实验原理氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。但可以用甲醛法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的 -氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮 R-NH3+→H++R-NH2 R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)2 4 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O 滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。四、实验组织运行要求集中授课形式五、实验条件 1．试剂 (1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和) (2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液 (3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液 (4)10%(体积分数)乙酸溶液 2．玻璃仪器 ⑴50ml容量瓶 ⑵20ml移液管 ⑶碱式滴定管 ⑷50ml量杯 ⑸250ml三角瓶六、实验步骤 (1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。 (2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤液，加水4mL，3滴酚酞指示剂，摇匀后用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定到微红色。然后加入2mL中性甲醛溶液，摇匀，放置片刻，再用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定回到微红色中点，记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。同样，取6mL水按以上操作做空白实验。七、计算

空气质量-甲醛的测定-乙酰丙酮分光光度法

新项目试验报告空气质量甲醛的测定____________ 项目名称: 乙酰丙酮分光光度法GB/T15516-1995 项目负责人：______________________________________________ 审批日期:

一、新项目概述本标准规定了测定工业废气和环境空气中甲醛的乙酰丙酮分光光度法。二、检测方法与原理检测方法：乙酰丙酮分光光度法原理：甲醛气体经水吸收后，在pH=6的乙酸-乙酸铵缓冲溶液中，与乙酰丙酮作用，在沸水浴条件下，迅速生成稳定的黄色化合物，在波长413 nm处测定。三、主要仪器和试剂仪器和试剂： 1、分光光度计（配套 1cm比色皿） 2、多孔玻板吸收管 3、吸收液：不含有机物的重蒸水。 4、乙酰丙酮溶液：0.25 %（V/V）,称25 g乙酸铵，加少量水溶解，加 3 ml冰乙酸及0.25 ml新蒸馏的乙酰丙酮，混匀再加水至 100 ml，调整pH=6，此溶液于2C? 5C贮存，可稳定一个月。 5、甲醛标准贮备液：取10 ml甲醛溶液置于500 ml容量瓶中，用水稀释定容。甲醛标准储备液的标定：取 5.0 ml甲醛标准储备液置于 250 ml碘量瓶中，加 0.1 mol/L 碘溶液30.0 ml ,立即逐滴地加入 30 g/100ml氢氧化钠溶液值颜色褪到淡黄色为止。静置10 min，加（1+5）盐酸溶液酸化，在暗处静置10 min，加入100 ml 新煮沸但已冷却的水，用标定好的硫代硫酸钠滴定至淡黄色，加入新配制的1g/100ml 淀粉指示剂1 ml ，继续滴定至蓝色刚刚消失为终点。同时惊醒空白测定。 6、甲醛标准使用溶液用水将甲醛标准储备液稀释成 5.00 ug/ml甲醛标准使用液， 2C? 5C贮存，可稳定一个周。四、采样要求和样品保存采样要求：采样系统由采样引气管，采样吸收管和空气采样器串联组成。吸收管体积为50 ml或125 ml，吸收液装液分别为 20 ml或50 ml ，以0.5?1.0 L/min 的流量，采气5?20 min。样品保存：采集好的样品应置于冰箱内2-5 C种保存，并且在 2天内分析完毕，以防止甲醛被氧化。

氨基酸含量测定

茚三酮比色测定氨基酸含量一、实验原理氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用，生成蓝紫色或黄色化合物（除脯氨酸外均有此反应），可用吸光光度法测定。生成的蓝紫色或黄色化合物颜色深浅与氨基酸含量成正比，其最大吸收波长分别为570nm或350nm，故据此可以测定样品中氨基酸含量。二、实验试剂（1）1.2%茚三酮溶液：称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解，加入40mg氯化亚锡（SnCl2?H2O），搅拌过滤（作防腐剂）。滤液置冷暗处过夜，加水至50mL，摇匀备用。（2）pH 8.04磷酸缓冲液： Ⅰ、准确称取磷酸二氢钾（KH2PO4）4.5350g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀备用。 Ⅱ、准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.9380g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀备用。 Ⅲ、取上述配好的磷酸二氢钾溶液10.0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH8.04的磷酸缓冲溶液。（3）氨基酸标准溶液：准确称取干燥的氨基酸（如异亮氨酸）0.2000g于烧杯中，先用少量水溶解后，定量转入100mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀，准确吸取此液10.0mL于100mL容量瓶中，加水到标线，摇匀，此为200μg/mL 氨基酸标准溶液。三、实验方法及步骤（1）标准曲线绘制准确吸取200μg/mL的氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL （相当于0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸），分别置于25mL 容量瓶或比色管中，各加水补充至容积为 4.0mL，然后加入茚三酮溶液（20g/L）和磷酸盐缓冲溶液（pH为8.04）各1mL，混合均匀，于90℃水浴上加热至显色恒定为止（该加热过程至少需要25分钟），取出迅速冷至室温，加水至标线，摇匀。静置15min后，若生成蓝紫色化合物，在570nm波长下，以试剂空白为

游离氨基酸的测定实验报告

游离氨基酸的测定实验方案（茚三酮比色法）一、实验目的茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程。二、实验原理游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。三、实验材料发酵液样品；实验试剂：水合茚三酮；氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸实验仪器：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器；枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10；分光光度计四、实验方法 1.溶液配制（1）水合茚三酮称取0.6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4.54的醋酸盐缓冲液混匀，棕色瓶中冰箱内保存，10天内有效。（2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg，以10%的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml），取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。（3）0.1%抗坏血酸称取0.1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。

2.标准曲线绘制取6支20ml 试管，按下表加剂：试剂管号 1 2 3 4 5 6 亮氨酸标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮(ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 氨基氮量（ug/管） 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇动冷却，用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。 λ=570nm 处测定吸光度 0 0.025 0.055 0.099 0.146 0.186 以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图：茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线 y = 0.0382x - 0.0103 R 2 = 0.9882 -0.05 00.05 0.10.15 0.20123456 氨基氮（ug）吸光度A 3.样品中游离氨基酸的测定取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml ，坏血酸0.1ml ，混匀，封口。沸水浴加热1 5分钟，冷水中摇动冷却，用 60%乙醇定溶至20ml ，摇匀，于570mn 测定吸光度。

空气质量甲醛的测定乙酰丙酮分光光度法

新项目试验报告项目名称：空气质量甲醛的测定乙酰丙酮分光光度法 GB/T15516-1995 项目负责人：审批日期：

一、新项目概述本标准规定了测定工业废气和环境空气中甲醛的乙酰丙酮分光光度法。二、检测方法与原理检测方法：乙酰丙酮分光光度法原理：甲醛气体经水吸收后，在pH=6 的乙酸-乙酸铵缓冲溶液中，与乙酰丙酮作用，在沸水浴条件下，迅速生成稳定的黄色化合物，在波长413 nm 处测定。三、主要仪器和试剂仪器和试剂： 1、分光光度计（配套1cm比色皿） 2、多孔玻板吸收管 3、吸收液：不含有机物的重蒸水。 4、乙酰丙酮溶液：％（V/V），称25 g 乙酸铵，加少量水溶解，加3 ml 冰乙酸及 ml 新蒸馏的乙酰丙酮，混匀再加水至100 ml，调整pH=6 ，此溶液于2℃～5℃贮存，可稳定一个月。 5、甲醛标准贮备液：取10 ml 甲醛溶液置于500 ml 容量瓶中，用水稀释定容。甲醛标准储备液的标定：取 ml 甲醛标准储备液置于 250 ml 碘量瓶中，加mol/L 碘溶液 ml，立即逐滴地加入30 g/100ml 氢氧化钠溶液值颜色褪到淡黄色为止。静置10 min ，加（1+5）盐酸溶液酸化，在暗处静置 10 min ，加入100 ml 新煮沸但已冷却的水，用标定好的硫代硫酸钠滴定至淡黄色，加入新配制的 1g/100ml 淀粉指示剂 1 ml ，继续滴定至蓝色刚刚消失为终点。同时惊醒空白测定。 6、甲醛标准使用溶液用水将甲醛标准储备液稀释成 ug/ml 甲醛标准使用液，2℃～ 5℃贮存，可稳定一个周。四、采样要求和样品保存采样要求：采样系统由采样引气管，采样吸收管和空气采样器串联组成。吸收管体积为50 ml 或 125 ml，吸收液装液分别为20 ml 或50 ml ，以～ L/min 的流量，采气5～20 min。样品保存：采集好的样品应置于冰箱内2-5℃种保存，并且在2天内分析完毕，以防止甲醛被氧化。

空气中甲醛气体含量的简易测定

空气中甲醛气体含量的简易测定教学目标： 1．知识目标：学习和探讨空气中甲醛气体含量简易测定的方法和技能。 2．能力目标：通过空气中甲醛气体含量测定装置和操作方法的设计，培养学生实验设计和创造性思维能力，培养学生做实验的能力。 3、情感目标：培养学生勇于解决问题的心理品质，加强同学间的合作。教学重点：引导学生探讨简易测定空气中甲醛含量的方法教学难点：实验的规范操作教学方法：诱思探究教学工具：多媒体、实验教学过程：同学们，我们都知道居室的豪华装璜往往带来甲醛对室内空气的污染，而甲醛对人体有害，不同浓度的甲醛对人体的伤害不同，国家标准规定，室内甲醛气体的最高允许浓度是0．08mg／m^3。那我们的教室中甲醛含量是多少呢，大家想不想知道？现在就让我们一起来探讨简易测定空气中甲醛含量的方法。首先我们来讨论几个问题：

(1) 甲醛是一种无色易溶于水的有刺激性气味的气体，甲醛分子中含有醛基，此基团决定了甲醛具有什么重要的化学性质？答：决定了甲醛具有还原性。 (2) 酸性高锰酸钾溶液具有什么重要的化学性质？高锰酸钾溶液显何颜色,其显色的灵敏度如何?答：酸性高锰酸钾溶液具有强氧化性。高锰酸钾溶液显深紫色，用它滴定无色或者浅色试液时一般不需要另加指示剂，因为MnO4-本身的颜色（粉红色）来指示终点。所以我们可以用已知浓度的酸性高锰酸钾溶液氧化空气中甲醛来确定其含量。化学反应方程式如下：4MnO4―＋5HCHO＋H＋＝4Mn2＋＋5CO2↑＋11H2O 由于空气中甲醛含量不多，我们可配制浓度约为1×10-4mol/L的高锰酸钾溶液。 (3) 气态物质跟溶液中的物质发生化学反应的一般装置是怎样的？要使气态物质跟溶液中的物质发生完全反应，其实验装置和操作各应注意什么? 答：一般装置是将气体导入装有反应物的装置中，其实验装置和操作应注意装置的气密性要良好，导管要尽量伸入到溶液底部使气体与溶液充分接触。所以我们可以采用下图的装置接下来我们来设计实验步骤： 1、用移液管准确量取1mL0.010mol/L的高锰酸钾溶液于100mL容量瓶中，再用蒸馏水将其稀释至刻度线。配成浓度为1.0×10∧-4mol/L高锰酸钾溶液。

游离氨基酸

总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉. 仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计. 一、试剂 1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。 2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。 0.2M 醋酸：11.55ml 冰醋酸定容至1000ml。 0.2M 醋酸钠：16.4g 无水醋酸钠或27.2g 醋酸钠.3H2O溶于1000ml水中。 0.2M 醋酸6.8ml 0.2M 醋酸钠43.2ml，混匀，如果有PH计，可以测一下（基本差不多），如果高了点，可以加一点0.2M 醋酸，低了，再加一点醋酸钠，最终浓度为0.2M。如果要别的浓度，可以稀释。 3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml 氨基酸标液。

4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。 5.10％乙酸二、标准曲线制备度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤： 1. 烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。 2. 1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。四. 计算：求三重复的平均值，由标准曲线得知各样的氨基酸ug数，代入公式计算。氨基酸含量（mg/g干样）=｛氨基酸ug数×（提取液总体积/测定体积）｝/（样品g数×1000）

室内空气中甲醛的取样与测定——AHMT分光光度法

实验三室内空气中甲醛的取样与测定——AHMT分光光度法一、实验提要甲醛（HCHO）无色气体，易溶于水和乙醇。甲醛对皮肤和粘膜有强烈的刺激作用，可使细胞中的蛋白质凝固变性，抑制一切细胞机能，由于甲醛在体内生成甲醇而对视丘及视网膜有较强的损害作用。甲醛对人体健康的影响主要表现在嗅觉异常、刺激、过敏、肺功能异常及免疫功能异常等方面。室内空气中甲醛主要来源于室内装饰的人造板材、人造板制造的家具、含有甲醛成分并有可能向外界散发的其他各类装饰材料及燃烧后会散发甲醛的材料。室内空气质量标准规定甲醛的最高允许含量为0.10mg/m3。空气中甲醛的测定方法主要有AHMT分光光度法、乙酰丙酮分光光度法、酚试剂分光光度法、气相色谱法、电化学传感器法等。 1.实验目的（1）了解和掌握室内空气中甲醛的采样方法；（2）了解室内空气中甲醛的测定方法，掌握AHMT分光光度法测定甲醛的方法。 2.实验原理空气中甲醛与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂在碱性条件下缩合，然后经高碘酸钾氧化成6-巯基-5-三氮杂茂[4，3-b]-S-四氮杂苯紫红色化合物，其色泽深浅与甲醛含量成正比。 AHMT分光光度法测定范围为2mL样品溶液中含 0.2～3.2 μg甲醛。若采样流量为1L/min，采样体积为20L，则测定浓度范围为 0.01~0.16 mg/m3。测定甲醛时，乙醛、丙醛、正丁醛、丙烯醛、丁烯醛、乙二醛、苯（甲）醛、甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、仲丁醇、异丁醇、异戊醇、乙酸乙酯无影响；二氧化硫共存时，使测定结果偏低。因此对二氧化硫干扰不可忽视，可将气样先通过硫酸锰滤纸过滤器，予以排除。二、仪器、试剂及材料 1.仪器材料（1）空气采样器：流量范围0～1 L/min；（2）多孔玻板吸收管：10 mL容量、棕色；（3）10mL具塞比色管；（4）可见光分光光度计。 2.试剂 (1) 吸收液：称取1g三乙醇胺、0.25g偏重亚硫酸钠和0.25g乙二胺四乙酸二钠溶于水中并

《室内空气中甲醛的测定》练习题(精)

《室内空气中甲醛的测定》练习题备注：每题后面的简单、一般、困难是指题目的难易程度。一、选择题 1.根据《公共场所空气中甲醛测定方法》（GB/T18204.26-2000）（酚试剂分光光度法）测定空气中的甲醛时，取 2.8mL含量为36%～38%甲醛溶液，用水稀释至1L。配成甲醛标准贮备液，其准确浓度通过碘量法标定得到。临用时，配制成浓度为1.0μg/mL 的甲醛标准使用液，此标准使用液（ C ）。 A、可稳定12h B、可稳定48h C、可稳定24h D、可长期使用 2.根据《公共场所空气中甲醛测定方法》（GB/T18204.26-2000）（酚试剂分光光度法）测定空气中的甲醛时，绘制标准曲线时与样品测定时（ D ）。 A、温度应完全一致 B、不受温差影响 C、温差应不超过5℃ D、温差应不超过2℃ 3.根据《公共场所空气中甲醛测定方法》（GB/T1820 4.26-2000）（酚试剂分光光度法）测定空气中的甲醛时，配制的吸收原液应贮存于合适容器中，在冰箱内可以稳定（ B ）d。 A、5 B、3 C、5 D、7 4.根据《公共场所空气中甲醛测定方法》（GB/T18204.26-2000）（酚试剂分光光度法）测定空气中的甲醛时，甲醛与酚试剂反应生成嗪，在高铁离子存在下，嗪与酚试剂的氧化产物反应生成（ A ）化合物。（一般） A、蓝绿色 B、紫色 C、黄色 D、红色 5.根据《公共场所空气中甲醛测定方法》（GB/T18204.26-2000）（酚试剂分光光度法）测定空气中的甲醛时，配制的吸收原液应贮存于（ B ）中。（一般） A、棕色瓶 B、棕色 C、玻璃瓶 D、塑料瓶 6.环境空气采样时，现场必须记录用于污染物浓度计算的项目包括（ BCDE ）。(困难) A、采样地点 B、采样时间 C、采样流量 D、采样时气温 E、采样点大气压二、判断题 1.根据《公共场所空气中甲醛测定方法》（GB/T18204.26-2000）（酚试剂分光光度法）测定空气中的甲醛时，配成甲醛标准贮备液用碘量法标定时，应同时用水作试剂空白，并且应进行两次平行测定，滴定误差应小于0.05mL，否则重新标定。（√）

测定茶叶中游离氨基酸总量研究

测定茶叶中游离氨基酸总量研究采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。确定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。所得线性方程A=4.312X-0.017，相关系数r=0.99955，回收率达到92.2%左右，精确度为0.8%，试验操作简单，重复性和稳定性良好。茶叶游离氨基酸茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。以谷氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。本试验对该方法的主要影响因素，精密度和回收率等进行研究，确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。 1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅，型号电子分析天平：感量为0.0001g，型号紫外可见分光光度计。可调式电炉。1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。PH8.0磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水，定容作为母液。（1ml含谷氨酸1mg）。配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml浓度的标准溶液。采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。1.3.2样品处理称取3g（精确到0.0001g）粉碎混合均匀过60目筛样品于500ml的锥形瓶中，加450ml煮沸的蒸馏水，沸水浴浸提45min，每10min震摇一次，减压过滤至500ml容量瓶中，残渣用热蒸馏水洗涤2-3次，冷却，定容。 2结果与讨论2.1反应条件加水与不加水的比较本试验选择反应条件加水和不加水两种标准系列的比较：分别吸取两组0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL浓度0.1mg/ml谷氨酸工作液于一组25mL容量瓶中，一组加水4ml，另一组水4ml再分别加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液+0.5ml2%茚三酮溶液，沸水浴15min 加热，冷却蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。试验结果显示加水的标准系列显色效果不理想，标准曲线线性很差。而不加水的标准曲线线性好，相关系数R2=0.9991。 2.2标准工作液浓度的选择本试验通过对配制的不同浓度的标准溶液（0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml）测定加标回收率进行比较。本实验分别选取4份茶粉一份作为本底，另3份加入不同量的氨基酸标准液进行样品处理。取1ml的茶汤测定其游离氨基酸总量作为本底量，另3份分别内含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加标量。按GB/T8314-2002方法测定，试验结果表明

实验：空气中甲醛浓度的测定

《空气理化检验》实验空气中甲醛浓度的测定（乙酰丙酮光度法）一、原理在过量铵盐存在下，甲醛与乙酰丙酮生成黄色化合物3，5-二乙基-1，4二氢卢剔啶，在最大吸收波长414nm处比色定量。环境空气取样体积30L时，最低检出浓度为0.05mg／m3，测定上限为2.5 mg／m3。二、器材 1．U型气泡吸收管； 2．大气采样器流量范围0～1L／min； 3．10ml具塞比色管； 4．分光光度计。三、试剂 1．吸收液：双蒸馏水； 2．乙酰丙酮溶液称取25g乙酸铵于lOOml烧杯中，加适量水溶解，加入3.0ml冰乙酸和0.25ml新蒸的乙酰丙酮，用水定容至lOOml。 3．甲醛标准储备液吸取2.8ml甲醛溶液(含甲醛36％～38％)，用水稀释至1000ml，此溶液每毫升含甲醛含量约为lmg／L，用碘量法标定准确含量。 4．甲醛标准溶液临用时用水将准确含量的甲醛标准储备液逐级稀释成 5.00μg／m1的标准应用液。四、分析步骤 1．灌注10ml吸收液入吸收管中（用移液管从吸收管空泡端小口加入）； 2．检查采样器，调整流量为0.5L／min； 3．连接采样器（注意连接顺序），以0.5L／min流量采集室内空气样10L（采样20min）。采样后转入具塞比色管中，用清洗吸收管的少量纯水定容至刻度； 4．配制标准系列取6支分别加入甲醛标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml，加水至刻度。 5．向标准系列试管和样品试管中各加入乙酰丙酮溶液 2.00ml，混匀，于沸水中加热10min，取出冷却。在分光光度计上于414nm波长，以0号管为参比，用1cm比色皿测定吸光度（注意检查比色皿配对，吸光度值±0.001）。 6．以标准系列中甲醛含量(μg)为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,在标准曲线上查得样品对应的甲醛含量。 7．读取测定条件下实验室的气温、气压值，用于计算。五、计算空气中甲醛含量（mg／m3）＝m／V 式中: m为在标准曲线上查得样品对应的甲醛含量，μg；Ｖ为换算为标准状态下的采样体积，L。六、结果分析卫生标准：室内空气中甲醛限值0.08 mg／m3

绿豆芽中游离氨基酸的测定

绿豆芽中游离氨基酸总量的测定一、实验目的：掌握茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法。二、实验原理：游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。三、材料、仪器设备及试剂材料：绿豆芽仪器设备：722型分光光度计，分析天平，研钵，容量瓶，移液管，水浴锅，三角瓶，漏斗试剂:水合茚三酮试剂、乙酸-乙酸钠缓冲液、标准氨基酸、0.1%抗坏血酸、10%乙酸四、实验步骤 1.样品的制备用剪刀将绿豆芽剪碎、混匀，称取1g 放入研钵中加入5mL 10%乙酸，研磨匀浆后，用蒸馏水稀释至100mL 。混匀，并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。 2.标准曲线的制作取6支20ml 具塞刻度试管，下表操作试剂管号 1 2 3 3 5 6 标准氨基酸/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 无氨蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮/mL 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸/mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量/μg 1 2 3 4 5 加完试剂后混匀，盖上大小合适的玻璃球，置沸水中加热15min ，取出后用冷水迅速冷却，并不时摇动，使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去，进而呈现蓝紫色时，用60%乙醇定容至20 ml 。混匀后用1cm 光径比色皿在570 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 3.样品的测定吸取样品滤液1.0ml ，放入20mL 干燥试管中，加无氨蒸馏水1.0ml ，其他操作与制作标准曲线相同。根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。四、结果计算按下式计算样品中氨基态氮的含量。 100V V C 100s T ???= W 克样品中氨基态氮含量式中：C 为从标准曲线上查得的氨基态氮含量，/μg;V T 为样品稀释总体积，mL ；Vs 为测定时样品体积，mL ；W 为样品鲜重。五、实验结论与误差分析六、思考题 1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物颜色都相同吗？为什么？ 2.抗坏血酸的作用是什么?

游离氨基酸总量的测定

植物体内游离氨基酸总量的测定方法一：一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。二、仪器设备分光光度计；电子天平；容量瓶25ml或50ml 3个；漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量；20ml刻度试管 7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。三、试剂 1. 3%茚三酮试剂称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。 2. 氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。 3. 标准氨基酸精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。

4. 95%乙醇；异丙醇（分析纯）。四、操作步骤 1. 标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。加完试剂后混匀，在100℃水浴中加热12min（加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。 2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速称取0.10~0.20g（视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入20ml刻度试管中，再加蒸馏水10ml盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20min以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml 容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。 3. 样品测定另取4支洁净干燥的试管，其中3支分别加入0.5ml提取液，另一支加0.5ml蒸馏水，然后在上述4支试管中分别加入NaCN缓冲液、水合茚三酮各0.5ml，加完试剂后盖塞，置沸水浴上加热12min，冷却后，再分别加5ml 95%乙醇，摇匀，以空白作参比，在波长570nm下测其光密度。根据光密度查标准曲线（或用回归方程计算）即可求出提取液中氨基酸的浓度。方法二：一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。二、仪器设备

室内空气中甲醛的测定方法酚试剂分光光度法

室内空气甲醛的测定酚试剂分光光度法 1. 原理空气中的甲醛与酸试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。 2. 测量范围测定范围为0.1~1.5μg，采样体积为10L时，可测浓度范围0.01~0.15mg/m3。 3. 试剂本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水；所用的试剂纯度一般为分析纯。 3.1 吸收液原液：称量0.10g酚试剂，简称MBTH，加水溶解，置于100ml容量瓶中，加水至刻度。放冰箱中保存，可稳定3d。 3.2 吸收液：量取吸收原液5ml，加95ml水，即为吸收液。采样时，临用现配。 3.3 1%硫酸铁铵溶液：称量l.0g硫酸铁铵（NH4Fe (SO4)2·12H2O)用0.1mol/L盐酸溶解，并稀释至100ml。 3.4 0.1000mol/L碘溶液：称量40g碘化钾，溶于25ml水中，加人12.7g碘。待碘完全溶解后，用水定容至1000ml。移入棕色瓶中，暗处贮存。 3.5 lmol/L氢氧化钠溶液：称量40g氢氧化钠，溶于水中，并稀释至1000ml。3.6 0.5mol/L硫酸溶液：取28ml浓硫酸缓慢加人水中，冷却后，稀释至1000ml。 3.7 硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3)=0.1000mol/L]：可购买标准试剂配制。 3.8 0.5%淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状后，再加人100ml 沸水，并煮沸2~3min至溶液透明。冷却后，加人0.1g水杨酸或0.4g氯化锌保存。 3.9 甲醒标准贮备溶液：取2.8ml含量为36% ~ 38%甲醛溶液，放人1L容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液lml约相当于lμg甲醛。 3.10 甲醛标准溶液：临用时，将甲醛标准贮备溶液用水稀释成1.00ml含10μg 甲醛溶液，立即再取此溶液10.00ml，加入100ml容量瓶中，加人5ml吸收原液，用水定容至100ml，此液1.00ml 含l.00μg甲醛，放置30min后，用于配制标准色列。此标准溶液可稳定24h。 4. 仪器和设备

酚试剂测空气甲醛浓度

酚试剂分光光度法测甲醛摘要：本文研究了室内空气中痕量甲醛的测定方法一一酚试剂分光光度法，考察了该法的测定原理，并选择了最佳实验条件。甲醛：甲醛是无色，具有强烈刺激性气味的气体，易溶于水、醇和醚。是室内环境的主要污染物之一。甲醛具有较高毒性，在我国有毒化学品优先控制名单上甲醛高居第二位。甲醛已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质，是公认的变态反应源，也是潜在的强致突变物之一。随着国家标准氓用建筑工程室内环境污染控制规莎GB50325—2001(2006腑的制订和实施，规定了室内<公共场所卫生标准检验方法>GB／T18204．26—2000中酚试剂分光光度法的测定结果为准。国家对不同场所空气中甲醛含量作了相应的规定；公共场所甲醛≤0．12 mg／m3，居室内甲醛≤0．08 mg／m3 酚试剂分光光度法测甲醛酚试剂分光光度法测定室内空气中的甲醛浓度具有良好的线性关系，操作简便快捷，灵敏度高于其他比色法，其相对标准偏差小，回收率为95％以上。为室内空间环境检测甲醛的主要方法。因此，我们选用此方法测定甲醛含量。主要检验仪器及试剂可见光分光光度计；大型气泡吸收管：有5ml，10ml刻度线空气采样器：流量范围0一lL／min 10ml比色管吸收原液(0．1％)：0．10 g酚试剂(C6H．SN(CH3)C：NH2·HCl，简称MBTH)，用水定容至100ml：吸收液(O．005％)：另取5ml吸收原液，加95ml蒸馏水，采样时现用现配。；硫酸铁铵溶液(显色剂)(1％)：1．O g硫酸铁铵(NH4Fe(SO4)2·12H2O)，用O.1 moL ／L盐酸溶液定容至100 mL：甲醛标准贮备液(1 mg／mL)：：取2．8ml甲醛溶液(A．R．含量36％一38％)。放人lL溶量瓶中加蒸馏水稀释至翔度，其准确浓度用碘量法标定。；甲醛标准工作液(1ug／mL)：：临用时，将甲醛标准贮备溶液用蒸馏水稀释成1．00ml含10ug甲醛，立即再取此溶液10．OOml加入100ml容量瓶中，用水定容至lOOml，加入5ml吸收原液。此溶液1．00ml含1．00ug甲醛。放置30min后，用于绘制标准曲线。；实验所用试剂均为分析纯，实验用水为2次蒸馏水。测定原理空气中的甲醛与3一甲基-2-苯并噻唑酮腙(简称酚试剂)反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。颜色深浅与甲醛含量成正比，通过比色定量。反应中，Fe3+为氧化剂和显色剂，一般采用硫酸铁铵的酸性溶液。

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