冷冻
山东莱阳伊达实业公司
年产500吨冻干食品项目商业计划书
一、执行总结
（1）项目概况：真空冷冻干燥技术生产的冻干食品，可最大限度地保留产品的色、香、味、形和营养成分，被国内外公认为是生产高品质脱水食品的最好加工技术和最好的脱水保鲜食品。是发展效益农业、提高产品附加值的一种高新技术。是国家九五计划和863计划重点研发项目,现在技术已经十分成熟，并投入产业化生产。
（2）项目投资规模：该项目计划为4条LG—200fx2型生产线，总投资为7，000万元 (8 46万美元)，其中：设备购置，土地购置和厂房建设计5，660万元（684万美元），其它费用1，340万元 (162万美元)。
（3）项目建设规模：项目总占地面积约73，380平方米。其中：生产设施面积13，380
平方米，配套设施14，500平方米，其它占地面积45，500平方米。
（4）项目的经济效益分析：（以草莓为例）生产和销售1吨冻干草莓平均综合成本为6.8万元，销售1吨冻干食品平均价格为17万元，每吨盈利10.2万元（保守估计），再扣除所得税33%，（3.4）万元，每吨净利润6.8万元，全年合计生产500吨，税后净盈利3，4 00万元(约400万美元)。
（5）项目市场预测：由于人们生活水平的提高，工作节奏的加快，以及对食品的方便、营养、绿色的追求，国际市场的冻干食品供不应求。目前冻干食品的年消费量，美国500万吨，日本160万吨，法国150）万吨，欧美的其它一些国家冻干食品的消费量也非常可观。冻干技术广泛应用到食品和医药行业的各个领域。1、方便食品领域。2、即食汤料领域。3、粉
末蔬菜领域。4、颗粒蔬菜领域。5、医药保健品领域。同时由于人们收入的增长和认识水平的增长，对冻干食品的需求稳定增长，中国国内市场前景也十分广阔。
（6）项目建设：共分二期，一期建设周期为1年，二期建设周期为1年，两年完成，投资回收期3.4年。
(7) 引资方简介：莱阳市伊达实业公司现有资产人民币4，100多万，业务主要集中在化工，机电安装，建材，食品加工和酒店业，历年被评为中国农业银行山东省分行信用AA 级企业。具有良好的商业和银行信用，在其发展的过程中取得银行的大力支持。
（8）管理团队特点: 年轻，有抱负，互补性强，有较高的文化素质，既有相关行业的专业技术背景和丰富的国际营销经验，又有很强管理能力和团队协作精神。
（9）合作方式：合资。按照出资额确定合作双方所占的股份和双方的权益。投资期为十年。
二、产业背景和公司概述
（1）产业发展背景
当前世界食品工业的发展有三大趋势：随着全球生态环境日益恶化，无污染的绿色食品越来越受到人们的欢迎，因而生产绿色食品成了食品工业发展的主要趋势；随着人们的生活节奏日益加快，人们对饮食用餐越来越要求快捷，因而生产方便食品成了食品工业发展的另一趋势；随着人们的高血脂、高血压、糖尿病、心脑血管疾病的发病率不断上升，人们对改变不合理的饮食结构的愿望越来越强，因而生产低热量、低脂肪的保健食品成了食品工业发展的又一重要趋势。冻干技术能很好地吻合“绿色食品”、“方便食品”、“保健食品”的三大发展趋势。我们应该积极适应消费者这一巨大市场需求，积极发展冻干食品工业。
真空冷冻干燥食品是采用国际上先进的食品加工技术,将新鲜蔬菜、水果、土特产等食品速冻干燥而制成的干制品,具有保持原有食品色、香、味、营养成分和形状不变等优点, 复水性好、保存期长,广泛应用于航天、军用及野外作业等方面,被国家列为今后重点发展的六大食品加工业。
（2）国际市场展望
我国农副产品资源极其丰富，急需深加工增值，生产冻干食品的成本也远比其他国家低得多。这种低成本对外商产生了巨大的吸引力。在近几年里，更多的外商由国外市场转向中国市场大量求购冻干食品。这可视为在我国发展冻干食品外销创汇的大好机遇。
由于冷冻干燥食品具有天然、营养、方便等特点，自然成为正在世界范围内掀起的厨房革命（即食物制作从家庭厨房转向工业化生产）的一个重要组成部分。它作为一种产业正以极快的速度发展。从2002年法国世界食品博览会反馈的信息来看，全球特别是欧美、俄罗斯等一些发达国家对这种产品的需求正在日益扩大。其订单的数量和订量都是令人吃惊的，最小的订量都在500吨以上，多的达几千吨，发展前景十分可观。
目前，日本由于产业调整，农副产品加工已转向国外，其冻干产品的缺口2—3万吨（不包括咖啡等饮料）都将依赖进口。欧美也有这种趋势。俄罗斯也需要大量进口冻干食品。我国目前冻干产品年产几千吨，产量增加的潜力和出口余地都很大。
（3）国内市场展望
我国是世界上最大的食品消费国，其饮食文化同日本和亚洲经济新兴国家和地区相近，因此食品工业发展模式差异不大。随着经济的快速发展，随着厨房革命步伐的加快，以冻干食品作配料的各种方便食品必然有很大的市场。以方便面而言，日本、香港、新加坡、台湾等地目前人均年消费量在40包以上，韩国则高达80包。其中20%为冻干食品作辅料的高档型。而我国目前人均年消费量仅为5包，而且基本上是低档型。预计至2010年可能达到人均消费量20包。按10%为高档型，每包辅料15ｇ计，则每年仅方便面辅料一项即需冻干食品4万吨。加上食品加工业，快餐业的配料，各种汤料，饮料等，每年冻干食品的消费量将超过10万吨。国内冷冻干燥技术正处于刚刚起步阶段，而冻干食品在世界上作为一种成熟的商品也不过20年的历史，还有相当长的发展道路要走。由此可见，国内市场的前景也是十分可观的。
（4）冻干食品种类
随着食品冻干工艺和冻干设备的发展，应用冻干技术加工食品的范围日益扩大，目前市场上的冻干食品已达22大类80多种，包括：肉类、肉制品、鱼贝类、海产品、蔬菜类、汤类、芋类、乳制品、蛋类、水产制品、谷类、水果类、饮料、菌类、渍菜类、油炸类、点心、豆制品、酵素、保健品、医药及其它食品。大多数冻干食品不是靠零售商零售，而是用作食品工业中的各种食品的配料，主要是为汤料业、配餐业、饮品业、公用事业部门和食品加工业者采用，用于生产各种方便食品、医药保健品及军用品。
（5）引资方简介
莱阳市伊达实业公司创建于1993年，现有资产人民币4，100万元，业务主要集中在化工，机电安装，建材，食品加工和酒店业，历年被评为中国农业银行山东省分行信用等级AA 级企业。具有良好的商业和银行信用，在发展的过程中取得银行的大力支持。管理团队年轻，有魄力，具有很强的技术背景和管理能力。考虑到当地丰富的原材料和人力资源，以及食品国际贸易的传统，伊达实业公司的管理团队一直对高档食品市场的发展非常关注并与相应的科研院所建立合作关系，经过对国内外食品市场和食品加工技术的慎重研究和分析，公司被冻干食品发展的良好前景所吸引，决定将发展重点转移到冻干食品行业来。
三、冻干技术原理和工艺
（1）冻干技术原理
冻干是从冻结的物料产品中去除水分的过程，它分为真空冷冻干燥和常压冷冻干燥二种，由于一些条件限制目前采用的是真空冷冻干燥。冻干目的是保留产品的完整的生物和化学结构及其活性。象其它许多的技术步骤，一种冻干的类型被称做升华，是自然发生的。升华指的是溶剂，比如水，象干冰一样，直接从固态变为气态的过程。传统的干燥会引起材料皱缩，破坏细胞。这种情况将不会发生在冻干里，因为固体构成被在其位置上的坚冰支撑着。在冰升华时，它会留下孔隙在干燥的剩余物质里。
冻干过程分为冷冻、升华、解析干燥三个阶段，每一个阶段都有相应的要求，不同的物料其要求各不相同，各阶段工艺设计及控制手段的差异直接关系冻干产品的质量和冻干设备的性能。
1．冷冻阶段
冷冻干燥首先要把原料进行冻结，使原料中的水变成冰，为下阶段的升华做好准备。冻结温度的高低及冻结速度是控制目的，温度要达到物料的冻结点以下，不同的物料其冻结点各不
相同。冻结速度的快慢直接关系到物料中冰晶颗粒的大小，冰晶颗粒的大小对固态物料的结构及升华速率有直接关联。一般情况下，要求1--3小时完成物料的冻结，进入升华阶段。
2．升华阶段
升华干燥是冷冻干燥的主要过程，其目的是将物料中的冰全部汽化移走，整个过程中不允许冰出现溶化，否则便告冻干失败。升华的二个基本条件：一是保证冰不溶化；二是冰周围的水蒸汽必须低于610帕（正确的说法应是低于物料冻结点的饱和蒸汽压）。升华干燥一方面要不断移走水蒸汽，使水蒸汽压低于要求的饱和蒸汽压，另一方面为加快干燥速度，要连续不断地提供维持升华所需的热量，这便需要对水蒸气压和供热温度进行最优化控制，以保证升华干燥能快速、低能耗完成。
3．解析干燥
物料中所有的冰晶升华干燥后，物料内留下许多空穴，但物料的基质内还留有残余的未冻结水分（它们以结合水和玻璃态形式存在）。解析干燥就是要把残余的未冻结水分除去，最终得到干燥物料。
（2）冻干工艺
国外的冻干技术发展较早，如丹麦和日本。而我国在很长一段时间内由于厂家制造冻干机技术水平所限，真空冻干机是非标准设备，在尚处于发展初期。国内众多的食品冻干机（不管是进口还是国产）其品质参差不齐，冻干品产量质量及能耗各说己见，有些甚至把落后的工艺手段吹嘘成国际先进水平，其科学态度极不严肃。冻干机涉及真空、制冷、热工、微机等技术领域，它是把速冻、制冷、真空、热工、自控等工艺过程有机结合的一个整体，采用的工艺过程不同、其各工艺过程结合的不同，都关系到冻干机的性能。但不管怎样，只要冻干品质量好、产量高、设备能耗低（水电汽）、自动化程度高（操作简便：从物料放入按钮开机，速冻真空升华干燥一气呵成，提示冻干完成后关机出料）、设备可靠性高、维护成本低且方便，用户认可，就可以认为是好设备。
我公司采用中国航天工业总公司下属沈阳新阳冻干机械设备公司的设备，该设备几年前便完成项目攻关，取得国家级专利，投入到产业化生产，并经过生产实践检验，性能稳定，且吸收了国外冻干工艺的先进技术，优于国内其他同类设备。
冻干过程：速冻（时间快慢对冻干品质量有影响，1至3小时完成）--- 抽真空至一定的工作点（时间5至40分钟）--- 升华干燥（按工艺曲线加热、保持真空度，此阶段最复杂，时间最长）--- 冻干结束（判断冻干结束点）--- 出料
1．速冻
原料经过挑选、漂洗、整形、放盘等前几道工艺后，便可以进入冻干阶段。冻干的第一步必须对冻干物料进行速冻，把放了物料的料盘置于冻干机中进行速冻（有的冻干机不带速冻功能，要另配速冻机）。速冻工艺有几种，我方设备主要采用真空制冷法：利用抽真空使物料中水分蒸发带走热量，冷却物料达到制冷目的。不管采取何种方式，都应该保证物料在基本不变形的前提下在规定时间内冻结到一定的温度。
2．真空保持
为保证物料中的冰不溶化而直接汽化（升华），并不断移走汽体，保证升华正常进行，必须使箱内真空度低于某一温度下冰的饱和蒸汽压（610pa以下）。真空度的保持所用的装置有：多级蒸汽喷射泵，罗茨泵+水环泵，冷阱+罗茨泵+水环泵，冷阱+罗茨泵+滑片泵，冷阱+滑片泵。
采用冷阱是为了捕捉水汽，降低真空泵的负荷，设计合理的冷阱基本不会导致真空泵失效，能耗也低，不过对制冷系统、冷阱的设计要求较严。
3．加热方式
随着冰不断升华汽体的移走，也带走物料的热量，使物料温度（冰温）持续走低，从而引起冰的饱和蒸汽压降低，升华速度放慢。为保持一定的升华速率，就必须不断给物料补充热量。热量补充太少会降低升华速率，热量补充太快会引起冰的溶化，导致物料塌陷冻干失败。加热方式有以下几种: 微波加热法；接触加热法；辐射加热法；接触、辐射混合加热法。
接触加热法，辐射加热法，和接触，辐射混合加热法三种方法都利用加热搁板进行，其加热介质有蒸汽油、424介质，而油、424介质既可当加热介质又可以做制冷媒体（速冻时）。
4．自控系统
由于冻干过程较复杂，且工作状态范围较窄，稍有不慎便会造成冻干品质量下降，因此要求采用自控系统。冻干机自控系统设计要求操作简便，从物料放入按钮开机，速冻真空升华干燥一气呵成，提示冻干完成后关机出料。有关的温度、压力控制点要精心选择、合理控制，速冻、真空保持、加热的关联应控制恰当，针对不同的物料设置工艺曲线。
四、目前市场调查和分析
1．市场分析
真空冻干技术和冻干食品在我国刚刚起步。随着我国粮食生产、果蔬业、畜牧业、水产业的进一步发展，品种各异的冻干食品将会逐步占领广阔的市场。
随着经济发展和人民生活水平和日是水平的日益提高,人们饮食逐步从温饱型向讲究营养保健、原汁原味、新、特等高档食品过渡, 对冻干食品的需求将会稳定增长。一些高级宾馆尤其是各国驻华使馆对无公害新特果菜消费越来越多, 纷纷前来定货。
而同时国际冻干食品市场需求增长很快，据统计世界浓缩果汁总产量60万吨, 而需求量达80多万吨, 缺口20万吨。目前世界冻干食品销售额达65亿美元, 仅日本每年要花费1000亿日元进口冻干食品, 俄罗斯每年缺口15万吨左右, 冻干食品的主要消费地为欧洲，日本、韩国、美国、俄罗斯和东南亚各国。我国临近这些国家, 运输方便, 国内外市场广阔。
现在我国利用冻干设备生产的食品主要包括：汤料、虾仁、半成品（如鸡蛋粉）、保健品（如干人参）及食品配料（如方便面中的脱水蔬菜），年产量不足10，000吨。据专家预测，在2010年，我国仅高档方便面辅料一项，约需冻干食品4万吨，加上各种食品快餐配料、汤料、饮料，每年冻干食品的消费量将超过10万吨。国内外对冻干食品的巨大需求，为发展我国的冻干食品工业提供了大好机遇。
（2）竞争分析
作为中国九五计划和863火炬计划的重点研发项目，目前冻干食品加工的技术已经十分成熟，冻干食品产业化成为可能。人们已经逐渐认识到冻干食品行业发展的广阔前景。但由于资金，技术和管理水平等因素的限制，生产规模还很小，远远满足不了国内外的需求。目前，我国的冻干食品生产厂家主要集中在山东，浙江，和西北地区的陕西甘肃等地。特点是企业数目少，生产规模小，利润高，产品绝大部分外销，生产满足不了需求。国内冻干产品的供方市场尚处于最初的发展阶段，为进入者提供了很好的发展机会。
（3）地缘优势
莱阳市地处胶东半岛的中心，是胶济铁路的枢纽，临近青岛和烟台优良港，离青岛国际航空港只有1个小时的路程。烟青一级公路贯穿东西，青岛国际航空港有直达航线通往日本，韩国和新加坡等国家。海陆空交通十分方便。
莱阳是山东省最重要的食品出口基地之一，原材料资源丰富，劳力成本低，具有蔬菜食品出口加工的传统，近几年来涌现出一批食品出口加工的骨干企业，在国家蔬菜和食品出口贸易
中占有重要的地位。近几年来，众多外商被莱阳丰富的资源，优越的地理位置和良好的投资环境所吸引，纷纷到此下订单或投资设厂，建立合资或独资企业，从事蔬菜食品国际贸易。
拟建项目地处莱阳市外向型工业园，临近高速公路，交通方便，而且可充分享有政府给予的优惠政策。
五、优劣势综合分析（SWOT analysis）
六、公司发展战略
公司宗旨：通过开发，生产和经营高质量，多品种绿色健康的冻干食品，回报社会，服务大众，同时实现企业的盈利目标。
公司的发展目标：5年内成为国内冻干食品生产的骨干企业；8年内成为国际冻干食品领域知名的企业；争取国外上市。远期目标：创立国际食品行业知名品牌。
公司计划先上1条生产线，如果生产及运营良好，将再上3条生产线，以实现规模经济，降低平均成本，增强企业竞争能力。如果一期工程达到预期利润目标，二期将继续扩大生产规模，使公司成为国内较大的冻干食品生产基地。
目前，国外对冻干食品的需求很大，市场已经十分成熟。而中国国内冻干食品的消费市场才刚刚开始发展，消费量受产品成本和人们认识水平的制约，还存在着很大的提升空间，很难在短时间内实现较大的飞跃。鉴于市场的这种特点，公司拟采用先外后内的营销战略。
首先，公司将侧重国际营销，通过参加国际食品类博览会，推广自己产品。完成一定积累后，然后在海外市场和客户集中的地方建立国际营销中心和海外的办事机构。与此同时，完善公司网络建设，通过网络传媒向海外推广自己产品。
当建立起国外的销售网络后，开始重视国内销售市场的开发。通过电视广告，和其他的产品推广活动，宣传自己的产品。国内业务发展到一定规模，通过兼并和重组扩大生产规模，取得协同效应和规模效应，并在国内各主要目标市场设立办事机构和分公司，从而建立起国内的销售网络。
树立强烈的品牌意识，在国内外营销的过程中通过严格保证质量，树立企业形象，加强营销推广，建立起自己的优良品牌。并加强品牌管理，不断提高产品附加值。
条件成熟时实现境外上市，吸引更多资金注入企业的运营当中，建立起规范的管理系统，接受股东和其他债权人的监督，实现企业发展的不断的良性循环。
七、总体进度安排
（1）工程建设进度。
2002年6月着手项目筹备；2002年7月购买土地110亩；2002年8月订购设备；2003年1月开始厂房建设；2003年3月设备安装；2003年6月一期项目完成，开始投产；预计2004年5月二期项目完成。二期完成后企业将成为国内规模最大的冻干食品生产基地之一。
（2）产品开发。
世界冻干食品产业正在利用其加工特点，向各个食品加工行业深入发展，冻干产品正在广泛应用到食品行业的各个领域。方便食品领域：高档次的方便面和方便米饭，日益广泛地使用冻干工艺制成冻干最终产品。而冻干蔬菜、冻干水产品及肉类、冻干调味品等作为配料被广泛使用在方便食品中。即食汤料领域：用各种冻干蔬菜、冻干调味品、冻干水产品及肉类、冻干蛋类等经科学搭配混合而制成的各种口味的汤料，即冲即饮，即可口又方便。颗粒蔬菜领域：采用多种蔬菜粉碎混合，经冻干后制成蔬菜颗粒，其富含胡萝卜素、叶绿素、多种维生素、矿物质、纤维素等天然营养物质，味道鲜美可口，食用方便，很适宜婴幼儿和老年人食用。粉末蔬菜领域：把冻干蔬菜磨成粉末可用作配料加工其他食品，还可制成蔬菜挂面、糖果与糕点等。调味品领域：葱姜蒜等经冻干后制成粉或段状和其他调味品如胡椒粉、番茄粉等进行小包装后直接上市销售，或作为配料用于其他冻干食品中。速溶饮品领域：包括咖啡、茶、豆奶、奶、饮料等。在保健医药品领域内也有广泛的应用。
我公司对冻干食品的开发首先集中在方便食品领域和即食汤料领域，然后根据国内外市场的需求和企业自身的情况开发别的产品，如粉末蛋类，颗粒蔬菜和医药保健品。
该项目总投资7，000万元（846万美元），其中固定资产投资5，660万元（684万美元），流动资金1，340万元（162万美元），年产冻干食品500吨，销售收入8，500万元（约1，000万美元），年利税约5，000万元（约600万美元），税后利润3，400万元（约400万美元），投资回收期约为3.4年。
由于该项目成本高，对资金的需求量比较大，伊达实业公司自有资金难以满足规模化生产的要求，希望引进外资，用以购置设备和作为流动资金，同时希望外商带来先进的管理理念，参与到企业的经营管理和国际营销中来，与伊达实业公司同舟共济，共担风险，共图大业。
八、关键的风险、问题和假定
（1）由于冻干食品生产成本很高，生产的过程中要注意降低食品冻干机的能耗，提高自控手段、冻干品合格率等性能。企业建立自己的技术研究团队，致力于减少能耗和提高品质。并随时与设备研发方和相关的科研院所建立密切的联系，吸收采纳新技术以降低成本。加强生产运作环节的管理，节约能源。
（2）由于冻干食品货值高，所以加强国际营销和订单管理，减少库存，改善现金流将是企业持续不变的目标之一。将营销作为经营工作的重点，建立库存管理系统，减少库存，最大限度加速资金的周转。
（3）对于食品行业来说检疫至关重要，冻干食品也不例外。企业应当建立起严格的检疫标准，使产品能够通过日本，美国和欧洲等重要的目标销售国家的要求。方法是熟悉各个国家的进口检疫要求，采用无化学和农药残留的绿色蔬菜作为原材料，建立品质管理与检疫实验室，在加工的各个环节对物料，人员和环境严格消毒，采纳国际食品行业通行的质量控制标准去要求生产，并积极参加国际质量认证。目前的原材料来源，生产技术水平，设备性能，和检疫人员的素质和经验，能够保证企业的产品达到各国检疫的要求。
九、管理团队
伊达实业公司在发展过程中注重管理团队的素质和互相协作。拟建公司管理团队的主要特点是：年轻化，高素质，既有相关行业的专业技术背景和丰富的国际营销经验，又有很强管理能力和团队协作精神。主要管理人员的教育及工作背景如下：
王云晖，35岁，河海大学机械工程专业毕业，工程师。历任莱阳市机电设备安装公司工程师，副总经理，伊达实业有限公司董事长，总经理，莱阳市残疾人服务中心总经理。擅长领域：管理，中小企业融资，冷冻机械设备安装。具有很强的领导能力和广泛的社会联系。1 992年创建了伊达实业公司，现在已经发展为拥有资产约人民币4100万，经营范围涉及工程安装，食品，化工，建材，和酒店业等的综合性公司。公司连续6年被评为中国农业银行山东省分行信誉“AA” 级企业，为农业银行莱阳支行，中国银行莱阳支行重点支持企业。
姜永东，33岁，山东大学经济管理专业毕业，经济师。历任莱阳市外贸进出口总公司食品进出口公司经理，莱阳市外贸绣品公司总经理。1997年作为莱阳市政府重点选派的20名跨世纪干部之一到南开大学学习企业管理。擅长领域：运作管理，国际贸易，熟悉食品行业。在进出口公司任职期间，为集团出口创汇业务骨干；1995年在外贸绣品厂经营举步维艰之
际担任总经理，一年之内扭亏为盈，使其避免了被拍卖的命运，并成为莱阳外贸系统的主要创汇企业之一。1998年加入伊达实业公司的管理团队。
王云晟，29岁，东北林业大学贸易经济毕业，新加坡国立大学工商管理硕士生，国际商务师。现任山东莱阳伊达实业公司副总经理，北京文泰嘉合网络技术有限公司合伙人之一。曾在中国出口商品基地建设总公司工作，后任中国基地嘉佳进出口公司进出口部经理，总经理助理。擅长领域：企业管理咨询，国际贸易与金融中小企业融资，营销策划。在中基嘉佳进出口公司创建之初时加入公司，成为业务骨干，参与公司建立，集团建立和扩张的重大决策，现在公司已发展成为外经贸部下属经营门类齐全，年进出口额8000多万美元的外贸企业集团。2001年加入伊达实业公司管理团队，2002年到新加坡国立大学商学院学习。
郭文贵，54岁，上海同济大学制冷工程专业毕业，高级工程师。曾任山东莱阳商业集团食品公司副总经理，山东龙顺食品公司总工程师，食品冷冻工程专家。擅长领域：冷冻技术及安装工艺。
石岩，35岁，中国农业大学食品工程博士，教授，科研拔尖人才，硕士生导师。国内食品基因工程领域专家，具有较强的食品研发能力。
赵明清，45岁，莱阳农学院会计专业毕业，会计师，曾任山东深汇食品有限公司财务经理。具有丰富的会计专业知识和技能，尤其熟悉外贸食品行业会计。
另外，管理团队的人员构成可以根据投资双方的要求进行相应的调整。
十、拟建企业经济状况预测
公司计划总投资7，000万元（846万美元），年产冻干食品约500吨，实现销售收入8，5 00万元，（约合1，000万美元），实现利税5，000万元（约合600万美元），税后利润3 400万元（400万美元）。（外向型工业园内合资企业享受两免三减税收上的优惠和其他的优惠。）税前利润率（税前利润/销售额）约为58.8%，净利（税后利润）率为40%。固定成本为土地，厂房，设备和其他配套设施投资，工人工资和管理费用。半可变成本：营销费用。可变成本为原材料成本，水电等能源消耗。总投资回收期约为3.4年（从开始建设到收回全部投资，已经考虑折旧费用）。
十一、财务预测
部分冻干食品去年国际市场价格为：牛肉130元／公斤、羊肉180元／公斤、胡萝卜130
元／公斤、大葱140元／公斤、枸杞240元／公斤、菠菜160元／公斤、百合200元／公斤、蘑菇260元／公斤、草莓180元／公斤、洋葱130元／公斤、青辣椒190元／公斤、红辣椒210元／公斤、大蒜片60-100元／公斤、蒜苗130元／公斤（人民币）。
公司投资7，000万元，年产冻干食品约500吨，实现销售收入8,500万元，（约合1，000万美元），实现利税5，100万元（约合600万美元），税后利润3，400万元 (约合400
万美元)。（外向型工业园内合资企业享受两免三减减税收优惠）.
基本计算方法如下（以草莓为例）：
每吨冻干食品销售价格： 170,000元/吨
生产和销售每吨成本： 68,000元/吨（毛利润+销售前所发生的各种费用）
每吨税前利润为： 102,000元/吨
所得税率为33%： 34,000元/吨
每吨税后利润为： 68,000元/吨
年总产量： 500吨
年销售收入： 170,000 x 500 = 85,000,000元（约1,000万美元）
年生产和销售成本： 68,000 x 500 = 34,000,000元（约400万美元）
年税前利润： 102,000 x 500 = 51,000,000元（约600万美元）
年上缴所得税： 34,000 x 500 = 17,000,000元（约200万美元）
年税后利润： 680,00 x 500 = 34,000,000元（约400万美元）
备注：
1．生产和销售成本包括：原材料成本，水电费，工资，管理费用，营销费用，运输费用，包装费用，商检报关费用和其他除了折旧费用以外的所有费用。
2．这里没有计算毛利润，而是将毛利润和费用和在一起计算。因为一般来讲原材料成本相对于销售价格很低，食品冻干行业最大的成本在于能耗费用，和其他的费用。计算毛利润没有现实意义。
3．合资企业享受前两年免除所得税，随后三年减半征收所得税的优惠政策。
4．企业如果产品出口可以得到出口退税的补偿。会最终增加企业的净利润。
十二、投资方式及权益
莱阳市伊达实业公司以土地，新建厂房，新购置设备作价共计约4，000万元进行合作。希望投资方投入400万美元。投资方资金将用于流动资金和购买设备以扩大规模。
双方按照投资额确定所占股份和相应的权益。原则上伊达公司占超过51%的股份。投资双方委派管理人员方参与企业的经营管理。
投资方在每个财务年度末按照所占股份取得相应税后利润。投资期至少为10年，10年后投资双方可根据情况商定撤资与增资事宜。
制冷设备常见故障及处理方法
制冷系统及设备常见的故障原因及排除方法 1、冷系统安全运行必要的三个条件是什么 ? 2、什么叫蒸发温度 ? 3、什么叫冷凝温度 ? 4、什么叫再冷却 ( 或称过冷 ) 温度 ? 5、什么叫中间温度 ? 6、什么叫压缩机的吸气温度 ? 7、什么叫压缩机的排气温度 ? 8、什么叫潮车? 9、什么原因能造成潮车? 10、潮车后能造成什么后果? 11、如何排除潮车 ? 12、排气压力超高什么原因? 13、压缩机不能启动 14、压缩机启动后即停机 15、气缸有敲击声(活塞机) 16、曲轴箱有敲击声(活塞机) 17、压缩机启动后无油压 18、润滑油油压过低(活塞机) 19、压缩机耗油量增大 20、轴封漏油或漏气 21、压缩机卸载装置机构失灵 22、压缩机吸气温度比蒸发温度高(比规定值高) 23、压缩机排气温度相对压力下温度偏高 24、压缩机吸入压力太低 25、机组发生不正常振动(螺杆机) 26、制冷能力不足 27、机器运转中出现不正常的响声(螺杆机) 28、排气温度或油温过高 29、排气温度或油温下降 30、滑阀动作不灵活或不动作 31、螺杆压缩机体温度过高 32、压缩机及油泵轴封泄漏 33、油压过低 34、油消耗量大
35、油面上升 36、停车时压缩机反转 37、吸气温度低于应用温度 38、制冷系统及设备的调整压力值 ( 供参考 ) 39、高压系统试验压力是多少 ? 40、低压系统试验压力是多少 ? 41、系统真空试验压力是多少 ? 42、设备的检修期要求 43、螺杆压缩机组检修期限 1、冷系统安全运行必要的三个条件是什么 ? 答：(1) 系统的制冷剂压力不得出现异常高压，以免设备破裂。 (2) 不得发生湿冲程、液爆、液击等误操作，以免设备被破坏。 (3) 运动部件不得有缺陷或紧固件松动，以免损坏机械。 2 、什么叫蒸发温度 ? 答：蒸发器的制冷剂在一定压力下沸腾汽化时的温度称为蒸发温度。 3 、什么叫冷凝温度 ? 答：冷凝器的气体制冷剂，在一定的压力下凝结成液体的温度称为冷凝温度。 4 、什么叫再冷却 ( 或称过冷 ) 温度 ? 答：冷凝后的液体制冷剂在高温、高压下被冷却到低于冷凝温度后的温度称冷却温度 ( 或过冷温度 ) 。 5 、什么叫中间温度 ? 答：中问冷却器中制冷剂在中问压力 (P2) 下所对应的饱和温度称中间温度。 6 、什么叫压缩机的吸气温度 ? 答：压缩机的吸气温度，可以从压缩机的吸气阀前面的温度计测得, 吸气温度一般都高于蒸发温度，其高出差值取决于回气管的长度与管道保温情况，一般应较蒸发温度高 5～10 ℃ ( 称过热度 ) 。 7 、什么叫压缩机的排气温度 ? 答：压缩机的排气温度可以从排气管路上的温度计测得。排气温度的高低与压力比(PK/P· ) 及吸气温度成正比，如果吸气的过热度越高, 压力比愈大, 则排气温度也就愈高, 否则相反, 一般排气压力稍高于冷凝压力。 8 、什么叫潮车? 答：制冷工质因未能或未充分吸热而将液体或湿蒸汽被压缩机吸入机称为潮车 9 、什么原因能造成潮车? 答：(1) 系统中的气液分离器标高是否低于标准( 要求 1.2m 以上 )。 (2) 系统中的自动控制液位失灵。 (3) 手动供液过大、过急( 或节流阀漏或开启过大 )。
六种常见制冷方式.docx
六种常见制冷方式 一、蒸汽式压缩制冷 原理：在蒸汽压缩制冷循环系统中，压缩机从蒸发器吸入低温低压的制冷剂蒸汽， 经压缩机绝热压缩成为高温高压的过热蒸汽，再压入冷凝器中定压冷却，并向冷却 介质放出热量，然后冷却为过冷液态制冷剂，液态制冷剂经膨胀阀（或毛细管）绝 热节流成为低压液态制冷剂，在蒸发器内蒸发吸收空调循环水（空气）中的热量， 从而冷却空调循环水（空气）达到制冷的目的，流出低压的制冷剂被吸入压缩机， 如此循环工作。 压缩机功能： 把制冷剂蒸气从低压状态压缩至高压状态，创造了制冷剂在冷凝器中常温液化的 条件。被称为整个装置的“心脏”。 冷凝器功能： 使压缩机排出的制冷剂过热蒸气冷却，并凝结为制冷剂液体，在冷凝器内制冷剂的热量排放给冷却介质。 分类：水冷式冷凝器、风冷式冷凝器、蒸发式冷凝器。 风冷式冷凝器： 使用和安装方便，不需要冷却水、热量由分机将其带入大气中。但同样传热系数低， 相对其他类型重量偏大，翅片表面会积灰是散热能力下降，须及时清理。 蒸发器功能： 依靠制冷剂液体的蒸发来吸收冷却介质热量的换热设备，它在制冷系统中的任务 是对外输出冷量。 分类：满液式（沉浸式）蒸发器、干式蒸发器。干式蒸发器：沉浸式蛇管、壳管 式、板式、喷淋式等。 节流装置功能： 截流降压：高压常温的制冷剂流过膨胀阀后，就变为低压、低温的制冷剂液体。 控制制冷剂流量：膨胀阀通过感温包感受蒸发器出口处制冷剂过热度的变化来控制 阀的开度，调节进入蒸发器的制冷剂流量，使其流量与蒸发器的热负荷相匹配。 控制过热度：膨胀阀具有控制蒸发器出口制冷剂过热度的功能，即保持蒸发器的 传热面积的充分利用，又防止压缩机冲缸事故的发生。
细胞冻存方法
细胞冻存方法 一、概述 目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。 二、主要冷冻设备和材料 常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有35L3和50L3两种。使用时要注意以下几点：（1）一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-196℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。 （2）液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。（3）在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。 细胞冻存时常备的材料有：0.25%胰蛋白酶，含10%～20%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121°C蒸气高压消毒)，2mL安瓿（或专用细胞冻存管）、吸管、离心管、喷灯、纱布袋（或冻存管架）等。 三、细胞冻存方法 主要操作步骤为： （1）选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。 （2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。（3）将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。 （4）将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时（此步可省略），再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，最后沉入液氮中。 细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞冻存的方法与步骤
细胞冻存的方法与步骤文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）
细胞冻存、解冻方法与细胞计数 江苏大学附属医院风湿科李晶??????〖〗 一、细胞冷冻保存 1.材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII) 2、冷冻保存方法： （1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。 -20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 （2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 3、步骤： （1）冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。 （2）配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。 （3）离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
冷藏和冷冻方法的原理
低温处理作为贮藏食品中抑制化学反应和酶反应、阻止微生物生长的手段，很早就被极其广泛地应用了。 在一般情况下，温度越低微生物生长越慢，至某一温度界限以下则所有的微生物活动完全停止，因此可以采用低温（冷冻）来控制微生物生长。而在实际的食品保藏中，常常米用0C左右或略高一点的温度来冷藏。在这样的温度下，虽然不可能完全抑制微生物的生长，但可在相当长时间内使食品保持原来的状态。由于经济上是合算的，所以对某些种类的食品来讲，冷藏可以说是出色的保藏方法。 1、微生物生长和环境温度的关系 微生物生活环境的物理和化学条件只能在一定的范围内变化。如果超越了变化范围，则生长就不能进行。另外，综合的环境条件，即使大致在可能生长的范围内，如果各个环境因素远离微生物生长的最适值，则也会相应地降低微生物生长速度。 环境温度从这个意义上来说也是控制微生物生长活动的最重要因素之一。用冷冻、冷藏来防止食品的腐败和变质，应使其环境温度处于不适于大部分腐败微生物的生长的范围内，从而使得由微生物活动而引起的食品成分的各种反应难以发生和进行，这也就是低温保藏的原理。 通常，微生物可以生长的温度范围很广，从最低的-10C到最高的80C之 间。然而，这是对含有非常多种类的微生物群的整体而言，实际上从各种微生物来看，其可以生长的温度范围比此值狭隘得多。生长最适温度在25?45C的微生物称为嗜温微生物，也是我们周围普遍存在的微生物，引起食品腐败和变质的微生物大部分属于此群。生长最适温度在25C以下的微生物称为低温微生物，这类微生物为冷藏时引起食品变质的重要微生物群。最适温度在45C以上的微生物是土壤中常见的菌群，称为嗜热微生物。 2、在低温环境中微生物的生长 多数嗜低温细菌在0C或更低的温度下，有某种程度的生长。但是在这样的温度下，即使某些微生物能生长，也并不是一个好的温度。
微小组织快速冰冻切片法
微小组织快速冰冻切片法 自1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技术列为正式诊断方法以来,国内外病理同仁在这方面做了大量工作,随着技术的不断完善,冰冻切片已成为病理科的常规工作,这为术中诊断提供了条件。随着人们生活水平的不断提高和医学科学技术的不断发展,人们对健康越来越重视,临床医生和患者常常要求对直径小于0.3 cm的微小组织作出快速诊断,由于组织小,有时难以制片和诊断,影响了此项工作的全面开展。为解决这一问题,在实际工作中,我们不断摸索、改进、完善,总结出了一种较实用的微小组织快速冰冻切片法,现介绍如下。 1材料与方法 1.1材料①微小组织包括纤维胃镜活检标本,肾穿刺标本,脱落细胞沉淀后剩余物等,均为我院门诊及住院部送检。②原西德产Leitz 1720型低温恒冷冰冻切片机。③组织包埋托的改进:找一直径为0.8～1 cm,高约1 cm的圆柱形铜质材料,一端可上螺丝,在机器所配的组织包埋托中央打一小孔,将铜质的圆柱体用螺丝与组织包埋托固定,铜质圆柱体周围缠以3～4圈医用胶布,周围略高于铜质圆柱体。④包埋剂:取适量甲基纤维素,然后加入适量蒸馏水调成糊状,煮沸,放凉,再加入适量麝香草酚,分装于空的超声耦合剂瓶内,贮存于4℃冰箱待用。 1.2方法①开机预冷:提前开机,将低温恒冷切片机冷台及切片刀冷至-22℃左右。②滴加包埋剂:在改进后的组织包埋托上滴加包埋剂,待冷冻好后修平,将微小组织平放于修好的平面上,冷冻片刻,修切,若是长条组织,如肾穿刺标本,组织与组织包埋托旋钮呈60°角,若是多块组织则应放置于同一平面,且不互相重叠。③切片:用手术刀片切去组织周围多余的包埋剂。使之成为长方形或正方形,然后开始切片,切片厚度3～5 μm。④固定:95%乙醇或乙醚酒精混合液(乙醚,95%乙醇等量混合)固定5～10 s。⑤染色:苏木素1～2 min,0.5%盐酸酒精分化1 s,0.25%氨水返蓝,伊红染1 min,95%乙醇3 s,无水乙醇3 s,在烘片机上烤干,封片。 2结果 组织切片完整,可连续切片,HE染色组织结构清晰,色彩鲜艳,细胞核、细胞质对比明显。 3讨论 快速低温恒冷冰冻切片是手术中病理诊断的方法之一,具有较广泛的应用,在很大程度上决定了手术的方式和治疗方案的确定,因此质量较好的冰冻切片,对病理医生和临床医生都至关重要。对于大块组织的冰冻切片基本不成问题,既可用一块组织多切,又可再次取材,然而,对于直径小于0.3 cm的微小组织来说,材料显得尤为珍贵,要作出正确的诊断,就必须要有一张高质量的冰冻切片。笔者将原组织包埋托进行改进,使切片刀与组织包埋托的接触面缩小,这样便于观察组织,又不至于损伤刀口,修切时防止将组织切完,有利于切片。
细胞冻存与复苏步骤原理及注意事项
培养细胞的冷冻保存与复苏 ?概述?冻存过程 ?冷冻保存与复苏的原理?冻存结果 ?冷冻速率?讨论 ?冷冻保存温度?冻存细胞的复苏 ?复温速率?非玻璃化冻存细胞的复 苏 ?冷冻保护剂?主要材料 ?冷冻保存方法?复苏过程 ?非玻璃化冻存方法?结果 ?主要材料?讨论 ?冻存过程?玻璃化冻存细胞的复苏 ?冻存结果?主要材料 ?讨论?复苏过程 ?玻璃化冻存方法?结果 ?主要材料?讨论
? Ｐolge等人(１9４9)发现了甘油对低温下贮存的细胞具有保护作用,她们仍 然以精子进行研究发现,加入甘油能够大大提高贮存于-７９0C下精子的存活率。接下来的重大进展就是Luyｅｔ(１9５1)与Ｌoveｌock(1953)等多位学者发现了电解质浓度对贮存细胞的损伤作用。她们的结论就是,电解质浓度增大就是造成贮存细胞损伤的主要原因。冷冻理论后来得到Ｍerryman(１９5６)、Reｙ(195７)以及Ｓmｉtｈ(1９61)等学者的继续与发展。 １94９年至1９６0年这一段时间可以称为冷冻保存的“甘油时期”,这一时期对生物材料的冷冻保存一般都就是以甘油作为保护剂。Lovｅｌock(１95９)等人发现了一种新的化学保护剂,这就就是人们熟悉的二甲基亚砜(ＤMSＯ)。而且,用于冷冻保存的仪器也有明显的发展。目前,无论就是冷冻保存理论、各种保护剂、冷冻用品与设备以及各种生物材料的保存与复苏技术都已十分成熟与完备。 返回页首 ?冷冻保存与复苏原理 在低于-70０C的超低温条件下,有机体细胞内部的生化反应极其缓慢,甚至终止。水在低于零度的条件下会结冰。如果将细胞悬浮在纯水中,随着温度的降低,细胞内外的水分都会结冰,所形成的冰晶会造成细胞膜与细胞器的破坏而引起细胞死亡。这种因细胞内部结冰而导致的细胞损伤称为细胞内冰晶的损伤。如果将细胞悬浮在溶液中,随着温度的降低,细胞外部的水分会首先结冰,从而使得未结 冰的溶液中电解质浓度升高。如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长,
制冷方法
第2章制冷方法 制冷的方法很多，常见的有：物质相变制冷，气体膨胀制冷，绝热放气制冷，电、磁制冷。 本章介绍现有的各种制冷方法，概述其基本原理和应用领域。 利用天然冷源也是获得低温的一个方面(例如，采集和贮存天然冰、冬灌蓄冷、深井水空调等)。面对工业化伴随而来的环境问题压力，利用天然冷源的环保意义日益突出。天然冷源利用会受到更多重视。 2．1 物质相变制冷 2．1．1 相变制冷概述 物质有三种集态：气态、液态、固态。物质集态的改变称为相变。相变过程中，由于物质分子重新排列和分子热运动速度的改变，会吸收或放出热量，这种热量称为潜热。物质发生从质密态到质稀态的相变时，将吸收潜热；反之，当它发生由质稀态向质密态的相变时，放出潜热。相变制冷就是利用前者的吸热效应而实现的。利用液体相变的，是液体蒸发制冷；利用固体相变的，是固体融化或升华冷却。 液体蒸发制冷以流体作制冷剂，通过一定的机器设备构成制冷循环，可以对被冷却对象实现连续制冷。它是制冷技术中使用的主要方法。 固体相变冷却则是以一定数量的固体物质作制冷剂，作用于被冷却对象，实现冷却降温。一旦固体全部相变，冷却过程即告终止。 1．固体相变冷却 常用的制冷剂是冰、冰盐、干冰，此外还有一些其他固体物质。 (1) 冰冷却 冰冷却是最早使用的降温方法，现在仍广泛应用于日常生活、工农业、科学研究等各种领域。冰融化和冰升华均可用于冷却，实际主要是利用冰融化冷却。 常压下冰在0℃融化，冰的融化潜热为335 kJ/kg。能够满足0℃以上的制冷要求。 冰冷却时，常借助空气或水作中间介质以吸收被冷却对象的热量。此时，换热过程发生在水或空气与冰表面之间。被冷却物体所能达到的温度一般比冰的融化温度高5－10℃。厚度10 cm左右的冰块，其比表面积在25－30 m2/m3之间。为了增大比表面积，可以将冰粉碎成碎冰。水到冰表面的表面传热系数为116 W/(m2·K)。空气到冰表面的表面传热系数与二者之间的温度差以及空气的运动情况有关。其值见表2－l。 表2－1 空气到冰表面的表面传热系数W/（m2·K） 冰的其他物理特性如下。 水冻结成冰时出现膨胀现象，其体积约增大9%。冰的膨胀系数与温度有关；见表2－2。冰的
新鲜和冰冻组织DNA提取操作规程
新鲜和冰冻血液DNA提取操作规程 1.目的 规范从新鲜和冰冻血液中提取DNA的操作。 2.适用范围 从新鲜和冰冻血液中提取DNA的操作过程。 3.定义和术语 DNA (Deoxyribonucleic acid) 即脱氧核糖核酸，遗传信息的储存及传递者，染色体的主要化学成分。 4.职责 样本库实验技术员负责从新鲜和冰冻血液中提取DNA。 5.设备和耗材 EDTA抗凝管、离心管、高速冷冻离心机、移液器及无菌枪头、水浴锅、玻棒、真空泵、摇床、-80℃冰箱、旋转器。 6.内容 6.1试剂准备 6.1.1所需试剂： 70%乙醇、无水乙醇、1xPBS、氯仿、EDTA、苯酚、TE缓冲液、蛋白酶K。 6.1.2 Tris-EDTA 0.5M EDTA，20ml 1M Tris，pH8.0，20ml
无菌水 6.1.3蛋白酶K(20mg/ml) 将200mg蛋白酶K加入到10mlTE缓冲液中，室温下放置20分钟后分装，并贮存于-20℃中。 6.2新鲜血样中收集白细胞 6.2.1将新鲜血液收集到EDTA抗凝管中。 6.2.2将血样转移至离心管并于4℃下1300g离心15分钟。 6.2.3吸去上清，并将淡黄色层小心转移至新管中再次离心，弃红细胞沉淀。 6.2.4将淡黄色层重悬于适量裂解缓冲液中，37℃温浴1小时后进行DNA提取。 6.3冰冻血样中收集白细胞 6.3.1将血样置于室温水浴进行解冻。 6.3.2解冻后将血样转移至离心管，加入等体积磷酸盐缓冲液，室温下3500g离心15分钟。 6.3.3吸去上清，将沉淀重悬于适量裂解缓冲液中，37℃温浴1小时后进行DNA 提取。 6.4 DNA提取(酚-氯仿法) 6.4.1将裂解液分装至一个或多个离心管中，裂解液体积不能超过离心管体积的1/3。 6.4.2加入蛋白酶(20mg/ml)至终浓度100ug/ml，用玻棒温和地将酶混入裂解液中。 6.4.3将裂解液置于50℃水浴中3小时，不时旋转溶液。 6.4.4将溶液冷却至室温，加入等体积的苯酚(此苯酚经0.1M Tris.HCl(pH8.0)平衡)。将离心管缓慢颠转10分钟使两相温和地混合。然后将离心管置于旋转器上1小时。
冷藏和冷冻方法的原理
冷藏和冷冻方法的原理 低温处理作为贮藏食品中抑制化学反应和酶反应、阻止微生物生长的手段，很早就被极其广泛地应用了。 在一般情况下，温度越低微生物生长越慢，至某一温度界限以下则所有的微生物活动完全停止，因此可以采用低温（冷冻）来控制微生物生长。而在实际的食品保藏中，常常采用0℃左右或略高一点的温度来冷藏。在这样的温度下，虽然不可能完全抑制微生物的生长，但可在相当长时间内使食品保持原来的状态。由于经济上是合算的，所以对某些种类的食品来讲，冷藏可以说是出色的保藏方法。 1、微生物生长和环境温度的关系 微生物生活环境的物理和化学条件只能在一定的范围内变化。如果超越了变化范围，则生长就不能进行。另外，综合的环境条件，即使大致在可能生长的范围内，如果各个环境因素远离微生物生长的最适值，则也会相应地降低微生物生长速度。 环境温度从这个意义上来说也是控制微生物生长活动的最重要因素之一。用冷冻、冷藏来防止食品的腐败和变质，应使其环境温度处于不适于大部分腐败微生物的生长的范围内，从而使得由微生物活动而引起的食品成分的各种反应难以发生和进行，这也就是低温保藏的原理。 通常，微生物可以生长的温度范围很广，从最低的-10℃到最高的80℃之间。然而，这是对含有非常多种类的微生物生物群的整体而言，实际上从各种微生物来看，其可以生长的温度范围比此值狭隘
得多。生长最适温度在25～45℃的微生物称为嗜温微生物，也是我们周围普遍存在的微生物，引起食品腐败和变质的微生物大部分属于此群。生长最适温度在25℃以下的微生物称为低温微生物，这类微生物为冷藏时引起食品变质的重要微生物群。最适温度在45℃以上的微生物是土壤中常见的菌群，称为嗜热微生物。 2、在低温环境中微生物的生长 多数嗜低温细菌在0℃或更低的温度下，有某种程度的生长。但是在这样的温度下，即使某些微生物能生长，也并不是一个好的温度。它们生长最快的温度通常为15℃或20℃。就是在特别低温下能生长的微生物，其最适温度也是在10℃左右。因此，在低温下，生长速度随着温度的降低而降低，0℃以下则极其缓慢。 研究结果表明，远离生长最适温度时，细胞分裂时间逐渐增长。在0℃左右，嗜低温细菌的分裂速度也极其缓慢。 3、嗜低温微生物的分布 微生物生长的适宜温度和进行代谢活动的温度范围，一般与此微生物生活环境的温度有关。大多数在水温低的海洋中生活的鱼类，在自然状态下附带的微生物几乎大部分都是嗜低温性的微生物，它们即使在0℃也能很好地生长。所以把附有这些嗜低温微生物的鱼体等进行冷藏，尤其是在0℃左右或略高一点的温度下贮藏时，经常会发现这类微生物生长的现象。例如；在-2℃下冷藏的鱼肉中，活菌数随时间的推移而增加。 由此，鲜鱼贝类等水产食品粘附嗜低温微生物的可能性比较大。
三种常用制冷方式之比较
三种常用制冷方式之比较 论文作者：xwqzy 摘要：本文对热电式空调、蒸汽压缩式空调、吸收式空调三种典型的制冷系统进行了比较，阐述了这三种空调系统的基本循环过程及运行特性。从对这三种系统的比较中可以看出，蒸汽压缩式空调系统COP值高，运行费用少，但它所使用的制冷剂会破坏臭氧层,对环境存在着有害影响；吸收式空调系统利用热能为动力进行循环，电能耗费少，但它体积庞大，设备复杂，价格昂贵；热电式空调系统是一种新型环保型空调系统，它结构简单，运行平稳可靠，但它运行费用很高，且制冷量较小。 关键词：热电式空调蒸汽压缩式空调吸收式空调 1、前言 本文介绍了三种主要空调系统的优缺点，蒸汽压缩式空调系统具有较高的制冷系数和较强的制冷、制热能力，但这种系统所使用的制冷剂CFCs，对臭氧层有活多或少的破坏，且运行时噪音很大，窗式空调尤为明显。分体式中央空调系统将冷凝器、压缩机封闭在一金属箱体内放在室外，将蒸发器装在一箱体内放在室内，从而可以降低系统的噪音，同时，它采用新型的制冷剂，例如用R134a取代CFCs，可以有效降低对臭氧层的破坏。但新型制冷剂的采用却使系统的COP值有所降低。吸收式空调系统的COP值中等，具有废热再利用及再生热的优点，但这种系统体积较大。热电式空调系统体积小，噪音低，但它的COP值较其他两种系统低，并且设备价格昂贵。此外，这种系统利用直流电运行，可使用电池或DV直接驱动。 2、三种空调系统的热力循环和原理 2.1 蒸汽压缩式循环 不设有换向阀的蒸汽压缩式空调系统只能在夏天用于制冷，大多数蒸汽压缩式空调系统能全年运行，既能制冷也能制热,两种过程分如图1所示。 在制冷循环系统中，压缩机从蒸发器吸入低温低压的制冷剂R134a蒸汽,经压缩机绝热压缩成为高温高压的过热蒸汽,再压入冷凝器中定压冷却,并向冷却介质放出热量,然后冷却为过冷液态制冷剂,液态制冷剂经膨胀阀（或毛细管）绝热节流成为低压液态制冷剂，在蒸发器内蒸发吸收空调循环水（空气）中的热量,从而冷却空调循环水（空气）达到制冷的目的, 流出低压的制冷剂被吸入压缩机,如此循环工作.
细胞冻存的方法与步骤
细胞冻存、解冻方法与细胞计数 江苏大学附属医院风湿科李晶〖返回主页〗 一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sｉｇma D-2６５0）、无菌塑料冷冻保存管(Naｌgene 5０0０—00２0)、0、４％（w／ｖ)tryｐan blue(GibcoBＲL1５250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KＲYＯ10Sｅri ｅsIＩ) 2、冷冻保存方法： （１)传统方法：冷存管置于4℃１0分钟－--＞-20℃3０分钟--－>-80℃１6~18小时（或隔夜)——->液氮槽ｖaｐorphａsｅ长期储存. -20℃不可超过１小时,以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入—80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 (２）程序降温:利用已设定程序得等速降温机以—１～-3℃／分钟之速度由室温降至（－8０℃以下）-12０℃，再放在液氮槽vａｐｏrphａｓｅ长期储存。适用于悬浮型细胞与hybｒidoｍａ之保存。 ３、步骤： （1）冷冻前2４－4８小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。 （2)配制冷冻保存溶液（使用前配制）：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMＳO）至20％浓度,即制成双倍得冻存液，置于室温下待用。 (3）离心收集培养之细胞，用加血清得培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约０、1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）取与细胞悬液等量得冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管,制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×１0６cｅlls/ｍl，混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中，1~2mｌ/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测.严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。 4、注意事项: （１）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（lｏgphase）且存活率高之状态，约为80~90%致密度。冷冻前检测细胞就是否仍保有其特有性质,例如hｙbrｉdoｍa应在冷冻保存前一至二日测试就是否有抗体之产生。
冷冻组织免疫组化实验方法
冷冻组织免疫组化实验方法 Protocol for the Preparation and Chromogenic IHC Staining of Frozen Tissue Sections Reagents Required ?Formaldehyde Fixative Solution: 85 mM Na2HPO4, 75 mM KH2P04, 4% paraformaldehyde, and 14% (v/v) saturated picric acid, pH 6.9. (Picric acid is optional, enhances preservation of morphology in some tissues). ?Sucrose Solution: 130 mM Na2HPO4, 30 mM KH2P04, 10% (w/v) sucrose, 0.01% sodium azide and 0.03% Bacitracin, pH 7.2 ?OCT Embedding Compound ?Isopentane ?Dry Ice Procedure This technique utilizes formaldehyde-based fixation before the tissue is frozen and sectioned using a cryostat. 1.To preserve tissue morphology and retain the antigenicity of the target molecules, fix the tissue by vascular perfusion with 500 - 700 mL of Formaldehyde Fixative Solution. 2.Perfuse the animal with 400 mL of Sucrose Solution. This step cryoprotects tissues frozen for cutting on a cryostat. Note: When it is not possible to fix by perfusion, dissected tissue may be fixed by immersion in a 10% formalin solution for 4-8 hours at room temperature. It is commonly accepted that the volume of fixative should be 50 times greater than the size of the immersed tissue. Avoid fixing the tissue for greater than 24 hours since tissue antigens may either be masked or destroyed. Note: R&D Systems scientists perfuse fix all rodent tissue with the exception of lung, spleen, and embryonic tissue, which are immersion fixed. 3.Dissect the tissue, mount in OCT embedding compound, and freeze at -20 to - 80 °C.
冷冻切片方法及注意事项
一、实验前准备 清理实验台及仪器。 开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15~-20℃*）。 准备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。 二、取材 解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内结构移位。 （注： 取材中目的标本既要明确也要确保其结构的完整性，应避免不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。） 三、冷冻切片 1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。 2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。 3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm间。 4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带,可避免组织摊片过程中皱折,保证组织结构的完整及切片的美观。
注： ①包埋剂的选用： 包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。常用的有三种包埋剂OCT剂、B超藕合剂以及普通胶水。B超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,普通胶水或OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。（OCT包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。） ②组织块过小： 先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30秒钟左右待胶凝固时将小组织放上,组织周围再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。 ③冷冻箱及冷冻头的温度高低，要根据不同的组织而定。温度过低会导致组织块过硬,切片碎裂,出现梯田状薄厚不均或空洞;反之,温度过高,组织块硬度不够,切片不易成形或成皱褶。数据图1供参考。 ④当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。 四、常用冰冻切片xx精—伊红染色 染色步骤： 1、冰冻切片用10%甲醛固定1~5分钟，流水冲洗2分钟，蒸馏水浸洗3分钟。 2、xx精1~2分钟。自来水快洗。 3、0.5%盐酸乙醇分色1~2秒。蒸馏水快洗。
比较常用的几种制冷的方法
比较常用的几种制冷的方法 1.1 液体汽化制冷 液体汽化制冷是利用液体汽化时的吸热效应而实现制冷的。在一定压力下液体汽化时，需要吸收热量，该热量称为液体的汽化潜热。液体所吸收的热量来自被冷却对象，使被冷却对象温度降低，或者使它维持低于环境温度的某一温度。 为了使上述过程得以连续进行，必须不断地将蒸气从容器（蒸发器）中抽走，再不断地将液体补充进去。由此可见，液体汽化制冷循环由液体工质低压下汽化、工质气体升压、高压气体液化、高压液体降压四个基本过程组成。 压缩式、吸收式、喷射式和吸附式制冷都属于液体汽化制冷方式。 1.1.1 压缩式制冷 压缩式制冷系统由压缩机、冷凝器、膨胀阀、蒸发器组成，用管道将其连成一个封闭的系统。工质在蒸发器内与被冷却对象发生热量交换，吸收被冷却对象的热量并汽化，产生的低压蒸气被压缩机吸人，压缩机消耗能量（通常是电能），将低压蒸气压缩到需要的高压后排出。压缩机排出的高温高压气态工质在冷凝器内被常温冷却介质(水或空气)冷却，凝结成高压液体。高压液体流经膨胀阀时节流，变成低压、低温湿蒸气，进入蒸发器，其中的低压液体在蒸发器中再次汽化制冷。 1.1.2 吸收式制冷 吸收式制冷是以热能为动力、利用溶液吸收和发生制冷剂蒸气的特性来完成循环的。吸收式制冷系统的主要部件 设该系统使用氨-水溶液为工作物质，则吸收器中充有氨水稀溶液，用它吸收氨蒸气。溶液吸收氨蒸气的过程是放热过程。因此，必须对吸收器进行冷却，否则随着温度的升高，吸收器将丧失吸收能力。吸收器中形成的氨水浓溶液用溶液泵提高压力后送入发生器。在发生器中，浓溶液被加热至沸腾。产生的蒸气先经过精馏，得到几乎是纯氨的蒸气，然后进入冷凝器。在发生器中形成的稀溶液通过热交换器返回吸收器。为了保持发生器和吸收器之间的压力差，在两者的连接管道上安装了节流阀5。在这一系统中，水为吸收剂，氨为吸收剂。 吸收式制冷的另外一种常见类型是以水为制冷剂，溴化锂水溶液为吸收剂的溴化锂吸收式制冷机，用于生产冷水，可供集中式空气调节使用，或者提供生产工艺需要的冷却用水。 吸收式制冷机消耗热能，可用多种不同品位的热能驱动。通常用1MPa（表压力）以下的蒸气或燃气、燃油为驱动热源。也可以利用温度在75℃以上的热水、废气等低品位余热驱动；还可以利用太阳能、地热等能源。因此，吸收式制冷易于实现能源的综合利用。 1.1.3 喷射式制冷 喷射式制冷以蒸气的压力能为驱动能源，用喷射器造成一个真空环境，使制冷剂在低温下蒸发而制冷。如图2-3所示，是一种开式循环的喷射式制冷原理图。从锅炉来的蒸气进入喷射器的喷嘴，在其中迅速膨胀，在喷嘴出口处达到很大速度并形成真空状态。由于高速气流的引射作用，将蒸发器内的蒸气不断抽吸出来，从而保持蒸发器的真空。在喷射器内，工作蒸
冰冻组织切片样品制备方法
冰冻组织切片样品制备方法 组织采集后，经固定、冷冻、切片、晾片，方可进行免疫抗体标记。 1、组织的采集、固定和保存： 不同来源的组织可依据实验条件和实验目的而考虑采用不同的固定和保存方法。此处介绍几种实验室常用方法。 液氮冷冻法： 采取新鲜组织后，即可放入液氮中，并保存于液氮中。 固定法： 采取新鲜组织后，4%多聚甲醛（4%PFA）4?C 固定1小时（根据组织大小和致密程度调整固定时间）或过夜，PBS缓冲液洗三次，每次10-30min，20%蔗糖中浸泡1小时或过夜，4?C保存于20%蔗糖（含0.05%NaN3）中。 2、组织的冷冻和切片： 组织的冷冻方法可根据固定和保存条件不同而不同。使用冷冻切片机，将组织冰切成4-20μm的切片，粘贴于处理过的载玻片上，室温干燥1小时后，可进行免疫标记。或放入载片盒，-80?C密闭保存。 气体CO2冷冻法： 将样品置于样品台的OCT中，打开钢瓶开关，CO2气体喷出，迅速冷冻组织样品。 干冰冷冻法：（适合小块和致密度低的组织，如胚胎、小块组织、活检组织等）将小组织块放入冷冻包埋模具中，调整切面位置（必要时可在体视镜下操作）后，置于干冰上（暂时无干冰，可置于-80?C），待冷冻完全后，-80?C密闭保存。 ●直接冷冻法：
将样品直接粘着在涂有OCT的样品台上，于冰切机（箱体温度-80?C）中直接冷冻。 3、冰冻组织切片的免疫荧光标记： 将冰冻组织切片从-80?C 冰箱中取出，室温放置10min, 待切片回温并干燥，PBS 10min 洗去OCT，可无需Triton处理，即可进行免疫抗体标记，操作步骤与培养细胞反应方法相同。 4、冰冻组织切片的免疫酶反应：（酶联免疫反应，在抗体作用之前或显色时组织样品需进行内源性酶抑制作用，以降低反应背景） 碱性磷酸酶（AP）: 密封保存的组织切片 PBS 5min ↓ 含0.5%NS,1%BSA的PBS中室温封闭30min-1hr ↓ 一抗（稀释过）室温1-1.5hr或4?C 过夜 ↓ PBS 10min ? 3 ↓ 二抗-AP（稀释过）室温1.5-2hr ↓ PBS 10min ? 3 ↓ 显色: AP-CDS 5min? 2 ↓ NBT4.5μl/ml、BCIP3.5μl/ml in AP-CDS 室温或37?C 5-30min ↓ TE 室温10min ↓
三种常用制冷方式比较
三种常用制冷方式比较 1、刖言 本文介绍了三种主要空调系统的优缺点，蒸汽压缩式空调系统具有较高的制冷系数和较强的制冷、制热能力，但这种系统所使用的制冷剂CFCs对臭氧层有活多或少的破坏，且运行时噪音很大，窗式空调尤为明显。分体式中央空调系统将冷凝器、压缩机封闭在一金属箱体内放在室外，将蒸发器装在一箱体内放在室内，从而可以降低系统的噪音，同时，它采用新型的制冷剂，例如用R134a取代CFCs可以有效降低对臭氧层的破坏。但新型制冷剂的采用却使系统的COP值有所降低。吸收式空调系统的COP fi中等，具有废热再利用及再生热的优点，但这种系统体积较大。热电式空调系统体积小，噪音低，但它的COP fi较其他两种系统低，并且设备价格昂贵。此外，这种系统利用直流电运行，可使用电池或DV直接驱动。 2、三种空调系统的热力循环和原理 2.1蒸汽压缩式循环 不设有换向阀的蒸汽压缩式空调系统只能在夏天用于制冷, 运 大多数蒸汽压缩式空调系统能全年行，既能制冷也能制热，两种过程分如图1所示。 在制冷循环系统中，压缩机从蒸发器吸入低温低压的制冷剂R134a蒸汽，经压缩机绝热压缩成 为高温高压的过热蒸汽，再压入冷凝器中定压冷却，并向冷却介质放出热量，然后冷却为过冷液态制冷剂,液态制冷剂经膨胀阀（或毛细管）绝热节流成为低压液态制冷剂，在蒸发器内蒸发吸收空调循环水（空气）中的热量，从而冷却空调循环水（空气）达到制冷的目的，流出低压的制冷剂被吸入压缩机，如此循环工作. 蒸汽压缩式空调系统的实际逆卡诺循环过程的值如下: 册仁= :-1 1■' ■■■ J — (1) 显然，当热源温度相同时，实际逆卡诺循环的COP c值比理想卡诺循环的COP rnot的值小，并且随着和…的增大而减小。 从公式（1）可以看出："，对COP c值的影响较’「亠大。空调系统正常运行时，蒸发器中空气出口温度比进口温度低，一般至少低8C,即大于等于8C。对于冷凝器，为使制冷系统能有效的运行，周围环境温度一般要求低于43C。
关于制作脑组织冷冻切片方法的改良
关于制作脑组织冷冻切片方法的改良 冷冻切片就是新鲜标本借助低温( - 18℃) ，使组织在短时间内达到一定硬度进行快速切片、染色的一种制片方法。冷冻切片有着制片快速、切片较薄、染色佳等优点，在各级医院病理科实验室广泛使用，但要在短时间内制作出高质量的冷冻切片难度较大，尤其是制作高质量的脑组织冷冻切片难度更大。现就我科制作脑组织冷冻切片的方法介绍如下。 1 材料与方法 1. 1 材料选取我院20XX-01 20XX-12 间送检冷冻切片的脑组织标本148 例。德国Leica CM1900 冷冻切片机，日本产Feather 一次性刀片，医用耦合剂，甲醇、Gill 改良苏木精染液、醇溶性伊红、梯度乙醇和二甲苯等试剂。 1. 2 方法①根据所取组织的大小在组织托上滴加适量的医用耦合剂; ②将组织块平放于包埋剂上并用冷冻锤轻压组织30 s，使组织迅速达到较低温度以防冰晶的形成，切片机冻头温度控制在- 14℃ ～ - 16℃为宜; ③切片时用力均匀，厚度8 m，用常温载玻片粘贴后放入甲醇中固定1 min;④放入Gill 改良苏木精染色1 min，水洗后直接用温水( 45℃左右) 返蓝，伊红染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。整个过程需时5 ～ 7 min。 2 结果 148 例脑组织冷冻切片完整，厚薄均匀，无皱褶刀痕，组织结构清
晰，核、浆着色鲜艳，透明度较好，接近常规HE 切片，极少出现影响诊断的因素，准确率 99%。图1 脑组织冷冻切片，组织结构清晰，颜色鲜艳，透明度好,细胞结构清楚，核浆着色分明. 3 讨论 脑组织冷冻切片要求制片快速，冷冻温度准确，防止冰晶出现和细胞肿胀。特别是脑组织含水较丰富、质地较软、结构疏松等特点，制作高质量的冷冻切片难度较大，在制片过程中应注意以下几个方面: ①脑组织冷冻切片出现冰晶的主要原因是没有迅速将组织冷冻到合适温度。其形成机制主要有: 一是蛋白质和水所形成的胶体状态受到破坏，水分从胶体状态的蛋白质中分离出来形成冰晶; 二是人体细胞大约含有30% ～ 40% 水分，水在4℃时体积最小，冷却至零度以下时水结成冰，体积增大。冰晶形成后细胞形态发生改变，当冰晶融化后，镜下可见原组织被挤压变形，留下大小不一、形态不定的空隙。笔者采用冷冻锤轻压组织，使组织块上下两面同时冷冻，达到迅速冷冻组织的目的。而冷冻切片机冻头温度控制在- 14 ～ - 16℃较为适宜，过低易造成组织过硬、变脆，影响切片质量; 其次，送检标本要避免用生理盐水纱布包裹，取材刀、镊子等不易粘水取材。②固定是冷冻切片的关键，要选用甲醇作为脑组织冷冻切片的固定液。甲醇具有固定时间短、细胞收缩小、对细胞核和抗原保存较好的特点。经甲醇充分固定的脑组织结构清晰，核浆对比鲜明，基本能保持组织的形态结构。在以往的脑组织冷冻切片染色中，存在苏木精染色时间过长的现象，多采用温水水浴加热苏木精染液或将苏木精染液放入恒温烤