分光光度法复习题
第十七章 吸光光度法复习题
一、填空题
17-1-1．已知某有色络合物在一定波长下用2cm 吸收池测定时其透光度T=0.60。若在相同条件下改用1cm 吸收池测定，吸光度A 为0.111，用3cm 吸收池测量，T 为0.46。
17-1-2．测量某有色络合物的透光度时，若吸收池厚度不变，当有色络合物浓度为C 时的透
光度为T ，当其浓度为1/3C 时的透光度为31T
。 17-1-3．影响有色络合物的摩尔吸收系数的因素是 入射光的波长
17-1-4. 已知KmnO 4的摩尔质量为158g ·mol -1，其水溶液的k 545=2.2×103L ·mol -1·cm -1。求此波长下质量分数为0.002%的KmnO 4溶液在3.0cm 吸收池中的透光度为14%。
17-1-5. 吸收曲线上光谱峰值处称为 最大吸收，它对应的波长称为 最大吸收波长，吸收曲线
的 形状 和 最大吸收波长与物质的分子结构有关，因此，吸收曲线的特征可作为对物质进行定性分析的基础。
17-1-6对于同一物质的不同浓度溶液来说，其吸收曲线的形状 相似 ；最大吸收波长 位置相同 ；只是吸收程度要 随浓度的改变而变化 ，表现在曲线上就是曲线的高低 不同 。
17-1-7多组分分光光度法可用解联立方程的方法求得各组分的含量，这是基于多组分溶液的吸光度等于___各组分吸光度之和_。
17-1-8分光光度法中所用的分光元件主要有 三棱镜 _和___光栅_两种。
二、选择题
17-2-1．符合朗伯-比尔定律的范围内，有色物的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是（ B ）
A ． 增加， 增加，增加；
B 减小，不变，减小；
C ．减小，增加，增加；
D 增加，不变，减小。
17-2-2.参比溶液是指（ A ）
A 吸光度为零的溶液
B 吸光度为固定值的溶液
C 吸光度为1的溶液
D 以上三种溶液均不是
17-2-3．在分光光度分析中，常出现工作曲线不过原点的情况。下列说法中不会引起这一现
象的是（C ）
A 测量和参比溶液所用吸收池不对称；
B 参比溶液选择不当；
C 显色反应的灵敏度太低；
D 不含KIO4的试样溶液。
17-2-4．用普通分光光度法测得标液C1的透光度为20%，试液的透光度为12%；若以示差分光光度法测定，以C1为参比，则试液的透光度为（ C ）。
A 40%
B 50%
C 60%
D 70%
17-2-5．今有两种有色络合物M和N。已知其透光率关系为lgT N-lgT M=1，则其吸光度关系为A N-A M=（ D ）
A 1
B 2
C -2
D –1
17-2-6．已知Ar(Mn)=55.0。准确称取含锰试样2.00g，处理成100.0mL溶液。取出25.00mL 溶液，将其中的Mn2+用KIO4氧化为MnO4-，稀释至100mL，在515nm波长处用2.00cm吸收池，测得吸光度为0.62。已知MnO4-的k515=2235L·mol-1cm-1。则该试样中锰的质量分数为（ A ）A 0.152% B 1.52% C 1.65 D 3.3
17-2-7．用饱和法（摩尔比法）测定Al3+与某显色剂形成的络合物的组成时，在同样加入1.0×10-3mol·L-1Al3+的溶液2.00mL的情况下，分别加入1.0×10-3mol·L-1的显色剂R的体积为：2.0mL, 3.0mL, 4.0mL, 5.0mL, 6.0mL, 8.0mL, 10.0mL, 12.0mL，在相同的条件下用1.0cm吸收池在一定波长下测得吸光度为：0.220, 0.340, 0.450, 0.573, 0.680, 0.669,
0.699, 0.699。因此，Al3+与显色剂R络合物的组成是（ B ）。
A 1：2
B 1：3
C 1：1
D 2：1
17-2-8．光度分析中，在某浓度下以1.0cm吸收池测得透光度为T，若浓度增大1倍，则透光度为（A ）
A T2
B T/2
C 2T
D T
17-2-9. 影响配合物的摩尔吸光系数的因素是 (B )
A.比色皿的厚度
B. 入射光的波长
C. 有色物的浓度
D. 配合物的lgKs0
17-2-10.以下说法有错误的是 (C)
A. 吸光度随浓度增加而增加
B. 吸光度随液层厚度增加而增加
C. 吸光度随入射光的波长减小而增加
D. 吸光度随透光率的增大而减小
17-2-11. 下列几组吸光度范围内，测量相对误差较小的是（ C）
A. 0.2～0.8
B. 0.1～0.8
C. 0.3～0.6
D. 0.2～0.6
17-2-12. 光度分析中选择参比溶液的原则是 (C )
A. 一般选蒸馏水
B. 一般选试剂溶液
C. 根据加入试剂和被测试液的颜色选择
D. 一般选择褪色溶液
17-2-13. 下列表述不正确的是 (B )
A. 吸收光谱曲线表明了吸光度随波长的变化情况.
B. 吸收光谱曲线以波长为纵坐标, 以吸光度为横坐标
C. 吸收光谱曲线中, 最大吸收处的波长为最大吸收波长
D. 吸收光谱曲线表明了吸光物质的光吸收特性
17-2-14. 在可见分光光度分析中，若试剂或显色剂有颜色，而试液无色时，参比溶
液应为（ C）
A.溶剂空白
B.样品空白
C.试剂空白
D.蒸馏水空白
17-2-15用普通分光光度法测得标准溶液C1的吸光度为0.21，试液的吸光度为0.54；若以
示差法测定，以标准溶液C1为参比，则试液的吸光度为（A．0.75；B．0.33；C．0.54；D．0.21；
17-2-16在紫外可见分光光度计中，用于可见光区的光源是（）。
A. 钨灯
B. 卤钨灯
C. 氘灯
D. 能斯特灯
17-2-17下例说法正确的是（）
A．透光率与浓度成直线关系B．摩尔吸收系数随波长而改变
C．分光光度法测定红色物质时，用红色光测定 D．玻璃棱镜适用于紫外光区
17-2-18测定某有色溶液的吸光度，用1cm比色皿时吸光度为A，若用2cm比色皿，吸光
度为
A.2A
B.A/2
C.A
D.4A
17-2-18吸光度读数在范围内，测量较准确。（）
A．0～1 B．0.15～0.7
C．0～0.8 D．0.15～1.5
17-2-19吸光光度法是（ D）
A．吸光光度法是根据溶液中物质的分子或离子对可见紫外光谱区辐射能的发射以研究物质组成和结构的方法。
B. 吸光光度法是根据溶液中物质的分子或离子对可见紫外光谱区辐射能的散射以研究物质组成和结构的方法。
C. 吸光光度法是根据溶液中物质的分子或离子对可见紫外光谱区辐射能的折射以研究物质组成和结构的方法。
D吸光光度法是根据溶液中物质的分子或离子对可见紫外光谱区辐射能的吸收以研究物质组成和结构的方法。
17-2-20吸光光度法的仪器中，光源的作用是（A）
A光源的作用是提供所需波长范围内的连续光谱。B.光源的作用是提供激发样品所需的能量。C.光源的作用是提供反应所需的能量。D光源的作用是提供所需的单色光。
17-2-21吸光光度法的仪器中，单色器的作用是（ A ）
A. 单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为最容易被样品溶液吸收的单色光。
B. 单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光。
C. 单色器的作用是将光能转换成电流进行测量.。 D 单色器的作用是盛装吸收试液。
17-2-22吸光光度法的仪器中，吸收池的作用是（D）
A. 吸收池的作用是将光源发出的连续光谱分解为最容易被样液吸收的单色光。
B. 吸收池的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光。
C. 吸收池的作用是将光能转换成电流进行测量.。 D 吸收池的作用是用于盛装吸收试液。
17-2-23吸收光谱曲线是（ B ）
A ：吸光度（A）--时间（t）曲线 B: 吸光度（A）--波长（λ）曲线
C: 吸光度（A）--浓度（C）曲线 D. 吸光度（A）-温度(t)曲线
17-2-24光分析中的标准曲线是（C）
A ：吸光度（A）--时间（t）曲线 B: 吸光度（A）--波长（λ）曲线
C: 吸光度（A）--浓度（C）曲线 D. 吸光度（A）-温度(t)曲线
17-2-25 参比溶液的作用是使光强度的减弱仅与待测离子含量有关。待测离子( M ) 无色, 显色剂( R ) 无色时，应选用（ A ）作参比溶液。
A ：蒸馏水 B: 显色剂 C: 试样溶液 D.无法确定
17-2-26 在光分析中，当显色剂有颜色，样品无色时，应选( B )作参比溶液。
A.蒸馏水
B.试剂空白 C试样空白. D.无法确定
17-2-27摩尔吸光系数ε在分析化学中有何意义(A )
A. 摩尔吸光系数ε是衡量分析方法灵敏度的尺度，通常ε越大，方法越灵敏
B. 摩尔吸光系数ε是衡量分析方法灵敏度的尺度，通常ε越小，方法越灵敏
C. 摩尔吸光系数ε是朗白--比尔定律公式中的比例系数，如果知道摩尔吸光系数ε和比色皿厚度，测量出吸光度，即可由朗白--比尔定律公式求出所需浓度。
D. 摩尔吸光系数ε仅仅是朗白--比尔定律公式中的比例系数而已，无特殊的意义。
17-2-28 吸光物质的摩尔吸光系数与下列哪些因素有关：（A）
A..入射光波长；
B.被测物质的浓度；
C.络合物的离解度；
D.掩蔽剂。
17-2-29示差法和一般光度法的不同点在于所用参比溶液不同，前者的参比溶液为(D )
A. 去离子水
B. 试剂空白
C. 比被测试浓度稍高的标准溶液
D. 比被测试液浓度稍低的标准溶液
三．判断题
17-3-1.可见分光光度法所用参比溶液的作用是调A=0. （√）
17-3-2.可见分光光度法测定KMnO4时,应选紫色光为入射光. （×）
17-3-3.光度分析中,测定的吸光度越大,测定结果的相对误差越小（×）
17-3-4.分光光度法，其他条件一定，ε越大，测定的灵敏度越高。（√）
17-3-5.朗伯-比尔定律不仅使用于可见分光光度法,也使用于紫外分光光度法。（√）17-3-6.透光率T与吸光物质浓度成反比（×）
17-3-7吸收曲线是物质的浓度与吸光度之间的关系曲线
17-3-8将合符光的吸收定律的某有色溶液稀释,其最大吸收波长不移动,但峰高值降低
17-3-9入射光的强度会影响摩尔吸光系数
17-3-10在吸光度的测量中，参比溶液的透光度为0%
17-3-11Lambert-Beer定律是建立在单色光的基础之上
17-3-12在分析工作中,选择合适的显色反应是为了提高分析的灵敏度、准确度和重现性
17-3-13吸光系数和摩尔吸光系数的关系是Mε=a
17-3-14吸光度具有加和性
17-3-15溶液本身的化学因素会引起Lambert-Beer定律的偏离,而物理性质不会引起Lambert-Beer定律的偏离
17-3-18当A=0.368或T=0.434时,浓度的相对误差最小
F T F F T T F T F F
四、计算题：
17-4-1．某试液用2cm 比色皿测量时，T=60%，若改用1cm 或3cm 比色皿，T 及A 等于多少？ 解：A 1=lg 1
1T =ab 1c (T 1=60%，b 1=2cm)① A 2= lg 2
1T =ab 2c (b 2=1cm) ② ①∕②可得：T 2=77% A 1=0.11 同理当b 3=3cm
T 3=46% A 3=0.33
17-4-2．某钢样含镍约0.12%，用丁二酮肟光度法（ε=1.3×104L ·mol -1·cm -1
）进行测定。试样溶解后，转入100mL 容量瓶中显色，并稀释至刻度。取部分试液于波长470nm 处用1cm 比色皿进行测量，如要求此时的测量误差最小，应称取试样多少克？ 解：434.01103.11000%12.04=?????NI
M W 得： W =0.16g
17-4-3．有一溶液，每毫升含铁0.056mg ，吸取此试液2.00mL 于50mL 容量瓶中显色，用1cm 吸收池于508nm 处测得吸光度A=0.400，计算吸光系数α和摩尔吸光系数ε。 解：（1）计算吸光系数α
显色液内Fe 的浓度为
()g c 33
3102.250
10210056.0--?=???= 由（7-2）式得
=??==-310
2.21400.0bc A a 1.8×102（L ?g -1?cm -1） （2）计算摩尔吸光系数ε
显色液内Fe 的浓度为：
(100.485
.555010210056.053
3--?=????=c mol ?L -1) =?==-510
0.440.0bc A ε1．0×104（L ?mol -1?cm -1） 17-4-4.用磺基水杨酸分光光度法测铁，称取0.5000g 铁按矾[NH 4Fe(SO 4)2·12H 2O]溶于
250mL 水中制成铁标准溶液，测得吸光度为0.380。吸取5.00mL 试样溶液稀释至250mL ，从中吸取2.00mL 按标准溶液显我条件显色定容至50mL ，测得A=0.400，求试样溶液中的铁的含量（以gL -1
计），已知Ar(Fe)=55.85, Mr[NH 4Fe(SO 4)212H 2O]=482.18。
解：先计算铁标准溶液的浓度 )(2317.018
.48285.552501000500.01L g -?=??=Fe c 由铁标准溶液显色后，显色溶液中的铁浓度为 )(02317.05000.52317.01L g -?=?
计算试样溶液显色后显色溶液中铁的浓度
由公式A =εbc , ε,b 固定，A 与c 成正比，可得到
试标试标
c c A A = 即`02317.0400.0380.0试
c = )L g (02439
.0c 1`-?=试 则试样溶液中铁的浓度为
?=???=g (5.3000
.500.22505002439.0`试c L -1） 17-4-5波长在508nm 处，用分光光度法测定某组分，当浓度为2.5×10-4g/L,吸收池厚度为
4cm 时，测得吸光度A=0.190,已知摩尔吸光系数为10611.5,求该元素的原子量。（μ=55.85）
17-4-6某亚铁螯合物的摩尔吸光系数为12000；如果希望把透光率读数限在0.200-0.650之间（吸收池厚度为1.00cm ），问分析的浓度范围是多少？
17-4-7已知摩尔质量为168g?mol -1某化合物，在λmax=272nm,εmax 为1.35×104。称取0.250g 该化合物配制成250mL 的乙醇溶液，用1cm 的吸收池，在272nm 处测得A 为0.702。求该化合物的含量？
17-4-8吸光光度分析中选择测定波长的原则是什么？
若某一种有色物质的吸收光谱如图所示, 你认为选择
哪一种波长进行测定比较合适？说明理由。
答：（1）吸光光度分析中选择测定波长的原则是“最
大吸收原则”，即选择该有色物质的最大吸收光波长。
（2）根据该有色物质的吸收曲线，应该选择a
处对应的波长。
（3）选择该波长既可以提高测定的灵敏度还可以减少非单色光对郎佰—
比尔定律的偏
离，提高测定的准确度。
17-4-9紫外—可见分光光度法中测量条件的选择包括哪几个方面？
答：主要包括：
（1）、入射波长的选择：通常是根据被测组分的吸收光谱，选择最强吸收带的最大吸收波长为入射波长。当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低，峰形稍平坦的次强峰进行测定。
（2）、吸光度测量范围的选择：最适宜的测量范围为0.2~0.8之间。
（3）、参比溶液的选择
17-4-10已知维生素B12的最大吸收波长为361nm。精确称取样品30mg，加水溶解稀释至100mL，在波长361nm下测得溶液的吸光度为0.618，另有一未知浓度的样品在同样条件下测得吸光度为0.475，计算样品维生素B12的浓度。
答：根据郎伯—比尔定律，列出方程得：
A1 = εb30mg/100ml = 0.618
A2 =εbCx = 0.475
用单组分定量测定中的标准对照法：
A1/A2=0.3/Cx=0.618/0.475
求出Cx=0.23mg/ml
即样品维生素B12的浓度为0.23mg/ml。
硫酸根离子的测定
MM_FS_CNG_0301制盐工业通用试验方法 硫酸根离子重量法光度法（适用于微量硫酸根含量的测定）容量法（EDTA络合滴定法） MM_FS_CNG_0301 制盐工业通用试验方法硫酸根离子的测定 1.适用范围 本方法适用于制盐工业中工业盐、食用盐（海盐、湖盐、矿盐、精制盐）、氯化钾、工业氯化镁试样中硫酸根含量的测定。 2.重量法 .原理概要 样品溶液调至弱酸性，加入氯化钡溶液生成硫酸钡沉淀，沉淀经过滤、洗涤、烘干、称重，计算硫酸根含量。 .主要试剂和仪器 2.2.1.主要试剂 氯化钡：／L溶液； 配制：称取氯化钡，溶于500mL水中，室温放置24h，使用前过滤； 盐酸：2mol／L溶液； 甲基红：％溶液。 仪器 一般实验室仪器。 .过程简述 吸取一定量样品溶液〔见附录A（补充件）〕，置于400mL烧杯中，加水至150mL，加2滴甲基红指示剂，滴加2mol／L盐酸至溶液恰呈红色，加热至近沸，迅速加入40mL（硫酸根含量＞％时加入60mL）／L氯化钡热溶液，剧烈搅拌2min，冷却至室温，再加少许氯化钡溶液检查沉淀是否完全，用预先在120℃烘至恒重的4号玻璃坩埚抽滤，先将上层清液倾入坩埚内，用水将杯内沉淀洗涤数次，然后将杯内沉淀全部移入坩埚内，继续用水洗涤沉淀数次，至滤液中不含氯离子（硝酸介质中硝酸银检验）。以少量水冲洗坩埚外壁后，置电烘箱内于120±2℃烘1h后取出。在干燥器中冷却至室温，称重。以后每次烘30min，直至两次称重之差不超过视为恒重。 .结果计算 硫酸根含量按式（1）计算。 硫酸根（％）＝（G1－G2）× ×100 (1) W 式中：G1——玻璃坩埚加硫酸钡质量，g；G2——玻璃坩埚质量，g；W——所取样品质量，g；——硫酸钡换算为硫酸根的系数。 .允许差 允许差见表1。 表 1 硫酸根，％允许差，％ ＜ ～＜
紫外可见分光光度法试题
紫外可见分光光度法试题
————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：
紫外-可见分光光度法 一、单项选择题 1．可见光的波长范围是 A、760~1000nm B、400~760nm C、200~400nm D、小于400nm E、大于760nm 2．下列关于光波的叙述，正确的是 A、只具有波动性 B、只具有粒子性 C、具有波粒二象性 D、其能量大小于波长成正比 E、传播速度与介质无关 3．两种是互补色关系的单色光，按一定的强度比例混合可成为 A、白光 B、红色光 C、黄色光 D、蓝色光 E、紫色光 4．测定Fe3+含量时，加入KSCN显色剂，生成的配合物是红色的，则此配合物吸收了白光中的 A、红光 B、绿光 C、紫光 D、蓝光 E、青光 5．紫外-可见分光光度计的波长范围是 A、200~1000nm B、400~760nm C、1000nm以上 D、200~760nm E、200nm以下 6．紫外-可见分光光度法测定的灵敏度高，准确度好，一般其相对误差在 A、不超过±0.1％ B、1%~5% C、5%~20% D、5%~10% E、0.1%~1% 7．在分光光度分析中，透过光强度（I t）与入射光强度（I0）之比，即I t / I0称为 A、吸光度 B、透光率 C、吸光系数 D、光密度 E、消光度8．当入射光的强度（I0）一定时，溶液吸收光的强度（I a）越小，则溶液透过光的强度（I t） A、越大 B、越小 C、保持不变 D、等于0 E、以上都不正确9．朗伯-比尔定律，即光的吸收定律，表述了光的吸光度与 A、溶液浓度的关系 B、溶液液层厚度的关系 C、波长的关系 D、溶液的浓度与液层厚度的关系 E、溶液温度的关系 10．符合光的吸收定律的物质，与吸光系数无关的因素是 A、入射光的波长 B、吸光物质的性质 C、溶液的温度 D、溶剂的性质 E、在稀溶液条件下，溶液的浓度 11．在吸收光谱曲线上，如果其他条件都不变，只改变溶液的浓度，则最大吸收波长的位置和峰的
硫酸根离子精确检测方法
2.重量法 2.1.原理概要 样品溶液调至弱酸性，加入氯化钡溶液生成硫酸钡沉淀，沉淀经过滤、洗涤、烘干、称重，计算硫酸根含量。 2.2.主要试剂和仪器 2.2.1.主要试剂 氯化钡：0.02mol／L溶液； 配制：称取2.40g氯化钡，溶于500mL水中，室温放置24h，使用前过滤； 盐酸：2mol／L溶液； 甲基红：0.2％溶液。 2.2.2.仪器 一般实验室仪器。 2.3.过程简述 吸取一定量样品溶液〔见附录A（补充件）〕，置于400mL烧杯中，加水至150mL，加2滴甲基红指示剂，滴加2mol／L盐酸至溶液恰呈红色，加热至近沸，迅速加入40mL（硫酸根含量＞2.5％时加入60mL）0.02mol／L氯化钡热溶液，剧烈搅拌2min，冷却至室温，再加少许氯化钡溶液检查沉淀是否完全，用预先在120℃烘至恒重的4号玻璃坩埚抽滤，先将上层清液倾入坩埚内，用水将杯内沉淀洗涤数次，然后将杯内沉淀全部移入坩埚内，继续用水洗涤沉淀数次，至滤液中不含氯离子（硝酸介质中硝酸银检验）。以少量水冲洗坩埚外壁后，置电烘箱内于120±2℃烘1h后取出。在干燥器中冷却至室温，称重。以后每次烘30min，直至两次称重之差不超过0.0002g视为恒重。 2.4.结果计算 硫酸根含量按式（1）计算。 硫酸根（％）＝（G1－G2）×0.4116 ×100 (1) W 式中：G1——玻璃坩埚加硫酸钡质量，g； G2——玻璃坩埚质量，g； W——所取样品质量，g； 0.4116——硫酸钡换算为硫酸根的系数。 2.5.允许差 允许差见表1。 表1 硫酸根，％允许差，％ ＜0.50 0.03 0.50～＜1.50 0.04 1.50～3.50 0.05 2.6.分析次数和报告值 同一实验室取双样进行平行测定，其测定值之差超过允许差时应重测，平行测定值之差如不超过允许差取测定值的平均值作为报告值。
环境监测人员持证上岗考核试题 分光光度法：色度
(一)基础知识 分类号：W6-0 一、填空题 1．分光光度法测定样品的基本原理是利用朗伯—比尔定律，根据不同浓度样品溶液对光信号具有不同的，对待测组分进行定量测定。 答案：吸光度(或吸光性，或吸收) 2．应用分光光度法测定样品时，校正波长是为了检验波长刻度与实际波长的，并通过适当方法进行修正，以消除因波长刻度的误差引起的光度测定误差。 答案：符合程度 3．分光光度法测定样品时，比色皿表面不清洁是造成测量误差的常见原因之一，每当测定有色溶液后，一定要充分洗涤。可用涮洗，或用浸泡。注意浸泡时间不宜过长，以防比色皿脱胶损坏。 答案：相应的溶剂(1+3)HNO3 二、判断题 1．分光光度计可根据使用的波长范围、光路的构造、单色器的结构、扫描的机构分为不同类型的光度计。( ) 答案：正确 2．应用分光光度法进行试样测定时，由于不同浓度下的测定误差不同，因此选择最适宜的测定浓度可减少测定误差。一般来说，透光度在20％～65％或吸光值在0.2～0.7之间时，测定误差相对较小。( ) 答案：正确 3．分光光度法主要应用于测定样品中的常量组分含量。( ) 答案：错误 正确答案为：分光光度法主要应用于测定样品中的微量组分。 4．应用分光光度法进行样品测定时，同一组比色皿之间的差值应小于测定误差。( ) 答案：错误 正确答案为：测定同一溶液时，同组比色皿之间吸光度相差应小于0.005，否则需进行校正。 5．应用分光光度法进行样品测定时，摩尔吸光系数随比色皿厚度的变化而变化。( ) 答案：错误 正确答案为：摩尔吸光系数与比色皿厚度无关。 三、选择题 1．利用分光光度法测定样品时，下列因素中不是产生偏离朗伯—比尔定律的主要原因。( ) A．所用试剂的纯度不够的影响B．非吸收光的影响 C．非单色光的影响D．被测组分发生解离、缔合等化学因素 答案：A 2．分光光度计波长准确度是指单色光最大强度的波长值与波长指示值。( ) A．之和B．之差C．乘积
磺基水杨酸分光光度法测定陶瓷原料中的微量铁_蔡新安
中国陶瓷│CHINA CERAMICS │2008(44)第 11 期│63 【摘 要】：采用磺基水杨酸分光光度法，以磺基水杨酸为显色剂、双氧水为氧化剂, 控制pH 值为1.5～3,磺基水杨酸与Fe 3+生成稳定的紫红色配合物(1∶1)，其最大吸收波长在515nm 处，在等吸收点处测定吸光度，铁量在0.00～1.00mg 范围内符合比尔定律，该方法适用于陶瓷原料中微量铁的测定。 【关键词】:磺基水杨酸，分光光度法，铁 引 言 影响陶瓷白度的主要元素是铁化合物，故检验陶瓷原料中的铁含量对制备高质量的陶瓷十分重要，现有陶瓷原料中铁的测定主要采用原子吸收光谱法[1] ，由于原子 吸收光谱仪价贵昂贵，对一些小型原料厂不太现实，磺基水杨酸分光光度法以其特有的仪器简单，操作简便灵敏度高优点，非常适合铁含量的测定[2]，本文在此基础上，经过实验研究发现，在pH=1.5～3时，磺基水杨酸与Fe 3+ 可生成稳定的紫红色配合物(1∶1)，利用铁(Ⅲ)-磺基水杨酸显色体系及光度特性，可成功地用于陶瓷原料中微量铁的测定。 1 实验部分 1.1 主要仪器与试剂 752 型紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），Fe 3+ 标准溶液：准确称取经400℃灼烧的三氧 化二铁（光谱纯）0.1000g 于烧杯中，加入（1+1）盐酸30mL，浓硝酸5mL，于水浴上溶解之后，移入1L 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以每毫升含三氧化二铁0.1mg/mL 做为储备液，使用时并稀释至0.05mg/mL。pH2.0的盐酸溶液∶于1L 水中加入浓盐酸2.5mL,并用酸度计校正至2.0。磺基水杨酸溶液浓度为10%。以上试剂均为分析纯，水为双蒸馏水。 1.2 实验方法 取一定量的含铁(Fe 3+)溶液于50mL 容量瓶中，加入少量双氧水使其中部分Fe 2+氧化为Fe 3+，然后加入磺基水杨酸溶液，用蒸馏水稀释并同时调节pH 值，定容，摇匀，以试剂空白为参比，采用1cm 比色皿测吸光度， 求其中的铁含量。 准确称取0.5克左右烘干的陶瓷原料试样（精确至0.0001g）置于镍钳锅中，取NaOH 4g 将熔剂的2/3 与试样混匀，剩下的1/3 覆盖于上面，先低温加热，逐渐升高至1000℃，熔融10～15min 取出冷却后，将熔块用热水浸出于500mL 烧杯中，加入盐酸（密度1.19g/cm 3）20mL，盖上表面皿，待反应停止后用盐酸（1+1）及热水洗净坩埚、坩埚盖及表面皿，将烧杯移至沸水浴上，浓缩至硅酸胶体析出仅带少量液体为止（约10mL）。取下，冷却至室温，加沸水10mL，用慢速定量滤纸过滤于100mL 容量瓶中，用热盐酸（1+19）洗涤5～6次，再用热水洗涤沉淀无氯离子止，加水定容至刻度。移取5mL 于50mL 容量瓶中，加入少量双氧水氧化Fe 2+为Fe 3+,然后加入磺基水杨酸溶液,用蒸馏水稀释并同时调节pH 值，定容，用1cm 比色皿，以试剂空白作参比，在550nm 波长处，测定其吸光度。由测得的吸光度值，通过工作曲线，查取铁的浓度，从而计算出试样中铁的含量。 2 结果与讨论 2.1吸收光谱 按实验方法配制磺基水杨酸铁溶液, 在波长460～640nm 范围内每隔10nm 测定一次吸光度,以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化曲线，如图1所示。结果表明，515nm 为铁与磺基水杨酸所形成配合物的最佳吸收波长。 2.2溶液pH 值对吸光度的影响 Fe 3+与磺基水杨酸配合物的形成与溶液pH 值有密切的关系。图2为溶液pH 值对吸光度的影响。由图2可见:Fe 3+与磺基水杨酸形成的配合物的吸光度随pH 值的增大而升高。当pH 值<1.5和pH 值>3.0时,吸光度随pH 磺基水杨酸分光光度法测定陶瓷原料中的微量铁 蔡新安1，章慧芳1，李 硕2，杨晓波1 （1景德镇高等专科学校生化系， 景德镇 333000； 2中国轻工业陶瓷研究所， 景德镇 333000） 图1 吸光度随波长变化曲线 收稿日期：2008-8-29 基金项目：景德镇高等专科学校科研重点资助项目，编号：TCYJ-08-01 作者简介：蔡新安，男，江西丰城人，副教授。主要从事有机化学、分析化学实验教学及陶瓷材料研究工作。
分光光度计说明
722可见分光光度计使用说明书 1．仪器的主要用途 722可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的的分析。仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一 2．仪器的工作环境 2．1仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃~35℃，相对湿度不超过85%。 2．2使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。 2．3 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。 2．4 电扇不宜直接向仪器吹向，以免影响仪器的正常使用。 2．5 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 2．6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。 2．7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐 蚀气体的场所使用。 3 仪器的主要技术指标及规格 3．1 光学系统：单束光、衍射光栅。 3．2 波长范围：330nm~800nm。 3．3 光源：钨卤素灯12V30W。 3．4 接收元件：光电池。 3．5 波长准确度：≤±2nm。
3．6 波长重复性：1nm。 3．7 光谱带宽：＜6nm。 3．8 杂散光：0.7%τ（在360nm处）。 3．9 透射比测量范围：0.0%τ~100.0%τ。 3．10 吸光度测量范围：0.000A~1.999A。 3．11 浓度直读范围：0000~1999。 3．12 透射比准确度：±1.0%τ。 3．13 透射比重复性：0.5%τ。 3．14 噪声：≤0.3%τ。 3．15 稳定性：亮电流≤0.5%τ/3min， 暗电流≤0.2%τ/3min。 3．16 电源：AC220V±22V，50Hz±1Hz。 3．17 外型尺寸：570mm×400mm×260mm。 3．18 净杂散光测量范围：18 净重：22kg。 4．仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物 质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理--比耳定律。 τ=I/I0 logI0/I=KCL A=KCL
硫酸根离子精确检测方法
硫酸根离子精确检 测方法
2.重量法 2.1.原理概要 样品溶液调至弱酸性，加入氯化钡溶液生成硫酸钡沉淀，沉淀经过滤、洗涤、烘干、称重，计算硫酸根含量。 2.2.主要试剂和仪器 2.2.1.主要试剂 氯化钡：0.02mol／L溶液； 配制：称取2.40g氯化钡，溶于500mL水中，室温放置24h，使用前过滤； 盐酸：2mol／L溶液； 甲基红：0.2％溶液。 2.2.2.仪器 一般实验室仪器。 2.3.过程简述 吸取一定量样品溶液〔见附录A（补充件）〕，置于400mL烧杯中，加水至150mL，加2滴甲基红指示剂，滴加2mol／L盐酸至溶液恰呈红色，加热至近沸，迅速加入40mL（硫酸根含量＞ 2.5％时加入60mL）0.02mol／L氯化钡热溶液，剧烈搅拌2min，冷却至室温，再加少许氯化钡溶液检查沉淀是否完全，用预先在120℃烘至恒重的4号玻璃坩埚抽滤，先将上层清液倾入坩埚内，用水将杯内沉淀洗涤数次，然后将杯内沉淀全部移入坩埚内，继续用水洗涤沉淀数次，至滤液中不含氯离子（硝酸介质中硝酸银
检验）。以少量水冲洗坩埚外壁后，置电烘箱内于120±2℃烘1h 后取出。在干燥器中冷却至室温，称重。以后每次烘30min，直至两次称重之差不超过0.0002g视为恒重。 2.4.结果计算 硫酸根含量按式（1）计算。 硫酸根（％）＝（G1－G2）×0.4116 ×100 (1) W 式中：G1——玻璃坩埚加硫酸钡质量，g； G2——玻璃坩埚质量，g； W——所取样品质量，g； 0.4116——硫酸钡换算为硫酸根的系数。 2.5.允许差 允许差见表1。 表 1 硫酸根，％允许差，％ ＜0.50 0.03 0.50～＜1.50 0.04 1.50～3.50 0.05 2.6.分析次数和报告值
紫外可见分光光度法练习题
紫外-可见分光光度法 一、单项选择题 1．可见光的波长范围是 A、760~1000nm B、400~760nm C、200~400nm D、小于400nm E、大于760nm 2．下列关于光波的叙述，正确的是 A、只具有波动性 B、只具有粒子性 C、具有波粒二象性 D、其能量大小于波长成正比 E、传播速度与介质无关 3．两种是互补色关系的单色光，按一定的强度比例混合可成为 A、白光 B、红色光 C、黄色光 D、蓝色光 E、紫色光 4．测定Fe3+含量时，加入KSCN显色剂，生成的配合物是红色的，则此配合物吸收了白光中的 A、红光 B、绿光 C、紫光 D、蓝光 E、青光 5．紫外-可见分光光度计的波长范围是 A、200~1000nm B、400~760nm C、1000nm 以上 D、200~760nm E、200nm以下 6．紫外-可见分光光度法测定的灵敏度高，准确度好，一般其相对误差在 A、不超过±％ B、1%~5% C、5%~20%
D 、5%~10% E 、%~1% 7．在分光光度分析中，透过光强度（I t ）与入射光强度（I 0）之比，即I t / I 0称 为 A 、吸光度 B 、透光率 C 、吸光系数 D 、光密度 E 、 消光度 8．当入射光的强度（I 0）一定时，溶液吸收光的强度（I a ）越小，则溶液透过光的 强度（I t ） A 、越大 B 、越小 C 、保持不变 D 、等于0 E 、以 上都不正确 9．朗伯-比尔定律，即光的吸收定律，表述了光的吸光度与 A 、溶液浓度的关系 B 、溶液液层厚度的关系 C 、波长的关系 D 、溶液的浓度与液层厚度的关系 E 、溶液温度的关系 10．符合光的吸收定律的物质，与吸光系数无关的因素是 A 、入射光的波长 B 、吸光物质的性质 C 、溶 液的温度 D 、溶剂的性质 E 、在稀溶液条件下，溶液的浓度 11．在吸收光谱曲线上，如果其他条件都不变，只改变溶液的浓度，则最大吸收波长的位置和峰的 高度将 A 、峰位向长波方向移动，逢高增加 B 、峰位向短波方向移 动，峰高增加
磺基水杨酸分光光度法测定海带中的铁
磺基水杨酸分光光度法测定海带中的铁 开题报告 房如玉 1.研究背景 铁是人体内必不可少的重要元素之一，对人体有重要的生理生化作用，铁元素在人体中具有造血功能，参与血蛋白，细胞色素及各种酶的合成，促进生长，铁还在血液中起运输氧和营养物质的作用，人的颜面泛出红润之美，离不开铁元素，人体缺铁会发生小细胞性贫血，免疫功能下降和新陈代谢紊乱，缺铁或铁过量都能引起人体代谢过程紊乱，使人容易感到疲劳，从而影响人的正常工作、学习与生活，而人体所摄取的铁中实际上只有大约8%被吸收而进入血液之中，体内的铁大部分用于制造血红素。血红素在血液细胞每120天更换新细胞时被循环再利用。与蛋白质结合的铁贮藏在体内，而组织铁（存在于肌血球素中）贮藏在体内的量则非常少，因此，人体需保证摄入适量的铁元素，而海带是一种受人们欢迎的副食，且含有一定量的铁元素，对铁缺乏症的预防和辅助治疗有作用[1]。海带为海生植物，性味咸，入药名为“昆布”。据文献记载：海带含有褐藻、胶酸、纤维素、粗蛋白、碳水化合物、甘露醇、钾、碘、铁等成分，经常适量食用海带，不仅可以乌发美容养颜，还能预防肝病，心血管病，对治疗急性肾功能衰竭，脑水肿，乙型脑炎，脚气病，消化不良，排尿不畅等症都有一定的效果。因此在食品、医药、卫生等方面对铁的含量测定均有严格要求，对铁的测定方法研究也有重大意义。 2.研究现状 近几年来，铁的可见光光度分析检测方法报道很多，其中，主要有催化动力学光度法[2,3]、显色反应分光光度法[4,5]和固相分光光度法[6]。催化动力学分光光度法根据待测物质对某些反应的催化作用，利用反应速率与催化剂的浓度之间的定量关系，通过测量与反应速率成比列关系的吸光度，来计算待测物质的浓度。其中段秀云[7]基于在HCl介质中，Fe(Ⅲ)催化H2O2氧化次甲基绿的反应，建立了测定痕量Fe(Ⅲ)的方法，检出限为0.005μg/L，相对标准偏差3×10-3，线性范围为
紫外可见分光光度法测定水杨酸的含量[详实参考]
紫外可见分光光度法测定水杨酸的含量 一、实验目的 1、了解紫外可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。 2、掌握紫外－可见分光光度法定性、定量分析的基本原理和实验技术。 二、实验原理 紫外-可见光谱是用紫外-可见光测获的物质电子光谱，它研究产生于价电子在电子能级间的跃迁，研究物质在紫外-可见光区的分子吸收光谱。当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率，以ABS为纵坐标对横坐标波长λ作图，可获得物质的吸收光谱曲线。一般紫外光区为190-400nm，可见光区为400-800nm。 紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。由于分子结构不同但只要具有相同的生色团，它们的最大吸收波长值就相同。因此，通过对末知化合物的扫描光谱、最大吸收波长值与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较，就可获得基础鉴定。 利用紫外吸收光谱进行定量分析时，必须选择合适的测定波长。苯甲酸和水杨酸的紫外吸收光谱如图1所示。 图1 苯甲酸与水杨酸紫外吸收光谱图 1-苯甲酸；2-水杨酸 水杨酸在波长300 nm处有吸收峰，而苯甲酸此处无吸收，在波长230 nm两组吸收峰重叠，为了避开其干扰，选用300 nm波长作为测定水杨酸的工作波长。由于乙醇在250～350nm无吸收干扰，因此可用60%乙醇为参比溶液。 三、仪器与试剂 1．仪器 紫外－可见分光光度计（UVWIN 5，北京普析通用仪器有限公司）；容量瓶
100mL 1个、50mL 5个；刻度吸量管1mL、2mL、5mL各1支。 2．试剂 水杨酸对照品（分析纯）；60%乙醇溶液（自制）。 四、实验步骤 1、标准溶液的制备：准确称取0.0500 g水杨酸置于100 mL烧杯中，用60%乙醇溶解后，转移到100 mL容量瓶中，以60%乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为0.5mg·mL-1。 2、将五个50mL容量瓶按1-5依次编号。分别移取水杨酸标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL于相应编号容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀释至刻度，摇匀。 3、用1 cm石英吸收池、，以60%乙醇作为参比溶液，在200～350 nm波长范围内测定一份水杨酸标准溶液的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。 4、在选定波长下，以60%乙醇为参比溶液，由低浓度到高浓度测定水杨酸标准溶液系列及未知液的吸光度。以水杨酸标准溶液的吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据水杨酸试液的吸光度，通过标准曲线计算水杨酸试样中水杨酸的含量。 表1 标准曲线制定及未知试样浓度检测
7200分光光度计的使用方法
分光光度计的结构与使用方法 2008-12-31 10:02:01 作者：来源：互联网浏览次数：122 文字大小：【大】【中】【小】 1. 分光光度法定义与应用 1.1 定义: 分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术. 1.2 特点: 灵敏,精确,快速和简便,在复杂组分系统中,不需要分离,即能检测出其中所含的极少量物质. 1.3 应用: 生物<>化学研究中广泛使用的方法之一,广泛用于糖,蛋白质,核酸,酶等的快速定量检测. 2. 分光光度计的基本结构和工作原理 2.1 分光光度计的分类 2.2 分光光度计工作原理 2.3 分光光度计的基本结构 2.4 分光光度法的测量误差 2.5 显色反应及其影响因素 2.1 分光光度计的分类 分光光度计的分类 红外分光光度计: 测定波长范围为大于760 nm的红外光区 可见光分光光度计: 测定波长范围为400~760 nm的可见光区 紫外分光光度计: 测定波长范围为200～400 nm的紫外光区 2.2 分光光度计工作原理 人眼可见的光只占电磁波谱的很小—部分(400~760nm) 它是一种频率较大的电磁波.电磁波按频率大小,从频率最小的无线电波到频率最大的γ-射线排成一列,即组成电磁波的波谱, 2.2.1 分光光度计的光谱范围 包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源. 钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红,橙,黄,绿,蓝,靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源. 氢灯的发射光谱:氢灯能发出185～400 nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源. 2.2.2 物质的吸收光谱(1) 如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱,它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失,这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱. 不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质.
磺基水杨酸分光光度法测铁
磺基水杨酸分光光度法测铁 、目的和要求 1练习使用移液管、容量瓶 2、 掌握用磺基水杨酸显色法测定铁的原理和方法。 3、 掌握722型分光光度计的使用方法。 二、实验原理 磺基水杨酸是分光光度法测定铁的有机显色剂之一。磺基水杨酸（简式为 HR ）与Fe 3+可以形 成稳定的配合物，因溶液 pH 的不同，形成配合物的组成也不同。在 pH=9?11.5的NH 3H2O-NHCI 溶液中， Fe 3+与磺基水杨酸反应生成三磺基水杨酸铁黄色配合物。 3+ + Fe SO 3H 该配 剂用量及溶液酸度略有改 CaT 、Mg 2+、Al 3+等与磺基水杨酸能生 成无色配合 _ 3 — 量时，不干扰测定。F 、NQ 、PO 4等离子对测定无影响。 在时干扰测定。由于 Fe 2+在碱性溶液中易被氧化， 所以。本法所测定的铁实际上是溶液中铁的总含 量。 磺基水杨酸铁配合物在碱性溶液中的最大吸收波长为 420nm,故在此波长下测量吸光度。 三、实验仪器及试剂 1, 15mlFeCI3 溶液（0.05mg/L ） 2.4.8g 的 NH4CI 固体，50ml1mol/L 氨水稀释至 500ml （ pH=9 的 NH4CL-NH3缓冲溶液） 3, 2ml10%磺基水杨酸溶液 4, 752型分光光度计 5, 50ml 容量瓶7个 6, 250ml 烧杯1个，500ml 烧杯1个 7, 蒸馏水 8, 移液管3个 9, 塑料滴管1个 10.50ml 量筒1个 11.pH 计1个 四、实验步骤 1、进入实验室，将实验要用到的有关仪器从仪器橱中取出，把玻璃器皿按洗涤要求洗涤干净 备用。 2、系列标准溶液的配制 在6只5Oml 容量瓶中，用移液管分别加入 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00浓度为 0.025mg/L 的铁盐标准溶液，各加2ml 2%磺基水杨酸溶液，滴加pH=9-11.5的NH4CL-NH 缓冲溶液） 直到溶液变成黄色。 -COO - - Fe Ar 。- -SO3 3 6- 2+ 2+ 合物很稳定，试 变都无影响。 物，在显色剂过 Cr 等离子大量存 2+ Cu 、Co 、Ni 、 COOH HO 2+ 2+ 3+
4 紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量
实验二紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量 苯酚是工业废水中一种有害污染物质，需对水中酚含量控制。苯酚在270-295nm波长处有特征吸收峰，其吸光度与苯酚的含量成正比，应用Lambert－Beer定律可直接测定水中总酚的含量。 一、实验目的 1．学会使用Cary50型紫外-可见分光光度计 2．掌握紫外-可见分光光度计的定量分析方法 二、原理简介 紫外-可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外-可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即： 其中A是吸光度，I、分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，为摩尔吸光系数，b为样品厚度。 由于苯酚在酸、碱溶液中吸收波长不一致（见下式），实验选择在碱性中测试，选择测试的波长为288nm左右，取紫外-可见光谱仪波长扫描后的最大吸收波长。 Cary50是瓦里安公司的单光束紫外-可见分光光度计。仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。 三、仪器与溶液准备 1、Cary50型紫外-可见分光光度计 2、1cm石英比色皿一套 3、25 ml容量瓶5只，100 ml容量瓶1只，10ml移液管二支
配置250 mg/L苯酚的标准溶液：准确称取0.0250 g苯酚于250 mL烧杯中，加入去离子水20 mL使之溶解，加入0.1M NaOH 2mL，混合均匀，移入100 mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。 取5只25 mL容量瓶，分别加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀，作为标准溶液系列。 将溶剂，标准溶液，待测水样依此装入石英比色皿。按测试程序的提示，依次放入样品室中进行测试。 四、测试过程 1、确认样品室内无样品 2、开电脑进入Window 系统 3、点击进入Cary50 主菜单 4、双击Cary-WinUV图标 5、在Win-UV 主显示窗口下，双击所选图标“SCAN”以扫描测定吸收曲线：取上述标准系列任一溶液装进1cm石英比色皿至4/5，以装有蒸馏水的1cm石英比色皿作为空白参比，设定在220－350 nm波长范围内扫描，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据。 6、在Win-UV 主显示窗口下，双击图标“Concentration”进入定量分析主菜单 7、设定测试分析步骤: （l）单击Setup功能键，进入参数设置页面。在Wavelength处填入由步骤5获取的波长数据。 （2）按Cary Control 、Standards、Options、Samples、Reports、Auto store顺序，分别设置好菜单中每页的参数。按OK回到“Concentration”界面主菜单。 （3）单击View莱单，选择需要显示的内容。 例如基本选项Toolbar，buttons，Graphics，Report。 （4）单击Zero，提示“Load blank press OK to read” (放空白按OK读)，放入空白蒸馏水到样品室内，按OK测试，测完取出样品。 （5）单击Start, 出现标准／样品选择页。选Selected for Analysis（选择分析的标准和样品）。此框的内容为准备分析的标准和样品。 （6）按OK进行分析测试。 依Presentstdl的提示：放入标准1然后按OK键进行读数。放标准2按OK进行读数。直到全部标准读完。 （7）出现“Present Samplel Press OK to read”提示框，根据提示，放入样品1按OK开始读样品，直到样品测完。 （8）可点击Save Method AS保存此方法，以后可以从Open Method调用此方法。从标准曲线读出水样中苯酚的含量（g／L），测试数据采用点击Save Data AS 保存。
紫外分光光度计分类
紫外可见分光光度计的种类 分光光度计从分光元件来讲可分为棱镜式和光栅式两种，也有光栅加棱镜的高档分光光度计，现今的分光光度计大部分采用光栅分光。从结构上来区分可分为单光束、准双光束、双光束和双波长分光光度计 （1） 棱镜式分光光度计 棱镜式分光光度计采用棱镜作为分光元件，是分光光度计诞生前后分光的主要元件，随着电气化的发展，棱镜分光给结构设计带来了很大的麻烦，应用起来不够灵活，所以逐渐的被淘汰了，但在相当长的一段时间内，国内外的主要厂商都采用棱镜，到目前为止还有部分国内厂商在721、751等分光光度计上采用棱镜作为分光元器件。我们后边讨论的都是光栅式分光光度计，棱镜式后面不作分析。 （2） 单光束分光光度计 1945年美国Beckman 公司推出的世界第一台成熟的分光光度计，就是单光束分光光度计。单光束分光光度计只有一束单色光、一只比色皿、一只光电转换器。这种分光光度计测试过程简便，有高、中、低档之分。低档的目前国内有两种：一种是手动设置波长，通过旋钮转动刻度盘，同时带动光栅，从而达到设置波长的目的；一种是自动设置波长，通过电机带动扇形齿轮，同时带动光栅，从而达到自动设置波长的目的。这两种单光束分光光度计，之所以说它们低档，主要是因为它们的技术指标相对较差，他们的主要技术指标像：波长准确度一般在±2nm ，波长重复性一般在1nm ，功能也相对简单，测试结果误差较大。例如目前国内用的较多的型号有：721（上分）、722（上分）、751（上分）、752（上分）、754（上分）、T6（北京普析）。中档的目前国内一般采用丝杆结构，采用自动波长设置，电路设计也比较合理，采用较好的屏蔽技术和滤波技术，成品仪器比较稳定，也不易受外界的干扰，但是这种仪器，每个厂家做出来的效果不尽相同，有的做出来很不稳定，有的却很可靠，因为每个厂家的技术存在很大的差异，特别是在关键点上的处理，例如190nm 处的稳定性，国内目前很少有厂家做的好，有的厂家甚至在200nm 处还很不稳定，220nm 处的杂散光，国内厂家目前一般在0.2%T ，很少有厂家能做到0.1%T 以下，这种档次的仪器的波长准确度一般能做到±0.5nm ，波长重复性一般能做到小于0.3nm 。这种档次的仪器目前的性价比比较好，销量也很不错。像国内现在比较流行的型号如：756。高档的单光束分光光度计，一般采用非常先进的微机处理技术，电路设计也是非常的出色，结构设计也是极为合理，光路准确可靠，此类单光束分光光度计基本可以和准双光束以及双光束媲美，主机功能丰富，界面清晰，读数直观。 单光束紫外可见分光光度计的基本结构 （3） 准双光束紫外可见分光光度计 所谓准双光束，就是有两束光，一束通过比色皿，另一束光直接进入光电转换器。严格意义上来讲
仪器分析紫外-可见分光光度法单元测验题及参考答案
紫外-可见分光光度法单元测验题参考答案 一、填空题（共20分，1分/空） 1、朗伯定律是说明在一定条件下，光的吸收与光径长度成正比；比尔定律是说明在一定条件下，光的吸收与溶液浓度成正比，二者合为一体称为朗伯-比尔定律，其数学表达式为A=Kbc。 2、摩尔吸光系数的单位是L·mol-1·cm-1，它表示物质的浓度为1mol·L-1，液层厚度为1cm时，在一定波长下溶液的吸光度，常用符号ε表示。 3、分子的运动包括三种，它们是电子运动、分子振动和分子转动。其中能量最大的是电子运动，能量最低的是分子转动。 4、多组分分光光度法可用解方程组的方法来求得各组分的含量，这是基于吸光度的加和性。 5、在紫外可见分光光度计中，在可见光区使用的光源是钨灯，用的棱镜和比色皿的材质可以是玻璃；而在紫外光区使用的光源是氢或氘灯，用的棱镜和比色皿的材质一定是石英。 6、影响有色配合物的摩尔吸收系数的因素是波长。 二、单选题(共20分，2分/题) 1、人眼能感觉到的光称为可见光，其波长范围是（A）。 ～780nm ～400nm ～1000nm ～1000nm 2、物质吸收光辐射后产生紫外-可见吸收光谱，这是由于（C）。 A.分子的振动 B.分子的转动 C.原子核外层电子的跃迁 D.分子的振动和转动 3、物质的颜色是由于选择吸收了白光中的某些波长的光所致。CuSO4溶液呈蓝色是由于它吸收了白光中的（C）。 A.蓝色光波 B.绿色光波 C.黄色光波 D.青色光波 4、符合吸收定律得溶液稀释时，其最大吸收峰波长位置（D）。 A.向长波移动 B.向短波移动
C.不移动 D.不移动，吸收峰值降低 5、当吸光度A=0时，τ为（C）。 % % D.∞ 6、高吸光度差示法和一般的分光光度法不同点在于参比溶液不同，前者的参比溶液为（D）。 A.溶剂 B.试剂空白 C.比被测试液浓度稍高的待测组分标准溶液 D.比被测试液浓度稍低的待测组分标准溶液 7、双波长分光光度计的输出信号是（B）。 A.试样在λ1吸收和参比在λ2吸收之差 B.试样在λ1和λ2吸收之差 C.试样在λ1和λ2吸收之和 D.试样在λ1吸收和参比在λ2吸收之和 8、在分光光度分析中，常出现工作曲线不过原点的情况，下列说法中不会引起这一现象的是（C）。 A.测量和参比溶液所用吸收池不对称 B.参比溶液选择不当 C.显色反应灵敏度太低 D.显色反应的检测下限太高 9、在符合朗伯-比尔定律的范围内，有色物的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是（B）。 A.增加，增加，增加 B.减小，不变，减小 C.减小，增加，增加 D.增加，不变，减小 10、双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于（D）。 A.光源的种类 B.检测器的个数 C.吸收池的个数 D.使用的单色器的个数 三、简答题(共25分，5分/题) 1、紫外-可见分光光度法具有什么特点 答：①具有较高的灵明度，适用于微量组分的测定； ②分析速度快，操作简便； ③仪器设备不复杂，价格低廉； ④应用广泛，大部分无机离子和许多有机物质的微量成分都可以用这种方法测定。 2、分光光度计由哪几个主要部件组成各部件的作用是什么
磺基水杨酸分光光度法测铁
磺基水杨酸分光光度法测铁 一、目的和要求 1、练习使用移液管、容量瓶 2、掌握用磺基水杨酸显色法测定铁的原理和方法。 3、掌握722型分光光度计的使用方法。 二、实验原理 磺基水杨酸是分光光度法测定铁的有机显色剂之一。磺基水杨酸（简式为H3R）与Fe3+可以形成稳定的配合物，因溶液pH的不同，形成配合物的组成也不同。在 pH=9～11.5 的 NH3.H2O-NH4Cl 溶液中，Fe3+与磺基水杨酸反应生成三磺基水杨酸铁黄色配合物。 + Fe3+ 该配合物很稳定, 试剂用量及溶液酸度略有改变都无影响。Ca2+、 Mg2+、 Al3+等与磺基水杨酸能生成无色配合物, 在显色剂过量时, 不干扰测定。F-、 NO3-、 PO43-等离子对测定无影响。Cu2+ 、Co2+、Ni2+、Cr3+等离子大量存在时干扰测定。由于Fe2+ 在碱性溶液中易被氧化，所以。本法所测定的铁实际上是溶液中铁的总含量。 磺基水杨酸铁配合物在碱性溶液中的最大吸收波长为 420nm, 故在此波长下测量吸光度。 三、实验仪器及试剂 1，15mlFeCl3溶液（0.05mg/L) NH4CL-NH3缓冲溶液） 3，2ml10%磺基水杨酸溶液 4，752型分光光度计 5，50ml容量瓶7个 6，250ml烧杯1个，500ml烧杯1个 7.蒸馏水 8.移液管3个 9.塑料滴管1个 10.50ml量筒1个 11.pH计1个 四、实验步骤 1、进入实验室，将实验要用到的有关仪器从仪器橱中取出，把玻璃器皿按洗涤要求洗涤干净备用。 2、系列标准溶液的配制 在6 只 5Oml 容量瓶中, 用移液管分别加入0.00 、1.00、 2.00、3.00、4.00 、5.00浓度为0.025mg/L的铁盐标准溶液, 各加2ml 2%磺基水杨酸溶液, 滴加pH=9-11.5的NH4CL-NH3缓冲溶液）直到溶液变成黄色。 表1 作工作曲线所配的系列溶液 2，标准曲Array线制作 用分光光度计于420m 波长下, 以试剂空
实验报告-紫外-可见分光光度法测铁的含量-
一、实验目的： 了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；了解分光光度计的构造；掌握分光光度计的正确使用方法；学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。 二、实验原理 邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其反应式如下： Fe3+能与领二氮菲生成淡蓝色配合物（不稳定），故显色前加入还原剂：盐酸羟胺使其还原为Fe2+。。 三、仪器及试剂 紫外可见分光光度计、铁标准溶液：含铁0.01mg/mL、0.1%邻菲罗啉水溶液、10%盐酸羟胺水溶液、1mol/lNaAc缓冲溶液（pH4.6）。 四、实验步骤 1．吸收曲线的绘制和测量波长的选择 吸取0.0mL和6.0mL 铁标准溶液分别注入两个50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔0.5nm测吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。 2、标准曲线的绘制
分别吸取铁的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在其最大吸收波长下，用1cm比色皿，以试剂溶液为空白，测定各溶液的吸光度，以铁含量(mg/50ml)为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 五、实验记录及数据处理 波长/nm 吸光度 标准溶液（0.01g/L）未知液容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 7 吸取的体积0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 吸光度A （1）绘制曲线图。
72型分光光度计工作原理
72型分光光度计工作原理 72型分光光度计是可见光分光光度计，波长范围为420nm～700nm，它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。 72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。如图所示，白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，从刻度标尺上直接读出透光率的值。 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被
吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。 核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。 事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值 1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗