pdf下载水稻蛋白质激酶ck2 催化亚基的表达和活性测定

文章编号:042727104(2005)0420544205

收稿日期:2005204212

基金项目:国家自然科学基金资助项目(30370298)

作者简介:俞　芳(1979—

),女,硕士研究生,通讯联系人董爱武副教授.水稻蛋白质激酶CK 2催化亚基的表达和活性测定

俞　芳,朱　炎,忻　骅,曹凯鸣,董爱武

(复旦大学生命科学学院生物化学系,上海　200433)

摘　要:用RT 2PCR 的方法分离到了水稻蛋白质激酶CK2催化亚基(OsCK2

α)的cDNA ,通过大肠杆菌高效表达系统表达了OsCK2

α,并利用亲合层析的方法纯化了重组蛋白质GST 2OsCK2α.得到的大肠杆菌重组蛋白质GST 2OsCK2

α能够体外磷酸化CK2的常用底物酪蛋白,并且该磷酸化反应能够被CK2的特异性抑制剂肝素所抑制,研究表明重组CK2

α具有典型的蛋白质激酶CK2的活性,为研究水稻CK2及其底物的功能奠定了基础.关键词:水稻;蛋白质激酶CK2;表达;纯化;活性测定

中图分类号:Q 943.2 文献标识码:A

蛋白质磷酸化是生物体内蛋白质功能调节的重要方式.在细胞内,蛋白质的磷酸化是由多种蛋白质激酶参与,它控制着细胞的生长、代谢和分化.蛋白质激酶C K2(casein kinase 2)是细胞内具有多种重要功能的主要蛋白质激酶之一1.

C K2是一种真核细胞中普遍存在的高度保守的信使非依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶.它所识别的磷酸化位点S/T 位于多个带负电荷的氨基酸残基(酸性或磷酸化氨基酸残基)中,其最小的保守识别序列为S/T 2X 2X 2E/D/Sp/Y p (X 表示任意氨基酸残基,p 表示磷酸化的氨基酸残基),识别位点附近负电荷氨基酸残基的存在可提高S/T 的磷酸化效率.蛋白质激酶C K2全酶一般是由两个催化亚基α和/或α′、两个调节亚基β构成的不均一四聚体1.

在植物体内,C K2参与了许多植物体特有的生物学过程.在烟草中,脱落酸(Salicylic Acid ,SA )通过as 21类似元件激活基因转录,而C K2的特异性抑制剂可以减弱SA 对基因转录的激活2.通过对高度同步化的烟草B Y2细胞不同细胞周期C K2活性的检测发现,在G1/S 和M 期C K2活性最强,推测C K2可能在烟草B Y2细胞G2期到M 期的转变过程中起了重要作用3.在拟南芥中反义表达C K2基因发现由于C K2表达量的下降造成了光调节基因表达量的变化而且还影响了植株的生长4.另外在拟南芥中还发现C K2通过对与调节生理周期相关的蛋白CCA1(Circadian Clock Associated 1)的磷酸化调节而调控植株的生理周期5,6.在玉米中,C K2通过磷酸化玉米异染色质蛋白HM G B1的酸性C 末端从而在HM G B1与DNA 的作用过程中起着负调节作用7.另外在对玉米结构特性蛋白(Structure Specific Recognition Protein 1,SSRP1)的研究过程中还发现,只有被C K2磷酸化的SSRP1才能识别UV 损伤的DNA ,而且C K2还通过对玉米脱落酸反应蛋白Rab17的磷酸化从而在植物体对外界压力的反应过程中起着重要作用8,9.在水稻中C K2是由第3号染色体上的Hd6基因编码的,Hd6基因是水稻内通过光敏感性调节抽苔时间的数量基因之一10.但是对于C K2在水稻内功能的研究还相对缺乏.

通过分析C K2磷酸化位点的保守识别序列,发现C K2磷酸化位点广泛存在于生物体的多种蛋白质中,已报道有307种蛋白质含有潜在的C K2磷酸化位点11,因此这些蛋白质的功能可能受到C K2的调节.为了研究植物C K2的重要作用及其某些靶蛋白受C K2调节的情况,我们通过R T 2PCR 的方法从水稻

中获得了C K2催化亚基的cDNA ,在大肠杆菌中进行表达和纯化,同时对该C K2

α的催化活性进行了研究.

第44卷　第4期2005年8月复旦学报(自然科学版)Journal of Fudan University (Natural Science )Vol.44No.4Aug.2005

1　材料和方法

1.1　材料

(1)植物、菌株和载体　水稻(O ryz a S ativa L.ssp.indica

“Guangluai4”)种子由中国水稻研究所提供.E.coli BL21(DE3)和 E.coli Top10由本实验室保存;表达载体p GEX 24T 21购自Amersham 公司.

(2)酶和试剂　Taq DNA 聚合酶、反转录试剂盒及各种限制性内切酶、连接酶均为Ta KaRa 公司产品,PCR 引物由上海博亚生物技术有限公司合成,层析介质均购自Amersham Pharmacia Biotech 公司,Heparin 、Casein 购自Sigma 公司,Trizol 购自Novagen 公司,γ232P A TP/γ232P GTP (5μCi/pmol )购自北京市福瑞生物工程公司,其他试剂均为国产分析纯.

1.2　方法

(1)水稻C K2α的大肠杆菌表达载体的构建　根据已经报道的水稻C K2的基因序列(G enBank :

Ab036788)设计扩增C K2α编码区的寡核苷酸引物,上游引物为:5’2GG A TCCA TGTCG AA GGCG A G

GGTC 23’(下划线为B am H Ⅰ(位点),下游引物为:5’2G A GCTCTTA TCA TTGTGTCGTGCTC 23’

(下划线为Xho 位点).用Trizol 法抽提水稻黄化苗的总RNA (具体抽提方法按Trizol 说明书),取2μg 总RNA 作为模板进行R T 2PCR 反应(50℃30min ,94℃2min ;94℃30s ,54℃30s ,72℃1min ,25个循环;72℃7min ).纯化的PCR 产物用pMD182T vector 连接试剂盒,16℃连接过夜.将连接产物转化 E.coli Top10感受态细胞,涂布于含有氨苄青霉素(100μg/mL )的LB 培养基上,37℃培养过夜,挑选单克隆菌落,酶

切鉴定阳性克隆并测序,将得到的正确克隆命名为pMD182T 2OsC K2

α.将pMD 182T 2OsC K2α用限制性内切酶B am H Ⅰ和Xho Ⅰ酶切,将目的片段回收后克隆于p GEX 24T 21

融合表达载体中12.

(2)OsC K2α的表达条件的确定　将上面构建的重组质粒p GEX 24T 212C K2

α转化 E.coli BL21(DE3)菌株,接种转化子于含有氨苄青霉素(100μg/mL )的LB 培养基中,培养至OD 600值在0.4～0.6之间时,加IPTG 至终浓度为0.1mmol/L ,37℃诱导2h 后测量OD 600,取1mL 培养物于12000r/min 离心1min 收集沉淀.用0.5mL 预冷的50mmol/L Tris 2Cl (p H7.5)悬浮菌体,12000r/min 离心1min 收集菌体.1OD 600菌体加入50μL 水振荡重悬菌体,再加入50μL 2×SDS 凝胶加样缓冲液(100mmol/L Tris 2Cl p H6.8,200mmol/L 二硫苏糖醇(D TT ),4%SDS ,0.2%溴酚蓝,20%甘油).样品在沸水浴中煮沸5min ,室温13000r/min 离心10min ,取上清,直接用于SDS 2PA GE 电泳.SDS 2PA GE 胶的浓度为10%分离胶和3%浓缩胶12.

(3)OsC K2α的纯化　大量培养菌株,3000r/min 离心10min 收集菌体,用PBS 缓冲液(1000mL :8g NaCl ,0.2g KCl ,1.44g Na 2HPO 4,0.24g NaH 2PO 4,p H7.4)吹打重悬,3000r/min 离心10min ,弃上清.沉淀可冻存于-70℃备用,也可直接用于裂解.沉淀重悬于裂解缓冲液(PBS ,p H7.4,1mmol/L D TT ,0.1mmol/L ED TA ,10%甘油,1mmol/L PMSF ,溶菌酶100μg/mL )中,室温15min 裂解菌体,冰浴超声破碎.15000r/min 离心30min ,上清液用滤纸过滤后通过G lutathione Sepharose 4B 亲和层析柱,用洗涤缓冲液(PBS p H7.4,0.1%Triton 2100,1mmol/L PMSF ,1mmol/L D TT )充分洗涤,后用洗脱缓冲液(50mmol/L Tris 2HCl ,10mmol/L G lutathione ,p H8.0)进行洗脱,收集洗脱峰,取一部分用SDS 2PA GE 电泳进行纯度检测12.剩下的蛋白质用测活缓冲液(20mmol/L Tris 2Cl p H7.5,5mmol/L MgCl 2)透析,冻存于-70℃备用.

(4)OsC K2α的活性测定　将重组OsC K2α(0.1μg )在20μL 测活缓冲液中与酪蛋白(2μg )及[γ232P A TP/γ232P GTP (10μCi )30℃

反应30min 后加入3×SDS 凝胶加样缓冲液终止反应,SDS 2PA GE 电泳后放射自显影.

(5)Heparin 对OsC K2α催化活性的抑制　在上述活性测定反应体系中加入Heparin 至终浓度为10

和100μg/mL ,30℃反应30min 加入3×SDS 凝胶加样缓冲液终止反应,SDS 2PA GE 电泳后放射自显影.

545　第4期俞　芳等:水稻蛋白质激酶CK2催化亚基的表达和活性测定

2　结　果

2.1　pGEX 24T 212OsCK 2

α重组质粒的构建水稻总RNA 经R T 2PCR 扩增,得到长度约1kb 的均一条带,与预计的大小一致.扩增产物经纯化后,连接pMD182T vector 后转化大肠杆菌 E.coli Top10.获得含有插入片段的阳性克隆.取阳性克隆测序,测

序结果与公布的OsC K 2

α基因的编码区顺序完全一致,命名该质粒为pMD 182T 2OsC K2α.将得到的重组质粒用限制性内切酶B am H Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并回收含有OsC K 2

α基因编码区的片段后,克隆于p GEX 24T 21融合表达载体中,构建得到的表达质粒命名为p GEX 24T 212OsC K2

α,重组质粒图谱如图1所示.

2.2　OsCK 2

α在 E.coli 中的表达与纯化将重组质粒p GEX 24T 212OsC K2

α转化 E.coli BL21(DE3)菌株,经IPTG 诱导后经SDS 2PA GE 电泳分析重组菌株检测到预期的重组蛋白质表达(图2泳道2),而没有用IPTG 诱导的重组菌株在相应位置没有

检测到相应蛋白质条带(图2泳道1),说明OsC K2

α在大肠杆菌中得到了表达,OsC K2α的分子质量约为39ku 而GST 的分子质量约为27ku ,所以融合蛋白质分子质量约为66ku ,电泳显示的条带与计算的融合蛋白质分子质量相符.

p GEX 24T 212OsC K2

α带有融合的谷胱甘肽S 2转移酶(G lutathione S 2transferase ,GST ),GST 可与还原型谷胱甘肽特异结合,利用该特点可以快速将目的蛋白质纯化.由图2泳道3可见,经G lutathione

Sepharose 4B 一步层析分离得到高纯度的融合蛋白质GST 2OsC K2

α

.2.3　G ST 2OsCK 2

α功能的测定蛋白质激酶C K1能够利用A TP 作为磷供体将酪蛋白Casein 磷酸化,而蛋白质激酶C K2不仅能够利用A TP 而且还能利用GTP 作为磷供体,并且其催化活性能被Heparin 抑制13.图3A 为SDS 2PA GE 电泳结果,而B 为A 图所对应的放射自显影结果.从A 和B 的对照中我们可以发现:重组蛋白质GST 2OsC K2α

能够利用A TP 或GTP 作为磷供体,将酪蛋白Casein 磷酸化,而GST (不带OsC K2

α)则没有激酶活性不能将酪蛋白Casein 磷酸化.并且GST 2OsC K2α对Casein 的磷酸化活性能够被Heparin 特异性抑制.以上结

果证明大肠杆菌表达纯化的重组蛋白质GST 2OsC K2

α具有典型的蛋白质激酶C K2的活性.3　讨　论

蛋白质激酶C K2普遍存在于真核细胞中,并且在细胞的各个时期都处于活性状态,具有重要的生命

645 复旦学报(自然科学版)第44卷　

图3　重组蛋白质GST 2OsCK2

α的蛋白质激酶活性的检测Fig.3　Recombinant CK2

αhas typical activity of casein kinase 2A 为SDS 2PA GE 电泳结果1.GST +casein +γ232P ATP ;2.GST 2OsCK2α+casein +γ232P ATP 3.GST 2OsCK2

α+casein +γ232P ATP +10μg/mL Heparin ;4.GST 2OsCK2α+casein +γ232P ATP +100μg/mL Heparin ;5.GST +ca 2

sein +γ232P GTP ;6.GST 2OsCK2α+casein +γ232P GTP ;7.GST 2OsCK2α+casein +γ232P GTP +10μg/mL

Heparin ;8.GST 2OsCK2α+casein +γ232P GTP +100μg/mL Heparin ;B 为A 图相对应的放射自显影结果

功能,例如参与了DNA 的复制和转录、RNA 的加工和翻译、细胞的新陈代谢以及细胞的运动等过程,并且还发现C K2在动物体内的过表达与肿瘤生长的密切相关性,使其成为越来越具有吸引力的研究对象.C K2的这些重要功能大多是通过它的众多底物来发挥的,2003年,M EGGIO 和PINNA 总结了已报道的C K2底物共有307种,其中1/3以上的底物参与基因表达和蛋白质的合成,大约有60种底物为转录因子,50种底物为DNA/RNA 结构的影响因子.通过对C K2催化位点专一序列的分析发现,C K2的底物应该远大于目前已经发现的和正在研究的这307种底物11,而且C K2对蛋白质的磷酸化还可能影响到蛋白质的稳定性及其在细胞中的定位14.C K2功能的重要性、作用的广泛性也推动了植物C K2的功能研究,但是从植物中分离提取C K2比较困难,并且目前还没有商品化的植物来源的C K2,因而获得有活性的植物来源的C K2对研究它的功能具有重要意义.

我们利用R T 2PCR 的方法从水稻总RNA 中扩增得到OsC K 2

α的cDNA ,并将该编码区克隆到p GEX 24T 21表达载体中,经过表达纯化得到了较高纯度的并且具有天然活性的重组蛋白质GST 2OsC K2

α.有活性的OsC K2

α的获得解决了没有商品化植物来源C K2的现状,为研究C K2在植物体内的功能打下了良好的基础.同时由于蛋白质激酶C K2底物的广泛性,许多蛋白质序列都存在潜在的磷酸化位点,可以通过本研究所用的方法,来检测这些潜在的底物在体外被蛋白质激酶磷酸化的状况,从而为更进一步阐明磷酸化和蛋白质功能之间的关系打下基础.

近年来有关细胞周期的调控及其调控机理的研究一直是分子生物学研究的热点,因此与细胞周期相关的蛋白质也引起了人们的关注.DNA 和组蛋白组装成核小体是真核生物细胞中一个最基本的过程,它影响着包括细胞周期在内的很多生物过程,核小体组装蛋白(nucleosome assembly protein 1,NAP1)是帮助组蛋白H2A/H2B 沉积到DNA 上的一类组装因子15,16.我们分析水稻的NAP1类似蛋白氨基酸顺序发现其含有多个蛋白激酶C K2的磷酸化位点,但是磷酸化所发挥的调控机制仍不清楚.获得了有活性的

重组OsC K2

α,对深入研究水稻的NAP1类似蛋白功能将会有很大的帮助.参考文献:

1

　陈小文,刘新光,梁念慈.蛋白激酶CK2J .国外医学分子生物学分册,2001,23(4):2062209.2

　Hidalgo P ,G arreton V ,Berrios C G ,et al .A nuclear casein kinase 2activity is involved in early events of tran 2scriptional activation induced by Salicylic acid in tobacco J .Plant Physiol ,2001,125(1):3962405.3

　Espunya M C ,Combettes B ,Dot J ,et al .Cell 2cycle modulation of CK2activity in tobacco B Y 22cellsJ .Plant J ,1999,19(6):6552666.4

　Lee Y ,Lloyd A M ,Roux S J.Antisense expression of the CK2alpha 2subunit gene in Arabidopsis.E ffects on light 2regulated gene expression and plant growth J .Plant Physiol ,1999,119(3):98921000.5

　Sugano S ,Andronis C ,Green R M ,et al .Protein kinase CK2interacts with and phosphorylates the Arabidopsis circadian clock 2associated 1proteinJ .

PNA S ,1998,95(18):11020211025.6　Daniel X ,Sugano S ,Tobin E M.CK2phosphorylation of CCA1is necessary for its circadian oscillator function in ArabidopsisJ .PNA S ,2004,101(9):329223297.

745　第4期俞　芳等:水稻蛋白质激酶CK2催化亚基的表达和活性测定

7

　Thomsen M S ,Franssen L ,Launholt D ,et al .Interactions of the basic N 2terminal and the acidic C 2terminal do 2mains of the maize chromosomal HM G B1proteinJ .Biochemist ry ,2004,43(25):802928037.8

　Jensen A B ,G oday A ,Figueras M ,et al .Phosphorylation mediates the nuclear targeting of the maize Rab17pro 2teinJ .Plant J ,1998,13(5):6912697.9

　Riera M ,Figueras M ,Lopez C ,et al .Protein kinase CK2modulates developmental functions of the abscisic acid responsive protein Rab17from maizeJ .PNA S ,2004,101(26):987929884.10

　Takahashi Y ,Shomura A ,Sasaki T ,et al .Hd6,a rice quantitative trait locus involved in photoperiod sensitivity ,encodes the alpha subunit of protein kinase CK2J .PNA S ,2001,98(14):792227927.11

　Flavio M ,Lorenzo A.One 2thousand 2and 2one substrates of protein kinase CK2αJ .The FA S EB J ,2004,17(3):3492362.12

　Sambrook J ,Russell D W.分子克隆实验指南,第3版M .北京:科学出版社,2002.13

　Stefania S ,Philippe V ,Luca C ,et al .A multifunctional network of basic residues confers unique properties to protein kinase CK2J .Mol Cell Biochem ,1999,191(122):13219.14

　Li M ,Strand D ,Krehan A ,et al .Casein kinase 2binds and phosphorylates the nucleosome assembly protein 21(NAP1)in Drosophila melanogasterJ .J Mol Biol ,1999,293(5):106721084.15

　Adams C R ,K amakaka R T.Chromatin assembly :Biochemical identities and genetic redundancy J .Curr Opin Genet Dec ,1999,9(2):1852190.16　Nakagawa T ,Bulger M ,Muramatsu M ,et al .Multistep chromatin assembly on supercoiled plasmid DNA by nu 2

cleosome assembly protein 1and ACFJ .J Biol Chem ,2001,276(29):27384227391.

Expression and Activity Detection of the C atalytic Alpha

Subunit of CK 2from Oryza sativa

Y U Fang ,ZH U Y an ,XI N Hua ,CAO Kai 2ming ,DONG Ai 2wu

(Depart ment of Biochemist ry ,School of L if e Sciences ,Fudan U niversity ,S hanghai 200433,China )

Abstract :The cDNA of CK 2(casein kinase 2)alpha subunit from rice tissue was isolated.Recombinant OsCK 2

αfused with GST (G lutathione S 2transferase )was expressed in E.coli and purified by affinity chromatograph.The recombinant

OsCK 2

αcan phosphate casein using ATP or GTP as phosphate donor ,and this activity can be inhibited by heparin.These data suggested that the recombinant OsCK 2

αhas the typical activity of CK 2.K eyw ords :rice ;protein kinase CK 2;expression ;purification ;kinase activity 8

45 复旦学报(自然科学版)第44卷　

实验报告 小麦种子储藏蛋白

实验二小麦种子储藏蛋白─HMW-GS的分离 (SDS-PAGE) 一、实验目的 利用SDS─聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)研究小麦种子储藏蛋白，高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）组成结构。此外SDS-PAGE也是测量蛋白质亚基分子质量常用的方法。通过本实验，掌握SDS-PAGE的基本原理、技术以及应用。 二、实验原理 用十二烷基硫酸钠（SDS）和还原剂（巯基乙醇或二硫苏糖醇）热处理蛋白质样品，蛋白质中的二硫键被还原，解离的亚基与SDS发生定量结合后使蛋白质亚基带上大量负电荷，从而掩盖了蛋白质各亚基原有的电荷差异。亚基的构象均呈长椭圆棒状，各各种蛋白质亚基-SDS复合物表现出相等的电荷密度，在电场中迁移速度仅与亚基分子质量有关。因此，SDS-PAGE可用来分离蛋白质亚基并测定其蛋白质亚基的分子质量。 三、材料与仪器 1、仪器 电泳仪、垂直板电泳槽、台式高速离心机、脱色摇床、加样枪、50ml烧杯2个、移液管。 2、试剂和材料 70%乙醇、50%正乙醇、样品提取缓冲液、样品提取液、30%丙烯酰胺+甲叉双丙烯酰胺、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、10%SDS、10%过硫酸铵、TEMED、电极缓冲液、染色液、漂洗液。 四、实验步骤 1、样品的提取 [1] 分别取4粒小麦种子研碎，加入70%乙醇1000ul，10min后，1200转离心8min，弃乙醇晾干。 [2] 加50%正丙醇（含2%β-巯基乙醇）250ul混匀后，50℃水浴1.5h，中途

振荡，1200转离心8min。 [3] 取上清液加满丙酮置于-20℃中3h。 [4] 1200转离心8min，倒掉丙酮晾干，加样品提取液250ul、待溶解完全后，煮沸3分钟，取上清液点样。 2、SDS-PAGE分析 [1] 组装电泳槽（略）。 [2] 凝胶制备 取两只50ml干净的烧杯，按下表1加样。在组装好的电泳槽中先制备分离胶，待分离胶聚合后，倒掉乙醇容易，再灌浓缩胶，灌好浓缩胶后迅速插入样品梳静止聚合。 表1 凝胶制备试剂配方 聚丙烯酰胺凝胶配方分离胶浓缩胶 30%Acr-Bis(ul) 2.5 0.62 pH8.8Tris-Hcl(ul) 2 ─ pH6.8Tris-Hcl(ul) ─ 1.3 H2O(ul) 2.95 3.0 1%AP(ml) 100 75 [3] 加样及电泳 待凝胶完全聚合后，拔掉电泳梳子。然后将电泳槽注满电极缓冲液。取适量上清液加样。为了比较蛋白质条带的效果，将4个小麦品种的样品，分别按照2.5ul和5ul两种不同剂量加入。此外，电泳装置上接负极，下接正极，恒流20mA，待溴酚蓝走出分离胶30min后停止电泳，取出玻璃板，剥胶染色。 [4] 染色 剥下的胶用蒸馏水洗涤后加入染色液，盖上盖子，放入微波炉中低温染色3min，每隔一分钟取出振荡。 [5] 脱色 将染色液倒回瓶内，加入漂洗液至背景无色为止，照相保存。 五、结果与分析 本次实验没有加入标准蛋白质，无法计算相对迁移率。实验结果见下图。

玉米贮藏蛋白质的提取及亚基电泳分析

玉米贮藏蛋白质的提取及亚基电泳分析 李艳1,郝建平1,郑亚军2,王将2(1.山西农业大学农学院,山西太谷030801;2.山西农业大学食品学院,山西太谷030801) 摘要采用SD S-PAG E,浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度为12%,对2种新品种玉米———强盛49和奥玉3101的贮藏蛋白亚基进行了电泳分析,并对组成2种玉米贮藏蛋白的各亚基的分子量和含量进行了分析。结果表明,分离胶浓度为12%的电泳图谱最佳。2种玉米蛋白的亚基组成相同,都含有14个亚基,二者分子量分布范围也接近,但是亚基含量差别较大,尤其是亚基13差别最为显著。在玉米蛋白的亚基组成中,以低分子量亚基为主,玉米蛋白亚基分子质量范围约为1.0×104～8.0×104D a。 关键词玉米贮藏蛋白亚基;SD S-P AG E;组成;分子量 中图分类号O658.9文献标识码 A 文章编号0517-6611(2007)115-04626-02 A n a ly s is o f th e M a iz e S to rag e P ro te in Subu n its w ith SD S-PAGE LI Y an e t a l(C o lle ge o f A gr icu ltu re,S h an x i A g ricu ltu re U n ive rs ity,T a igu,S h an x i030801) A b s tra c t T h e expe r i m en t in th e i n v es tiga tion o f tw o k i n ds o f m a ize’s sto rag e pro te in subu n its w ith sod iumdodecy l su lph a te-po ly acrlam ide ge l e lec-troph ore sis(SD S-PAG E)w a s con du cted.T h e re su lts sh ow ed th a t th e re so lv i n g e ffe ct o f m a ize’s sto rag e p ro te in subu n its cou ld be gre a tly a ffe cted by th e con cen tra tion s ch an g e o f re so lv in g ge l.A n d th e go od re so lv in g e ffe ct o f a l m on d s to rage p ro te in subu n its cou ld be ob ta in ed w h enth e re so lv in g g e l con cen tra-tion w a s12%.F u rth e rm o re,th e re su lts sh ow edth a t th e tw o k i n ds o f m a ize s con ta in ed14subu n its an d th e m o lecu la r w e igh t o f m a ize’s s tora ge p ro te in su b-u n its w e re abou t1.0×104～8.0×104D a.T h e percen t o f13th su bu n it is ve ry diffe ren t i n Q ian g sh en g49and A oyu3101. K e y w o rd s M a ize sto rage p ro te in su bu n its;SD S-P AG E;C om pon en t;M o lecu la r am ou n t 植物贮藏蛋白亚基的构成对蛋白的功能性和营养特性影响较大[1],即玉米蛋白亚基的组成和含量直接影响玉米品质。因此,对玉米贮藏蛋白亚基进行凝胶电泳分离、鉴别和分析,在玉米的资源筛选、加工利用和鉴定品种真实性、检测品种纯度上尤显重要。SD S-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)在蛋白质的量化、比较及特性鉴定中是一种经济、快速、重复性好的方法[2]。笔者采用SD S-PAG E法,对2个玉米品种进行了亚基分析,以期为玉米的品种纯度检测和加工利用等研究提供参考。 1材料与方法 1.1 试验材料以玉米品种强盛49和奥玉3101为试材。1.2 试验方法 1.2.1 脱脂玉米的制备。将玉米籽粒粉碎后过60目筛,所得玉米粉末与乙醚按1∶20的比例混合,4℃水浴中磁力搅拌8h,弃取上清液,保留玉米粉。3次重复,最后将脱脂玉米粉风干,-20℃保存。 1.2.2 玉米贮藏蛋白质的提取。将脱脂玉米粉与pH值8.0的磷酸盐缓冲液按料液比1∶20混合,4℃水浴中磁力搅拌提取8h后,4000r/m in离心15m in,弃去沉淀(不溶性糖类和杂质),收集上清液,用0.1m ol/L H C l调上清液pH至4.5,使蛋白质在等电点沉淀后,再次磁力搅拌15m in,在12000r/m in 下,离心20m in,将离心所得沉淀用蒸馏水洗涤5～6次,收集沉淀,真空冷冻干燥即得玉米贮藏蛋白。 1.2.3 玉米贮藏蛋白的电泳检测方法。 1.2.3.1 电泳贮存液的配制。①丙烯酰胺溶液。将29.2g 丙烯酰胺和0.8g N,N′-甲叉双丙烯酰胺溶解在50m l双蒸水中,定容至100m l,移入棕色瓶中4℃保存;②浓缩胶缓冲液。将12.11g T r is溶解于100m l双蒸水中,加入10%S DS溶液8 m l,用浓盐酸调pH至6.8,定容至200m l,4℃保存;③分离胶缓冲液。将90.83g T r is溶解于200m l双蒸水中,加入10% 基金项目山西省科技攻关项目(2006031041)。 作者简介李艳(1980-),女,山西榆社人,硕士研究生,研究方向:作物栽培与耕作学。 收稿日期2007-02-08SD S溶液20m l,用浓盐酸调pH至8.8,定容至500m l,4℃保存;④电极缓冲液。将3.03g T ris,14.41g甘氨酸,1g SD S溶解于双蒸水中,定容于1000m l,4℃保存;⑤样品缓冲液。 0.5m o l/L T ris-H C l pH6.8,2.0m l;20%丙三醇,2.0m l;20% SD S,2.0m l;0.1%(W/V)溴酚蓝,0.5m l;β-巯基乙醇,1.0m l;以上溶液混合后加蒸馏水2.5m l;⑥10%过硫酸铵。1g过硫酸铵加10m l双蒸水(新鲜配制);⑦10%TEM ED。0.1m l TEM ED加0.9m l双蒸水(新鲜配制)。 1.2.3.2 凝胶浓度的计算。凝胶浓度用T和C来表示。T 是2个单体(丙烯酰胺和N,N′-甲叉双丙烯酰胺)的总百分浓度,C是与浓度有关的交联百分度。 T(%)=[A cr(g)+B is(g)]/V(m l)×100%,C=B is(g)/ [A cr(g)+B is(g)]×100% 式中:A cr(g)为丙烯酰胺的克数,B is(g)为N,N′-甲叉双丙烯酰胺的克数,V(m l)为溶液的终浓度。 1.2.3.3 蛋白质亚基迁移率的计算。蛋白质的相对迁移率R f是用每条蛋白带的迁移距离(分离胶与浓缩胶分界线至带中心位置的距离)除以溴酚蓝前沿的迁移距离得到的,即:R f=蛋白带迁移距离/溴酚蓝迁移距离。 1.2.3.4 玉米贮藏蛋白的S DS-PAGE方法。将玉米蛋白溶液浓度标定至1m g/m l,与样品缓冲液按1∶1的比例混合,100℃煮沸5m in,上样20μl,恒压电泳(浓缩胶100V,分离胶150 V),当溴酚蓝指示剂距胶底部5m m时,停止电泳,剥下胶片后,将胶片放入固定液中固定2h,然后考马斯亮蓝R-250染色,过夜,放入脱色液中脱色,直至胶片背景蓝色完全透明状,数码照相,分析。 1.2.3.5 玉米贮藏蛋白亚基分析。用天能凝胶成像系统软件分析系统分析电泳图谱。 2结果与分析 2.1 玉米贮藏蛋白电泳的最佳分离胶浓度的选择 2.1.1 不同胶浓度的配制(表1)。SD S-PAGE全部采用5%浓缩胶,分离胶浓度采用10%、12%、1 3.5%、14%、15%共5个水平,对比其电泳图谱和蛋白质迁移率,以图谱清晰、差异 安徽农业科学,J ou rn a l o f A n hu i A g r i.S c i.2007,35(15):4626-4627责任编辑罗芸责任校对李洪

《稻盛和夫阿米巴经营》读后感

阿米巴经营之读后感 读完《稻盛和夫自传》和《稻盛和夫阿米巴经营》这两本书后，不难发现，从他的经历中，他从小并不是一个明显具备成功特质的人，包括性格方面也存在懦弱等方面特质，但是这一切都没有阻碍他向前的发展。首先，作为一位优秀的企业家，用40年的时间创建了两家世界500强企业。是目前唯一在世的日本四大“经营之圣”(另三位分别是大名鼎鼎的松下公司创始人松下幸之助、索尼公司创始人盛田昭夫、本田公司创始人本田宗一郎)，也是是世界上唯一能够先后创立两家进入世界500强公司的人。另外，他也是一位非常有社会责任感的慈祥老人，78岁高龄应日本政府的托付，冒着一世英名毁于一旦的危险，以零薪水接任日航公司董事长，并以420多天的时间扭转日本航空的颓势并获利1880多亿日元。在如此多传奇的背后，我们发现了他的阿米巴经营。 书中详细介绍了阿米巴这种组织应该如何去构建、如何去协调、如何去管理，尤其是重点介绍了作为其核心的单位时间核算制，这些内容对广大经营者和管理者来说，无疑都是非常具有参考价值的内容。然而，但凡经营机制，都是其形易效，其神难仿，直接拿几个工具过来用用很简单，真要想把握到此机制背后的精髓，充分发挥其效果，必须要付出艰辛的努力才行。就我个人的理解来说，支撑阿米巴经营的“神”之所在，乃“无私”或者说“利他之心”，这种道德层面的东西。稻盛和夫自己也在书中不止一次地指出，阿米巴经营对于领导者的道德要求非常高，如果没有这一层面的内涵，阿米巴经营是难以发挥预期之效果的。按照专业的话来说，这些应该是属于“企业文化”层面的内容了。 阿米巴经营理念来源于稻盛和夫管理企业的感想，随着企业的发展壮大，他感觉到管不过来了。因此想发挥群体智慧和能动性，希望每个组织的领导人和责任人都能向他一样，为企业发展尽心尽责，关注企业利润最大化。同时保障组织整体效益，更加关注企业内部的人员之间的公平合理和组织透明，使员工在思想上和内心深处为企业发展不遗余力。让每个员工都成为企业的主人，也就是所谓主人翁精神。稻盛和夫的厉害之处在于直接将员工的需求提升到自我实现的最高层次，使员工拥有了做一番事业，回报社会的理想和动力。因此看待人和事的境界自然超越了国内员工的认识水平。但是稻盛和夫在这个过程中除了说教之外并没有简单的画大饼，而是给了员工真实的物质需求。同时也体会到了组织的关爱、平等、透明，让员工感受到付出就有回报，以及稻盛和夫不拘一格的人才使用观。大部分国人面对日本人的管理思想从来就没有静心学习和

《稻盛和夫阿米巴经营》读书心得

《稻盛和夫阿米巴经营》读书心得 这是一本讲述稻盛和夫经营实学的书。所谓实学，即描述经营企业时实际的管理技术，具体的操作手法。 稻盛和夫 被称为日本的"经营之圣，人生之师"，作为日本的企业家兼哲学家第一人，在企业经营和人生理念方面均有独到而务实的见解。他用40年的时间创建了两家世界500强企业。 阿米巴经营：就是以各个阿米巴的领导为核心，让其自行制定各自的计划，并依靠全体成员的智慧和努力来完成目标。通过这种做法，让第一线的每一位员工都能成为主角，主动参与经营，进而实现"全员参与经营"。 实现阿米巴经营有两个前提条件： 1.企业经营者的人格魅力。经营者必须具备"追求全体员工物质和精神两方面幸福，并为社会做贡献"的明确信念。 __的公平无私是调动员工积极性的最大动力，也是实施"阿米巴经营"的首要前提条件；

2.所谓的"哲学共有"，即共同的经营价值观和哲学。亦即从公司高层到阿米巴成员，必须用信任的纽带连结起来。 全书共分为五章。 第一章的主题是"每一位员工都是主角"，主要介绍了阿米巴经营的诞生背景和目的。 第二章的主题是"经营不能没有哲学"，主要介绍了实践阿米巴经营的要点，阿米巴组织的定价以及领导需要具备的经营哲学。 第三章的主题是"阿米巴的组织构建"，主要介绍如何在公司中构建阿米巴及相关的原则。 第四章的主题是"现场是核算管理的主角--单位时间核算制"，重点介绍了阿米巴经营的核心"单位时间核算制"及阿米巴经营过程中的相关要点。 第五章的主题是"打造激情四射的集体"，主要介绍了阿米巴经营运行过程中的目标设定及阿米巴经营的经营哲学。 分述：

第一章的主题是"每一位员工都是主角" 第一章的主题是"每一位员工都是主角"，主要介绍了阿米巴经营的诞生背景和目的。 京瓷的经营理念："应在追求全体员工物质与精神两方面幸福的同时，为人类和社会的进步和发展做出贡献。" 在培养领导的同时，在公司内部增加关心经营，有经营者意识的员工的数量。 阿米巴经营的三个目的： 1.确立与市场挂钩的部门核算制度； 2.培养具有经营者意识的人才； 3.实现全体员工共同参与经营。 把"做人何谓正确"这一基准作为公司经营的原理原则。以此为依据对所有事情做出判断。它表现为：公平、公正、正义、勇气、诚实、

稻盛和夫的阿米巴经营模式

稻盛和夫的阿米巴经营模式 阿米巴经营模式源于稻盛创业早年的困境，当时他一个人既负责研发，又负责营销，当公司发展到100人以上时，觉得苦不堪言，非常渴望有许多个自己的分身可以到各重要部门承担责任。于是，他把公司细分成所谓“阿米巴”的小集体，从公司内部选拔阿米巴领导，并委以经营重任，从而培育出许多具有经营者意识的领导。 阿米巴经营模式是日本经营之圣稻盛和夫独创的经营模式，稻盛和夫创建了两家世界500强企业——京瓷和第二电电（KDDI），正是阿米巴经营模式让这两家企业茁壮成长，长盛不衰，京瓷更是创造了神话一般的业绩——50余年从不亏损，越是经济危机越是大发展；稻盛和夫目前任破产重组的前世界500强日本航空公司（JAL）的总裁，他正尝试把阿米巴经营模式导入日航。事实上，阿米巴经营模式与京瓷会计学（稻盛的专著《稻盛和夫的实学》进行了介绍），被称为稻盛经营哲学的两大支柱。 阿米巴模式的目的 按照京瓷的阿米巴经营模式指定研究机构——神户大学的教授三矢裕在《创造高收益的阿米巴模式》中的总结，阿米巴经营有五大目的： 1、实现全员参与的经营； 2、以核算作为衡量员工贡献的重要指标，培养员工的目标意识； 3、实行高度透明的经营； 4、自上而下和自下而上的整合； 5、培养领导人； 阿米巴经营模式是将领导力培养、现场管理和企业文化这三大企业管理的难题集中在一

起，予以解决的伟大经营模式。 虽然将三大难题熔为一炉，但难能可贵的是，阿米巴经营模式却是特别特别的简单，只要对经营企业有所热情的人，就足以很好地理解和领悟。所谓，大道至简吧！ 阿米巴模式实现的基本条件 阿米巴经营并不是单纯的利润管理手段，而是实现全员参与的经营方式。当然光靠单位时间核算衡量现场业绩是无法实现参与式经营的。参与式经营的实现需要一定的条件，我们关注的主要有以下五点。在序章里，笔者提到过阿米巴经营是一种赋权式经营模式，之所以这样说，就是因为具备这些条件才实现了有效的赋权。 实现阿米巴模式的第一个条件 第一个条件是企业内部的信任关系。作为经营者，要相信员工的能力，有企业发展需要依靠员工智慧的姿态。同样作为员工，必须抱有自己的努力和智慧关系到企业、客户甚 至自己的长期利益的信念，只有这样才能实现全员参与式的经营。无论是经营者还是员工，必须把经营建立在互相信任的基础之上，这也是实现阿米巴经营的最基本的条件。如果缺乏这一条件，就无法把一些重要的经营信息公布给员工。在一种总担心企业信息遭到泄露的疑神疑鬼的状态下，是无法实现全员参与式经营的。员工不是单纯用来利用的工具，而是经营共同体中的一员，领导人必须要有这样的姿态。正是基于这一点，京瓷的阿米巴经营并没有把阿米巴的业绩和员工的金钱报酬挂钩。 实现阿米巴模式的第二个条件

稻盛和夫的阿米巴经营

稻盛和夫的阿米巴经营 阿米巴（amoeba）是一种单细胞生物，俗称变形虫。稻盛和夫用它作为组织单元的比喻。 阿米巴经营，形象地比喻稻盛和夫创造的经营方法。这种方法的核心，是把企业划分成独立核算单元，每个单元就是一个阿米巴。 稻盛创办的两家世界五百强企业——京瓷和KDDI，能够一直保持高收益并可持续发展，按他自己的说法，其奥秘全在他的经营哲学和阿米巴组织。 稻盛指出：“所谓的‘阿米巴经营’就是以各个阿米巴的领导为核心，让其自行制定各自的计划，并依靠全体成员的智慧和努力来完成目标。” 阿米巴经营有三个主要目的： 第一，“确立与市场挂钩的单元核算制度” 第二，“培养具有经营者意识的人才”。 第三，“实现全体员工共同参与经营”。 划分阿米巴的原则 划分阿米巴应遵循三个原则。 首先，划分后的阿米巴必须能够独立核算。 其次，划分后的阿米巴必须能够独立完成业务。 再次，划分后的阿米巴必须能够贯彻公司的整体目标和方针。 如何有效衡量阿米巴的经营业绩呢？ 京瓷制定了单位时间核算表，以此计算各阿米巴在单位时间内的增值率。将稻盛提出的“追求销售额最大化和费用最小化”落到实处，使其成为各阿米巴的努力方向。 独立核算的阿米巴，是企业的基本经营单位。通过授予阿米巴相应的经营权，可以有效激发其领导及成员的工作热情。 定价主要涉及两种因素，一是市场需求因素，二是制造成本因素。一般而言，定价要考虑制造成本和销售费用。 因此，在京都陶瓷，“定价是经营之本”。各阿米巴之间通过定价机制进行交易，产品价格的高低就成为影响阿米巴单位时间附加价值的重要变量。 阿米巴经营的基础和前提 第一，企业成员之间必须相互信任。阿米巴之间，固然存在一定的竞争，但作为同一个企业的不同单元，肯定唇齿相依。 第二，上级领导必须成为“公正的裁判”。 第三，阿米巴领导者要具备诚实正直的品格。诚实正直是最基本、最朴实的人世伦理。 推广阿米巴经营，有几点值得注意： 第一，如果没有稻盛和夫这样道德高尚、部下真诚信服的领导者，阿米巴经营就无法推行； 第二，如果没有上下共同认可的经营理念，所谓阿米巴经营就会蜕变为传统的承包制，或者蜕变为变质的绩效管理，甚至有可能滑向罪恶的血汗工资制； 第三，如果人力资源管理跟不上，阿米巴的核心缺乏领导能力，成员缺乏自治能力，就会导致阿米巴的控制与协调成本过于高昂，失去其存在价值；

稻盛和夫阿米巴经营学习要点知识分享

稻盛和夫阿米巴经营 学习要点

韬盛和夫阿米巴（小型经营体）管理模式学习要点 （内部资料，仅供参考） 企业管理部 一、推行小型经营体管理模式的目的意义 1、建立起与市场挂钩的部门核算制度：传统的经营管理模式是将生产部门作为成本中心进行管理，不管企业盈利还是亏损，只管按照目标成本组织生产，企业盈亏就看销售价格如何，命运掌握在少数销售人员手上。小型经营体管理模式通过内部买卖制将顾客驱动和市场机制引入企业内部，通过单位人工核算制将所有部门都变成利润中心，从而建立起企业整体联动、全过程应对市场的快速反应机制，使得生产、销售部门全都成为利润创造部门。 2、培养具有经营者意识的人才：企业发展象脓包，大了以后就会破，这是因为企业变大后企业经营者力不从心，有时甚至感到孤独无助、高不胜寒，希望有更多共同经营的伙伴，由此联想到孙悟空分身术，于是划小经营单位，让那些只能管20－30人的一般管理人员都能担负起小型经营体的领导，从而达到培养经营人才、共同分担经营责任的目的。 3、实现全体员工共同参与经营：企业要创造利润，就必须实现销售收入最大化和成本费用最小化，这是会计核算的本质和企业经营的原则，而成本费用每天都发生在生产现场，身处一线的员工却对此漠不关心，企业经营好差似乎与大多数员工都没关系。小型经营体管理模式让每个经营体、每位员工、每天都能看到自己所在经营体的收入、支出和盈利情况，过去认为只要在规定时间内工作就能获取报酬的人，现在观点发生了180度转变，认识到只有创造盈利自身报酬才能有着落，广大员工的工作激情、参与意识和成就感得到充分激发。 二、如何进行经营体划分 1、掌握三个条件，并非越细越好：三个条件是能够独立核算收入、支出的单位，也就是能够准确地掌握经营体收支状况；能够独立完成业务的单位，也就是经营体负责人具有钻研创造的空间，可以体会他的事业价值；能够执行公司方针目标的单位，也就是组织细分不会阻碍公司方针目标执行。可以按照工序、产品或生产区域进行划分，也可按照市场、客户或销售区域划分，形成多元化经营组织。 2、不仅细分生产部门，销售等部门也应进行细分：生产部门细分了，销售部门如不细分，导致销售部门只顾完成总量目标而放弃个别产品不去努力。销售部门细分后说不定会出现3产品的销售员同时接待同一个客户，表面看似浪费，实则有利拓展事业，其产出远远大于投入。其次，原料配制也可作为一项独立业务细分出来，单独建立一个经营体，通过低价采购、配制再销售给下道部门，这样一来，很多生产部门都被赋予了采购职能，由生产部门直接选定供货商并与其进行价格谈判，有可能出现内外勾结和独家采购，为此，公司应在生产部门之外，独立设置一个采购管理部门或赋予某个管理部门的采购管理职能，对采购行为

稻盛和夫阿米巴经营第一章的读后感

《稻盛和夫阿米巴经营》读后感“阿米巴经营”是稻盛和夫所创造的一种经营模式、一种经营理念、从一个经营一窍不通到被称之为日本的经营之圣、人生之师，成为日本的企业家兼哲学家的第一人。在企业经营和人生理念方面均有独到而务实的见解，用40年的时间创建了两家世界500强企业。 从创建公司到公司启动阶段，所面临诸多的实际困难从该书的第一章中已充分说明其经营的独到理念，阿米巴经营，在京都白手起家创建了京瓷公司，没有经验和缺乏技术，这方面的基础设施必须从零开始建设等。但是稻盛和夫没有被困难吓到，而是迎难而上。他认为企业只要是不掺杂任何死心的做有利于企业。有利于国民的事情，于员工以心交心，让员工作为企业的主人，那么企业就会获得成功。 一：把公司划分为若干个小的单元，建立由小单元在公司内部进行购销的机制，以各小集体独立核算的原则，追求销售额最大化和经费最小化，采取能够即刻应对市场变化的部门核算原理，实现开展阿米巴经营的第一个目的。 二：培养具备经营者有意识的人才，让小单位领导能够同甘苦，担负起共同经营责任的伙伴。使每一位员工会产生自己也是经营者的一员的意识，更会萌生出一个经营者的责任感、努力去提升业绩、和各自的阿米巴开展出色的经营。 三：在经营者与员工构筑家庭成员般的人际关系建立一个有更多员工互相携手共同参与经营公司、让全体员工为了公司的发展而齐心协力。在工作中感受人生的意义以及成功的喜悦，最大限度地提升个

人能力，并努力工作，茁壮成长。 “自利则生，利他则久”，“利他”是企业经营的起点，拥有，“利他之心”的企业是战无不胜的、这里的“他”不但代表员工，客户，还包括供应商，股东，银行社区和其他利益相关系。 企业不能脱离社会孤立的发展，而是存在于一个自然的生态系统中，如果企业仅仅关注自己的利益，可以实现生存，但是一旦危机爆发，就容易毁于一旦，企业只有同相关利益者建立共赢到共生的良性关系，从“利他之心”出发，那么大家都会来帮助企业，企业也因此受益，并依靠强大的整体力量持续成长。 自利，可能让企业在短期内获取一定的生存空间，利他，才能让企业真正实现基业长青。

稻盛和夫阿米巴经营读后感

稻盛和夫阿米巴经营读后感 阿米巴经营模式是稻盛先生创立的特有的经营模式，两个世界五百强——京瓷和第二电电和后来的拯救日航，都引入了阿米巴经营模式。所谓阿米巴经营，就是以各个阿米巴的领导为核心，让其自行制定各自的计划，并依靠全体成员的智慧和努力来完成目标。通过这种做法，让第一线的每一位员工都能成为主角，主动参与经营，进而实现“全员参与经营”。从而打造出一支激情四射的经营团队。 首先，实行阿米巴经营需要两个前提条件： 第一，企业经营者的人格魅力。作为一个公司，最重要的目的就是保障员工及其家庭的生活，并为其谋幸福。所以经营者必须具备“应在追求全体员工物质与精神两方面幸福的同时，为人类和社会进步与发展做出贡献”的明确信念。 第二，“哲学共有”。始终把做人何为正确作为经营公司的原理原则，以此为依据，对公司遇到的事情作出判断。阿米巴作为一个独立核算单位，正对自己的事业部门具有明确的目标和方向，是一个持续发展的独立组织。根据需求，将组织划分为若干个小集体，然后各自安排领导，因而在培养领导的同时，使员工对经营更加的关心，增加具有经营者意识的员工数量。在经营者与员工之间构建家人般的关系，互助互爱，携手共建公司的美好未来。 其次，阿米巴经营的三个目的： 第一，确立与市场挂钩的部门核算制度。公司在追求销售额最大化和经费最小化，把组织划分成小单元，采取能够即刻应对市场变化的部门核算管理。这是使得每个小单元都尽心尽力创造价值，那么公司的整体盈利将是巨大的，这种方法比起绩效考核就更进一步，因为每个阿米巴的绩效都是是放到市场上去衡量的，更准确有效，另外可以全天候触摸市场脉搏，随时调整，避免风险。 第二，培养具有经营意识的人才。一个人再厉害，总会有心有余而力不足的时候，如果能有共同经营的伙伴是有多好。如此一来，只要把组织划分成若

稻盛和夫阿米巴经营一书读后感

稻盛和夫阿米巴经营一书读后感 看到《阿米巴经营》，才真的觉得是有些实实在在的东西。可能正如其序言所说，《活法》乃是哲学，《阿米巴经营》则是实学，也即经营企业时实际的管理技术，具体的操作手法。仅仅模仿阿米巴经营的做法，并不一定适合中国的企业。原因在于阿米巴经营是以经营哲学作为基础，是与公司运作的各项制度息息相关的整体经营管理系统。 首先，让我们来了解一下本书的作者：稻盛和夫，被称为日本的“经营之圣、人生之师”，作为日本的企业家兼哲学家第一人，在企业经营和人生理念方面均有独到而务实的见解。他用40年时间创建了两家世界500强企业，是目前唯一在世的日本四大“经营之圣”(另三位分别是松下公司的创始人松下幸之助、索尼公司的创始人盛田昭夫、本田公司的创始人本田宗一郎)之一。他是4000多名经营者追随的企业导师，曾出版过10多本介绍企业经营理念和人生哲学的图书。其次，要了解稻盛和夫经营的理念：追求员工及其家庭的幸福，作为公司第一目标。位列第二的目标是为了协作商的员工及其家庭的幸福，第三目标是为了客户，第四目标是为了社区，第五目标才是为了股东。把员工的发展放在首位，也就是要把造就自由的、追求一刻接一刻极致的整体人放在了首位。这是稻盛和夫最大的秘密。最后，实施“阿米巴经营”有两个前提条件：第一是企业经

营者的人格魅力。经营者必须具备“追求全体员工物质和精神两方面幸福、并为社会做贡献”的明确信念。领导人的公平无私是调动员工积极性的最大动力，也是实施“阿米巴经营”的首要前提条件。第二个前提条件是所谓“哲学共有”。稻盛哲学里有“以心为本的经营”、“伙伴式经营”“玻璃般透明的经营”以及“动机至善、私心了无”、等内容。各个“阿米巴”之间，每一个“阿米巴”内部的每一位成员，在为自己和自己的“阿米巴”的业绩考虑时，如果缺乏为别人、为别的“阿米巴”以及为企业整体着想的“利他之心”“阿米巴经营”将，难以推行。换句话说，在实施“阿米巴经营”的管理手法时，需要协调利己和利他、协调部门利益和整体利益的辩证法，需要“作为人，何谓正确”这种高层次的哲学。 然后，让我们来了解一下阿米巴模式： 读《阿米巴经营》一书，感觉稻盛确实是一位“伟大的企业家，”他的那种“追求全体员工物质和精神两方面幸福，并为人类和社会的进步与发展做出贡献”的信念。在我看来，似乎可以和共产主义的最高理想相媲美。我对这种信念是没有疑问的，但我可以感觉到多数人对稻盛的信念，心存怀疑。试问一下，假如让你们做他的员工，你会崇拜他吗?会跟随他吗? 佛与稻盛哲学在禅宗寺庙里,僧侣需要负责从煮饭到打

稻盛和夫阿米巴经营一书的读后感

稻盛和夫《阿米巴经营》读后感 阿米巴经营模式是日本经营之圣稻盛和夫独创的经营模式，其对经营的理解之深对员工的激励之强，真是令人发自内心的尊崇。读稻盛和夫的《阿米巴经营》，把其中的思想理念与自己在工作中的实际情况相结合，许多问题都都会化繁至简，碰撞出属于自己思想的火花。读稻盛和夫的《阿米巴经营》，知道这是一本讲述经营实学的书，主要描述经营企业时实际的管理技术，具体的操作手法。读稻盛和夫的《阿米巴经营》，更是知道日本产品质量之优，销售竞争之强，市场占有率之广的具体原因。作者稻盛和夫被称为日本的“经营之圣，人生之师”，作为日本的企业家兼哲学家第一人，他创造性地把哲学、心理学与实践相结合。创造了属于他自己独有的经营模式，正是这种阿米巴经营模式，使他用40年的时间创建了两家世界500强企业—京瓷和第二电电（KDDI），并使这两家企业茁壮成长，长久不衰。 什么是阿米巴经营模式呢？阿米巴经营模式，就是以各个阿米巴的各个领导为核心，让其自行制定各自的计划，并依靠全体成员的智慧和努力来完成目标。通过这种做法，让第一线的每一位员工都能成为主角，主动参与经营，进而实现“全员参与经营”，人人都是经营者。正是由于稻盛和夫塑造的上述公司文化，公司流传出这样的话：“遵守交货日

期是销售人员的责任，接受订单是生产部门的职责”，足见其公司的分工明确地步。 阿米巴经营，讲究的是团队的共同成长，一个企业的发展，不只是依靠高级管理者的远见卓识，更是要依靠全体中下层员工共同的责任感，用“敬事”的态度让全体员工能在工作中找到乐趣和价值，自觉发挥自己的作用，尽到自己作为团队一员的责任，努力为公司创造价值。用“信任”的心灵连接企业的每一个人，发挥企业的整体力量，团队成员之间相互尊重，不管是高层还是员工都互相帮助，相互之间不撒谎、不欺骗、正直真诚地对待身边的团队成员。用“严格的财务核算制度”使经费最小化，以财务控制费用，减少各方面的指出。用“爱人”的宽容吸纳各方面正直并有全局观的人才，一个企业开拓新的领域，必须有各种经验、技术、才智能够胜任的人才。要实现这些，就必须要求企业经营者有高尚的人格魅力和企业中要有共同的经营价值观和哲学。经营者必须具备“追求全体员工物质和精神两方面幸福，并为社会做贡献”的明确信念，才能让员工看到奋斗的希望。有共同的价值观和哲学，才能使企业的每一个人拥有明确的经营原理和原则，以此为依据对所有事情做出判断，才能使每一个成员有明确的志向和目标，才能增强员工的凝聚力，才能实现阿米巴经营提到的“哲学共有”。 那么，《阿米巴经营》一书要求我们怎样才能在自己的

稻盛和夫“阿米巴经营”的特点、经验及启示

稻盛和夫“阿米巴经营”的特点、经验及启示 摘要：日本企业家稻盛和夫在他创办的京瓷公司发展过程中，创造了独特的“阿米巴经营”。这种经营模式以制造部门为利润来源，依靠“单位时间核算”沟通了市场与制造现场，推动了“精细化管理”的实现和“PDCA循环”的持续进行，有效地控制了成本，提高了企业的适应能力和竞争力。我国中小企业应借鉴其思路，重视制造现场，并探索将市场信息及时引入制造现场的手段，并实现“精细化管理”和可持续的“PDCA循环”。 关键词：阿米巴经营；制造现场；单位时间核算；PDCA循环 稻盛和夫先生是一位令人肃然起敬的日本企业家。他27岁创业，40多年间先后创建了京瓷和KDDI两家世界500强企业，2010年受日本首相邀请，以78岁高龄出山拯救日航，仅一年就使这家重病缠身的大企业扭亏为盈，业绩堪称无出其右。其中，稻盛和夫起家时一手创办的京瓷公司，从一家街道小作坊起步，历经70年代“石油危机”、90年代日本“泡沫经济破灭”及以后长期化的“平成萧条”一路成长为世界级大企业，并保持了近50年从未亏损、利润率从不低于10%的骄人纪录。 京瓷战胜困境而成功的法宝，稻盛和夫本人认为就是“基于精细化独立核算的阿米巴经营”。因此，我国企业，尤其是广大中小企业，在当前外部宏观环境趋紧、竞争日益激烈、经营成本急剧提高的形势下，有必要认真研究借鉴“阿米巴经营”的特点与经验。 一、“阿米巴经营”的特点 稻盛和夫将“阿米巴经营”定义为：“就是以各个阿米巴的领导为核心，让其自行制定各自的计划，并依靠全体成员的智慧和努力来完成目标。通过这种做法，让第一线的每一位员工都能成为主角，主动参与经营，进而实现全员参与经营。”京瓷公司内部虽然也存在部、课、系、班等自上而下的组织结构，但其真正的最小基层组织却是“阿米巴”。每个阿米巴小组平均由十二三人组成，京瓷的员工几乎都要参加自己的阿米巴小组，整个公司就是由数千个“阿米巴”组成的“超大型阿米巴”。每个阿米巴集生产、会计、经营于一体，就像一个小企业那样活动，各个阿米巴小组之间能够随意分拆与组合，从而使公司能够像阿米巴变形虫那样，对市场变化做出柔软而迅疾的反应。 与现代企业中其他类型的“小团体活动”，如“QC小组”、“项目组”等相比，“阿米巴经营”有鲜明的特点： （一）以制造部门为利润来源，实现赋权与利润中心下沉 创业初期因难以满足客户提出的降价要求而遭冷遇的教训，使稻盛和夫认识到“价格是由客户，也就是市场决定的。”“但成本却是我们自己可以控制的。竭

稻盛和夫阿米巴经营读后感

稻盛和夫阿米巴经营读后感 导语：阿米巴经营模式源于稻盛创业早年的困境。下面是小编为您准备的稻盛和夫阿米巴经营读后感，供您参阅。 稻盛和夫阿米巴经营读后感1 先前看过稻盛和夫的几本书，都是关于其经营人生的“哲学”思考。这本书却不同，说的是经营的“实学”，即为介绍具体做法的一本书。虽然为了让读者易于理解，书中也尽量把具体做法背后的哲学思想进行了些介绍，但总体来说，大部分篇幅说的还是具体要如何去做的事情。因此，要想从这本书中获得比较好的养分，最好在企业经营管理方面能有所实践，或者是已经有一些这方面的经验。 阿米巴经营是一种能充分调动全体成员积极主动性、充分形成集体合力的经营体制，它把组织细分成一个个强健的独立组成单位，通过对每个单位进行独立核算，把企业每一个组成单元都打造成具有良好盈利能力的组成部分。同时也在所有单元之间建立起良好的协作机制以解决冲突、形成互补，进而形成公司整体的强大竞争力。可以说，是一种非常优秀、非常精干的组织形式。 书中详细介绍了阿米巴这种组织应该如何去构建、如何去协调、如何去管理，尤其是重点介绍了作为其核心的单位时间核算制，这些内容对广大想要提高企业业绩的经营者和管理者来说，无疑都是非常具有参考价值的内容。然而，

但凡经营机制，都是其形易效，其神难仿，直接拿几个工具过来用用很简单，真要想把握到此机制背后的精髓，充分发挥其效果，必须要付出艰辛的努力才行。就我个人的理解来说，支撑阿米巴经营的“神”之所在，乃“无私”或者说“利他之心”这种道德层面的东西。稻盛和夫自己也在书中不止一次地指出，阿米巴经营对于领导者的道德要求非常高，如果没有这一层面的内涵，阿米巴经营是难以发挥预期之效果的。按照现在的行话来说，这些应该是属于“企业文化”层面的内容了，需要在学习时也多加留意。 最后，综合评价下：此书篇幅适中，内容实用，描述清晰，是值得一看的好书。 稻盛和夫阿米巴经营读后感2 《阿米巴经营》最近一直在读，虽然没有读完，但是回想前半部分的内容，发现它所讲的内容能够给我们平时的工作带来很大的帮助。 书中的主人公刚开始经营一家公司时，没有任何经验，所以把所有的工作内容揽于一身，像最初的开发、生产、销售、管理等等，如有问题自己立马到现场，所以搞得自己非常累，精神状态非常差，看到他这样的时候，让我联想到了咱们店面的管理者，刚开始的时候完全和他是一样的，都非常累，所有的事情自己都要亲力亲为，很不放心店员去做，担心员工出错，久而久之自己的状态就会出现问题。 那主人公后来怎么做了呢？

《稻盛和夫阿米巴经营》读后感

阿米巴经营之读后感读完《稻盛和夫自传》和《稻盛和夫阿米巴经营》这两本书后，不难发现，从他的经历中，他从小并不是一个明显具备成功特质的人，包括性格方面也存在懦弱等方面特质，但是这一切都没有阻碍他向前的发展。首先，作为一位优秀的企业家，用40年的时间创建了两家世界500强企业。是目前唯一在世的日本四大“经营之圣”(另三位分别是大名鼎鼎的松下公司创始人松下幸之助、索尼公司创始人盛田昭夫、本田公司创始人本田宗一郎)，也是是世界上唯一能够先后创立两家进入世界500强公司的人。另外，他也是一位非常有社会责任感的慈祥老人，78岁高龄应日本政府的托付，冒着一世英名毁于一旦的危险，以零薪水接任日航公司董事长，并以420多天的时间扭转日本航空的颓势并获利1880多亿日元。在如此多传奇的背后，我们发现了他的阿米巴经营。书中详细介绍了阿米巴这种组织应该如何去构建、如何去协调、如何去管理，尤其是重点介绍了作为其核心的单位时间核算制，这些内容对广大经营者和管理者来说，无疑都是非常具有参考价值的内容。然而，但凡经营机制，都是其形易效，其神难仿，直接拿几个工具过来用用很简单，真要想把握到此机制背后的精髓，充分发挥其效果，必须要付出艰辛的努力才行。就我个人的理解来说，支撑阿米巴经营的“神”之所在，乃“无私”或者说“利他之心”，这种道德层面的东西。稻盛和夫自己也在书中不止一次地指出，阿米巴经营对于领导者的道德要求非常高，如果没有这一层面的内涵，阿米巴经营是难以发挥预期之效果的。按照专业的话来说，这些应该是属于“企业文化”层面的内容了。阿米巴经营理念来源于稻盛和夫管理企业的感想，随着企业的发展壮大，他感觉到管不过来了。因此想发挥群体智慧和能动性，希望每个组织的领导人和责任人都能向他一样，为企业发展尽心尽责，关注企业利润最大化。同时保障组织整体效益，更加关注企业内部的人员之间的公平合理和组织透明，使员工在思想上和内心深处为企业发展不遗余力。让每个员工都成为企业的主人，也就是所谓主人翁精神。稻盛和夫的厉害之处在于直接将员工的需求提升到自我实现的最高层次，使员工拥有了做一番事业，回报社会的理想和动力。因此看待人和事的境界自然超越了国内员工的认识水平。但是稻盛和夫在这个过程中除了说教之外并没有简单的画大饼，而是给了员工真实的物质需求。同时也体会到了组织的关爱、平等、透明，让员工感受到付出就有回报，以及稻盛和夫不拘一格的人才使用观。大部分国人面对日本人的管理思想从来就没有静心学习和参悟过，只是知其然而不知其所以然。要想突破阿米巴经营首先领导人要有大的胸怀，要有才散人聚的价值观，有高尚的人格和为社会做贡献的感召力。通过言传身教为企业做出榜样形成文化，这样才可能出现中国的经营之圣。阿米巴经营是一种能充分调动全体成员积极主动性、充分形成集体合力的经营体制，它把组织细分成一个个强健的独立组成单位，通过对每个单位进行独立核算，把企业每一个组成单元都打造成具有良好盈利能力的组成部分。同时也在所有单元之间建立起良好的协作机制以解决冲突、形成互补，进而形成公司整体的强大竞争力。可以说，是一种非常优秀、非常精干的组织形式。通过对稻盛和夫经营哲学和人生哲学的学习有以下两点感受：一、以德治企。稻盛和夫的经营哲学可以概括为“以德治企”。以德治企首先要求经营者提高心性，也就是说经营者要有意识地不断提升自己的品格和思想，同时要不断反省自己、坚持学习、维持高尚的人格，这是经营者的义务。企业经营最终决定于经营者的器量。其次，以德为本。要求经营者在企业内树立明确的判断基准。稻盛和夫把这个判断基准概括为“做人何谓正确”，这是稻盛和夫经营哲学的原点。稻盛和夫认为任何经营行为都不得违反社会的一般道德标准，要符合做人的道理。“不要撒谎、不要贪得无厌、要诚实、正直……”，这些孩提时代父母和老师教导我们应该遵守的原则，是大家所熟知、最简单、最基本的人生规范。因此，在日常的判断或行为过程中，每个人都应该遵守这些规范，把它们作为经营的指针。这样经营就不会迷失方向，并能取得最后的成功。以德为本还有一个要点就是“以心为本”。经营是围绕着怎样在企业内建立一种牢固的、相互信任的人与人之间的关系这一中心点进行的。为了公司的发展，每个人都要竭尽全力。经营者不负众望努力工作，员工们相互信任不图私利。即使