Advantage 2 PCR 操作步骤

4Advantage ○R2 PCR 酶系统操作步骤

A 控制PCR反应

下列控制PCR反应需要与实验相平行从而确定Advantage ○R2 聚合酶系统作用正常。Advantage ○R2 PCR试剂盒提供阳性控制的模板和引物。当Advantage ○R2 聚合酶系统我们其他的基于PCR反应的应用试剂盒时同时使用时，需要进行阳性控制。

1.把所有的成分置于冰上使其完全融化。在使用前将每个成分充分混合。

2.

3.

4.[选做]如果热循环没有热限制，可以在循环过程中滴加1-2滴矿物油防止蒸发。矿物油

密封效果要好的话必须在两相之间有界限清楚地弯液面。PCR管盖须盖严实。

5.用下面的参量开始热循环：

95℃ 1min

30循环：

95℃ 15s

68℃ 3min

退火延伸时间是3min且30个循环可以使试剂盒中阳性克隆的阳性控制模板充分扩增。其他的模板可能需要增加或减少循环数和不同的退货延伸时间。

6.将PCR反应的样品取5μL转入新的PCR管中并添加1μL 5×stop/loading缓冲液.用1.2%

琼脂糖/EB凝胶电泳和DNA大小合适的Markers分析样品。

预期结果：如果使用试剂盒中提供的阳性控制参数，反应应该产生一个3.5kb的单链大片段，从牛胰腺的胰蛋白酶抑制因子基因分离而来。没有条带的应该是阴性控制形成的。

B.所有Advantage ○R2PCR产品的循环参数的介绍

设计含有Advantage 2 系统初始实验时需要使用下列指导。这些只是大体指导-最佳参数将随热循环数变化而变化，并依赖于特定的引物、模板和其他实验变量。

注意：

当配合使用其他PCR应用试剂盒时，使用其他试剂盒实验流程推荐的参数。

如果打算用T/A克隆收集PCR产物，建议增加一个额外的10min的70℃的延伸，然后立即进行克隆或者立即冻存PCR产物。不要把反应在4℃保存。这些步骤将确保3’A突出端的掺入和保存。

目标片段大小循环参数

<1kb 95℃ 1min

25-35个循环a:

95℃ 30sec b

68℃ 1min c

68℃ 1min d

1-5kb 95℃ 1min

25-35个循环a:

95℃ 30sec b

68℃ 3min c

68℃ 3min d

5-9kb 95℃ 1min

25-35个循环a:

95℃ 30sec b

68℃ 6min c

68℃ 6min d

10-20kb 95℃ 1min

25-35个循环a:

95℃ 30sec b

68℃ 12min c

68℃ 12min d

a:25个循环适用于多拷贝基因或者中到高分度的cDNA;30-35个循环适用于单链或者低拷贝数基因还有稀有cDNA。在多数情况下，我们使用两步循环（T1变性，T2退火延伸）代替三步循环（T1变性，T2退火，T3延伸）。当引物的T m 值低于60-65℃或者在特定的流程中三步循环是不可或缺的。

b:尽可能短的变性时间。在一些情况下，改良变性过程（95℃ 15sec）有利于获得更好的结果。将DNA暴露在高温环境中会引起单链DNA在变形过程中的脱嘌呤作用，最终会导致DNA链的断裂。高温也会使酶活性逐渐失活。缩减一些总循环时间达到12hr的大片段引物实验的变性时间特别重要。

c:尽可能高的退火延伸温度。见“Note a”。一些学者喜欢使用等于期待目标片段大小（每kb）再加2的退火延伸温度,我们建议使用1℃/(kb目标片段)。

d:选做：最终的延伸在某些情况下会降低北京的影响。

C:电泳的建议

将PCR反应的样品取5μL转入新的PCR管中并添加1μL 5×stop/loading缓冲液。将剩下的45μL反应混合物置于冰上；没有看到结果的话可以进一步循环。用适宜浓度琼脂糖凝胶（1μg/mL）电泳和DNA大小合适的Markers分析样品。琼脂糖的百分数和DNA Marker 的大小取决于插入大小的预期范围。在制作凝胶前可以参考下列一般大纲。

D:使用10×Advantage 2 SA PCR 缓冲液

在某些情况下非特异性背景扩增是一个问题，我们强烈推荐使用10×Advantage 2 SA PCR 缓冲液.

当扩增产物小于2kb时，无论使用10×Advantage 2 PCR 缓冲液还是使用10×Advantage 2 SA PCR 缓冲液都不会影响产量。刚开始时推荐使用10×Advantage 2 PCR 缓冲液；当背景

扩增增加，特别是扩增物长度短语2kb时。我们建议转换成10×Advantage 2 SA PCR 缓冲液.

RT-PCR的实验原理与操作步骤复习课程

R T-P C R的实验原理与 操作步骤

提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 (一) 反转录酶的选择 1. Moloney鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。 2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。 3. Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn2 存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV反转录酶的RNase H-突变体：商品名为SuperScript 和 SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的m模板合成较长cDNA。 (二) 合成cDNA引物的选择 1. 随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。 2. Oligo(dT)：是一种对mRNA特异的方法。因绝大多数真核细胞mRNA具有3’端Poly(A )尾，此引物与其配对，仅mRNA被转录。由于Poly(A )RNA仅占总RNA的1-4%，故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA 在数量和复杂性方面均要小。 3. 特异性引物：最特异的引发方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物，若PCR反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由与mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA，导致更为特异的PCR扩增。生物科研https://www.wendangku.net/doc/cb7863993.html, 二、实验耗材与试剂 1．RNA提取" target="_blank" >RNA取试剂 2．第一链cDNA合成试剂盒

RT-PCR实验方法总结大全.

RT-PCR实验方法总结大全 RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求: 1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng 或1ug。 2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA 存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列?必须 在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers;b:Oligo dT-Adaptor Primer;和c:特异的下游引物。如果用a和b方法,是扩增的所有的cDNA(理论上,还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法,那么要去那里查它的序列呢?https://www.wendangku.net/doc/cb7863993.html,问题: 在做RT-PCR遇到一怪现象,即对同一动物不同组织扩增同一段基因,结果从一种组织中可以扩出我的目的基因,条带非常的好,而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带,尝试其他条件同样无法得到满意的结果,百思不得其解!(注:已肯定该基因在两种组织中都表达,且内参照在两种组织都可扩增出来 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的,我测过吸光度,差异还很大,会不会和这有关呢?请高手指教! 解答: 1.RT-PCR有两种做法:

条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA(保留后可做5‘,3’RACE;引物的(最好产物短点;若涉及粗略定量的话还应考虑RNA的浓度或是cDNA的浓度(如果由内标分子更好,但我发现其实很不容易将RNA的浓度以及内标分子的表达量调整的完全一样;体系的均一性等。 3.RACE 我做过RACE(3’RACE是宝生物的Kit;5‘RACE是Gibico,但现在再进行另一个同源基因的3‘RACE时却怎么也P不出来,这两个基因是由同一对引物扩增出来的,其中一个已经获得了全序列(RACE的方法,而另一个基因的3’UTR 却增么也扩不出来,我推测是不是该基因的3‘UTR太长的缘故,我都快绿了,有无 RT-PCR的常用内标b-actin 和GAPDH的使用有选择性吗?比如不同的细胞,不同的刺激。 有关内参: RT-PCR内参照可以在一个管子里做(那样也是图好看一些,最好分开两管,把除了引物之外的mixture统一配,拍照后,算目的基因和内参的比值,这就是基因表达的相对浓度。 问:我曾经作过同一管的PCR,内有actin 和目的基因引物。虽然可见到两条均一条带但图片质量不理想(而且酶量、Mg2+加倍。请教mxbdna2003 ,你是如何处理同一管的PCR的各成分的浓度? 答: it should determined the amount of RNA. but it not for the quantitity of the PCR. it just was convienent to guess the amount ot the template<(for RT and PCR and bettrer for publication and editor if he don not know the preocedure much. but the amount just

高中化学定量实验的设计与评价练习题

定量实验的设计与评价训练题1．某助熔剂具有较好的热稳定性，是两种常见钠盐的混合物，其中一种组分是NaCl。为确定另一种组分X及其含量，甲、乙两个小组进行了以下实验。 (1)取适量样品，注入装置A中，测定组分X的化学式。 ①甲组用图Ⅰ的装置进行实验，观察到相应实验现象，则X的化学式是________。 ②乙组只用图Ⅰ中装置A和C进行实验，得到与甲组相同的实验结论，则分液漏斗中盛装的溶液应换为__________，原因是_______________________________________。 (2)甲、乙组分别用以下方法测定组分X的含量。 ①甲组用装置A和图Ⅱ中所示的部分装置(可重复选用)进行实验。请选择必要的装置，依次连接的合理顺序为装置A后接________(填仪器接口的字母)。完成一组实验，除样品的质量外，还需测定的实验数据有_________________________________________________。 ②乙组用酸碱滴定法测定X的含量。准确称取两份样品，滴入少量水润湿后，分别加入 0.200 0 mol·L－1的盐酸40.00 mL，加入2滴酚酞作为指示剂，用0.200 0 mol·L－1的NaOH 溶液滴定过量盐酸至终点，实验数据列于下表中。 Ⅰ.滴定过程中选用的滴定管是________________。 Ⅱ.滴定至终点时的现象为______________________________________________。 Ⅲ.样品中X的质量分数为__________________。 ③乙组测得的X含量比实际值偏高，可能的原因是_________(填字母)。 A．用NaOH溶液润洗滴定管 B．滴定终点读数时仰视液面刻度 C．滴定时少量溶液溅出锥形瓶 D．滴定终点时滴定管尖嘴部分出现气泡

PCR扩增实验操作步骤

PCR扩增反应 一、实验原理 PCR：是一种选择性扩增DNA或RNA的方法，其基本原理是依据体内细胞分裂中的DNA半保留复制机理，以及在体外dNTP分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链DNA；单链DNA与人工合成的引物退火，以及在dNTP存在下，耐高温的DNA聚合酶使引物沿单链模板延伸成为双链DNA。 PCR反应分3步：①变性：通过加热使DNA 双螺旋的氢键断裂，双链解离形成单链DNA；②退火：当温度突然降低时，由于模板分子结构较引物要复杂得多，而且反应体系中引物DNA量大大多于模板DNA，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA 双链之间互补的机会较少。③延伸：在DNA聚合酶和4 种dNTP底物及Mg2+存在的条件下，5'→3'的聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应，以上3步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，数小时之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达2×106~7拷贝。 变性 退火 延伸 图反应历程

二、实验材料 1·模板：细菌DNA 2·TsgDNA聚合酶3·dNTP混合液 4·10倍浓度PCR缓冲液5·2.5mmol/LMgCl2 6·RAPD引物：S14 S15 S18 S66 S74 S88 S97 S103 S110 S115 7·提取细菌DNA的相关试剂 三、操作步骤 1．细菌染色体DNA的提取（见上一组） 3·反应程序： 将RAPD反应试剂加入EP管中 轻混后用100ul石蜡油覆盖于反应混合液之上，防止样品在反复加热-冷却的过程中蒸发，盖好盖子 打开PCR反应仪输入以下反应数据 ●94 摄氏度预变性5min ●94摄氏度变性40s ●40摄氏度退火40s ●72摄氏度延伸1min 将EP管放入仪器开始扩增，循环35次；72摄氏度延伸10min 仪器为Model MyGene 25 Plus 三、注意事项 1、PCR反应体系中DNA样品及各种试剂的用量都极少，必须严格注意吸样量的准确性 及全部放入反应体系中。 2、为避免污染凡是用在PCR反应中的Tip尖、离心管、蒸馏水都要灭菌；吸每种试剂 时都要换新的灭菌Tip尖。 3、加试剂时先加消毒三蒸水，最后加DNA模板和Taq DNA聚合酶。 4、置PCR仪进行PCR反应前，PCR管要盖紧，否则使液体蒸发影响PCR反应。 5.引物条件首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定二聚 体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应（即错配）。

氢化铝锂操作步骤总结

1】氢化铝锂操作步骤总结氢化铝锂还原反应的操作和格氏反应相似，需要无水，干燥的条件。装置一般有磁力搅伴、滴液漏斗和回流冷凝器（用氯化钙干燥管或N2 隔绝潮湿空气）三口瓶，在冰浴冷却下，先加入氢化铝锂，由滴液漏生慢慢加入无水乙醚或THF ，搅拌几 分钟。再：将溶解在无水乙醚（或THF ）中的反应物滴加到氢化铝锂（过量）的乙醚＜或THF ）溶液中。滴加的速度以维持反应混合物平稳的沸腾迥流为限（据物质要求）（也可以 先加入底物的THF 液，在分次慢加氢化铝锂）。然后继续反应，反应温度据反应活性及物质的稳定性而定。反应结束后，在剧烈搅拌下（一般换成机械搅拌），小心地用含水的乙醚，或乙醚一酒精混合液，或滴加冰水，滴加浓碱溶液来分解过剩的还原试剂（最好不要过量）。最好是用已酸乙酯回流一段时间来分解，分解最终产物是酒精，通常不会影响产物的析离，也不产生氢气。 最后若用的为乙醚溶剂，将反应混合物倒入含有稀酸（一般HCI或H2SO4）的冰水中， 分解铝的复合物，溶解氢氧化铝的沉淀。产物或在水中，或在乙醚层中，分液并萃取几次，萃取前有可能要调节水液的pH 值，以使产品最大程度提取出。若是THF ，过滤沉淀，用干燥剂干燥，再分离就行了。 若涉及到三氯化铝的氢化铝锂复合物的反应，则一般是将回流30min 后的氢化铝锂醚 液在冰水冷却下用滴液漏斗滴加到三氯化铝的醚溶液中，室温下搅拌30min （形成复合氢化 物mixedhydrid ）再滴加要还原的物质。 若涉及到改性的氢化铝锂，如手性（BINAL-H ）试剂，也是将改性的辅助试剂用醚稀释之后滴加到氢化铝锂的醚液中，等生成手性试剂后在滴加要还原的物质。 2】纯化 乙醚（CH3CH2OCH2CH3） 普通乙醚中常含有一定量的水、乙醇及少量过氧化物等杂质。制备无水乙醚，首先要检验有无过氧化物。为此取少量乙醚与等体积的2%碘化钾溶液，加入几滴稀盐酸一起振摇，若能 使淀粉溶液呈紫色或蓝色，即证明有过氧化物存在。除去过氧化物可在分液漏斗中加入普通乙醚和相当于乙醚体积1/5 新配制的硫酸亚铁溶液，剧烈摇动后分去水溶液。再用浓硫酸及金属钠作干燥剂，所得无水乙醚可用于Grignard 反应。 在250mL 圆底烧瓶中，放置100mL 除去过氧化物的普通乙醚和几粒沸石，装上回流冷凝管。冷凝管上端通过一带有侧槽的软木塞，插入盛有10mL 浓硫酸的滴液漏斗。通入冷凝水，将浓硫酸慢慢滴入乙醚中。由于脱水发热，乙醚会自行沸腾。加完后摇动反应瓶。 待乙醚停止沸腾后，折下回流冷凝管，改成蒸馏装置回收乙醚。在收集乙醚的接引管支管上连一氯化钙干燥管，用与干燥管连接的橡皮管把乙醚蒸气导入水槽。在蒸馏瓶中补加沸石后，用事先准备好的热水浴加热蒸馏，蒸馏速度不宜太快，以免乙醚蒸气来不及冷凝而逸散室内。收集约70mL 乙醚，待蒸馏速度显着变慢时，可停止蒸馏。瓶内所剩残液，倒入指定的回收瓶中，切不可将水加入残液中（飞溅）。 将收集的乙醚倒入干燥的锥形瓶中，将钠块迅速切成极薄的钠片加入，然后用带有氯化钙干燥管的软木塞塞住，或在木塞中插入末端拉成毛细管的玻璃管，这样可防止潮气侵入，并可使产生的气体逸出，放置24 小时以上，使乙醚中残留的少量水和乙醇转化成氢氧化钠和乙醇钠。如不再有气泡逸出，同时钠的表面较好，则可储存备用。如放置后，金属钠表面已全部发生作用，则须重新加入少量钠片直至无气泡发生。这种无水乙醚可符合一般无水要求。另外也可用无水氯化钙浸泡几天后，用金属钠干燥以除去少量的水和乙醇。 纯乙醚 b.p. 34.51 C, nD20 1.3526, d420 0.71378。 . 四氢呋喃（C4H8O ） 四氢呋喃系具乙醚气味的无色透明液体, 市售的四氢呋喃常含有少量水分及过氧化物。 如要制得无水四氢呋喃可与氢化铝锂在隔绝潮气下和氮气气氛下回流(通常1000 mL 约需2~4g 氢化铝锂)

实时荧光定量PCR(Real-Time-PCR)实验流程

实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）实验流程 一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录) 不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。 在总RNA的提取过程中，注意避免mRNA的断裂；取2ug进行RNA的甲醛变性胶电泳检测，如果存在DNA污染时，要用DNase I进行消化（因为在处理过程中RNA极易降解，建议体系中加入适量RNA酶抑制剂）。 二、DNase I 消化样品RNA 中的DNA 用DNase I 消化DNA 组份加量 模板(RNA) 10ug RNase Inhibitor 4ul DNase I buffer 10ul DNase I 10ul DEPC处理H2O 至100ul 混匀，37℃ 90min 三、RNA琼脂糖凝胶电泳 1．1%的琼脂糖凝胶电泳凝胶的配制： 1）称取琼脂糖0.45g放入三角瓶中，向其中加入4.5ml的10×MOPS缓冲液和39.5ml 的DEPC水，放微波炉里溶化。 2）待冷却到60摄氏度左右时，加入1ml甲醛，摇匀（避免产生气泡）。倒入凝胶板上凝固30min。 2．取各个RNA样品4μl，加入6×RNA电泳上样缓冲液2μl混匀，加入变性胶加样孔中。3．120V电压下电泳25min。用凝胶紫外分析仪观察，照相保存。 4．RNA电泳结果如下图所示。可见28S和18S两条明亮条带，无DNA条带污染。 四．RNA反转录为cDNA 反转录程序(以MBI的M-MLV为例) 组份加量(20ul体系) 加量(40ul体系) 模板(RNA) 0.1~2.5ug(根据条带的亮度适当调整) 3ug(根据条带的亮度适当调整) 引物T18(50uM)(或其他引物) 2.0ul 4.0ul DEPC处理H2O 至12.5ul 至25ul

危险试剂的使用

危险试剂的使用 1.危险试剂的采购必须提前申请，经审核同意后提交 给采购部门。 2.采购：凡需要危险化学试剂的单位或部门均应持有 地方政府有关部门核发的危险品采购证明，向具有资格经营化学品的单位购买。 3.危险试剂：易燃易爆具有爆炸性的试剂的存放，应 遵循先进先出的原则，以免存储时间过长，导致试剂变质。 4.爆炸性试剂，剧毒化学试剂，应双人管理，双锁， 双人收发，双人使用，双账。 5.双人使用制度：领取，称量，使用，以及退还仓库 必须有使用人的签字以及部门主管的确认签字；同时管理人员填写好台账（电脑以及手工）管理记录表。 6.尤其像常用的无水三氯化铝，金属钠，三氯氧磷， 钯，正丁基锂，二异丙基氨基锂，氢化铝锂，氢化钠，氢化钙等危险品，要双人收发，双人使用。7.重氮化反应，格式反应等危险反应做好安全以及防 护工作。

常见的危险化学试剂以及处理流程 A）碱金属钠、钾、锂的处理标准操作流程(Na,K,Li) 金属钠的后处理:有两种方法，第一种为优先。 方法一： 1) 准备程序：钠的处理必须在整理好的通风橱内进行，由主管、组长或其指定的有经验的人来操作，并且第二人在场监察，保证该通风橱内无其他任何化学试剂。把灭火砂、消防棉准备好（不要用CO2 灭火器），在向处理瓶中滴加无水乙醇之前，必须保证所有残存的钠浸泡在THF 或甲苯中，若没有完全浸泡，需要将未浸泡部分用磁子吸出棒等将其小心导入，也可加入适量的KOH干燥过的THF 或甲苯浸泡（溶剂总体积不超过瓶子体积的1/3），加入适度大小的磁子让该体系快速搅拌。 2) 操作程序：系统内冲入惰性气体，乙二醇/干冰(-10.5oC)浴(冰水浴有潜在的危险性)冷却后，在三颈瓶上装上滴液漏斗，敞开另外两个或其中一个颈（最好一端装温度计插入剂中部，另一端安上较短的干燥的没有冷凝水冷凝管），开始向体系中缓慢滴加无水乙醇，观察气泡较慢的产生，保持体系冰冷的温度，约10 分钟后，可细心小量增加滴加速度（观察气泡较慢的产生，和控制温度）。滴加过量的无水乙醇，直至无氢气产生，无明显的块状固体残留，体系变清（溶剂总体积不超过瓶子体积的2/3）。 3）后处理程序：继续滴加少量的50%乙醇, 搅拌2 小时,该处理过程约需3 小时。之后稀盐酸水溶液中和，处理液倒入废液桶中。 4）注意事项：操作小心谨慎，不要让磁子等打破三颈瓶！ 方法二： 1）准备程序：钠的处理必须在整理好的通风橱内进行，由主管、组长或其指定的有经验的人来操作，并且第二人在场监察，保证该通风橱内无其他任何化学试剂，必须保证操作范围无水。把灭火砂、消防棉准备好（不要用CO2 灭火器）。 2）操作程序：用一个敞口的容器（塑料盆），里面倒入预冷的无水乙醇，用勺取少量的残余钠放入敞口的容器中，同时不停的搅拌，观察气泡缓慢产生，体系温度不超过45 度。残余的含钠粘状物，可分数次用勺挖出来。在蒸馏瓶里剩下少量残余的粘状物，加入适量的KOH 干燥过的THF 浸泡，再可以向蒸馏瓶里缓慢滴加无水乙醇搅拌，小量分批倒入上述敞口的容器。 3）后处理程序：处理后的溶液放置过夜，检查无固体残渣后，用稀盐酸中和，处理液倒入废液桶中。4）注意事项：切记该法不用冰水冷却。该法不适合在天气潮湿时操作。含钠残余物的转移必须小心谨慎。 金属钾的后处理: 搅拌下将待处理的金属钾一小粒一小粒地加到干燥的叔丁醇中(21ml 叔丁醇/g金属钾)，再小心加入无甲醇的乙醇，搅拌，促使其全溶，然后用稀酸中和。 金属锂的后处理: 搅拌下将待处理的金属锂一小粒一小粒小心地加到95% 乙醇中(30ml95% 乙醇/g 金属锂)，搅拌，促使其全溶，然后用稀酸中和。

RT-PCR实验步骤

RT-PCR实验步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。 2. 震荡30s。 3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。 4. 12000×g，4℃离心，15min。 5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。 6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。 7. 12000×g，4℃离心，10min。在管底部可见微量RNA沉淀 8. 弃上清，加75%乙醇1ml，振荡。 9. 7500×g，4℃离心，10min。 10. 弃上清，用滤纸小心吸取残留液体，室温干燥5-10min。 11. 沉淀溶于20μlDEPC水，取1μl加入79μlDEPC水测OD260/OD280 12. 计算浓度与纯度，-70℃保存。 二、逆转录合成cDNA第一链 反应体系如下

混匀快速离心一次反应条件如下 -20℃ 冰箱冻存三、PCR反应 混匀快速离心一次反应条件如下

PCR产物-20℃冰箱保存 取PCR产物8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%琼脂糖凝胶电泳120V。 100mA 30min 溴化乙锭染色，凝胶成象仪成象并保存结果。 RT-PCR实验方法总结1,2 RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须 在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDNA（理论上），还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？https://www.wendangku.net/doc/cb7863993.html, 问题： 在做RT-PCR遇到一怪现象，即对同一动物不同组织扩增同一段基因，结果从一种组织中可以扩出我的目的基因，条带非常的好，而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带，尝试其他条件同样无法得到满意的结果，百思不得其解！（注：已肯定该基因在两种组织中都表达，且内参照在两种组织都可扩增出来） 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的，我测过吸光度，差异还很大，会不会和这有关呢？请高手指教！ 解答： 1.RT-PCR有两种做法： 条件具备的话可用kit进行一步法进行；若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想，条带特异性强且无拖尾现象，我推测是体系更加单一比较利于PCR 的进行，当然也可能是我买的kit不太好。（promega）。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA（保留后可做5‘，3’RACE）；引物的（最好产物短点）；若涉及粗略定量的话还应

实验小专题(1)仪器的连接及操作的先后顺序

实验小专题（1）仪器的连接及操作的先后顺序 1．某化学小组拟采用如下装置（夹持和加热仪器已略去）来电解饱和食盐水，并用电解产生的H2还原CuO粉末来测定Cu的相对原子质量，同时检验氯气的氧化性。 为完成上述实验，正确的连接顺序为E→（填写连接的字母）。 2．亚硝酰氣(ClNO)常用作催化剂和合成洗涤剂,其沸点为-5.5℃,遇水反应生成一种氢化物和两种氧化物。某学习小组在实验室用Cl2和NO制备ClNO并测定其纯度,进行如下实验(夹持装置略去)。请回答: Ⅰ.Cl2的制备 欲收集一瓶千燥的氯气,选择上图中的装置,其连接顺序为:a （按气流方向,用小写字母表示)。 3．氢化铝锂(LiAlH4)是有机合成中的重要还原剂。某课题组设计实验制备氢化铝锂并测定其纯度。已知: 氢化铝锂、氢化锂遇水都剧烈反应井产生同一种气体。 I.制备氢化锂 选择图1中的装置制备氢化锂(有些装置可重复使用): 装置的连接顺序(从左至右)为A→________________。

4．POCl3是有机合成的催化剂，研究小组利用Cl2、PCl3和H2O在105~109℃下制备POCl3。 已知:①PCl3易被氧化易水解，沸点为76℃；②POCl3易水解，沸点为105.8℃。 装置连接顺序是 A—， C 中盛装的物质是_______ 。 5．某课外小组利用H2还原WO3（黄色）粉末测定W（银白色）的相对原子质量，下图是测定装置的示意图，A中的试剂是盐酸。 请回答下列问题： 实验过程中有下面几步：①加热反应管E，②从仪器A逐滴滴加液体，③由仪器G收集气体并检验纯度，④待E试管冷却后，停止从A中滴加液体。正确的实验操作顺序是； 6．水合草酸亚铁（FeC2O4·x H2O）是生产锂电池的原料，难溶于水，受热易分解。某化学兴趣小组对草酸亚铁的一些性质进行探究。回答下列问题： 为探究草酸亚铁的分解产物，将已恒重的装置A接入下图所示部分的装置（可重复选用）进行实验。打开K1和K2，缓缓通入N2，充分加热。实验后石英玻璃管中固体仅残留一种有磁性的黑色化合物。 实验装置中，依次连接的合理顺序。

RT-PCR的实验原理与操作步骤

提取组织或细胞中的总RNA以其中的mRN作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCF使测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量 RNA羊品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 （一）反转录酶的选择 1. Moloney 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活 性相对较弱。最适作用温度为37 C。 2. 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和 RNA 酶 H 活性。 最适作用温度为42 C。 3. Thermus thermophilus 、 Thermus flavus 等嗜热微生物的热稳定性反转录 酶：在Mn2存在下，允许高温反转录 RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV 反转录酶的 RNase H- 突变体：商品名为 SuperScript 和 SuperScript U。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一 特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的 m 模板合成较长 cDNA 。 （二）合成 cDNA 引物的选择 1. 随机六聚体引物：当特定 mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝 其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长 mRNA 。 用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了 cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的 cDNA 中 96%来源 于 rRNA。 2. Oligo(dT) ：是一种对 mRNA 特异的方法。因绝大多数真核细胞 mRNA 具有

易燃易爆化学试剂使用规程

易燃易爆化学试剂使用规 程 Prepared on 24 November 2020

易燃易爆化学试剂使用规程 一易燃易爆化学试剂储存注意事项： 储存于阴凉、干燥、通风良好的库房，远离火种、热源。库温不超过25℃，相对湿度不超过75％。包装必须密封，切勿受潮。钯碳、金属钠、氢化铝锂、氢化钠等应与氧化剂、酸类、醇类、卤素等分开存放，过氧化氢与还原剂分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。储区应备有合适的材料收容泄漏物并配有灭火器材。 二易燃易爆化学试剂的使用： 1、钯碳 危险性质： 钯碳活性高，遇空气自燃，主要是钯与氧反应大量放热并产生火花，点燃了干燥的活性炭等易燃物质。 使用注意事项： 1.2.1 操作人员应配戴好防护眼镜、防护面罩 1.2.2 称量时会接触空气，因此使用前必须冷冻24小时以上，以减缓称量时钯 碳与空气反应的速度。 1.2.3 双人称量完毕后，用于润湿钯碳的溶剂在使用前也必须冷冻24小时以 上，以降低溶剂被钯碳点燃的可能性。 1.2.4 润湿后的钯碳应马上投入反应釜中，特殊情况下不能立即使用应封口后贴 上标签冰冻保存。 后处理注意事项：

1.3.1 称量操作完毕，应及时清场用饮用水润湿的毛巾将称量工具、台面、操作 区域擦拭干净，地面用饮用水润湿的拖把擦拭干净。 1.3.2 对于盛装过钯碳的容器及原包装，应用饮用水冲洗。 1.3.3 反应完毕后过滤时，滤饼（及钯碳）不能抽干，并及时将钯碳转移至事先 准备好的空玻璃瓶中，用水封存贴上标签，交环境健康部统一处理。 2、金属钠 危险性质： 金属钠为极活泼的软质碱金属，暴露在空气中能自行燃烧并爆炸，使熔融物飞溅，遇水或潮气猛烈反应放出氢气，大量放热，引起燃烧或爆炸。 使用注意事项： 2.2.1 操作区域及周围不允许有水渍，也不得进行带水操作，确认干燥后方能进 行操作。 2.2.2 进行切割金属钠操作时，应在指定地点双人操作，非相关人员不得进入， 操作人员应配戴好防护眼镜、防护面罩及防切割手套，操作地点、操作台面、手套及工用具应保持干燥。操作过程中途操作人员离开操作地点应避免手套及脚下带出金属钠，返回操作地点时也应保持手及脚下干燥。 后处理注意事项： 2.3.1 切钠操作完毕，应及时清场，用镊子将台面、地面的金属钠碎屑收集，与 钠皮一起放入原包装瓶中待处理，用无水甲、乙醇润湿的无水干燥毛巾将切钠工具、台面、操作区域擦拭干净，地面用无水甲、乙醇润湿的无水干燥拖把擦拭干净。对盛装过金属钠的器具先用无水甲、乙醇浸泡清洗10 分钟以上，再用水清洁。

定量PCR的实验步骤。

定量PCR的实验步骤 一、标准曲线的标准DNA样品准备 1.将目的片段进行克隆，对克隆得到的阳性菌落进行质粒DNA的提取和纯化（试剂盒），纯化后的质粒DNA纯度用DO260/DO280的比值来鉴定，纯的DNA比值应该在1.8-1.9之间，如果比值大于1.9的时候表示有RNA污染，小于1.6的时候表示有蛋白质的污染（DO260的1OD值相当于50ng/ul的双链DNA 或33ng/ul的单链DNA或40ng/ul的RNA）； 2.采用紫外分光光度法（DO260 nm）测定质粒DNA的吸光度DO260值为A，（B=1DO260=50 ng/ul），由于载体质粒序列和插入的目标片段的序列都是已知的，这样通过核苷酸的相对分子量和标准品序列信息估算出单个质粒DNA （阳性质粒）的分子量C (ng/mol)，进而计算标准品的拷贝数D(copy/uL)： 拷贝数D=A×B C ×6.02×1023(copy/ul) 3.将2步骤中计算出来的已知拷贝数的质粒DNA以10倍为梯度进行稀释，稀释7个系列（各个梯度的浓度一般为101～107），作为标准曲线的DNA模板； 二、未知样品的定量标定 模板质粒DNA每个梯度设置3个平行样。未知样品设置2个平行样，同时设置一个没有质粒DNA的阴性对照。（定量实验，误差是不可避免的，设立平行样，对数据进行统计处理，可以将误差降低到最小，以满足小样本统计的要求；确保数据的有效性，排除假阳性的干扰，必须设置阴性对照，阳性对照有标准样品就做，没有标准样品就可以省略不做）； 2.按照下面的程序进行荧光定量PCR反应： 95℃ 3 min 95℃10 s 58℃20 s 40个循环 72℃20 s

RT-PCR实验步骤

RT-PCR实验步骤

RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须 在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDNA（理论上），还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？https://www.wendangku.net/doc/cb7863993.html, 问题： 在做RT-PCR遇到一怪现象，即对同一动物不同组织扩增同一段基因，结果从一种组织中可以扩出我的目的基因，条带非常的好，而另

一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带，尝试其他条件同样无法得到满意的结果，百思不得其解！（注：已肯定该基因在两种组织中都表达，且内参照在两种组织都可扩增出来） 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的，我测过吸光度，差异还很大，会不会和这有关呢？请高手指教！ 解答： 1.RT-PCR有两种做法： 条件具备的话可用kit进行一步法进行；若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想，条带特异性强且无拖尾现象，我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行，当然也可能是我买的kit不太好。（promega）。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA（保留后可做5‘，3’RACE）；引物的（最好产物短点）；若涉及粗略定量的话还应考虑RNA的浓度或是cDNA的浓度（如果由内标分子更好，但我发现其实很不容易将RNA的浓度以及内标分子的表达量调整的完全一样）；体系的均一性等。 3.RACE 我做过RACE（3’RACE是宝生物的Kit；5‘RACE是Gibico），但现在再进行另一个同源基因的3‘RACE时却怎么也P不出来，这两个基因是由同一对引物扩增出来的，其中一个已经获得了全序列（RACE的方法），而另一个基因的3’UTR却增么也扩不出来，我推测是不是该基因的3‘UTR太长的缘故，我都快绿了，有无

(待分)rtpcr原理和实验步骤

原理与实验步骤 一、知识背景： 、基因表达： 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因个丝心蛋白（每个存活，可以合成个丝心蛋白）共合成个丝心蛋白。因此单拷贝基因的表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 、技术( )：即聚合酶链式反应。 在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于聚合酶的酶促反应，其特异性由两我工合成的引物序列决定。反应分三步： .变性：通过加热使双螺旋的氢键断裂，形成单链。 .退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。 .延伸：在聚合酶和及＋存在下，退火引物沿’’方向延伸。 以上三步为一个循环，如此反复。 、逆转录酶和 逆转录酶（）是存在于病毒体内的依赖的聚合酶，至少具有以下三种活性： 、依赖的聚合酶活性：以为模板合成第一条链。 、水解活性：水解杂合体中的。 、依赖的聚合酶活性：以第一条链为模板合成互补的双链. 二、的准备： .引物的设计及其原则： ) 引物的特异性决定反应特异性。因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列，同种蛋白的不同亚型，不同的剪切方式以及可能存在的对引物的特异性的影响。尽量选择覆盖相连两个内含子的引物，或者在目的蛋白表达过程中特异存在而在其他亚型中不存在的内含子。 ) 引物设计原则的把握 引物设计原则包括 : 、引物长度:一般为～，引物太短会影响的特异性，引物太长的最适延伸温度会超过酶的最适温度，也影响反应的特异性。 、碱基分布：四种碱基最好应随机分布，避免嘌呤或嘧啶的聚集存在，特别是连续出现个以上的单一碱基。含量（值）：％～％，扩增的复性温度一般是较低值减去～度。 、’端要求：’端必须与模板严格互补，不能进行任何修饰，也不能有形成任何二级结构的可能。末位碱基是时错配的引发效率最低，、居中间，因此引物的’端最好选用、、而尽可能避免连续出现两个以上的。 、引物自身二级结构：引物自身不应存在互补序列，否则会自身折叠成发夹状结构或引物自身复性。 、引物之间的二级结构：两引物之间不应有多于个连续碱基互补，’端不应超过个。、同源序列：引物与非特异扩增序列的同源性应小于连续个的互补碱基存在。 、’端无严格限制：’末端碱基可以游离，但最好是或，使产物的末端结合稳定。还可以进行特异修饰（标记、酶切位点等）等等。 根据实验目的选择适当的引物。常用引物设计软件如，等对于这些条件都可以自行设置。 、耗材：

成都市高考化学一诊试卷(I)卷

成都市高考化学一诊试卷（I）卷 姓名:________ 班级:________ 成绩:________ 一、选择题 (共7题；共31分) 1. （2分） (2017高一上·沈阳期中) 某研究小组对离子方程式xR2++yH++O2=mR3++nH2O的分析研究，下列说法中错误的是（） A . 根据电荷守恒，得出x与y的和一定等于m B . 根据原子守恒，得出x和m的数值一定相等 C . 根据电子得失守恒，得出x=4的结论 D . 根据氧化还原反应关系得出：R2+是还原剂，O2是氧化剂，R3+是氧化产物，H2O是还原产物 2. （2分）用NA表示阿伏加德罗常数，下列说法中正确的是（） ①18g D2O含有的电子数为10NA ②同温、同压下，相同体积的氟气和氩气所含的原子数相等③标准状况下， 11.2L以任意比例混合的氮气和氧气所含的原子数为NA ④在标准状况下，22.4LSO3的物质的量为1mol ⑤4℃时5.4mL的水所含的原子总数为0.9NA ⑥0.1molOH－含0.1NA个电子⑦1mol Na2O2与水完全反应时转移电子数为2NA A . ③⑤⑥⑦ B . ③⑤ C . ①②④⑦ D . ③④⑤⑥ 3. （3分） (2015高二下·枣阳期中) 短周期元素X、Y、Z在周期表中的位置如图所示，则下列说法正确的是（）

A . X是活泼的非金属 B . 三种元素中Y的非金属性最强 C . Z的最高价氧化物的水化物是强酸 D . Y的最高价氧化物的水化物是一种强酸 4. （2分） (2016高二上·宝应期中) 某化合物由碳、氢、氧三种元素组成，红外光谱图显示有四种共价键的振动吸收，核磁共振氢谱图显示有三个峰，峰面积比为6：1：1，则该有机物的结构简式是（） A . C2H5OCH3 B . CH3CH（OH）CH3 C . CH3CH2CH2OH D . CH3CH2CHO 5. （2分）(2016·广东模拟) 下列实验操作、现象及由此得出的结论均正确的是（） A . A B . B C . C D . D

PCR实验步骤

qRT-PCR实验步骤 应用LightCycler?/LightCycler?480 System Real Time PCR扩增仪的操作方法 一、按下列组分配制PCR反应液（反应液配制请在冰上进行） 注意： 1、通常引物终浓度为0.4μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1～1.0 μM 范围内调整引物浓度。 2、在20 μl的反应体系中，DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同种类的DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定最佳的DNA模板添加量。另外，2 Step RT-PCR反应的cDNA（RT反应液）作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10%。 二、进行Real Time PCR反应 LightCycler? 480 System： Stage 1：预变性 95℃30s（升温速率4.4℃/s） 1 Cycle Stage 2：PCR反应 分析模式：定量分析 95℃5s（升温速率4.4℃/s） 60℃30s (升温速率2.2℃/秒，Acquisition Mode : Single) 40 Cycles Stage 3：溶解 分析模式：溶解曲线 95℃5 秒钟(升温速率4.4℃/秒) 60℃1 分钟(升温速率2.2℃/秒) 95℃(升温速率0.11℃/秒, Acquisition Mode : Continuous, Acquisitions : 5 per℃) 1 cycle Stage 4：降温

40℃30 秒钟(升温速率2.2℃/秒) 1 cycle 三、实验结果分析 反应结束后确认Real Time PCR的扩增曲线和融解曲线，进行PCR定量时制作标准曲线等。分析方法参见仪器操作手册。

2019年高考理综专题——名校12月份联考化学试题与答案

2019年高考理综专题——名校12月份联考化学试题与答案 1. 中国古代科学著作《天工开物》中有言:“世间丝、麻、裘、褐皆具素质”，“裘”的主要成分是 A. 维生素 B. 油脂 C. 蛋白质 D. 纤维素 【答案】C 【解析】“世间丝、麻、裘、褐皆具素质”，“裘”的主要成分是蛋白质，答案选C。 2. 李时珍在《本草纲目》中写到:“烧酒非古法也，自元时始创其法。用浓酒和糟入甑。蒸令气上，用器承取滴露。”文中涉及的操作方法是 A. 萃取 B. 干馏 C. 升华 D. 蒸馏 【答案】D 【解析】“用浓酒和糟入甑。蒸令气上，用器承取滴露”可见，烧酒的酿造方法为：加热浓酒和糟，利用沸点的不同，将酒蒸出，然后用器皿盛装冷凝后的馏分，即为蒸馏。答案选D。 3. 四元轴烯(a)、苯乙烯(b)、立方烷(c)的分子式均为C 8H 8 ，下列说法正确 的是 A. a 的同分异构体只有b 利c 两种 B. a、b、c 均能使溴的四氯化碳溶液褪色 C. a、b分子中的所有原子一定处于同一平面 D. a、c 的二氯代物有 3 种，b的一氯代物有5种(不考虑立体异构) 【答案】D

【解析】A 、通过多个碳碳双键和叁键或环状满足分子C 8H 8的化合物很多，如：CH 2=CHCH=CHCH=CHC CH 等，选项A 错误；B 、三种分子中只有a 和b 中含碳碳双键，而立方烷不含碳碳双键，只有a 和b 能与溴发生加成反应而使溴的四氯化碳溶液褪色，选项B 错误；C 、乙烯分子是平面结构，四元轴烯分子中的所有原子一定处于同一平面；苯乙烯中由于乙烯基与苯环是单键相连可以转动，苯乙烯分子中所有原子不一定在同一平面，选项C 错误；D 、不考虑立体结构，a 的二氯代物一种两个氯在碳碳双键末端、一种是同一边的末端两个碳上和一种是对角末端两个碳上的取代共3种；c 的二氯代物一种分别是在立方体的同一边两个碳上取代，或在同一面的对角的碳上取代，或是在立体对角上两个碳上的取代，也有3种，b 有五种化学环境下的氢，其一氯代物有5种，选项D 正确。答案选D 。 4. 某同学查阅教材得知，普通锌锰电池筒内无机物的主要成分为MnO 2、NH 4C1、ZnCl 2等。他在探究废干电池内的黑色固体回收利用时，进行如图所示实验。下列有关实验的叙述不正确的是 A. 操作①中玻璃棒能加快固体溶解 B. 操作②为过滤，得到的滤液显酸性 C. 操作③盛放药品的仪器是坩埚 D. 操作④的目的是除去滤渣中的杂质 【答案】D 【解析】A ．操作①中玻璃棒起到搅拌加速溶解的作用，选项A 正确；B ．普通锌锰电池筒内无机物质主要成分为MnO 2、NH 4Cl 、ZnCl 2等物质，NH 4Cl 、ZnCl 2易溶于水，MnO 2难溶于水，操作②是把固体与溶液分离，应是过滤，得到的滤液NH 4Cl 、ZnCl 2水解显酸性，选项B 正确；C ．由图可知操作③是在坩埚