常用培养基的配制
附录三常用培养基的制备
目录
一、肉浸液肉汤
二、营养琼脂
三、鲜血琼脂
四、半固体培养基
五、明胶培养基
六、乳糖胆盐发酵培养基
七、乳糖发酵培养基
八、缓冲蛋白胨水（BP）
九、氯化镁孔雀绿增菌液（MM）
十、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
十一、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
十二、GN增菌液
十三、肠道菌增菌肉汤
十四、HE琼脂
十五、SS琼脂
十六、麦康凯琼脂
十七、伊红美蓝琼脂（EMB）
十八、三糖铁琼脂（TSI）
一、肉浸液肉汤
（一）成份
十九、三糖铁琼脂（换用方法）
二十、血消化汤
二十一、克氏双糖铁琼脂（KI）
二十二、克氏双糖铁琼脂（换用方法）
二十三、动力硝酸盐增养基（A法）（SPS）
二十四、动力硝酸盐培养基（B法）
二十五、马丁氏肉汤
二十六、察氏培养基
二十七、马铃薯萄萄糖琼脂（PDA）
二十八、马铃薯琼脂
二十九、Elek氏培养基（毒索测定用）
三十、胰蛋白胨水
三十一、3.5％氯化钠三糖铁琼脂
三十二、牛肉（或中心）消化汤
三十三、0.1％蛋白胨水稀释剂
一、肉浸液肉汤
（一）成份
绞碎牛肉 500g
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 2g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000 ml
（二）制法将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000ml，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7．4～7．6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30分。
（三）用途一般细菌培养用。
二、营养琼脂
（一）成份
肉水 1000ml
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 1g
氯化钠 5g
琼脂 20～30g
（二）制法先将琼脂剪碎，用冷水洗净后加入肉汤中，划线补充水分，加热溶化。校正pH7.4～7.6，用纱布夹棉花过滤至透明。分装中试管或三角瓶。高压灭菌121℃20分，灭菌后中试管摆成斜面。
（三）用途一般细菌的分离培养，纯培养，观察菌落性状及保存菌种用。为特殊培养基的基础。
三、鲜血琼脂
（一）成份
营养琼脂
脱纤维鲜血（马、绵羊、牛、家兔）5～8％。
（二）制法将灭菌的营养琼脂加热溶化，冷至45～50℃时，加入无菌脱纤维鲜血5～8％，分装试管，即摆成斜面或倾注平皿，待凝固后，置37℃培养1日，有污染者废弃，无菌者保存于冰箱备用。
无菌脱纤维鲜血：以无菌手术采取健康动物（马、绵羊、牛用颈静脉采血、家兔用心脏采血）血液，加到盛有玻璃殊的三角瓶内，摇匀5～10分钟，置冰箱中备用。
（三）用途用于分离培养和保存菌种。
四、半固体培养基
（一）成份
肉汤培养基（pH7.4～pH7．6） 100 ml
琼脂 0.3g
（二）制法将琼脂加入肉汤培养基中加热溶化，校正pH至7．6，滤过后分接于试管内，以15磅高压灭菌20～30分钟，作成高层，经无菌检查合格后，置冰箱中保存备用。
（三）用途菌种保存，观察细菌的运动性。
五、明胶培养基
（一）成分
普通肉汤100 ml 明胶 12～15g（冬天少用，夏天多用）
（二）制法将上述成分加热溶化，校正pH至7．6，趁热过滤，分装试管，用8磅15
分钟灭菌或流通蒸气100℃，30分钟间歇，灭菌，经无菌检验合格的保存于冰箱内备用。
六、乳糖胆盐发酵培养基
（一）成份
蛋白胨 20g
猪胆盐（或牛、羊肠盐） 5g
乳糖 10g
0.04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH7．4，加入指示剂，分装每管10ml，并先放入一个小例立的管，115℃高压灭菌15分钟。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
七、乳糖发酵培养基
（一）成份
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH7．4，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个倒立的小管，115℃高压灭菌15分钟。
注：1、双料乳糖发酵除蒸馏水外，其他成分加倍。
2、30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
八、缓冲蛋白胨水（BP）
（一）成份
蛋白胨 10g
磷酸二氢钾 1．5g
磷酸氢二钠（Na2HPO4〃12H2O） 9g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
（二）制法按上述成分称好后，装入大烧瓶，121℃高压灭菌15分钟。用时无菌分装，每瓶225ml。
注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
九、氯化镁孔雀绿增菌液（MM）
（一）成份
1．甲液：
胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾 1.6g
蒸馏水 1000ml
2．乙液：
氯化镁（化学纯） 40g
蒸馏水 100ml
3．丙液: 0.4％孔雀绿水溶液
（二）制法分别按上述成分配好后，121℃高压，灭菌15分钟备用。临用时取甲液90ml、
乙液9ml、丙液0.9ml，以灭菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaprt10（R10）增菌液。
十、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
（一）成份
1．基础培养基
肠胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1000 ml
2．碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
蒸馏水 20ml
（二）制法将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100ml。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15分钟临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml、0．1％煌绿溶液1ml。
十一、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
（一）成份
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸二氢钾 5.5 g
磷酸二氢钾 4.5g
L—胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1000ml
1％L—胱氨酸—氢氨化钠溶液的配法：称取L—胱氨酸0．1g（或DL—胱氨酸0．2g），加1N氢氧化钠1．5ml，使溶解，再加入蒸馏水8．5ml即成。
（二）制法将除亚硒酸氢钠和L—胱氨酸以外的各成份溶解于900ml蒸馏水中，加热煮沸，冷却后备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100ml蒸馏水中，加热煮沸，冷却后以无菌操作与上液混合。再加入1％L—胱氨酸—氢氧化钠溶液1ml。分装于灭菌瓶中，每瓶100ml，pH应为7．0±0．1。
十二、GN增菌液
（一）成份
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
柠檬酸钠 5g
去氧胆酸钠 0.5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
（二）制法按上述成分配好，加热使溶解，校正pH7.0。分装每瓶225ml，115℃高压灭
菌15分钟。
十三、肠道菌增菌肉汤
（一）成份
蛋白胨 10g
葡萄糖 5g
牛胆盐 20g
磷酸氢二钠 8g
磷酸二氢钾 2g
煌绿 0.015g
蒸馏水 1000ml
（二）制法按上述成分配好，加热使溶解，校正pH7．2。分装每瓶30ml，115℃高压灭菌15分钟。
十四、HE琼脂
（一）成份
1. 基础液:
肘胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨苷 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 10g～20g
0.4％溴香酚蓝溶液 16ml
蒸馏水 1000ml
2.Andrade指示剂:
酸性复红 0.5g
1N氢氧化钢溶液 16ml
蒸馏水 100ml
将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2ml。
3. 甲液:
硫代硫酸钠 34g
柠檬酸铁铵 4g
蒸馏水 100ml
4. 乙液:
去氧胆酸钠 10g
蒸馏水 100ml
（二）制法将前面八种成分溶解于400ml蒸馏水内作为基础液，将琼脂加入于600ml 蒸馏水内，加热溶解。加入甲液20ml和乙液20ml于基础液内，校正pH7.5。再加入Andrade 指示剂20ml，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：此培养基不可高压灭菌
十五、SS琼脂
（一）成份
1．基础培养基
牛肉膏 5g
肘胨 5g
三号胆盐 3.5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000ml
制法：将牛肉膏、肘胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中，将琼脂加入于600ml蒸馏水中，煮沸使其溶解，再将二液混合，121℃高压灭菌15分钟，保存备用。
2．完全培养基
基础培养基 1000ml
乳糖 10g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 8.5g
10％柠檬酸铁溶液 10ml
1％中性红溶液 2.5ml
0．1％煌绿溶液 0.22ml
制法：加热溶化培养基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正pH7．0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48小时内使用。
②煌绿溶液配好后应在10天以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
十六、麦康凯琼脂
（一）成份
蛋白胨 17g
肘胨 3g
猪胆盐（或牛、羊胆盐） 5g
氯化钠 5g
琼脂 17g
乳糖 10g
0．01％结晶紫水溶液 10ml
0．5％中性红水溶液 5ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法
1．将蛋白胨、肘胨、胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，校正至pH7.2。将琼脂加入于600ml蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高灭菌15分钟备用。
2．临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖。冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
十七、伊红美蓝琼脂（EMB）
（一）成份
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2％伊红y溶液 20ml
0．65％美蓝溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH7．1，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15分钟备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷却至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
十八、三糖铁琼脂
（一）成份
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵[Fe（NH
4）2（SO
4
）2〃6H
2
O] 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
酚红 0.025g
琼脂 12g
蒸馏水 1000ml
（二）制法将除琼脂和酚红以外的各成份溶解于蒸馏水中，pH7．4。加入琼脂，加热煮沸，以融化琼脂。加入0．2％酚红水溶液12．5ml，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15分钟。放置高层斜面备用。
十九、三糖铁琼脂（换用方法）
（一）成份
蛋白胨 15g
肘胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁 0.2g
疏代硫酸钠 0.3g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000ml
（二）制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中校正pH7．4。加入琼脂，加热煮沸，以融化琼脂。加入0．2％酚红水溶液12．5ml，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15分钟，放置高层斜面备用。
二十、血消化汤
（一）成份
绞碎猪胃 100g
绞碎猪血块 100g
磷酸二氢钾 1g
2N碳酸钠溶液 50ml
浓盐酸 10ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法
1．洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机续碎。
2．用绞肉机将猪血块绞碎。
3．将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24小时，常加以摇动。
4．从水浴锅内取出，加入2N碳酸钠液5ml，煮沸10分钟，置于冰箱内一夜。
5．吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入2N碳酸钠溶液45ml，煮沸，校正pH7．2～7．4。
6．用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20分钟。
注：①本培养基不含糖可供作鉴别培养基的基础，不需加蛋白胨和氯化钠。
②2N碳酸钠溶液的配法：无水碳酸钠10．6g，溶于1000ml蒸馏水中。
二十一、克氏双糖铁琼脂（KI）
（一）成份
下层：
血消化汤（pH7．6） 500ml
琼脂 2g
葡萄糖 1g
0．2％酚红溶液 5ml
上层：
血消化汤（pH7．6） 500ml
琼脂 6.5g
硫代硫酸钠 0.1g
硫酸亚铁按 0.1g
乳糖 5g
0．2％酚红溶液 5ml
（二）制法
1．取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别装入琼脂，加热溶解。
2．分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养基分装于灭菌试管内，（12×100mm），每管约2ml。10磅高压灭菌15分钟。
3．将上层培养基放在56℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内，使其凝固。
4．俟下层培养基凝固后，以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5ml，放成斜面。
二十二、克氏双糖铁琼脂（换用方法）
（一）成份
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
疏代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000ml
（二）制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH7．4。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0．2％酚红水溶液12．5ml，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15分钟。放置高层斜面备用。
二十三、动力—硝酸盐培养基（A法）
（一）成份
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸钾 1g
琼脂 3g
蒸馏水 1000ml
（二）制法加热溶解，校正pH7．0。分装试管，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟。
二十四、动力—硝酸盐培养基（B法）
（一）成份
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸钾 5g
磷酸氢二钠 2.5g
半乳糖 5g
甘油 5g
琼脂 3g
蒸馏水 1000ml
（二）制法将上各成份混合，加热溶解，校正pH7．4。分别装试管，121℃高压灭菌15分钟。
二十五、马丁氏肉汤
（一）成份
猪胃数个过滤清水（普通水） 150ml
纯盐酸 15ml
（二）制法
取猪胃去掉筋膜及脂肪，以绞肉机绞碎，每300g猪胃加盐酸15ml，过滤水150ml，于50℃消化24小时（每小时搅拌1～2次），取出后加热至80℃，使消化作用停止，并用NaOH中和，调PH至7．2，用滤纸过滤，分装试管或小三角烧瓶，15磅高压15分钟灭菌。
二十六、察氏培养基
（一）成份
硝酸钠 3g
磷酸氢二押 1g
梳酸镁（MgSO
4〃7H
2
O） 0.5g
氯化钾 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
蔗糖 30g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
（二）制法加热溶解，分装后121℃灭菌20分钟。
（三）用途青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
二十七、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）
（一）成份
马铃薯（去皮切块） 300g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
（二）制法将马铃薯去皮切块，加1000ml蒸馏水，煮沸10～20分钟。用纱布过滤加蒸馏水至1000ml。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20分钟。
（三）用途：分离培养霉菌。
二十八、马铃薯琼脂
（一）成份
马铃薯（去皮切块） 200g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
（二）制法同马铃薯葡萄糖琼脂。
（三）用途鉴定霉菌用。
二十九、Elek氏培养基（毒素测定用）
（一）成份
肘胨 20g
麦芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化钠 5g
琼脂 15g
40％氢氧化钠溶液 1.5ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法用500ml蒸馏水溶解除琼脂外的成份，煮沸，并用滤纸过滤。用1N氢氧化钠校正pH7．8。用另外500ml蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合，分装试管10ml或20ml。121℃高压灭菌15分钟。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
三十、胰蛋白胨水
（一）成份
胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000ml
（二）制法将上述成份溶解，校正pH7．0。分装试管，121℃高压灭菌15分钟。
三十一、3．5％氯化钠三糖铁琼脂
（一）成份
三糖铁琼脂 1000ml
氯化钠 30g
（二）制法按本附录十八或十九配制三糖铁琼脂，再加入氯化钠30g，分装试管，121℃高压灭菌15分钟。放置高层斜面备用。
三十二、牛肉（或牛心）消化汤
（一）成份
绞碎牛肉（或牛心） 1000g
15％氢氧化钠溶液 27ml
胰蛋白酶 40ml
氯仿 1ml
氯化钠 10g
蒸馏水 200ml
（二）制法
1．称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15分钟；
2．加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷却至40℃；
3．加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5小时，每小时摇动一、二次；
4．4小时后，吸取上层液5ml于试管中，加1％硫酸铜溶液0.1ml、4％氢氧化钠溶液5ml，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出；
5．加入15％乙酸溶液45ml，对pH试纸呈酸性；
6．煮沸15分钟，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜；
7．次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸；
8．校正pH7.0～7.6（加15％氢氧化钠液约10ml）加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20分钟。
注：①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需要加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500ml，蒸馏水1500ml，混
合之，装入玻塞瓶内。
每日摇匀三次，三天后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0．05％，放冰箱内保存备用。
三十三、0.1％蛋白胨水稀释剂
（一）成份
蛋白胨 1g
蒸馏水 1000ml
（二）制法溶解蛋白胨于蒸馏水中，校正pH至7.0，121℃灭菌15分钟。
Yeast extract 3 酵母膏
Malt extract 3
Peptone from soybeans 5
Glucose 10
Agar 15
Distilled water 1000
MA medium (Ichimura,1979)
Working solution
[g/l] NaNO 3 0.05 KNO 3
0.1 Ca(NO 3)2〃4H 2O 0.05 Na 2SO 4 0.04 MgCl 2.6H 2O 0.05 Β
-Sodiumglycer ophosphate 0.1 Na 2EDTA 0.005 FeCl 3.6H 2O 0.0005 MnCl 2.4H 2O 0.005 ZnCl 2 0.0005 CoCl 2 .6H 2O 0.005 Na 2MoO 4.2H 2O 0.0008 H 3BO 3 0.02 Bicine 0.5 Distilled water 1000ml pH
8.6
F/2培养基
WORK(mg/L)
Mother(g/L)
A:NaNO 3
75 75 B:NaH 2PO 4〃H 2O 5 5 C:Na 2SiO 3 〃9H 2O 20 20 D:Na 2EDTA
4.36 4.36 E:FeCl 3 〃6H 2O 3.16 3.16 F:CuSO 4 〃5H 2O ZnSO 4 〃7H 2O CoCl 2〃6H 2O MnCl 〃4H 2O Na 2MO 4〃 2H 2O
0.01 0.01 0.023 0.023 0.012 0.012 0.18 0.18 0.07 0.07 G:B 1 0.1ug/L 0.1mg/L B 12 0.5ug/L 0.5mg/L 生物素 0.5ug/L
0.5mg/L
H:海盐
24g/L
对于藻体的高密度培养，将F/2培养基的A 改为乙酸铵：0.5g/L,B 改为NaH 2PO 4:0.2g/L
SE Medium
Working solution (g/l)
NaNO 3 0.25g K 2HPO 4 . 3H 2O 0.075g MgSO 4 . 7H 2O 0.075g CaCl 2 . 2H 2O 0.025g KH 2PO 4 0.175g NaCl 0.025 Soil extract * 40ml FeCl 3〃6H 2O 0.005 Fe —EDTA 1ml A 5 solution *
1
distilled water 958
Soil Extract(土壤提取液)配置方法
取花园土未施过肥0。5kg 置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热2小时，冷却数小时，在无菌条件下过滤，取上清液，将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积1000毫升。土壤提取液保存在4oC 备用。 * Composition of the A 5 solution Add to 100 ml of distilled water:
H 3BO 3 286 mg MnCl 2 . 4H 2O 181 mg ZnSO 4 . 7H 2O 22 mg CuSO 4 . 5 H 2O Na 2MoO 4〃2H 2O 7.9 mg 39mg (NH 4)6Mo 7O 24 . 4H 2O
3.9 mg
EDTA-Fe 的配置方法：
将EDTA 和FeCl 3〃6H 2O 分别溶于水和HCl(0.1N),混匀即可。
Na 2EDTA 1g distilled water 50ml FeCl 3〃6H 2O 81 mg HCl （0.1N ）
50ml
微量元素溶液 A5 是BG-11培养基微量元素的重要组成部分。
BG-11是培养蓝藻使用最广泛的培养基，除了极少数蓝藻，大部分都可以用BG-11培养基。
A5微量溶液组成成分
Add to 1000 ml of distilled water:
将以下物质称量并定容至1000ml
H3BO3 …………………………………………2.86g
MnCl2 ·H2O …………………………………1.81g
ZnSO4 ·7H2O ………………………………0.222g
CuSO4 ·5 H2O ………………………………0.079g
Na2MoO4 ·2H2O……………………………0.390g
Co(NO3)2 ·6H2O ………………………… 0.049g
BBM培养基
BBM Medium（雨生红球藻生长最好的培养基（若要用于虾青素积累要加0.25g/L的乙酸钠））
Component Amount Stock Solution
(1) NaNO3 1 mL/L 25 g/100mldH2O
(2) K2HPO4 1 mL/L 7.5 g/100 mL dH2O
(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7.5 g/100 mL dH2O
(4 )CaCl2·2H2O 1 mL/L 2.5 g/100 mL dH2O
(5 ) KH2PO4 1 mL/L 17.5 g/100 mL dH2O
(6 ) NaCl 1mL/L 2.5g/100ml dH2O
(7 ) B1 1mg/L
(8) biotin 0.25ug/L
(9) B12 0.15ug/L
(10) PIV ( Trace mental solution ) 1ml/L
Na2EDTA 0.75g/L dH2O
MnCl2·4H2O 0.041g/L dH2O
ZnCl2·7H2O 0.005g/L dH2O
Na2MoO4·2H2O 0.004g/L dH2O
FeCl3·6 H2O 0.097g/L dH2O
CoCl2.6 H2O 0.002g/L dH2O
BG11 ( Blue-Green Medium)
Component Amount Stock Solution
(1) NaNO3 100 mL/L 15.0 g/L dH2O
(2) K2HPO4 10 mL/L 2 g/500 mL dH2O
(3) MgSO4·7H2O 10 mL/L 3.75 g/500 mLdH2O
(4 ) CaCl2·2H2O 10 mL/L 1.8 g/500 mL dH2O
(5 ) Citric acid 10 mL/L 0.3 g/500 mL dH2O
(6 )Ferric ammonium citrate 10 mL/L 0.3g/500ml dH2O
(7 ) EDTANa2 10 mL/L 0.05g/500ml dH2O
(8) Na2CO3 10 mL/L 1.0g/500ml dH2O
(9) A5 （Trace mental solution ）1ml/L
H3BO3 2.86g/L dH2O
MnCl2·4H2O 1.86g/L dH2O
ZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O
Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O
CuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2O
Co(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O Adjust PH to 7.1 with 1M NaOH or HCl
JM培养基
Component Amount（mg/L）
(1) NaNO3 1500
(2)Ca(NO3)2·4H2O 20
(3) KH2PO4 12.4
(4 ) Na2HPO4 ·12 H2O 36
(5 ) Na2HCO3 15.9
(6 ) MgSO4·7H2O 50
(7 ) H3B03 2.48
(8)Na2一EDTA 2.25
(9) NaFeEDTA 2.25
(10) (NH4)6MoO24·4H2O 1.0
(11)Cyanocobalami 0.04
(12)ThiamineHCI 0.04
(13)Biotin 0.04
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml
植物常用培养基附加配制说明
备注：培养基和激素母液配制方法 （1）母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水，再一一称取各种盐放入烧杯中溶解，装入容量瓶， 不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。 （2）200×Fe盐溶液 称取1.39g FeSO4?7H2O溶于水（A液）；称取1.865 g Na2?EDTA溶于热水（B液）； 将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml，煮沸，混合液颜色变深，冷却到室温，定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。 （3）0.5mg/ml 2,4-D母液的配法 称取50mg 2,4-D，置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解； 加水定容至100ml，4℃保存。如果出现沉淀，需要重新配置。 （4）0.5mg/ml α-NAA母液的配法 称取100mgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA；用水定容至200m l，4℃保存。 （5）0.5mg/ml 6-BA母液的配法 称取100mg 6-BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml，4℃保存。 （6）100mM乙酰丁香酮（As）的配制 称取196.2mg As，用5ml DMSO直接溶解，再加水定容至10ml，过滤灭菌后，分装入无菌小管，-20℃冰冻保存。使用前加入灭菌培养基。 （7） 0.5mg/ml KT和ABT的配法 称取50mg kenetin或ABT生根粉，先用少量1N KOH溶解，再用水稀释定容至100ml，4℃保存。 （8）其他附加物的溶解及配制 A、称取吗啉乙磺酸（MES）5g溶于水中，定容至10mL。4℃保存。 B、称取1g L-半胱氨酸(Cys) 溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液, 用蒸馏 水稀释定容至10mL，现用配制。4℃保存。 C、称取850mg硝酸银，用蒸馏水溶解后定容至100mL。4℃保存。 D、头孢霉素（cefotaxime）2500mg，用蒸馏水溶解后定容至10mL。4℃保存。 E、潮霉素（Hyg B），商品已溶解，筛选时一般加5、8、12mg/L梯度浓度。
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
芽孢杆菌常用培养基配方
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
培养基配方及配制方法
培养基配方 1 斜面菌种保存培养基 1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 1.2麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 2.1平板计数琼脂培养基 将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。 3志贺氏菌检测
3.1 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。pH7.0 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。 3.2 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。
36种常用微生物培养基配制汇总
36 种微生物常用培养基配制 1. 牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g,蛋白胨10g, NaCI 5g ,水1000mL pH7.4?7.6。 2. 高氏1 号培养基（用于放线菌培养） 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCI 0.5g ，K2HPO4?3H2O0.5g，MgS04?7H200.5gFeS04?7H200.01,水1000mL pH7.4?7.6。配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3. 马丁氏（Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌） K2HPO41g MgSO4?7H2O0.5g蛋白胨5g,葡萄糖10g, 1/3000 孟加拉红水溶液100mL水900mL自然pH, 121C湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55?60C时加入链霉素（链霉素含量为30 卩g/mL）。 4. 马铃薯培养基（PDA）（用于霉菌或酵母菌培养） 马铃薯（去皮）200g，蔗糖（或葡萄糖）20g，水1000mL配制方法如下： 将马铃署去皮，切成约2cm2的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸 30mi n,注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加
糖，再补足至1000mL自然pH,霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 5. 察氏培养基（蔗糖硝酸钠培养基）（用于霉菌培养） 蔗糖30g, NaNO32g, K2HPO41g, MgSO4?7H2O0.5,gKCl 0.5g, FeSO4?7H2O0.1,水1000mL pH7.0?7.2。 6. Hayflik 培养基（用于支原体培养） 牛心消化液（或浸出液）1000mL,蛋白胨10g,NaCI 5g,琼脂15g, pH7.8?8.0，分装每瓶70mL 121C湿热灭菌15min,待冷却至80C 左右，每70mL中加入马血清20mL 25%羊酵母浸出液10mL 15醋酸铊水溶液2.5mL,青霉素G钾盐水溶液（20万单位以上）0.5mL ,以上混合后倾注平板。 *注意：醋酸铊是极毒的药品，需特别注意安全操作。 7. 麦氏（McCLary）培养基（醋酸钠培养基） 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g，醋酸钠0.82g，琼脂 l.5g，蒸馏水l00mL。溶解后分装试管，1l5 C湿热灭菌15min 8. 葡萄糖蛋白胨水培养基（用于V.P.反应和甲基红试验） 蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g, K2HPO4 0.2g,水100mL pH7.2,
实验室常用培养基的配制方法
五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后，4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin
细胞培养基及其配制方法
【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项 配制方法： （1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5％的双蒸水。（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。（3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0.2到0.3。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 ●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 ●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 ●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 ●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。
DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。 （6）除了以上与细胞生长有关的物质以外，培养基中一般还要加入酚红（当溶液酸性时pH 小于6.8呈黄色；当溶液碱性时pH大于8.4呈红色），一种pH指示剂。
常用培养基的配方
伊红美蓝培养基 原理 一般用来鉴定大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： ①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。 ③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 ④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 ⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。 配置方法 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 麦康凯培养基 原理 1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基 2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。 配置方法 蛋白胨 17g 脙胨3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水1000mL 乳糖10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL 麦康凯-制法 1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL 加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。 2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 吲哚试验 吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。 LB培养基 配方 胰化蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g 琼脂 1.5-2g 水100ml LB培养基-LB培养基条件 LB培养基-固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉
常用培养基的配制
常用培养基的配制 （一）营养琼脂培养基 【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。 【成分】牛肉膏 3g NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 【pH值】7.2±0.2 【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基 【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃20min高压灭菌备用。 （三）半固体培养基 【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g 【pH值】7.6 【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。 （四）营养肉汤培养基 【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉粉（牛肉浸汁） 3g 【pH值】7.2±0.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，分装小试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min 高压灭菌备用。 （五）葡萄糖蛋白胨水培养基 【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。 【成分】蛋白胨5g 葡萄糖5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g) 【pH值】7.0～7.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。 （六）伊红美蓝培养基（EMB培养基）
常用培养基概念及配方复习课程
常用培养基概念及配 方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总
称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／ L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／ L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L． 一、LB培养基配制
常用培养基配方
常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分） 渤海大学生物与食品科学学院 2006年3月
目录 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸－苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN－1培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂 74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA) 75 Cary－Blair氏运送培养基 76 Skirrow氏培养基 77 TTC琼脂 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird－Parker氏培养基 83 7.5%氯化钠肉汤 84 匹克氏肉汤 85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
细胞培养基及其配制方法
D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分
DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分 DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分
双蒸水。（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。 （3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升到，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低到。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 ●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 ●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 ●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
实验室常用培养基配方
031*-2./4,+ 5 86779\_V_[_PUY\RQTXYWYS^QO\OWYS YXWUXR:bkkiNIIlllHk_d_j_H`hfH`g Ofic`ceecg EKJJ faIfeF rqq 74p 76z 7:5256658vq 76 ro Jf v 4z 7:5256658-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA UZ\S ELM faIfeF su 74p 76*./}vq 76 ro Jf ros 4*./}-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA ]GS_e ELJ faIfeF nsq BIVGMA r + ro Jlwgt\E -} r +rH .A so ]q~yqq 76Nme 0uEKR_FoaA to O]v ,,1-~C~qos 76@EP`:~+,xoq A uo ]me 0u^j{[Qp ,r +A vo TvTzicYEdn ,svA wo ]q r 76z 7:5256658C rqq 74p 76DYb *ZXA xo u BGMA
031*-2./4,+ 5 9678 :UWPWTW JOSULKNRSQSMV KIUIQSM SRQORL;Y``^HGGaaaF`WZW_WFX][FX\ i x if ]wZjnOFp>hfio y wv j |{l @hfoj y w j v|{l ?ihh 21< aU jfki /wv j |{l M ijfml /w j v|{l r qh 21I_Xyix@TAaUN@R_Xy iJbu ihh 21@LkLm[V 大肠杆菌培养 一、菌种冻存液的制备 含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。 二、培养基制备 LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4） 液体培养基 胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 水 1000ml pH 7.4 固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂 三、平板的制备 1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。 2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入 2.5g琼脂）。3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。 5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固， 可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。 6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。 四、接种大肠杆菌 1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。 3）因实验一般都要求挑取单菌落，故涂平板适应考虑冻存液内细菌数量，若菌量过大应适当稀释。一般方法一获得单菌落的可能性比较大。涂平板应在酒大肠杆菌培养基配制及培养方法