复方菠萝酶片对症治感冒后久咳不愈.docx

复方菠萝酶片对症治感冒后久咳不愈

随着季节的替，有些人易患感冒，但当感冒的鼻塞、流涕等症状消失后，却久咳不愈，咳声嘶哑，并且咳痰不止。对此该怎么办呢？

感冒一般是由病毒感染所致，当病毒感染几天后，即使不治疗，机体也会产生相应的抗体以对抗病毒，这就是有的患者感冒不治自愈的原因。这时，如果没有并发细菌感染，感冒就可以说是痊愈了。但是，为什么有的患者还久咳不愈呢？其原因是上呼吸道(鼻、咽、喉)存在着炎性分泌物，如痰液等；或者存在着其他过敏因素，这时只要给予对症治疗，即止咳化痰就可以了。

复方菠萝酶片、复方甘草片。复方菠萝酶片每次3片，每天3次。该药中所含的菠萝酶，可渗透入炎症组织，分解痰液中的蛋白成分，使粘痰分解，易于咳出；其所含的猪胆汁也可化痰止咳。也可选用复方甘草片，口服或含服，每次2～3片，每天3次。

草珊瑚含片、西瓜霜含片。草珊瑚含片为含服药，每次2片，每隔2小时1次。此药直接作用于咽喉局部患处，使局部药物保持高浓度，有利于局部残余炎症和痰液的分解、咳出。也可选用西瓜霜含片，作用和用法与草珊瑚含片相同。

清音丸。也为含服药，每次1丸，每天2～3次。此药对于咳嗽兼有声嘶的患者有良效，可迅速缓解声音嘶哑的症状。

众生丸。为内服纯中药制剂，每次4～6丸，每天3次，口服。此药含多种清热解毒中药成分，对于清除咽喉局部残余炎症效果较好。

此外，还可酌情选用麻杏止咳糖浆、非那根糖浆、双黄连口服液、清热解毒口服液、川贝枇杷露和桔梗片等。

网址：https://www.wendangku.net/doc/c59047623.html, 第 1 页，共 1 页

菠萝蛋白酶的提取实验报告

菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定 12食安2班陈志廉 摘要 本文阐述了通过运用高速离心法提取粗酶，盐析分离提纯，透析除杂等方法提取出了菠萝蛋白酶并将其初步分离纯化且测定了各个步骤的酶活性的过程。关键词 菠萝蛋白酶纯化酶活性 前言 菠萝蛋白酶（Bromelain，EC3.4.22.3）简称菠萝酶，是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶，1891年Mercaro于菠萝的汁中首先发现。 在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。菠萝蛋白酶来可以用来增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品及含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。其它还有生产脱水豆类、婴儿食品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给日常食品添味等。 在医药上它可以治疗水肿及多种炎症，并有助消化，健胃消食等功能。 菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。本文主要验证了从新鲜菠萝皮中提取菠萝蛋白酶并将之纯化的方法，以求改进工艺等。 1实验材料与仪器 1.1实验材料与试剂 新鲜菠萝、0.1mo1/L pH7.8磷酸缓冲液（PBS）、0.01mo1/L pH7.8磷酸缓冲液（PBS）、1％酪蛋白、激活剂、10％三氯乙酸(TCA)、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G250

1.2实验仪器 722型可见光分光光度计：上海舜宇恒平科学仪器有限公司； 752型光栅分光光度计：北京光学仪器厂； TDL-60B台式离心机：上海安宁科学仪器厂； D5M离心机：长沙湘智离心机仪器有限公司； DK-8D电热恒温水浴锅：上海森信实验仪器有限公司； 可控硅恒温水浴锅：上海锦屏仪器仪表有限公司； AMPUT电子天平：深圳安普特科技有限公司； BS110S分析天平北京赛多利斯天平有限公司； DS-1型高速组织捣碎机：上海标本模型厂； HZS-H型水浴振荡器：哈尔滨市东联电子技术开发有限公司 2实验方法 2．1菠萝蛋白酶的粗酶提取 称取菠萝皮材料30g，将菠萝皮在清水中洗净，沥干，切成小段后置于超高速搅拌机中，加入约60mL预冷的0.1mo1/L pH7.8PBS，持续搅拌10~15min至粉碎，搅拌完成后用4层纱布过滤，得到滤液后，用冷冻离心机于4°C3000rpm 离心6min，弃沉淀，即得到菠萝蛋白酶粗提液，测定粗提液的体积、蛋白质含量和酶活性。 2．2盐析 根据附录的“硫酸铵饱和度计算表”，按30%硫酸铵饱和度计算在上述酶提取液中需添加的固体硫酸铵量，称取固体硫酸铵于研钵中，研磨呈粉末，慢慢小量分次向酶提取液中添加固体硫酸铵，边加边搅拌，使溶液最终硫酸铵饱和度为30%，放置于冰水混合物（4℃）30min后，酶蛋白沉淀析出，4°C3000rpm离心6min，收集沉淀，加入0.1mo1/L pH7.8PBS约15mL至完全溶解，测定其体积、蛋白质含量和酶活性。 2．3透析 将溶解液装入2.5cm×8cm透析袋（预先将透析袋在蒸馏水中煮沸30min）中，于500mL烧杯中，在磁力搅拌器搅拌下用蒸馏水透析，15min换水一次，换水3～4次后，检查SO42-是否已被除净（检查的方法是：取2mLBaCl2溶液

菠萝蛋白酶

菠萝蛋白酶的应用 菠萝酶的最早研究 菠萝酶(Bromelain，全称菠萝蛋白酶)的最早研究 许多人认为医药企业的研究数据更可靠。美国、德国和瑞士的一些主要的医药公司研究发现菠萝蛋白脢能治疗多种疾病，而且非常有效和安全一一这些疾病与诺丽所帮助的疾病相同，但诺丽比它的作用更大。他们的发现表明，在一种植物中存在着一种非常重要的成份。也就是说，医药企业证实有一种食品补充物质能对许多疾病有帮助，尽管他们不知道这种特殊成份的化学特性和他是怎样在人体中起作用的。 海尼克博士的报告中说，1957年美国一家重要的医药企业的总裁说，菠萝蛋白脢的发现是近50年来最重要的医学发现之一。海尼克博士的第一个重要的医药客户计划用菠萝蛋白脢溶液作为一种快速(特效) 成份，在30秒内缓解痛经。这个公司的总裁深被菠萝蛋白脢的效果所打动，决定对它作进一步的研究来解决医学上的其他问题(遗憾的是今天的商用菠萝蛋白脢只有3%的有效成份一一赛洛宁原，这是当时让菠萝蛋白脢在药理上有如此活性的物质) 在进一步的研究中，这个公司发现菠萝蛋白脢可以使大的癌肿块衰退。还有一个男孩得了严重的肺气肿，用菠萝蛋白脢治疗很快恢复了健康。科学家发现菠萝蛋白脢和抗菌素一起使用，能用小的剂量可以达到好的效果，这和使用诺丽的效果报告的一样。事实上，通过对一万名使用过诺丽的人的调查结果显示，对呼吸系统的有效率为78%。海尼克博士推测，医药公司没有坚持进一步的研究，是因为他们不知道要花费多长时间

和多少资金来确定到底是什么药理成份使菠萝蛋白脢起作用。下面这个有趣的例子，说明研究一种天然产品的复杂性和不可预测性。 在申请FDA批准时要求做双盲试验。三个月以后，对双盲试验进行评估时，他们发现提纯后的菠萝蛋白脢几乎没有什么作用。显然提纯过程去掉了原有菠萝蛋白脢中的药理活性。我们现在知道这种去掉的物质就是塞洛宁原，与诺丽中富含的这种成份一样，这显然也是诺丽为什么那么有疗效的原因。 尽管这个医药公司想与Dole公司合作来研究被净化掉的这种物质到底是什么，但Dole有自己的计划。在这个时候，另一家医药公司已经获得了FDA的批准，同意他销售一种肠衣的菠萝蛋白脢片剂来治疗炎症。海尼克博士说Dole公司更愿意延续现在的利润收益，而不愿冒险去进行这个研究。 在以后的几年里，海尼克博士与马丁一一销售肠衣菠萝蛋白脢公司的科研主任一起合作来研究治疗炎症。尽管他关于菠萝蛋白脢的生理学作用与海尼克的理论不一样。马丁是一位极富热情和想象力的科研带头人，他所研究出的大量数据至今仍非常有意义。但他幷不是唯一的菠萝蛋白脢的研究者。养呈现良好白嫩状态。 菠萝蛋白酶的基本信息 菠萝酶(Bromelain，全称菠萝蛋白酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000 ，等电点为

菠萝蛋白酶活力的测定

菠萝蛋白酶活力的测定 ?碱性蛋白酶在碱性条件下，可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸，酪氨酸为含有酚 羟基的氨基酸，可与福林试剂（磷钨酸与磷钼酸的混合物）发生福林酚反应，利用比色法即可测定酪氨酸的生成量，用碱性蛋白酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表示酶活力。 ?（福林酚反应：福林试剂在碱性条件下极其不稳定，容易定量地被酚类化合物还原，生成钨蓝和钼蓝的混合物，而呈现不同深浅的蓝色） 1、实验材料 （1）实验器材 榨汁机、电热恒温水浴锅、分析天平、紫外分光光度计等。 （2）实验试剂 1）对照样品溶液：酪氨酸溶液0.05g/L，用0.1mol/LHCl溶液配制。 2）菠萝汁：市售菠萝压榨后过滤即得。 3）菠萝汁稀释液：称取L-半胱氨酸盐酸0.53g，EDTA0.22g，分别兑少量溶解后，混合，用NaOH(0.1mol/L)调pH至4.5，加水至100mL（新鲜配制）。 4 ）底物溶液：精确称取酪蛋白0.6g ，加Na2HPO4溶液（0.005mol/L ）80mL ，用1mol/L 盐酸调pH 至7.0 ，加水至100mL （新鲜配制）。 5 ）三氯醋酸溶液：称取三氯醋酸溶液1.80g ，醋酸钠2.99g ，加水少量使溶解，加冰醋酸1.98mL ，加水稀释至100mL 。 2、操作步骤 （1）供试溶液的配制 将菠萝切碎，置于榨汁机中榨汁，用4层纱布过滤，弃初滤液，取滤后菠萝汁10mL，加菠萝汁稀释液10mL，放置15min，制成供测试用液。 （2）供试液酶解后吸光度值的测定 取上述供试液1mL，置带塞试管中，于37℃预热10min后，迅速加入已经37℃预热10min的底物溶液5mL，加入起准确计时反应10min，立即加入三氯醋酸5mL终止反应，混合后过滤，滤液在275mn处以水作参照，测吸光度A。（3 ）空白试验 取上述供试液1mL ，置带塞试管中，于37 ℃预热10min 后，迅速加入已经37 ℃预热10min 的三氯醋酸5mL ，加入起准确计时反应10min ，立即加入底物溶液5mL 终止反应，混合后过滤，滤液在275nm 处以水作参照，测吸光度A0。 （4 ）对照吸光度测定 用水作参照，测定对照品溶液在275nm 处的吸光度A S。 5 、实验结果 （五）结果讨论从上述结果可知菠萝蛋白酶的比活力较低，可能的原因有：1、所加入的有机酸单宁的量对菠萝蛋白酶沉淀有的影响；2、在实验中是否把单宁

菠萝蛋白酶的制备及活性测定

菠萝蛋白酶的制备及活性测定 背景 菠萝蛋白酶(Bromelain)，别名菠萝酶，是存在于菠萝(Anana COmOSl2S)植株中的蛋白质水解酶，为浅黄色无定形粉末，微有异臭。菠萝的果、茎、柄和叶片中都含有菠萝蛋白酶。一般从菠萝果中提取的称为果菠萝蛋白酶，从菠萝皮、茎中提取的为茎菠萝蛋白酶。八成熟的菠萝果汁含有约0．4％的菠萝蛋白酶，成熟的菠萝果汁含有O．3％左右的菠萝蛋白酶，茎汁含8．7％的菠萝蛋白酶(Murachi，et a1．，1964)。1981年，Marcano首先发现菠萝汁中含有蛋白水解酶，随后Willstatter，Bergmann和Martin相继指出，菠萝蛋白酶存在于果、皮和茎部中，存在于茎部的称为茎酶(Stembromelain E．C．3．4．22．4)，存在于果汁中的酶称为果酶(Fruit bromelainE．C．3．4．22．5)。Murachi和Neurath、E1．G harbawi和Whitaker采取层析法分离提取了菠萝蛋白酶并研究了它的活性成分。结构特性研究表明，果菠萝蛋白酶是酸性酶，等电点为pH4．6，茎菠，约为33，000，等电点为pH9．5，其活性中心的氨基酸顺序和催化机理与木瓜蛋白酶相似，并确定茎菠萝蛋白酶为糖蛋白。Ota S et aL研究指出，茎菠萝酶分子量为36000，末端氨基酸残基是丙氨酸，果酶分子量为30000，末端氨基酸残基也为丙氨酸，碳水化合物分析与Muraclli 的分析结果相似。1988年，T．L．迈诺特等由十二烷基硫酸钠．聚丙烯胺凝胶电泳(SDS．PAGE)测定果菠萝蛋白酶分子量22200．25080，等电点3．8~4．8。菠萝蛋白酶是各种酶的混合物，已知菠萝蛋白酶粗品中包含至少五种蛋白水解酶，也包含非蛋白水解酶，包括酸性磷酸酶和过氧化物酶，并含有淀粉酶和纤维素酶活性，还存在其他成分。菠萝蛋白酶成分的复杂性，限制了其在生产中的应用，特别是医药领域对功能成分的要求上，因此对菠萝蛋白酶的成分和各成分的具体功能的分析研究具有重要意义。菠萝蛋白酶纯品是一种糖蛋白，分子结构中含有一个寡糖分子，由木糖(xylose，xyl)、岩藻糖(fucose，Fuc)、甘露糖(mannose，Mall)和N一乙酰葡萄胺(N．aceltylglucosamine，GIcNAC)组成 用离子交换柱层析、硫酸铵沉淀等方法提纯得到的菠萝蛋白酶进行研究表明，菠萝蛋白酶相对分子量为33200D，等电点为pH9．55，酶液的最大吸收波长为280nm，0．051％浓度的酶液在280nm的光吸收值达0．984(Murachi，et a1．，1964)。分子中有4个N

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因菠萝蛋白酶提取 一、实验目的： 1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺 2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取 二、实验原理： 菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药等行业。结果表明。提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能

迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。 三、实验步骤 操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml， 搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。把洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％

菠萝蛋白酶的应用

菠萝蛋白酶的应用 一、菠萝蛋白酶在食品加工业的应用 1、焙烤食品：将菠萝蛋白酶加入生面团中，可使面筋降解，生面团被软化后易于加工。并能提高饼干与面包的口感与品质。 2、干酪：用于干酪素的凝结。 3、肉类的嫩化：菠萝蛋白酶将肉类蛋白质的大分子蛋白质水解为易吸收的小分子氨基酸和蛋白质。可广泛地应用于肉制品的精加工。 4、菠萝蛋白酶在其它食品加工业中的应用，有人已经用菠萝蛋白酶来增加豆饼和豆粉的PDI 值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品及含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。其它还有生产脱水豆类、婴儿食品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给日常食品添味等。 二、菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用 1、抑制肿瘤细胞的生长 经相关临床研究观察表明，菠萝蛋白酶能抑制肿瘤细胞的生长。 2、对心血管疾病的防治 菠萝蛋白酶作为蛋白水解酶对心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风，缓解心绞痛症状，缓和动脉收缩，加速纤维蛋白原的分解。 3、用于烧伤脱痂 菠萝蛋白酶能选择性地除皮，使新皮移植得以尽早进行。动物实验证明，菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良影响。局部使用抗生素不影响菠萝蛋白酶的效果。 4、消炎作用 菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿（包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤），菠萝蛋白酶具有激活炎症反应的潜力。菠萝蛋白酶还可治疗腹泻。 5、增进药物吸收 将菠萝蛋白酶与各种抗生素（如四环素，阿莫西林等）联用，能提高其疗效。相关研究表明,它能促进抗生素在感染部位的传输，从而减少抗生素的用药量。据推断，对于抗癌药物，也有类似的作用。此外，菠萝蛋白酶能促进营养物质的吸收。 三、菠萝蛋白酶在美容化妆品业中的应用 菠萝蛋白酶具有嫩肤、美白去斑的优异功效。 基本作用原理：菠萝蛋白酶可作用于人体皮肤上的老化角质层，促使其退化、分解、去除，促进皮肤新陈代谢，减少因日晒引起的皮肤色深现象。使皮肤保养呈现良好白嫩状态。四、菠萝蛋白酶制剂在饲料中的应用 将菠萝蛋白酶加入饲料配方或直接混合在饲料中，可以大大提高蛋白质的利用率和转化率，并能开发更广的蛋白源，从而降低饲料成本。 作用PH值： 6.0～9.0 包装： 该品包装分为两种： 1）铝箔袋包装，净重1公斤/袋.20公斤/纸箱. 2）纸板桶包装，内衬透明塑料袋，净重25公斤/桶. 储存及保存期： 推荐存放在阴凉干燥的地方，相对湿度低于60%，温度低于25℃；保存期12个月，5～15℃

菠萝蛋白酶的作用与功效

菠萝蛋白酶是从菠萝的果、茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻、干燥而得到的一种纯天然的植物蛋白酶。所以，是由多种不同分子量和分子结构的酶所组成的酶系，且其中至少包含了5种蛋白水解酶。因此，不仅具有能够分解蛋白质帮助消化及一定的利尿功效，同时，还具有以下作用。 一、食品加工业： 1、焙烤食品：将菠萝蛋白酶加入生面团中，可使面筋降解，生面团被软化后易于加工，并能提高饼干与面包的口感与品质； 2、干酪：可用于干酪素的凝结； 3、肉类的嫩化：菠萝蛋白酶可将肉类蛋白质的大分子蛋白质水解为易吸收的小分子氨基酸和蛋白质，因此，现被广泛应用于肉制品的精加工。 二、在美容化妆品业中的应用： 菠萝蛋白酶因具有嫩肤、美白去斑的优异功效，所以，可作用于人体皮肤上的老化角质层，促使其退化、分解、去除，促进皮肤新陈代谢，减少因日晒引起

的皮肤色深现象，使皮肤保养呈现良好白嫩状态。 三、在医药、保健品业的应用： 1、肿瘤细胞的生长：经相关临床研究观察表明，菠萝蛋白酶能抑制肿瘤细胞的生长； 2、心血管疾病的防治：菠萝蛋白酶作为蛋白水解酶对心血管疾病的防治是有益的；它能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风，缓解心绞痛症状，缓和动脉收缩，加速纤维蛋白原的分解； 3、于烧伤脱痂：菠萝蛋白酶能选择性地除皮，使新皮移植得以尽早进行；动物实验证明，菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良影响； 4、炎作用：菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿(包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤)，且能促进抗生素在感染部位的传输，从而减少抗生素的用药量。此外，还能促进营养物质的吸收。 以上就是有关菠萝蛋白酶功效以及相关作用的一些简单介绍，希望对大家进

探究盐水对菠萝中菠萝蛋白酶活性的影响

探究盐水对菠萝中菠萝蛋白酶活性的影响 一．实验目的 1.了解并解释食用菠萝前用食盐水浸泡的原理 2.掌握从菠萝中提取菠萝蛋白酶的方法 3.掌握测量菠萝蛋白酶活性的方法 二．实验原理 菠萝蛋白酶是一种具有消炎，抗水肿作用的疏基酶，能分解蛋白质、酯和酞胺。 菠萝蛋白酶一般从菠萝汁或菠萝废皮中提取，为浅黄色无定形粉末，分子量33000，微有异臭，微溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿，乙醚，等电点9.55 。 本实验先从新鲜的菠萝汁中使用有机酸（单宁）沉淀法提取出菠萝蛋白酶，然后通过考马斯亮蓝法测定酶制品中菠萝蛋白酶的总量，最后菠萝蛋白酶将酪蛋白水解产生酪氨酸，通过在275nm波长下测定吸光度的变化，可以测得菠萝蛋白酶的活力。 三．实验器材与试剂 1、实验材料 新鲜菠萝(自备)、0.1mg/ml牛血清蛋白 2、实验试剂 柠檬酸钠维生素单宁溶液 氯化钠溶液酪蛋白溶液氢氧化钠溶液 磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0） 激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA-2Na,现配现用） 研钵； 离心机； 紫外可见分光光度计（1cm石英比色皿）； 恒温水浴锅（37℃）； 试管、试管架； 烧杯、容量瓶； 移液管； 四．实验步骤 （一）预处理菠萝 （二）从菠萝中提取菠萝蛋白酶 1. 将处理过后的菠萝切成小块，和适量柠檬酸钠一起放入研钵研成匀浆。 2．过滤后2000r/min，离心7min。取上清液

3. 加Vc,0.2%单宁溶液搅拌15min,静置40min4200r/min,5min离心。弃上清液 4. 加100ml0.1%EDTA溶液，200ml1.5%氯化钠液。4200r/min,5min离心。 5. 加适量1.5%氯化钠溶液，4000r/min,7min离心。得酶沉淀。 （三）考马斯亮蓝法测定酶制品中蛋白酶含量 已测得标准曲线为y=6.2357x (y为吸光度，x为蛋白酶质量) （四）菠萝蛋白酶活力的测定 1、取酶制品溶解于0.05mol/L磷酸缓冲液（PH7.0)至10ml,离心得上清液； 2、取4支试管，分别标号1、2、3 4，各加1ml溶液酶和0.9m激活剂； 3、另取4支试管，分别对应标号1’、2’、3’、4’，各加1ml缓冲液和0.9ml激活剂； 4、将8支试管置于37℃水浴； 5、分别加入0.6ml 1%酪蛋白混匀 6、37℃水浴下反应10 min; 7、向8支试管中各加入8ml1mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀，于室温放置30min; 8、取各自对应的试管为空白调零在275nm波长下测定吸光度 五．数据处理 由线性关系y=6.2357x，(y为吸光度，x为蛋白酶质量) 可以计算酶制品中蛋白酶的总质量及其他参数(详情见下表) 菠萝蛋白酶活力=吸光度/10 比活力=蛋白酶活力/蛋白酶质量 六．分析与讨论 从上述结果可知菠萝蛋白酶的比活力较低，可能的原因有： 1、所加入的有机酸单宁的量对菠萝蛋白酶沉淀有的影响； 2、在实验中是否把单宁溶液弄混而导致菠萝蛋白酶很少沉淀析出； 3、菠萝蛋白酶对热不稳定，试验中温度的控制是否合理； 4、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足，导致结果偏低； 5、活力测定中，由于操作不当，导致部分沉淀溶解在了上清液中，溶液微浑浊，对吸光度的测定有影响 从本实验可以看出，在其他条件一致的情况下不同氯化钠浓度的溶液会对菠萝中菠萝酶的活性有影响，且成负相关关系。菠萝中含有的菠萝酶可能对人体造成过敏反应。盐水的浸泡可以减少菠萝酶的活性已达到减小人体过敏反应的效果。

菠萝蛋白酶提取

菠萝蛋白酶提取 一．实验目的: 1.了解菠萝蛋白酶的基本性质，设计提取方法并测性其蛋白总量及酶活性； 2.计算从菠萝中提取菠萝蛋白酶时每步的回收率，判断提取方法的优劣。 二．实验原理： 菠萝蛋白酶外观为白色至浅棕黄色无定形粉末；可溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚；属糖蛋白。主要作用原理是使多肽类水解为低分子量的肽类，尚有水解酰胺基键和酯类的作用。其作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化,啤酒澄清,还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂,对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。 提取菠萝蛋白酶的传统工艺是高岭土吸附法和单宁沉淀法。高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,酶活总回收率低,但产品质量较好,纯度较高,单宁沉淀法工艺和操作比高岭土法简单,原材料消耗少,所需设备少,但酶活回收率低。有些研究用超滤法对传统工艺进行了改革,不仅使菠萝蛋白酶产品更纯,而且酶粉得率比传统工艺高,但超滤法生产工艺和和操作比上述两种方法复杂,工人素质要求高,且设备一次性投资大。本实验采用新型吸附法提取菠萝蛋白酶,步骤简单,产率比传统方法有所提高,是一种有发展的方法。在新型吸附沉淀法提取菠萝蛋白酶中,所使用的锌离子对酶有激活作用,乙二胺四乙酸是一种螯合物,可有效地螯合原料中某些重金属离子,以避免其与酶结合而使酶失去活性,抗坏血酸则具有还原性,分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态,从而有效地保持酶活性,其中以EDTA 和L2半胱氨酸组合,效果最佳。单宁用量多少会直接影响酶产量,一般范围0. 15 %～0. 25 %的浓度。 采用Folin-酚法测定蛋白酶含量，发生双缩脲反应的蛋白中酚基（酪氨酸），在碱性条件下将磷钼酸和磷钨酸还原成钼酸和钨酸，呈蓝色，在650nm和66onm处有最大吸收值。Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O）组成。多肽中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。乙试剂是由磷钼酸、磷钨酸、硫酸和溴等组成。此试剂在碱性条件下，易被多肽中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与多肽含量成正比。 活性测定方法是以酪蛋白水解释放的氨基酸在275nm的吸收值为基础。酶活单位定义为在37℃，pH7.0的条件下，每分钟水解酪蛋白所产生的酪氨酸的微克数为一个菠萝蛋白酶单位。pH 值对酶活力有很大的影响,大多数的酶在酸性条件下活力最强,最适合菠萝蛋白酶的pH 为7. 4 ,在碱性条件下就会失活,在操作过程中应注意pH 值的变化。从温度2酶活力曲线上可以看出,温度也是影响酶活力的重要因素之一,最适合的温度为45 ℃。 三．实验步骤： （1）新型吸附法提取菠萝蛋白酶的过程： 菠萝压榨得汁液, 按压出汁液的体积量加10 %氯化钠,在室温下自然沉降120 h ,弃去沉淀物,得澄清液。将澄清液移入烧杯中,在搅拌条件下,按澄清液体积加入0. 05 %EDTA22Na 、0. 02 %维生素C ,立刻加入0. 1 %的单宁和自制的吸附剂,在4 ℃下静置1 h ,离心弃去上清液,收集沉淀物,加入2～3 倍pH 值为4. 5 的抗坏血酸溶液,静止30 min。离心14 min ,弃去沉淀物,收集滤液,用冷冻真空干燥即得菠萝酶。 （2）蛋白质含量的测定过程： 取12 支试管,分别加入0 ,0. 20 ,0. 40 ,0. 60 ,0. 80 ,1. 00 mL 标准牛血清溶液(500μg/ L ,用水补足1. 00mL ,以上每种浓度各做一份重复,即平行做两份,按顺序向各管加入5 mL Folin-酚试剂甲,混匀。室温下放置10 min 后,再依次向各管加入0. 5 mL Folin-酚试剂乙,

菠萝蛋白酶

菠萝蛋白酶 【产品名称】菠萝果粉菠萝蛋白酶 【英文名称】Pineapple fruit powder 【拉丁名称】Ananas comosus 【产品指标】 外观：粉末疏松、无结块，无肉眼可见杂质。颜色：黄绿色精细粉末，且均匀一致 规格：食品级 气味：天然菠萝味 水分：≤5% 菌落总数：＜1000

沙门氏菌：无 大肠杆菌：无 【产品说明】 菠萝（学名：Ananas comosus）为凤梨俗称，是著名热带水果之一。本公司生产的菠萝粉以优质的菠萝为原料，采用目前较为先进的喷雾干燥技术加工而成。最大限度的保持了菠萝本身的原味，含有多种维生素和酸类物质。粉状，流动性好，口感佳，易溶解，易保存。 【产品功效】 菠萝性平，味甘、微酸、微涩、性微寒，具有清暑解渴、消食止泻、补脾胃、固元气、益气血、消食、祛湿、养颜瘦身等功效 菠萝含有一种叫“菠萝朊酶”的物质，它能分解蛋白质，帮助消化，溶解阻塞于组织中的纤维蛋白和血凝块，改善局部的血液循环，稀释血脂，消除炎症和水肿，能够促进血循环。尤其是过食肉类及油腻食物之后，吃些菠萝更为适宜，可以预防脂肪沉积。菠萝蛋白酶能有效分解食物中蛋白质，增加肠胃蠕动。这种酶在

胃中可分解蛋白质，补充人体内消化酶的不足，使消化不良的病人恢复正常消化机能。这种物质可以阻止凝胶聚集，可用来使牛奶变酸或软化其他水果，但这种特点在烹饪中会被减弱。 此外，菠萝中所含的糖、酶有一定的利尿作用，对肾炎和高血压者有益，对支气管炎也有辅助疗效。由于纤维素的作用，对便秘治疗也有一定的疗效。当出现消化不良时，吃点菠萝能开胃顺气，解油腻，能起到助消化的作用，还可以缓解便秘。除此之外，菠萝富含维生素B1，能促进新陈代谢，消除疲劳感。 菠萝汁有降温的作用，并能有效预防支气管炎，但是发烧最好不要食用。经医学研究，自古以来，人类就常常凭借菠萝中含有的菠萝蛋白酶来疏缓嗓子疼和咳嗽的症状。菠萝皮中富含菠萝酶，有丰富的药用价值，据国外专家20多年实验，长期食用菠萝皮，心脑血管，糖尿病发病率显著降低，并有一定的抗癌效果。尚含一种酵素，可以分解蛋白质。 【应用范围】医药保健品，健康营养品，固体饮料，乳制品，方便食品，膨化食品，调味品，中老年食品，烘焙食品，休闲食品，冷食冷饮等。 【建议添加】固体饮料（5%）、饮品（5%）、休闲食品（3-5%）、

菠萝蛋白酶

菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响 一、实验目的 1、掌握菠萝蛋白酶的提取纯化方法 2、了解菠萝蛋白酶的活力测定方法 3、了解化学修饰的方法并探究对其活力的影响。 4、探究菠萝蛋白酶的稳定性 二、实验原理 菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白质, 广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中, 分子量为33 000, 能分解蛋白质和酰胺等。它的水解活性较木瓜酶高10 倍以上。因此有广泛的用途。它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清. 还用于胶、水解蛋白的生产, 在医药上它可在生物体内溶解纤维蛋白及血凝块。因此可以治疗水肿及多种炎症, 它能迅速溶痂。对正常组织无害, 不影响植皮, 适用于中小面积深度烧伤的治疗。 ?菠萝蛋白酶的理化条性质 ?最佳温度：53±1℃ ?失活温度：≥65℃ ?最佳PH值： 5.0～8.0 ?失活PH值：小于3.0和大与9.5 ?推荐用量:0.05～0.1%对蛋白质计 ?温度范围：50～60℃ 作用PH值: 6.0～9.0 提取菠萝蛋白酶的传统工艺是高岭土吸附法和单宁沉淀法。高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,酶活总回收率低,但产品质量较好,纯度较高,单宁沉淀法工艺和操作比高岭土法简单,原材料消耗少,所需设备少,但酶活回收率低。超滤法使菠萝蛋白酶产品更纯,而且酶粉得率比传统工艺高,但超滤法生产工艺和和操作比上述 两种方法复杂,工人素质要求高,且设备一次性投资大。本实验采用单宁沉淀法提取菠萝蛋白酶。 活性测定方法是以酪蛋白水解释放的氨基酸在275nm的吸收值为基础。酶活单位定义为在37℃，pH7.0的条件下，每分钟水解酪蛋白所产生的酪氨酸的微克数为一个菠萝蛋白酶单位。pH 值对酶活力有很大的影响,大多数的酶在酸性条件下活力最强,最适合菠萝蛋白酶的pH 为7. 4 ,在碱性条件下就会失活,在操作过程中应注意pH 值的变化。 实验材料 1、材料：新鲜的成熟菠萝 2、仪器：榨汁机、离心机、紫外分光光度计、恒温水浴锅、氯化钙的干燥器、CM Sepharose FF 凝胶（1.1cm×30.0cm）、研钵、滴管（大、小）、烧杯（大、中、小）、试管、具塞试管、白瓷板、温度计、PH计、搅拌棒 3、试剂：0.2%单宁、5 %苯甲酸钠溶液、0. 1 %/0.5%EDTA 溶液、1. 5%氯化钠溶 液、0. 5%乙酸锌溶液、0.06 %抗坏血酸溶液、0. 5%硫代硫酸钠、1 %L - 半胱氨酸溶液、20mM pH4.0 的醋酸缓冲液、1MNaCl~20mM pH4.0 醋酸缓冲液（含0.01%EDTA）、双缩脲试剂、pH7.0 的干酪素溶液、酶液激活液（pH4.5 ，L-cys 和EDTA-2Na 配制）、三氯乙酸溶液、标准酪蛋白试剂、0.1M盐酸、0.1M氢氧化钠、50%乙二醇、50%甘露醇、50%葡萄糖、50%甘油、O．1mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 3．0)、NEM