山豆根组培快繁及栽培技术研究进展_刘波
２０１５年 第１期耕作与栽培·５３
·■专题综述
山豆根组培快繁及栽培技术研究进展
刘 波，支永明，唐 虎，桂镜富
（贵州省黔西南州农业科学研究所，贵州兴义 ５６２４００）
摘 要：山豆根是我国常用的中药材，临床应用广泛。近来年，山豆根药材的需求量不断增加，导致其野生资源濒临枯竭，为抢救这一中药资源，国内不少科研工作者和科研机构开展山豆根的组织培养研究，并取得一些进展。文章对山豆根快速繁殖及栽培技术的研究进展进行综述，为山豆根资源的保护、利用、野生驯化及工厂化生产提供参考依据。
关键词：山豆根；快速繁殖；栽培技术
Ｒｅｃｅｎｔ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ
Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｐｎｅｐ
ＬＩＵ Ｂｏ，ＺＨＩ Ｙｏｎｇ－ｍｉｎｇ，ＴＡＮＧ Ｈｕ，ＧＵＩ Ｊｉｎｇ－ｆｕ
（Ｏｉａｎｘｉｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｉｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５６２４００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｐｎｅｐ．ｈａｓ ｂｅｅｎ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｖａｌｕａｂｌｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｈｅｒｂ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｆｏｒ ａ ｌｏｎｇ ｔｉｍｅ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ｔｈｅ ｄｅ－ｍａｎｄ ｏｆ Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｐｎｅｐ．ｋｅｅｐｓ ｇｒｏｗｉｎｇ，ｗｈｉｃｈ ａｌｒｅａｄｙ ｃａｕｓｅｄ ｔｈｅ ｗｉｌｄ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｔｏ ｄｒｙ ｕｐ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｏｔｅｃｔ ｔｈｅｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｈｅｒｂ ｉｎ Ｃｈｉｎａ，ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ ｈａｖｅ ｍａｄｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓ．Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ａｔｔｅｍｐｔｓ ｔｏ ｍａｋｅ ａ ｂｒｉｅｆ ｖｉｅｗ，ｂａｓｅｄ ｏｎ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｄ ｆｏｒｅｉｇｎ ｄｏｃｕｍｅｎｔ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ｗｉｌｄ ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ，ｍｏｄｅｒｎ ｓｃａｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｐｎｅｐ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｐｎｅｐ．；ａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ；ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
山豆根为豆科植物越南槐（Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｇ－ｎｅｐ．）的干燥根及根茎。别名：山大豆根、黄结（《经验方》）、苦豆根（《中药材手册》）［１］。原植物广豆根又名：柔枝槐；处方名：豆根、山豆根、广豆根、南豆根、北豆根、苦豆根。主要分布于我国的西南地区的贵州、广西、广东、江西、云南等地，此外，在越南也有分布［２］。山豆根多生于阳光充足的丘陵、石灰岩及石缝中。其为我国的传统中药，早在北宋（公元９７３－９７４）成书的《开宝本草》中就有记载，２００５年版的《中华人民共和国药典》将越南槐（Ｓｏｐｈｏｒａ ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ Ｇａｇｎｅｐ．）作为中药材广豆根的正品收载，主要的功能是清热解毒、消肿利咽等［３］。目前已从山豆根中分离提取得到生物碱类成分２１种，黄酮类成分１７种，被认为具有抗病毒、细胞毒活性、抗炎和抗心率失常等多方面的药理活性［４－７］。
由于山豆根资源的日益枯竭和人们对山豆根需求的不断增大，其研究和生产受到了极为广泛的关注，近年来在国内外发表了很多相关论著，内容涉及了快繁、大田栽培、化学成分、药用机理等诸多方面。根据近年来的文献信息，对山豆根快速繁殖以及栽培技术研究的进展做一简要的总结和评价，以供有关方面的参考。
１ 山豆根快速繁殖研究
收稿日期：２０１４－１０－１０
基金项目：黔西南州科技计划项目（２０１３－６７）：山豆根资源调查及引种驯化技术研究
第一作者：刘 波（１９８６－），男，研究实习员，从事微生物研究工作。１．１ 种苗的快速繁殖
目前，山豆根人工栽培的种苗主要来自于组织培养技术，通过组织培养条件的优化以获得再生植株。一般通过组织培养再生山豆根植株的途径有２种：种子→愈伤组织→丛生芽→生根苗；茎段→愈伤组织→丛生芽→生根苗。山豆根的组培快繁研究主要集中在以下几个方面［９－１３］。１．１．１ 外植体的选择
在山豆根的组培中，外植体的选择至关重要。一般情况下，同一植株的不同部位的外植体，其生理年龄不同，内源激素含量也不同，其离体器官发生的能力也不尽相同。此外，因植株各部位生长情况不同，其自然环境裸露的时间也不同，外植体体表内外携带的微生物数量也有差异。研究发现山豆根越幼嫩的部位污染率越低；上部带腋芽茎段的外植体污染率较低，且分化能力强，适合进行离体培养，同时，不同季节取材对山豆根外植体污染率的影响也不同。试验发现，于春季选择山豆根带腋芽茎段培养，可获得污染率相对较低，分化率相对较高，在生长期和休眠期采样会因污染率、分化率、褐化率等多种原因而导致培养得不到预期的效果［８］。１．１．２ 灭菌条件的选择
由于山豆根属多年生灌木，其嫩茎密被柔毛，其外植体的消毒存在一定的难度，研究发现山豆根外植体在相同的７５％酒精处理时间下，污染率随灭菌时间的增长而不断降低，死亡率也随之上升，用０．１％升汞＋吐温８０处理８ｍｉｎ和１０ｍｉｎ，都能取得较好的灭菌效果。覃文流等将山豆根种子置于０．１％升汞溶液浸泡消毒１０ｍｉｎ，在超净工作台上用无菌
DOI:10.13605/https://www.wendangku.net/doc/c89426711.html,ki.52-1065/s.2015.01.024
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·耕作与栽培２０１５年 第１期水浸洗４次，每次浸洗２ｍｉｎ，播种于ＭＳ培养基上，发芽率高
达９２％［８，１１］。
１．１．３ 基本培养基的选择
山豆根组培养中常用的培养基是ＭＳ、１／２ＭＳ、改良ＭＳ
（ＮＨ
４ＮＯ３减半）、Ｂ５、改良Ｂ５（ＫＮＯ
３
减半）等。基本培养基
对试管苗的有效繁殖系数影响差异较大，Ｂ５、改良Ｂ５和改良ＭＳ培养基均有较好的增殖效果，有效繁殖系数均在４．０以上，而且这３种培养基的氮盐含量均较低，对山豆根品种的离体培养均表现出明显的促进增殖作用［１０］，而黄晓红认为ＭＳ、Ｂ５较为适合山豆根外植体腋芽的诱导，可能与山豆根外植体在初代培养时的盐分浓度的要求较高，即其腋芽的分化需要盐分的刺激和促进［８］。
１．１．４ 激素与添加物
在植物组织培养中，基本培养基是组织培养的主要基质，外源激素是植物外植体不定芽分化的重要因素。由于植物种类不同，其生物学特性、遗传习性都有所差异，在离体培养过程中所需要的营养成分和对外源激素的要求也不相同。研究表明６－ＢＡ对山豆根离体繁殖有着重要的调节作用，其在一定范围能不仅能促进丛生芽增殖还能促进不定芽的伸长，当浓度超过２．０ｍｇ／Ｌ，不利于丛生芽增殖和茎的伸长，玻璃化现象比较严重［１０］，ＫＴ作为细胞分裂素也能对山豆根继代增殖起到一定的调节作用，随着ＫＴ浓度的不断增加，山豆根继代芽的增值率、增殖倍数也呈现出先升后降的变化趋势，高浓度的ＫＴ有抑制山豆根不定芽的分化和生长［８］。在分析各因子对丛生芽的增殖和生长影响重要性上：６－ＢＡ＞ＮＡＡ＞ＩＢＡ，增值率主要受６－ＢＡ浓度的影响，且添加低浓度的生长素有利于丛生芽的增殖和生长，但当生长素浓度增大呈先升后降的趋势［８，１３］。
一般认为在培养基中加入天然添加物（如土豆汁、香蕉汁、椰汁、苹果汁、绿豆汁等）对山豆根幼苗的生长和根系的发育有促进作用。黄晓红在培养基中加入椰乳，山豆根继代增殖倍数显著提高［８］。实际上，不同的天然添加物中所含的有效成分和作用机理至今尚不清楚，但适当掌握其用量要比加入人工生长调节剂要好的多，而且天然添加剂价格经济实惠，便于规模化生产使用。
１．１．４ 其他影响因素
１．１．４．１ 培养条件
除了外植体、基础培养基、激素以及天然添加物的影响外，光照、温度、ＰＨ值等也会影响山豆根的增殖、分化和生根。
山豆根组织培养常用的温度２６±２℃，光照强度１５００～２ ０００ｌｘ，光照时间１２ｈ／ｄ，空气湿度为７０％～８５％［８，１１，１３］。１．１．４．２ 碳含量
在山豆根培养基中加入适量的活性炭是有必要的，它可以除去琼脂中的毒性物质或培养物中产生的芳香族代谢产物，以防止组织褐变，并刺激其增殖，但过高的活性炭含量可吸附培养基中的营养物质，使培养物营养不足，生长受阻。此外，在培养基中调整蔗糖的含量能明显促进组培苗的复壮，但蔗糖浓度过高时会导致山豆根组培苗的叶偏细长，略微弯曲，长势不佳［８］。
１．１．４．３ 培养基的ｐＨ值
用于山豆根组织培养的培养基，经高温高压消毒以及培养物在培养过程中的代谢也会改变ｐＨ值，进而会影响到培养物的生长。山豆根对ｐＨ的要求比较苛刻，一般用于山豆根组织培养的培养基ｐＨ在５．８～６．０之间［８，１０，１３］。１．１．４．３ 继代周期
不同的继代周期对山豆根的继代增值有不同的影响，其整体变化趋势是先增大后减小。继代周期过短和过长都会对山豆根的继代增值不利，前者可能是因为组培苗复壮时间不够，后者可能是由于生长高峰期已过或培养基中营养不足所致［８，１０］。
１．２ 栽培技术
１．２．１ 组培苗的选择
组培苗在培养过程中，要不断地淘汰瘦弱的苗，种子繁殖的组培苗，其繁殖代数最好在４代内，而茎段繁殖的代数也需控制在６代以内，否则会使组培苗衰老、退化，进而降低了移栽的成活率［８，１１，１２］。
１．２．２ 组培苗移栽
组培苗在培养室内培养所处的环境是人为控制的理想化环境，炼苗过程是它从异养到自养适应外界的温度和光照的过程，从而提高组培苗移栽大田后的生存能力。在炼苗过程中应尽可能提供与实验室相接近的条件，逐渐开放培养瓶瓶口，让组培苗慢慢与外界接触，不断提高组培苗适应外界环境的能力。炼苗时间过短，组培苗环境的骤变会导致叶片出现卷曲、发黄、干枯等症状，而炼苗时间过长，培养基受杂菌污染严重，部分幼苗移栽时，根部会出现易折断、腐烂等症状［８］。
１．２．３ 移栽基质的选择
移栽成活率是决定组培快繁技术是否取得成功的关键，基质的选择是决定植株成活的关键因素。山豆根是多年生药用植物，入药部位又是根部。所以应选择土层深厚、质地疏松、排水良好、光照充足的栽培基质。不同基质对山豆根组培苗后期生长存在一定的影响，以珍珠岩＋泥炭作为移栽基质的山豆根组培苗在后期生长中，植株高度明显高于珍珠岩＋黄沙＋泥炭、泥炭＋黄沙、珍珠岩＋黄沙等基质，也有文献报道采用菜园土＋菌渣（１：１）为基质，移栽成活率高达８０％以上，移栽于排水良好并经过消毒的沙床上，成活率达９０％［８，１１］。
由于山豆根对生长环境要求较为苛刻，随着移栽时间的延长，选用不同的基质都存在成活率下降的问题，所以选择能控制温湿度、通风及光照的大棚对提高山豆根的成活率很有必要［１１］。
１．２．４ 田间管理
山豆根幼苗期生长比较缓慢，而且种植株距疏，容易生长杂草，每年４月份、７～８月份和１１月份各除草１次。种植后每年施两次复合肥，每株２５ｇ，第１次在３～４月份除草后施肥，第２次在秋季９月份［９，１２］。
１．２．５ 病虫害防治
山豆根主要有两种病害：根腐病、白绢病。根腐病在发
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病初期可以用百菌清兑水５００～８００倍灌根。白绢病在发病初期可以用多菌灵兑水８００倍灌根或喷雾。
山豆根主要虫害有４种：蛀茎螟、豆荚螟、红蜘蛛、蚧壳虫。蛀茎螟可用敌百虫兑水８００倍喷雾或从蛀口灌入，豆荚螟可用敌百虫兑水８００～１ ２００倍喷雾，红蜘蛛可用吡虫啉１２００～１ ５００倍喷雾，蚧壳虫克勇敌敌畏兑水１ ２００～１ ５００倍喷雾［９，１２］。
２ 展 望
山豆根具有很高的药用价值，近２０年来，国内外学者从中发现了很多化学成分，除了生物碱和黄酮外，还有皂角、多糖、微量元素等。山豆根的市场需求不断增大，全年药厂销量在８００ｔ左右，供求出现矛盾局面，自上世纪８０年代中期广西开展重要普查时起至本世纪初，山豆根主要供医疗单位配方用药及一些中成药的生产原料用，而当时年均销量只有３０～３５ｔ之间，但是，自２００３年以后，国内开始有厂家以山豆根提取氧化苦参碱用于生产抗肿瘤新药后，市上销量便明显增多，并迅速递增，２００７年销量达２ ８５０ｔ，在５年间年均增加量为２１０ｔ，比２００２年前年平均销量最高１ ８００ｔ，升幅达５８．３％。年均增长１１．７％，而目前市场的销量仍未能满足需求［１４，１５］。因此开展山豆根引种驯化栽培技术的研究对生产发展拥有较好的应用前景，但从已有的研究看，山豆根的组培苗根部所含的苦参碱和氧化苦参碱的含量略低于实生苗，但在相同的时间内，用植物组织培养方式所获得的山豆根生物量远大于以种子繁殖的方式，可弥补其生物碱含量略低的劣势［８，１６］，目前山豆根在组织快繁技术上虽取得较大的进展，也能成功培育出大量的试管苗，并进行大面的大田栽培，但是关于山豆根组织快繁技术方面的报道还很少，说明其快繁技术研究方面还存在一些瓶颈有待突破，比如从自然界筛选生物碱含量高的山豆根进行快繁体系的建立，山豆根继代过程中，随着培养的时间增长，激素和营养物质的增多，内生菌造成的污染问题，继代材料分化能力和生长能力下降问题，玻璃化、褐化问题等。因此，建立山豆根种质资源基因库，保护濒临枯竭的山豆根资源，在全国范围内建立稳定的无性快繁体系，从而提高人工山豆根资源的产量，从而满足人们的需求。
参 考 文 献
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檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵
１８５－１８７．
（上接第５９页）间７月１５日～１７日）施用３．５ｋｇ／６６７ｍ２纯氮，磷钾肥按照Ｎ∶Ｐ２Ｏ５∶Ｋ２Ｏ＝１∶０．５∶１施用。磷肥作基肥一次施用，钾肥分基肥和倒５叶（时间６月２７日左右）促花肥２次施用，各占５０％；另基肥施硅钙肥５０ｋｇ／６６７ｍ２。
２．４ 精确防治病虫害
坚持预防为主，综合防治，在示范片建立病虫害监测点，及时地查虫情苗情定防治对象田，查发育进度定防治时期，根据防治指标，做好分类指导，精确防治，特别要注意稻瘟病、稻飞虱、纹枯病、稻纵卷叶螟和稻曲病的防治。
２．５ 精确水浆管理
移栽后７ｄ，灌浅水，干湿交替，保持田面湿润。移栽后７ｄ至有效分蘖临界叶龄期前一叶龄期（即１０．５叶，够苗８０％），浅水灌溉，水层２～３ｃｍ，并视苗情露田１～２次。从１１．５叶期（时间６月１７日左右）到叶龄余数３．５时（即１３叶期），进行分次晒田，先轻后重。晒田程度到为风吹稻叶响，叶尖刺手掌，田面开裂泛白根，中间不发白。第１３叶期（叶龄余数３．５时）到抽穗２５ｄ，浅水勤灌，以浅水层和湿润为主。抽穗后２５ｄ到成熟，以湿润为主，干湿交替，养根保叶。
３ 做好叶蘖动态调查，为技术调控提供依据
３．１ 茎蘖动态
五点法定５点，每点２０窝，拔节前每６ｄ１次，拔节至抽穗期每７ｄ调查１次，计算全田的总茎蘖数。
３．２ 叶龄动态
定点查茎蘖数的每个田块，选１个点调查１０窝主茎叶龄。
山豆根的研究概况
山豆根研究进展 赖秀平 暨南大学附属清远医院中药房广东清远 【摘要】：介绍山豆根化学成分，药理作用及毒性等研究进展,建立其安全有效的治疗窗口，最终为其安全有效用药提供有意义的参考。 【关键字】：山豆根;化学成分; 药理作用;不良反应;中毒救治
前言 山豆根为豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis Gapnep.）的干燥根及根茎，主要分布于广西、贵州、广东、江西等省。2010版《中国药典》载本品味苦, 性寒；有毒。归肺、胃经, 具有清火、解毒、消肿、止痛之功效。用于治疗火毒蕴结、咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮以及肺热咳嗽等症。故山豆根属传统“有毒中药”范畴, 但一般临床医师认为该药毒性较小, 时常大剂量或长期用药, 从而导致临床不良反应发生有递增趋势。兹对有关问题探讨如下。 概述 1 化学成分 研究表明，山豆根主要含黄酮、生物碱及多糖类成分。目前从该植物中分离得到的黄酮有高丽槐素、红车轴草苷、柔枝槐酮、柔枝槐素、紫檀素、槲皮素、染料木素、山槐素、光甘草酚、芒柄花素、金雀异黄素、槐酮、槐定、槐多色烯、sophora flavone A，sophora flavone B，baying 等［1-5］。从山豆根分离得到生物碱类成分20 多种，总生物碱1.34%～1.88% ，以苦参碱、氧化苦参碱为主，还有少量的臭豆碱、金雀花碱、N-甲基金雀花碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐氨、槐醇、(-)-14β-乙酸基苦参碱、(+)-14α-乙酸基苦参碱等［6-8］。此外，从山豆根还分离得到的多糖组分有8 种，分别为SSa-1，SSa-2，SSa-3，SSa-4，SSb-1 FA，SSb-2，SSb-3，SSc-1，它们分属于淀粉、类淀粉、半纤维素、果胶，其中淀粉的含量最多，其次为果胶类多糖［9-11］。 2 药理作用 2.1 抗肿瘤作用。对于接种的子宫癌有明显的抑制作用。山豆根对急性淋巴细胞型白血病和急性粒细胞型白血病患者的脱氧酶均有抑制作用［12］。 2.2 其中的红车轴草根苷能抑制感染植物的真菌, 柔枝槐素色烯能预防鼠生溃疡。 2.3 日本山豆根对恶性肿瘤有显著效果, 且不使白细胞减少。 2.4 山豆根碱具有良好的保肝降酶活性，能防治多种原因引起的肝功能损伤，由其提取物制成的制剂肝炎灵，目前被广泛应用于肝炎的治疗［13］。 3 毒理学研究 山豆根的毒副反应以急性肝毒性、神经毒性、胃肠道反应为主，此外还可引
《植物组织培养》课程标准
《植物组织培养》课程标准 课程名称：《园林植物植物组织培养》 课程性质：职业能力必修课 学分：3分 计划学时：45 适用专业：园艺技术、园林技术、种子生产与经营专业 1.前言 1.1课程定位 《植物组织培养技术》是一门园艺技术、园林技术等专业的基础课，也是一门实践性很强的课程。通过本门课程学习，主要培养学生将来能从事相关工作，如能够独立设计组培方案、具备培养基制备、进行无菌操作、快繁、控制污染、褐化、玻璃化等不良现象发生和分析解决问题的能力，还能够独立从事植物组织培养经营管理的工作。该课程以化学、植物学、植物生理学、遗传学等学科为基础建立起来的，为适应时代发展，结合当前高职教育改革实际，压缩理论课时，精选教学内容，增加单位时间内的知识传授量，增加实验实训课的课时。培养技能型、应用型人才，使课程教学朝着高职院校校企合作的办学模式，工学结合的人才培养模式，教学做合一的教学模式方向发展。 1.2设计思路 本课程理论课时48学时。根据植物组织培养岗位对从业人员知识、能力和素质要求，以“应用”为主旨和特征，构建课程内容模块体系。课程内容打破传统的“老三段”模式，打破学科特性，理论知识要求“必需、够用”，实践教学突出能力培养，注重知识的应用性、实践性和针对性，并以此来构建组培课结构和内容体系。在实践教学上，以“项目教学法”为主导，强化实训项目的实用性。本课程一般按照“实验室设计与培养条件要求―培养基制备―无菌操作技术―器官培养―个体植物组织培养与园艺植物栽培”的顺序进行。 2．课程目标 2.1总体目标 通过理论学习和实践锻炼，掌握植物组织培养的基本理论，能识别常见的污染、褐变、玻璃化等现象，掌握组培培养方案设计程序和器官培养要求，掌握组培各流程环节与技术要求。通过参观组培实验室，掌握组培实验室的场地选择和厂房设计的原理和方法；通过配制母液、培养基的制作、使用无菌操作技术，能熟练掌握培养基母液和激素母液的配制，并且能够独立完成培养基的制作和高压灭菌锅的使用，还要掌握不通植物材料无菌接种技术。通过个体植物组织培养的
蓝莓组培快繁技术实例 · 附配方
蓝莓（Vaccinium corymbosum）属杜鹃花科，越橘属植物。起源于北美，多年生灌木小浆果果树。因果实呈蓝色，故称为蓝莓国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。 本试验以蓝莓半木质化茎段为外植体，并通过瓶外生根技术，建立起植株再生体系。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 高灌蓝莓半木质化茎段。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 剪取蓝莓半木质化枝条，立即去掉上部叶片带回室内，剪成带有一个叶芽2-3厘米长茎段，在流动自来水中冲洗20-30分钟，在超净工作台上用75%酒精消毒2-3分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水后在0.1%升汞中消毒5-8分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水分，剪去茎段两端约 0.5-1厘米，立即接种到初代培养基中。 1.1.3 培养条件 诱导培养基：改良WPM + ZT 1.0mg/L 增殖培养基：改良WPM + IAA 0.1mg/L + ZT 2.0mg/L 复壮培养基：改良WPM + IBA 0.1mg/L WPM具体改良为：以硝酸钙 684mg/L、硝酸钾 190mg/L、EDTA铁钠 73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L代替原WPM培养基中的硫酸钾、氯化钙、硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠。 以上培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH值5.2。 培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时长为12-16时/天。
2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 将处理好的外植体立即接种到诱导培养基中，5-6天叶芽开始萌动，10天开始展叶，20天腋芽长到1厘米长，30天腋芽长到1.5-2.5厘米长。 2.2 继代增殖培养 将初代培养长出的茎剪成1.5-2厘米长茎段转接到增殖培养基中。30-35天增殖5-7倍，增殖苗生长健壮。 2.3 复壮培养 将继代苗剪成1-1.5厘米茎段，转接到壮苗培养基，复壮培养30-40天，复壮苗高5-6厘米且粗壮。 2.4 瓶外生根培养
山豆根
山豆根信息库 一、药材基原 （一）形态特征 山豆根，豆科植物越南槐的干燥根及根茎。植物形态为灌木，高1～2m，生于石灰岩山地或岩石缝中。奇数羽状复叶互生，有小叶3－7；小叶常对生，无小托叶；花组成与叶对生或顶生的总状花序；萼钟状，极偏斜，裂齿6，极短；花冠伸出萼外，白色，旗瓣狭；雄蕊10，二体（9+1），花药丁字着生；子房具长柄，有胚珠1－2颗；荚果肿胀，卵状或椭圆形，稍肥厚而呈核果状，不开裂，有种子1颗。 （二）性味功能 味苦性寒，入心、肺、大肠三经。清火解毒，消肿止痛。用于咽喉牙龈肿痛、肺热咳嗽烦渴、黄疸、热结便秘。 （三）药理作用 根含总生物碱约0.93%，其中苦参碱0.52%，氧化苦参碱0.35%，以及微量的臭豆碱和甲基金雀花碱；并含槐果碱。黄酮类化合物有紫檀素和l-三叶豆高丽槐甙，后者经酶水解得l-高丽槐素,均为紫檀素类化合物，有抗癌作用，其作用甙比甙元强，右旋体比左旋体强。另含山豆根素、山豆根查耳酮、山豆根色烯素、山豆根色烯查耳酮、山豆根色烯素、山豆根色烯查耳酮、山豆根色满素、山豆根苯并二氢呋喃素、大豆素、山豆根苯并吡喃素、4′，7-二羟基-6,8-双（3-甲基-2-丁烯）二氢黄酮、2′，4′，7-三羟基-6,8-双（3- 甲基-2-丁烯）二氢黄酮、山豆根新色烯查耳、山豆根新色烯素及柒料木素；其所含酚性物质，水解得咖啡酸和长链醇其中以C26为主，占72.4%；此外，尚含羽扇豆醇、β-谷甾醇、维生素C 和维生素B1。有报道，中性多糖由D-半乳糖和D-葡萄糖组成，其分子比为1:1。 1、抗病原微生物作用：实验表明，山豆根对金黄色葡萄球菌、絮状表皮癣菌和白色念珠菌有抑制作用，对结核杆菌有高效抗菌作用。苦参碱溶液对乙型链球菌、痢疾杆菌（F2）、变形菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌均有较强的抑制作用。氧化苦参碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、乙型链球菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用。 2、抗肿瘤作用：山豆根对恶性肿瘤有显著效果，副作用小，安全，且不使白细胞减少，试验动物一般状态良好。
《植物组织培养技术》组培技术研发
《植物组织培养技术》组培技术研发 模块介绍 本模块针对组培研发岗位的工作职责与任职要求，编排了试验方案设计和数据调查与分析二个实训项目，主要内容包括组培的基本理论、提高组培苗遗传稳定性的措施、组培试验方案的制订等，重点阐述了组培快繁的程序与类型、组培研究的技术路线与试验设计方法、组培快繁的常见问题、组培数据调查与分析方法等。在理论学习的同时，开展项目实践活动，培养学生会设计组培试验、撰写试验方案、编制组培试验观察表和技术指标统计分析，具备组培研发工所要求的理论知识、技能水平和相应的职业素质。模块结构设计见表1。 表1 模块结构设计 项目1 组培试验方案设计 一、学习目标 （一）终极目标 能够根据培养对象和培养目的科学设计试验方案。 （二）促成目标 1.熟悉信息搜集途径和文献检索方法，提高信息搜集与处理能力； 2.清楚组培研究的内容与技术路线、试验方案的体例与撰写要求； 3.熟悉组培基本理论，清楚组培快繁程序、类型与试验设计方法； 4.熟悉组培苗遗传稳定的影响因素与提高措施； 5.培养团队精神、创新意识和科学思维方法。
二、学习内容 1.组培基本理论； 2.组培快繁程序； 3.组培快繁类型与再生途径； 4.提高组培苗遗传稳定性的措施； 5.信息搜集途径与方法； 6．组培研究内容（影响因素）； 7.组培研究的技术路线； 8.组培试验设计方法； 9.组培试验方案格式。 三、知识点 1.植物细胞全能性理论（植物细胞全能性理论、根芽激素理论）； 2.组培快繁程序（初代培养、继代培养、生根培养）； 3.组培快繁类型（无菌短枝型、丛生芽增殖型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎发生型）； 4.提高组培苗遗传稳定性的措施； 5.信息搜集途径与方法； 6．组培研究内容（影响因素）； 7.组培研究的技术路线； 8.组培试验设计方法（单因子试验设计、双因子试验设计、正交试验设计）； 9.组培试验方案格式。 四、技能点 1.组培信息搜集与处理能力； 2.组培试验方案设计能力。 五、教学重点 1.细胞全能性理论； 2.组培快繁程序与快繁类型（植株再生途径）； 3.组培研究的内容与技术路线；
苹果树组培快繁技术实例 · 含配方
苹果的组织培养是采用无菌培养技术，将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、鳞片、块根和球茎等器官以及它们的组织切片进行离体培养，使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。由于离体技术处理严格，所以很容易脱除一些细菌病原及病毒，是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。苹果矮化砧、抗寒砧的组织培养也已成功。苹果脱毒组培技术流程具体如下。
一 外植体材料选择与处理 早春，将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移人温室，待新梢长出3～5片新叶时，放入热处理箱中，37℃恒温热处理30d或32℃与37℃每8h变换一次，变温热处理60d。脱毒率可达80％以上。热处理结束后，从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约2～3cm顶梢，流水冲洗10min，去掉小叶。70％乙醇浸泡30s，蒸馏水冲洗后放入0.1％HgCI。中消毒10min，无菌水冲洗3～5次，解剖镜下迅速剥取1.0mm的茎尖进行分离培养，接种于起始培养基上。
二 培养基制备 1.1 芽诱导 适宜苹果芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。诱导的芽生长正常可发育成新梢。 1.2 继代培养 选择诱导的芽丛切割成单芽茎段，转接于设计的继代培养基上。适宜的苹果继代培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖4％+琼脂0.36mg/L。培养条件：光照强度2000～ 2500lx，光照时间14～16h/d，适宜温度为25℃±2.0℃。40d后增殖6.1倍。 1.3 生根培养 选择生长正常的继代培养苗，剪成单芽茎段，插入生根培养基中，苹果适宜的生根培养基为：1／2MS+IAA1.5mg/L+蔗糖25％+琼脂0.36％。培养30d后，平均4～6条根／苗，长达0.5～1.0cm。根白且粗，多直接生于茎基部。
樱桃组培快繁技术研究
樱桃组培快繁技术研究 摘要：以甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃品种莱阳矮樱为试材，以MS与F14为基本培养基进行组织培养试验。对增殖率和成苗率等指标进行研究。结果表明，用F14做培养基3个樱桃品种茎尖组培苗的增殖系数比MS高，F14上高砂、顽童和莱阳矮樱的增殖系数分别是4．17、3．78和5．0，MS上则分别是3．33、3．22和4．17；在F14上，樱桃茎尖组培成苗率莱阳矮樱为83．3％，高砂23．3％，顽童16．7％；在F14添加植物生长调节剂的增殖培养基中，以F14+6-BA 1．0mg／L+IBA 0．5mg／L+GA32．0mg／L对高砂和顽童的茎尖组培苗增殖系数大，以F14+6-BA 1．Omg／L+IBA 0．1mg／L+GA 2．0mg／L对高砂组培苗的增殖系数大，促进节间伸长的效果好：在一步生根法培养基F14+IBA 1．0mg／L上，平均生根率高砂较顽童高；在F14+IBA 1．0mg／L上添加活性炭500～1000mg／L时，可有效提高顽童的生根率。 关键词：樱桃；茎尖；组织培养；快速繁殖 组织培养技术的发展为果树的育种工作带来许多方便，也为长期保存果树种质资源提供了新的手段?。研究表明，通过茎尖外植体进行樱桃组培繁殖，可达到快速繁殖苗木和脱去病毒病的效果。 1 材料和方法 试材为甜樱桃品种高砂、顽童．中国樱桃品种莱阳矮樱，均来自辽阳市农林科学院果树基地。试验采用F14和Ms 为基本培养基；F14+蔗糖30 L+琼脂7 L为分化培养基；F14+植物生 长调节剂为增殖培养基，添加的植物生长调节剂有6一苄基氨基嘌呤(6．BA)、赤霉素(GA )和吲哚丁酸(IBA)，具体配方见表3；F14+IBA和MS+IBA为生根培养基。F14+IBA 1．0mg／L为一步生根法培养基。F14+IBA 1．0mg／L+活性炭为试验活性炭作用的培养基。培养基的pH值为5．6～5．8，分装在lO0ml三角瓶中，在121℃下灭菌20分钟，在黑暗条件下保存备用。 1．1 试材的预处理 取樱桃芽露绿的一年生成熟枝条，剪成带一个芽、长约2cm的枝段，用刀将芽从枝段上削下来(带些木质部)，剥除芽鳞片，去除茎表皮，用洗洁精浸泡3分钟，在流水中冲洗60～90分钟，在超净工作台上用70％酒精消毒30秒钟，用无菌水冲洗3次(每次1～2分钟)，再用0．1％氯化汞消毒15分钟，置无菌水中浸泡20分钟，用无菌水冲洗4次，待接种。 1．2 试材的接种培养 在超净工作台上将经预处理的试材用镊子剥除芽外部的叶原基，去除木质部，切下1mm大小的茎尖，接种于分化培养基F14+蔗糖3O L+琼脂7 L上培养。培养温度25±2cC，光强2000～2500K．每天光照l6小时。 1．3 评价指标 微茎尖成苗数=萌发后能正常增殖继代、具有成苗能力的微茎尖数。 成苗率(％)=成苗微茎尖数／接种微茎尖数×100 增殖芽数=接种1个芽25天后增殖的所有芽数 增殖系数=转接后芽数／转接前芽数 生根率(％)=生根嫩梢数／接种嫩梢数×100 2 结果与分析 2．1 不同樱桃品种间茎尖组培成苗率的差异 在F14基本培养基上，接种甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃莱阳矮樱的茎尖，高砂的成苗率为23．3％，顽童16．7％，莱阳矮樱83．3％(表1)。在组培中发现，甜樱桃萌发率较低，接种后的第2天伤口处及茎尖边缘褐变，之后有的茎尖周围发生大量愈伤组织，延缓了茎尖的萌发及成苗时间，甚至导致死亡。而中国樱桃莱阳矮樱则萌发率和成苗率均高，组培容易。
植物无糖组培快繁技术
植物无糖组培快繁技术 一、无糖组培技术原理 无糖组培快繁技术是由日本千叶大学的古在丰树教授上世纪八十年代末发明。它是一种全新的植物组织培养技术，是环境控制技术和组织培养技术的有机结合。它以CO2代替糖作为植物体的碳源，利用工程技术手段调节组培微环境的空气、光照、温度、湿度等影响因子，促进植物光合作用，使组培植物由兼养型转变为自养型，从而促进植物的生长发育。 经大量实验研究证明，该项研究成果已成为世界领先技术。目前，中国、美国、英国、韩国等国家已将该项技术应用于种苗工业化生产中。该技术于1997年由国家外国专家局和昆明市科技局委托昆明市环境科学研究所从日本引进。 二、无糖组培技术优势 由于植物无糖组培以CO2代替糖作为植物体的碳源，对植物无糖组培微繁殖中的容器换气次数、光照强度、CO2浓度、培养基质、植物生长调节剂进行调节，并通过监测反馈结合植株生长特性建立符合植株生长要求的稳定供气系统和温度调控系统，从而解决了传统组织培养中存在的污染率高、植物生长发育不良、生长迟缓、生理功能紊乱、玻璃苗、畸形苗多等问题。据相关资料报道，无糖组培快繁技术与传统的植物组织培养技术相比，显著提高苗的质量和产苗率，可缩短培养周期，种苗生产综合成本降低。经大量实验研究证明，该项
研究成果已成为世界领先技术。 无糖组培生产工艺简单，流程缩短，技术和设备的集成度提高，降低了人工操作强度，更易于在规模化生产上推广应用。 三、无糖组培技术国内外研究进展 无糖组培快繁技术通过多年的试验研究和生产示范，在引进消化吸收国外先进技术的基础上，结合国情，昆明市环境科学研究所研制开发了无糖培养微繁殖生产的配套设施，获得三项专利。 目前，该项技术已初步应用于非洲菊、彩色马蹄莲、灯盏花、甘薯、葡萄、满天星等植物并获得成功。上述研究结果表明，无糖组培技术培育出的苗具有抽叶多、植株健壮、节间距短、根系发达、干物质积累多、光合自养能力强等优良的生物学性状。美国、韩国、英国、日本等国家已将该项技术应用于生产，并显示出了巨大的优势和良好的效果。 无糖组培快繁技术可解决传统组织培养中存在的诸多问题，显著提高种苗质量，缩短培养周期，提高产苗率，降低生产成本。但目前，该项技术在药用植物方面的应用研究，除云南农大王荔课题组报道外尚未见其它报道。
关于4种山豆根的鉴别和质量分析
论文关键词：山豆根；木蓝根；北豆根；滇豆根论文摘要：本文重点介绍了4种“山豆根”的性状、显微鉴别和山豆根与木蓝根的薄层色谱鉴别，并对四种“山豆根”的质量进行了初步的分析。《中国药典》2005年版一部收载的山豆根为豆科槐属植物越南槐(Sophora tonkinensis Gagnep)的干燥根及根茎，但是这种正品山豆根的中药饮片近几年越来越少，现在运用最多的“山豆根”是豆科木蓝属(Indigofera)多种植物的根(简称木蓝根，下同)。除此之外，《中国药典》2005年版一部收载的北豆根和《云南省中药饮片标准》2005年版第一册收载的滇豆根，在医疗单位均作“山豆根”使用。笔者现对这4种山豆根的鉴别及质量分析简述如下。 1 4种山豆根的性状鉴别 1.1山豆根根呈长圆柱形，直径0.5～1.5cm。表面棕色至棕褐色，有不规则的纵皱纹和横长皮孔样突起。根茎呈不规则结节状。质硬，难折断，断面皮部浅棕色，木部淡黄色。有豆腥气，味极苦。 1.2木蓝根根呈圆柱形，常有分枝，直径0.2～O.7(～1.2)cm。表面灰色、灰黄色或灰棕色，有时栓皮呈鳞片状剥落，有横长皮孔。质坚硬，难折断，断面皮部灰棕色，木部黄白色。气微，味微苦。 1.3北豆根根茎呈细长圆柱形，有分枝，长可达50cm，直径0.3～0.5(～0.8em)。表面黄棕色至暗棕色，无明显的节，常有须状细根，外皮易剥落。质韧，不易折断，断面纤维性，木部淡黄色，中心有髓。气微，味苦。 1.4滇豆根根茎呈圆柱形，常有分枝，长2～7em，直径0.3～0.8cm。表面棕褐色，具数个明显的节和节间，节间长0.5～2era。质硬脆，易折断，断面绿黄色至暗黄色，角质样，有光泽。气微，味苦。 2 显微鉴别2.1山豆根根横切面：木栓层为数列细胞。皮层外侧薄壁细胞有的含草酸钙方晶，继续形成含晶细胞环，含晶细胞的壁木化增厚。皮层和韧皮部均有纤维束散在。木射线宽1～8列细胞，木纤维成束，多与导管相间排列。 2.2木蓝根根横切面：木栓层为数列细胞，其细胞壁增厚成石细胞状。皮层和韧皮部均有纤维束散在，薄壁细胞有的含草酸钙方晶，皮层内有的可见石细胞。木质部宽广，木射线宽1～5列细胞，木纤维发达，导管呈放射状排列。 2.3北豆根根茎横切面：表皮细胞一列，其下面常有数列木栓细胞断续排列。皮层内有的可见单个石细胞散在。中柱鞘纤维排列成新月形。维管束外韧型，间断排列成环。髓部宽广。薄壁细胞含细小草酸钙方晶、棒晶或针晶。 2.4滇豆根根茎横切面：表皮细胞一列，皮层内可见根迹维管束，内皮层明显。维管束外韧型，间断排列成环。髓部宽广。薄壁细胞内充满淀粉粒，无草酸钙结晶。 3 山豆根与木蓝根的薄层色谱鉴别 [1][2]下一页按《中国药典》2005年版一部山豆根项下[鉴别](2)检验：分别取山豆根和木蓝根粗粉各0.5g，分别加三氯甲烷各10ml，浓氨试液各0.2ml，振摇15min，滤过，滤液蒸干，残渣各加三氯甲烷0.5mI使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。分别吸取山豆根和木蓝根供试品溶液各2μl，对照品溶液4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—浓氨试液(4：1：0.1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，山豆根在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；木蓝根在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点。 [!--empirenews.page--] 4 4种山豆根质量分析 4.1山豆根《中国药典》2005年版一部收载，其植物来源为豆科槐属 《中国药典》植物越南槐(Sophora tonkingensis Gagnep.)的干燥根及根茎，这是正品山豆根。 规定山豆根薄层色谱鉴别必须检出苦参碱和氧化苦参碱，并规定氧化苦参碱含量不得少于0.40％。 4.2木蓝根《中国药典》和《云南省药品标准》均未收载，其植物来源为豆科木蓝属(Indigofera)多种植物的根。据《中药鉴定学》记载，在陕西、河南、湖北、江苏、安徽等地曾用本品作山豆根用。现在我市大多数医疗单位使用的山豆根就是这种木蓝根。笔者按《中国药典》山豆根薄层色谱鉴别方法，检验过多批木蓝根，大部分未检出苦参碱和氧化苦参碱，仅少部分检出微量的氧化苦参碱。木蓝根与山豆根是同科不同属的植物，木蓝根植物来源、性状、鉴别等均不符合《中国药典》山豆根之规定。按照《药品管理法》，
华南紫萁组培快繁途径研究
2019年第14期现代园艺 华南紫萁（），又名贯众、大凤尾蕨，真蕨目紫萁科紫萁属蕨类植物，原产于亚热带湿润地区，常野生于山地、草丛或溪边。该种是薄囊蕨类中最原始的类群，也是现存厚囊蕨纲和薄囊蕨纲过渡的少数种类之一[1]。植株高1~2m，树形美观、姿态优雅、终冬不凋，可供庭园、绿化带栽植或室内盆栽观赏，在植物造景和生态绿化中的作用日益凸显。其嫩苗、根茎、叶柄髓部还可入药，具有清热解毒、止血生肌、健脾利湿、舒筋活络等功效。 华南紫萁普遍采用分株和孢子繁殖进行人工繁育，对环境条件要求高，且繁殖周期长，受季节限制，不能满足日益增长的市场需求。李杨介绍并提出蕨类组培存在的问题[2]；葛佳等以扇蕨茎尖为外植体，通过绿球体（GGB）途径获得了再生植株[3]；王淼等研究了不同培养基和激素配比对东北蕨菜组培快繁的影响[4]。本研究旨在探索出适宜华南紫萁离体诱导的快繁方法，为促进其高频、稳定、产业化生产提供参考依据，对缓解野生资源压力，满足市场需求，丰富生态内涵具有重要意义。 1外植体选择及预处理 以徐州生物工程职业技术学院琴湖基地成功引种的健康华南紫萁种苗为试验材料，采集带有幼孢子囊群，未完全展开的叶片作外植体。用软毛刷轻轻去除外植体表面污垢，流水冲洗30min后，转入75%乙醇浸泡20s，0.1%氯化汞振荡清洗4min，无菌水冲洗5~7次，得华南紫萁无菌幼叶孢子囊外植体。 2GGB诱导培养 将外植体首尾切除，剪成2cm小段，按照极性方向接种到B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA培养基中，培养基添加30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，每瓶1个外植体，共接种60瓶，置于光照度2000~3000Lx，14h/d，温度23~27℃，湿度75%~85%的环境下培养。10d后观察发现，培养基表面有许多散落下来的绿色小孢子，其渐渐膨大，从基部产生不规则的突起，形成绿色球状体（GGB）。培养30d，GGB诱导率可达66.67%。 3GGB的增殖与分化培养 将诱导出的GGB分割成直径为3~5mm的绿球体小块，重新接种到B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA培养基中继续培养。培养30d后发现，GGB增殖膨大明显，平均直径为2.15cm，增殖率达79.8%，但是未见有不定芽分化现象产生。将增殖后的GGB接种至1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭分化培养基中，培养过程中观察到有不定芽的分化，60d产生的平均芽数可达35个，分化率达58.3%，且叶平展健壮，生长速度较快。 4壮苗生根培养 当新生不定芽长到约2cm，带2~3片健康平展叶片时，切下单芽接种至生根培养基中进行不定根诱导。生根培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭。30d更换1次培养基，60d后观察有数条不定根产生，生长状况良好，生根率达100%，平均根数达3.5条。若将NAA浓度继续提高，不定芽基部有愈伤化趋势，生根的小苗长势缓慢、叶片发黄、状态不佳。 5炼苗移栽 将高3~4cm，具3~4根健康根系的组培苗置于温度为20~25℃、光强2000Lx，12h/d的条件下进行驯化炼苗。之后小心取出，去除根部培养基，用质量分数为0.125%多菌灵溶液清洗根部，种植于泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，用薄膜和透光率30%的遮阳网覆盖，30d后统计成活率达91.8%，小苗生长健壮。 我国蕨类植物资源丰富，种类繁多，约有2600多种，占全世界的1/5以上。多数蕨类因其高雅飘逸的体态、碧绿青翠的叶色、精美的羽片图案、精致的脉序以及别致的孢子囊群排列[5]，已成为现代园林绿化行业的一个重要组成部分。本研究提出了一种以幼孢子囊群诱导，GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法，初步建立了其离体再生体系，有效解决了现有繁殖方法的弊端，为优质华南紫萁商品种苗生产提供了方法和途径。 GGB，又称绿色球状体（），是指由蕨类植物外植体诱导得到的绿色球状分生组织集合体，接种于分化培养基上，可以获得大量蕨类植物幼苗。通过GGB诱导再生获得优质种苗，已是蕨类植物组培一种常见的研究途径。本试验以华南紫萁幼孢子囊叶为外植体，在B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上，成功诱导出GGB，继续培养可对GGB进行有效增殖，但未见不定芽分化。1/2MS配合1.0mg/L6-BA、0.1mg/L NAA及1.5g/L活性炭的情况下，分化率可达58.3%，说明低盐条件对不定芽分化的促进较明显。生根培养以1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭的培养基效果最好。在泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，组培苗成活率达91.8%，是华南紫萁组培苗移栽驯化的最佳基质。 华南紫萁组培快繁途径研究 陶佩琳1马新永2高政平1 （1徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州221000；2徐州市铜山区大彭镇农机服务中心） 摘要:以华南紫萁幼孢子囊叶为外植体，研究不同培养基对GGB诱导、增殖、分化及组培苗生根移栽的影响，初步建立了华南紫萁离体快繁体系。 关键词:华南紫萁；组培；快繁 基金项目：2017年徐州市推动科技创新项目《观赏蕨类引种驯化和商品化繁殖技术研究》，（项目编号：KC17056）。 作者简介：陶佩琳（1984-），女，汉族，江苏南通人，硕士，副教授，研究方向：植物组织培养。 试验研究 7 --
多肉万象组培快繁技术实例分享 · 附配方
万象（Haworthia maughanii）又名毛汉十二卷，为百合科、十二卷属多年生肉质植物。万象形态非常奇特，叶半圆筒状，肉质叶肥厚，属典型的珍奇观赏多肉植物。 试验以花葶为外植体，获得再生植株，并从芽诱导、芽增殖，到诱导生根的培养，已建立起完整的无性繁殖体系，本课题万象微型繁殖技术已应用于在企业生产中。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 购得的万象成熟种苗在25℃环境下培养，浇少量水，待到其抽出花葶3-5厘米时切下。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 用洗衣粉水清洗并用毛笔刷洗；在超净工作台上用75%酒精快速浸泡30秒，然后用加有两滴吐温-80的0.1%氯化汞溶液浸泡8分钟，之后用无菌水冲洗4次，每次洗2分钟。 1.1.3 培养条件 培养温度22℃-26℃之间，光照12小时/天，光照强度1500-2000lx。 2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 在超净工作台上把花葶切断，每段0.5-1厘米，接入诱导培养基（配方见文末，下同）中，培养20天左右，会诱导出愈伤组织，培养45-60天可诱导出丛生芽。 2.2 继代增殖培养 愈伤组织形成后，会在愈伤组织上萌发丛生的不定芽。在超净台上，剥离不定芽，接种于增殖培养基，培养30-40天有新的丛生芽长出。 2.3 生根培养 将长至2厘米以上的小苗，转接至生根培养基中，转接时，切净芽基部的愈伤组织。10天开始可以看到根的发生。 2.4 炼苗与移栽 小苗根长1厘米时可以出苗，移栽前在培养室中打开瓶盖练苗3天，取出生根苗，在放有800-1000倍多菌灵溶液中清洗去基部培养基。
栽培基质用新鲜湿润的蛭石，植入后遮阴，第一次不浇水。1个星期后喷杀菌剂，浇少量水。小苗移栽成活率78%。 附配方 诱导培养基：MS + KT 2mg/L + NAA 0.2mg/L + Ad 5mg/L 增殖培养基：MS + KT 1mg/L + NAA 0.1mg/L + NaH2PO4 40mg/L 生根培养基：1/2MS + NAA 0.2mg/L 以上培养基均加琼脂0.7%，诱导愈伤组织和芽以及芽增殖时加蔗糖3%，生根时加蔗糖2.5%。pH值5.6-5.8，其中NaH2PO4主要起促进芽的分化的作用。
山豆根的功效与作用
山豆根的功效与作用 山豆根为豆科植物越南槐的干燥根及根茎。山豆根又名广豆根。主产于广东、江西、广西、贵州等地。全年可采，以秋季采挖者为佳。除去杂质，洗净，干燥。切片生用。 【山豆根药性】苦，寒。有毒。归肺、胃经。 【山豆根功效】清热解毒，利咽消肿。 【山豆根应用】 1.牙龈肿痛：山豆根苦寒，入胃经，清胃火，故对胃火上炎引起的牙龈肿痛、口舌生疮均可应用，可单用煎汤漱口，或与石膏、黄连、升麻、牡丹皮等同用。 2.咽喉肿痛：山豆根大苦大寒，功善清肺火、解热毒，利咽消肿，为治疗咽喉肿痛的要药。凡热毒蕴结之咽喉肿痛者均可用之。轻者可单用，如《永类钤方》单用山豆根磨醋噙服；重者常与桔梗、栀子、连翘等药同用，如清凉散（《增补万病回春》）；若治乳蛾喉痹，可配伍射干、花粉、麦冬等药，如山豆根汤（《慈幼新书》）。 此外，山豆根还可用于湿热黄疸，肺热咳嗽，痈肿疮毒等证。 【山豆根用法用量】 煎服，3～6g。外用适量。 【山豆根使用注意】 山豆根有毒，过量服用易引起呕吐、腹泻、胸闷、心悸等副作用，故用量不宜过大。脾胃虚寒者慎用。 【山豆根现代研究】 1.山豆根化学成分：山豆根主要生物碱及黄酮化合物。生物碱有苦参碱、氧化苦参碱、臭豆碱和甲基金雀花碱等；黄酮类化合物包括柔枝槐酮、柔枝槐素、柔枝槐酮色烯、柔枝槐素色烯。其他尚含紫檀素、山槐素、红车轴草根苷等。
2.山豆根药理作用：山豆根有抗癌作用，所含苦参碱、氧化苦参碱对实验性肿瘤均呈抑制作用。有抗溃疡作用，能抑制胃酸分泌、对实验性溃疡有明显的修复作用；对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、结核杆菌、霍乱弧菌、麻风杆菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌以及钩端螺旋体均有抑制作用；山豆根所含臭豆碱、金雀花碱能反射性地兴奋呼吸，氧化苦参碱和槐果碱有较强的平喘作用；此外，山豆根还有升高白血球、抗心律失常作用、抗炎作用及保肝作用。 4.山豆根不良反应：大剂量广豆根总碱对心脏呈负性频率、负性传导作用和心肌复极化障碍，对呼吸中枢先兴奋后抑制。中毒成分可能是苦参碱和氧化苦参碱以及槐果碱。中毒时主要症状为：不同程度的头痛，头晕，恶心，呕吐，腹痛（或腹泻），四肢无力，心悸，胸闷；重者表现为面色苍白，四肢颤抖、麻木，大汗淋漓，心跳加快，血压升高，步态不稳等；继则呼吸急促、浅表，四肢抽搐，面唇青紫，瞳孔散大，最终因呼吸衰竭而死亡。山豆根中毒的主要原因是超剂量用药（大于10g）。因此，应用时应严格掌握剂量，一般以3～6g为宜。中毒救治的一般疗法为：早期催吐、洗胃；服药超过4小时，可导泻，并服活性炭。重度中毒者须用维生素c和654-2静脉滴注，或用维生素B6静脉注射。若抽搐痉挛者用氯丙嗪；腹痛剧烈者注射阿托品；昏迷者给氯酯醒，吸氧；合并血压下降、肺水肿、呼吸衰竭者则用升压、利尿和呼吸兴奋药，同时加用抗生素预防感染。 3.山豆根临床研究：据报道，山豆根在临床上尚可用于治疗多种疾病，如：用山豆根、桔梗各 4.5g，生甘草3g，治疗小儿寻常型银屑病300例，总有效率95%（北京中医1990，2：23）；用肝炎注射液（山豆根提取物）治疗慢性迁延性肝炎（CPH）和慢性活动性肝炎（CAH）各80例，总有效率CPH组82.5%，CAH组77.5%，降酶效果显着（中药新药与临床药理2000，2：68）；此外，还可用于钩端螺旋体病、白细胞减少症、痢疾、心律失常、宫颈糜烂以及绒毛膜上皮癌等。
植物组培快繁研究
（一）树型金银花组培快繁技术的研究 实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌 一、目的要求： 1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。 2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、材料用具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。 三、说明： 在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。 植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 四、方法和步骤： 首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。 对器皿和用具进行高压灭菌，即用手提式高压灭菌锅，在1.2个大气压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具在接种前还要用百分之七十的酒精棉球擦一下，再用酒精灯的火焰灭菌，冷却后即可应用。 五、作业：试阐述为什么要对器皿和用具进行严格的洗涤和灭菌？ 实验二母液的制备及培养基的配制、灭菌 一、目的要求： 通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。 二、材料用具： 高压灭菌锅、冰箱、普通及精密天平、电炉、铝锅、玻璃器皿（烧杯、量微、容量瓶、移液管、试剂瓶、三角瓶、漏斗），化学试剂(CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O， NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，
满天星组培快繁技术实例 · 含配方
满天星 Gypsophila elegans 满天星，又名为霞草、重瓣丝石竹，原产地中海沿岸，属石竹科多年生宿根草本花卉。为常绿矮生小灌木，其株高约为65～70cm，茎细皮滑，分枝甚多，叶片窄长，无柄，对生，叶色粉绿。由于它花型小、浅色、花姿蓬松具立体感，气质高雅清秀，给人以朦胧感，花序群体效果极佳，是重要的陪衬花，为当今最流行的切花之一，十分畅销。
满天星种苗多采用边生产切花，边利用植株下部发生的腋芽进行插扦获得。用这种方法，满 天星繁殖系数较低，种苗品质参差不齐，较难获得大批量的优质种苗。一些单瓣种可用种子 繁殖。商品化切花生产的，种苗繁殖以组培为主，采用茎尖培养，繁殖系数高，根系生长状 况好，花枝挺拔，色泽纯正，切花质量高。满天星组织培养繁殖速度快，生根率高，无畸形 变异，过渡苗驯化成活率高，与其他花卉组培相比，易获得成功，但普遍存在玻璃化现象。 1、初代培养 诱导培养基为1/2MS+0.3mg/L 6-BA+0.1mg/L KT+0.3mg/L NAA，或MS+1.0mg/L 6- BA+2.0mg/L KT+0.3mg/L NAA+0.2mg/L IAA，各培养基加3％～4％蔗糖0.6％～0.7％琼脂。培养温度25～27℃，光照强度2000～2200lx，光照时间每天12～16h。 剪取满天星母株上生长较粗壮的嫩梢，剪去展开叶片，留下生长较嫩的叶片，将外植体放在 烧杯中，用自来水冲洗10～20min，然后加入少量家用洗衣粉或洗洁精少许，加入少量的水，用小毛刷搅拌2～5min。用此方法重复数次，再用自来水冲洗干净满天星茎尖上的洗涤液。 把冲洗净的满天星茎尖外植体放入75％的酒精中约3～5min，再用0.1％的升汞浸泡外植体 5～7min，或在10％的漂白粉清洗液中浸泡10～15min，再用无菌蒸馏水冲洗5～7次，即得 无菌外植体，置于无菌操作台中的培养皿中待用。然后将嫩茎切成lcm左右的带芽茎段，腋 芽切取0.5～1.0cm长的茎尖，接种到诱导培养基上。
康乃馨植物组织培养(1)
《植物组培快繁技术》 康乃馨植物组织培养 实 验 设 计 小组成员：陈梅20141641044 郑莉20141641002 雷雨田20141641043
康乃馨植物组织培养 一、实验目的 掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。 二、实验原理 香石竹（学名Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨，花色艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高经济价值。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵变小，花色产生斑点，退色甚至不开花，影响切花产 量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获得“无病毒”的健康植株，对于引 进的少而新的脱毒种苗，再进行一次茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通过组织培养的方法快速繁殖，在短期内，就可以获得大量的脱毒试管苗，使引入材料迅速在生产上推广应用，取得明显的经济效益。 三、实验仪器与材料 仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、接种盘、 纱布、记号笔、标签纸 试剂：75%乙醇、0.1%升汞、无菌水、MS培养基、IAA0.1mg/L、BA0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂 材料：康乃馨带芽外植体材料 四、实验步骤 （一）培养基的配方 1、康乃馨的生芽培养基 MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L) pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10~15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3~4瓶。纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。
2、康乃馨的继代培养基 MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10-15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3-4瓶。纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 3、康乃馨的生根培养基 MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)， pH5.8-6.0,配制0.3L，用培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水10瓶，每人3-4培养瓶、纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 （二）康乃馨的生芽培养 1、无菌操作准备 将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋，换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台。用纱布吸取75%酒精擦手、擦拭超净台、擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。 2、外植体消毒 选取康乃馨叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时，将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用解剖刀切取所需组织放入大烧杯中，用75%的酒精浸泡消毒30s，用无菌水冲洗3次，再将材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分钟,然后在超净台内用无菌水冲洗6次。材料消毒完成。 3、外植体的制备 将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份,然后在无菌超净工作台上的接种盘内，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0.3mm左右。以上操作均
第一节 植物组培快繁工厂的设计
第一节植物组培快繁工厂的设计 第一节植物组培快繁工厂的设计 一、组培苗生产规模的确定 生产规模的确定首先应根据市场需求、生长的植物种类和经济实力来确定，例如，木本植物比草本植物的培养周期长，设计时必须比草本植物多增30%的空间、设备。植物种苗无糖微繁殖工厂化生产程序包括①入选品种外植体的筛选及获取; ②外植体灭菌诱导培养; ③快速 繁殖; ④生根培养; ⑤出瓶过渡炼苗; ⑥包装进入市场等工艺。一般一个熟练的接种工人根据繁殖品种的不同，年生产量可达15―20万苗。即规划一个年生产量达500万株的组培室，需设25―30个无菌操作位置。当无菌操作位置数量确定后，即可计算出接种室的需求面积。按日生产组培苗的数量及培养周期计算需要的培养架数量，以此为基础很容易就可计算出培养室的需求面积，一般为1台无菌工作台或者说一个无菌操作位置，需配备净培养面积（放置培养物的面积）7-10平方米，无菌操作室与培养室的面积比例为1：2，围绕组培工厂建设，其它必备的配套设施设备及操作用具购置的数量，应以每个无菌工作台的需求量计算，解剖刀、镊子、刀片等常用工具还要有充足的备用量。室外应有相应的温室配套，生产品种栽培展示区等，其面积的大小应根据不同的植物种类来确定。因此组培工厂的建设，需要认真规划、仔细计算、合理投资，使之既有系统性又适用，才能充分发挥最大的生产潜力。在市场竞争中，尽量降低生产成本，提高产品质量和确保品种的可靠性。 二、组培种苗工厂的设计 植物组培育苗工厂应选址在安静、清洁、可避开各种环境污染源的地方，以减少污染，降低生产成本确保工作的顺利进行。根据已确定的生产规模，设计组培生产车间时，要全面了解组培工作中所需的最基本的条件，以便因地制宜地利用现有房屋改建或新建组培工厂，尽量做到合理布局。通常按工作程序先后，安排成一条连续的生产线，避免环节错位，增加日后工作的负担或引起混乱。组织培养的生产线主要包括培养器皿清洗；培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌；无菌操作材料的表面灭菌和接种；进入培养室培养；试管苗出瓶、移栽等。各个房间的面积要合理安排，做到大小适中，工作方便，减少污染，节省能源，使用安全。图5.1所示的是一种组培生产车间设计的平面布置图： 图5.1组培生产车间的设计