鱼的急性毒性实验设计
鱼类急性毒性实验设计
一实验目的及意义
本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握
测定毒物的半数致死剂量/浓度（LD
50/LC
50
）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及计
算表示方法。
通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。
二实验原理
鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24 h、48 h．72h、96 h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。
本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率，得出剂量-死亡率曲线，求出不同时间的LC
50
。
三实验材料
1）待测化学物：使用实验室剂---重铬酸钾溶液K
2Cr
2
O
7
（Cr6+, 2000mg/L）溶液、曝气自来
水）以及助溶剂（丙酮）。
2) 实验动物：斑马鱼（从鱼市购买）：用曝气后的自来水驯养3天，补充氧气以保证溶解氧的浓度。
3）实验常用仪器设备：温度控制仪分光光度计玻璃水槽抄网（尼龙制，对照和实验容器分用）气相色谱-质谱联用 pH计(PHS-3B) 溶解氧测定仪(JYD-1A) 水硬度计温度计电子分析天平烧杯（25，50ml）移液管（1，10ml）量筒等。
四实验步骤
1、实验动物的选择。
鱼是水生生态系统的重要组成部分,是人类主要的食物来源,所以,鱼类的急性毒理资料是常用的评价有毒化学物质和工业废水对水生生物危害的资料.
实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具有代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学背景资料丰富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。
而斑马鱼是国际标准化组织(ISO)推荐的实验鱼种，其个体较小，性成熟期短，繁殖能力强，价格便宜。被广泛的应用于生命科学的研究，也是实验室标准毒理学检验最常用的实验
动物，所以本实验选用斑马鱼作为实验动物。
2. 实验溶液的制备
以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液由蒸馏水配制而成。母液最好每日配各1次，比较稳定的物质也可以两日配制1次，配好后，最好低温保存。配制好的母液可以稀释为进行毒性实验的溶液，以等比或等对数间距设置浓度系列，相临浓度比值不得超过2.2。
3、实验动物的喂养环境。
(1)实验用水使用高质量的自然水或标准稀释水，也可以使用饮用水(必要时应除氯〉。水的
总硬度为10-250mg/L (以CaCO3计)，pH为 6.0-8.5。
(2)实验周期96h。
(3)实验负荷静态实验系统最大承载量为1.0 g鱼/L。
(4)光照每天12-16h.
(5)温度与实验鱼种相适宜，变化范围土2℃。
(6)溶解氧不低于空气饱和值的60%。曝气时不能使受试物明显受损。
4、实验动物的染毒实验。
1）预试验：
○1般用 3~5 个动物,实验在2L的烧杯中进行，用对数比例形成的系列浓度, 如 0.01, 0.1, 1, 10, l00ppm, 同时做一对照（如受试物为废水, 采用体积百分比浓度, 如 0.01, 0.1, 1, 10, 100%)，以确定高锰酸钾对斑马鱼24h100%致死的最低浓度和96h不引起死亡的最高浓度。
○2尽可能使LC50在设置的浓度范围内，每个浓度设平行。
○3实验开始后每隔一段时间观察记录，整理24h、48h，72h，96h观察记录，需要统计各容器试验鱼的存活情况和行为特征，实验观察时发现死鱼需要及时捞出。
○4实验数据记录。
2）正式试验：
○1试验结束时，对照组的死亡率不得超过10％。
○2从预实验得到的无死亡浓度和100%死亡浓度之间，以实验配置好的母液以及稀释水，按照一定的间隔设置6个实验浓度组（4.5mg/L, 5.0mg/L, 5.5mg/L, 6.0mg/L, 6.5mg/L, 7.0mg/L）和一个空白对照组（曝气自来水）以及助溶剂（丙酮）对照组，每组设三个平行。
○3每组10条斑马鱼，以96h为一个实验周期，采用静水流的方式，在24h，48h，72h，96h后分别观察斑马鱼存活状况，并记录溶解氧、pH、温度情况，鱼的死亡情况及行为变化等等（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。还要及时捞出死鱼。
○4最终确定鱼死50%时受试物的浓度，半数致死浓度用24h-LC50、48h-LC50、72h-LC50、
96h-LC50来表示，判断斑马鱼死亡需要用玻璃棒轻轻按压斑马鱼的尾部，如果没有反应即认为斑马鱼已经死亡。
○4实验数据记录。
○5根据高锰酸钾对斑马鱼的致死数据计算出其平均死亡率，再转化为概率单位，求出概率单位与高锰酸钾浓度对数的回归方程，计算出高锰酸钾的LC50，数据记录在表3。
○6根据鱼类毒性分级标准，LC50<1mg/l为剧毒，1~100mg/l为高毒；100~1000mg/L为中等毒性；1000~10000mg/L为低毒，>10000mg/L为微毒或无毒。再以此判断含该化合物的废水的毒性.，具体参见下表。
关于含高锰酸钾的废水毒性实验,实验设计废水浓度100％、50％、40％、20％、10％、5％和0(CK)7个处理，3次重复。每组废水中均放入10尾斑马鱼,实验周期为96h,开始暴露前,
试验鱼逐条测量全长和体重,各组之间试验鱼的全长和体重均无显著性差异.采用自然光照,对照组和实验组同时进行试验,试验期间每24h更换一次试液.为防止饵料影响,试验期间不喂食.每两小时观察记录1次斑马鱼的生活作息;分别于4h,8h,12h,24h,48h,96h时统计斑马鱼的死亡率.
五数据计算
根据斑马鱼在各观察时间段的死亡率,计算出LC50, SC,MAC和Tua急性毒性特征参数。
(1)半致死浓度（LC50）：采用概率单位-质量浓度直线回归计算。
(2)安全浓度(SC):SC=0.1×各观察时段的半致死浓度。
(3)毒性累积程度（MAC）:MAC=某观察时段的半致死浓度差值/最初观察点与实验结束时的半
致死浓度差值×100%。分析斑马鱼对含A废水的蓄积与降减动态。
(4)急性毒性单位(Tua)=100%/LC50
(5)以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死
亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出 6 h、24 h、48 h、72 h、96 h的半致死浓度（LC50）值，并计算95％的置信限。
(6)如果实验数据不适于用标淮方法计算LC50，可用不引起死亡的最高浓度和引起100%死亡
的最低死亡浓度估算LC50的近似值，即这两个浓度的几何平均值。
六实验结果分析
附：标准稀释水的配制方法
1、制备标准稀释水前先按照下列要求配制4种溶液
(1)氯化钙溶液将11.76g CaC12 ? 2H2O溶解于水中，稀释至1L。
(2)硫酸镁溶液将4.93g MgSO4 ? 7H2O溶解于水中，稀释至1L。
(3)碳酸氢钠溶液将2. 59g NaHCO3溶解于水中，稀释至1L。
(4)氯化钾溶液将0.23g KCl溶解于水中，稀释至1L。
2、将这4种溶液各25mL加以混合并用蒸馏水稀释至1L，即配成标准稀释用水。
3、溶液中钙离子和镁离子的总和是2.5mmol/L。 Ca: Mg的比例为4: 1， Na : K 比为10:1。
稀释用水需经曝气直到氧饱和为止，然后储存备用，在使用前不必再曝气。
工业废水的鱼类急性毒性效应研究
工业废水的鱼类急性毒性效应研究 李丽君1，刘振乾*1，徐国栋2，舒阳1，曹玉珍2，齐卫华 2 (1暨南大学水生生物研究所，广州 510632；2广州市环境监测中心站，广州 510030) 【摘要】利用斑马鱼对某市六家有代表性的企业所排放的处理前和处理后的工业废水进行了急性毒性试验，以对斑马鱼的半致死浓度为评价指标，得到了六种工业废水毒性强度的初步排序，并结合理化指标分析了斑马鱼的致死原因。 实验表明，六家企业处理前工业废水的毒性大小顺序为：电子类>食品类>电镀类>电池类>玻璃类>橡胶类,96hLC50分别为：0.98%、4.73%、11.35%、13.60%、47.60% , 其中橡胶类毒性最小，100%的工业废水对斑马鱼无致死效应。处理后的工业废水毒性基本消除，但部分行业的工业废水处理后仍存在毒性。 关键词：工业废水；斑马鱼；急性毒性 中图分类号：X 503.225 文献标识码：A 文章编号：1008-8873(2006)01-043-05 Study on acute-toxicity of six kind industrial wastewaters to zebrafish LI Li-jun1, LIU Zhen-qian*1, XU Guo-dong2，SHU Yang1, CAO Yu-zhen2,QI Wei-hua2(1.Institute of Hydrobiology, Jinan University, Guangzhou 510632, China;2.Guangzhou Environmental Monitoring Centre,Guangzhou 510030,China) Abstract In this paper, acute-toxicity test using zebrafish was applied to monitoring the wastewater form six industries. Based on 96h LC50 values, the toxicity sequence of the six industrial effluents was in order of electron effluent> grocery effluents> electroplate effluent >battery effulent >glass effluent > rubber effluent. The six 96hLC50 are as follows: 0.98%、4.73%、11.35%、 13.60%、47.60%.The toxicity of the rubber effluent was the least, the 100% industrial wastewater can not be deadly to Brachydanio rerio fish. The toxicity was eliminated after management, but the toxicity of some industries were not eliminated. Key word: Industrial wastewater; Zebrafish (Brachydanio , rerio); Acute-toxicity 随着近代工业的发展，工业废水对水生生态系统及人类安全的影响日益严重，已引起世界各国的普遍关注，为了有效地控制水环境污染和保护水资源，近几十年来，世界各国都广泛地开展了工业废水及其组分的毒性评价和生物监测工作。目前我国工业废水排放的监督和管理主要以理化监测为主，这虽然能快速地定量测定某些废水中的污染物含量，但对于组分复杂的工业废水来说，就难以用理化分析方法阐明其组分和对环境的影响，而且是在没有考虑时间因素和环境因素对毒性的影响，没有考虑各毒性物质之间可能相互作用的情况下进行的，而实际情况比较复杂，理化分析并不能反映出废水的综合毒性强度。因此通过水生生物毒性试验[1、2]来反映废水的综合毒性，以此说明水质的污染状况将是一行之有效的方法。 目前被用来监测工业废水的生物主要有：鱼[3~9]、藻类[10]、大型溞类[11]、发光细菌[13，14]、虾[12]等，本研究选择国际标准化组织（ISO）推荐的五大试验鱼种之一——斑马鱼为试验生物，对某市六家有代表性的企业处理前和处理后的工业废水进行急性毒性试验，并把毒性测试结合理化测试进行比较分析，综合评价了污染源的污染程度，确定了工业废水的安全排放浓度。这对加强生物监测与评价手段，强化工业污染源的科学管理有着重要的意义。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 试验生物试验所用鱼种为斑马鱼（Brachydanio rerio），又名蓝条鱼、花条鱼，真骨鱼总目，鲤科。原产地：印度和孟加拉国。购于当地鸟鱼虫市场，平均体长 2.56 cm，平均体重为0.29 g。在连续曝气的循环水中驯养14 d以上，驯养期间无一尾鱼死亡。 1.1.2 试验器材化学惰性材料制成的水族箱（规格一致，体积适宜），采用高27 cm、直径20 cm的5000 mL 的圆形玻璃烧杯，同一试验采用相同规格和质量的容器。实验容器使用前彻底洗净。 pH计（HI-8424）等。 1.2 试验条件 试验用水为曝气24 h的驯养循环水；光照每天12 h 生态科学 2006年2月第25卷第1期 ECOLOGIC SCIENCE Feb., 2006, 25(1):43～47
鱼的急性毒性试验
鱼的急性毒性试验 一、实验目的和要求： 通过本试验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、实验原理： 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效成都，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 三、实验材料： 1.实验鱼的选择和驯养 12×6 小锦鲤鱼体长7-12cm 体宽3-5cm 体重 7-12g 不同浓度的苯酚（mg/L）0、24、48、96、192、384 2、实验仪器设备 （1）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水槽。容器体积可以根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g（最好为1g）。一些小型鱼类幼鱼可选择500ml 或1000ml烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。 （2）其他 吸光光度计 3、实验用水：曝气水 四、操作步骤： 1、设置5个浓度组，1个空白对照组，选择不同浓度的苯酚（mg/L）0、24、48、96、 192、384。每个浓度放入12条小锦鲤鱼。采用直接投毒方式，将配制的苯酚溶液直接倒入水槽中，搅拌均匀。分别分为1、2、3、4、5、6组。染毒后观察其活动状况，并
鱼类的急性毒性实验
鱼类的急性毒性实验 鱼类急性毒性试验，是水生生态毒理学的重要内容之一，并广泛应用于水域环境污染监测工作中，对控制工业废水的排放、保护水域环境、发展渔业生产，制定渔业水质标准，具有重要意义。 一、实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二、实验材料 1、试验用鱼的选择与驯养 试验用的鱼必须对毒物敏感，应具有代表性，便于在实验条件下饲养，来源丰富，个体健康。我国可采用的试验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼等。 在同一实验中要求试验鱼必须同属、同种、同龄，最好是当年生。鱼的平均体长以7cm 以下为宜。金鱼体短、身宽，一般以3cm以下较为合适。同组鱼中最大的体长不应超过最小的体长的1.5倍。 选用的试验鱼在试验前必须在实验室内经过驯养，使之适应实验室条件的生活环境和进行健康选择。驯养鱼应该与试验相同水质水温的水体中至少驯养7天，使其适应试验环境，不应长期养殖（<2个月）。驯养期间，应每天换水，可每天喂食1～2次，但在试验前一天应停止喂食，以免试验时，剩余饵料及粪便影响水质。驯养期间试验鱼死亡率不得超过5%，否则，可以认为这批鱼不符合试验鱼的要求，应该继续驯养或者重新更换试验鱼进行驯养。 试验前必须挑选健康的鱼，即选择行动活泼、体色光泽、鱼鳍舒展完整、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病的鱼作为试验鱼。任何畸形鱼、外观上反常态的鱼都不得作试验鱼。 2、实验仪器设备 （1）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水槽。容器体积可根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g（最好为1g），或者其盛水量以每条鱼2～3L为宜。一些小型鱼类幼鱼可选择500mL或1000mL烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。 （2）其他 溶解氧测定仪、水硬度计、温度控制仪、pH计、分析天平。 3、实验用水（稀释水）及水质条件 用来驯养和配制实验液的水，必须是未受污染的清洁水。一般可采用天然河水、湖水或
实验二 鱼类急性毒性实验
实验二鱼类急性毒性实验 一、实验目的 （1）掌握鱼类急性毒性实验的原理和操作 （2）掌握半致死浓度的计算方法 二、实验原理 鱼类对水环境的变化十分灵敏，运用毒理实验方法，观察鱼类在含有化学污染物的水环境中的反应，可以比较不同化学物质的毒性高低。鱼类毒性实验方法可分为静态方法和动态方法两大类。静态实验方法操作简单，不需要特殊设备，适宜于受试化学物在水中相对稳定，在实验过程中耗氧量较低的短期实验。动态实验方法要求具备一定的设备，对于在水中不稳定、耗氧量较高的化学物需要进行较长时间的实验观察时，可采用动态实验方法。本实验介绍静态实验方法。三、实验器材 玻璃缸或搪瓷桶、重金属盐、金鱼 四、实验步骤 （1）预备实验：预备实验的方法，可参考有关资料初步估计3～4个浓度，每个浓度用3～4尾鱼，观察24～48h。进行预备实验的目的是确定实验浓度的范围（找出引起实验鱼全部死亡和不引起实验鱼死亡的浓度）；观察鱼中毒的表现和出现中毒的时间，为正式实验选择观察指标提供依据。同时还要做一些化学测定，以了解实验液的稳定性、pH值、溶解氧的变化情况，以便在正式实验时采取措施。 （2）正式实验： 1、根据在预备实验中得到的浓度范围，其间距按等比级数插入3～5个中间浓度 实验中至少选择5个不同浓度，一般以7个浓度较常用，但所选择的浓度应包括有使实验鱼在24h内死亡的浓度，以及96h内不发生中毒的浓度。表中第1纵行包括的浓度最常用。 实验中无论采用何种分组方法，都必须同时设对照组。 配制实验液时应先配制少量高浓度的储备液，实验时临时稀释所需浓度的实验液。先把药液与水均匀混合后，再放入实验鱼，禁止先放入实验鱼后往实验缸中加受试药液，以免实验鱼接触到不均匀的高浓度的药液而提前死亡。
金鱼毒性试验
环境毒理学实验报告 指导老师：XXXX 姓名：XXXX 班级：XXXX 学号：XXXX
实验一金鱼毒性试验 一、实验目的： 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、实验原理： 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96 h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 三、实验材料： 1、实验鱼：小型金鱼幼苗100尾 2、实验试剂：CdCl溶液 四、实验步骤：
1．饲养管理 本实验采用2000mL大烧杯对受试鱼进行饲养。水源为进过曝气后的自来水，PH值6.2-6.7，溶解氧6-10mg/L。水温12摄氏度。空气压缩机24小时增氧，实验期间受试鱼不喂食。 2．急性实验 按照急性毒性实验方法，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和96 h 鱼类全部存活的最好浓度之间设置4个浓度组，分别是1mg/L、4mg/L、12mg/L、16mg/L。 每个试验浓度组设2个平行，每一系列设一个空白对照。试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机迅速放入各试验容器中，每个容器投放受试鱼10尾。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。 在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。 以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值，并计算95％的置信限。 2．化学物质急性毒性分级 依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧毒、高
水生生物急性毒性试验一般程序
水生生物急性毒性试验一般程序 1、试验准备 1）实验容器准备、清洁和消毒处理 ——容器：大小合适、材料无毒、不易吸附、对生物不造成损伤 2）受试生物的采集与驯化 3）稀释水（试验关键） ——来源：无污染自然水、去氯自来水、配置标准水（OECD ASTM推荐配方） ——质量控制：pH、温度、溶解氧、盐度、硬度、无其它污染物，有参比 4）环境条件：控制系统 2、实验设计 1）测试方式选择 ——可选用静止、更新式和直流式。 ——挥发性高、降解速率大化合物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式 ——BOD高的废水不能用静止式，选用更新式，最好用直流式 ——生长速率快、代谢快的生物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式 2）试验生物选择 3）被测毒物的配置 ——配成高浓度储备液 ——不溶或溶解度小用助溶试剂，如丙酮等，并设置溶剂对照，助溶试剂的毒性要小、溶解度高、实验系统用量要少，关键是要了解被测毒物的溶解度 4）生物指标确定及试验重点 5）试验浓度的设置（获得毒性数据的关键） ——文献资料 ——预备试验 ——浓度确定方式：等对数浓度 3、正式试验 1）实验浓度的配置 2）试验动物的数量 ——数量分配：5~10 ——生物量：＜0.8g/L；个体小的热带种＜0.1g/L 3）实验组数 ——5个浓度+对照（稀释水） ——5个浓度+对照（稀释水）+溶剂对照 ——对照组死亡率＜10% ——3~5个平行（不少于30个受试生物） 4）实验周期（暴露时间） ——根据试验目的和生物不同而不同 ——标准方法：藻类生长抑制试验，72h 枝角类急性毒性试验，48h 鱼类急性毒性试验，96h
5）试验终点观察：不同生物不同，同一实验相同 6）理化指标测定：温度、溶解氧、pH、硬度等 7）受试毒物浓度确定（计算得的数值VS实测） 8）实验记录 P.S.急性毒性试验期间不喂食物 4、LC50的求法 1）直线内插法——图解计算LC50、EC50的一种简便方法。在半对数纸上作图，即可求解。 2）概率单位法 依据：浓度对数与概率单位呈直线关系 方法一：查死亡率——概率单位换算表，然后作图（浓度对数——概率单位图） 方法二：直接用对数——概率纸作图 ——求直线回归方程 ——求LC50的置信区间（范围） 推荐软件：Trimmed Spearman-Karber Software/Excel/SPSS
鱼的急性毒性实验设计
鱼类急性毒性实验设计 一实验目的及意义本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握测定毒物的半数致死剂量/ 浓度（LD50/LC50）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及计算表示方法。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表 明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二实验原理鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h 为一个实验周期，在24 h、48 h ．72h、96 h 时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。 本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr 的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr 的鱼的死亡率，得出剂量- 死亡率曲线，求出不同时间的LC50。 三实验材料 1）待测化学物：使用实验室剂--- 重铬酸钾溶液K2Cr2O7（Cr6+, 2000mg/L）溶液、曝气自来水）以及助溶剂（丙酮）。 2）实验动物：斑马鱼（从鱼市购买）：用曝气后的自来水驯养 3 天，补充氧气以保证溶解氧的浓度。 3）实验常用仪器设备：温度控制仪分光光度计玻璃水槽抄网（尼龙制，对照和实验容 器分用）气相色谱- 质谱联用pH 计（PHS-3B）溶解氧测定仪（JYD-1A）水硬度计温度计电子分析天平烧杯（25，50ml）移液管（1，10ml）量筒等。 四实验步骤 1、实验动物的选择。 鱼是水生生态系统的重要组成部分, 是人类主要的食物来源, 所以, 鱼类的急性毒理资料是常用的评价有毒化学物质和工业废水对水生生物危害的资料. 实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具有代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学背景资料丰富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖
鱼的急性毒性实验设计
鱼类急性毒性实验设计 一实验目的及意义 本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握 测定毒物的半数致死剂量/浓度（LD 50/LC 50 ）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及计 算表示方法。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24 h、48 h．72h、96 h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。 本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率，得出剂量-死亡率曲线，求出不同时间的LC 50 。 三实验材料 1）待测化学物：使用实验室剂---重铬酸钾溶液K 2Cr 2 O 7 （Cr6+, 2000mg/L）溶液、曝气自来 水）以及助溶剂（丙酮）。 2) 实验动物：斑马鱼（从鱼市购买）：用曝气后的自来水驯养3天，补充氧气以保证溶解氧的浓度。 3）实验常用仪器设备：温度控制仪分光光度计玻璃水槽抄网（尼龙制，对照和实验容器分用）气相色谱-质谱联用 pH计(PHS-3B) 溶解氧测定仪(JYD-1A) 水硬度计温度计电子分析天平烧杯（25，50ml）移液管（1，10ml）量筒等。 四实验步骤 1、实验动物的选择。 鱼是水生生态系统的重要组成部分,是人类主要的食物来源,所以,鱼类的急性毒理资料是常用的评价有毒化学物质和工业废水对水生生物危害的资料. 实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具有代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学背景资料丰富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。 而斑马鱼是国际标准化组织(ISO)推荐的实验鱼种，其个体较小，性成熟期短，繁殖能力强，价格便宜。被广泛的应用于生命科学的研究，也是实验室标准毒理学检验最常用的实验
海洋鱼类水生态毒性试验方法与设计方案
本技术公开了一种海洋鱼类水生态毒性试验方法，包括：选择虾虎鱼作为试验的鱼类生物，在与测试水样水质条件相同的标准水中进行驯养，准备待测水样储备液，先通过虾虎鱼的急性毒性和慢性毒性预试验分别筛选浓度梯度范围，设置差距小的浓度梯度，以海水作为对照组，待测水样作为试验组，同时进行虾虎鱼的急性毒性和慢性毒性试验，记录虾虎鱼和环境的变化，对数据进行方差分析，绘制虾虎鱼死亡率曲线，结合虾虎鱼的体征情况和水体指标变化判断水质毒性；克服目前国内对于鱼类毒性试验研究较为单一，没有适用于含盐条件下的水生生态毒性测试方法的问题。 权利要求书 1.一种海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)在与待测水样水质条件相同的标准水中驯养海鱼； (2)以海水作为对照组、待测水样作为试验组，在不同毒物浓度梯度条件下进行急性毒性试验和慢性毒性试验，试验过程中海鱼禁止喂食，并保持对照组和试验组水质条件不变、鱼体大小相同，光照充足；其中： 所述急性毒性试验包括：将驯养后的海鱼装入1.5升海水的容器中，每组海鱼数量为10尾，每个毒物浓度梯度设置两组平行，采用流水式，水流流速为20mL/min，试验时间为96小时，保持温度为22-25℃、pH为7.6-8.0、溶解氧大于60％，并分别在0、24、48、72和96小时观察
并记录急性毒性试验过程中水质指标和海鱼生长指标的变化； 所述慢性毒性试验包括：将驯养后的海鱼装入800毫升海水的容器中，每组海鱼数量为10尾，每个毒物浓度梯度设置四组平行，采用半静态式，试验时间为7天，每间隔24小时分别从每个容器中取出150毫升溶液，再加入150毫升与试验开始设置浓度梯度相同浓度的溶液，分别在0、1、2、3、4、5、6和7天观察并记录所述慢性毒性试验过程中水质指标和海鱼生长指标的变化； (3)对步骤(2)中所得数据进行分析，判断水质毒性； 其中，所述海鱼包括虾虎鱼； 所述水质指标包括pH、溶解氧和温度； 所述海鱼生长指标包括存活数量、体重和体长； 所述毒物包括硫酸钠和萘。 2.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(1)中，所述标准水是盐度在25‰-30‰浓度的海水。 3.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(1)中，所述驯养的周期为七天，期间喂食，定期清理水中杂物，每1-2天换一次水，每次换水量控制在容器容量的1/3，试验开始前一天禁食。 4.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(2)中，所述急性毒性试验中，萘的浓度梯度为0μg/L、20μg/L、3 5.6μg/L、63.37μg/L、112.8μg/L、200μg/L，硫酸钠的浓度梯度为0g/L、3g/L、4.23g/L、5.96g/L、8.41g/L、12g/L。 5.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(2)中，所述慢性毒性试验中，萘的浓度梯度为0μg/L、20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L，硫酸钠的浓
毒理学实验一 鱼的急性毒性试验
08100049 毒理学实验一、鱼的急性毒性实验 背景知识 急性毒性实验的主要目的是确定化学物质的毒性程度、剂量―反应关系，根据待测化学物质与其它已知毒性化学物质的相对毒性,推定具体的理化性质，测定其急性毒作用,以及提供毒作用模型方面的资料。此外,这种研究也能指出化学物质可能的靶器官及其特异性毒作用,并对亚慢性毒性试验研究中所用剂量提供指南。外源化合物的毒作用往往通过某一染毒 持续时间的半致死量/浓度 (LD 50/LC 50 ), 或化学物质在空气中某一染毒浓度的半致死时间 (LT 50)，或用半数效应量 (ED 50 或 (EC 50 ) 来估计表示（注：化学物质在水中浓度对水生生 物如无脊椎动物、鱼虾的死亡不易鉴别时使用）。水生生物的急性毒性试验广泛应用于水域环境污染监测工作中, 对控制工业废水的排放，保护水域环境，制定水质标准，发展水产品的生产，具有重大意义。 受试生物的急性实验有下列四种方式进行暴露试验即静态、循环、更新、动态, 但最常用的方法是静态与动态方法。可提供下列的观测指标：①估计产生毒性作用的上限浓度，②估计不同种的水生生物对受试物的相对敏感性，③估计大量受试物的相对毒性，④估计水质对受试物毒性的影响(pH、溶解氧、盐度、硬度、悬浮物)。⑤得出浓度―反应关系曲线及暴露时间的意义,动态实验可提高保持令人满意的实验条件的能力, 而且没有时间的限制。因此它能给出暴露时间―反应关系比较完美的估计。水生生物的急性毒性的实验应当设计成为能得到计数标准的反应(有或无,生与死)，受试污染物浓度与暴露生物中受影响生物的百分比之间的关系，可画出浓度―死亡率曲线。急性实验结果可表示每一实验浓度中死亡或不 动生物的百分比; 从观察内插法或计算中得出 LC 50，或 EC 50 及相应的 95% 的置信区间。 实验目的 本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握 测定毒物的半数致死剂量/浓度（LD 50/LC 50 ）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及 计算表示方法。 实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24 h、48 h．72h、96 h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率，得出剂量-死亡率曲线，求出不同时间的LC 50 。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 实验材料与方法 1. 实验材料： 1）待测化学物：使用实验室剂---重铬酸钾溶液K 2Cr 2 O 7 （Cr6+, 2000mg/L）溶液。配制一
26种农药对鱼类的急性毒性研究
26种农药对鱼类的急性毒性研究 黄勤清 （福建农业职业技术学院，福州 350007） 摘要：以金鱼（Carassius auratus）为实验材料，研究了26种常用农药（包括18种杀虫剂、4种杀菌剂和4种除草剂）在推荐使用浓度下对金鱼的急性毒性效应。结果表明，苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis, 简称Bt）、吡虫啉、甲胺磷和多菌灵这4种农药在正常使用浓度下对金鱼无毒，而其余的22种农药则在不同程度上对金鱼产生药害，不宜在金鱼养殖厂附近农田施用或用于鱼病防治。 关键词：农药；金鱼；急性毒性 Acute toxicity of 26 pesticides to Carassius auratus HUANG Qin-qing （Fujian Vocational College of Agriculture, Fuzhou, Fujian 350002, China）Abstract:The acute toxicity of recommended dosages of 26 kinds of pesticides, including 18 insecticides, 4 bactericides and 4 herbicides, on Carassius auratus was investigated. The results showed that Bacillus thuringiensis(Bt), imidacloprid, methamidophos and carbendazim were nontoxic while other kinds of pesticides showed toxicity to C. auratus, which indicated that they should not be applied in farmlands near fish ponds or for fish disease control. Key words: pesticide；Carassius auratus；acute toxicity 我国是农业大国，农药的生产和施用量均位于世界前列，但由于施用技术相对落后，农药的有效利用率极低[1]。施用于农田中的农药通过雨水淋溶或其他途径进入水环境中，经食物链逐级浓缩后对水生生态系统构成了严重威胁，甚至最终危害到人类健康[2-3]。农药对水生生物的急性毒性和生物富集性与农药的合理施用密切相关，是农药环境安全评价的重要参数[4]。而鱼类急性毒性资料是评价有毒化学物质和工业废水对水生生物的危害最常用的依据之一。金鱼（Carassius auratus）是我国重要的观赏性鱼类，被誉为“水中皇后”，与热带鱼并称为世界两大著名观赏鱼。随着生活水平的提高，其需求量呈日益提升的趋势[5]。鉴于以上原因，本文研究了26种常用的农药在正常使用浓度下对金鱼的急性毒性，对农药在农业上使用的安全性提出建议，并为我国渔业水质标准的制定提供参考依据[16]。