樱桃的组织培养
樱桃矮化砧木组培快繁技术及脱毒研究
陶波
（甘肃农业大学生命科学技术学院09级）
摘要：本文综述了大樱桃矮化砧木组织培养及脱毒技术研究进展，重点对樱桃矮化砧木GD-1、GD-2外植体的初代培养、增殖培养、生根培养等环节进行了研究，也对樱桃茎尖脱毒技术进行了研究。以大樱桃嫩梢芽为外植体进行茎尖组培脱毒研究，结果表明：(1)筛选出的增殖培养基为MS +6–B A1.0 mg/L +NAA0.2mg/L+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，丛生芽增殖数达到6个以上。确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂3.5g/L，生根率可达75.1%。
(2)外植体进行暗培养能提高生根率，生根率达到了73%，而对照仅有57%，单株根数也从1.2条增加到了1.7条。(3)采用特异引物的RT-PCR扩增方法，对3个大樱桃品种进行了李坏死环斑病毒(PNRSV)的检测。结果表明，0.5～0.8mm 茎尖培养对李坏死环斑病毒(PNRSV)的脱毒率达78.5％；
0.5mm 以下茎尖培养对PNRSV 的脱毒率达 93.3％，证明大樱桃试管苗0.5mm 以下的小茎尖培养能有效脱除 PNRSV病毒。
关键词：大樱桃；矮化砧木；组培快繁；脱毒技术
Rearch On Tissue Culture Rapid Propation Technology And Virus-free Of Sweet Cherry
Dwarfing Rootstocks
Abstract: The paper summarized research progress on tissue culture rapid propagation and virus-free of sweet cherry dwarfing rootstocks, mainly studied crucial technology of propagating, rooting, acclimatizating and transplanting on tissue culture of the sweet cherry dwarfing rootstocks GD-1.GD-2, elementarily discussed on virus-free of cherry. The results indicated：(1)The culture medium of MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2 mg/L +sucrose 30g/L+agar 6.5g/L was screened out used to differentiate and multiply and differentiating quantities of buds up to more 6. Meanwhile, the inducing rate on culture medium of 1/2 MS +IBA 0.7mg /L +NAA0.2 mg/L+sucrose20g/L+agar3.5g/L being responsible for root growth up to 75.1% was accounted for the optim- umone.(2) The root percentage of shoots of GD-1,GD-2 was improbed by a dark treatment of explants.(3) Total RNA, isolated from three sweet cherry cultivars, was used as template to amplify PNRSV by polymerase chain reaction (PCR). The results showed the virus-free rate of PNRSV is 78.5% on 0.5～0.8mm shoot tip; The virus-free rate of PNRSV is 93.3% less than 0.5mm shoot tip, it was proved that PNRSV could be elimin -ated effectively from sweet cherry plantlets in vitro by culture of shoot tip less than 0.5mm.
Key word: Sweet cherry; Dwarfing rootstocks; Tissue culture rapid propagation; Virus-free
樱桃（Prunus）为蔷薇科樱属（Cerasus Mill.）的落叶乔木。樱桃属植物有100余种，主要的栽培种有中国樱桃（Prunus pseudoerasus Lindl.）、欧洲甜樱桃（Prunus avium L.）、欧洲酸樱桃（Prunus cerasus L.）和毛樱桃（Prunus tomentosaThub.）四个种[1,2]。甜樱桃（Prunus avium L.）即欧洲甜樱桃，又称西洋樱桃、大樱桃，原产欧洲及小亚细亚一带，德、意、法、美、英等国栽培面积较大。我国于19世纪70年代通过传教士、船员等引入烟台[3]，20世纪以来，栽培面积陆续扩大，全国各地竞相扩大
栽培，发展潜力很大。大樱桃是世界上广泛栽培的果树之一，在我国落叶果树中是继中国樱桃之后成熟最早的果品，是调节淡季水果市场的佳品。由于大樱桃外观鲜艳、济效益较高，品质好、成熟早、营养丰富、耐贮运，因此，栽培的经济效益较高，近几年得到了较快的发展。
1.1 国内外大樱桃矮化砧研究利用现状
大樱桃繁殖主要依靠嫁接繁殖，由于受到砧木问题的制约，限制了大樱桃的生产和发展。由于用中国樱桃、酸樱桃作砧木嫁接大樱桃品种存在许多弊端，例如：①树体高大（最高可达15m）难管理，“樱桃好吃熟难采”，不利于保护地栽培。②栽植前期易旺长，成花难，结果晚，进入盛果期需7-8年。③不抗根癌病、流胶病、西方X病和树干溃疡病，抗逆性差。④后期生长衰落快，产量低，品质差。因此，由于矮化栽培因具有结果早、品质好、管理方便、品种更新快等优点，已成为果树业发展的趋势[4]。
上世纪60年代英、德等国把选育大樱桃的矮化砧木列入了研究计划并付之实施，70年代以后各国陆续推出矮化砧木品种（或品种系列），美国专门成立了一个NC-140基金来研究大樱桃砧木的矮化作用及生产繁育最早是英国的东茂林试验站推出的大樱桃半矮化砧木考特（Colt）；随后许多国续推出矮化或半矮化砧木系列：如意大利的CAB 系列、法国的Edabriz系列、捷克和波兰的P-HL系列、丹麦的DNA系列、比利时的GM 系列、美国的M×M系列、俄罗斯的VC-13和VSL-2、罗马尼亚的IP-CI系列、德国的Pi-Ku系列、Weiroot系列、Gisela系列[5]等等。20世纪90年代初，西方园艺发达的国家新建的大樱桃园已普遍采用矮化或半矮化砧木。
由于矮化或半矮化砧木的应用，大樱桃的树高从过去的10m以上控制在4m左右,种植密度从每公顷300余株增加到825～1245株，进入结果期由过去的4-5年缩短为3年；进入丰产期由过去定植后7-8年缩短为5-6年，大大减少了管理用工和农药的用量，缩短了资金的回收年限，提高了经济效益 [6]。利用矮化砧木实行密植栽培是实现果树早实、丰产、优质、高效重要措施，这在我国苹果生产上已经取得了巨大的成功，但在大樱桃上尚处于起阶段。
1.2 樱桃及砧木植物组织培养研究
植物组织培养萌芽于20世纪初，1943年White提出了植物细胞全能性学说，使植物组织培养开始形成为一门新兴学科。20世纪50年代以来，植物组织培养得到了迅速的发展，广泛应用于生物学和农业科学，在农业生产上发挥了巨大的作用。我国植物组
织培养研究工作始于30年代初，1931年李继侗培养银杏的胚。1935-1942年罗宗洛进行了玉米根尖离体培养。其后，罗士韦进行了植物幼胚、根尖、茎尖和愈伤组织的培养。70年代以来，我国开展了植物花药培养单倍体育种，并在植物组织培养方面进行了大量的研究，取得了一系列的举世瞩目的成就，不少研究成果已走在世界的前列，我国的植物组织培养水平居世界领先地位 [7]。
樱桃组织培养技术始于 20 世纪 70 年代末，以茎尖、茎段、子叶、根尖、种子和花器官等器官作为外植体进行离体培养，是樱桃组织培养中一个主要的方面。同时，对胚培养、细胞悬浮培养和胚状体的诱导也进行了初步的研究；近些年，在组织细胞培养物的超低温保存以及基因工程方面也取得了一些进展。目前植物组织培养方面应用最多、最广泛和最有效的是脱毒和离体快繁，利用组织培养快速繁育砧木苗的方法大致分为培养材料的选择与灭菌、培养基的选择、芽分化与增殖继代、诱导生根和移栽等阶段。
樱桃茎尖组织培养是建立组织培养程序中一种简单易行的方法。采用茎尖培养进行快繁，繁殖系数高，成苗快，苗木整齐、一致、质量好。有关研究者先后对樱桃4个种的众多品种及变种进行了茎尖离体培养。首先是意大利的Ancora、Benvenuto、Roselli 等(1982)将樱桃砧木F12/1无性系的茎尖分生组织接种于MS培养基上，然后扩繁、生根并移栽，成功地获得植株。Isac(1983)[8]、Swir(1983)先后利用酸樱桃的茎尖进行大量离体繁殖。Wilkins、Dodds(1982)研究分析了9种生长调节剂对樱桃茎尖的生长和扩
和乙烯抑制生繁的作用，试验表明BA和IBA能促进茎尖的增殖倍数，而 KT、ABA、GA
3
长，IAA、NAA、2,4-D也能提高扩繁系数。Dradi、Vito、Standardi(1996)对马哈利樱桃(Prunus mahaleb)的11个不同生态型樱桃的茎尖进行离体培养，平均增殖系数是3.4，然而不同生态型植株的生根率和增殖系数变异都很大[9]。Buzkan、Cetiner、Yalcin-mendi等(1997)对酸樱桃和大樱桃砧木茎尖离体培养的季节进行了研究，结果显示，春季茎尖分生组织成活率最高，夏季细菌污染率比较高，秋季的成活率最低。
韩东生、吴绛云、郭淑元等（1993）对樱桃砧木Colt的茎尖培养和快速繁殖进行了研究，并对茎尖培养过程中的愈伤组织进行分离培养，获得绿色苗端，再将苗端分离培养诱导分化，实验同时获得了由茎尖腋芽原基发育增殖的幼苗和由愈伤组织再分化出的幼苗，继代增殖中使用激动素KT(0.5～1.0毫克/升)代替细胞分裂素BA(2.0毫克/升)可消除丛状苗的黄化现象，并促进芽的伸长。随后，韩文璞（1994）[10]对大樱桃茎尖离体培养和快速繁殖进行了研究并建立了高效的扩繁体系。王然、戴洪义、周爱芹（1994）对矮樱桃（中国樱桃）茎尖组培进行了研究，实验发现活性炭对试管苗的根长和侧根量
有明显的促进作用。姜淑荣、王际轩、刘志等(1996)对简化Colt砧木茎尖组培快繁技术作了研究。伍克俊、苟永平、贾福明(1997)研究了不同浓度IBA和IAA组合对大樱桃茎尖脱毒无根苗诱导生根的影响。
孙清荣、孙洪雁、赵红军(2000)中国樱桃抗病毒选系试管苗为试材,研究了基本培养基、IBA、蔗糖、光暗培养4个因素,结果表明基本培养基、IBA和光暗培养是影响试管苗产生不定根的主要因素。生根的基本培养基为1/4MS，认为减到1/3～1/4,能把生根率提高10%以上。陈君帜、李青、孙钊(2003)以中国樱桃半野生种对樱茎尖为外植体研究发现，外植体种类、茎尖大小及抗氧化剂维生C均影响茎尖初代培养成活率，0.5mm 及1.0mm茎尖培养成活率均极显著高于0.3mm茎尖，0.5mm与1.0mm茎尖之间差异不显著。初代培养取0.5mm茎尖接种为宜[11]。因为马哈利樱桃极耐寒，不传播Buckskin病，受根癌病、萎蔫病和细菌性溃疡病危害较轻，与大樱桃等嫁接的亲和力强，接口愈合良好，生长健壮，抗旱、抗寒、耐瘠薄，且抗根头癌肿病，作为优良砧木，市场潜力巨大，张志勤、肖娅萍和王喆之(2004)以马哈利樱桃（Cerasus mahaleb），进行了茎尖培养快繁[12]
1.3 樱桃脱毒技术及检测研究进展
由于病毒对樱桃危害的严重性，世界各国对病毒病害的研究和防治都极为重视，目前主要采用脱毒技术以获得脱毒苗。欧美各国已在明确病毒种类的基础上，制定出了较为完善的病毒病防治措施，并已证明栽培无病毒苗木既可有效地防治果树病毒的危害，也可显著地提高果品的产量和质量，是一项行之有效的先进技术[13]。覃兰英等经观察发现，樱桃脱毒苗生产上表现出以下特点：苗木生长健壮整齐，结果早，果实成熟期比对提前5～10天，果实个头增大近1倍以上，果品总产量提高20～60%，果实品质所改善，可溶性固形物含量稍高，果实着色度大于对照，经济效益增加1倍以上。获得脱毒苗的基本方法有4种：茎尖培养、茎尖微嫁接、热处理、化学处理。
White(1934)和Limasset等(1949)研究表明，病毒浓度呈梯度变化，病毒粒子随植物组织的成熟而增加，旺盛生长的根尖、茎尖很少有病毒分布。Morel等(1952)首次通过茎尖培养成功获得脱毒的大丽花[14]。以后茎尖培养相继用于桃、樱桃、樱花、豆樱、山樱花等植物脱毒。茎尖的成活率和脱毒率是茎尖脱毒培养的两个关键环节。褐化是降低茎尖培养成活率的首要原因。茎尖大小、取材季节、培养方式、激素浓度、基本培养基、培养基添加物都对茎尖褐化有影响。茎尖越小，褐化越严重。同等大小茎尖休眠季
节取材、液体培养、添加低浓度激素成活率高于休眠前期或生长期取材、固体培养、添
加高浓度激素。桃、樱桃、杏的茎尖在F
14，MS,LG培养基上培养，结果3个树种在F
14
培养基上成活率均高于MS,LG。应用抗氧化剂AC和Vc对茎尖培养的褐化现象可有效抑制[15]。茎尖大小、细胞分裂素浓度、继代次数影响脱毒率。不同植物种类和病毒无毒茎尖长度不相同。高浓度细胞分裂素结合多次继代可提高脱毒率。在草莓上应用二次茎尖脱毒可有效提高脱毒率，该方法可尝试用于李属植物脱毒。
采用各种办法获得的脱毒苗，必须经过严格的病毒检测确定脱毒才能推广应用。危害李属的几种主要病毒在侵染寄主后，经过各种脱毒处理，表现症状极轻微，或不表现任何症状，必须借助于其他手段来鉴定。目前常用的检测技术包括指示植物法、酶联免疫法、分子生物学技术。电镜技术应用较少。
1.4 本试验研究目标与方向
虽然目前国内外有关樱桃组培快繁的报道很多，但是由于试管苗的驯化移栽程序要求过于严格，基质的各种处理措施以及环境条件的控制费时费工，以至于试管苗的生产成本高，实用性不强，在生产上很难进行广泛推广。本试验对大樱桃矮化砧木组培快繁的几个关键技术进行深入的探讨。重点包括:通过应用不同的生长调节物质处理，创造适宜的试管微环境，来摸索脱毒樱桃矮化砧木外植体快速与高效生根技术；矮化砧木与品种试管苗茎尖脱毒技术及检测。
2 材料与方法
2.1 试验材料
材料选用从美国引进的樱桃矮化砧木GD-1和GD-2(吉塞拉系列)和从意大利引进的脱毒半矮化砧木ZY-1为对照。
2.2 试验方法
2.2.1 外植体的消毒
取GD-1、GD-2、ZY-1品种一年到两年生的休眠枝条，放入培养箱，经水培后取其萌发的嫩芽。先将外植体用洗涤剂水浸3min后，流水冲洗60～90min，然后用70％酒精浸泡30秒，无菌水冲洗8次后，用0.1％升汞(HgCl
2
)灭菌，一般灭菌5～8min。2.2.2 茎尖脱毒
灭菌后剥取生长点，利用解剖针在解剖镜下剥除顶芽及侧芽外部鳞片、幼叶和叶原
基，使生长点露出，然后切下顶端1.5mm以下生长点分生组织部分（设3个处理，每处理30株，见表5），作为培养材料，用无菌滤纸吸干，接种于初代培养基上。初代培养
0.5mg/L蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，调节pH值至基为MS +6- BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA
3
5.8，培养温度25℃，光照强度2000lx～3000lx，每天光照14h。
2.2.3 试管苗的增殖培养
将丛生芽或带1～2个芽的茎端转入增殖培养基上增殖，增殖培养基为
0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，设10 MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.3mg/L+GA
3
个处理，3次重复，培养40d后，统计芽苗分化率。
2.2.4 试管苗的生根培养
丛生芽在增殖培养基上生长到2～3周后，取苗高2.0cm以上的新梢转移到生根培养基上进行诱导生根。生根培养基为1/2MS+IBA0.2～1.4mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L，设6个处理，3次重复；1/2MS+IBA0.3～1.0mg/L+NAA0.1～1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L，设7个处理，3次重复，培养20d后，统计芽苗生根率。
另外将2cm左右高的GD-2外植体接种于生根培养基中，在人工气候箱内黑暗的条件下培养一周，再置于正常的光照条件进行生根培养。设4个处理每处理30株（见表4），40天后调查生根率和单株根数。
2.2.5 脱毒苗的RT-PCR检测
取大樱桃坏死环斑病毒(PNRSV)的带毒叶片、非带毒对照的叶片和试管苗（每处理取30株）的叶片冰冻于-70℃冰箱中，备用。以指示植物法摩擦接种后具有典型坏死环斑症状的带毒叶片的总RNA为阳性对照，以指示植物法摩擦接种后无典型坏死环斑症状的非带毒叶片的总RNA为阴性对照。对大樱桃试管苗茎尖分生组织培养进行RT-PCR检测。
3 结果与分析
3.1 不同培养基对大樱桃试管苗生长的影响
3.1.1 试管苗增殖中的激素配比对生长的影响(加0.5mg/L的GA)
表1 试管苗茎段增殖中的激素配比对生长的影响(加0.5mg/L的GA)
激素浓度(mg/L) 生长状况
6-BA NAA IAA IBA
0 0 0.5 0 较缓慢，腋芽发出
0 0.5 0.2 0 较缓慢，腋芽发出
1.5 0 0 0.3 茎段逐渐枯死
0.8 0 0 0.2 腋芽抽出但不健壮，生长一般，有畸形叶，叶柄处有愈伤
1.0 0.2 0 0 茎段基部有愈伤，生长比较缓慢，有畸形叶，分叉成枫叶状
1.0 0 0 0.2 成活但生长一般较慢
1.0 0 0.5 0 腋芽膨大变绿，生长较慢
2.0 0.4 0 0 茎段基部膨大，有少许愈伤，腋芽小叶长出，生长迅速。
0.5 0.2 0 0 茎段，生长极慢
1 1.
2 0.
3 0 转入绿色茎段变褐
从试验结果(表1)看，樱桃试管苗茎段增殖以MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.4 mg/L为培养基的茎段增殖效果最好。实验中发现，基部有少许愈伤的茎段生长一般较好。以MS+6-BA1.0 mg/L+IBA0.5 mg/L为培养基的茎段带愈伤茎段转入培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L后生长停止，再转入以MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L为培养基的茎段生长变化不大，成活但生长停滞。培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L 直接转入培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA 0.2 mg/L有少量腋芽长出。培养基MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L 所接茎段成活但长得慢可能是由于IAA的作用没有NAA强烈。以MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.2mg/L+GA为培养基的茎段茎段叶柄拿掉后的伤口处长出愈伤组织，培养基MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.2mg/L+GA去除赤霉素后，接带芽茎段生长良好，也健壮，叶柄处无愈伤,但茎段切口处有愈伤组织包被形成。可能是赤霉素有促进愈伤组织的形成，但叶柄处过多的愈伤组织影响了腋芽的萌发生长。培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L细胞分裂素和生长素二者浓度都较高，比值也较高，因此腋芽萌动生长快。
3.1.2 IBA和NAA对试管苗生根的影响
表 2 不同浓度的 IBA 对大樱桃生根的影响
IBA 浓度（mg/L）生根率(％) 平均根长(cm)
0.2 17.1 0.7
0.4 24.8 1.1
0.6 35.4 2.4
0.8 48.2 2.8
1.0 51.6 3.4
1.4 20.3 1.7
实验中发现，继代增殖的试管苗转入生根培养基的试管苗26天后已有七条1.5cm长的根。表2结果表明，用IBA诱导生根时，其最佳处理浓度为1.0mg/L。IBA在0.2～1.0mg/L 的范围内，随浓度增加、生根率及平均株高均增加，且在IBA浓度为1.0mg/L 时达最大值，生根率及平均根长分别为51.6％及3.4cm，当IBA浓度超过1.0mg/L时，
生根率及平均根长有所下降，IBA浓度为1.4mg/L时，生根率仅为20.3％，仅比IBA0.2 mg/L的生根率增加3.2％。
表 3 不同浓度 NAA 和 IBA 组合对大樱桃幼苗生根的影响
培养基生根率％
IBA0.3mg/L+NAA0.1mg/L 19.3
IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L 27.4
IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L 75.1
IBA1.0mg/L+NAA0.2mg/L 67.2
IBA0.5mg/L+NAA0.2mg/L 9.7
IBA0.7mg/L+NAA0.5mg/L 70.6
IBA1.0mg/L+NAA1.0mg/L 28.5
从表3可以看出，生根培养基中激素的种类和用量，对生根的影响较大，以MS+6-BA0.7mg/L+NAA0.2mg/L为生根培养基时，生根率最高，可达75.1％。试验中发现，转入生根培养基10d左右，幼苗基部出现多个瘤状小突起，进而长出幼根，20d后根可长到3cm左右，根系生长健壮且柔软不易折断，根系洁白正常。
3.2 暗培养对试管苗生根培养的影响
表4暗培养对樱桃矮砧外植体GD-2生根的影响
培养基生根率(％) 根数(条)/株
光培养暗培养光培养暗培养
l/2MS+NAA0.3mg/L+IAA1.0mg/L 57 73 1.2 1.7
l/2MS+NAA0.4mg/L+IAA1.0mg/L 54 67 1.1 1.4
l/2MS+NAA0.3mg/L+IAA1.5mg/L 40 60 1.3 2.0
l/2MS+NAA0.4mg/L+IAA1.5mg/L 42 64 1.2 1.6 本试验将生根难的GD-2外植体接种于几个效果较好培养基上，进行一周的暗培养，结果(表4)发现，不同培养基中的外植体进行暗培养后，都能明显地提高生根率，增加单株根数。其中处理为l/2MS+NAA0.3mg/L+IAA1.0mg/L的外植体经过暗处理后，生根率达到了73%，而对照仅有57%，单株根数也从1.2条增加到了1.7条。
3.3 试管苗的脱毒检测
表 5 外植体大小对大樱桃病毒脱除效果的影响
处理脱毒苗（株）脱毒率(％)
0.5mm以下茎尖培养 28 93.3
0.5-0.8mm茎尖培养 24 78.5
0.8-1.5mm茎尖培养 16 54.3
检测大樱桃茎尖分生组织培养脱去PNRSV的结果（表5）发现，0.5mm以下小茎尖的脱毒率为93.3%，0.5～0.8mm则脱毒率为78.5%，0.8～1.5mm脱毒率仅为54.3%。茎
尖愈小脱毒率愈高的原因是：小茎尖分生组织尚未形成微管束，病毒无法感染。0.5mm 以下的小茎尖分生组织培养脱除病毒较彻底。
4 结论与讨论
4.1讨论
4.1.1 不同培养基对试管苗增殖培养的影响
一般樱桃组织培养多以MS为基本培养基，且不同外植体、不同激素和配比对樱桃芽分化有不同的效果。由于茎尖对激素反应更敏感，且其本身又有较高的内源激素水平，因此，在不同研究者的结果中，适合其分化生长的外源激素浓度差异较大。通过试验筛选出增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA
0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，
3
丛生芽增殖数达到6个以上。
4.1.2 不同培养基对试管苗生根培养的影响
樱桃茎尖脱毒培养在生产上的应用和推广前景广阔，但樱桃试管苗生根较难，生根率最高者仅达75.1%，试验中发现不同品种之间差异较大，分析原因主要与培养条件和取样时间制约，也可能与樱桃成熟植株本身的发育阶段有关，基因型可能是主要差异原因。确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L，生根率可达75.1%。
4.1.3 暗培养对试管苗生根培养的影响
外植体进行暗培养能提高生根率，究其原因是暗培养一方面能增加天冬氨酸、赖氨酸、脯氨酸等游离氨基酸的含量，促进细胞的脱分化;另一方面可以抑制生长素的光氧化作用，提高生长素的含量和活性。
4.1.4 试管苗的茎尖脱毒技术研究
病毒浓度呈梯度变化，病毒粒子随植物组织的成熟而增加，旺盛生长的根尖、茎尖很少有病毒分布。茎尖愈小脱毒率愈高的原因是：小茎尖分生组织尚未形成微管束，病毒无法感染。0.5mm以下的小茎尖分生组织培养脱除病毒较彻底。
4.2 结论
本试验结论如下:
0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼
1. 筛选出的增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA
3
脂7g/L，丛生芽增殖数达到6个以上。确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L，生根率可达75.1%。
2. 外植体进行暗培养能提高生根率，生根率达到了73%，而对照仅有57%，单株根数也从1.2条增加到了1.7条。
3. 采用特异引物的RT-PCR扩增方法，对3个大樱桃品种进行了李坏死环斑病毒(PNRSV)的检测。结果表明，0.5～0.8mm 茎尖培养对李坏死环斑病毒(PNRSV)的脱毒率达78.5％；0.5mm以下茎尖培养对PNRSV的脱毒率达93.3％，证明大樱桃试管苗0.5mm 以下的小茎尖培养能有效脱除PNRSV病毒。
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植物组培培养基的成分
植物组培培养基的成分 培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。 大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。 人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。 怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地
用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。 植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分 水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。
植物组织培养的培养条件
植物组织培养的培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。 一、温度(temperature) 因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23～27℃之间进行，一般采用 25±2℃。低于15℃时培养，植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。白鹤非的最适温度是20℃、月季是25～27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28℃为最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。 不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在2～5℃条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～5d，可得到无病毒苗。 二、光照(light) 组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面： 1、光照强度(light intensity) 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。 2、光质(light wave) 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 3、光周期(light period) 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而
组织管理能力
组织管理就是通过建立组织结构，规定职务或职位，明确责权关系，以使组织中的成员互相协作配合、共同劳动，有效实现组织目标的过程。组织管理是管理活动的一部分，也称组织职能。组织管理能力是指为了有效地实现目标，灵活地运用各种方法，把各种力量合理地组织和有效地协调起来的能力。包括协调关系的能力和善于用人的能力等等。组织管理能力是一个人的知识、素质等基础条件的外在综合表现。现代社会是一个庞大的、错综复杂的系统，绝大多数工作往往需要多个人的协作才能完成，所以，从某种角度讲，每一个人都是组织管理者，承担着一定的组织管理任务。 组织管理的工作内容，概括地讲，包括四个方面： 第一，确定实现组织目标所需要的活动，并按专业化分工的原则进行分类，按类别设立相应的工作岗位； 第二，根据组织的特点、外部环境和目标需要划分工作部门，设计组织机构和结构； 第三，规定组织结构中的各种职务或职位，明确各自的责任，并授予相应的权力； 第四，制订规章制度，建立和健全组织结构中纵横各方面的相互关系。 组织管理能力的培养和训练首先要学习沟通技巧，要把握任何一次学习的机会。另外通过公司培训的方式也是必不可少的，比如大势管理顾问公司 一、要有自信的态度 组织管理者要有自己的想法和作风，但却很少对别人吼叫、谩骂，甚至连争辩都极为罕见。他们对自己了解相当清楚，并且肯定自己。 二、体谅他人的行为 所谓体谅是指设身处地为别人着想，并且体会对方的感受与需要，在经营“人”的事业过程中，当我们想对他人表示体谅与关心，惟有我们自己设身处地为对着想。 三、适当地提示对方 产生矛盾与误会的原因，如果出自于对方的健忘，我们的提示正可使对方信守承诺；反之若是对方有意食言，提示就代表我们并未忘记事情，并且希望对方信守诺言。 四、有效地直接告诉对方 若能有效地直接告诉你所想要表达的对象，将会有效帮助我们建立良好的人际网络。 五、善用询问与倾听 一位优秀的沟通好手，绝对善于询问以及积极倾听他人的意见与感受。在许多人与人接触以及沟通的机会里，如果我们能随时随地仔细观察并且重视他人情绪上的表现，慢慢就可以清楚了解他人的想法及感受，进而加以引导激励。 一个人的成功，20%靠专业知识，40%靠人际关系，另外40%需要观察力的帮助，因此为了提升我们个人的竞争力，获得成功，就必须不断地运用有效的沟通方式和技巧，随时有效地与“人”接触沟通，只有这样，才有可能使你事业成功。
2.植物离体繁殖(植物组织培养)
第二章植物离体繁殖 植物离体繁殖: 利用组织培养技术对外植体进行离体培养，短期内获得遗传性一致的大量再生植株。也叫快繁或微繁。 和传统方法突出特点： 1、繁殖效率高:增值率高，生长速度快，可周年生产，在一个短暂的时间，由单一个体开始，能产生出大量的遗传组成相同的植株。（如苹果矮化砧木茎尖8个月可繁殖6万株，石刁柏一个腋芽一年可繁殖７万株） 2、培养条件可控性强：人为提供培养基及小气候，便于对环境进行控制，省去田间栽培繁杂劳动。 3、便于管理、占地面积小：30m2可存放1万多培养瓶，约10万多苗木。 4、利于种质资源的保存及交换。 快速繁殖的应用 （1）短期内获得大量形状优良、整齐一致的种苗群体。加快引进新种、新育良种的繁殖，促进优良品种推广和应用。（2）大量繁育原来常规方法不能进行无性繁殖、难繁殖和繁殖速度慢的一些植物，尤其对一些珍、稀、濒危的植物的繁殖有更重要的意义。 （3）作为培育新品种的有效手段，繁殖和保存育种材料。如远缘杂种、多倍体、突变体。 （4）通过茎尖培养等技术脱毒，扩增脱毒苗，达到提纯复壮良种的目的。 一、植物快繁的器官形成方式 由于植物种类不同，器官再生及快速繁殖的方式也不同。 1、短枝发生型：外植体为带叶单芽茎段，培养为完整植株。 特点：一次成苗，培养过程简单，容易移栽成活，遗传性状稳定。例如：葡萄、红薯等试管苗繁殖。 2、器官型：外植体带有顶芽或腋芽。培养后形成丛生芽，转入生根培养基，诱导生根成苗，扩大繁殖。 特点：由单芽到丛芽，繁殖速度快，遗传性状稳定，多数花卉、苗木的快繁属于此类。 3、器官发生型：直接由外植体上或从愈伤组织产生不定芽，经过脱分化与再分化成苗。 特点：繁殖速度快，由愈伤组织再生植株，遗传不稳定。烟草、水稻、小麦、番茄等。 4、胚胎发生型：外植体脱分化产生愈伤组织或细胞团，再分化为胚状体产生小植株（球形期、心形期、鱼雷期、子叶期）特点：发生数量大，速度快，结构完整，人工种子繁殖，遗传变异。 5、原球茎发生型：兰科。 茎尖或腋芽外植体通过形成原球茎，而发育为完整植株。 二、植物快繁的程序和关键技术 离体无性繁殖的程序包括：无菌母株的制备，继代芽的增殖，芽苗生根培养，再生植株的锻炼和移栽。 1、无菌母株的制备 初代培养：在无菌条件下，制备无菌繁殖的材料称为无菌母株，或繁殖母株。 选取遗传性状优良、稳定，生长健壮、无病虫害植株上的外植体，经适当有效灭菌处理后，接种在培养基上，诱导其产生芽（腑芽或不定芽）和愈伤组织。 注意:培养基激素配比，取材的年龄、大小和生理状态。 初代培养的启动生长方式:腋芽被刺激后生长;茎段、叶片、其它器官伤口处产生不定芽；外植体切口产生愈伤组织。此阶段一般需要4-6周。 ↗愈伤组织 2、继代芽的增殖 无菌母株再次切割继代培养，芽分化增殖成丛芽，加快繁殖速度。 在快速繁殖过程中，随培养时间和继代次数增加，芽分化和生长速率降低，称为驯化现象，与内源激素和恒定培养条件有关，故可以调节激素配比或变温处理，提高繁殖速度。 3、芽苗生根培养 诱导无根苗生根的方法有两种：试管内生根和试管外生根。 1）试管内生根：将无菌小枝条转入生根培养基中进行培养。 提高生根率的措施： ①降低无机盐和有机物含量（如1/2MS或1/4MS培养基）
怎样才能提高组织能力
怎样才能提高组织能力 来源:亦锐营销策划 组织和个人有着极其微妙的关系，如果我们不能够很好地管理组织，那么对于个人来说是极其痛苦的事情。 人类为了生存和发展，需要有组织（有共同目标的人群集合体），因此，怎样提高组织能力就成为管理中永恒的主题之一。 组织的理解 了解和关注组织是每一个人必须掌握的知识，尤其是管理者。我之所以这样认为，是因为大多数在组织里工作的人们并不理解什么是组织。这样导致的结果是：很多在组织里的人并不开心，更多的人认为他们被组织抹杀掉。查尔斯·汉迪说：“在我看来，有时候组织会成为禁锢人们灵魂的监狱。我自己在组织中工作时常常会有这种体验。”这位被称为组织管理大师的人这样来描述组织，也让我们了解到组织和个人有着极其微妙的关系，如果我们不能够很好地管理组织，那么对于个人来说是极其痛苦的事情。 在我看来：组织的存在是为了实现目标，组织管理的存在是为了提升效率。 组织的属性决定了组织自身有着自己的特点，作为一个需要对目标和效率做承诺的人的集合体，我们需要还原组织自己的特性，因此对于组织的正确理解是： 第一，“公司不是一个家” 在现实的管理当中，我们的管理一直存在一个非常错误的观点，认为公司就是一个家，一直以来，很多管理者认为需要成为“父母官”，很多人都认为“应该以公司为家”，但是这些观点其实是非常不对的。公司到底应该是什么样的状态，我们还是需要回归到组织本身的属性上。当一个人与组织联结的时候，对于这个个体来说，组织和个人的关系如何理解就变得非常重要。当我们说“公司不是一个家”的时候，就表明组织不会照顾个人，也就意味着在组织中我们是用目标、责任、权力来联结，而不是用情感来联结的。 组织有正式组织与非正式组织之分。正式组织就是指运用权力、责任和目标来联结人群的集合；非正式组织是指用情感、兴趣和爱好来联结人群的集合。我们在管理概念下主要是谈正式组织，因为当说到组织管理的时候，应该就是谈论责任、目标和权力，所以，组织理论从简单的意义上讲，就是探讨责任与权力是否匹配的理论，组织结构设计从本质意义上讲就是一个分权、分责的设计。所以当我们理解组织的时候，也就意味着对于组织而言，不能够谈论情感、爱好和兴趣，不能够希望组织是一个“家”。我们只能够抱歉地告诉人们组织不是家，组织更注重的是责任、权力和目标，当目标无法实现的时候，组织也就没有存在的意义，而组织中的人也就失去了存在的意义。 上课的时候，我常常问大家一个问题—“家庭是什么样的组织”，在这个时候，很多人都不确定家庭是正式组织，真是奇怪的现象。但是为什么会出现这样的情况呢？因为家庭是一个非常奇特的组织，从组织属性上讲家庭是正式组织，但从管理的属性上讲家庭是非正式组织管理。所以回到家里，一定要讲情感、爱好和兴趣，千万不要讲责任、目标和权力。可是我们常常看到的情况是反过来的，到家里人们大讲责任、权力和目标，在家里争论谁的权大，责任应该是谁的，而且为家庭设计了非常高的目标。结果发现，家里人常常因为谁说了算大伤感情，
兰花组织培养技术
兰花组织培养技术 摘要：在适宜的条件下，将兰花植株的外植体在无菌环境中应用人工培养基，通过外植体的采集与处理、培养基的制作、外植体的接种、继代增殖以及驯化移栽等操作技术，可在短期内获得大量幼小的无病毒植株，从而达到增殖扩繁的目的。组织培养技术是经济有效快速繁殖优良品种的方法，也是产生脱毒苗的重要途径。 关键词：组织培养兰花外植体试管苗 花属兰科多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价值和经济价值，深受人们的喜爱。此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。 兰花在植物分类学上属于单子叶植物中的一个科，为多年生草本植物，附生、地生或腐生。兰花根呈圆柱状，属肉质组织，茎很短，高度约为2～3cm，兰叶大多叶边全缘，有的略有锯齿。其花属于不整齐花范畴，总状花序。兰属植物的果实为蒴果，呈三角或六角形，俗称“兰荪“。 一、无菌培养物的建立 （一）培养容器的洗涤及培养基的制作 1.培养容器的洗涤 容器的洗涤是否干净直接影响组织培养的成败，为保证培养材料在瓶内生长健壮，在培养前期一定要对容器进行彻底的洗涤与灭菌。以达到“瓶壁锃亮、水膜均匀，不挂水珠”为标准。洗涤时用洗衣粉水洗刷，再用清水冲洗3～4次，干燥后备用。 2.培养基的制作 培养基是植物组织培养的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到外植体的生长于分化。组培快繁中最常用的培养基主要是MS培养基。母液要根据药剂的化学性质分别配置，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类母液。其配置方法是先进行大量元素的配置，称量时应注意多余的药品不能回放在瓶中，应做其它处理。电子天平在使用时先对其进行调平，然后进行微量元素母液、有机物母液的配制。 当MS母液配好以后，则可进行培养基的制作，继之对琼脂和蔗糖进行称取、溶解，琼脂呈现半透明状时将糖加入容器中溶解，再加入事先吸取好的各类母液混合均匀后转入1L容量瓶中对其进行定容，然后根据培养基的要求对PH进行调整（PH值控制在5.6～5.8测定不得少于3～4次）。进行分装时，一般以培养瓶的1/4～1/3为宜，分装后立即进行灭菌。
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
百合的组织培养
百合的组织培养 【摘要】将百合鳞片的不同部位接种于加油不同激素和不同浓度BA和NAA 的6种培养基上，一周后接种的百合鳞片开始变绿，2周后，鳞片的受伤部位出现绿色的愈伤组织,，再经2—3周培养，产生愈伤组织的部位逐渐形成小鳞茎，并开始有叶片长出。其中2号培养基MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L的分化率最高。实验结果表明，鳞片的不同部位分化能力也有差异，其中下部分化效果最好；激素6-BA和NAA浓度的配比，与鳞片分化小鳞茎的速度、数量和质量有着重要的关系。 【关键词】百合；鳞茎；组织培养 1.百合的简介 百合是百合科百合属（LiliumL.）各个种、杂交种、园艺品种的总称。它是著名的球根花卉，其地下部分为众多肥厚鳞片组成的鳞茎。百合花花姿优美，花大色艳，历来深受世界各国人民的喜爱，为世界名贵切花之一，广泛用于盆栽、花坛、花境及专类园。从考古文物中发现百合花用作观赏已有三千六百五十多年的历史。此外，多种百合的鳞茎、茎、花、种子均可入药，百合的鳞茎及花营养丰富，可制作多种美味佳肴。芳香的百合可提取芳香油制成香料。全世界百合属植物约一百种，起源于我国的就有四十七种和十八个变种，占世界百合属植物的一半以上。 1.1实验目的和意义 传统的花卉繁殖是靠播种、扦插、分株、压条、嫁接这些措施来实现的，然而在花卉业迅猛发展的今天，传统的育种技术已经无法满足生产需要，因而人们对花卉的繁殖技术提出了更高的要求。在世界各国植物生理工作者的努力下，利用组织培养进行花卉繁殖的技术日趋成熟。目前已有很多花卉可以利用组织培养为花卉提供种苗。今天，我们所享用的花卉产品之所以能够如此之高的品质，与花卉组织培养的应用不无关联。 百合植物资源丰富，栽培历史悠久，花色多样，它不仅适用于庭院栽培，布置花境，也可盆栽观赏，并早已成为花卉研究领域的佼佼者。百合虽然观赏性很高，但大多抗性很弱，尤其抗寒性。一般在东北地区种植商品百合时，每年秋季必须起球，窖藏或者冷库存放，这大大增加了百合的生产成本，限制了东北地区花卉业的发展。随着百合在国内外鲜切花市场的走俏，百合花生产和消费逐年增加，但由于百合种球繁殖率底，病毒侵染造成退化，难于满足切花生产需要。目前主要采用组织培养进行百合脱毒和快繁，以促进百合商品种球的生产。但是百合试管苗小鳞茎较小，结鳞茎时间较长，移植成活率低，制约了工厂化商品生产。 目前国内繁殖百合主要通过进口鳞茎进行繁殖。但是市场售价较高，而且有时鳞茎质量难以保证、繁殖率低易造成鳞茎退化。采用组织培养的方法在很短时
植物组织培养试题与答案(集合版)
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。
(完整版)组织能力与领导能力怎么提高
组织能力与领导能力怎么提高 企业管理人员要提高领导能力，必须具备胜任管理职位的工作能力，必须培育非履行职权的人格魅力，必须拥有健康的体魄和心理。通过正确履行职权和人格影响，吸引部属主动跟随，有效调动部属的积极性、主动性和创造性，带动部属完成各项工作目标，推动企业不断向前发展。 组织能力与领导能力怎么提高 第一，提高领导能力要与时俱进，提高学习能力。 联合国教科文组织曾提出一个标准：不能自学的人是现代文盲。新的形势总是在不断变化，如果将工作思维局限于过去掌握的知识或积累的经验，工作总是老一套，欠缺创新精神，就跟不上新要求。领导干部要主动学习，不断充实，掌握相当的文化知识、专业知识、管理知识与工作经验，提高自身能力素质，提高领导管理能力，适应新形势工作需求。其次，领导干部具备良好的学习素养，也是获得青年员工认可，与青年员工打成一片的有效途径。目前，越来越多的80后、90后逐渐 成长为企业的中坚力量。这些青年人思维活跃、爱好广泛。作为领导干部如果不能说出一些青年人热衷的事物，不能接受和理解新的流行时尚元素，是很难与这些青年员工形成共鸣，那么员工对于你的领导可能只停留在被动服从的层面，无法真正打心眼儿里接受和认可你的思想，也就无从实现主动跟随。 第二，提高领导能力要以身作则，工作充满激情。 近几年来，我更加深刻体会到：工作需要激情。一个人如果没有激情投入工作，就缺少了内在动力，干什么都是被动的，马马虎虎应付，很难取得工作成效。一个企业，不管在创业初
期，发展期，稳定期，还是波动期，都需要领导有一种激情带动员工或艰苦创业，或扭转乾坤，促进企业生存和发展。在企业发展形势大好时，不要骄傲自满，带领员工乘势而上，再创佳绩;在企业发展遇到瓶颈时，要坚韧应对，带领员工渡过难关。在工作中，要始终坚持以身作则，发挥表率作用。如带头执行制度，维护制度的公平性、严肃性;带头加班加点，激励 下属一起完成艰巨任务。有领导亲力亲为，下属再苦再累，也感到安慰。邮政企业是个传统的劳动密集型企业，与移动、电力、电信等国企相比，邮政员工收入不算太高，但工作强度和压力相对较大。但很多员工依然坚守自己的岗位，兢兢业业，无私奉献。员工们常说，工资低不怕，工作累也不怕，干活图的就是心气儿顺。所以，作为邮政企业的领导干部必须学会用一颗父母心对待员工，激发员工的工作激情。 第三，提高领导能力要敢于负责，不推卸责任。 有一种现象见多不怪：某一件事做完了，工作成绩出来了，就有很多人过来，不管有参与的，还是在旁观的，都喜欢过来邀功请赏;有一个事故发生了，有的责任也清晰了，就是没有 人敢出来承担责任，你推我卸，谁也不愿意跟这事扯上关系。我认为，领导者由于职位所需，比员工占据了更为全面和丰富的资源优势，因此，领导者也理应相应地比员工承担起更大的责任。我认为一个敢于承担责任的领导本身也是一种自信的表现，正因为有了责任，你才会思考如何持续改进，如何做得更好，这对于员工来说也是一种潜移默化的激励，最终成就出一支高效率的团队。 第四，提高领导能力要公平做事，做到奖惩分明。 一个团队由几个、几十个、几百个、几千个甚至更多的人组成，每个人心中都有一把称，用来衡量自己、衡量同事、衡
植物组织培养实验室(组培室)规划设计
植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。
植物组织培养 (2)
植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对离体的植物胚胎、器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养 离体生态学：是指研究离体培养环境条件控制的科学，其研究对象是培养基、植物材料和人工环境条件 外植体：用于离体培养的那部分植物器官、组织或细胞 愈伤组织（callus）：是指外植体因受伤或在离体培养时，其细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织 植物组织培养的特点 1.组培技术是无菌操作技术。 2.组培材料处于完全的异养状态。 3.组培材料可以是离体状态的器官、组织、细胞或原生质体。 4.组织培养物可以形成克隆（clone，无性繁殖系），也可以进行茎芽增殖或生根 5.组培容器内的气体和环境气体可通过封口材料进行交换，相对湿度通常是几乎100％，因此，组培苗叶片表面一般都无角质层或蜡质层，且气孔保卫细胞功能缺乏，气孔始终都是张开的。 6.组培的环境温度、光照强度和时间都是人为设定的，其参数可调 植物组织培养的研究类型 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 植物组织培养的研究任务 研究离体培养条件下，细胞、组织或器官所需营养条件和环境条件，细胞、组织或器官的形态发生和代谢规律，植物脱毒方法和机理，植物特别是一些难繁植物的大量快速繁殖方法，细胞融合方法和机理，再生个体的遗传和变异，种质资源的离体保存机理和方法等 德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann于1838-1839年提出的细胞学说 德国植物学家Haberlandt于1902年提出了植物细胞具有全能性 李继侗和沈同1933年成功培养了银杏的胚。 1952年，Morel和Martin提出了植物脱毒（virus free）技术 Guha和Maheshwari等——花药培养 Cocking等-原生质体培养
实验一 植物组织培养基母液配制的若干关键环节
实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求： 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。 以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制 成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍 数 称取量/ mg 母液定溶 体积/ml 配1LMS培 养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1
植物组织培养技术
楚雄师范学院化学与生命科学系 生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲 一、课程基本信息 课程代码：031106014 课程中文名称：植物组织培养技术 课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology 课程性质：专业选修课 使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业 开课学期：第7学期 总学时：36+27 总学分：3 预修课程：植物学、植物生理学 课程简介 植物组织培养技术是将植物的离体材料(器官、组织、细胞、原生质体等)无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。 教材建议 《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。 参考书 《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。 《植物组织培养(第三版)》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。 《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。
植物组织培养习题及答案
0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制 培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。 一、组成培养基的五类成分 目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。 1.无机营养物 无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源 培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。 3.维生素 在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。 4.有机附加物 包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。 5.生长调节物质 常用的生长调节物质大致包括以下三类： (1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。 (2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
白芨组织培养实施方案
白及组织培养实施方案一、白及简介 白及为兰科白及属多年生草本植物，又名甘根、连及草、地螺丝、羊角七、皲口药、利知子、刀口药、鱼眼兰等。分布在中国、日本以及缅甸北部，主产于贵州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陕西等地。其味苦、甘、涩,性凉,归肺、胃、肝经。以块茎供药用，能收敛止血，消肿生肌；治肺结核咳血，支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症。块茎含黏液质和淀粉等，可作糊料，在生物医药、保健食品、纺织印染、特种涂料和日用化工等方面有巨大的商业利用价值。又因白及为地生兰的一种，花开艳丽，被作为庭院、居室及园林景观绿化苗木大量应用。 白及一般生于海拔110——3200m的山野、山谷较潮湿处或林下半遮阴地带，喜温暖、稍阴湿的环境，耐阴性强，忌强光直射，需排水良好、富含腐殖质的砂质土壤，稍耐寒，冬季可在地下越冬。白及能产生大量的种子(每个蒴果10～30万粒)，但这些种子没有胚乳，自然萌发率极低，繁殖困难，但白及胚的薄壁细胞贮存大量的蛋白质、油脂和碳水化合物，可作为种子萌发的营养成分，因此白及种子在保湿的情况下可以萌发，是兰科植物中种子易萌发的类型。传统的白及繁殖方法大多以分株为主，即将块茎分成小块种植，但繁殖系数低，大面积发展对种源消耗大，不宜推广且难以满足市场需求。 采用白及组织培养可在短时间内大量获取种苗，且成本相对较低，是提高白及产量的强有力措施。目前，国内研究资料报道的白及组织培养方法各异，所采用的外植体各不相同，且培养基及其中所加的植物生长调节剂种类和规格也千差万别。 二、白及组织培养技术路线 参照植物组织组织培养获得再生植株的方式，可通过4种途径获得白及再生植株：一是由愈伤组织形成不定芽再生植株；二是愈伤组织产生胚状体而再生植株；三是由侧芽或顶芽再生植株；四是由茎尖产生原球茎而再生植株。4种方式各有利弊，传统认为采用侧芽或顶芽发育途径获得的后代性状较稳定，但因为白及原球茎带有大量共生菌，组培过程中容易出现污染。
M519 植物组织培养基
MS培养基 MS培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。 MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的**盐、钾和铵的含量高，这是它的明显特点。 Phytotech是美国著名的植物培养基供应商，公司集研发、生产、销售为一体，产品主要覆盖植物组织培养、植物生物技术与植物科学等领域。特色产品有优质基础培养基、植物凝胶、琼脂粉、植物生长调节因子、抗生素等，其生产的植物培养基如MS培养基、N6及B5植物培养基具有极高的性价比。 M519这款产品可以配置50升培养基. 品牌phytotech 产地美国 每升培养基需要4.43克M519再加7—10克糖溶于一升水即可. 目标客户:农科院,清华大学人环楼做植物的,遗传所,北林等 MS是人名Murashige and Skoog的缩写。 MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。 MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。