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肿瘤干细胞多靶点联合治疗效果分析_莫文秀

肿瘤干细胞多靶点联合治疗效果分析

莫文秀，孙立新，王佳佳，遇

珑，杨治华，冉宇靓

（北京协和医学院，中国医学科学院肿瘤医院/肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室，北京100021）摘要：［目的］探讨有效的肿瘤生物治疗新思路，用肝癌细胞系Bel7402-V3为细胞模型检测联合单克隆抗体9A9和15D2对其干性功能（自我更新、侵袭和耐药）的影响。［方法］采用活细胞流式免疫荧光术检测单独抗体、联合抗体与肿瘤干细胞标志物ESA 在Bel7402-V3亲本及sphere 细胞中的表达；甲基纤维素成球实验和Transwell 小室侵袭实验分别检测抗体对Bel7402-V3亲本细胞成球能力和侵袭能力的影响；CCK8法及IC50法检测联合抗体对Bel7402-V3亲本细胞耐药能力的影响。［结果］流式荧光结果显示：标志物ESA 、单抗15D2、单抗9A9所识别的细胞比例在Bel7402-V3sphere 细胞中比在亲本细胞中分别富集了2.6倍、4.1倍、2.0倍；在Bel7402-V3亲本和sphere 细胞中，联合单抗与标志物共染比例（9A9+15D2与ESA ）大于单抗分别与标志物共染比例之和［（9A9+ESA ）+（15D2+ESA ）］；单抗9A9与15D2联合时对Bel7402-V3亲本细胞的成球抑制率和侵袭抑制率均明显高于等浓度的单种单抗对Bel7402-V3亲本细胞的功能抑制；经联合单抗处理的Bel7402-V3亲本细胞耐药能力较经等浓度单种单抗处理的细胞耐药能力显著降低［9A9+15D2：IC50为0.32μg/ml ，9A9：IC50为0.58μg/ml ，15D2：IC50为0.56μg/ml 。［结论］肿瘤干细胞中存在不同亚群，其在不同的信号通路或基因水平上发挥了不同的作用。联合多靶点的抗体治疗能显著提高疗效。

关键词：肿瘤干细胞；单克隆抗体；联合；多靶点；9A9；15D2中图分类号：R735.5；R735.7文献标识码：A 文章编号：1004-0242（2014）02-0162-08doi ：10.11735/j.issn.1004-0242.02.A017

The Efficacy of Combined Multi -targeted Cancer Stem Cell Therapy

MO Wen -xiu ，SUN Li -xin ，WANG Jia -jia ，et al.

(State Key Laboratory of Molecular Oncology ，Cancer Institute ，Cancer Hospital ，Chinese Academy of Medical Science ，Peking Union Medical College ，Beijing 100021，China)

Abstract ：［Purpose ］To investigate the silver lining of cancer biological -therapeutic regimen.The hepatic carcinoma cell line Bel7402-V3intervened with combination of monoclonal antibodies 15D2and 9A9to monitor its subsequent functions change including self -renewal ，invading and drug -resis -tance abilities.［Methods ］Hepatic carcinoma cell line Bel7402-V3was choose as an ideal model ，in which living cell flow cytometry was adopted to identify the expression of sole antibody ，combination antibodies and cancer stem cell marker among parent cells and spheres.Antibodies's influence on cell self -renewal ，invade ability and drug -resistance were examined by methyl cellulose spheres ，Transwell invading test and CCK8plus IC50method respectively.［Results ］The proportion of cells identified by cancer stem cell marker ESA ，9A9A and 15D2in the sphere cells were enriched 2.6times ，2.0times and 4.1times more than those in the parental cells ，respectively.The co -expression antigen of combined antibodies and ESA was more than the sum of antigen located on (9A9+ESA)and (15D2+ESA).The combined antibodies have notable inhibitory ratio than sole antibody with equal concentration on spheres forming and invading ability ，which is same as drug -resistance.The IC50in combined antibodies group ，9A9and 15D2was 0.32μg/ml ，0.58μg/ml and 0.56μg/ml ，respectively.［Conclusion ］There are different kinds of sub -sets in cancer stem cells bearing distinct functions on many signal pathways and gene https://www.wendangku.net/doc/c211845467.html,bined multi -targeted antibodies are capable of in -creasing efficacy of treatment.

Key words ：cancer stem cell ；monoclonal antibody ；combination ；multi -targeted ；9A9；15D2

收稿日期：2013-10-13；修回日期：2013-11-15基金项目：国家科技重大专项（2011ZX09102-010）通讯作者：冉宇靓，E -mail ：ran_yuliang@https://www.wendangku.net/doc/c211845467.html,

目前，肝癌的发病率位居世界恶性肿瘤发病第

5位，居肿瘤死亡病因的第3位。尽管有外科手术和

局部的一些治疗方法，但肝癌细胞对于传统放化疗的高抵抗性，以及肝癌的转移、复发，仍使得大部分

肝癌患者的预后不良［1，2］。肿瘤干细胞是一类能够促使肿瘤发生，并且具有自我更新和分化能力的细胞。Lobo等［3］提出：肿瘤干细胞是肿瘤发生的源头，也是维持肿瘤生长的必要细胞，更是肿瘤转移复发的根源。近年来，肿瘤干细胞的存在被认为与肝癌的耐药性、转移及复发有着密切的关系［4］。目前，针对肿瘤干细胞的靶向治疗已开始应用于临床研究，但均为单一靶点的治疗，针对肿瘤的异质性尚缺乏联合多靶点治疗的尝试［5］。我们前期已筛选出多株靶向肝癌干细胞的单克隆抗体，能有效抑制肝癌干细胞的成球、侵袭和耐药等。在本研究中，我们将在一株肝癌细胞系模型中，探讨多靶点抗肝癌干细胞单抗联合治疗的疗效。

1材料与方法

1.1材料

人肝癌细胞系Bel7402-V3细胞为中国医学科学院肿瘤研究所细胞及分子生物学实验室从人肝癌细胞系Bel7402中筛选获得的，为具有高自发性肺转移的亚株。本课题组前期实验筛出多株特异性识别肝癌干细胞样细胞的杂交瘤单抗，包括：15B7，15D2，9A9和11C9等，均为本室保藏。常规细胞培养液、bFGF、B27、LIF购自美国Gibco公司，EGF购自Invitrogen公司，DAPI购自Sigma公司，FITC-ESA购自Gentex公司，Percp-羊抗小鼠IgM μchain购自Jackson公司。

1.2方法

1.2.1Bel7402-V3sphere细胞的培养

文献报道，肿瘤干细胞可在无血清培养基中悬浮培养，形成由单个肿瘤干细胞分化而来的细胞球即sphere细胞。将处于对数生长期的Bel7402-V3亲本细胞消化至单细胞，制备成细胞密度为2×104/ml 的细胞悬液，以该密度接种于含LIF（10ng/ml）、EGF （20ng/ml）、bFGF（20ng/ml）、B27（1∶50）、肝素（0.6U/ ml）和L-谷氨酰胺（2mmol/L）的DMEM-F12无血清培养基中，于37℃、5%CO2孵箱中培养7d，用于Bel7402-V3sphere细胞活细胞流式检测。

1.2.2流式细胞术检测标志物ESA在Bel7402-V3亲本细胞及sphere细胞中的比例

制备Bel7402-V3亲本细胞及sphere细胞的单细胞悬液，调整细胞密度为1×107/ml，PBS洗1遍后，加入FITC-ESA，37℃避光孵育30min，PBS洗2遍，用1%多聚甲醛固定后上流式仪检测。

1.2.3流式细胞术分选Bel7402-V3亲本中ESA+细胞并检测其成球能力

消化对数期的Bel7402-V3亲本细胞成单细胞悬液，1200rpm，5min离心后用PBS洗1遍，加入FITC-ESA，重悬细胞浓度至1×107/ml，37℃避光孵育30min，PBS洗2遍，用含1%BSA的PBS重悬，上机行流式细胞仪分选。将分选得到的Bel7402-V3ESA+细胞，Bel7402-V3亲本细胞和Bel7402-V3ESA-细胞以500个/孔接种于低粘附24孔板，进行无血清培养，每隔2d补液1次，7d后显微镜下记录球体细胞数。

1.2.4流式细胞术检测Bel7402-V3亲本和sphere 细胞中标志物ESA及单抗识别抗原共表达比例制备Bel7402-V3亲本细胞及sphere细胞的单细胞悬液，调整细胞密度为1×107/ml，PBS洗1遍后，加入杂交瘤单抗9A9、15D2的上清，37℃孵育1h，PBS洗2遍，加入Percp-羊抗小鼠IgMμchain和FITC-ESA，37℃避光孵育30min，PBS洗2遍，用1%多聚甲醛固定后上流式仪检测。

1.2.5无血清悬浮培养法检测单抗对细胞成球能力的影响

消化处于对数生长期的Bel7402-V3亲本细胞成单细胞，分别用单抗9A9(300μg/ml，600μg/ml）、15D2(300μg/ml，600μg/ml）和9A9+15D2（各300μg/ ml)与细胞共孵育，37℃孵育2h，以500个细胞/孔接种于低粘附24孔板中，用含0.8%甲基纤维素的无血清悬浮培养，在37℃，5%CO2孵箱中培养11d后计算成球率。

1.2.6Transwell侵袭实验检测单抗对细胞侵袭能力的影响

消化处于对数生长期的Bel7402-V3亲本细胞成单细胞，分别用单抗9A9(300μg/ml，600μg/ml）、15D2(300μg/ml，600μg/ml）和9A9+15D2（各300μg/ ml)与细胞共孵育，37℃孵育2h，以4×104个细胞/孔接种于预先包被好Matrigel的Transwell上室中，在37℃、5%CO2孵箱中培养24h后，取下底膜，DAPI染色，封片，在荧光显微镜下观察穿膜细胞并计数。

Cell

15D2+ESA 9A9+ESA

15D2+9A9+ESA

15D2

ESA Co -exp 9A9ESA Co -exp 15D2+9A9ESA Co -exp

Bel742-V3

1.7±0.3 4.4±0.50.3±0.1

2.5±0.7 4.8±0.40.3±0.17.0±0.9 5.2±0.8 1.4±0.2Bel742-V3sphere

5.6±1.011.0±0.8 1.1±0.1

5.0±0.811.7±0.9

1.3±0.2

15.7±1.011.5±0.9 2.9±0.4

Figure 1The expression of ESA in Bel7402-V3parent cells and sphere cells 1.2.7CCK -8法和IC50法检测单抗处理后细胞的

顺铂耐药性

将消化好的Bel7402-V3亲本细胞以5000个/

孔接种于96孔板，并分别加入抗体9A9(300μg/ml ，

600μg/ml ）、15D2(300μg/ml ，600μg/ml ）和9A9+15D2（各300μg/ml)于各孔中，37℃、5%CO 2孵箱中培养24h 后，移去含抗体的培养基，每组细胞均用含0、0.15μg/ml 、0.30μg/ml 、0.45μg/ml 、0.60μg/ml 、0.75μg/ml 和0.90μg/ml 共7个浓度顺铂的培养基培养细胞，48h 后换含顺铂的培养基，5d 后按照CCK -8试

剂盒说明书加入CCK -8试剂，测定OD450值；用

IC50软件计算各组IC50值。1.3统计学处理

应用SPSS13.0软件，数据用x +s 表示，组间差异采用t 检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Bel7402-V3sphere 细胞中富集ESA +细胞亚群

活细胞流式荧光检测Bel7402-V3亲本及

sphere 细胞中ESA +细胞比例发现（Figure 1）：ESA +

细胞在Bel7402-V3sphere 细胞中比例为11.6%，比其在Bel7402-V3亲本细胞中的比例（4.4%）富集了约2.6倍，即Bel7402-V3ESA +细胞经无血清悬浮培养后得到富集，提示ESA 可能是Bel7402-V3细胞系的肿瘤干细胞标志物。

2.2Bel7402-V3ESA +细胞具有更强的自我更新能力

采用活细胞流式分选后的Bel7402-V3ESA +细

胞，Bel7402-V3ESA -细胞和Bel7402-V3亲本细胞的成球培养结果显示（Figure 2）：Bel7402-V3ESA +细胞的成球率为20.2%±1.6%，明显高于Bel7402-V3

ESA -细胞的4.6%±1.0%及Bel7402-V3亲本细胞的9.6%±1.0%（P 均＜0.01），即Bel7402-V3ESA +细胞具

有更强的成球能力，进一步提示了ESA 是Bel7402-

V3细胞系的肿瘤干细胞标志物。

2.3Bel7402-V3亲本及sphere 细胞中ESA 及单抗

识别抗原的共表达

流式细胞术检测结果显示（Table 1，Table 2，

Figure 3）：肝癌干细胞

标志物ESA 、单抗9A9、

单抗15D2的比例在

Bel7402-V3sphere 细胞中较在Bel7402-V3亲

本细胞中均明显提升，其比例分别是后者的

2.6倍、2.0倍、4.1倍；在sphere 细胞中，9A9+15D2两种单抗双染的比例为15.1%，约等于单抗9A9单染比例

（6.3%）与单抗15D2单染比例（7.8%）之和，在

Bel7402-V3亲本细胞中也如此，提示9A9与15D2可能识别的是两

个不同分子表型的亚

104

ESA

100101102103100101102

103

B 4.4%

B 11.6%

Bel7402-V3parent cells

Bel7402-V3sphere cells

Table 1Expression of ESA ，9A9，15D2in Bel7402-V3parent cells and sphere cells (%）Cell

ESA 15D29A915D2+9A9Bel7402-V3

4.4±0.5 1.9±0.6 3.2±0.3 6.0±0.7Bel7402-V3sphere

11.6±1.0

7.8±1.0

6.3±0.7

15.1±0.9

Table 2Co -expression of ESA ，9A9，15D2in Bel7402-V3parent cells and sphere cells （%）

Figure 3The co -expression of ESA ，9A9，15D2in Bel7402-V3parent cells and sphere cells

A ：The spheres of ESA +，parent and ESA -cells （*P <0.01）；

B ：ESA +cells (×100)；

C ：parent cells (×100)；

D ：ESA -cells (×100)；

E ：ESA +cells (×400)；

F ：parent cells (×400)；

G ：ESA -cells (×400).

Figure 2Self -renewal assay of ESA+，panrent and ESA -cells

B C

D E

E S A

c e

l l s 150

100

0P a

r e n t

c e

l l s E S

c e

l l s

D1D21.6%

0.2%

D3D494.0%

4.2%D1D22.4%

0.3%

D493.0%

4.3%

D1D26.5%

1.3%

D488.5%

3.8%D1D23.9%

1.0%

D3D485.8%

9.3%D1

D23.2% 1.1%

D3D485.1%

10.6%01

D213.8% 2.9%

03D475.9%

7.5%103102101100

100

101

102

103

Bel7402-V315D2+ESA

100

101

102

103

Bel7402-V39A9+ESA

103102101

100100

101

102

103

Bel7402-V315D2+9A9+ESA

103102101

100103

102

101100

100

101

102

103

Bel7402-V3sphere 15D2+ESA Bel7402-V3sphere 15D2+9A9+ESA

Bel7402-V3sphere 9A9+ESA 15D 2

15D 2

9A 9

15D 2&9A 9

ESA

ESA ESA ESA

103102

101100

100

101

102

103

103102

101

100

101

102

103

群；且在sphere 细胞中，9A9+15D2+ESA 共染的比例（2.9%）略大于9A9+ESA 共染比例（1.3%）与

15D2+ESA 共染比例（1.1%）之和，Bel7402-V3亲本

细胞中也是如此，更进一步提示两种单抗可能识别了不同的ESA 分子表型。

2.4联合抗体作用具有更强的抑制成球能力抗体抑制Bel7402-V3亲本细胞成球能力的结果显示（Figure 4）：当单种抗体浓度由300μg/ml 提升一倍至600μg/ml 时，单抗15D2对细胞的成球抑制率从21.7%±4.6%增加至26.9%±1.2%（P ＞0.05）；

单抗9A9对细胞的成球抑制率从46.9%±3.7%上升为49.1%±3.9%（P ＞0.05），均无统计学差异；而联合两种单抗15D2+9A9，使其浓度分别达300μg/ml 时，成球抑制率达到80.5%±3.5%，显著高于等浓度（600μg/ml ）单种单抗15D2的成球抑制率26.9%±

1.2%和9A9的成球抑制率49.1%±3.9%（P ＜0.05）。

2.5联合抗体作用具有更强的抑制侵袭能力

抗体抑制Bel7402-V3亲本细胞侵袭能力的结果显示（Figure 5）：当单种抗体浓度由300μg/ml 提升一倍至600μg/ml 时，单抗15D2对细胞的侵袭抑

Figure 4Sphere inhibition assay of single antibody and combined antibodies

Figure 5Invasion inhibition assay of single antibody and combined antibodies

s p h e r e s /500c e l l s

6040

C o

n t r o l

15D 2(300μ

g /m l )

15D 2(600μg /m l )9A 9(300μg /m l )9A 9(600μg /m l )15D 2+

9A 9(300μg /m l )Control

Single antibody

Combined antibodies

i n v a s i v e c e l l s /v i s i o n

800600

400

200

C o

n t r o l 15D 2(300μg /m l )15D 2(600μg /m l )9A 9(300μg /m l )9A 9(600μg /m l )15D 2+

9A 9(300μg /m l )Control

Single antibody

Combined antibodies

（*P <0.05）

制率从20.0%±0.7%增加至41.2%±0.5%(P ＜0.05)；9A9对细胞的侵袭抑制率从44.5％±1.2%上升为47.1％±1.0%（P ＞0.05）；而联合两种单抗(15D2+9A9)，

使其浓度分别达300μg/ml 时，侵袭抑制率达到

57.1%±1.2%，高于等浓度（600μg/ml ）单种单抗15D2

的侵袭抑制率41.2%±0.5%和9A9的侵袭抑制率

47.1%±1.0%(P ＜0.05)。2.6

联合抗体作用更有助于降低细胞的耐药性抗体处理后对Bel7402-V3亲本细胞耐药能力的影响结果显示（Figure 6）：当单抗15D2浓度由

300μg/ml 提升一倍至600μg/ml 时，其处理后的细胞IC50值由0.59μg/ml 降低至0.56μg/ml （P ＞0.05）；当

单抗9A9浓度由300μg/ml 提升一倍至600μg/ml 时，其处理后的细胞IC50值由0.6μg/ml 降低至

0.58μg/ml （P ＞0.05）；而联合两种单抗（15D2+9A9），

使其浓度分别达300μg/ml 时，其处理后的细胞

IC50值为0.32μg/ml ，明显低于等浓度（600μg/ml ）单

种单抗15D2处理后的IC50值（0.56μg/ml ）和9A9处理后的IC50值（0.58μg/ml ）（P ＜0.05）。同时，耐药曲线图显示：对照组和单独抗体处理组在低化疗药剂量的情况下，细胞的死亡并不明显，只有在高剂量

化疗药剂量范围时细胞才显著随剂量增加而加速死亡；而联合抗体处理组则在较低的化疗药剂量范围时就观察到随化疗药剂量增加，死亡的细胞显著增加的现象，提示联合多靶点抗体治疗可以在相当低的化疗药物浓度下就获得较满意的疗效。

3讨论

肿瘤干细胞是一类促使肿瘤发生、发展、复发，且具有不定向分化能力和自我更新能力的细胞，而对于肿瘤干细胞的各种体内外功能鉴定就依赖于特异性的肿瘤干细胞标志物，如细胞膜蛋白和细胞内酶［6］。肿瘤的异质性也同样适用于肿瘤干细胞。近年来，对于肿瘤干细胞的亚群鉴定观点不一。2013年9月，Meacham 等［7］提出：在同一肿瘤的不同患者中，存在表达不同标志物的干细胞亚群。乳腺癌是第一个报道的被发现存在有肿瘤干细胞的实体瘤，其干细胞在CD44+CD24-/lo 、SP 、ALDH +等不同亚群中均存在［8］。Tang 等［9］在文献中提出：在肿瘤中存在着各种不同来源的干细胞亚群，这些干细胞亚群在基因水平上已有明显差异，可能行使着不同的功能；我们的

结果也提示了肿瘤干细胞不同亚群的存在。

在本研究中，我们观察到：在肝癌细胞系Bel7402-

V3中，Bel7402-V3ESA +细胞

比例在Bel7402-V3sphere 中比在亲本细胞中富集了2.6倍；经分选得到的Bel7402-

V3ESA +细胞展示出比Bel7402-V3ESA

细胞和

Bel7402-V3亲本细胞更强自

我更新能力，这些都提示

ESA 为此细胞系的干细胞标

志物。流式结果显示：在

Bel7402-V3亲本和sphere 细

胞中，两种单抗9A9和15D2单染比例之和约等于其双染比例，表明两种单抗分别识别了该细胞系中完全不同的两群细胞，且相互之间没有

Figure 6Comparison of the drug -resistence capacity betweem single

antibody and combined antibodies

Control 15D2(600μg/ml)

9A9(600μg/ml)15D2(300μg/ml)

9A9(300μg/ml)Combination(300μg/ml)

0.15

0.30

0.45

0.60

0.75

0.90

Concentration of cisplatin(μg/ml )

1.2

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0.0

S u r v i v a l r a t e

交叉，说明这两群细胞至少是表达不同分子表型的亚群；两种单抗均能单独与ESA共染，且在Bel7402-V3sphere细胞中得到富集，说明两种单抗均能识别部分ESA+的肿瘤干细胞；9A9和15D2联合与ESA 的共染比例大于其分别与ESA共染的比例之和，提示了9A9和15D2分别识别了Bel7402-V3ESA+肿瘤干细胞中的不同分子表型的亚群。

Tang等曾提出：肿瘤干细胞作为肿瘤发生的起始细胞，存在异质性。在首个被发现肿瘤干细胞存在的白血病中，就发现了CD34+CD38-，Lin+，CD45RA+等多个肿瘤干细胞亚群［10，11］。由于肿瘤干细胞的异质性，可能会导致靶向药物在抑制或杀死一种亚群的同时，使得另一种亚群成优势生长，从而导致肿瘤的转移复发［12，13］。因此，多靶点联合治疗可针对更多的肿瘤干细胞亚群，有望显著提高治疗效果［14］。

研究中，我们设置了2个浓度的抗体（300μg/ ml，600μg/ml)，并分别从体外功能实验中观察到，浓度为600μg/ml的抗体对Bel7402-V3肿瘤干细胞的各种功能抑制率只稍强于浓度为300μg/ml的抗体，即增加一倍浓度的抗体时并没有明显提高抗体的作用，提示了单纯依靠提高单一靶点治疗药物的浓度对于提高疗效来说是没有多大帮助的；而联合9A9和15D2两种单抗，其浓度分别为300μg/ml时，对Bel7402-V3肿瘤干细胞的功能抑制率明显增强：15D2+9A9各300μg/ml时，成球抑制率为80.5%±3.5%，约为15D2单独作用的4倍，为9A9单独作用的2倍；15D2+9A9各300μg/ml时，侵袭抑制率为57.1%±1.2%，约为15D2和9A9单独作用的1.3倍；15D2+9A9各300μg/ml处理过的Bel7402-V3亲本细胞耐药的IC50值为0.32，耐药性明显低于15D2单独作用（IC50：0.56）和9A9单独作用（IC50：0.58）后的耐药性。结果显示联合2株针对不同分子表型肿瘤干细胞亚群抗体对肿瘤干细胞的侵袭抑制和成球抑制均优于等浓度的单个抗体作用。这不仅证实了肿瘤干细胞亚群的存在，还提示了多靶点联合治疗有可能提高疗效。

有趣的是，在耐药实验中，我们发现对照组和单独抗体处理组耐药曲线呈上凸型，而联合抗体处理组耐药曲线呈下凹型。这意味着对照组和单独抗体处理组必须在高剂量化疗药浓度范围时细胞才显著随剂量增加而加速死亡；而联合抗体处理组则能在较低的化疗药剂量范围时就观察到随化疗药剂量增加，肿瘤细胞显著加速死亡，即只需要较低剂量的化疗药即可达到非常好的效果。联合抗体组对细胞的耐药影响不仅呈现出两种单抗作用的叠加效应，而更像是一种协同效应。推测这可能是因为在肿瘤干细胞中，由于存在有表达不同分子表型的亚群，并在不同的信号通路或基因水平上发挥了不同的作用。单一靶点抗体治疗时，其他的亚群成优势生长，从而导致治疗效果降低；但在联合使用多靶点治疗时，即便针对单一靶点的疗效受限，也有望通过多靶点治疗得以弥补。目前在临床工作中，正是由于化疗药物的毒副作用，常使肿瘤患者不能耐受有效杀伤剂量的化疗药，导致治疗疗效受限［15］。而我们的结果提示：经联合多靶点肿瘤干细胞治疗后，将使得化疗药物更容易在低剂量时达到高疗效，这将提高化疗药在安全剂量内的疗效，降低毒副作用，多靶点联合+化疗方案可能会让肿瘤患者获益。综合以上结果说明，在提高一种靶向肿瘤干细胞药物剂量已不足以提高疗效的情况下，联合多靶点的治疗能够获得更好的疗效，使得化疗药物在较低剂量时就可获得令人满意的疗效。

靶向治疗已成为治疗中晚期肿瘤的重要手段［16］，靶向治疗后患者发生转移或复发是否与肿瘤的异质性有着重要的关系还需要进一步研究。而联合多靶点治疗可能会抑制多个具有不同生物学功能的亚群，从不同通路和基因水平阻断了肿瘤的耐药、自我更新等能力，进而有可能有效阻断肿瘤的复发。

本研究为肿瘤干细胞存在异质性，且不同亚群在不同的信号通路或基因水平发挥了不同的作用提供了间接证据，并进而为临床治疗肿瘤提供了新思路——

—针对肿瘤干细胞的多靶点联合治疗能显著提高疗效。

参考文献：

[1]Wysocki PJ.Targeted therapy of hepatocellular cancer[J].

Expert Opin Investig Drugs，2010，19(2)：265-274.

[2]Gomes MA，Priolli DG，Tralh觔o JG，et al.Hepatocellular

carcinoma：epidemiology，biology，diagnosis，and therapies [J].Rev Assoc Med Bras，2013.[Epub ahead of print] [3]Lobo NA，Shimono Y，Qian D，et al.The biology of cancer

stem cells[J].Annu Rev Cell Dev Biol，2007，23(3)：675-699.

[4]Yamashita T，Wang XW.Cancer stem cells in the develop-

ment of liver cancer[J].J Clin Invest，2013，123(5)：1911-1918.

[5]Shinagare AB，Jagannathan JP，Krajewski KM，et al.Liver

metastases in the era of molecular tar geted therapy：new faces of treatment response[J].AJR Am J Roentgenol，2013，201(1)：W15-W28.

[6]Wieczorek K，Niewiarowska J.Cancer stem cells[J].

Postepy Hig Med Dosw，2012，66：629-636.

[7]Meacham CE，Morrison SJ.Tumor heterogeneity and can-

cer cell plasticity[J].Nature，2013，501(2)：328-336.

[8]Mannello F.Understanding breast cancer stem cell hetero-

geneity：time to move on to a new research paradigm[J].

BMC Med，2013，11：169.

[9]Tang DG.Understanding cancer stem cell heterogeneity

and plasticity[J].Cell Res，2012，22(3)：457-472

[10]O'Brien JA，Rizzieri DA.Leukemic stem cells：a review[J].

Cancer Invest，2013，31(4)：215-220.

[11]Guzman ML，Allan JN.Leukemia stem cells in personal-

ized medicine[J].Stem Cells，2013.[Epub ahead of print] [12]Wong RS，Cheong SK.Leukaemic stem cells：drug resis-

tance，metastasis and therapeutic implications[J].Malays J Pathol，2012，34(2)：77-88.

[13]Crea F，Duhagon MA，Farrar WL，et al.Pharmacogenomics

and cancer stem cells：a changing landscape?[J].Trends Pharmacol Sci，2011，32(8)：487-494.

[14]Ibrahim N，Yu Y，Walsh WR，et al.Molecular targeted

therapies for cancer：sorafenib mono-therapy and its com-

bination with other therapies[J].Oncol Rep，2012，27(5)：1303-1311.

[15]Conklin KA.Dietary antioxidants during cancer chemother-

apy：impact on chemotherapeutic effectiveness and devel-opment of side effects[J].Nutr Cancer，2000，37(1)：1-18.

[16]Dietel M，J?hrens K，Laffert M，et al.Predictive molecular

pathology and its role in targeted cancer therapy：a review focussing on clinical relevance[J].Cancer Gene Ther, 2013,20(4)：211-221.

《胸部肿瘤放射治疗策略》出版启事

肺癌、食管癌和乳腺癌是我国常见的胸部恶性肿瘤，也是全球范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，不但给患者及其家属带来巨大的痛苦，也给社会带来了沉重的负担。

由毛伟敏教授和许亚萍教授组织浙江省肿瘤医院/浙江省胸部肿瘤研究指导中心的中青年骨干编写的《胸部肿瘤放射治疗策略》，是一本系统介绍胸部恶性肿瘤诊断以及放射治疗规范和进展的学术专著。

全书内容主要针对临床一线的放射治疗工作者，以循证医学为基础，并结合目前国内外的临床指南，重点介绍了肺癌、食管癌、乳腺癌等常见胸部恶性肿瘤近年来的放射治疗新技术、新进展，放射治疗与化疗、靶向治疗、内分泌治疗、手术治疗等手段的联合应用，并对肿瘤的疗效评价、放射治疗并发症的处理做了较为详细的阐述。大量引用了近年来国内外的最新资料，并参考了美国国立综合癌症网络（NCCN）发布的2013指南中的诊治规范。

体现综合治疗的原则是该书的另一特点。在胸部恶性肿瘤中有较多争议的部分，如局部晚期非小细胞肺癌的多学科综合治疗，由多个科室的专家联合执笔，以两个章节的篇幅详细阐述；在以手术为基础的食管癌多学科综合治疗部分，全面地讨论了手术与术前新辅助放化疗联合以及与术后辅助放化疗联合的意义。

该书由中国抗癌协会副理事长、山东省肿瘤医院院长、中国工程院院士于金明教授作序，由美国Georgia Regents University的Feng-Ming(Spring)Kong教授和浙江省肿瘤医院陈明教授担任主审，由军事医学科学出版社出版发行。