Geographical distribution and genetic diversity of Gymnogobius sp. “Chokai-endemic species”

FULL PAPER

Geographical distribution and genetic diversity of Gymnogobius sp.‘‘Chokai-endemic species’’(Perciformes:Gobiidae)

Satoru N.Chiba ?Ryosuke Kakehashi ?Kouichi Shibukawa ?Takahiko Mukai ?Yasuyuki Suzuki ?Naoto Hanzawa

Received:1December 2013/Revised:20May 2014/Accepted:30May 2014/Published online:26June 2014óThe Ichthyological Society of Japan 2014

Abstract The geographical distribution and intraspeci?c genetic diversity of an endangered freshwater goby,Gym-nogobius sp.‘‘Chokai-endemic species’’,was surveyed based on mitochondrial cytochrome b gene sequences in Yamagata Prefecture and adjacent areas on the island of Honshu,Japan.An extensive ?eld survey showed that the species is distributed in 11locations from Gosen,Niigata Prefecture to Yuza,Yamagata Prefecture.The species was not collected together with Gymnogobius sp.‘‘widely

distributed species’’at each location,although the distri-bution of these two species overlaps.A maximum likeli-hood phylogenetic analysis showed that Gymnogobius sp.‘‘Chokai-endemic species’’is genetically divergent from other Gymnogobius castaneus species complex and the species consists of Niigata and Yamagata sub-clades.The result suggests that the Niigata and Yamagata regional groups can be distinguished from each other by their sequence divergence and the two groups should be treated as provisionally distinct ‘‘evolutionarily signi?cant units’’.The indices of intra-population genetic diversity were noticeably low,suggesting that each population has prob-ably experienced bottleneck events.The geographical dis-tance between the two populations in the Yamagata group,where the haplotypes are completely different from each other,was within 3km.This suggests that habitat loss,fragmentation and isolation occurred in the Yamagata area due to some arti?cial cause.Conservation measures may be needed not only to protect individual habitats but also to promote genetic exchange among habitats in the Yamagata area.

Keywords Gymnogobius castaneus complex áconservation áphylogeography áYamagata áNiigata

Introduction

In Japan,the ?oating goby,Gymnogobius castaneus (Perciformes:Gobiidae)(Japanese name:Juzukake-haze),normally inhabits freshwater lakes and surrounding streams (Stevenson 2002;Mukai et al.2010).The species is dis-tributed from the Kanto and Hokuriku districts to the Sakhalin and Kuril Islands in the south (Stevenson 2002;Mukai et al.2010).Previous genetic studies,based on

Electronic supplementary material The online version of this article (doi:10.1007/s10228-014-0415-x )contains supplementary material,which is available to authorized users.

S.N.Chiba (&)

Center for Molecular Biodiversity Research,

National Museum of Nature and Science,4-1-1Amakubo,Tsukuba,Ibaraki 305-0005,Japan e-mail:chiba_s@kahaku.go.jp

S.N.Chiba áR.Kakehashi áN.Hanzawa Faculty of Science,Yamagata University,

1-4-12Kojirakawa-machi,Yamagata 990-8560,Japan R.Kakehashi

Institute for Amphibian Biology,Graduate School of Science,Hiroshima University,1-3-1Kagamiyama,Higashi-Hiroshima,Hiroshima 739-8526,Japan

K.Shibukawa

Nagao Natural Environment Foundation,3-3-7Kotobashi,Sumida ku,Tokyo 130-0022,Japan

T.Mukai

Faculty of Regional Studies,Gifu University,1-1Yanagido,Gifu 501-1193,Japan

Y.Suzuki

Publishers’Association of Fishes in Gakko-gawa River,1-2-10Eki-higashi,Sakata,Yamagata 998-0022,Japan

Ichthyol Res (2015)62:156–162DOI 10.1007/s10228-014-0415-x

allozyme and mitochondrial DNA markers,showed that G. castaneus,as previously recognized,can be classi?ed into several species(Aizawa et al.1994;Sota et al.2005; Shinozaki et al.2006).Recently,Mukai et al.(2010)sug-gested that G.castaneus forms a species complex,which consists of at least four species,Gymnogobius sp.‘‘widely distributed species(WD)’’,Gymnogobius sp.‘‘Chokai-endemic species(CE)’’,Gymnogobius sp.‘‘Toyama-ende-mic species(TE)’’and Gymnogobius sp.‘‘Kanto-endemic species(KE)’’.Gymnogobius sp.‘‘WD’’has a relatively wide distribution from the Kanto and Hokuriku districts northward to Hokkaido.The other species,Gymnogobius sp.‘‘CE’’,Gymnogobius sp.‘‘TE’’and Gymnogobius sp.‘‘KE’’,are endemic to relatively speci?c regions,i.e.,the area adjacent to Mt.Chokai in Yamagata and Akita Pre-fectures,a narrow region of Toyama Prefecture,and the middle course of four river systems in the Kanto district (the Naka-gawa,Tone-gawa,Ara-kawa and Tama-gawa rivers),respectively.In recent decades,these species have been threatened by destruction of their habitats and deci-mated by introduced predators;as a result,they are now listed as endangered species in the Red List of Nature Conservation Bureau of Japan Ministry of the Environment (2013).

Gymnogobius sp.‘‘CE’’is hitherto known only from several ponds and adjacent streams in Yamagata and Akita Prefectures;hence,the existence of this species is tenuous (Mukai et al.2010).The distribution area of this species and some adjacent areas is home to a very unique fresh-

water?sh fauna(e.g.,Takahashi et al.2001;Yokoyama and Goto2002;Yamazaki et al.2003;Aiki et al.2009), and phylogeographical studies of this species are essential to an understanding of biogeography in the areas.However, its taxonomic status,geographical distribution and genetic diversity within Gymnogobius sp.‘‘CE’’are still unclear. The main aim of the present study was to clarify the geo-graphical distribution and intraspeci?c genetic diversity of Gymnogobius sp.‘‘CE’’.Based on the results,its conser-vation and the common geographical and/or ecological factors affecting?sh in the Yamagata area are discussed. Materials and methods

Field survey and sample collection.Extensive?eld surveys to clarify the geographical distribution of Gymnogobius sp.‘‘CE’’were conducted in the Hokuriku and Tohoku dis-tricts of northern Japan during2009–2011(Fig.1).The surveys were carried out at52locations(23,16,and13 locations at Niigata,Yamagata,and Akita Prefectures, respectively),in ponds,reservoirs,and adjacent streams on the margins of montane areas.We had conducted more extensive?eld surveys in these prefectures,but many of the locations where we could not collect any?sh specimens were not recorded.Fish samples were collected by hand-nets and minnow traps.We collected a smaller number of specimens at each sampling site for conservation of the species.Species identi?cation followed Mukai et al. (2010).Gymnogobius sp.‘‘CE’’is unique within the G. castaneus species complex by lacking distinct yellow vertical bands on the side of the body in nuptial coloration of the female,and can be distinguished from the other congeners in the complex by having following combination of characters:32–34(usually33–34)vertebrae;sum of soft ray numbers of the second dorsal and anal?ns16–18 (usually18);total35–39caudal-?n rays(including pro-current rays);0–5predorsal scales.Although the habitat of Gymnogobius sp.‘‘CE’’is adjoined to that of Gymnogobius sp.‘‘WD’’,snout length,inter-orbital width,and jaw length of the former are relatively longer than those of the latter (Mukai et al.2010).A small portion of the pectoral?n or skeletal muscle was removed from the right side of each specimen and preserved in99.95%ethanol.Voucher specimens and tissue samples were deposited in the National Museum of Nature and Science,Tsukuba.Details of the specimens used in the study are summarized in Electronic Supplementary Material(ESM)Table

S1. Fig.1Distribution of Gymnogobius sp.‘‘CE’’.Open circles indicate sampling locations with population code.Open squares indicate an area where the geographical distribution of Gymnogobius sp.‘‘CE’’was surveyed.Shadings of gray on the map indicate different altitudes.Detailed locations are masked in the interest of conservation of the species

Phylogeography of Gymnogobius sp.‘‘Chokai-endemic species’’157

DNA extraction,PCR and sequencing.Total DNA puri?cation from tissue samples was performed according to the methods described by Chiba et al.(2009).Using total DNA and primer pair AJG15(Akihito et al.2000)and Simt12-Fb(Kuriiwa et al.2007),approximately2.3kbp fragments including the mitochondrial cytochrome b(cyt-b)gene were ampli?ed under the following PCR condi-tions.Thirty ampli?cation cycles were performed at94°C for45s,56°C for30s and72°C for2min.Two primers were used for sequencing the PCR products(L14736-TM: 50-AAY CAC CGT TGT AAT TCA ACT A-30as the forward primer of cyt-b and H15973-TM:50-TTG GGA GCT AGG GGT GGG AGT T-30as the reverse primer of cyt-b).Direct sequencing was performed using automated genetic analyzer models3130and3500(Applied Biosystems).

The obtained cyt-b sequences were multiply aligned using MUSCLE(Robert2004)and the aligned sequences were visually inspected.All haplotype sequences are available from DDBJ/EMBL/GenBank with accession numbers AB872269–AB872276.To construct a maximum likelihood tree of the Gymnogobius castaneus complex,the sequences were further multiply aligned following those of related species,Rhinogobius giurinus(accession number: AB018997)(Kumazawa et al.1999),Gymnogobius uchidai (AB073934),Gymnogobius isaza(AB073945),Gymnogo-bius macrognathos(AB073964)(Harada et al.2002); Gymnogobius urotaenia(AY450365),Gymnogobius breunigii(AY450368),Gymnogobius heptacanthus (AY450376),Gymnogobius opperiens(AY450379),Gym-nogobius petschiliensis(AY450380),Gymnogobius taran-etzi(AY450366,AY450367,AY450373,AY450374, AY450378,AY450381,AY450382,AY450385),and Gymnogobius castaneus(AY450383,AY450384,AY-450386–AY450388,AY461730,AY461731)(Sota et al. 2005).

Phylogenetic analysis.A maximum likelihood(ML) tree was inferred by likelihood ratchet(Vos2003)using all haplotype sequences of the gene detected in the study and 24sequences of related species from DDBJ/EMBL/Gen-Bank.A ML tree was heuristically searched using Tree-?nder(Jobb2008).The ML model adopted HKY? Gamma,HKY and TN?Gamma models for the1st,2nd and3rd codon positions,respectively,which were selected as the best-?t model of the nucleotide substitution by KAKUSAN ver.4.0(Tanabe2007)on the basis of Akaike Information Criterion(AIC;Akaike1973).A likelihood ratchet analysis was performed using Tree?nder with the parallel execution program Phylogears(Tanabe2008).This analysis was accomplished through the program TNT (Goloboff et al.2008),which generated3,000trees as a starting tree with a random re-weighting of15%of the characters.Subsequently,the ML trees were subjected to a heuristic search using Tree?nder.An ML tree was selected from3,000trees generated by the likelihood ratchet ana-lysis.The signi?cance of each branch of the tree was evaluated by bootstrapping with1,000replications using Tree?nder with Phylogears.In the analysis,the ML tree was used as the starting tree and the parameters were the same values as those used to construct the ML tree.To reconstruct the relationship among the haplotypes assigned to each tree clade,a statistical parsimony network was constructed using the program TCS1.21(Clement et al. 2000).

Genetic diversity and population structure analyses. Haplotype diversity(h)and nucleotide diversity(p)within populations were estimated using the program ARLEQUIN ver. 3.11(Excof?er et al.2005).Haplotype frequency distributions for each population were compared using an exact test of population differentiation(Raymond and Rousset1995).

Results

Geographical distribution.Gymnogobius sp.‘‘CE’’was found at11locations(Populations A–K)from Gosen in Niigata Prefecture northward to Yuza in Yamagata Pre-fecture(Fig.1;Table1).All locations are situated on the margins of montane areas(details of collection areas are not shown in the interest of habitat protection).Twenty specimens of Gymnogobius sp.‘‘WD’’were also col-lected for comparison with Gymnogobius sp.‘‘CE’’. Gymnogobius sp.‘‘CE’’and Gymnogobius sp.‘‘WD’’were not collected together at a single location,although both species are distributed in Niigata and Yamagata Prefectures.Gymnogobius sp.‘‘CE’’was collected from several ponds and adjacent streams on the margins of montane areas,whereas Gymnogobius sp.‘‘WD’’was found around the lower reaches of rivers and canals on the plains.

Mitochondrial DNA phylogenies.Partial cyt-b gene sequences(1,093bp)of194individuals were classi?ed into eight haplotypes.We used1,093homologous sites for the following analyses(except ML analysis).Five and three of the haplotypes were obtained from Gymnogobius sp.‘‘CE’’and from Gymnogobius sp.‘‘WD’’,respectively. The sequences were further multiply aligned with those of related species.We used640homologous sites for the following ML analysis.The eight haplotypes were distin-guishable with the640sites.ML analysis showed that Gymnogobius sp.‘‘CE’’was divergent from other G.cas-taneus species complexes(Fig.2).ML analysis showed that those haplotypes were divided into two divergent clades(clades A and B).Clade A consisted of?ve haplo-types(Hap-01,02,03,04and05).Hap-03was the same as

158S.N.Chiba et al.

that of the Yuza,Yamagata,as previously reported by Sota et al.(2005).Clade A was further divided into two sub-clades(Yamagata and Niigata sub-clades).In the haplotype network of clade A,the two sub-clades were connected by 24single-base substitutions(Fig.2).Haplotypes within the Yamagata sub-clade were generated from Hap-01by a single-base substitution.Those of the Niigata sub-clade were connected to another by two single-base substitutions. Clade B consists of three haplotypes(Hap-06,07and08). These haplotypes were generated from Hap-06by a single-base substitution.This clade was closely related to the lineage from the Yoneshiro River in Akita Prefecture,as reported previously(Sota et al.2005),and further formed a major clade with other?oating gobies found along the Sea of Japan coast of Honshu(Sota et al.2005)(Fig.2).

Genetic diversity.Three haplotypes,Hap-01,02and 03,were shared by more than one population(Table1); namely,Hap-01,02and03were found in populations D and J,populations A,B,F and H,and populations C,E,G, H and I,respectively.An exact test of the haplotype fre-quency distributions for each population resulted in sig-ni?cant differences(P\0.001),except for the comparison of populations C–D,C–H,G–H,and D–J(P[0.138) (Fig.3).Notably,although geographically distant two populations D and J(ca.34km in direct distance)shared and?xed same haplotype Hap-01,geographically close two populations C and D(ca.3km in direct distance)are ?xed different haplotype from each other(Table1;Fig.3). The other two haplotypes,Hap-04and05were only found in population K.The cyt-b gene sequences were mono-morphic in the eight populations,B,C,D,E,F,G,I and J (Table1).The level of haplotype diversity(h)in the Gymnogobius sp.‘‘CE’’populations was low,with observed values ranging from0.000to0.262for1,093bases in the cyt-b gene(Table1).In contrast,three hap-lotypes,Hap-06,07and08,were found in population L of Gymnogobius sp.‘‘WD’’and its haplotype diversity (h=0.468)was relatively high(Table1).Nucleotide diversities(p)were comparatively low in all populations (0.000–0.048%)(Table1).

Discussion

Distribution of Gymnogobius sp.‘‘CE’’.Our?eld surveys showed that Gymnogobius sp.‘‘CE’’is distributed from Gosen in the northern part of Niigata Prefecture northward to Yuza in the northern part of Yamagata Prefecture, although it was previously thought to be restricted to the region surrounding Mt.Chokai on the borders of Yamagata and Akita Prefectures(Sota et al.2005;Mukai et al.2010).

The distribution of Gymnogobius sp.‘‘CE’’is still uncertain within Akita Prefecture.Mukai et al.(2010) mentioned the distribution of this species in Akita Prefec-ture based on personal communication by T.Shinozaki. However,there is no information on voucher specimens and their sampling locations.Although we surveyed more than13ponds and streams in the southern part of Akita Prefecture,whose environments are quite similar to those of Yamagata and Niigata Prefectures,Gymnogobius sp.‘‘WD’’was the only species found.Further?eld studies are needed to verify the distribution of Gymnogobius sp.‘‘CE’’in Akita Prefecture.On the other hand,the present study uniquely revealed the existence of another regional group of Gymnogobius sp.‘‘CE’’in Gosen,northern Niigata. Jordan and Richardson(1907)described a new goby spe-cies,Chloea nakamurae,based on specimens collected from Nagaoka in Niigata Prefecture(approximately50km

Table1List of locations,number of specimens(n),haplotype diversity(h)and nucleotide diversities(p)

Species Population code(location)n Haplotype(n)h±SD p(%)±SD

Gymnogobius sp.‘‘CE’’

A(Yuza,Yamagata Prefecture)27Hap-02(23),Hap-03(4)0.262±0.0970.048±0.046

B(Yuza,Yamagata Pref.)2Hap-02(2)0.0000.000

C(Sakata,Yamagata Pref.)18Hap-03(18)0.0000.000

D(Sakata,Yamagata Pref.)23Hap-01(23)0.0000.000

E(Sakata,Yamagata pref.)2Hap-03(2)0.0000.000

F(Sakata,Yamagata Pref.)5Hap-02(5)0.0000.000

G(Sakata,Yamagata Pref.)18Hap-03(18)0.0000.000

H(Sakata,Yamagata Pref.)27Hap-02(4),Hap-03(23)0.262±0.0970.048±0.046

I(Sakata,Yamagata Pref.)5Hap-03(5)0.0000.000

J(Tsuruoka,Yamagata Pref.)27Hap-01(27)0.0000.000

K(Gosen,Niigata Pref.)20Hap-04(18),Hap-05(2)0.190±0.1080.035±0.038 Gymnogobius sp.‘‘WD’’

L(Tsuruoka,Yamagata Pref.)20Hap-06(14),Hap-07(1),Hap-08(5)0.468±0.1050.045±0.045 Phylogeography of Gymnogobius sp.‘‘Chokai-endemic species’’159

southwest of Gosen).Subsequently,Stevenson (2002)regarded the scienti?c name as a junior synonym of Gymnogobius castaneus .The morphological characteristics of C.nakamurae are almost identical to those of Gym-nogobius sp.‘‘CE’’.Unfortunately,despite extensive ?eld studies,we have not succeeded in collecting any specimens of the G.castaneus complex from Nagaoka.There is a distinct possibility that habitats of the G.castaneus com-plex disappeared in Nagaoka because of human activities.Taxonomic status of Gymnogobius sp.‘‘CE’’will be dis-cussed in detail by our forthcoming paper.

Genetic diversity in Gymnogobius sp.‘‘CE’’.Popula-tion genetic analysis of Gymnogobius sp.‘‘CE’’showed that most populations were monomorphic or polymorphic with only two haplotypes with one or two single nucleotide substitutions.The parameters of intra-population diversi-ties (h and p )were noticeably low (Table 1).As Grant and Bowen (1998)proposed,populations with low haplotype and low nucleotide diversities had possibly experienced

bottleneck and/or founder events during the last thousands to ten thousands years.The low intra-population diversity in Gymnogobius sp.‘‘CE’’is also probably caused by such bottleneck and/or founder events.

The phylogenetic tree indicated that Gymnogobius sp.‘‘CE’’was divergent from other G.castaneus species complexes (Fig.2).Similarly,other genetic studies have also shown that some freshwater ?sh or populations,such as nine-spine stickleback (Takahashi et al.2001),?uvial sculpin (Yokoyama and Goto 2002),Far Eastern brook lamprey (Yamazaki et al.2003),medaka (Takayama-Wa-tanabe et al.2006)and eight-barbel loach (Aiki et al.2009),collected from Yamagata Prefecture,were divergent from their relatives collected from neighboring areas.These unique phylogeographic patterns may have been formed by common geological and/or ecological factors across the ?sh fauna in the area.A large freshwater system,encompassing the Okitama and Shinjo Paleo-lakes,devel-oped in the present inland area of Yamagata Prefecture during the Pliocene (Yamanoi 2009).It can be hypothe-sized that the paleo-lakes may have promoted speciation of Gymnogobius sp.‘‘CE’’.Sota et al.(2005)estimated that the differentiation of Gymnogobius sp.‘‘CE’’has occurred since the Pliocene (ca.5million years ago).This agrees with the age in which the above ancient lake existed.On the other hand,this area was often exposed to active tec-togenesis and climatic changes during the Plio–Pleistocene era (Koike et al.2005).During the processes,the structure of freshwater systems has been changed through river capture and sea level changes.As a result of the changes of water systems,migration and isolation of Gymnogobius sp.‘‘CE’’might have occurred in the Niigata and Yamagata https://www.wendangku.net/doc/c411952749.html,parative biogeographical studies

of

Fig.2Phylogenetic tree for the Gymnogobius castaneus

complex constructed based on mitochondrial cytochrome b gene sequences with

haplotype networks for clades A and B.A star with a thick line and a solid black circle indicate 24base substitutions and the missing haplotype in the

haplotype network,

respectively

Fig.3Result of the exact test for the difference in haplotype frequencies between populations of the Yamagata group.Asterisks indicate P \0.001.The geographical direct distance between pop-ulations is indicated by gray shadings

160

S.N.Chiba et al.

freshwater?shes in these areas could prove informative. Such studies are urgently required,as most species con-sidered are now endangered,as discussed below.

Conservation of Gymnogobius sp.‘‘CE’’.Gymnogo-bius sp.‘‘CE’’is assigned as a critically endangered species in the Red List of the Nature Conservation Bureau of Japan Ministry of the Environment(2013).The evolutionarily signi?cant unit(ESU)is a population unit that merits separate management and is highly valuable in conserva-tion(Ryder1986).Crandall et al.(2000)proposed the need for a broader categorization of population distinctiveness based on concepts of ecological and genetic exchange-ability.It is possible that genetic exchangeability is detectable from fundamental molecular analyses such as in the present study.There is no historical or recent genetic exchangeability between the Niigata and Yamagata groups of Gymnogobius sp.‘‘CE’’.The two groups should be treated as provisionally distinct ESUs to protect from outbreeding depression and retain the value of historical background of local populations.

In the Yamagata group,haplotypes in geographically close two populations C and D(ca.3km in direct distance) are?xed to different ones with signi?cantly different fre-quencies(Table1;Fig.3).In contrast,those in geographi-cally distant two populations D and J(ca.34km in direct distance)are shared and?xed to the same haplotype,Hap-01(Table1;Fig.3).The formation process of such genetic population structures in the Yamagata group may be explained by decrease of population size and habitat loss. As mentioned above,the populations might have experi-enced bottleneck and/or founder events.The genetic drift after bottleneck and/or founder events consequently leads to random?xation of a single or small number of haplotypes. If gene?ow is maintained between the populations within the Yamagata group,differentiation of haplotype frequen-cies would not occur.However,the signi?cant difference in haplotype frequencies was actually detected between the Yamagata populations;this suggests no gene?ow occurs among the populations after the?xation.Such absence of gene?ow might have been caused by habitat loss and fragmentation,which lead to the fragmentation and isola-tion of populations.An ancient population of Gymnogobius sp.‘‘CE’’is presumed to be distributed continuously in montane wetlands in this area.However,the population has been fragmented until the present.In the Yamagata area, rice paddy-?eld development has taken place,and notably more modern and large-scale development has taken for a number of decades(e.g.,Yamagata Prefecture and Mo-gamigawa River Land Improvement Of?ce1996).These development activities would have caused habitat destruc-tion,reduction and fragmentation of the goby.Although further consideration of the effect on the environment is required,conservation measures may be necessary not only to protect each habitat but also to promote genetic exchange among habitats in the Yamagata area.

In Niigata Prefecture,the existence of Gymnogobius sp.‘‘CE’’from only a single location in Gosen could be con-?rmed.In and around Gosen,there are numerous ponds and streams suitable for Gymnogobius sp.‘‘CE’’;however,these habitats have been unavailable because of the introduction of predator?sh species,viz.bluegill(Lepomis macrochirus) and/or largemouth bass(Micropterus salmoides)(see Nii-gata Prefecture2001).Field studies on the current status and distribution of the Niigata group of Gymnogobius sp.‘‘CE’’are of a priority for conservation of the species. Acknowledgments We thank H.Sugiyama(Akita Prefectural University),T.Kusanagi(SHIZEN KAGAKU),S.Honma,Y.Mi-shima,H.Kudo(Kamo Fisheries High School)and T.Kawaguchi (Bioindicator Co.Ltd.)for helpful advice and assistance during the ?eld survey.This study was partially supported by JSPS KAKENHI Grant Number23570105.

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162S.N.Chiba et al.

脐带干细胞综述

脐带间充质干细胞的研究进展 间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC S ）是来源于发育早期中胚层 的一类多能干细胞[1-5]，MSC S 由于它的自我更新和多项分化潜能，而具有巨大的 治疗价值 ,日益受到关注。MSC S 有以下特点：(1)多向分化潜能，在适当的诱导条件下可分化为肌细胞[2]、成骨细胞[3、4]、脂肪细胞、神经细胞[9]、肝细胞[6]、心肌细胞[10]和表皮细胞[11, 12]；(2)通过分泌可溶性因子和转分化促进创面愈合；(3) 免疫调控功能，骨髓源（bone marrow ）MSC S 表达MHC-I类分子，不表达MHC-II 类分子，不表达CD80、CD86、CD40等协同刺激分子，体外抑制混合淋巴细胞反应，体内诱导免疫耐受[11, 15]，在预防和治疗移植物抗宿主病、诱导器官移植免疫耐受等领域有较好的应用前景；(4)连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于组织工程和细胞替代治疗。1974年Friedenstein [16] 首先证明了骨髓中存在MSC S ，以后的研究证明MSC S 不仅存在于骨髓中，也存在 于其他一些组织与器官的间质中：如外周血[17]，脐血[5]，松质骨[1, 18]，脂肪组织[1]，滑膜[18]和脐带。在所有这些来源中，脐血(umbilical cord blood)和脐带(umbilical cord)是MSC S 最理想的来源，因为它们可以通过非侵入性手段容易获 得，并且病毒污染的风险低，还可冷冻保存后行自体移植。然而，脐血MSC的培养成功率不高[19, 23-24]，Shetty 的研究认为只有6%，而脐带MSC的培养成功率可 达100%[25]。另外从脐血中分离MSC S ，就浪费了其中的造血干/祖细胞(hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells,HSCs/HPCs) [26, 27]，因此，脐带MSC S (umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC S )就成 为重要来源。 一．概述 人脐带约40 g, 它的长度约60–65 cm, 足月脐带的平均直径约1.5 cm[28, 29]。脐带被覆着鳞状上皮，叫脐带上皮，是单层或复层结构，这层上皮由羊膜延续过来[30, 31]。脐带的内部是两根动脉和一根静脉，血管之间是粘液样的结缔组织，叫做沃顿胶质，充当血管外膜的功能。脐带中无毛细血管和淋巴系统。沃顿胶质的网状系统是糖蛋白微纤维和胶原纤维。沃顿胶质中最多的葡萄糖胺聚糖是透明质酸，它是包绕在成纤维样细胞和胶原纤维周围的并维持脐带形状的水合凝胶，使脐带免受挤压。沃顿胶质的基质细胞是成纤维样细胞[32]，这种中间丝蛋白表达于间充质来源的细胞如成纤维细胞的，而不表达于平滑肌细胞。共表达波形蛋白和索蛋白提示这些细胞本质上肌纤维母细胞。 脐带基质细胞也是一种具有多能干细胞特点的细胞，具有多项分化潜能，其 形态和生物学特点与骨髓源性MSC S 相似[5, 20, 21, 38, 46]，但脐带MSC S 更原始，是介 于成体干细胞和胚胎干细胞之间的一种干细胞，表达Oct-4, Sox-2和Nanog等多

外阴白色病变考试试题

外阴白色病变考试试题 一、A1型题（本大题11小题．每题1.0分，共11.0分。每一道考试题下面有A、 B、C、D、E五个备选答案。请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。） 第1题 外阴硬化性苔癣的早期病理改变是 A 表层细胞过度角化 B 表层细胞增生 C 真皮乳头层水肿 D 毛囊角质栓塞 E 底层细胞增生 【正确答案】：C 【本题分数】：1.0分 第2题 女，50岁。因外阴瘙痒而就医，组织病理为增生型，营养不良，下列治疗中哪项是正确的 A 因有恶变趋向，应及早手术治疗 B 全身治疗 C 补充多量维生素 D 活检有非典型增生时手术治疗 E 全身+局部治疗 【正确答案】：D 【本题分数】：1.0分 第3题 关于外阴瘙痒下列哪项是正确的 A 外阴瘙痒是外阴癌的早期表现 B 外阴瘙痒最常见的原因是蛲虫病

C 外阴瘙痒严重时用肥皂液清洗会有所好转 D 外阴瘙痒经治疗无效应作单纯性外阴切除术 E 外阴瘙痒不是一种疾病而是多种疾病可引起的一种症状 【正确答案】：E 【本题分数】：1.0分 第4题 女，37岁。外阴奇痒，分泌物不多。妇检：两侧小阴唇增厚，外阴粘膜不红，阴道畅，皱襞正常，无异常分泌物，宫颈柱状，光滑，I°肥大，子宫前位，常大，双附件(-)，为确诊应选用 A 外阴活检 B 阴道分泌物涂片 C 宫颈涂片(CG D 阴道镜 E 盆腔B超 【正确答案】：A 【本题分数】：1.0分 第5题 属于癌前病变的外阴白色病变是 A 增生型营养不良 B 硬化苔癣型营养不良 C 混合型营养不良 D 营养不良伴有上皮不典型增生 E 白癜风 【正确答案】：D 【本题分数】：1.0分 第6题

外阴疾病

外阴疾病 外阴：阴道口外边的外露部分肛门、阴道口及尿道邻近，经常受阴道分泌物及尿液的浸渍，容易发炎。 常见病症：外因瘙痒、外阴炎、外阴白色病变、外因溃疡、外阴癌 外阴疾病 外阴：阴道口外边的外露部分肛门、阴道口及尿道邻近，经常受阴道分泌物及尿液的浸渍，容易发炎。 常见病症：外因瘙痒、外阴炎、外阴白色病变、外因溃疡、外阴癌 外因瘙痒 外阴瘙痒是妇科疾病中很常见的一种症状，外阴是特别敏感的部位，妇科多种病变及外来刺激均可引起瘙痒，使人寝食难安、坐卧不宁。外阴瘙痒多发生于阴蒂、小阴唇，也可波及大阴唇、会阴和肛周 病因：1.慢性局部刺激，外阴、阴道、宫颈炎症的异常分泌物的刺激； 2.外阴不清洁及紧身化纤内裤、卫生巾等致通透不良； 3.外阴寄生虫病，如阴虱、蛲虫、疥疮等； 4.各种外阴皮肤病和外阴肿瘤等； 5.全身性疾病的外阴局部症状，如糖尿病、尿毒症、维生素缺乏等。 症状：外因皮肤瘙痒、烧灼感和疼痛瘙痒部位多生与阴帝、小阴唇、也可波及大阴、会阴、甚至肛周围 危害：(1)性外阴部瘙痒严重时，不但使人坐卧不宁，影响工作、学习、生活和睡眠。 (2)由于女性外阴瘙痒，会影响夫妻生活，所以极有导致夫妻感情不和，严重的 甚至造成感情破裂，婚姻走向终点。 (3)诱发生殖器感染，盆腔炎、肾周炎、性交痛等，日久不愈还可导致多种疾病 同时发生，疾病的危害严重的会危害女性健康，甚至还会造成女性不孕等严重后果。 (4)女性外阴瘙痒严重时，不易根治，易反复，引发早产、胎儿感染畸形等，造 成终身遗憾。 治疗1.外阴涂药

使用有止痒作用的洗剂、膏霜等，如炉甘石洗剂、苯海拉明软膏、皮质醇类软膏等。 2.局部封闭或穴位注药 如皮质醇激素、维生素B12、非那根等。 3.针对病因治疗。 4.预防1. 注意经期卫生，勤清洗。 2.不要冲洗阴道，因为阴道有自清的功能，如果刻意冲洗反而不利 3.忌乱用、烂用药物，忌抓搔及局部摩擦。 4.忌酒及辛辣食物，不吃海鲜等及易引起过敏的药物 6 .久治不愈者应作血糖检查。少吃糖类可避免常常感染霉菌，如少吃淀粉类、糖类以及刺激性的食物(例如酒、辛辣物、油炸类)，多吃蔬菜水果类，水份要充足。 5、不穿紧身兜裆裤，内裤更须宽松、透气，并以棉制品为宜。 6.就医检查是否有霉菌或滴虫，如有应及时治疗，而不要自己应用“止痒水”治疗。 8.保持外阴清洁干燥，尤其在经期、孕期、产褥期，每天用女性护理液清洗外阴更换内裤。 9.不穿化纤内裤、紧身裤，着棉织内衣裤。局部坐浴时注意溶液浓度、温度及时间、注意事项。 10.外阴瘙痒者应勤剪指甲、勤洗手，不要搔抓皮肤，以防破溃感染从而继发细菌性感染。 11.上完厕所请记得由前往后擦，因为肛门可能会带来不少细菌，所以如厕后请不要由肛门擦到阴部，才能减少感染的机会。 12.内裤要和其他的衣物分开洗，最好暴晒，可以减少细菌的滋生。如果患有霉菌性阴道炎的话，最好内裤都有热水煮 外阴溃疡外阴溃疡是发生于外阴部的皮肤黏膜发炎、溃烂、缺损。病灶多发生于小阴唇和大阴唇内侧，其次为前庭黏膜及阴道口周围。病程有急性及慢性。 大小阴唇、阴道口周围、阴蒂等处（外阴疾病发展中出现的一个过程，不是一个独立的疾病，有急性和慢性）急性外阴溃疡：非特异性外阴炎病情较轻，多在搔抓之后出现一般比较表浅，但疼痛比较厉害 慢性外阴溃疡：持续时间较长，或者反复发作 癌症引起的溃疡，与结核性溃疡很难鉴别，需做确诊

脐带血造血干细胞库管理办法(试行)

脐带血造血干细胞库管理办法（试行） 第一章总则 第一条为合理利用我国脐带血造血干细胞资源，促进脐带血造血干细胞移植高新技术的发展，确保脐带血 造血干细胞应用的安全性和有效性，特制定本管理办法。 第二条脐带血造血干细胞库是指以人体造血干细胞移植为目的，具有采集、处理、保存和提供造血干细胞 的能力，并具有相当研究实力的特殊血站。 任何单位和个人不得以营利为目的进行脐带血采供活动。 第三条本办法所指脐带血为与孕妇和新生儿血容量和血循环无关的，由新生儿脐带扎断后的远端所采集的 胎盘血。 第四条对脐带血造血干细胞库实行全国统一规划，统一布局，统一标准，统一规范和统一管理制度。 第二章设置审批 第五条国务院卫生行政部门根据我国人口分布、卫生资源、临床造血干细胞移植需要等实际情况，制订我 国脐带血造血干细胞库设置的总体布局和发展规划。 第六条脐带血造血干细胞库的设置必须经国务院卫生行政部门批准。 第七条国务院卫生行政部门成立由有关方面专家组成的脐带血造血干细胞库专家委员会（以下简称专家委

员会），负责对脐带血造血干细胞库设置的申请、验收和考评提出论证意见。专家委员会负责制订脐带血 造血干细胞库建设、操作、运行等技术标准。 第八条脐带血造血干细胞库设置的申请者除符合国家规划和布局要求，具备设置一般血站基本条件之外， 还需具备下列条件： （一）具有基本的血液学研究基础和造血干细胞研究能力； （二）具有符合储存不低于1 万份脐带血的高清洁度的空间和冷冻设备的设计规划； （三）具有血细胞生物学、HLA 配型、相关病原体检测、遗传学和冷冻生物学、专供脐带血处理等符合GMP、 GLP 标准的实验室、资料保存室； （四）具有流式细胞仪、程控冷冻仪、PCR 仪和细胞冷冻及相关检测及计算机网络管理等仪器设备； （五）具有独立开展实验血液学、免疫学、造血细胞培养、检测、HLA 配型、病原体检测、冷冻生物学、 管理、质量控制和监测、仪器操作、资料保管和共享等方面的技术、管理和服务人员； （六）具有安全可靠的脐带血来源保证； （七）具备多渠道筹集建设资金运转经费的能力。 第九条设置脐带血造血干细胞库应向所在地省级卫生行政部门提交设置可行性研究报告，内容包括：

外阴白色病变的症状表现有哪些

外阴白色病变的症状表现有哪些 外阴白色病变是慢性外阴的营养不良。属于营养不良的一种。而这也有分为好几个类型，混合型、增生型和硬化苔藓型等等都是外阴白色病变的类型。 外阴奇痒为主要症状，搔痒时间从发病到治疗有2～3月之内，也有达20 年之久，搔痒剧烈程度不分季节与昼夜，如伴有滴虫性或霉菌性阴道炎，分泌物会更多，局部烧灼感，刺痛与搔痒所致的皮肤粘膜破损或感染有关，局部有不同程度的皮肤粘膜色素减退，常有水肿，皲裂及散在的表浅溃疡。 一、增生型营养不良 一般发生在30～60岁的妇女，主要症状为外阴奇痒难忍，抓伤后疼痛加剧，病变范围不一，主要波及大阴唇，阴唇间沟，阴蒂包皮和后联合处，多呈对称性，病变皮肤增厚似皮革，隆起有皱襞，或有鳞屑，湿疹样改变，表面颜色多暗红或粉红，夹杂有界限清晰的白色斑块，一般无萎缩或粘连。 二、硬化苔藓型营养不良 可见于任何年龄，多见于40岁左右妇女，主要症状为病变区发痒，但一般远较增生型病变为轻，晚期出现性交困难，病变累及外阴皮肤，粘膜和肛周围皮肤，除皮肤或粘膜变白，变薄，干燥易皲裂外，并失去弹性，阴蒂多萎缩，且与包皮粘连，小阴唇平坦消失，晚期皮肤菲薄皱缩似卷烟纸，阴道口挛缩狭窄，仅容指尖。 幼女患此病多在小便或大便后感外阴及肛周不适，外阴及肛周区出现锁孔状珠黄色花斑样或白色病损，一般至青春期时，病变多自行消失。 三、混合型营养不良 主要表现为菲薄的外阴发白区的邻近部位，或在其范围内伴有局灶性皮肤增厚或隆起。 四、增生型或混合型伴上皮非典型增生 一般认为在增生型及混合型病变中，仅5、10例可出现非典型增生，且此非典型增生仅限于增生的上皮细胞部分。非典型增生多无特殊临床表现，局部组织活体组织检查为唯一的诊断方法。但如外阴局部出现溃疡。或界限清楚的白色隆起时，在该处活检发现非典型增生，其癌变的可能性较大。

外阴白色病变的检查诊断方法是什么

外阴白色病变的检查诊断方法是什么 外阴奇痒是外阴白色病变的主要症状，搔痒时间从发病到治疗有2～3月之内，也有达20年之久，搔痒剧烈程度不分季节与昼夜。专家提示，一旦发现自己有类似于外阴白色病变的这种，应立即到医院进行确诊。早期的诊断及治疗对我们早日恢复健康并且尤为重要。 外阴白色病变的检查： 多点活检送病理检查，确定病变性质，排除早期癌变，活检应在有皲裂，溃疡，隆起，硬结或粗糙处进行，为做到取材适当，可先用1%甲苯胺蓝(toluidine blue)涂病变区，待白干后，再用1%醋酸液擦洗脱色，凡不脱色区表示该处有裸核存在，提示在该处活检，发现非典型增生或甚至癌变的可能性较大，如局部破损区太广，应先治疗数日，待皮损大部愈合后，再选择活检部位以提高诊断准确率。 外阴白色病变的诊断： 1、症状判断：外阴白斑一般根据症状就可以判断，比如，外阴局部粘 膜发白，瘙痒、粗糙、脱屑等现象的出现，都会诊断为外阴白斑，当然，外阴白斑有很多的类型，如果外阴白斑属于增生型，也就是说局部的皮肤粘膜增厚了，弹性变差了，而且也出现了相应的溃疡等不适症状。这是主要的外阴白斑的诊断方法。 2、细胞活检：有时外阴白斑的诊断需要进一步的做细胞活检，观察有 没有癌细胞，以便于确诊。活检病理检查确定病变性质，排除早期癌变。活检应在有皲裂溃疡、隆起、硬结或粗糙处进行为做到取材适当，外阴白斑的诊断方法可先用1%甲苯胺蓝涂病变区，待白干后再用1%醋酸液擦洗脱色。凡不脱色区表示该处有裸核存在，提示在该处活检发现非典型增生或甚至癌变的可能性较大。如局部破损区太广，应先治疗数日待皮损大部愈合后，再选择活检部位以提高诊断准确率。 3、病理诊断依据：除了解疾病的主要临床症状外，还应对疾病的发病 机理有一定的认识，因为导致外阴白斑皮肤瘙痒及色素的减退或脱色的疾病有很多种，不只是外阴白斑一种，它们的表现虽有些不同，但用肉眼不易区别开来，所以当遇到外阴有病损不典型或慢性皲裂、局限性增厚、溃破等症状的患者时，必须依靠活组织病理检查确诊。

卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范(试行)

卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规 范(试行)》的通知 【法规类别】采供血机构和血液管理 【发文字号】卫办医政发[2009]189号 【失效依据】国家卫生计生委办公厅关于印发造血干细胞移植技术管理规范(2017年版)等15个“限制临床应用”医疗技术管理规范和质量控制指标的通知 【发布部门】卫生部(已撤销) 【发布日期】2009.11.13 【实施日期】2009.11.13 【时效性】失效 【效力级别】部门规范性文件 卫生部办公厅关于印发《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范（试行）》的通知 （卫办医政发〔2009〕189号） 各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局： 为贯彻落实《医疗技术临床应用管理办法》，做好脐带血造血干细胞治疗技术审核和临床应用管理，保障医疗质量和医疗安全，我部组织制定了《脐带血造血干细胞治疗技术管理规范（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。 二〇〇九年十一月十三日

脐带血造血干细胞 治疗技术管理规范（试行） 为规范脐带血造血干细胞治疗技术的临床应用，保证医疗质量和医疗安全，制定本规范。本规范为技术审核机构对医疗机构申请临床应用脐带血造血干细胞治疗技术进行技术审核的依据，是医疗机构及其医师开展脐带血造血干细胞治疗技术的最低要求。 本治疗技术管理规范适用于脐带血造血干细胞移植技术。 一、医疗机构基本要求 （一）开展脐带血造血干细胞治疗技术的医疗机构应当与其功能、任务相适应，有合法脐带血造血干细胞来源。 （二）三级综合医院、血液病医院或儿童医院，具有卫生行政部门核准登记的血液内科或儿科专业诊疗科目。 1.三级综合医院血液内科开展成人脐带血造血干细胞治疗技术的，还应当具备以下条件： （1）近3年内独立开展脐带血造血干细胞和（或）同种异基因造血干细胞移植15例以上。 （2）有4张床位以上的百级层流病房，配备病人呼叫系统、心电监护仪、电动吸引器、供氧设施。 （3）开展儿童脐带血造血干细胞治疗技术的，还应至少有1名具有副主任医师以上专业技术职务任职资格的儿科医师。 2.三级综合医院儿科开展儿童脐带血造血干细胞治疗技术的，还应当具备以下条件：

妇科良方_第二章 外阴白色病变及外阴瘙痒症方

外阴白色病变方 外阴白色病变包括由于各种因素影响所致之外阴部皮肤及粘膜的不同程度变白及（或）粗糙、萎缩的状态。1975年国际外阴病研究会改称“外阴白斑”为“慢性外阴营养不良”，并根据其组织病理变化的不同而分为增生型营养不良（包括无非典型增生、非典型增生两类）、硬化苔藓型营养不良、混合型营养不良（亦包括无非典型增生、非典型增生两类）三种类型。 外阴瘙痒为本病主要症状，搔抓可造成局部破溃与感染而出现烧灼感、疼痛、流液。增生型皮肤增厚似皮革，粗糙，或有鳞屑、湿疹样改变，表面颜色多暗红或粉红，夹杂有界限清晰的白色斑块；硬化苔藓型皮肤或粘膜变白变薄，甚至裂开，阴道口萎缩者可致性交痛；混合型是在外阴萎缩的基础上又有增厚的斑块或疣状增生灶。各型均以病检为主要诊断依据。 西医治疗可内服维生素A、B2、B6、鱼甘油等；局部用药以止痒、消炎、润肤和改善局部营养为目的，用药应依据病理类型。如增生型可用肤轻松、氢化可的松等软膏涂擦；硬化苔藓型给予1～2%丙酸睾丸酮鱼甘油软膏；混合型则用丙酸睾素软膏与可的松软膏合用或先后使用。氦氖激光照射对外阴硬萎有一定疗效。 本病一般属中医“阴痒”、“阴蚀”等病证范畴。其发病机理，常因肝肾阴血不足，不能滋养阴器，血虚生风化燥，而致阴部奇痒难忍；或因脾气亏虚，一则气虚血少，不能滋养阴部，脾虚又可生湿，流注于下，形成气血不足而湿浊停滞的虚实夹杂局面；或因湿热内盛，热蕴阴部肌肤而致阴痒阴肿；久病入络，气血运行不畅而成瘀滞，与湿浊相互胶结，而见苔癣、奇痒、干裂诸候，且经久难愈。治疗当结合病因病机，或滋养肝肾，养血熄风止痒；或清热利湿，祛风止痒；或活血化瘀软坚；或健脾祛湿杀虫等。 本节选介消斑膏丸方、蛇桑坐浴方等治疗外阴白色病变验方共13首。 1.消斑膏丸方 【药物组成】①外用消斑膏：A、消斑膏1号：补骨脂、仙灵脾各9g，生狼毒、白藓皮各6g，蛇床子、徐长卿各15g，薄荷1g。用其酒精渗出液，回收浓缩后，制成霜剂；B、消斑膏2号：即1号去薄荷，加0.1%强的松粉拌匀而成（制法同上）；C、消斑膏3号：即1号去狼毒、薄荷，加白花蛇舌草、一枝黄花各30g（制法同上）；D、消斑膏4号：即1号去薄荷加丙酸睾丸酮做成0.2%的霜剂（制法同上）。 ②内服消斑丸：黄芪、丹参、当归、菟丝子、仙灵脾、白蒺藜各3g，白藓皮4g，木香 0.2g。共研细末，做成蜜丸或煎成汤剂（以上为1日量）。 【治疗方法】①外用消斑膏：1号适用于外阴无破溃或皲裂者；2号适用于对1号有过敏反应但无癌变可能者；3号适用于局部有感染、破溃或皲裂，或有霉菌，滴虫感染者；4号适用于外阴萎缩或有粘连者。 以上软膏均每日外涂阴部1～2次。 ②内服消斑丸：每日2次，每次10g。所有病例均服此丸。 膏剂外用和丸剂内服，均以3个月为1疗程。一般用药1～3个疗程。

卫生部关于印发《脐带血造血干细胞库设置管理规范(试行)》的通知

卫生部关于印发《脐带血造血干细胞库设置管理规范(试行)》的通知 发文机关：卫生部(已撤销) 发布日期： 2001.01.09 生效日期： 2001.02.01 时效性：现行有效 文号：卫医发(2001)10号 各省、自治区、直辖市卫生厅局： 为贯彻实施《脐带血造血干细胞库管理办法（试行）》，保证脐带血临床使用的安全、有效，我部制定了《脐带血造血干细胞库设计管理规范（试行）》。现印发给你们，请遵照执行。 附件：《脐带血造血干细胞库设置管理规范（试行）》 二○○一年一月九日 附件： 脐带血造血干细胞库设置管理规范（试行） 脐带血造血干细胞库的设置管理必须符合本规范的规定。 一、机构设置 （一）脐带血造血干细胞库（以下简称脐带血库）实行主任负责制。 （二）部门设置 脐带血库设置业务科室至少应涵盖以下功能：脐带血采运、处理、细胞培养、组织配型、微生物、深低温冻存及融化、脐带血档案资料及独立的质量管理部分。 二、人员要求

（一）脐带血库主任应具有医学高级职称。脐带血库可设副主任，应具有临床医学或生物学中、高级职称。 （二）各部门负责人员要求 1．负责脐带血采运的人员应具有医学中专以上学历，2年以上医护工作经验，经专业培训并考核合格者。 2．负责细胞培养、组织配型、微生物、深低温冻存及融化、质量保证的人员应具有医学或相关学科本科以上学历，4年以上专业工作经历，并具有丰富的相关专业技术经验和较高的业务指导水平。 3．负责档案资料的人员应具相关专业中专以上学历，具有计算机基础知识和一定的医学知识，熟悉脐带血库的生产全过程。 4．负责其它业务工作的人员应具有相关专业大学以上学历，熟悉相关业务，具有2年以上相关专业工作经验。 （三）各部门工作人员任职条件 1．脐带血采集人员为经过严格专业培训的护士或助产士职称以上卫生专业技术人员并经考核合格者。 2．脐带血处理技术人员为医学、生物学专业大专以上学历，经培训并考核合格者。 3．脐带血冻存技术人员为大专以上学历、经培训并考核合格者。 4．脐带血库实验室技术人员为相关专业大专以上学历，经培训并考核合格者。 三、建筑和设施 （一）脐带血库建筑选址应保证周围无污染源。 （二）脐带血库建筑设施应符合国家有关规定，总体结构与装修要符合抗震、消防、安全、合理、坚固的要求。 （三）脐带血库要布局合理，建筑面积应达到至少能够储存一万份脐带血的空间；并具有脐带血处理洁净室、深低温冻存室、组织配型室、细菌检测室、病毒检测室、造血干/祖细胞检测室、流式细胞仪室、档案资料室、收/发血室、消毒室等专业房。 （四）业务工作区域应与行政区域分开。

女性警惕五种常见外阴疾病

女性警惕五种常见外阴疾病 *导读：女性的阴部柔软，脆弱，不好好呵护就容易受伤。外阴损伤是常见的外阴疾病，常因遭到猛烈碰撞导致。此外，还有外阴损伤、尖锐湿疣、外阴肿瘤等外阴疾病女性也要警惕。…… *1、外阴损伤 外阴损伤是女性常见的症状之一。发病原因多数为骑跨式跌伤，如骑男式自行车时意外的急刹车，或上下车时阴部遭到猛烈碰撞，外阴部位受到暴力打击等等。 在这种情况下，外阴部有严重的挫伤，可有疼痛，能见到皮下淤血或血肿。 *2、*尖锐湿疣 尖锐湿疣是一种性传播疾病，一般与不洁性交有关。发病时，外阴瘙痒，分泌物增加。早期外阴部的皮肤、粘膜粗糙不平，随后可摸到小结节或肿块，样子为毛刺状，或者像大小不等的菜花状、鸡冠花状的灰白色肿物，多分布在小阴唇的内侧、大小阴唇之间的唇间沟、会阴和肛门。 *3、假性湿疣 假性湿疣不是性传播疾病。在阴唇内侧可以看到有小米粒大小的淡红色疹子，两侧对称，分布均匀。 *4、*外阴肿瘤 女性外阴的良性肿瘤，如乳头瘤、纤维瘤等，并不多见。它

们是生长在大阴唇外侧的单个肿瘤。 常见的恶性肿瘤是“外阴鳞状上皮癌”。在外阴部能摸到硬结或肿物，常伴有疼痛或瘙痒，有的病人在外阴部位，还会长有经久不愈的溃疡。 *5、*外阴白色病变 外阴白色病变，也称为“慢性外阴营养不良”。 有一种外阴白色病变，一般发生在30～60岁的妇女，主要症状是外阴奇痒难忍，抓破以后伴有局部疼痛。外阴皮肤增厚，颜色多为暗红色或粉红色中夹杂有界限清晰的白色斑块。 如果发现有外阴白斑，应当去详细检查治疗。过去，曾经认为它可以癌变，所以主张早期切除。现在，虽然医生们已经不主张早期切除，但是，还是要病人积极治疗。 有白色病变的人，更要保持外阴部位的清洁干燥，不要用肥皂或其他刺激性药物清洗外阴，也不要用手去搔抓，不要吃辛辣的食物，衣服要宽大，不要穿不透气的人造纤维内裤。

脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定

脐带血间充质干细胞的分离培养和鉴定 【摘要】目的分离培养脐带血间充质干细胞并检测其生物学特性。方法在无菌条件下用密度梯度离心的方法获得脐血单个核细胞，接种含10%胎牛血清的DMEM培养基中。单个核细胞行贴壁培养后，进行细胞形态学观察，绘制细胞生长曲线，分析细胞周期，检测细胞表面抗原。结果采用Percoll(1.073 g/mL)分离的脐血间充质干细胞大小较为均匀，梭形或星形的成纤维细胞样细胞。细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期，至第9天后数量减少;流式细胞检测表明50%～70%细胞为CD29和CD45阳性。结论体外分离培养脐血间充质干细胞生长稳定，可作为组织工程的种子细胞。 【关键词】脐血;间充质干细胞;细胞周期;免疫细胞化学 Abstract: Objective Isolation and cultivation of mesenchymal stem cells (MSCs) in human umbilical cord in vitro, and determine their biological properties. Methods The mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation from human umbilical cord blood in sterile condition, and cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum. After the adherent mononuclear cells were obtained, the shape of cells were observed by microscope, then the cell growth curve, the cell cycle and the cell surface antigens were obtained by immunocytochemistry and flow cytometry methods. Results MSCs obtained by Percoll (1.073 g/mL) were similar in size, spindle-shaped or star-shaped fibroblasts-liked cells. Cell growth curve analysis indicated that MSCs were in the exponential stage after 5d and in the stationary stages after 9d. Flow cytometry analysis showed that the CD29 and CD44 positive cells were about 50%～70%. Conclusions The human umbilical cord derived mesenchymal stem cells were grown stably in vitro and can be used as the seed-cells in tissue engineering. Key words:human umbilical cord blood; mesenchymal stem cells; cell cycle; immunocytochemistry 间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)在一定条件下具有多向分化的潜能，是组织工程研究中重要的种子细胞来源。寻找来源丰富并不受伦理学制约的间充质干细胞成为近年来的研究热点[1]。脐血(umbilical cord blood, UCB)在胚胎娩出后，与胎盘一起存在的医疗废物。与骨髓相比，UCB来源更丰富，取材方便，具有肿瘤和微生物污染机会少等优点。有人认为脐血中也存在间充质干细胞(Umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells，UCB-MSCs)。如果从脐血中培养出MSCs，与胚胎干细胞相比，应用和研究则不受伦理的制约，蕴藏着巨大的临床应用价值[2,3]。本研究将探讨人UCB-MSCs体外培养的方法、细胞的生长曲线、增殖周期和细胞表面标志等方面，分析UCB-MSCs 作为间充质干细胞来源的可行性。

脐带血干细胞检测

脐带血干细胞检测 对每份脐血干细胞进行下列检测： ①母体血样做梅毒、HIV和CMV等病原体检测，这一检测使脐血干细胞适合于其它家庭成员应用。如任何一种病原体测试阳性，需重复测定。 ②每份脐血干细胞样本同时检测确定没有微生物污染。 ③细胞活性检测、有核细胞数、CD34+细胞数、集落形成试验等。CD34是分子量115KD 的糖蛋白分子，使用特定单克隆抗体（抗-CD34）确定，脐血祖细胞的大部分，包括体外培养产生造血集落的细胞都包含在表达CD34抗原的细胞群中。 ④HLA组织配型、ABO血型。 一、采血方式及其优点 再生缘生物科技公司采用最严谨的封闭式血袋收集法，避免在收集脐带血液时可能遭受微生物污染的发生，且以最少之操作步骤，收集最大量之脐带血液方式，在产房内即可完成。 二、脐带血处理与保存 脐带血收集于血袋，经专人运送至再生缘生物科技公司之无菌细胞分离实验室后，由专业的技术人员于完全无菌的环境下，依标准操作程序将血液进行分离，收集具有细胞核的细胞，其中含有丰富的血液干细胞，经加入冷冻保护剂和适当品管检测后，并进行以最适合

血液干细胞的冷冻降温程序方式，进行细胞冷冻程序，达到避免细胞受到冷冻过程之伤害。完成后，冷冻细胞立刻保存于摄氏零下196度的液态氮槽中。所有操作程序记录和细胞保存相关数据，均由计算机条形码系统追踪确认，完全符合国际脐带血库之标准操作程序和品管要求。 母亲血液之检测 为确保所操作和保存的脐带血液细胞，符合国际血液操作规范，并提供客户最大的保障，对于产妇血液必须同时进行一些病毒传染病的检测，以确保没有下列病毒，如艾滋病毒(HIV)、C型肝炎病毒(HCV)、人类T细胞淋巴病毒(HTLV)和梅毒(syphilis)，同时对于B型肝炎病毒(HBV)和巨细胞病毒(CMV)加以侦测和纪录，作为将来可能应用脐带血细胞时之必要参考数据并符合卫生医疗之要求。 脐带血细胞之品管 对于所保存之脐带血细胞均进行多项操作流程监控和品管检测，如微生物污染检测、血液细胞浓度、细胞存活率、细胞活性测定等，每一步骤均有详细之纪录，在操作方法和使用仪器方面均定期进行验证和校验，以符合国际医疗标准。 三、实验室、贮存处所介绍 再生缘生物科技公司拥有符合美国联邦标准(FED-STD-209E)和中华民国优良药品制造标准（一区、二区、三区）的生物安全实验室和无菌操作设备，在专业的技术人员依标准操作程序下进行血液分离和保存步骤，保障客户珍贵样品和权益。 分离后之细胞将依浓度分装入4-6个冷冻管，计算机降温冷冻完成后，即由食品工业发展研究所国家细胞库专业液态氮库房人员，将冷冻细胞分别存放于二个不同的脐带血细胞专属液态氮槽中保存，在安全机制上更有保障。液态氮库房拥有五吨的液态氮供应系统，每一液氮槽均有自动充填装置和异常警报系统，和每日值勤人员监控，确保冷冻细胞处于最佳的冷冻状态。 四、安全管制措施 脐带血液经快递送达无菌细胞分离实验室后，每一步骤均有专业技术人员操作和监督，并将所有分析数值详细填于具有条形码管制之分析表格和计算机数据表中，利用条形码和读码系统确认样品之专一性，避免人为失误，且便于追溯和数据品管。 在冷冻细胞保存上

妇科病史及检查、外阴白色病变练习题

妇科病史及检查、外阴白色病变单项选择题 1解析纠错 A、基础体温单相型 B、阴道脱落细胞反映为轻度雌激素影响 C、宫颈粘液有羊齿状结晶 D、子宫内膜呈增殖期变化 E、子宫内膜呈分泌期变化 2解析纠错 A、B超检查 B、阴道细胞学检查 C、基础体温测定 D、子宫内膜病理检查 E、X线检查 3解析纠错 A、宫颈粘液干燥后形成羊齿状结晶 B、尿雌三醇测定 C、子宫内膜呈增殖期变化 D、阴道脱落细胞中大部分为角化细胞 E、基础体温高温相

4解析纠错 A、盆腔检查前应首先排空膀胱 B、每检查一个病人应更换臀垫 C、查内诊前应消毒外阴 D、避免月经期内诊检查 E、未婚者禁内诊检查 5解析纠错 A、双合诊 B、三合诊 C、直肠腹部诊 D、腹部扪诊 E、肛诊 6、女，36岁。孕3个月自然流产后7天，阴道出血不多，但分泌物呈脓血性，有气味，发热伴小腹疼痛5天，今晨疼痛加剧。体检:体温39.6℃，痛苦病容，腹痛拒按，子宫略大而软，压痛，右侧附件区压痛明显，触及一边界不清囊性肿块，约5cm×6cm×4cm大小，左侧轻压痛，白细胞 1.5×109/L，中性0.9，血红蛋白10g解析纠错 A、急性盆腔炎，盆腔脓肿形成 B、右侧卵巢囊肿继发感染 C、流产诱发急性阑尾炎 D、异位妊娠 E、卵巢囊肿蒂扭转 7、女，30岁。外阴肿物疼痛一周，加剧5小时。查:右侧前庭腺红肿，触痛（+），波动（+）， 解析纠错

A、全身抗生素治疗+支持疗法 B、脓肿挖出术+抗生素应用 C、脓肿切开引流并造口术+抗生素 D、脓肿切开引流+抗生素应用 E、局部抗生素应用+全身支持疗法 8、女，65岁。绝经8年，近两年白带增多，时而呈血性，最近半年来反复阴道少量出血，色红， 不伴腹痛。妇科检查:宫颈光，子宫正常大小，未见明显萎缩，附件（- 解析纠错 A、子宫内膜炎 B、老年性阴道炎 C、颗粒细胞瘤 D、子宫内膜癌 E、子宫颈管癌 9、女，46岁。以往月经规律，近两年月经不规律。且月经量增多。本次停经2个月余出血已15天，量仍多伴头晕。妇检查:宫颈光滑，宫体前位，正常大小，附件未及，阴道内多量鲜血和血块。 解析纠错 A、止血药加静脉抗生素 B、止血药加补充铁剂 C、大量雌激素止血并支持疗法 D、诊断性刮宫，支持疗法 E、大量孕激素并支持疗法 10、女，26岁。月经规律，现停经45天，阴道少量出血7天，时有阵阵腹痛或腰酸。妇科检查: 宫颈软，摇摆痛（+），少量血染，宫体略大而软，附件（-

第二节 外阴上皮内瘤样病变

第二节外阴上皮内瘤样病变外阴上皮内瘤样病变（vulva intraepithelial neoplasia，VIN）是一组外阴病变的病理学诊断名称。包括外阴鳞状细胞上皮内瘤样病变和外阴非鳞状细胞上皮内瘤样病变（Paget’s病，未浸浸润的黑色素细胞瘤），多见于45岁左右妇女。近年VIN 发生率有所增加。VIN很少发展为浸润癌，但60岁以上或伴有免疫抑制的年轻患者可能转变为浸润癌。 [病因] 不完全清楚。现代分子学技术检测发现80%VIN伴有HPV （16型）感染。细胞病理学变化包括病毒蛋白在细胞核周形成晕圈、细胞膜增厚以及核融合。这些改变多发生在病变的表层细胞。其它的危险因素有性病、肛门-生殖道瘤样病变、免疫抑制以及吸烟。 [临床表现] V1N的症状无特异性，与外阴营养不良一样，主要为瘙痒、皮肤破损、烧灼感、溃疡等。体征有时表现为丘疹或斑点，单个或多个，融合或分散，灰白或粉红色；少数为略高出表面的色素沉着。 [诊断] 1．活组织病理检查对任何可疑病变应作多点活组织检查。为排除浸润癌，取材时需根据病灶情况决定取材深度，一般不需达皮下脂肪层。

2．病理学诊断与分级 （1）外阴鳞状上皮内瘤样病变分3级。VIN I：即轻度不典型增生。VINⅡ：即中度不典型增生。VIN Ⅲ：即重度不典型增生，及原位癌。 （2）外阴非鳞状上皮内瘤样病变主要指外阴Paget’s 病，其病理特征为基底层可见大而不规则的圆形、卵圆形或多边形细胞，胞浆空而透亮，核大小、形态、染色不一（即所谓的Paget’s细胞），表皮基底膜完整。 [治疗] 1．外阴鳞状上皮内瘤样病变 （1）VIN I：可用：①药物治疗，5%氟尿嘧啶（5-FU）软膏，外阴病灶涂抹，每日一次。②激光治疗，此法治疗后能保留外阴外观，疗效较好。 1％．占女性生殖道癌肿的3%～5%，常见于60岁以上妇女。以外阴鳞状细胞癌最常见，其它有恶性黑色素瘤、基底细胞癌、前庭大腺癌等。绝大多数肿瘤生长在外阴皮肤表面，容易被发现，但仍有很多患者未能获早期诊断和治疗。其原因或是患者不重视外阴部症状，如瘙痒、结节状小赘生物等，或是医师不认识外阴症状的重要性，常没有先作病变部位活组织检查，确诊后再治疗，而是先盲目给予不适当治疗延误病情。

外阴白斑症状类型和治疗方法

外阴白斑症状类型和治疗方法 一、萎缩型 萎缩型Ⅰ期： 主要症状不明显，部分患者有轻度瘙痒，无白色病变出现，外阴有不容易被肉眼发现的萎缩。 萎缩型Ⅱ期： 典型症状是外阴有轻度肉眼可见萎缩，一般从大、小阴唇，阴蒂开始。大、小阴唇弹性降低，表面皱褶减少或无皱褶、外阴瘙瘅比较轻微。因萎缩可有外阴干燥，性生活不适等感觉。外阴皮肤局部出现色素减退，成点状多发或片状。 萎缩型Ⅲ期： 症状严重。外阴大阴唇扁平，小阴唇消失，阴蒂萎缩变小或粘连。尿道口萎缩，严重时小便失禁，阴道口萎缩，性生活困难。部分患者波及肛门白斑及萎缩，引起肛周皮肤无皱褶，弹性降低，引起大便时肛裂。约50%患者外阴皮肤出现大面积色素减退。 二、增生型 增生型I期： 主要症状是外阴瘙痒，部分患者瘙痒剧烈，晚间瘙痒加剧，常因骚抓可引起红肿和溃破，可有烧灼等不适感 增生型Ⅱ期： 在Ⅰ期症状基础上，病变区皮肤出现角化增生，外阴皮肤局部出现轻度色素减退(一般多出现在大，小阴唇内侧)，成点状或白色小丘疹样，表面呈霜样白变。 增生型Ⅲ期： 皮肤角化增生严重，角化层反复脱落，或因搔抓引起外阴虹肿、水肿、皲裂、溃破糜烂，可有瘙痒伴随疼痛感觉，患者感觉症状剧烈，但此型患者治疗效果迅

速，就像中医阴斑散一个疗程内约85%患者症状基本消除。 三、混合型 外阴白斑病增生型和萎缩型患者的病情发展到Ⅱ期后期至Ⅲ期，一般会出现两种类型混合症状。 四、外阴白斑治疗方法 我以前用过很多药都不行，下边又干又痒钻心的难受有时候整晚睡不着，后来听说玉舒宁汤药效果好，抱着死马当活马医的态度试了一下，刚开始是干痒逐渐减轻，即使痒不大一会也就好了，慢慢的萎缩、变白的皮肤逐渐恢复，坚持了有近半年吧，真的把困扰我四五年的外阴白斑治好了。 五、外阴白斑调理方法 1、保持乐观情绪：日常生活中应注意生活压力及情绪的调节，患者应保持情绪乐观，心情开朗。患者的家人，尤其是丈夫应帮助患者树立战胜疾病的信心。 2、积极治疗慢性病：外阴白斑患者还应积极治疗慢性病，如糖尿病、内分泌疾病及免疫系统疾病。积极治疗阴道炎、外阴炎及各种引起带下增多的疾病。 3、清洗外阴方法：有些女性过于清洁，每天有清洗外阴一次或几次的习惯，其实女性外阴有自洁作用，一般一周清洗2次~3次即可，清洗时不要用任何洗涤剂，因为洗涤剂一般均为碱性，只用温水清洗即可，切忌水温不可过烫。 4、选择棉质内衣裤：患者日常生活中应穿宽松、透气性好的内衣裤，以纯棉制品为主，避免穿晴纶等化纤制品的内裤。

妇科疾病试卷(三基2013年5月第2版)

妇科疾病试卷(三基2013年5月第2版)

§6.5.2妇科疾病试卷单5选1 (题下选项可能多个正确，只能选择其中最佳的一项) 1.[1分]盆腔检查的基本要求不包括 A:检查前应解净小便 B:尽量避免经期做盆腔检查 C:未婚病人禁做双合诊及阴道窥器检查 D:所有盆腔检查均取膀胱截石位 E:检查时应每人一垫单，避免交叉感染 2.[1分]除正常月经外，引起阴道出血最多见的原因 A:卵巢内分泌功能失调 B:与妊娠有关的子宫出血 C:生殖器炎症 D:生殖器肿瘤 E:损伤、异物和药物 3.[1分]关于外阴白色病变哪项叙述是错误的 A:外阴白色病变亦称慢性外阴营养不良 B:增生型病变区皮肤发白增厚似皮革 C:苔藓型病变区皮肤萎缩变薄变白 D:混合型病变区有增生与苔藓型两种病变 E:萎缩型较易出现非典型增生 4.[1分]下列哪项不是正常月经的临床表现 A:月经期基础体温上升 B:经量>80mL为月经过多 C:月经血一般不凝固

D:不排卵也有月经来潮 E:两次月经第1天的间隔时间称为1个月经周期 5.[1分]外阴鳞癌病人中，约百分之几伴发外阴白色病变 A:15% B:5%～10% C:30% D:40% E:50%以上 6.[1分]宫颈癌的病因主要为 A:早婚、早育、多产 B:包皮垢的影响 C:单纯疱疹病毒2型及人乳头瘤病毒感染 D:慢性宫颈炎及宫颈裂伤 E:以上多种因素的协同作用 7.[1分]关于预防宫颈癌的方法，下述哪项不恰当 A:凡50岁以上的门诊病人均需做子宫颈活检 B:定期妇科病普查普治 C:贯彻计划生育政策，实行晚婚、晚育、少育 D:普及防癌知识，开展性卫生教育 E:积极治疗宫颈炎、子宫颈裂伤及上皮内瘤样病变 组5选1 (每组试题与5个共用备选项配对,可重复选用,但每题仅一个正确) 8.[1分]排卵期可出现 A:性交后出血

胎盘干细胞与脐带血干细胞的区别

胎盘干细胞与脐带血干细胞的区别 干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的原始的未分化的细胞，它可以向多种类型细胞分化，并具有相应的功能，可以用来修复和替代受到损伤，病变的组织和器官。目前主要的成体干细胞来源有胎盘来源、脐带来源、脐带血来源和骨髓来源的干细胞，本文主要介绍一下胎盘来源的干细胞和脐带血来源的干细胞的区别： 1、分离部位不同：胎盘干细胞是从胎盘组织中分离提取的干细胞，脐带血干细胞是从脐带里面血液中分离提取的干细胞。 2、种类不同：胎盘中的干细胞主要指的是间充质干细胞，而脐带血干细胞主要指的是造血干细胞。 3、分化能力不同：1）胎盘干细胞分化能力强，在特定的诱导条件下可以分化成血管干细胞、神经干细胞、肝干细胞等多种类型的干细胞，从而修复受损和病变的组织和器官2）脐带血干细胞可以在体内向红细胞、血小板等各种血液细胞分化。 4、数量不同：1）胎盘体积大，从中提取的干细胞数量丰富，并可以在体外培养扩增，扩增培养的子细胞数量达十亿个，可以供成人多次使用2）脐带血干细胞的数量要根据抽取的脐带血多少而定，不可以在体外培养扩增，一份脐带血干细胞可以供40kg以下患者一次使用。 5、治疗使用：1）胎盘干细胞目前在治疗脑瘫、糖尿病、肝硬化、心血管疾病等诸多疾病都显示了良好的效果2）脐带血干细胞可以治疗白血病，再生障碍性贫血等血液系统疾病。不过对于儿童白血病多以先天性为主，所以对于这种情况，自己的脐带血干细胞是不能使用的，需要配型使用捐献的脐血干细胞。 6、配型方面：二者自体使用都不需要配型，如果异体使用，胎盘干细胞由于免疫源性低的特点，所以配型成功率非常高，有血缘关系的亲属都可以使用；脐带血干细胞与父母配型有1/2的几率，与兄弟姐妹有1/4的几率。

外阴白色病变及外阴瘙痒的治疗

外阴白色病变及外阴瘙痒的治疗 摘要】目的讨论外阴白色病变及外阴瘙痒的治疗。方法根据患者临床表现结合 检查结果进行诊断并治疗。 【关键词】外阴白色病变外阴瘙痒治疗 外阴白色病变是指一组确切病因尚未明了的女性外阴皮肤、黏膜营养障碍性 疾病，表现为局部皮肤黏膜变白、变粗或萎缩，伴不同程度的组织变性。包括硬 化性苔藓和鳞状上皮增生，两者可同时存在，称为硬化性苔藓伴鳞状上皮增生。 外阴白色病变的癌变发生率约为2%～3%，鳞状上皮增生、硬化性苔藓伴鳞状上 皮增生可继发外阴上皮内瘤变(VIN)。硬化性苔藓很少继发VIN，恶变者罕见。外 阴瘙痒是妇科常见症状之一，可由局部或全身因素引起。 外阴鳞状上皮增生 【概述】 外阴鳞状上皮增生(squamous hyperplasia)是以外阴瘙痒为主要症状但病因不 明的疾病。迄今为止，尚无确切证据表明慢性损伤、过敏、局部营养失调或代谢 紊乱是导致此病的直接原因。 【临床表现】 1.多发生于30～60岁的妇女，最主要的症状是外阴奇痒。 2.病变范围不一，常呈对称性，主要累及大阴唇、阴唇间沟、阴蒂包皮、阴 唇后联合等处。病变部位皮肤增厚似皮革，隆起有皱襞或鳞屑、湿疹样变。表皮 层过度角化较轻时，皮肤颜色暗红或粉红；过度角化显著时，可出现界限清晰的 白色斑块。一般无萎缩或粘连。 【诊断要点】 1.外阴瘙痒为此病的主要症状，患者多难以忍受。 2.外阴色素减退起病时病变部位稍隆起，呈暗红色或粉红色，问有白色区。 进一步可发展为界限清晰的白色斑块。 3.妇科检查见外阴色素减退，常对称性累及大、小阴唇、阴蒂包皮、阴唇后 联合及肛门周围。鳞状上皮增生病损区皮肤增厚似皮革、湿疹样改变；硬化性苔 藓皮肤、黏膜变白、变薄，失去弹性，易破裂，阴道口狭窄，肛周皮肤变白。 4.病理检查为主要的确诊依据。为明确有无VIN或癌变，活检应选择在皲裂、溃疡、隆起、结节及粗糙部位进行。并应选择不同部位多点活检。也可先用1% 甲苯胺蓝涂抹病变皮肤，待自干后用1%醋酸擦洗脱色，于不脱色区活检。 5.阴道分泌物检查外阴皮肤增厚、发红或发白，伴有瘙痒且阴道分泌物增多者，应行阴道分泌物检查以排除念珠菌、滴虫感染。 6.尿糖、血糖检查外阴皮肤对称发红、增厚，伴有严重瘙痒但无分泌物者， 应考虑为糖尿病所致的外阴炎，检查尿糖、血糖可以明确诊断。 【治疗方案及原则】 1.一般处置选用宽松透气的内衣，以棉织物为佳。饮食宜清淡，忌烟酒及辛 辣刺激食品。保持外阴清洁，局部忌用肥皂及搔抓，止痒可用冷水或冰水坐浴， 每日3次，或按需施治。 2.全身用药精神紧张、瘙痒症状明显以致失眠者，可用镇静安眠和脱敏药。 3.局部用药用于控制局部瘙痒。 (1)皮质激素霜或软膏类局部外用，如l%氢化可的松软膏，每日3次。 (2)0.05%维生素A软膏外用，每日3次。