血管内皮功能检测及临床应用_勇强
#综述#血管内皮功能检测及临床应用
勇强陈真
1980年Furchgott和Za wadz k i[1]发现在外源性乙酰胆碱(acet ylcholi ne,ACh)介导的血管舒张过程中血管内皮细胞起着重要的作用。此后人们逐渐认识到血管内皮不仅在血管舒张方面发挥作用,而且还发现血管内皮分泌的一氧化氮(nitri c oxi de,NO)和内皮依赖性收缩因子(endothe li u m2dependent constricti ng fact ors,EDCFs)对血小板聚集、血管平滑肌细胞增殖和迁移、单核细胞黏附、黏附分子的表达以及在凝血和动脉粥样硬化斑块形成过程中起重要作用的各种因子具有抑制和激活作用。随着各种血管内皮功能不断被发现,血管内皮在人类疾病中所起的作用也越来越为人们所重视[2]。
一、基本原理
血管舒张可分为内皮依赖性舒张[3]和非内皮依赖性舒张[4]。内皮依赖性舒张是指在药物或生理刺激下,内皮细胞中的一氧化氮合酶(n itric2oxi de synt hase, NOS)将左旋精氨酸(L2argi n i n e,L2A rg)转化为一氧化氮,即内皮依赖性舒张因子(endot heli u m2dependent rel axi ng fact or,EDRF)通过环单磷酸鸟苷(cycli c g uanosi ne monophosphate,c G MP)途径引起平滑肌细胞舒张;内皮依赖性超级化因子(endot heli u m2deri ved hyperpol arizi ng factor,ED H F)则可通过开放钾离子通道引起平滑肌的舒张;此外内皮还可产生其他的血管活性物质,如前列环素(prostacy2 cli n,PG I2),其可通过环单磷酸腺苷(cycli c adenosi ne monophosphate,c A MP)途径引起血管平滑肌舒张。EDRF及NO被认为是引起内皮依赖性舒张最重要的因子,乙酰胆碱、缓激肽、腺苷及血管剪切力的提高均可增加NOS活性,继而通过EDRF及NO的增加引起血管舒张。内皮细胞不仅产生舒张因子,亦可产生一系
(thro mboxane a2,列收缩因子,如内皮素1(endotheli n1,ET21)、血栓素A
2
TX A2)、前列腺素H2(prostagland i n H2,PG H2),其中内皮素1是迄今为止所知道的最强的收缩因子。生理状态下,血管内皮所介导的舒张和收缩作用保持动态平衡[1]。非内皮依赖性舒张是指不依赖于血管内皮而直接作用于血管平滑肌引起血管舒张,如服用硝酸甘油可以产生外源性NO直接作用于血管平滑肌引起血管舒张[4]。
二、内皮功能检测方法
1.直接测定内皮细胞产生的相关因子:主要包括血浆(或尿样)NO、不对称二甲基精氨酸(asy mmetri ca l d i m et hylargi ni ne,AD MA)、内皮素1、组织型纤溶酶原激活剂(ti ssue p l as m i nogen acti vat or,t P A)、纤溶酶原激活剂抑制物21(type21作者单位:100029首都医科大学附属北京安贞医院超声诊断科
p l as m i nogen acti vator i nh i b itor,PA I21)、血管细胞黏附分子21(vascu l ar cell adhesi on molecu l e21,VC A M21)、内皮2白细胞黏附分子21(endothe li al leukocyte adhesi on mol2 ecu le21,ELA M21)、胞间黏附分子21(i ntercell u l ar ce ll adhesi on molecule21,I CA M2 1)、循环内皮细胞计数、类血友病因子(von W ill ebrand fact or,v W F)等[5,6],但上述物质的检测缺乏特异性。
2.有创性检测:一般选用冠状动脉或前臂血管(体积描记法),观察动脉对乙酰胆碱所诱发的血管内径变化,因操作较为复杂,其本身亦对内皮功能造成损害,现已较少应用[7]。冠状动脉内超声检查法是利用血管内超声观测某一段冠状动脉注射乙酰胆碱前后的截面积细微变化,以评价血管扩张的能力[8]。
3.无创性检测:正电子发射型电子计算机断层技术和磁共振技术对内皮功能的测定具有高敏感性和高特异性的特点,但检查成本较高,也可应用荧光透视成像技术和CT技术进行内皮功能检测[6]。
1992年Ce l er m ajer等[9]首先提出采用高分辨力超声无创性测定血管内皮依赖性舒张功能。目前,主要采用高分辨力超声测定肱动脉或股动脉血管舒张功能,也可应用经胸超声心动图检测冠状动脉主干进行冠状动脉内皮功能评价。经食道超声能清晰显示冠状动脉,可减少测量误差。本文着重介绍肱动脉血管舒张功能的超声检测方法。
三、体表测定法评价血管内皮功能
1.经胸超声心动图法评价冠状动脉内皮功能:(1)冷加压负荷实验:通过冠状动脉主干的长轴图像测量左主干内径,而后让受检者将一侧手及前臂浸入冰水中保持90s,记录此时冠状动脉左主干内径,计算内径变化百分率即内皮依赖血管舒张功能检测;间隔15m i n后,进行非内皮依赖血管舒张功能检测,让受检者舌下含服0.3mg硝酸甘油,5~6m i n后再记录冠状动脉左主干内径,观察冠状动脉左主干内径的变化;(2)乙酰胆碱法:通过冠状动脉主干的长轴图像测量左主干内径,而后让受检者将一侧手及前臂浸入冰水中保持90s,记录此时冠状动脉左主干内径,进行内皮依赖血管舒张功能检测;间隔15m i n后,进行非内皮依赖血管舒张功能检测,再经静脉向受检者注入乙酰胆碱4m i n后,观察冠状动脉左主干内径的变化[10]。
2.经肱动脉评价血管内皮功能:受试者保持空腹状态,检测当天禁烟、禁茶、禁咖啡,部分学者认为正在使用血管紧张素转换酶抑制剂类、钙离子拮抗剂类及B受体阻滞剂类的患者应停用该药24h。
血流介导的血管扩张功能(fl o w m ed i ated d ilati on,F MD):以血压袖带充气加压阻断血流以产生肱动脉血流刺激。加压位置为肘窝或前臂。受试者仰卧位休息至少10m i n后取右臂(肱动脉)做首次扫查,并用脉冲多普勒测量动脉血流速度,多普勒取样角度[60b,脉冲多普勒取样容积(1.5mm)置于管腔中央。而后将血压计充气袖带充气加压至300mm H g,持续4.5m i n。第2次扫查在袖带放气前30s至放气后90s进行,并于袖带放松后前15s记录血流速度。患者休息
15m i n后,进行第3次扫查,从而得到高剪切应力介导的肱动脉扩张。在松压前30s及之后2m i n内连续记录动脉长轴图像,在松压后15s内立即采集动脉中部的脉冲多普勒信号以评估反应性充血的速度。动脉反应性充血后内径相对于动脉基础内径变化的百分率即代表内皮功能,正常标准\10.0%。
反应充血试验后患者至少需要休息10m i n以恢复至进行非内皮依赖性舒张功能检查所需的基础状态。在大多数研究中,给予单次高剂量喷雾或舌下含0.4 mg硝酸甘油3~4m i n后进行非内皮依赖性舒张功能测量。值得注意的是,有明显心率过缓、低血压的患者不能使用硝酸甘油。
目前,上臂和前臂阻断在血管内皮功能测量中都有采用,而对应的哪种方法更准确、更精密并未达成共识。上臂阻断时,反应性充血引起的内径变化比前臂阻断更明显,这可能是由于更多的阻力血管可产生更大的血流刺激,或是肱动脉缺血而产生的直接影响。但上臂血流阻断时,由于肱动脉塌陷,软组织移位产生的图像变形将增加准确测量的难度。此外,在加压持续30s至5m i n松压后肱动脉直径变化与时间成正比,但持续加压5~10m i n直径变化不明显,因此阻断5 m i n运用更广泛。目前所采用的阻断压力标准也有所不同,阻断压力为受试者收缩压+50m m H g,直接加压250mm H g或300mm H g。另外,在桡动脉、腋动脉、下肢表浅动脉均可进行血管内皮功能检测,但通常认为血管管径<2.5mm时较难测量,血管管径\5m m的血管舒张更易于观察。
目前常用的血管内皮功能超声检测仪器包括:(1)传统的彩色多普勒超声诊断仪:纵断扫描肱动脉通过分别测量安静状态的肱动脉内径以及反应性充血后、舌下含服硝酸甘油后肱动脉内径,计算出肱动脉内径的变化率(F MD%);(2)特殊探头的B型超声血管内皮功能检测仪:目前有一种专门用于血管内皮功能检测的B型超声检测仪器,其具有一个特殊的高频线阵探头,呈H型,可以同时显示两个动脉横断面和一个纵断面的灰阶超声图像,取样门可自动跟踪动脉前后壁,仪器通过其内置的软件自动计算出肱动脉内径的变化率(图1);(3)具有血管回声跟踪技术的彩色多普勒超声诊断仪:利用血管回声跟踪技术,实时跟踪动脉管壁的运动(检测精度可达0.01mm),对袖带加压前后的肱动脉内径变化进行实时连续测量,最长可达20m i n,可准确记录到血管舒张的最大值,仪器内部的分析系统可自动完成血管内皮功能功能检测(图2)。
四、临床应用
血管内皮功能具有受多项危险因素综合影响、基因易感性的特点,血管内皮功能紊乱可作为心血管疾病前期的一个临床标志[11]。研究证实,除年龄以外,几乎所有的动脉粥样硬化危险因素都可影响血管内皮功能,如R aitakari等研究结果显示既往被动吸烟者血管内皮功能明显低于正常人。国内学者用超声显像法已经证实高血压、血脂异常、糖尿病、扩张型心肌病、川崎病、高同型半胱氨酸血症等疾病患者的血管内皮功能减低。有报道迅速的降压治疗并未改善内皮功能[12]。
图1A FMD
专用检测装置
图1B F MD
自动分析界面图2A彩色多普勒超声诊断仪及其F MD
专用检测装置
图2B F MD
数据采集界面
图2C F MD自动分析界面
研究表明,内皮功能障碍与冠心病有明确关系,是冠心病预后的一项独立预测指标[13,14]。在冠状动脉粥样硬化性疾病的早期阶段,冠状动脉微血管内皮功能异常会导致冠状动脉血流调节异常。美国心脏病协会指出,用肱动脉超声测量血管内皮功能,是评价血管内皮功能的一项/有前途的技术0,对判断疾病的预后具有重要价值[13,14]。
研究表明,饮食、生活习惯的改变和某些药物的使用均有益于患者血管内皮功能的改善。维生素C和左旋精氨酸可以改善冠心病患者的内皮功能[15],对于吸烟者维生素E可延缓内皮功能失调但不能恢复受损的内皮功能[14],体育锻炼可以改善青年人和代谢综合征患者的内皮功能[16,17],B2羟2B2甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂类药物可改善患者的内皮功能[18,19],磷酸二脂酶抑制剂可改善慢性心力衰竭患者的内皮功能[20,21]。
一些大规模试验试图证实,一旦出现肱动脉内皮功能紊乱的患者是否将极有可能有成为脑血管、冠状动脉及外周血管疾病患者。多数研究表明,随着药物治疗后危险因素的减少,肱动脉的反应性可以恢复,但这种血管内皮功能的改善能否直接转变为肱动脉输出量的提高尚不得而知[22]。
在过去的十余年,由于经肱动脉评价血管内皮功能技术受到检测方法的稳定性和超声仪器的分辨力以及测量数据的精度和重复性等因素的影响[23225],该技术的临床推广应用受到一定程度的限制。超声检测血管内皮功能这种简便的无创性方法将有可能将一些疾病的诊断提前,尤其是那些出现早期动脉粥样硬化家族性高胆固醇血症的儿童和青年人,从而尽早采取治疗措施,以保护或恢复受损的内皮功能,有助于减少心血管疾病的发生。随着血管内皮功能检测技术进一步的完善以及检测方法的标准化,利用无创性超声评价血管内皮功能将在各种疾病的长期随访以及疗效评估方面发挥重要作用。
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(收稿日期:2009203231)
(本文编辑:鲁玉红)
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血管内皮功能检测PAT2000简介
内皮功能检测仪/以色列Endo-PAT2000简介 midwest-group&Endo-PAT2000 数据单 概述： Endo-PAT2000是一种无创评价内皮功能和动脉僵硬硬度的理想检查设备：内皮功能测定是根据内皮介导的阻断肱动脉5分钟后手指末节动脉的反应程度来测定。动脉僵硬度则通过测定PAT波形的扩张指数自动计算出来的。Endo-PAT2000测定技术的一个革命性标志就是手指容积测定法探头，这种探头独特的设计和特性使得它能够克服某些测试环境的固有的物理因素的干扰。由探头收集的数据通过装在电脑或者笔记本上的Itamar医药公司拥有专利的软件进行分析。Endo-PAT2000是一件全新的非操作者依赖的、使用方便的设备，可以为研究人员或临床医师提供客观的数据，它克服了以往评价内皮功能方法的不足。它的操作简单易懂，探头使用起来也很简单，软件可以自动将分析完成。这种创新性的设备以其独特性、可靠性以及快速诊断内皮功能的能力成为许多医学领域研究的得力工具，在不远的将来成为心脏病学一种新检查评估方法。 Endo-PAT2000临床应用目的： 在多个临床应用中，Endo-PAT2000装置的应用目的主要是用来辅助诊断，通过反应性充血过程来检测冠状动脉内皮功能（阳性或阴性）。已经证实Endo-PAT2000对以下患者冠脉内皮功能紊乱有预测性：有缺血性心脏病的症状和体征，有冠脉造影指证但造影没有冠脉狭窄的证据。此设备主要应用于医院和诊所，结合患者的病史和其他临床资料使用。 不同时期研究试验和发表文章的部分清单（一些是多中心研究，一些是在不同地方通过不同实验方案完成的）：
?糖尿病和代谢综合征 ?高血压，肥胖，高胆固醇血症 ?儿科内皮功能紊乱 ?睡眠呼吸暂停综合症 ?遗传学（基因多态性，基因表现型） ?感染性疾病（疟疾，HIV） ?先兆子痫毒血症 ?勃起功能障碍 ?抑郁症和心血管风险 ?精神压力测定 ?充血性心力衰竭 ?肾功能衰竭 ?术后风险评估 ?痴呆和内皮功能紊乱 ?评估治疗内皮功能紊乱疗法：药物（例如他汀，ACE-I，柳氮磺吡啶，西地那非）或者生活方式改善（例如各种运动，维生素，营养保健品，食物等）。 临床使用Endo-PAT2000要求： 房间要安静、温度适中。检查时尽量避免强光，最好用暗光。检查应该在安静轻松的氛围中完成。尽量使患者舒适并完全放松，不要谈话保持安静。优先选择的姿势是仰卧于床上，床要足够宽，双臂可以放于身体两侧，两手放于和心脏同样的高度。患者处于坐位也可以做这项检查。如果有一辆小推车放置安装有Endo-PAT2000的笔记本电脑会更加方便。完成检查需要的额外的设备有：电脑，小推车（备选），
血管内皮因子综述
血管内皮生长因子与肿瘤治疗的研究进展 【摘要】肿瘤生长和转移依赖于血管生成,肿瘤血管生成是受多种细胞因子、生长因子及其受体调控,其中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)被认为是最关键的调控因子, 以VEGF及其受体作用途径中的任一环节为靶点,阻断VEGF对肿瘤血管的作用,都可以达到遏制肿瘤生长和转移的目的。VEGF靶向抗肿瘤血管生成成为抗肿瘤的新策略。 【关键词】VEGF 肿瘤靶向治疗 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),也叫做血管通透因子(vascular permeability factor,VPF),在正常胚胎发育时有广泛的表达,但正常成年者的组织中呈低水平表达,在肿瘤等病理情况下其表达异常升高。VEGF是一种高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂因子,通过与其特异性受体(VEGFR)结合,引起一系列的信号转导,释放多种细胞因子与生长因子,刺激血管内皮细胞增殖和迁移,促进新生血管生成,在肿瘤的生长和转移中起重要作用。 1．VEGF生物学功能 VEGF的功能包括:①诱导内皮细胞钙浓度短暂升高、形态改变、分裂及运动,影响内皮细胞基因表达,加快基底膜降解,从而发挥促血管生成功能。②增加血管通透性,使血浆蛋白外渗,形成血管化纤维蛋白基质,为内皮细胞迁移形成网架。血管内物质外漏也为肿瘤转移提供基质,这对于肿瘤发展和转移可能比促内皮细胞增生更重要。另外,肿瘤细胞分泌的VEGF弥散作用于肿瘤周围组织的毛细血管,使其通透性增加造成瘤周水肿。③改变内皮细胞基因表达,诱导其合成大量蛋白水解酶,加速血管构建。④抑制宿主抗原呈递细胞成熟,使肿瘤细胞得以逃避免疫监视。⑤诱导血管内皮细胞bcl-2基因表达,提高诸如放射损伤细胞、血管内皮细胞抗凋亡的能力。 2．VEGF促进肿瘤生长、侵袭、转移的机制 肿瘤的侵袭、转移涉及到多个步骤:包括在局部生长到一定大小后瘤细胞从原发灶脱落,细胞外基质和基底膜的降解,瘤细胞进入血循环后逃脱宿主的免疫监控而存活下来, 瘤细胞达远处组织器官后粘附, 继而新生血管形成, 最后继发成瘤。VEGF几乎参与了此过程中的各个步骤，而不仅仅只作为促血管生成因子和血管通透性因子。 2．1 VEGF通过对内皮细胞的增殖、迁移、粘附的调节而促进新生血管的形成。 2．2 肿瘤细胞分泌的VEGF通过自分泌机制与瘤细胞上的VEGFR-2(KDR)结合，调控下游基因的表达而促进瘤细胞的生长、侵袭、转移。 2．3 VEGF通过抑制树突细胞的分化、成熟，减少树突细胞的生成从而降低宿主免疫功能。3．VEGF肿瘤治疗中的应用 3．1 基因治疗 3．1．1 反义寡核苷酸 反义寡核苷酸可抑制VEGF基因水平的分泌,也可特异性降低细胞中VEGFR mRNA水平。高渝等利用超声微泡介导VEGF反义寡核苷酸转染作用于人膀胱癌裸鼠移植瘤模型，
重组人血管内皮生长因子抑制剂理化对照品质控方法及质量标准的建立
在进行新生物制品产品开发时，首先要做的一项工作是建立理化对照品及活性标准品。理化对照品主要用于产品肽图、等电点、相对分子质量、纯度等理化性质的检测；活性参考品主要用于产品生物学活性的检测［1］。进行理化对照品质量标准及质量方法的研究既便于检测和跟踪产品质量的一致性和稳定性，也是产品进一步走向临床和市场的必然要求，《中国药典》三部（2015版）也对其提出了明确规定［2-3］。 重组人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抑制剂是有VEGF阻断作用的重组蛋白，由2种不同的人VEGF受体VEGFR1和VEGFR2的细胞外区域，融合到人免疫球蛋白IgG1的Fc部分组成，是一种二聚体糖蛋白，其蛋白质相对 重组人血管内皮生长因子抑制剂理化对照品 质控方法及质量标准的建立 毕华，陶磊，韩春梅，秦玺，范文红，杨靖清，丁有学，饶春明 中国食品药品检定研究院重组药物室，北京100050 摘要：目的建立重组人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抑制剂理化对照品质控方法及质量标准。方法利用HEK293细胞增殖抑制法测定重组人VEGF抑制剂理化对照品生物学活性；紫外分光光度法测定蛋白含量；质谱法进行相对分子质量测定、液质肽图及糖基化位点分析、二硫键分析、N-寡糖糖型及比例分析； SDS-PAGE及SEC-HPLC法分析纯度；等点聚焦法进行电荷异质性分析；Edman降解法进行N-末端氨基酸序列分析。结果重组人VEGF抑制剂理化对照品各项检定指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部（2015版）相关要求。结论建立的质控方法和质量标准符合理化对照品的相关规定，具有保证该理化对照品结构正确、质量可控的特点。检定合格的理化对照品可用于该类产品的常规检定。 关键词：血管内皮生长因子抑制剂；理化对照品；质量控制 中图分类号：R979.1+9R392-33文献标识码：A文章编号：1004-5503（2017）08-0833-05 Establishment of methods and standard for quality control of physicochemical reference substance for recombinant human vascular endothelial growth factor inhibitor BI Hua,TAO Lei,HAN Chun-mei,QIN Xi,FAN Wen-hong,YANG Jing-qing,DING You-xue,RAO Chun-ming National Institutes for Food and Drug Control,Beijing100050,China Corresponding author:RAO Chun-ming,E-mail:raocm@https://www.wendangku.net/doc/c112729095.html,； DING You-xue,E-mail:dingyouxue@https://www.wendangku.net/doc/c112729095.html, Abstract：Objective To establish the methods and standard for quality control of the physicochemical reference sub-stance for recombinant human vascular endothelial growth factor inhibitor（rhVEGF inhibitor）.Methods The biological activity of reference substance for rhVEGF inhibitor was determined by HEK293cell proliferation inhibition test,while the protein content by ultraviolet（UV）spectrophotometry.The relative molecular mass,liquid peptide map,glycosylation site, disulfide bond,type and proportion of N-oligosaccharide of the reference substance were analyzed by mass spectrometry, while the purity by SDS-PAGE and SEC-HPLC,the charge heterogeneity by isoelectric focusing,and the N-terminal amino acid sequence by Edman degradation method.Results All the indexes of rhVEGF inhibitor met the requirements in Guideline for Quality Control of Recombinant DNA Products for Human Use and Chinese Pharmacopoeia（Volume III, 2015edition）.Conclusion The established methods and standard met the requirements for the relevant physical and chemical reference substances,which may assure that the structure of the reference substance is correct and the quality is controllable.The qualified reference substance may be used for the routine quality control of products of the same kind. Key words：Vascular endothelial growth factor（VEGF）inhibitor;Physicochemical reference substance;Quality control ·治疗性制剂· 通讯作者：饶春明，E-mail：raocm@https://www.wendangku.net/doc/c112729095.html,； 丁有学，E-mail：dingyouxue@https://www.wendangku.net/doc/c112729095.html, DOI:10.13200/https://www.wendangku.net/doc/c112729095.html,ki.cjb.001845
血管内皮功能检测仪技术参数
血管内皮功能检测仪技术参数 1.功能要求 ▲1.1全自动FMD（%）检测，血流依赖性血管扩张反应 1.2“H”型三组合探头，同步显示血管横截面、纵截面,彩色血流图 ▲1.3自动对焦，自动追踪、调整并锁定至超声波图像内的靶位置，准确捕捉血管位置 1.4全自动测量并显示静息状态下肱动脉血管内径，自动释放后进行测量，显示最大血管内径值。自动计算FMD（%）值：（开放后最大血管径—静息时血管径/静息时血管径）×100% 1.5设有探头微调控制器 1.6测量过程中实时显示血管直径 1.7显示开放后，血管随时间变化趋势图 ▲1.8自动得出血管开放后，达到血管扩张最大值所需时间，并自动定标显示血管内径最大时间点 1.9实时显示测量过程中血管内径变化率 1.10可手动调整用于测量血管内径的定位光标按钮，用于特殊情况下手动修正，测量血管内径 1.11可回放检测过程中血管扩张变化 2.参数要求 ▲2.1 FMD（%）：血管内径扩张率 2.2静息时血管内径(mm) 2.3扩张状态血管内径最大值(mm) 2.4血管扩张最大时间点（s） 2.5血流增大率（倍） 2.6血流最大时间点（s） 2.7解压迫后实时时间显示（s） 2.8血管横切面血流显示图 ▲2.9血管内径扩张-时间变化曲线图 2.10 bIMT-上臂颈动脉内中膜厚度
3.规格要求 3.1对焦模式：数字光速对焦 3.2 画面显示：≥10英寸彩色液晶触摸显示器 3.3 操作方式：触摸屏式，鼠标操控 3.4 探头的类型：“H”型三组合探头 3.5 超声波频率：10MHz 3.6 电击保护方式：I级 3.7 点击保护等级：BF式
用Elisa试剂盒检测人血清血浆中 VEGF 血管内皮生长因子的浓度
双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF的浓度 VEGF简介： VEGF属于PDGF因子家族，是A、B、C、D四种亚类的一类因子的总称，它们在血管发生过程中起重要作用。其中在血管再生和内皮细胞的再生过程中，VEGF-A扮演重要的角色。现已发现VEGF-A有许多种因切割后氨基酸数不同的亚型，其中含有的肝磷脂接合区域，能与胞外基质内的肝磷脂结合，以VEGF165量最多。VEGF-A可由多种细胞分泌的分子量为45kDa的糖蛋白。 VEGF的功能主要表现在伤口的愈合和女性生殖周期循环上。在病理组织中，VEGF能提升血管通透性。这就是肿瘤的转移和肿瘤复发的基础。在胚胎期，VEGF的作用表现为调控胚胎细胞的增殖、转移和提高内皮细胞的存活力上，通过成骨细胞和成软骨细胞的蓦集作用提升骨形成的效率。VEGF-A的功能还表现在一些如血管再生和血管通透相关联的生理过程中。肿瘤释放的细胞因子和生长因子能刺激骨髓中的巨核细胞分裂为血小板，这样就间接增加了VEGF-A 向肿瘤的迁移。 骨组织、心肌、肝实质、成骨细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、角化细胞、棕色脂肪组织、CD34+干细胞、内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞等细胞和组织均可表达 VEGF。 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF 的浓度。VEGF 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的VEGF 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人VEGF 抗体后，抗人VEGF 抗体与VEGF 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在VEGF 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，VEGF 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中VEGF 浓度。 实验过程需自备的材料： 1.不同规格的加样枪及相应的枪头； 2.酶标仪； 3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水； 注意事项: 1.试剂盒请保存在2～8℃。 2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。 3.若标准品复溶后，请在三天内用完。 4.底物请勿接触氧化剂和金属。 5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。 6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。 7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。 8.室温反应，请严格控制在25～28℃。 9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。 10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。 11.加样过程中避免气泡的产生。 12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。 标本收集: 1.标本的收集请按下列流程进行操作： A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可； B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液； C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；
血管内皮细胞功能与心血管疾病关系的研究进展
血管内皮细胞功能与心血管疾病关系的研究进展 摘要：血管内皮细胞（VEC）功能与心血管疾病的发生和发展密切相关, 本文综述了血管内皮细胞合成与释放的一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ等多种生物活性物质及VEC功能紊乱与心血管疾病的关系，研究VEC功能与心血管疾病形成之间的相互关系将为心血管疾病的治疗提供新思路、新策略。 关键词：血管内皮细胞；一氧化氮；内皮素；血管紧张素Ⅱ；心血管疾病 现已证明VEC除了完成血液和组织液的代谢交换以外，还是机体最大的内分泌腺【1】，可以产生和分泌十余种生物活性物质，具有维持正常的血管张力、血液的正常状态和动态平衡等作用，并通过其屏障和分泌功能，影响着炎症反应的发生、发展，参与调节机体的免疫应答。VEC功能紊乱在高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化（AS）等心血管疾病的发病过程中具有重要意义。 1血管内皮细胞功能【2】 VEC的功能极其重要和复杂。1维持血管内膜的光滑，防止血小板及白细胞粘附，防止有害物质侵入血管壁。2具有半透膜的作用，维持血液、组织液中物质的交换。3合成并释放多种生物活性物质，如一氧化氮（NO），PGI2,，内皮素（ET）等，调节血管张力，维持正常血压。4合成致栓及抗栓物质，维持其动态平衡，如肝素，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）及血管性假血友病因子（vWF）等。5 合成胶
原基底膜及血管平滑肌保护层。6合成血管生长因子及血管紧张素转化酶（AEC）。7影响血管壁对脂蛋白等物质的代谢。 2血管内皮细胞功能的标志物质【3~5】 2.1 一氧化氮(NO)。NO由血管EC释放，EC以L一精氨酸和分子氧作为底物，在NO合酶作用下生成NO 继之进入邻近的平滑肌细胞，激活鸟苷酸环化酶分解GTP使c—GMP增加，导致血管平滑肌舒张。NO还有抑制血管平滑肌增殖、抗血小板聚集和抗血栓形成作用【 3.5】。基础状态下，EC作为血藏感受器，转化血液切变力的机械信号为化学剌激，促使NO释放，维持血管张力和血流量相对恒定。乙酰胆碱、5_羟色胺、P物质，缓激肽、凝血酶、腺苷、TXA2、组胺{细胞因子如白介素-1、肿瘤坏死因子以及内毒素，都能促使NO释放。 2．2 PGI2。EC通过环氧化酶及前列环素合成酶途径代谢花生四烯酸产生PGI2，再通过第二信使cAMP发挥生物学效应。凝血酶、缓激肽、组胺，腺苷、高密度脂蛋白、TXA2、白三烯、血小板生长因子、组织缺氧和血流动力学应激等，促使EC释放PGI2。PGI2和NO 协同扩张血管，防止血小板聚集和抗血栓形成【5】。 2．3ET1988年Yanagisawa【6】从猪主动脉EC中分离提纯出21 个氨基酸组成的多肽,称内皮素。ET 受体中B型主要分布在EC,激活后可使EC释放NO、PGI2,但其舒血管效应常被A型受体兴奋所致平滑肌细胞强烈而持久的收缩所掩盖。有实验表明,给大鼠持续滴注ET1 后血液浓缩,微动脉和微静脉收缩,微循环血流量减少,血栓形成;
血管内皮功能检测研究进展及临床应用
血管内皮功能检测研究进展及临床应用 目前认为，内皮细胞功能有维持血管结构及张力，调节血管细胞生长，调节抗凝及纤溶系统，介导炎症与免疫，调节白细胞与血小板在血管内皮粘附，调节脂质氧化，调节血管通透等作用。现诸多证据已表明内皮功能的变化发生在动脉粥样硬化形态学改变发生发展之前，且参与了损伤的进展及随后的临床并发症，与心血管疾病关系密切，是急性冠脉综合症等严重后果的直接推手。当下已逐步开始成为心血管疾病诊疗的新靶点，准确评价这一器官功能很有临床价值。目前已有一些检测方法已应用于临床。现就内皮功能检测方法及临床应用做一综述。 标签：血管内皮功能vascular endothelial function；动脉粥样硬化atherosclerosis ；血流介导的舒张功能flow-mediated dilation；外周动脉张力测定Peripheral arterial tonometry 1980年Furchgott和Zawadaki[1]在兔子模型中发现，当去除血管内膜的表面物质，在注入外源性乙酰胆碱（acetylcholine ACH）时发现，其血管的反应是呈收缩状态；而当血管组织未受损时，再注入外源性乙酰胆碱（acetylcholine ACH）时血管为舒张反应，由此发现血管内皮细胞在血管舒张过程中起着重要的作用。现诸多证据已表明内皮功能损伤是动脉粥样硬化的第一步，并且血管内皮细胞受损还且参与了后续的一系列血管病理生理发展，冠脉粥样硬化、急性冠脉综合症就是一些例子[2-3]。当下血管内皮功能的评价已逐步受到关注，准确评价这一器官功能很有临床价值。目前已有一些检测方法已应用于临床。现就内皮功能检测方法及临床应用做一综述。 1 血管内皮功能生理功能 血管内皮是衬贴于血管内表面的一层单层细胞组织。目前认为血管内皮不仅仅是血液和组织间物质转运的屏障，它还是人体最大的内分泌器官，其分泌的诸多物质中有可以调节血管舒缩功能、调节血管细胞生长、调节抗凝及纤溶系统、介导炎症与免疫、调节白细胞与血小板在血管内皮粘附、调节脂质氧化、调节血管通透等功能。在这些诸多功能中，维持血管张力最为重要。血皮细胞可以生成并释放血管舒缩活性物质和血管调节因子，引起血管平滑肌舒张和收缩，从而维持血管有效弹性张力。舒血管物质中一类为前列环素（prostacyclin PGI2），另一类更为重要的是内皮舒张因子（endothelium-derived relaxing factors EDRFS），Furchgott 和Zawadzki 首先描述了血管内皮依赖性舒张血管因子，后来被证实为一氧化氮（NO）[1]。NO可使血管平滑肌内的鸟苷酸环化酶激活，cGMP浓度升高，游离Ca2+的浓度降低，故血管舒张。EDRF/NO被认为是引起内皮依赖性舒张最重要的因子。乙酰胆碱、缓激肽、腺苷及血管剪切力的提高均可增加NOs 活性，继而通过EDRF/NO的增加引起血管舒张。血管内皮细胞同时也产生多种缩血管物质，即内皮缩血管因子（endothelium-derived vasoconstrictor factors EDCFS）如内皮素。当内皮功能正常时，血管活性物质间维持相对平衡，血管舒缩功能正常。然而血管内皮功能受损时，EDRFS尤其是NO的生物活性下降，同时EDCFS增多[4]，当有血管剪切力或活性物质刺激时血管舒张幅度减小甚至
高脂血症与血管内皮细胞功能实验检测指标研究进展(一)
高脂血症与血管内皮细胞功能实验检测指标研究进展(一) 【关键词】高脂血症血管内皮细胞功能实验检测指标 高脂血症(Hypolipidemic)是血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)过高或血清高密度脂蛋白(HDL)过低的一种全身代谢异常,是现今严重危害人类健康的疾病。由于近年来对血管内皮细胞(VEC)生物学功能认识的不断深入,对高脂血症发病机制的研究除生化免疫指标外，重点已逐渐转向VEC功能障碍。本文拟对高脂血症与血管内皮细胞功能实验检测指标做一综述。 1血脂检测指标 高脂血症中常检测的血脂指标是TC、LDL-C、HDL-C、TG。近年来，血清载脂蛋白(Apo)和脂蛋白〔Lpc(a)〕也成为检测指标。一般认为，在诸多确认的危险因子中，血清胆固醇水平增高是唯一不需要其他危险因子协同而足以诱发和推进动脉粥样硬化（AS）发生发展的因素1]。LDL通过跨胞作用进入血管内皮屏障后可与一氧化氮直接作用，抑制内皮依赖性血管扩张。LDL经氧化修饰后易于被巨噬细胞表达的清道夫受体识别，进而被其吞噬形成泡沫细胞，大量泡沫细胞聚集在内皮下即形成最早的AS病变——脂质条纹。脂质在内皮下沉积会干扰内皮细胞（EC）合成和释放内皮源性血管活性因子NO和PGI2，使凝血和纤溶系统失平衡，从而导致血栓形成。HDL被认为是防止AS损伤的保护因子，可通过参予TC的逆向转运，促进平滑肌细胞（SMC）及巨噬细胞TC的移出，抑制SMC的增殖速度，从而阻碍AS病变的形成。同时HDL还是一种重要的抗氧化物质，可减少超氧阴离子的生成，从而保护EC合成和释放的NO不受破坏，发挥其抗AS的作用。高TC血症是否是致AS的独立危险因素曾有过长期的争议，近年来大量流行病学的调查表明TG是AS、冠心病的独立危险因素。研究表明，高TG可以通过产生小而密的LDL（sLDL）、降低HDL、促进凝血过程以及加强脂蛋白的氧化修饰等途径促进AS的形成2]。Apo是一类能与血浆脂质(主要是指胆固醇、甘油三酯和磷脂)结合的蛋白质，不仅对血浆脂蛋白的代谢起着决定性的作用，而且对AS的发生和发展也有很大的影响。Apo-A1是HDL最主要的蛋白成分，血清中Apo-A1缺乏或明显减少时，常伴有严重的低HDL血症，极易患AS。Apo-B100是参与构成VLDL、IDL和LDL的结构蛋白，参与脂质转运，在LDL代谢及AS的形成中起着极为重要的作用。七十年代中期科学家们发现并证实Lp(a)是一类独立于其他载脂蛋白代谢途径的具有特异抗原性的载脂蛋白，是动脉粥样硬化的危险因子，可以作为心脑血管疾病的一种独立的良好的危险因素指标3-6]。 2血管内皮细胞舒张收缩因子 2.1血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶（NOS） NO是最重要的血管舒张因子，在内皮细胞内由一氧化氮合酶（NOS）催化产生，NO由内皮弥散到血管平滑肌，促使环磷酸鸟苷浓度升高引起血管平滑肌松弛、血管扩张。NO进入血液之后可以协同前列环素(PGI2)抑制血小板聚集，对抗血小板分泌的血栓素A2(TXA2)引起的血小板激活，防止血栓形成；此外NO还具有拮抗氧自由基、稳定溶酶体膜和细胞膜，增加血管致密性的作用。NOS为NO合成的关键酶，目前己确定有三种同分异构体，即神经型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)和诱生型NOS(iNOS)7]，前两种统称为结构型NOS(cNOS)。cNOS 本身存在于细胞中，催化反应需Ca2+或钙调蛋白以及烟酰胺腺嘌呤二核甘磷酸（NADPH）的参与。正常生理情况下iNOS基本不表达，只有细胞受到如炎症或免疫等因素刺激时基因才转录产生iNOS，其反应不需要Ca2+或钙调蛋白的参与。NOS是一类同细胞色素P450样的酶，具有双重作用。一方面催化NO的合成，这一作用有赖于4氢生物蝶呤(BH4)作为辅因子的参与。后者将NADPH提供的电子传递到L-精氨酸的胍基氮以利于NO的形成。另一方面，当BH4缺乏时eNOS将催化产生O2和H2O2，通过氧化应激可导致内皮功能障碍。因此检测NO及NOS的变化可确定血管内皮损伤。 2.2血浆内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）
【CN110236490A】一种无创血管内皮功能诊断仪及其实现方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910366747.1 (22)申请日 2019.05.05 (71)申请人 广东省医疗器械研究所 地址 510500 广东省广州市天河区广州大 道中1307号 (72)发明人 李桂香 唐元梁 黄德群 吴新社 陈军 徐飞 谭仲威 彭科 刘凯 伊翔 (74)专利代理机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 44205 代理人 胡辉 (51)Int.Cl. A61B 5/00(2006.01) A61B 5/01(2006.01) A61B 5/021(2006.01) A61B 5/145(2006.01) (54)发明名称一种无创血管内皮功能诊断仪及其实现方法(57)摘要本发明公开了一种无创血管内皮功能诊断仪及其实现方法，诊断仪包括诱导测温模块、生理信号检测模块、显示模块和微处理器；所述生理信号检测模块包括血压检测单元和血氧检测单元；方法包括根据血压检测单元获取的血压信号和血氧检测单元获取的血氧信号，确定用户在血管内皮功能检测过程中的生理特征值满足健康要求；根据确定的诱导刺激方式对微小血管末梢进行诱导刺激；对诱导刺激后的微小血管末梢进行温度采集；根据采集到的温度信号生成血管内皮检测结果；通过显示模块对血氧信号、血压信号、温度信号和血管内皮检测结果进行实时展示。本发明降低了成本且提高了准确率，可广泛 应用于医疗仪器技术领域。权利要求书2页 说明书9页 附图5页CN 110236490 A 2019.09.17 C N 110236490 A
权 利 要 求 书1/2页CN 110236490 A 1.一种无创血管内皮功能诊断仪，其特征在于：包括诱导测温模块、生理信号检测模块、显示模块和微处理器；所述生理信号检测模块包括血压检测单元和血氧检测单元； 其中，血压检测单元，用于实时获取血管内皮功能检测过程中用户的血压信号； 血氧检测单元，用于实时获取血管内皮功能检测过程中用户的血氧信号； 微处理器，用于向诱导测温模块发送工作启动控制信号，以及根据血压检测单元获取的血压信号、血氧检测单元获取的血氧信号以及诱导测温模块获取的温度信号来触发显示信号，并将显示信号发送至显示模块； 诱导测温模块，用于集成诱导刺激和温度检测功能，由半导体制冷片实现加温和降温形成诱导刺激，并获取诱导刺激后的温度信号； 显示模块，用于根据微处理器的显示信号，实时显示末梢血管温度变化和检测结果。 2.根据权利要求1所述的一种无创血管内皮功能诊断仪，其特征在于：还包括： 按键模块，用于获取用户的输入信号； 电源模块，用于为诱导测温模块提供工作电源； 报警模块，用于根据微处理器的控制信号进行报警提示； 存储模块，用于存储血压检测单元获取的血压信号、血氧检测单元获取的血氧信号以及诱导测温模块获取的温度信号。 3.一种无创血管内皮功能诊断仪的实现方法，其特征在于：包括以下步骤： 根据血压检测单元获取的血压信号和血氧检测单元获取的血氧信号，确定用户在血管内皮功能检测过程中的生理特征值满足健康要求； 根据确定的诱导刺激方式对微小血管末梢进行诱导刺激，所述诱导刺激方式包括热刺激和冷刺激； 对诱导刺激后的微小血管末梢进行温度采集； 根据采集到的温度信号生成血管内皮检测结果； 通过显示模块对血氧信号、血压信号、温度信号和血管内皮检测结果进行实时展示。 4.根据权利要求3所述的一种无创血管内皮功能诊断仪的实现方法，其特征在于：所述根据血压检测单元获取的血压信号和血氧检测单元获取的血氧信号，确定用户在血管内皮功能检测过程中的生理特征值满足健康要求这一步骤，包括以下步骤： 采集用户基本信息，所述基本信息包括姓名，年龄，性别和病史基本情况； 根据用户基本信息，确定安全血压值和安全血氧值； 通过血压检测单元获取血压信号，以及通过血氧检测单元获取血氧信号； 基于安全血压值和安全血氧值，对血压信号和血氧信号进行监测，确定用户在血管内皮功能检测过程中的生理特征值满足健康要求。 5.根据权利要求3所述的一种无创血管内皮功能诊断仪的实现方法，其特征在于：所述对诱导刺激后的微小血管末梢进行温度采集这一步骤，包括以下步骤： 采集诱导刺激后的微小血管末梢的温度信号； 对采集到温度信号进行放大滤波处理； 对放大滤波处理后的温度信号进行去噪处理； 对去噪处理后的温度信号进行特征提取。 6.根据权利要求5所述的一种无创血管内皮功能诊断仪的实现方法，其特征在于：所述 2
血管内皮功能检测及临床应用_勇强
#综述#血管内皮功能检测及临床应用 勇强陈真 1980年Furchgott和Za wadz k i[1]发现在外源性乙酰胆碱(acet ylcholi ne,ACh)介导的血管舒张过程中血管内皮细胞起着重要的作用。此后人们逐渐认识到血管内皮不仅在血管舒张方面发挥作用,而且还发现血管内皮分泌的一氧化氮(nitri c oxi de,NO)和内皮依赖性收缩因子(endothe li u m2dependent constricti ng fact ors,EDCFs)对血小板聚集、血管平滑肌细胞增殖和迁移、单核细胞黏附、黏附分子的表达以及在凝血和动脉粥样硬化斑块形成过程中起重要作用的各种因子具有抑制和激活作用。随着各种血管内皮功能不断被发现,血管内皮在人类疾病中所起的作用也越来越为人们所重视[2]。 一、基本原理 血管舒张可分为内皮依赖性舒张[3]和非内皮依赖性舒张[4]。内皮依赖性舒张是指在药物或生理刺激下,内皮细胞中的一氧化氮合酶(n itric2oxi de synt hase, NOS)将左旋精氨酸(L2argi n i n e,L2A rg)转化为一氧化氮,即内皮依赖性舒张因子(endot heli u m2dependent rel axi ng fact or,EDRF)通过环单磷酸鸟苷(cycli c g uanosi ne monophosphate,c G MP)途径引起平滑肌细胞舒张;内皮依赖性超级化因子(endot heli u m2deri ved hyperpol arizi ng factor,ED H F)则可通过开放钾离子通道引起平滑肌的舒张;此外内皮还可产生其他的血管活性物质,如前列环素(prostacy2 cli n,PG I2),其可通过环单磷酸腺苷(cycli c adenosi ne monophosphate,c A MP)途径引起血管平滑肌舒张。EDRF及NO被认为是引起内皮依赖性舒张最重要的因子,乙酰胆碱、缓激肽、腺苷及血管剪切力的提高均可增加NOS活性,继而通过EDRF及NO的增加引起血管舒张。内皮细胞不仅产生舒张因子,亦可产生一系 (thro mboxane a2,列收缩因子,如内皮素1(endotheli n1,ET21)、血栓素A 2 TX A2)、前列腺素H2(prostagland i n H2,PG H2),其中内皮素1是迄今为止所知道的最强的收缩因子。生理状态下,血管内皮所介导的舒张和收缩作用保持动态平衡[1]。非内皮依赖性舒张是指不依赖于血管内皮而直接作用于血管平滑肌引起血管舒张,如服用硝酸甘油可以产生外源性NO直接作用于血管平滑肌引起血管舒张[4]。 二、内皮功能检测方法 1.直接测定内皮细胞产生的相关因子:主要包括血浆(或尿样)NO、不对称二甲基精氨酸(asy mmetri ca l d i m et hylargi ni ne,AD MA)、内皮素1、组织型纤溶酶原激活剂(ti ssue p l as m i nogen acti vat or,t P A)、纤溶酶原激活剂抑制物21(type21作者单位:100029首都医科大学附属北京安贞医院超声诊断科
血管内皮功能
勃起功能障碍与血管内皮功能障碍 全网发布：2011-06-23 20:07 发表者：邓春华 3060人已访问 孙祥宙刘贵华邓春华 (中山大学附属第一医院泌尿外科,广东广州510080) 血管内皮是衬于血管腔面的单层扁平上皮,在一些旧的观念里内皮只是一种机械屏障，为血液的流动提供一个平滑的物理表面。而随着科学技术的日新月异，人们的观点也发生了深刻的变化，近年来一些新观点认为血管内皮细胞是一个十分活跃的内分泌器官，具有多种重要的生物活性，能感受生理刺激，同时作出调节反应，以维持血管内环境的平衡。血管内皮细胞在阴茎勃起的过程中扮演了十分重要的角色。血管内皮细胞功能障碍是勃起功能障碍(Erectile Dysfunction ED)的病理基础之一。早在1996年，Sullivan等[1]就提出了血管内皮功能障碍的概念。随后,Higashi等[2]认为血管内皮功能障碍是ED发病的重要机制.近年来,许多研究从基础理论水平及临床研究水平证明血管内皮功能障碍及NO水平下调在ED发病中的作用[3]. 现就血管内皮功能障碍与勃起功能障碍的关系作一介绍。 1.血管内皮的正常生理功能与常用检测方法. 1.1 血管内皮细胞的正常生理功能 血管内皮细胞( vascular endothelial cell,VEC)是血管表面的一层单层细胞,直接接触血液成分和组织,起着调节血管的舒缩、防止血小板粘附和血栓形成、调节血管平滑肌细胞的生长和增殖和防止炎症细胞的浸润和有害物质的透入等作用。内皮细胞能分泌许多活性物质,包
括内皮源性收缩因子如内皮素(endothelin,ET)、血管紧张素(angiotonin,ANG)、前列腺素E2 (PGE2)、前列腺素F2a (PGF2a)、血栓素A2 (thromboxan, TXA2)等及内皮源性舒张因子(endothelium derived relaxing factor,EDRF)包括NO、前列腺素I2(PGI2) ,它们共同调节血管及海绵体平滑肌的舒缩,并有对抗血栓形成的功能。正常生理情况下, EDRF施加血管舒张效应, 而ET、血管紧张素II、TXA2、PGF2a具有血管收缩作用。两种因素共同调节血流,以维持稳定充足的组织灌注。许多内源性激动剂刺激内皮细胞产生血管舒张因子的同时,也诱导血管收缩因子的产生,如凝血酶、血栓素等。不仅促进EDRF/NO的产生,也增加了ET的合成与释放。正是EDRF/NO与ET这一对内皮细胞源性收缩和舒张因子间的相互作用,使血管张力保持动态平衡[4,5]。 1.2 血管内皮功能的常用检测方法 1.2.1 内皮细胞分泌物的直接测定内皮细胞释放大量的活性物质,包括一氧化氮、内皮素、血管紧张素、前列腺环素、血栓素A2、组织纤溶酶原激活剂、血小板聚集抑制剂、血管性假血友病因子等物质。这些物质可通过直接测量或测量后计算一氧化氮/ 内皮素、前列腺环素/血栓素A2 、组织纤溶酶原激活剂/血小板聚集抑制剂的比值,以了解内皮功能,这是最直 接的检测方法[6]。但由于以下原因: ①这些物质是局部分泌,并在局部起作用,而测量这些物质浓度代表了整体内皮水平; ②这些物质半衰期短,故测量值并不能完全反映真实水平; ③这些物质不仅是由内皮细胞分泌。因此,评价其结果要慎重。
乳腺癌患者血清血管内皮生长因子的检测和意义
乳腺癌患者血清血管内皮生长因子的检测和 意义 【摘要】目的探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌诊疗中的意义。方法采用ELISA方法检测33例初治乳腺癌、36例复发乳腺癌、35例定期随访者及30例正常人血清VEGF浓度。结果复治组的血清VEGF水平明显高于初治组、随访组及对照组(P均<0.01)。结论血清VEGF的检测对乳腺癌的疾病进展及预后估计有一定的临床意义。 【关键词】乳腺肿瘤;血清血管内皮生长因子 目前研究表明，血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的形成和生长以及转移中有极为重要的作用，多数实体瘤均过度表达VEGF，且常伴有血清VEGF的增高。笔者通过对104例乳腺癌患者血清浓度的检测，探讨血清VEGF在乳腺癌诊断、预后估计和病情监测的意义。 1 资料与方法 1.1 一般资料 2005年10月～2007年3月在我院化疗科治疗的乳腺癌患者69例，其中乳腺癌术后巩固化疗患者33例(初治组)，复发转移乳腺癌36例(复治组)。后期乳腺癌术后0.5～3年定期复查者35例(随访组)。初治组年龄28～59岁，复治组年龄32～67岁，随访组31～60岁，所有患者均经过病理学确诊，其中单纯癌22例，浸润性导管癌50例，髓样癌7例，乳头状癌16例，浸润性小叶癌9例。正常对照组30例，为门诊健康体检者，年龄20～57岁。
1.2 检测方法清晨空腹抽取静脉血3ml，1500r/min，离心15min，分离血清，置于-20℃冰箱保存。血清VEGF定量试剂由晶美生物工程(北京)有限公司提供，用ELISA方法按试剂盒测试步骤进行，VEGF水平范围6 2.5～250ng/L。 1.3 统计学方法计量数据用(±s)表示，两组间均数比较采用t检验。 2 结果 各组血清VEGF检测结果，见表1。复治组血清VEGF明显高于初治组、随访组及对照组，差异均有高度显著性(P<0.01)。表1 各组血清VEGF的检测结果 3 讨论 研究表明[1,2]，新的血管生成是肿瘤生长、转移和转移灶生长的必要条件，而VEGF是调节新的血管生成的最重要的细胞因子。VEGF通过促进肿瘤新生血管形成来促进肿瘤的生长，另一方面通过促进血管的渗透性来加速肿瘤细胞进出血管，因而加速肿瘤的转移。到目前为止，在乳腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、前腺癌等多种肿瘤组织中均检测到VEGF的表达。由于VEGF具有血管通透性，肿瘤细胞合成的VEGF进入血循环，测定血清VEGF对判断肿瘤的预后的意义[3，4]，Tempfer C等[5]对乳腺癌的研究发现，在手术切除肿瘤后，患者血清VEGF水平显著下降，跟踪研究表明，部分患者的肿瘤复发同时伴着水平再度升高。本资料表明，复治组的血清VEGF水平明显高于初治组、随访组及对照组，差异均有高度显著性(P<0.01)。与有关文献报道一致[3，6]。因此，动态观察血清VEGF水平，对乳腺癌的病情进展、
血管内皮功能检测的方法及意义
血管内皮功能检测的方法及意义 摘要] 内皮细胞是由单层细胞构成的，它构成了血液和组织之间的物理屏障，调 节血液和组织之间的分子的交换。动脉粥样硬化危险因素均可能影响血管内皮功能，血管内皮功能障碍的机制是多方面的，包括内皮源性血管舒张功能受损，内 皮源性血管收缩功能增强，活性氧和活性氮的过量生成、炎症和免疫反应的激活，凝血和纤溶系统失衡等，内皮功能变化是冠心病预后的一项独立预测指标。及时 检测血管内皮功能，对判断疾病的预后具有重要意义。 [ 主题词] 血管内皮舒缩功能；冠状动脉造影法；肱动脉血流介导性舒张技术大量研究证明，几乎所有的动脉粥样硬化危险因素都可能影响血管内皮功能，在冠状粥样硬化性疾病的早期阶段，冠状动脉微血管内皮功能异常会导致冠状动 脉血流调节异常，内皮功能的变化是冠心病预后的一项独立预测指标。及时检测 血管内皮功能，对判断疾病的预后具有重要意义。现已成功地运用冠状动脉造影法、血管内超声法、OCT和体积描记法等对血管内皮舒缩功能进行测定，并发现 血管内皮功能异常可能与动脉粥样硬化、高血压、心功能不全等心血管疾病的发 生发展密切相关，但是这些方法均有创伤及价格昂贵，临床中不易开展，肱动脉 血流介导性舒张技术做为一种无创性及价格低廉的检查，在检测血管内皮功能大 有用武之地。本文对血管内皮功能其检测方法进行讨论。 1. 血管内皮功能的检测方法 1.1 冠状动脉造影法 即采用定量冠状动脉造影法, 测定在冠状动脉内输注内皮依赖性剌激物(如乙 酰胆碱)前后冠状动脉内径和血流量的变化。1986 年 Ludmer 等[1] 首先采用冠状 动脉造影研究发现, 在冠状动脉内输注乙酰胆碱可引起正常的冠状动脉呈剂量依 赖性舒张, 而有动脉粥样硬化的冠状动脉则出现反常的收缩;但冠状动脉内输注硝 酸甘油时, 正常的和有动脉粥样硬化病变的冠状动脉均呈舒张反应。乙酰胆碱引 起的动脉舒张是内皮依赖性的;而外源性的 NO 前体物硝酸甘油或硝普钠可直接剌 激血管平滑肌细胞引起血管舒张, 因此是非内皮依赖性的。输注乙酰胆碱后粥样 硬化的动脉出现反常的收缩, 可能由于内皮功能受损, NO 释放障碍, 血管平滑肌细 胞失去舒张因子的作用, 而对乙酰胆碱产生直接反应所致。冠状动脉内输注血管 扩张剂(如腺苷)可增加冠状动脉血流,在其输注前后测定近端冠状动脉的内径变化 也用于评价其血流介导的内皮依赖性舒张功能[2]。但冠状动脉造影法属有创检查，不宜霞复检查，技术操作要求严格，费用高，一般患者不易接受，在基层医疗结 构也难开展，故难以作为CAD的早期筛查． 1.2 肱动脉ＦＭＤ 肱动脉血流介导性舒张(flow-mediated dilation , FMD)是目前最常用和有效的 检测内皮功能的无创方法。其无创、价廉、易行受到临床的普遍认同，并可作为 冠心病的筛选检查之一。早在1985年研究发现血管内皮必然舒张在增加血流剪 切力时，这种现象叫做血流介导性舒张，成为研究血管内皮功能的一个重要分支[3,4,5] 。1992 年 Celermajer 等[6] 首先采用高分辨率血管外超声法检测外周动脉(肱动脉或股动脉)的内皮依赖性舒张功能, 结果发现在有动脉粥样硬化危险因素的 儿童和成人中其无粥样病变的外周动脉存在内皮依赖性舒张功能的异常。研究表明，冠状动脉内皮功能与肱动脉内皮功能存在明显的相关性，肱动脉异常舒张对 冠状动脉内皮障碍的阳性预测值为95 %；FMD < 4. 5 %时,诊断冠心病的敏感度、 特异度、阳性预测值分别为71 %、81 %、95 % ；肱动脉FMD > 10 %时,对心肌缺