Mosher's method

各种转染试剂的中文转染方法

各种转染试剂的中文转染方法 FuGENE6（Roche）转染步骤： 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。 2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。 3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。 4. 室温孵育20分钟。 5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。 6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。 7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）： 1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。 3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。 4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放置20分钟。 5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入2 ml无血清配养基。 6. 直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。 中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。 7. 在37℃，5％CO 2 或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。 8. 在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。 贴壁细胞的稳定转染： 转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。 Lipofectamine 2000转染试剂转染步骤（24孔板）：

有机重排反应总结

Claisen 重排 烯丙基芳基醚在高温(200°C)下可以重排，生成烯丙基酚。 当烯丙基芳基醚的两个邻位未被取代基占满时，重排主要得到邻位产物，两个邻位均被取代基占据时，重排得到对位产物。对位、邻位均被占满时不发生此类重排反应。 交叉反应实验证明：Claisen重排是分子内的重排。采用 g-碳 14C 标记的烯丙基醚进行重排，重排后 g-碳原子与苯环相连，碳碳双键发生位移。两个邻位都被取代的芳基烯丙基酚，重排后则仍是a-碳原子与苯环相连。 反应机理 Claisen 重排是个协同反应，中间经过一个环状过渡态，所以芳环上取代基的电子效应对重排无影响。 从烯丙基芳基醚重排为邻烯丙基酚经过一次[3,3]s 迁移和一次由酮式到烯醇式的互变 异构；两个邻位都被取代基占据的烯丙基芳基酚重排时先经过一次[3,3]s 迁移到邻位(Claisen

重排)，由于邻位已被取代基占据，无法发生互变异构，接着又发生一次[3,3]s 迁移(Cope 重排)到对位，然后经互变异构得到对位烯丙基酚。 取代的烯丙基芳基醚重排时，无论原来的烯丙基双键是Z-构型还是E-构型，重排后的新双键的构型都是E-型，这是因为重排反应所经过的六员环状过渡态具有稳定椅式构象的缘故。 Beckmann 重排 肟在酸如硫酸、多聚磷酸以及能产生强酸的五氯化磷、三氯化磷、苯磺酰氯、亚硫酰氯等作用下发生重排，生成相应的取代酰胺，如环己酮肟在硫酸作用下重排生成己内酰胺：

反应机理 在酸作用下，肟首先发生质子化，然后脱去一分子水，同时与羟基处于反位的基团迁移到缺电子的氮原子上，所形成的碳正离子与水反应得到酰胺。 迁移基团如果是手性碳原子，则在迁移前后其构型不变，例如： 反应实例

RFect小核酸转染试剂说明(单核细胞 转染)

RFect 小核酸转染试剂 货 号：11011: 0.5ml 11012: 1.0ml 储存条件：-20℃ 11013: 1.5ml 产品特点 应 用 产品介绍 RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。 操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。 B. siRNA-RFect 混合物准备： 1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。 2. 2μl RFect 用50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min 。注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。 3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect 稀释液混合（总体积100μl ）。轻轻混匀，室温孵育20 min 。 C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）： 1. 将100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。 2. 37°C 培养18-72h ，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、 所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。 转染实验要点： ● 转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡； ● 首次实验siRNA 的用量可稍大（一般10 nM ） ，后续实验根据实验结果修改。 RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels Culture vessel Surface area/well (cm 2) Vol. of growth medium (μl) Vol. of dilution medium (μl) siRNA Amount (pmol) RFect (μl) 96-well 0.3 100 2 x 10 1.2 0.4 48-well 0.8 250 2 x 25 3 1 24-well 2 500 2 x 50 6 2 12-well 4 1000 2 x 100 12 4 ◎卓越的细胞转染性能：细胞转染阳性率高达90%以上，基因敲除效果明显，A549细胞Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上 ◎极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响 ◎转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果 ◎siRNA 转染 ◎antisense RNA 转染 ◎200bp 内的小分子DNA 转染

各种转染试剂中文说明

FuGENE6（Roche）转染步骤: 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总 体积到100ul。 2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。 3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。 4.室温孵育20分钟。 5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液 洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。 6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。 7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）： 1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。 细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释 4.0ugDNA，轻轻混匀。 3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如 OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。 Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。 NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。 4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放 置20分钟。 5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入 2ml无血清配养基。 6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。

转染试剂使用注意事项.doc

转染试剂使用注意事项 1.细胞密度：转染DNA（质粒）时，细胞密度为80-100%，转染RNA(siRNA 或miRNA)时，细胞密度为60-80%，具体细胞密度必须结合考虑核酸种类、转染试剂种类和细胞生长密度极限； 2.DNA用量：0.5-1ug/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实验 确定； 3.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实 验确定； 4.转染试剂的用量：转染试剂说明书推荐了一个使用范围，具体用量根据转染 效率检测实验确定； 5.根据转染效率检测实验确定核酸的用量及转染试剂的用量（核酸与转染试剂 的比例关系），转染效率检测实验一般在24孔板中进行，其他格式的培养器皿请根据底面积的比例（表1）进行计算； 6.转染试剂使用前才从4℃中取出，取用前，先短暂离心（转速达到3000RPM 时即可停止），然后放在涡旋振荡器上点动混匀三次，每次持续1秒，混匀后短暂离心（转速达到3000RPM时即可停止），上述措施是为了混匀转染试剂，保证使用效果，使用后立即放回4℃保存； 7.核酸和转染试剂分别用Opti-MEM（这是专用的转染稀释培养基，如果没有 Opti-MEM，可以用细胞对应的基础培养基代替）稀释，稀释的核酸可以通过弹匀，吹打均匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），稀释的转染试剂可以通过弹匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），不可使用吹打均匀；混匀后均需短暂离心； 8.把稀释的核酸和稀释的转染试剂复合混匀时，应该把稀释的核酸加入稀释的 转染试剂中（顺序不可调转）；加入后立即进行（不要耽搁）弹匀或颠倒混匀（稀释的核酸和稀释的转染试剂一旦复合，转染复合物的形成立即启动，如果不及时混匀，所形成的转染复合物的效率就会很低），先不进行短暂离心，待所有的管子复合完毕后，在一起进行涡旋点动混匀三次，每次持续1秒，然后短暂离心； 9.转染复合物孵育形成时尽量避光室温或37℃放置；

蛋白质专用转染试剂

蛋白质专用转染试剂 ● 多肽及小蛋白（如组蛋白，~11 kDa ）， ● 大蛋白（如抗体，~150 kDa ） ● 多分子蛋白复合物（半乳糖苷酶四聚体，~465 kDa ） 将蛋白导入细胞可以用于蛋白－蛋白相互作用，蛋白运转，细胞周期，信号传导通路，细胞凋亡通路，转录因子介导的基因调节等研究。将蛋白直接转染到细胞里也是研究特定蛋白对哺乳动物细胞的影响的最为迅速的方法。Novagen 的ProteoJuice TM 和Stratagene 的 BioTrek TM 是目前市售产品中适用细胞品种较多，对于哺乳动物细胞毒性极小的两种经过广泛测试的高效蛋白转染试剂。 BioTrek TM 蛋白转染试剂 已成功转染的细胞：293 B16-F0，BHK-21，CHO-K1，COS-1，COS-7， CV-1， HeLa ，HeLa-S3，HepG2，Jurkat ， K562Ki-Ras 267 β1， MDCK ，NIH 3T3，P19 转染试剂冻干粉 β-半乳糖苷酶对照10 μg FITC 标记山羊IgG 对照10 ug 包装 货号 24rxn #204140 ProteoJuice 蛋白转染试剂 已成功转染的细胞：A549，COS-7，HepG2，MCF-7，PC12，BHK-21，CV-1，HEK-293，Neuro2A ，Raw 264.7，CHO-K1，HeLa L6，NIH-3T3 包装 货号 0.125 ml 71281-3 4 × 0.125 ml 71281-4 质谱法（MS ）是蛋白质组学中鉴定蛋白品种的核心技术。蛋白MS 分析需要将蛋白按特定要求消化成多肽，再利用软件得到其序列及特性信息。胰蛋白酶能特异性地从赖氨酸和精氨酸残基的羧基端进行切割，产生符MS 分析所需要大小的肽段，因此胰蛋白酶是MS 实验中的重要工具之一。 Stratagene 的MS 级胰蛋白酶 纯度极高，克服了天然胰蛋白酶和非MS 级的胰蛋白酶的主要缺限，成为MS 的必然之选： ● 决无自我消化之虞：不会干扰目的蛋白的分析 经过甲基化修饰，消化活性只会针对目的蛋白；更不会产生糜蛋白酶这种活性更广的副产物 ● 杜绝任何可能的糜蛋白酶活性干扰 特别经过TCPK 处理，解决了其它胰蛋白酶产品的主要质量问题 ● 专为MS 应用而设计 Stratagene 著名的QuikChange 定点突变试剂盒家族的新成员 QuikChange TM Multi 多点突变试剂盒 用QuikChange TM Multi 多点突变试剂盒可以在短短1天时间内完成克 隆在如何质粒上多达5个点的突变，而不是通常方法的几天甚至数周！ ● 简单、高效、1天完成多点突变的全新方法 ● 可以从任何质粒开始，完全没有任何前处理步骤（如：亚克隆） ● 每个突变点设计一条引物，可以使用简并引物，省钱省时 ● 决无意外突变 ● 提供高效XL-10 Gold 超级感受态细胞 第1步 生成突变链 进行温度循环： 1) 模板DNA 变性 2) 突变引物退火 (所有的引物结合于同一条链) 3) 引物延伸，并用QuikChange Multi enzyme TM 封闭缺刻 第2步 Dpn I 消化模板DNA 用Dpn I 消化甲基化和半甲基化DNA 第3步 转化 将突变产物ssDNA 转入XL10-Gold 超级感受态细胞 QuikChange TM Multi 多点突变试剂盒

羟亚胺的Semipinacol重排反应与改进探究演示教学

羟亚胺的 S e m i p i n a c o l重排反应与改进探究

一：羟亚胺下游产品合成方法的简介：当前由干燥结晶的物理方法提取转向用化学法合成。前几年，国内羟亚胺下游注射液非法流失问题一度非常突出。究其原因，就是犯罪分子将羟亚胺下游注射液经过干燥结晶的简单方法提取羟亚胺下游，随着此类案件的增多，国家有关部门加大了羟亚胺下游注射液的管理力度，犯罪分子非法获取羟亚胺下游注射液变得困难后，继而转向用化学法合成羟亚胺下游。近两年，采用化学法制造羟亚胺下游犯罪活动频繁发生，需要引起高度重视。 目前，生产邻氯苯基环戊酮的基本方法有十多种，原料易获得的制造方法相对麻烦一些。比如以邻氯苯甲酸，邻氯苯甲酰氯，溴代环戊烷，环戊醇，环戊烷，环戊酮等等都可以作为主要原料，但其中最简单的，也是目前比较常见的有两种方法的主要原料就是邻氯苯甲酰氯，溴代环戊烷格式试剂法。技术含量并不高，原料很容易找到，化学合成只需要在实验室就能完成，方便易行、易分散、易隐蔽，成本低

廉而售价较高。利润丰厚。“具有初中化学水平的人，如果拥有制做配方，在家就能够生产成品。”对于文化程度不高的高中文化，初中文化，小学文化人员来说，这些技术也是容易学会的。生产出来的产品成色也挺好好，量也大。但现在盐酸羟亚胺，邻酮管控严格，不容易买到。因此就要得我们自己生产了。从生产角度来讲，氯胺酮技术相对简单，从盐酸羟亚胺到氯胺酮只需要重排既可以，反应加结晶一天就可以出来。从邻酮做也不算太难。氯胺酮的整个技术路线：包括需要的设备，原料、配料比、反应时间、反应温度、操作要点细节、注意事项等，内容具体详细通俗易懂。 两种常用的制作方法：制造邻氯苯基环戊酮的第一种方法是：现代工厂都以邻氯苯甲酰氯作为主要原料，以无水三氯化铝作为催化剂、环己烷与二氯乙烷作为溶剂、戊烷和苯作为基团转换剂，与环戊烯发生加成反应，然后经蒸馏提纯而得到邻氯苯基环戊酮。后面就可以再溴化胺化、中

转染试剂

自1978年William Linton 先生在美国威斯康辛州麦迪逊市（就是《廊桥遗梦》那里哦）创立Promega以来，今年已经是第26个年头了，也是Promega进驻中国的20周年――这个几乎可以说是国内生物技术最早的启蒙者之一的品牌非常了解国内科研经费来之不易，在进口品牌中以价格算可亲而广受欢迎。Promega的转染试剂产品由于市场定位较准确，获得的业内评价不错，尤其是在其价格经济实惠前提下，产品质量并没有因此打折扣（就是性价比高咯）。 1. siRNA转染试剂 CodeBreaker? siRNA转染试剂是Promega的专利配方产品，专门为有效转染siRNA而优化设计。这一试剂能有效促进siRNA转染哺乳动物细胞，促进基因沉默，而且毒性小，细胞死亡率低，比如转染CHO与HeLa细胞，使用CodeBreaker基因沉默率达到80%或更多，比起同类产品毒性小50%以上。这一产品操作简便，买来后即可使用，不用溶解。将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA二聚物混合后孵育几分钟，然后加到培养细胞即可。而且转染可在完全生长培养基中进行，不需要更换培养基或再加血清，简化了操纵步骤（见下）。CodeBreaker试剂适用的细胞有HeLa、HEK293、293T、CHO 和 3T3细胞等。价格1800/0.4ml，以24孔板为例，按照推荐剂量可以可以做200次，6孔板大约可用40次左右。Day One：细胞铺板 (in complete growth medium). Day Two 1. 将CodeBreaker? Reagent加到无血清培养基中，混合均匀，室温孵育15—20分钟。。 2. 制成复合物：加入siRNA到第二步中，轻微混合。室温孵育15—20分钟。 3. 然后与细胞混合，37°C培育24—72小时，OK，检测吧。 2. DNA转染试剂 Transfast? 是一种特殊的脂质体转染试剂，由阳离子脂类（+） -N,N[bis(2-hydroxyethyl)]-N-methyl-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和中性脂类DOPE（用于加强转染能力）组成。TransFast试剂是干脂膜，一旦水化后就形成多层脂质体，因此也就具有更多优势，尤其表现在可以传递多种生物大分子－－小的从寡聚核苷酸，到质

各种转染方法比较

各种转染方法比较 转染方法原理主要应 用 特点主要的厂家及产品 DEAE－葡聚糖法带正电的DEAE-葡聚糖与核酸 带负电的磷酸骨架相互作用形成 的复合物被细胞内吞 瞬时转 染 相对简便、重复比磷酸钙好,但对细 胞有一定的毒副作用,转染时需除血 清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS 细胞系 Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit) DNA复合物吸附细胞膜稳定转 染,染瞬 转染 不适用于原代细胞（所需的DNA浓 度较高）,操作简便但重复性差,有些 细胞不适用 细胞建议用CSCL梯度离心，转染 是拷贝数较多 GIBCO BRL，Promega 阳离子脂质体法带正电的脂质体与核酸带负电的 磷酸基团形成复合物，然后脂质 体上剩余的电核与细胞膜上的唾 液酸残基的负电核结合；另一种 解释是通过细胞是内吞作用而被 进入细胞。(若DNA浓度过高， 中和脂质体表面电核，而降低了 与细胞的结合能力) 稳定转 染,瞬时 转染,所 有细胞 使用方法简单，可携带大片段DNA， 通用于各种类型的裸露DNA或 RNA，能转染各种类型的细胞，没 有免疫原性。虽在体外基因转染中 有很高的效率，但在体内，能被血 清清除，并在肺组织内累积，诱发 强烈的抗炎反应，导致高水平的毒 性，这在很大程度上限制了其应用 Invitrogen（Lipofectamine 2000，Lipofectamine， Lipofectin，Lipofectamine Plus，Cellfectin） Roche（Dosper，DOTAP，FuGENE 6） CPG Biotech Co（GeneLimo Plus，GeneLimo Super） Promega（Transfast，Tfx， Transfectam）

碳正离子重排规律

有机化学中重排反应 有机化学中重排反应很早就被人们发现，研究并加以利用。第一次被Wohler发现的，由无机化合物合成有机化合物，从而掀开有机化学神秘面纱的反应—加热氰酸铵而得到尿素，今天也被化学家归入重排反应的范畴。一般地，在进攻试剂作用或者介质的影响下，有机分子发生原子或原子团的转移和电子云密度重新分布，或者重键位置改变，环的扩大或缩小，碳架发生了改变，等等，这样的反应称为是重排反应。 按照反应的机理，重排反应通常可分为亲核反应、亲电反应、自由基反应和周环反应四大类。也有按照不同的标准，分成分子内重排和分子间重排，光学活性改变和不改变的重排反应，等等。 一、亲核重排 重排反应中以亲核重排为最多，而亲核重排中又以1，2重排为最常见。 (一)亲核1，2重排的一般规律 1.亲核1，2重排的三个步骤：离去基团离去，1，2基团迁移，亲核试剂进攻 2.发生亲核1，2重排的条件 （1）转变成更稳定的正离子（在非环系统中，有时也从较稳定的离子重排成较不稳定的离子） （2）转变成稳定的中性化合物 （3）减小基团间的拥挤程度，减小环的张力等立体因素。 （4）进行重排的立体化学条件：带正电荷碳的空p轨道和相邻的C－Z键以及α碳和β碳应共平面或接近共平面 （5）重排产物在产物中所占的比例不仅和正电荷的结果有关，而且和反应介质中存在的亲核试剂的亲核能力有关 3.迁移基团的迁移能力 （1）多由试验方法来确定基团的固有迁移能力 （2）与迁移后正离子的稳定性有关 （3）邻位协助作用 （4）立体因素 4.亲核1，2重排的立体化学： （1）迁移基：构象基本保持，没有发现过构型反转，有时有部分消旋 （2）迁移终点：取决于离去及离去和迁移基进行迁移的相对时机 5.记忆效应：后一次重排好像和第一次重排有关，中间体似乎记住了前一次重排过程 (二) 亲核重排主要包括基团向碳正离子迁移，基团向羰基碳原子迁移，基团向碳烯碳原子迁移，基团向缺电子氮原子转移，基团向缺电氧原子的迁移，芳香族亲核重排，下面就这六种迁移作简要介绍： 1.基团向碳正离子迁移： (1)Wagner-Meerwein重排：烃基或氢的1，2移位，于是醇重排成烯 （2）片那醇重排：邻二醇在酸催化下会重排成醛和酮

软骨细胞 siRNA转染原理及转染试剂的选择

软骨细胞 siRNA转染原理及转染试剂的选择RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域，也是未来最有发展前途的新药开发领域。除此之外，siRNA技术还可以广泛应用于农业、林业、畜牧业和渔业等多种领域，进行良种培育、良种筛选和疾病治疗等。 siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。化学转染能否成功的关键在于转染试剂的选择，目前常用的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等。如何选择合适的转染试剂，一般可从以下几个方面考虑： 一、对siRNA有较高的转染效率。转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测的方法。金标准无疑是检测目标基因的mRNA 水平，因为转染试剂不仅要把siRNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的siRNA 释放出来，发挥抑制基因表达的作用。通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将siRNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因抑制效率并不高。因而，判断转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平，仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判，影响实验的进展。目前国内应用最广的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等，其中，Lipo2000、RNAiMAX为国外知名品牌，RFect转染试剂虽在国内生产，但实际上是在美国研发成功，拥有国际发明专利。就转染效率而言，RFect与RNAiMAX对绝大多数贴壁细胞的基因抑制效率都比较高，RFect在A549细胞中对LaminA/C的基因抑制效率可达95%，RNAiMAX在A549细胞中对LaminA/C的基因抑制效率也能到90%，与之相比，Lipo2000的抑制效率只有70%左右。显然，从转染效率上说，RFect与

大学有机方程式总结有机反应总结

基本有机反应: 烷烃的化学反应： ⒈卤代（F 2，I 2不可作卤化剂）CH 4+Cl 2?→? γ h CH 3Cl+CH 2Cl 2+CHCl 3+CCl 4+HCl CH 3CH 2CH 3+Cl 2 ???→??) 25(h C γCH 3CHClCH 3(57%)+CH 3CH 2CH 2Cl(43%) ⒉硝化，磺化，氧化（略） 烯烃的化学反应： ⒈加卤素：CH 3CH=CH 2+Br 2??→?4 CCl CH 3CHBr －CH 2Br ⒉加氢卤酸：CH 3CH=CH 2+HBr →CH 3CHBr －CH 3 有区域选择，符合马氏规则 ⒊与无机酸：CH 3CH=CH 2+H 2SO 4→CH 3CH(OSO 3H)－CH 3 CH 3CH=CH 2+HOCl →CH 3CH(OH)－CH 2Cl ⒋与水加成：CH 3CH=CH 2??→?42SO H CH 3CH(OSO 3H)－CH 3??→?O H 2 CH 3CH(OH)CH 3 ⒌与硼烷加成：CH 3CH=CH 2??→?6 2H B (CH 3CH 2CH 2)3B ???→?) O(OH H -2CH 3CH 2CH 2OH 顺式加成，反马氏取向生成1?醇 ⒍过氧化物存在下，反马氏取向：CH 3CH=CH 2+HBr →?? ?→?过氧化物 CH 3CH 2CH 3Br HCl 无此反应 ⒎催化加氢成烷烃：用Pt,Pd,Ni 等 ⒏高锰酸钾氧化： 酸性：CH 3CH=CH 2+KMnO 4??→ ?- OH CH 3CH(OH)CH 2OH+MnO 2+KOH 碱性：CH 3CH=CH 2+KMnO 4?? →?? +/H CH 3COOH+CO 2↑ ⒐臭氧化： R O RRC=CHR’?→?3 O C CHR’→ 可根据产物推断反应物结构 R O －O 故多用于双键位置判定 ???→?O 璈O H 222RCOR+R’COOH ??→?O H -Zn 2RCOR+R’CHO ??→?4LiAlH RRCHO H+R’CH 2OH ⒑催化氧化：CH 2=CH 2+O 2?? ??→??C 300-Ag/200CH 2－CH 2 O CH 2=CH 2+O 2??? ?→?2 2CuCl ~PdCl CH 3CHO 多用于工业生产 ⒒α-取代反应： 氯代：CH 2=CHCH 3???? →??C 600-/400Cl 2 CH 2=CH －CH 2Cl 溴代：CH 2=CHCH 3??→ ?NBS CH 2=CH －CH 2Br 两个反应均为自由基取代反应，NBS 即N-溴代琥珀酰亚胺 ⒓重排：(CH 3)3CCH=CH 2??→ ?HCl (CH 3)2CClCH(CH 3)2(主)+(CH 3)3CCHClCH 3(次) 这一重排是由于分步加成和第一步中，由H +对双键的加成生成碳正离子，其稳定性3?>2?>1?，故在可能的情况下，它将以重排的方式趋于更稳定的状态。 ⒔聚合反应：含二聚和多聚（略） 共轭双烯的反应： ⒈1,2-加成和1,4-加成: CH=CH －CH=CH ?→?2 Br BrCH 2CH=CHCH 2Br+BrCH 2－CHBr －CH=CH 2

细胞转染的各种方法比较

细胞转染的各种方法比较 梭华-Sofast TM 基因转染试剂 （高效率和细胞毒性低的聚阳离子转染试剂） 梭华-Sofast TM 是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，梭华-Sofast TM 具有高效率转染所必备特征，如浓缩DNA ，将DNA 运送到细胞内，并使其在细胞核内释放等；梭华-Sofast TM 的细胞毒性很低，这是它的另一个重要特点；而且与其它转染试剂相比，梭华-Sofast TM 很稳定，不被血清清除。以上优点使得基因转染的操作简便易行，重复性好。梭华-Sofast TM 已被成功应用于很多原代培养细胞和转化细胞株的基因转染。 一. 特点 ★ 转染效率高且稳定，比目前常用产品高10%。 ★ 细胞培养基中的血清存在与否，均能获得高效率转染。 ★ 细胞毒性低。 ★ 转染程序简单，转染前后无需更换培养基转染实验可以在半小时内完成。 ★ 价格比进口产品便宜60%。 ★ 完善的技术支持，保证质量，无效退货。 二. 效果比较 将梭华转染试剂与其它公司的聚阳离子转染试剂和常用的脂质体转染试剂分别在常用 的报告基因如GFP 、荧光素酶基因和LacZ 基因的转染效率方面作了对比。 实验表明: 1. 梭华-Sofast TM 具有很高和稳定的转染率，是一种很好的基因转染试剂。对某些常用的细胞株梭华-Sofast TM 转染率高于某常用阳离子脂质体，对其他多数细胞株的转染效率相近。 2. 需特别指出梭华-Sofast TM 在原代培养细胞HUV-EC 中有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。 3. 通过检测转染细胞荧光素酶基因的活性，测定其转染效率。实验表明梭华转染试剂具有最高的转

有机化学重排反应总结

1.Claisen克莱森重排 烯丙基芳基醚在高温(200°C)下可以重排，生成烯丙基酚。 当烯丙基芳基醚的两个邻位未被取代基占满时，重排主要得到邻位产物，两个邻位均被取代基占据时，重排得到对位产物。对位、邻位均被占满时不发生此类重排反应。 交叉反应实验证明：Claisen重排是分子内的重排。采用 g-碳 14C 标记的烯丙基醚进行重排，重排后 g-碳原子与苯环相连，碳碳双键发生位移。两个邻位都被取代的芳基烯丙基酚，重排后则仍是a-碳原子与苯环相连。 反应机理 Claisen 重排是个协同反应，中间经过一个环状过渡态，所以芳环上取代基的电子效应对重排无影响。 从烯丙基芳基醚重排为邻烯丙基酚经过一次[3,3]s 迁移和一次由酮式到烯醇式的互变异构；两个邻位都被取代基占据的烯丙基芳基酚重排时先经过一次[3,3]s 迁移到邻位(Claisen 重排)，由于邻位已被取代基占据，无法发生互变异构，接着又发生一次[3,3]s 迁移(Cope 重排)到对位，然后经互变异构得到对位烯丙基酚。 取代的烯丙基芳基醚重排时，无论原来的烯丙基双键是Z-构型还是E-构型，重排后的新双键的构型都是E-型，这是因为重排反应所经过的六员环状过渡态具有稳定椅式构象的缘故。

Claisen 重排具有普遍性，在醚类化合物中，如果存在烯丙氧基与碳碳相连的结构，就有可能发生Claisen 重排。 2.Beckmann贝克曼重排 肟在酸如硫酸、多聚磷酸以及能产生强酸的五氯化磷、三氯化磷、苯磺酰氯、亚硫酰氯等作用下发生重排，生成相应的取代酰胺，如环己酮肟在硫酸作用下重排生成己内酰胺： 反应机理 在酸作用下，肟首先发生质子化，然后脱去一分子水，同时与羟基处于反位的基团迁移到缺电子的氮原子上，所形成的碳正离子与水反应得到酰胺。 迁移基团如果是手性碳原子，则在迁移前后其构型不变，例如：

各种细胞转染方法比较

各种细胞转染方法比较 细胞转染方法包括DEAE－葡聚糖法，磷酸钙法，阳离子脂质体法，阳离子聚合物，病毒介导法，Biolistic 颗粒传递法（基因枪粒子轰击法），显微注射法，电穿孔法等，对各种方法的原理，应用，特点，厂家产品等信息的比较结果如下表： 转染方法原理主要应用特点厂家及产品 DEAE－葡聚糖法带正电的DEAE-葡聚 糖与核酸带负电的 磷酸骨架相互作用 形成的复合物被细 胞内吞 瞬时转染 相对简便、重复比磷酸钙好，但 对细胞有一定的毒副作用，转染 时需除血清且一般只用于BSC-1， CV-1，COS细胞系 Sigma-Aldrich (DEAE-Dextran Transfection Kit) 磷酸钙法磷酸钙DNA复合物吸 附细胞膜被细胞内 吞 稳定转染， 染瞬转染 不适用于原代细胞（所需的DNA 浓度较高），操作简便但重复性 差，有些细胞不适用 细胞建议用CSCL梯度离心，转染 是拷贝数较多 GIBCO BRL ， Promega 阳离子脂质体法带正电的脂质体与 核酸带负电的磷酸 基团形成复合物，然 后脂质体上剩余的 电核与细胞膜上的 唾液酸残基的负电 核结合；另一种解释 是通过细胞是内吞 作用而被进入细胞。 (若DNA浓度过高， 中和脂质体表面电 核，而降低了与细胞 的结合能力) 稳定转染， 瞬时转染， 所有细胞 使用方法简单，可携带大片段 DNA，通用于各种类型的裸露DNA 或RNA，能转染各种类型的细胞， 没有免疫原性。虽在体外基因转 染中有很高的效率，但在体内， 能被血清清除，并在肺组织内累 积，诱发强烈的抗炎反应，导致 高水平的毒性，这在很大程度上 限制了其应用 Invitrogen （Lipofectami ne 2000， Lipofectamine ，Lipofectin， Lipofectamine Plus， Cellfectin） Roche（Dosper， DOTAP，FuGENE 6） CPG Biotech Co （GeneLimo Plus，GeneLimo Super） Promega （Transfast， Tfx， Transfectam） 阳离子聚合物带正电的聚合物与 核酸带负电的磷酸 基团形成带正电的 复合物后与细胞表 面带负电的蛋白多 稳定转染， 瞬时转染， 所有细胞 除了具有阳离子脂质体的转染效 率高，操作简单，适用范围广， 重复性好等特点外，还具有在体 内，转染效率高，细胞毒性低等 特点，是新一代的转染试剂。 Sunma(梭华－ Sofast?) Qbiogene （jetPEI?） Qiagen(SuperF

如何选择siRNA转染试剂

如何选择siRNA转染试剂 RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域，也是未来最有发展前途的新药开发领域。除此之外，siRNA技术还可以广泛应用于农业、林业、畜牧业和渔业等多种领域，进行良种培育、良种筛选和疾病治疗等。 siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。化学转染能否成功的关键在于转染试剂的选择，目前常用的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等。如何选择合适的转染试剂，一般可从以下几个方面考虑： 一、对siRNA有较高的转染效率。转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测的方法。金标准无疑是检测目标基因的mRNA 水平，因为转染试剂不仅要把siRNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的siRNA 释放出来，发挥抑制基因表达的作用。通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将siRNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因抑制效率并不高。因而，判断转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平，仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判，影响实验的进展。目前国内应用最广的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等，其中，Lipo2000、RNAiMAX为国外知名品牌，RFect转染试剂虽在国内生产，但实际上是在美国研发成功，拥有国际发明专利。就转染效率而言，RFect与RNAiMAX对绝大多数贴壁细胞的基因抑制效率都比较高，RFect在A549细胞中对LaminA/C的基因抑制效率可达95%，RNAiMAX在A549细胞中对LaminA/C的基因抑制效率也能到90%，与之相比，Lipo2000的抑制效率只有70%左右。显然，从转染效率上说，RFect与

傅克反应总结材料

傅克反应总结材料1.傅克反应的发现： 在这些反应中，以制备芳烃和芳酮是主要的。 2.傅克反应的反应机理

注意以下三种情形下的反应： A.烷基正离子的重排(稳定性：叔>仲>伯) 因此反应中都有异构体产物的出现。如： B.烷基取代不会停留在一取代阶段 由于烷基是供电子基团，已取代后芳环上电子云密度增大，使得亲电取代反应更容易进行，所以取代还会继续进行下去，最后可以全部取代。如： 但是有些基团由于位阻关系，只能得到已取代的产物。 如果取代基团是酰基，由于酰基是吸电子基团，使得芳环电子云密度减小，使得亲电取代反应比较困难，反应一步后会停下来，所以傅克酰化合成芳酮更为有用。 C.定文问题：

下面的例子将让我们更好的去理解定位问题： 3.傅克反应的催化剂 路易氏酸，强酸，酸酐，酰氯和一些中性化合物和元素等。 特别需要注意以下及点： A.不同催化剂产生不桶产物： B.不同催化剂产率有很大的差别：

C. 氯化物作为催化剂要无水，但是绝对无水活性反而不大，甚至不能进行。有些反应还需要把催化剂暴露在空气中吸水几分钟后，才能催化反应的进行。 4.傅克反应所用的烷基化剂 A.常用的是氯化物，活泼性次序RCl>RBr>RI B.烯类也是很好的烷基化剂，催化剂用BF3和HF效果很好。 C.醇类也可作为烷基化剂，但是催化剂用BF3和HF效果最好。 5.酰基取代剂 A. 酰卤 活性顺序为： B. 酸酐也是很好的酰化剂，但是它需要比酰卤多50%的氯化铝。 C. 羧酸也可以直接用作酰化剂，但催化剂不宜用氯化铝，而要用硫酸，磷酸，最好是 氟化氢。 6.芳环 芳环和杂环化合物都能参加F-C反应，其中并环和稠环更易发生反应，杂环中，呋喃类，吡咯类等虽对酸敏感，但在适当情况下也可发生F-C反应。

体内转染试剂(Entranster)文献一

1.Biochemical and Biophysical Research Communications. 2017 May 25. Targeting long non-coding RNA ASBEL with oligonucleotide antagonist for breast cancer therapy.（长链非编码RNA与乳腺癌治疗） 2.Journal of Neurochemistry. 2017 May 24. TRAF6 participates in early brain injury after subarachnoid hemorrhage in rats through inhibiting autophagy and promoting oxidative stress.（大鼠蛛网膜下腔出血与早期脑损伤） 3.Clin Exp Pharmacol Physiol. 2017 May 19. Limb remote ischaemic postconditioning-induced elevation of fibulin-5 confers neuroprotection to rats with cerebral ischaemia/reperfusion injury: Activation of the AKT pathway.（AKT通路与大鼠大脑局部缺血/再灌注损伤） 4.Neurological Research. 2017 May 1. The 15-LO-1/15-HETE system promotes angiogenesis by upregulating VEGF in ischemic brains. （15-LO-1siRNA 通过在小鼠缺血性脑中上调VEGF来促进血管生成） 5.Blood. 2017 Apr 27. Osteoblasts support megakaryopoiesis through production of interleukin 9.(IF: 11.841.)（成骨细胞与白介素9研究） 6.EBioMedicine. 2017 Apr 11. Fluvastatin Prevents Lung Adenocarcinoma Bone Metastasis by Triggering Autophagy.（siRNA与小鼠肺腺癌骨转移研究） 7.Cellular and Molecular Neurobiology. 2017 Feb 25. Regulation of Sirtuin 3-Mediated Deacetylation of Cyclophilin D Attenuated Cognitive Dysfunction Induced by Sepsis-Associated Encephalopathy in Mice. （siRNA 侧脑室注射研究小鼠脓毒症相关脑病引起的认知功能障碍） 8.Mediators Inflamm. 2017 Feb 15. Involvement of Toll Like Receptor 2 Signaling in Secondary Injury during Experimental Diffuse Axonal Injury in Rats. （大鼠实验性弥漫性轴索损伤）