质粒DNA大提试剂盒-经典法
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质粒DNA大提试剂盒-经典法
Classic Max Plasmid DNAout
货号: M090110
产品及特点
本试剂盒是用于质粒DNA大量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全套操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从50-100 mL过夜培养的菌液纯化得到高达300-500 ug的高纯度质粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
1.快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2.纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间。
3.产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5 ug/mL。
4.用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
5.价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。
规格及成分
5次包装
成份
溶液A 30mL
溶液B 30mL
溶液C 40mL
RNase A溶液
1.5 mL
（2 mg/mL）
通用洗柱液100mL
大提离心吸附柱5套
通用洗脱液10mL
使用手册1份
运输及保存
RNase A溶液需要4℃保存，其余成分可室温保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。
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使用方法
1.先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在
4℃保存。
2.用250 mL离心管收集100-300 mL菌液，5,000 rpm离心10分钟，去除上清。
3.往细菌沉淀中加入6 mL溶液A（含RNase A），充分振荡悬浮。注意：充分重悬细胞沉
淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。
4.加入6 mL 溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或
室温放置5-10分钟直到裂解液变透明。注意：避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
5.加入冰浴的8 mL溶液C，颠倒混匀，冰上放置10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。
注意不要过分振荡。
6.6,000 rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀
絮状物。
7.将上清液（约20 mL左右）转移到离心过滤柱中（可以装20 mL左右），放入50 mL尖
底收集管中。如果上清液较多，不能一次上完，可以分两次处理。
8.6,000 rpm离心5-10 分钟，离心过滤柱将吸附溶液中的基因组DNA 和杂质，而质粒DNA
将在穿透液中。注意：转速不能过高，否则杂质会穿透过滤柱，污染质粒DNA。
9.将上步得到的穿透液移入到离心吸附柱中，放入50 mL尖底收集管中。
10.6,000 rpm离心5 分钟，质粒DNA将与离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
11.将10mL通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6,000 rpm 离心5分钟，
弃穿透液。
12.将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6,000 rpm 离心5分钟，
弃穿透液。
13.重复上步一次。
14.室温6,000 rpm空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。
15.将离心吸附柱放入一个干净的50 mL塑料离心管中，加1 mL通用洗脱液（洗脱液如加
热到50-65℃效果更佳），室温静置2分钟后6,000rpm 离心5分钟，收集液即是质粒DNA
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溶液。
16.重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
17.合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。
疑难解答
可能出现的问题可能原因建议解决方法
琼脂糖凝胶上可见RNA帶RNA降解不彻底适当补加点RNase到溶液A中
产物中有大分子量的DNA 污染加入溶液B后有剧
烈震荡或裂解时间
过长
加入溶液B后不要猛烈振荡或搖
匀，可轻轻颠倒离心管6-8次使充
分混匀,并且时间一般在5分钟之
内。
在琼脂糖凝胶上点样时，质粒漂出点样孔洗脱步骤后，乙醇
没有完全从柱子上
去除
DNA洗脱前离心柱必须干甩一次。
DNA产量低菌体量过多
细菌裂解率低
只使用含有氨苄青霉素的LB或YT
培养基.使用时，不要使用超过4 mL
的高拷贝质粒培养物或8 mL低拷
贝质粒培养物(一般用过夜培养物
1.5 mL)。
在加入溶液A后细胞没有充分混
匀，可漩渦振荡悬浮液使之充分混
匀。
加入溶液B后，延长裂解时间,使裂
解液澄清即可,一般不会超过5分
钟。
如果溶液B没有盖紧，可能需要重
配.可按以下准备：0.2N NaOH，1%
SDS。
使用的是低拷贝数
质粒
若5 mL过夜培养物的产量小于0.5
μg，增加培养物的体积至10 ml.