大型真菌总DNA提取步骤

大型真菌总DNA提取步骤

1、选取适量的硅胶干燥材料或从标本上切取适量组织放入1.5 ml离心管中，加入少量石英

砂，液氮冷冻，室温下用塑料研杵迅速用力研磨，直至材料呈粉末状，细腻均匀。

4、加入65℃预热的CTAB溶液500μl，充分混匀，65℃水浴1 h，10分钟轻摇一次。

5、在离心管中加入500μl的氯仿-异戊醇（V：V=24：1），轻摇10分钟，10000 r/min离心

10分钟，取上清。

6、再次在离心管中加入氯仿-异戊醇（V：V=24：1），加满离心管，轻摇10分钟，10000 r/min

离心10分钟，取上清。

7、加入满无水乙醇（-20℃预冷），轻摇，放于冰箱-20℃沉降4h 或过夜。

8、从冰箱中取出离心管，10000 r/min离心10分钟，弃上清，注意动作要轻。

9、-20℃预冷的75%乙醇10000 r/min离心2分钟洗两次，-20℃预冷的无水乙醇洗一次，每

次洗涤离心13000 r/min离心2分钟。

10、将离心管倒扣于通风橱内，风干2小时，使乙醇挥发。干燥后，加入50 μl TE(或水)溶

液，摇床内36℃,保温30min（不摇晃），使DNA溶解。

11、吸取溶解好的DNA原液5μl加45μl水(或TE)，混匀后的工作液可直接用于PCR。原

液则保存于-20℃备用。