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气相色谱方法验证

气相色谱方法验证
气相色谱方法验证

方案

第1版

顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B含量的验证

****药业有限公司

方法验证

生效日期:编写人:日期:

审阅人:日期:

批准人:日期:

QA经理

方法验证

目录

名称页数1.目的 (3)

2.范围 (3)

3.仪器与试剂及色谱条件 (3)

4.验证实验内容 (4)

5.最终报告 (20)

方法验证

一、目的

1.验证顶空气相色谱法能否准确、精密的测定一定浓度范围内的原料药中溶剂A和溶剂

B的含量。

2.验证顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B含量是否具有良好的选择性。

3.验证方法在环境、条件发生一定变化时,能否有一定的耐受性。

二、范围

适用于****药业有限公司原料药中溶剂A和溶剂B含量的验证,包括:空白试验、精密度、定量限、线性范围、准确度、耐受性等。

三、仪器与试剂及色谱条件

仪器与试剂

GC — HP6890N(FID)

Column:DB-1301(30m×0.32mmI.D.×1μm)

Oven:90℃

Inlet:150℃

Detector: 200℃

Column Pressure:4.8psi

Column flow rate: 0.8ml/min

Split rate: 1:25

Sampler Condition:

****有限公司

方法验证

Agilent 7694 Head-space Sampler

Equilibration temperature: 80℃

Equilibration time: 45min

Transfer-line temperature: 105℃

Carrier gas: 25ml/min

Pressurisation time: 0.5min

Injection time: 0.20min

移液管:25 ml,10ml,2ml 吸量管:2ml 胶头滴管分析天平顶空瓶(22ml),容量瓶:50ml

微量注射器:25μl

试剂:

DMF(AR)、溶剂B(AR)、溶剂A(AR)、原料药(批号)

无残溶的原料药

四、验证实验内容

1. 空白试验

(1)DMF

用称液管移取2mlDMF于22ml顶空瓶中,加盖,作色谱处理。

可接受标准:在溶剂B和溶剂A出峰位置处无干扰峰

验证结果:

结论:

操作者:核对者:

方法验证

(2)空白

取无残留溶媒(在水相结晶,不用溶媒处理)的普青_____g于22ml顶空瓶中,用移液管加入2mlDMF,加盖,摇匀,作色谱分析。

可接受标准:在溶剂B和溶剂A出峰位置处无干扰峰。

验证结果:

结论:

操作者:核对者:

2. 精密度

2.1 系统适应性

溶液配制

贮备液:向50ml容量瓶中精确加入溶剂B0.05g,溶剂A0.5g,用DMF定容。

标准溶液A:称取贮备液1.2800g于50ml容量瓶中,用DMF溶液定容。

精密称1.0g无残留的原料药于22ml顶空瓶中,加入2ml标准溶液A,加盖作色谱处理,各重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

可接受标准: RSD≤5%

验证结果:

1.贮备液配制:称取溶剂B g,溶剂A g,用DMF定容至50ml。

2.标准溶液A:称取贮备液 g于50 ml容量瓶中,用DMF溶液定容.

3.称取无残留的原料药 , , , ,于22ml顶空瓶中,加入2 ml标准溶液A,加盖作色谱处理。

方法验证

标准溶液A色谱数据表

结论:

操作者: 核对者:

3. 线性范围:

3.1 线性标准溶液配制:

贮备液a:用移液管移取10ml贮备液于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

1#标准液:用吸量管移取1.25ml贮备液于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀,制成1#贮备液。然后精密称 g无残留的原料药于22 ml顶空瓶中,加入2ml上述溶液,

混匀。(约含500ppm溶剂A及50ppm溶剂B)。

2#标准液:用移液管移取25ml1#贮备液于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀,制成2#贮备液。然后精密称 g无残留的原料药于22ml顶空瓶中,加入2ml上述溶液,

混匀。(约含250ppm溶剂A及25ppm溶剂B)。

3#标准液:用移液管移取25ml2#贮备液于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀,制成3#贮备液。然后精密称 g无残留的原料药于22ml顶空瓶中,加入2ml上述溶液,

混匀。(约含125ppm溶剂A及12.5ppm溶剂B)。

方法验证

4#标准液:用移液管移取25ml3#贮备液于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀,制成4#贮备液。然后精密称 g无残留的原料药于22ml顶空瓶中,加入2ml上述溶液,

混匀。(约含62.5ppm溶剂A及6.25ppm溶剂B)。

5#标准液:用移液管移取25ml4#贮备液于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀,制成5#贮备液。然后精密称 g无残留的原料药于22ml顶空瓶中,加入2ml上述溶液,

混匀。(约含31.3ppm溶剂A及3.13ppm溶剂B)。

分别取1#、2#、3#、4#、5#线性标准液,加盖作色谱处理。

按照线性标准液1#~5#的浓度与其对应的溶剂B及溶剂A的峰面积,作线性回归得到溶剂B和溶剂A的工作曲线。

可接受标准:γ≥0.99

线性范围数据表

方法验证

溶剂A线性回归结果:

a= b= r=

工作曲线: y =

溶剂B线性回归结果:

a= b= r=

工作曲线: y =

结论:

操作者:核对者:

4. 定量限

3#贮备液逐级稀释,作色谱分析,按照色谱峰的信噪比为1:10时的浓度作为溶剂A和溶剂B的定量限。

结论:溶剂B的定量限:

溶剂A的定量限:

操作者:核对者:

方法验证

5. 准确度

5.1 系统适用性

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,各重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

可接受标准: RSD≤5%

结论:

5.2 准确度

称取1.0g普鲁卡因青毒素产品,测出其溶剂B和溶剂A的残留量,然后加入一定量的标准溶液,加入三次, ,计算其回收率,可接受标准:回收率应在90%~110%之间。

验证结果:

5.2.1溶剂B回收率

称取原料药产品 g于22ml顶空瓶中,加入2mlDMF溶液作色谱

处理,根据工作曲线计算出该批产品中的溶剂B和溶剂A的含量。

方法验证

称取原料药产品1.0g 于22ml顶空瓶中,加入2mlDMF及10μl,20μl,25μl的贮备液a ,加盖作色谱处理,根据工作曲线计算溶剂B和溶剂A的含量。

溶剂B回收率:

溶剂A回收率:

结论:

操作者:核对者:

****有限公司

方法验证

6. 中间精密度

对同一样品进行三次平行测定,连续测定三天(三天均用同一个标准品和检品),由不同人测定。

可接受标准:当天测定结果的RSD 溶剂B≤20%;溶剂A≤15%

大与天之间的测定结果RSD:溶剂B≤30%;溶剂A≤20%

6.1 系统适用性(第一天)

溶液配制:

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

C:分别称原料药批 g, g, g于22 ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.

可接受标准: RSD≤5%

****有限公司

方 法 验 证

结论:

操作人: 核对者:

6.2 系统适用性(第二天) 溶液配制:

a :称取贮备液 g 于50ml 容量瓶中,用DMF 定容,摇匀。

b :取a 液2ml 于22ml

顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

C:分别称原料药 批 g, g, g 于22 ml 顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A 和溶剂B 含量. 可接受标准: RSD ≤5%

**** 有 限 公 司

方 法 验 证

结论:

操作人: 核对人: 6.3 系统适用性(第三天) 溶液配制:

a :称取贮备液 g 于50ml 容量瓶中,用DMF 定容,摇匀。

b :取a 液2ml 于22ml

顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

C:分别称原料药 批 g, g, g 于22 ml 顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A 和溶剂B 含量. 可接受标准: RSD ≤5%

**** 有 限 公 司

方 法 验 证

结论:

操作人:核对人:

三天验证结果统计

结论:

操作人:核对人:

7. 耐受性

对比如下条件的测量结果: a不同柱温的耐受性

b不同流速的耐受性

可接受标准: RSD≤5%

****有限公司

方法验证

7.1 使用不同柱温的耐受性

7.1.1 第一种柱温 T = 88℃

系统精密度

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

结论:

操作人:核对人:

7.1.2 第二种柱温 T=90℃

****有限公司

系统精密度

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

操作人:核对人:

7.1.3 第三种柱温 T=92℃

系统精密度

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

****有限公司

方法验证

结论:

操作人:核对人:

7.1.4 对比分析

7.1.5结论:

7.2 不同流速的耐受性

7.2.1 第一种流速0.7ml/min

系统精密度

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

****有限公司

方法验证

系统精密度

结论:

操作人:核对人:

7.2.2 第二种流速0.8ml/min

系统精密度

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

****有限公司

方法验证

结论:

操作人:核对人:

7.2.3 第三种流速0.9ml/min

系统精密度

a:称取贮备液 g于50ml容量瓶中,用DMF定容,摇匀。

b:取a液2ml于22ml顶空瓶中,加盖作色谱处理,共重复4次,计算4次的平均值,相对标准偏差。

****有限公司

方法验证

气相色谱仪操作步骤(精)

气相色谱仪操作步骤 1 打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关(或氮气钢瓶总阀),调整输出压力稳定在0.4Mpa左右(气体发生器一般在出厂时已调整好,不用再调整)。 2. 打开色谱仪气体净化器的氮气开关转到“开”的位置。注意观察色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后,打开色谱仪的电源开关。 3. 设置各工作部温度。TVOC分析的条件设置:(a)柱箱:柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终止温度250℃、终止时间10min; (b)进样器和检测器:都是250℃。苯分析时的色谱条件:(a)柱箱:柱箱初始温度100℃、初始时间0min、升温速率0℃/min、终止温度0℃、终止时间0min; (b)进样器和检测器:都是150℃。 4. 点火:待检测器(按“显示、换档、检测器”可查看检测器温度)温度升到100℃以上后,打开净化器上的氢气、空气开关阀到“开”的位置。观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳定在0.1Mpa和0.15Mpa左右。按住点火开关(每次点火时间不能超过6~8秒钟)点火。同时用明亮的金属片靠近检测器出口,当火点着时在金属片上会看到有明显的水汽。如果在6~8秒时间内氢气没有被点燃,要松开点火开关,再重新点火。在点火操作的过程中,如果发现检测器出口内白色的聚四氟帽中有水凝结,可旋下检测器收集极帽,把水清理掉。在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法:观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。 5. 打开电脑及工作站A,打开一个方法文件:TVOC分析方法或苯分析方法。显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。接着可以转动色谱仪放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮,检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时,基线应随着变化)。待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮,进行色谱数据分析。分析结束时,点击“停止”按钮,数据即自动保存。 8.关机程序:首先关闭氢气和空气气源,使氢火焰检测器灭火。在氢火焰熄灭后再将柱箱的初始温度、检测器温度及进样器温度设置为室温(20-30℃),待温度降至设置温度

气相色谱中的内标法与外标法

气相色谱中的内标法与外标法 内标法与外标法 一、内标法 什么叫内标法?怎样选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生 的影响,以提高分析结果的准确度。 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被色谱拄所分离,又不受试样中其它组分峰的干扰,只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值,即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时,内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说,内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物,这样它能以准确、已知的量加到样品中去,它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在 溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征,最好是被分析物质的一个同 系物。当然,在色谱分析条什下,内标物必须能与样品中各组分充分分离。 需要指出的是,在少数情况下,分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率,此时,他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标,来测定感兴趣化合物的百分回收率,而不必遵循以上所说的选择原则。

在使用内标法定量时,有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值? 影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。 由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。 化学方面的因素包括: 1、内标物在样品里混合不好; 2、内标物和样品组分之间发生反应, 3、内标物纯度可变等。 对于一个比较成熟的方法来说,色谱方面的问题发生的可能性更大一些,色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大,对面积比的影响则要小一些,但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度,那么一定有某个重要的色谱问题存在,比如进样量改变太大,样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别,检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变,这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠,而色谱固看来也是正常的话,应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是:面积比可变,而峰高比保持相对恒定, 在制作内标标准曲线时应注意什么? 在用内标法做色话定量分析时,先配制一定重量比的被测组分和内标样品

生物样品定量分析方法验证指导原则

9012 生物样品定量分析方法验证指导原则
1. 范围
准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和 制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动 学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此,必须完整地验证和 记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实 际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。 应该在相应的生物样品分析中遵守 GLP 原则或 GCP 原则。
2. 生物分析方法验证
2.1 分析方法的完整验证
分析方法验证的主要目的是,证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析 物浓度的可靠性。此外,方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。一般应对每 个物种和每种基质进行完整验证。当难于获得相同的基质时,可以采用适当基质 替代,但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括:选择性、定量下限、响应函数和校正范 围(标准曲线性能)、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液 中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物,也可能涉及一 个母体药物及其代谢物,或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下,验证和 分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质 在方法验证中,含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质 中。此外,色谱方法通常使用适当的内标。 应该从可追溯的来源获得对照标准物质。应该科学论证对照标准物质的适用 性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度,并提供储存条件、失效日期和批号。 对于内标,只要能证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关的任何杂质 不产生干扰。 当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽可能使用稳定同位素标记的内 标。它们必须具有足够高的同位素纯度,并且不发生同位素交换反应,以避免结 果的偏差。
1

气相色谱仪验证方案

编号:STP-YZ-HY-015-00 检测仪器验证方案 GC-14C气相色谱仪

目录1概述 2验证目的 3验证依据及验证范围 4参与验证的相关部门及其职责 5验证工作小组 6验证内容 6.1安装确认 6.1.1文件资料 6.1.2售后服务 6.1.3消耗性备品备件 6.1.4安装检查 6.2运行确认 6.2.1灵敏度及稳定性测试 6.2.1.1稳定性 6.2.1.2灵敏度 6.3性能确认 6.3.1系统适用性试验: 6.3.2定量重复性试验 7验证结果综合评价: 8偏差说明及措施: 9验证小组人员签字/日期: 10偏差处理及验证总结报 11再验证要求:

1概述 GC-14C 型气相色谱仪为日本岛津分析仪器有限公司生产,是由单片机控制的有较高性价比的气相色谱仪,采用氢焰离子化检测器,可以进行恒温及程序升温操作,适用于本公司所有产品的定量和定性分析。 2验证目的 为了确保使用该仪器检测数据真实可靠,也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标,对该仪器进行验证。 3验证依据及适用范围 参照国家技术监督局《实验室气相色谱仪检定规程》及《中国药典》2005版二部附录V E气相色谱法起草本验证方案。本验证方案适用于实验室GC-14C 型气相色谱仪的验证。 4参与验证的相关部门及其职责 4.1验证小组 4.1.1负责验证方案的审批; 4.1.2负责验证数据及结果的审核; 4.1.3负责验证报告的审核; 4.1.4负责验证周期的确认; 4.1.5负责发放验证证书; 4.2工程部 4.2.1负责设备的安装、调试,并做好相应的记录; 4.2.2负责拟定验证周期; 4.2.3负责收集预、安装确认的试验记录; 4.3质量管理部 4.3.1负责对验证参数要求进行确认; 4.3.2负责根据检验结果出具检验报告单; 4.3.3负责仪器、仪表的校验; 4.3.4负责起草设备操作、清洁和维护保养等方面的标准操作规程; 4.3.5负责设备日常的维护保养工作; 4.3.6负责建立设备档案。

药物非临床药代动力学研究技术指导原则

附件5 药物非临床药代动力学研究技术指导原则 一、概述 非临床药代动力学研究是通过体外和动物体内的研究方法,揭示药物在体内的动态变化规律,获得药物的基本药代动力学参数,阐明药物的吸收、分布、代谢和排泄(Absorption, Distribution, Metabolism, Excretion, 简称ADME)的过程和特征。 非临床药代动力学研究在新药研究开发的评价过程中起着重要 作用。在药物制剂学研究中,非临床药代动力学研究结果是评价药物制剂特性和质量的重要依据。在药效学和毒理学评价中,药代动力学特征可进一步深入阐明药物作用机制,同时也是药效和毒理研究动物选择的依据之一;药物或活性代谢产物浓度数据及其相关药代动力学参数是产生、决定或阐明药效或毒性大小的基础,可提供药物对靶器官效应(药效或毒性)的依据。在临床试验中,非临床药代动力学研究结果能为设计和优化临床试验给药方案提供有关参考信息。 本指导原则是供中药、天然药物和化学药物新药的非临床药代动力学研究的参考。研究者可根据不同药物的特点,参考本指导原则,科学合理地进行试验设计,并对试验结果进行综合评价。 本指导原则的主要内容包括进行药物非临床药代动力学研究的 基本原则、试验设计的总体要求、生物样品的测定方法、研究项目(血

药浓度-时间曲线、吸收、分布、排泄、血浆蛋白结合、生物转化、对药物代谢酶活性及转运体的影响)、数据处理与分析、结果与评价等,并对研究中其他一些需要关注的问题进行了分析。附录中描述了生物样品分析和放射性同位素标记技术的相关方法和要求,供研究者参考。 二、基本原则 进行非临床药代动力学研究,要遵循以下基本原则: (一)试验目的明确; (二)试验设计合理; (三)分析方法可靠; (四)所得参数全面,满足评价要求; (五)对试验结果进行综合分析与评价; (六)具体问题具体分析。 三、试验设计 (一)总体要求 1. 受试物 中药、天然药物:受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备,一般应为中试或中试以上规模的样品,否则应有充分的理由。应注明受试物的名称、来源、批号、含量(或规格)、保存条件、有效期及配制方法等,并提供质量检验报告。由于中药的特殊性,建议现用现配,否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。当给药时间较

安捷伦气相色谱仪校验方案及记录

气相色谱仪确认文件(2020年)

安捷伦7890A气相色谱仪验证方案及报告 文件编号:GC-V AP-YQ-001-01 文件类别:验证

目录 1、验证目的 2、验证范围 3、验证时间 4、接收标准 5、验证样品 6、责任者 7、分析方法描述 8、验证程序 9、系统确认证明 10、偏差调查 11、结果分析、结论及评价 12、再确认 13、附件

1、验证目的 对使用中的安捷伦7890气相色谱系统进行周期检定,以保证该仪器的检定项目都达到规定技术指标,是合格的仪器,能够有效进行质量控制。 2、验证范围 对该仪器的气路系统,加热系统,进样系统,检测器性能等进行检定。 3、验证时间 年月日。 4、接收标准 5、验证样品 6、责任者 QC分析员:起草方案并按批准的方案进行验证及整理报告; QC经理:对方案和报告进行审核; QA经理:对方案和报告进行批准。 7、分析方法描述 a Agilent7890A检定条件: 色谱柱:DB-624;30m×0.53mm×3μm film thickness; 柱温:70℃进样器温度:150℃;FID检测器温度:180℃ 载气:N2;流速:4.0ml/min恒流;分流比:40:1;

H2流速:35ml/min;Air流速:350 ml/min; 尾吹气流速:20 ml/min;进样量:1.0ul。 b 溶液配制: ⅰ)80%的甲苯溶液:准确移取4.0ml正丁醇置于100ml容量瓶中,再移入3.2ml甲苯,用甲醇稀释至刻度。 ⅱ)90%的甲苯溶液:准确移取4.0ml正丁醇置于100ml容量瓶中,再移入3.6ml甲苯,用甲醇稀释至刻度。 ⅲ)100%的甲苯溶液:准确移取4.0ml正丁醇置于100ml容量瓶中,再移入4.0ml甲苯,用甲醇稀释至刻度。 ⅳ)110%的甲苯溶液:准确移取4.0ml正丁醇置于100ml容量瓶中,再移入4.4ml甲苯,用甲醇稀释至刻度。 ⅴ)120%的甲苯溶液:准确移取4.0ml正丁醇置于100ml容量瓶中,再移入4.8ml甲苯,用甲醇稀释至刻度。 8、验证程序 按方法规定条件设定好仪器系统,待系统稳定后,进行下列试验。 8.1仪器设备: 8.2仪器外观检查 仪器的标识应齐全(包括名称、型号、制造厂名、出厂日期和序列号);仪器要成套、完整;各旋钮、按键、开关等能正常工作,无松动;指示灯灵敏;电源线、信号电缆等插、接头与插座紧密配合;气体管路应为铜管、不锈钢管、聚四氟乙烯管或尼龙管,接头要紧密、牢固,用试漏液检查气源至仪器所有气体通道的接头,应无泄漏。记录检查结果见下表一。

气相色谱法的基本知识及应用

高效液相色谱法(HPLC) 概述: 色谱法是一种应用范围相当广泛的分离分析技术,它已有近百年的发展史。 二十世纪五、六十年代石油及石油化工的突起促使了GC技术大发展,而七、八十年代生命科学、生化、制药工业的发展推动了HPLC的迅速发展。 目前除分析化学外,生物化学,石油化学,有机化学,无机化学等学科都普遍采用色谱技术。现代高效液相色谱仪,以其高效,快速和自动化等特点成为当代分析仪器中发展最快的仪器。HPLC已成为操作方便、准确、快速并能解决困难分离问题的强有力的分析手段。 适用范围广: 已知有机物中仅20%不经预先化学处理,可用GC分析;而其余80%有机物可用HPLC分析。HPLC适于分离生物、医学大分子和离子化合物,不稳定的天然产物,种类繁多的其它高分子及不稳定化合物。 第一课色谱法概述 色谱法是一种重要的分离分析方法,它是利用不同物质在两相中具有不同的分 配系数(或吸附系数、渗透性),当两相作相对运动时,这些物质在两相中进行多次反 复分配而实现分离。在色谱技术中,流动相为气体的叫气相色谱,流动相为液体的叫 液相色谱。固定相可以装在柱内,也可以做成薄层。前者叫柱色谱,后者叫薄层色谱。 根据色谱法原理制成的仪器叫色谱仪,目前,主要有气相色谱仪和液相色谱仪。 色谱法的创始人是俄国的植物学家茨维特。1905年,他将从植物色素提取的石油 醚提取液倒人一根装有碳酸钙的玻璃管顶端,然后用石油醚淋洗,结果使不同色素得 到分离,在管内显示出不同的色带,色谱一词也由此得名。这就是最初的色谱法。后 来,用色谱法分析的物质已极少为有色物质,但色谱一词仍沿用至今,在50年代,色 谱法有了很大的发展。1952年,詹姆斯和马丁以气体作为流动相分析了脂肪酸同系物 并提出了塔板理论。1956年范第姆特总结了前人的经验,提出了反映载气流速和柱效 关系的范笨姆特方程,建立了初步的色谱理论。同年,高莱(Golay)发明了毛细管拄, 以后又相继发明了各种检测器,使色谱技术更加完善。50年代末期,出现了气相色谱 和质谱联用的仪器,克服了气相色谱不适于定性的缺点。则年代,由于检测技术的提 高和高压泵的出现,高效液相色谱迅远发展,使得色谱法的应用范围大大扩展。目前 ,由于高效能的色谱往、高灵敏的检测器及微处理机的使用,使得色谱法已成为一种 分析速度快、灵敏度高、应用范围广的分析仪器。 在这里主要介绍气相色谱分析法。同时也适当介绍液相色谱法。气相色谱法的 基本理论和定性定量方法也适用于液相色谱法。其不同之处在液相色谱法中介绍。 第二课气相色谱仪 典型的气相色谱仪具有稳定流量的载气,将汽化的样品由汽化室 带入色谱柱,在色谱柱中不同组分得到分离,并先后从色谱柱中流出, 经过检测器和记录器,这些被分开的组分成为一个一个的色谱峰。色 谱仪通常由下列五个部分组成: 1.载气系统(包括气源和流量的调节与测量元件等) 2.进样系统(包括进样装置和汽化室两部分)

9012生物样品定量分析方法验证指导原则

中国药典2015年版 9012生物样品定置分析方法验证 指导原则 一、范围 准确测定生物基质(如全血、血清、血浆、尿)中的药物浓度,对于药物和制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性,或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此,必须完整地验证和记录应用的生物分析方法,以获得可靠的结果。 本指导原则提供生物分析方法验证的要求,也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求,以及何时可以使用部分验证或交叉验证,来替代完整验证。本指导原则二和三主要针对色谱分析方法,四针对配体结合分析方法。 生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。应该在相应的生物样品分析中遵守 G L P原则或GC P原则。 二、生物分析方法验证 (一)分析方法的完整验证 分析方法验证的主要目的是,证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。此外,方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。一般应对每个新分析方法和新分析物进行完整验证。当难于获得相同的基质时,可以采用适当基质替代,但要说明理由。 一个生物分析方法的主要特征包括:选择性、定量下限、响应函数和校正范围(标准曲线性能)、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。 有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物,也可能涉及一个母体药物及其代谢物,或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下,验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。 对照标准物质 在方法验证中,含有分析物对照标准物质的溶液将被加人到空白生物基质中。此外,色谱方法通常使用适当的内标。 应该从可追溯的来源获得对照标准物质。应该科学论证对照标准物质的适用性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度,并提供储存条件、失效日期和批号。对于内标,只要能证明其适用性即可,例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。 当在生物分析方法中使用质谱检测时,推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。它们必须具有足够高的同位素纯度,并且不发生同位素交换反应,以避免结果的偏差。 1.选择性 该分析方法应该能够区分目标分析物和内标与基质的内源性组分或样品中其他组分。应该使用至少6个受试者的适宜的空白基质来证明选择性(动物空白基质可以不同批次混 9012生物样品定量分析方法验证指导原则 合),它们被分别分析并评价干扰。当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应的20%,并低于内标响应的5%时,通常即可以接受0 应该考察药物代谢物、经样品预处理生成的分解产物以及可能的同服药物引起干扰的程度。在适当情况下,也应该评价代谢物在分析过程中回复转化为母体分析物的可能性。 2.残留 应该在方法建立中考察残留并使之最小。残留可能不影响准确度和精密度。应通过在注射高浓度样品或校正标样后,注射空白样品来估计残留。高浓度样品之后在空白样品中的残留应不超过定量下限的20%,并且不超过内标的5%。如果残留不可避免,应考虑特殊措施,在方法验证时检验并在试验样品分析时应用这些措施,以确保不影响准确度和精密度。这可能包括在高浓度样品后注射空白样品,然后分析下一个试验样品。 3.定量下限 定量下限是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度,具有可接受的准确度和精密度。定量下限是标准曲线的最低点,应适用于预期的浓度和试验目的。 4.标准曲线 应该在指定的浓度范围内评价仪器对分析物的响应,获得标准曲线。通过加人已知浓度的分析物(和内标)到空白基质中,制备各浓度的校正标样,其基质应该与目标试验样品基质相同。方法验证中研究的每种分析物和每一分析批,都应该有一条标准曲线。 在进行分析方法验证之前,最好应该了解预期的浓度范围。标准曲线范围应该尽量覆盖预期浓度范围,由定量下限和定量上限(校正标样的最髙浓度)来决定。该范围应该足够描述分析物的药动学。 应该使用至少6个校正浓度水平,不包括空白样品(不含分析物和内标的处理过的基质样品)和零浓度样品(含内标的处理过的基质〉。每个校正标样可以被多次处理和分析。 应该使用简单且足够描述仪器对分析物浓度响应的关系式。空白和零浓度样品结果不应参与计算标准曲线参数。 应该提交标准曲线参数,测定校正标样后回算得出的浓度应一并提交。在方法验证中,至少应该评价3条标准曲线。 校正标样回算的浓度一般应该在标示值的:t l5%以内,定量下限处应该在±20%内。至少75%校正标样,含最少6个有效浓度,应满足上述标准。如果某个校正标样结果不符合这些标准,应该拒绝这一标样,不含这一标样的标准曲线应被重新评价,包括回归分析^ 最好使用新鲜配制的样品建立标准曲线,但如果有稳定性数据支持,也可以使用预先配制并储存的校正标样。 5.准确度 分析方法的准确度描述该方法测得值与分析物标示浓度的接近程度,表示为:(测得值/真实值)x l00?^应采用加人已知 ? 363

气相色谱仪验证方案与报告

GC-安捷伦6820气相色谱仪A验证方 案 文件编码:02-0-F-P-02

目录1.概述 2.验证目的 3.验证依据及验证范围 4.验证工作小组 5.验证方案审批 5.1验证方案起草 5.2验证方案会签 5.3验证方案批准 5.4验证方案实施 6.验证内容 6.1安装确认 6.1.1 文件资料 6.1.2售后服务 6.1.3 消耗性备品备件 6.1.4安装检查 6.1.5安装确认结论及批准 6.2 运行确认 6.2.1 灵敏度及稳定性测试 6.2.2运行确认结论及批准 6.3性能确认 6.3.1 系统适用性试验: 6.3.2定量重复性试验 6.3.3性能确认结论及批准 7.验证结论 8.验证进度计划

1.概述 GC-安捷伦6820型气相色谱仪为安捷伦科技有限公司生产,采用氢火焰离子化检测器,色谱柱有填充柱和毛细管柱,可以进行恒温及程序升温操作,适用于定量和定性分析。我司在购买前对该产品的性能、价格、外观和售后服务进行了广泛地调查研究,在同类产品中价格适中、性能稳定、美观且售后服务好。2、验证目的 为了确保使用该仪器检测数据真实可靠,也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标,对该仪器进行验证。 2.验证依据及适用范围 参照国家技术监督局“实验室气相色谱仪检定规程”及中国药典2005版附录V E气相色谱法起草本验证方案。本验证方案适用于实验室GC-安捷伦6820 型气相色谱仪的验证。 4.验证工作小组 成立由组成的验证工作小组,担任验证工作小组组长。 5.验证方案审批 6.验证内容 6.1安装确认 6.1.1 文件资料

检查人日期 检查人日期 检查人日期6.1.4安装检查

气相色谱操作流程

气相色谱操作流程 开机:打开气阀,通氮气15分钟。 打开气相色谱的电源。 打开电脑,启动气相工作站。 选定一个要检测项目的分析方法,预热1小时。 关机:在6820气相色谱的面板上,将柱箱、前进样、前检测的温度关闭。 待三个温度降到50~80℃时,关闭气相色谱的电源。 关闭气源。 注意:在遇到特殊情况时,比如突遇停电,请将气相色谱的电源关闭,但不要把气源关闭。 (氮气能够保护在高温下的电子元件不受损害) 如何做好一个样品 第一步:点“样品”→“编辑”,在“样品名”中输入你要取的样品名,在“方法”的下拉箭头中选择一个你需要的方法。然后点击“注册样品”,样品就会注册进去。 第二步:点“仪器”→“样品项”,看一下仪器是否准备完毕,出现就绪,即可进样。“工作列表”是显示你注册的要做的样品。选中一个样品,右键点击,选择“把该样品从列表中删除”,即可取消该样品的操作。“状态”中显示的是仪器当前的状态,如有出现黄色标志,即该项尚未准备完毕。“实时绘图”是我们平时用来查看出峰情况的。一般在做实验时都使用“实时绘图”就可以了。 如何建立一个方法 第一步:点“方法”→“创建”,会跳出一个对话框,在“新方法名”输入你要取的方法名称。点击“确定” 第二步:点“采集”,第一个是阀参数,用不到的,不用动。第二个是进样口参数,输入合适的温度(最好不要超过300℃),第三个是柱箱参数,加热器的温度就是柱箱温度梯度中的初始温度,(如果建立不升温程序,输入所需要的温度和保持时间即可。如果建立一个升温程序,在梯度1中,输入每分钟要提升的温度,你所需要到达的温度,和需要保持的时间,把梯度2中的输入每分钟要提升的温度填为0,就不会执行下面的温度提升。)“平衡时间”一般可定在1~5分钟即可。第四个是检测器温度参数,输入合适的温度(最好不要超过300℃,同时,进样口温度要比检测器温度低),第四个后面的几个参数基本上不要修改。 第三步:点击“保存”。 如何在方法中加入标准曲线 第一步:选取一个方法,点“方法”→“分析”,点“积分”,(如果是做标线用的,最好不用修改)。 第二步:点“校准”,点“选项”,在“缺省校准曲线”中一般把“原点”中改成“忽略原点”(因为一般的空白都不是完全为零),在“样品缺省值”中把“单位”的选为ppb即可。 第三步:点“校准”,点“识别”,点“添加峰”:输入相应的化合物名称、保留时间即可。 第四步:点“校准”,点“校准”,点一次“添加峰”,再点N次“添加级数”(N为你所

醇类气相色谱法方法确认报告

GBZ/T 160.48-2007 工作场所空气有毒物质测定 醇类化合物--方法确认报告 一、线性 1 目的 确认GBZ/T 160.48-2007用气相色谱法对甲醇、异丙醇、正丁醇检测的线性范围。 2 过程 2.1 2.2 检验其标准曲线的相关系数(R)达到最低要求:R>0.999。 3 Results(结果)

4 结论 最终确认正己烷的线性范围达到R >0.999。 二、方法检出限MDL 1 目的 确认GBZ/T 160.48-2007方法中用气相色谱法测定甲醇、异丙醇、正丁醇的方法检出限。 2 Procedure(过程) 2.1 将样品空白打入气相色谱中并读取噪声读数。 2.2 计算检出限MDL (等于3倍噪声(单位时间)相对应的浓度)。 3 结果 4 结论 最终确认甲醇、异丙醇、正丁醇的方法检出限为0.54ug/mL 、0.51ug/mL 、0.38ug/mL 。 三、精密度 1 目的 确认GBZ/T 160.48-2007方法检测的精密度。 2 过程

2.1 在不同3天内各取7份空白活性炭管(不含待分析物的空白样品)到解吸瓶中。 2.2 2.3 按照GBZ/T 160.48-2007解吸样品。 2.4 用气相色谱仪分析样品中的甲醇、异丙醇、正丁醇浓度。 2.5 计算精密度(即相对标准偏差),相对标准偏差不大于10%。 3 结果

4 结论 最终确认高、中、低浓度的RSD均小于10%。 四、准确度 1 目的 确认GBZT 160.48-2007方法的准确度。 2 过程 2.1 在不同3天内各取7份空白活性炭管(不含待分析物的空白样品)到解吸瓶中。 2.2 往样品中加入标准溶液中间浓度甲醇:500mg/L,异丙醇:10000mg/L,正丁醇2000 mg/L。 2.3 按照GBZ/T 160.48-2007解吸样品。 2.4 用气相色谱仪分析样品中的甲醇、异丙醇、正丁醇浓度。 2.4 回收率在90%到110%之间。 3 结果 加标回收实验(引用精密度中间浓度测试数据),其结果如下: 4 结论 最终确认准确度符合要求。

抗药抗体免疫原性分析方法学验证指导原则(中文版)

抗药抗体免疫原性分析方法学验证指导原则 摘要: 几乎所有的生物制药产品都会引起一定的抗药抗体(anti-drug antibody,ADA)反应,抗药抗体反应可能会降低药物疗效或导致严重的不良反应。在人体内,抗药抗体通常不会引起明显的临床反应。但是对于某些治疗性蛋白质,抗药抗体反应能引起各种临床的不良反应,包括温和事件及严重不良事件。临床前研究表明,抗药抗体能对药物暴露、药物毒性作用、药物代谢动力学、药物效应动力学等造成影响。因此治疗性蛋白质的免疫原性引起了临床医生、药企及监管机构的注意。为了评估生物药物分子的免疫原性,以及将实验结果与临床事件联系起来,在临床前研究和临床研究中,很有必要开发可靠的能够有效评估抗药抗体反应的实验方法。这里方法学验证显得尤为重要,并且方法学验证是药物上市申请必不可少的。现行的监管文件对于免疫分析方法的验证的指导相当有限,特别是缺乏有关免疫原性分析方法的验证的指导。因此,本文对抗药抗体免疫分析方法的验证提供科学的建议。在现有的关于生物分析的规范性文件的基础上加入独特的性能验证。笔者建议采用实验和统计学的方法进行免疫分析的方法学验证。这些建议被视为最佳的例子,旨在促进整个医药行业形成一个更加统一的抗体检测方法。 1.简介: 生物制药产品包括氨基酸聚合物、碳水化合物或核酸,一般通过人细胞系、哺乳动物细胞或细菌进行表达,比常规的小分子药物更大(一般大于1~3KD)。由于以上特性,生物制药产品引起免疫反应的潜力更大。生物制药的免疫原性与产品的内在因素(种属特异性表位、外源性、糖基化程度、聚合或变性程度、杂质和制剂)、外在因素(给药途径、慢性或急性给药、药代动力学及内源性当量)、患者因素(自身免疫性疾病、免疫抑制、和替代疗法)相关。 抗药抗体反应可能会导致严重的临床症状,包括过敏、自身免疫和不同的药代动力学特征(例如,药物中和、生物分布异常和药物清除率增强等均可能会使

气相色谱法的应用

气相色谱法的应用 气相色谱法在石油工业中的应用 ⑴石油气的分析石油气(C1~C4)的成分分析,目前都采用气相色谱法。以25%丁酮酸乙酯为固定液,6201担体,柱长12.15m,内径4mm,柱温12℃,氢为载气,流速25ml/nin,热导池电桥电流120~150mA, C1~C4各组分得较好的分离见图10。图10 石油在丁酮酸乙酯柱上的分离1-空气;2-乙烷;3-乙烯;4-二氧化碳;5-丙烷;6-丙烯;7-异丁烷8-乙炔;9-正丁烷;10-正丁烯;11-异丁烯12- 反丁烯-2,3;13- 顺丁烯-2,4;14-丁二烯北京化工研究院近期研究出用多孔氧化铝微球色谱固定相,对C1~C4烃分离很好,柱长2m,内径2mm,内填充0.3%阿皮松L,改性?-Al2O3,微球120~130目;柱温85℃,氮为载气,流速15ml/min,氢火焰离子化检测器。分离谱见图11. 此外吉林化学工业公司研究院还研制了石墨化炭黑和改性石墨化炭黑色谱固定相分离C1~C4烃。⑵石油馏的的分析气相色谱法分析石油馏分的效能与分析速度是精密分馏等化学方法所不能比拟的。如一根60m长、内径0.17mm的弹性石英毛细管柱,内涂OV-101,在程序升温条件下(柱温40~90℃)进样0.6?1,分流比150:1,分析了65~165℃大港直馏气油。用一根30m长、内径0.25mm 毛细管柱,涂PEG1500,柱温80℃,汽化100℃,氮为载气,分流比100:1,汽油中微量芳香烃得到很好的分离(见图12)。图11 低级烃类的气相色谱分离图1-CH4;2-C2H6;3-C2 H4;4-C3 H8;5-C2 H2;6-C8 H6;7-iC4 H10;8-nC4 H10;9-丙二烯;10-丁烯-1;11-iC5 H12 12--i C4 H6;13- 反丁烯-2;14- 顺丁烯-2;15-丁二烯16-丙炔图12汽微量芳烃的油中色谱分离1-苯;2-甲苯;3-乙苯;4-对二甲苯;5-一间二甲苯; 6-邻二甲苯 气相色谱法在环境科学中的应用 我国在环境科学研究、监督检测中,广泛使用气相色谱法测定大气和水中痕量胡害物质。 ⑴大气中微量-氧化碳的分析 汽车尾气中含有一氧化碳,工业锅炉和家用煤炉燃烧不完全放出一氧化碳,都污染环境。大气中痕量一氧化碳常用转化法没定。国产SP-2307色谱仪具有转化装置,使CO转化为CH4。CO+3H2Ni催化/380℃→CH4+H2O 色谱柱固定相可用5A筛分子,GDX-104,Porpak Q等,以分子筛为例,13X或5A分子筛60~80目(先经500~550℃活化2小时)以氢气载气, 57ml/nin;氢焰检测器;空气400ml/min;尾吹氮气80ml/min。柱长2m,内径2mm,柱温36℃,检测室130℃,转化炉380v;进样量1mm。可测大气中ppm级一氧化碳。

PE气相色谱仪验证方案要点

PE Clarus680型气相色谱仪确认方案 2013年11月

目录 1 方案审批................................................................ 11.1 确认方案起草.......................................................... 11. 2 确认方案审核.......................................................... 1 1.3 确认方案批准.......................................................... 1 2 确认时间进度计划........................................................ 2 3 概述.................................................................... 2 3.1 设备基本情况.......................................................... 2 4 确认目的................................................................ 2 5 确认标准和依据.......................................................... 2 6 确认实施人员及有关部门职责.............................................. 2 7 确认内容、认可标准及检查方法............................................ 37.1 设计确认.............................................................. 37.2 安装确认.............................................................. 47.3 运行确认.............................................................. 4 7.4 性能确认.............................................................. 5 8 再确认.................................................................. 6 9 文件要求................................................................ 6 10 附录................................................................... 6 11 记录................................................................... 6

气相色谱仪确认方案

气相色谱仪确认方案 1.适用范围及目的 本方案适用于高效液相色谱仪的验证。通过验证确认气相色谱仪性能能满足质量控制部日常检测需要,并能保证检测数据的准确度。 2.职责 仪器设备验证小组:负责精密仪器确认方案、确认报告起草,并组织实施。 验证委员会:负责审核确认方案、验证或确认报告。 验证管理员:负责确认工作的管理,协调确认工作。 质量受权人:批准确认方案、确认报告。 3.内容 3.1.概述 GC-2010PLUS型:新购,为日本岛津公司生产。 其它新增仪器:若参数与该验证方案一致,则可直接采用该验证方案进行验证。 气相色谱仪由气路系统、进样系统、色谱柱、检测器、控制程序(色谱工作站)及电脑组成。被测物质随载气进入色谱柱,根据被测成分的不同分配性质,在柱内形成分离的谱带,然后在载气的携带下先后进入检测器,转换成相应的输出信号,并记录成色谱图。 根据保留时间进行定性分析,根据峰高或峰面积进行定量分析。该仪器主要用于各种原辅料、中间体、成品的检测。本方案依据GC-2010PLUS型、《验证管理程序》、《检验方法验证SOP》。 3.2.预确认 3.2.1.目的 根据GMP要求,确定气相色谱仪各项参数符合检测需要。 3.2.2.确认项目及标准 3.2.2.1.仪器主要技术指标确认 气源:载气纯度%至% 柱温箱:温度范围(4~400℃) 动态控温精度:±0.1℃ 仪器升降温速率:大于15℃(4至380℃) 程序控温梯度:大于8阶 进样口与检测器:温度范围(室温~400℃) FID检测器:离子化率应≥0.01c/g 其它技术指标:应符合《中国药典》2010版要求 3.2.2.2.价格及售后:供货价格应合理,并能够提供及时、优质的售后服务。

气相色谱操作规范流程

安捷伦7890B气相色谱仪-GC-001操作规程 1.仪器分析原理 气相色谱仪是以气体作为流动相(载气),当样品由微量注射器“注射”进入进样器,在衬管中快速挥发后被载气携带进入填充柱或毛细管色谱柱。由于样品中各组份在色谱柱中的流动相(气相)和固定相(液相或固相)间分配或吸附系数的差异,在载气的冲洗下,各组份在两相间作反复多次分配,使各组份在柱中得到分离,然后用接在柱后的检测器根据组份的物理化学特性,将各组份按顺序检测出来。 图1 MDI-100产品异构体色谱图 2.仪器组成及各部件作用 2.1气相色谱仪主要由载气系统、进样系统、分离系统(色谱柱系统)、检测系统、记录系统等五大系统组成。各系统的作用分别为: 载气系统――提供洁净的具有一定流速的载气(流动相)。 进样系统――样品在此气化后进入到色谱柱。 分离系统――分离样品中的各组分。 检测系统――将分离后由色谱柱流出的组分的浓度或质量转变为相应的电信号。 记录系统――将检测到的电信号经处理后记录、并显示。

2.2各部件介绍: 图2 Agilent 7890B GC-001 的前视图 2.2.1进样口 进样口是将样品注射到GC 中的位置。Agilent 7890B GC 最多可以有两个进样口,标为Front Inlet(前进样口)和Back Inlet(后进样口)。GC-001前后进样口为分流/ 不分流进样口 图3 Agilent 7890B GC-001 的前后进样口 2.2.2自动进样器

带有样品盘的Agilent 7683B 自动液体进样器将会自动处理液体样品。Agilent 7890B GC 最多可以有两个自动进样器,标为Front Injector(前进样器)和Back Injector (后进样器)。 2.2.3色谱柱和柱箱 GC 色谱柱位于温度控制柱箱的内部。通常,色谱柱的一端连接进样口,另一端连接检测器。色谱柱因长度、直径和内涂层而异。每个色谱柱被设计为可以处理不同化合物。色谱柱和柱箱的用途是将注入的样品在经过色谱柱时分离成各种化合物。要协助此过程,可以对GC 进行编程,以加速样品流过色谱柱。GC-001前后色谱柱均采用HP-5色谱柱 图4 Agilent 7890B GC-001 柱箱视图 2.2.4检测器 当化合物流出色谱柱时,检测器用于测定其是否存在。当每种化合物进入检测器时,会产生与已检测到的化合物的量成比例的电子信号。此信号通常会被发送到数据分析系统-如EZchrome OpenLab -信号是以色谱图上峰的形式出现在系统中。Agilent 7890B GC-001容纳两个检测器,分别标为Front Det (前检测器)、Back Det (后检测器)。前后检测器均为FID检测器。

气相色谱验证性实验

实验二 甲醇、异丙醇与正丁醇的气相色谱分析 一、实验目的 1. 了解气相色谱仪的基本结构和工作原理. 2. 学习归一化法定量的基本原理和方法. 3. 掌握气相色谱操作的基本要求. 二、实验原理 1. 纯物质保留时间定性分析 利用同一种物质在相同的色谱条件下应具有相同的保留时间的特点,采用纯物质定性法,对混合物中的甲醇、异丙醇与正丁醇进行定性,以确定混合物样品中甲醇、异丙醇与正丁醇的存在与否,并得出它们相应的出峰顺序。 2. 面积归一化法定量分析 应用归一化法进行色谱定量分析,要求试样中各组分都必须全部流出并得到完全分离,根据色谱图中各色谱峰的数据,可按下式计算各组分的含量: 100%1?∑==n i fiAi fiAi ci 本实验以峰面积A i 为测定参数,假定fi 恒等于1,利用FL9500色谱工作站对进样后所得到的各色谱峰进行直接定量,并打印出样品组分的色谱分析结果报告单。 三、仪器与试剂 1. 福立气相色谱仪 2. 微量注射器 0.5 uL 3. 高纯氮、高纯氢、低噪声空气净化源 4. 甲醇(AR );异丙醇(AR );正丁醇(AR ); 甲醇、异丙醇与正丁醇的混合液

四、色谱条件 1. 固定液:聚甲基硅烷(非极性);色谱柱:毛细管0.32×30 mm/m 2. 柱温:80 ℃;气化室温度:150 ℃;检测器温度:150 ℃ 3. 载气:氮气;检测器:氢火焰离子化检测器(FID) 4. 进样量:0.1 uL 五、实验步骤 1 . 开N2钢瓶:⑴逆时针转动减压阀手柄至放松位置,此时减压阀处于关闭状态. ⑵逆时针打开钢瓶上的总阀门,并记录瓶中余气压力. ⑶顺时针旋紧减压阀,直至分压值达所需压力0.5 Mpa. 2. 接通电源,开净化器,三个全打开. 3. 开色谱仪上的两电源,并调毛细管柱前压(主机顶上表压力)0.06 Mpa. 4. 设置参数,选择优化条件:1.柱温(柱箱键). 2. 汽化室(辅助I). 3. FID(检测器). 4. 其它参数(参数键,通过上行和下行调出极性,量程等参数). 5. 待所设参数达到设置条件时(显示键查看),开H2钢瓶. H2钢瓶的开法:⑴.逆时针转动减压阀手柄至放松位置. ⑵.逆时针打开钢瓶上的总阀门. ⑶.逆时针打开减压阀左边的小通道(使用阀). ⑷. 顺时针旋紧减压阀直至分压值达所需压力0.2 Mpa. 6. 调色谱仪主板上H2表Ⅱ的压力为0.1 Mpa. 7. 开低噪声空气净化源,调色谱仪主板上空气压力为0.03 Mpa. 8. 点火,若点火困难,可先调高氢气至0.15 Mpa,点火后调回至0.1 Mpa. 9. 打开电脑,点桌面上的FL9500色谱工作站图标进入系统,点通道1或2,在菜单样品设置中点新建,输入样品名及各种信息.点下一步,点下一步选择定量方法等,点下一步,点下一步,点下一步,点完成,填入仪器条件,点确定. 10. 待基线平直后,即可进样,进样后按工作站的通道A或B上的按时器或在工作界面上 点击开始按钮即进行进样分析。(注意:进样前一定要将微量注射器用相应试剂清洗干净,清洗干净的微量注射器应该专用,不能与准备进样别的试剂的微量注射器混用). 11. 采样结束后点停止,若想处理色谱图点进样后处理,点转入再处理,打印结果,待所有 样品采样结束后,关色谱程序窗,关电脑.

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