茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量方法存在问题的探讨

茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量方法存在问题的探讨

周国兰　何　萍　郑文莉

(贵州省茶叶研究所,湄潭　564100)

氨基酸是茶叶中的主要成分,茶叶中氨基酸与茶叶嫩度有密切关系,它对茶汤的滋味、色泽也有较明显的影响,是形成茶叶香气和鲜爽度的重要成分。茶叶中有20多种游离氨基酸,其中茶氨酸占氨基酸总量的50%以上。

目前,国家标准规定测定茶游离氨基酸总量采用G B/T8314《茶　游离氨酸总量测定》,即茚三酮比色法。由于该标准存在较多问题,导致各分析室对同一样品的测定结果有很大差异,为此笔者查找相关文献资料,咨询同行专家,对该标准中的疑点进行了反复的试验研究,并对疑点进行了修正,旨在使各分析室测定数据可比性强,达到方法统一、数据一致的目的。

1　G B/T8314标准的引用

1.1　游离氨基酸定义

游离氨基酸:茶叶水浸出物中呈游离状态存在的α-氨基的有机酸。

1.2　测定原理

α2氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度计在特定的波长下测定其含量。

1.3　仪器和用具

实验室常规仪器及TG-328A分析天平(感量0.0001g)、TU1901紫外分光光度计、PHS-2C型精密酸度计

1.4　试剂和溶液

(1)磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)的配制

1/15mol/L磷酸氢二钠溶液:称取23.877g磷酸氢二钠,加水溶解后定容至1L,得a溶液。

1/15mol/L磷酸二氢钾:称取9.073g磷酸二氢钾,加水溶解后定容至1L,得b溶液。

取a溶液95mL和b溶液5mL,混合均匀。

(2)茚三酮溶液:2%,称取茚三酮(纯度不低于99%)2g,加50mL水和80m g氯化亚锡搅拌均匀。分次加少量水溶解,放在暗处,静置,过滤后加水定容至L。2　使用国家标准方法时存在的问题

2.1　不同实验室采用同一方法测定结果存在很大

差异

表1为不同实验室采用G B/T8314方法测定的结果。

表1　不同实验室采用标准方法对茶样的分析结果

样品编号

游离氨基酸总量测定结果/%

实验室1实验室2

相对误差3

/% 113.87.880

29.5 4.8100

39.0 5.090

48.4 4.590

59.2 5.370

　3注:相对误差以实验室2的测定结果为参比。

2.2　没有严格执行国家标准

因市场上很难购买到茶氨酸纯品,只能用谷氨酸代替。按照标准曾先后多次做过谷氨酸标准曲线,但都以标准曲线无梯度而无法对应计算样品的结果而告终。因此人们长期以来习惯用公式:游离氨基酸总量(%)=7.5E Mm来计算结果,其中,E 为样品测定的吸光度;M为试样量;m为试样干物率%。于是形成了样品测定采用的是国家标准步骤,而样品的结果计算则没有采用国家标准的现象。

2.3　采用国家标准方法绘制标准曲线时出现的问

题

国家标准规定标准曲线的绘制:称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99%)溶于100mL水中作为母液,准确吸取5mL母液,加水定容至50mL 作为工作液。分别吸取0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL氨基酸工作液于一组25mL容量瓶中,各加水4 mL、茚三酮溶液0.5mL和缓冲液2mL,在沸水浴中加热15m in,冷却后加水定容至25mL,放置10m in 后,用5mm比色杯在570nm处测定吸光度,将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸的浓度绘制标准曲线。实际测试过程中,按照此标准绘制不出标准曲线,因此笔者对标准曲线的绘制方法提出以下 收稿日期262

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周国兰,等:茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量方法存在问题的探讨

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100m:2009020