乳酸菌

乳酸菌在毛皮养殖业中的作用

关键词：乳酸菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、有益菌、毛皮动物、水貂、貂、狐狸、

银狐、蓝狐、貉、微生态、益生素、中药益生素。

乳酸菌以及微生态制剂在畜牧养殖业以及医药行业已经应用很长时间了，（1857年法国科学家发现乳酸菌--1979年中国正常菌群学组成立）在毛皮养殖

业应用是近几年才出现的，现在大部分养殖户都是用的干粉状态的微生物制剂，

也取得了很好的经济效益。哈尔滨中科生物工程有限公司专注活性乳酸菌以及中

药活性乳酸菌的生产和研发，那么活菌制剂在毛皮动物养殖业中的作用在这里我

们共同分享一下，活性乳酸菌对毛皮动物的消化吸收、免疫系统、生产等方面的

影响。

乳酸菌

乳酸菌（Lactobacillus）是发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢（芽孢——特殊的休眠构造在一定条件下，细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。）、革兰氏染色阳性细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。是一种存在于动物体内的益生菌。

这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是动物体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于动物体的消化道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康有着非常密切的直接关系。

一般来说，我们正在使用的乳酸菌从大的方面可分为6个属：棍状的乳酸杆菌属、球状的链球菌属、双歧杆菌属、嗜酸乳杆菌属、小球菌属、乳球菌属。

大量研究表明，乳酸菌能够调节机体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提

高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌生长

繁殖和腐败产物的产生，制造营养物质，刺激组织发育，从而对机体的营养状态、

生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和

突然的应急反应等产生作用。由此可见，乳酸菌的生理功能与机体的生命活动息

息相关。可以说，如果乳酸菌停止生长，人和动物就很难健康生存。也正因为如

此，乳酸菌被广泛用于轻工业、食品、医药及饲料工业等许多行业上。

养殖业的应用：饲料中添加乳酸菌，能提高蛋雏鸡成活率和日增重，可使

断乳后仔犬、幼畜、仔貂、仔狐体重显著增加，因此显著提高饲料利用率。不同

的研究或者接种不同类型的乳酸菌有不同的结果。一般接种同型乳酸菌（如乳酸

片球菌；植物胚芽乳杆菌；酪蛋白乳杆菌；粪链球菌；戊糖片球菌）可降低青贮

饲料pH值，增加乳酸含量，降低丁酸含量；接种异型乳酸菌（如布氏乳杆菌；

发酵乳杆菌）则提高青贮饲料pH，增加乙酸的生成。乳酸菌常用于生物防腐，

研究表明，用乳酸菌发酵液保鲜肉品，可以抑制肉品中的致病菌和腐败菌的生长，

保存风味物质，不改变食品组织状态，而且在正常冷却储存条件下，也不影响食

品的感官特性。

乳酸菌发酵原理是在酶的催化作用下将葡萄糖转化为乳酸，同时放出能量提供给

其自身生命活动。

作用机理：乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能。大量研究资料表明，乳酸菌能促进动物生长，调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡，清除肠道垃圾，从而改善胃肠道功能，增强食欲；提高食物消化率和生物效价；降低血清胆固醇，控制内毒素；抑制肠道内腐败菌生长：提高机体免疫力等。

乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、酸菌素等物质具有特殊生理功能，可刺激组织发育，对机体的营养状态、生理功能、免疫反应和应激反应等产生作用。乳酸菌的生物活性对狐、貉、貂的影响：

1.提供营养物质，促进机体生长，根据解剖发现水貂、狐、貉的消化道短而细，水貂食物通过消化道的时间1h45min--2h30min，狐貉的时间稍长一些，导致食物在消化道中消化过程非常迅速，难消化的植物性饲料消化不彻底，导致饲料利用率低。毛皮动物的消化系统决定了他们的饲料必须以容易消化的高蛋白的动物性饲料为主，动物性饲料蛋白含量高，且容易被消化酶分解，机体吸收利用的可能性大，植物蛋白由于植物纤维素的大量包围，蛋白与酶的接触面积较差，通常消化率低。乳酸菌在代谢过程中可分泌蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶等几十种胞外酶进入消化道，这些酶可水解植物细胞壁的纤维素、半纤维素、果胶质等，使细胞壁破裂，有利于有效成分的溶出，使植物性饲料的利用大大加强。

乳酸菌如果能在体内正常发挥代谢活性，就能直接为宿主提供可利用的氨基酸。嗜乳酸杆菌的工作是协助蛋白质消化，在此作用中将产生乳酸、过氧化氢、酵素、抗生素（抗生素是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。目前已知天然抗生素不下万种）、及B族维生素（维生素B包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、烟酸、泛酸、叶酸、生物素等）和维生素K等；

必需氨基酸：（必需氨基酸（essential amino acid）：指动物体体内不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。）氨基酸：在自然界中共有300多种氨基酸。毛皮动物必需的氨基酸有常规的12种，水貂约有11种，即：賴氨酸（能促进机体发育、增强免疫功能，促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化）、色氨酸（促进胃液及胰液的产生）、组氨酸（用于治疗贫血，风湿性关节炎等的药物。）、苯丙氨酸（参与消除肾及膀胱功能的损耗；）、亮氨酸（作用平衡异亮氨酸；）、异亮氨酸（参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺）、苏氨酸（有转变某些氨基酸达

到平衡的功能）、蛋氨酸（参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能）、精氨酸（精氨酸与脱氧胆酸制成的复合制剂（明诺芬）是主治梅毒、病毒性黄疸等病的有效药物）、胱氨酸（能促进细胞氧化还原功能，使肝脏功能旺盛，并能中和毒素、促进白细胞增生、阻止病原菌发育）。其中蛋氨酸和胱氨酸是含硫氨基酸对毛皮的性状有直接的作用含硫氨基酸共有蛋氨酸（又名甲硫氨酸）、半胱氨酸和胱氨酸三种，蛋氨酸可转变为半胱氨酸和胱氨酸，半胱氨酸和胱氨酸在一定条件下也可以相互转化，但它们在毛皮动物体内都不能转化为蛋氨酸。水貂被毛所含蛋白质占总储存蛋白质7%～12%，其中60%为胱氨酸。

蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。同样蛋白质也乳酸菌是维持生命的主要物质，乳酸菌利用消化道内的氨、硫化氢、胺、酚、靛基质、细菌毒素、亚硝基化合物、环氧化物、次级胆汁酸合成氨基酸供自己和机体使用。乳酸菌也是有寿命的，死掉的乳酸菌菌体崩解，为宿主提供氨基酸和其他营养物质。这就使体内的废物变成了可利用的氨基酸，同时也也使体内的氨、硫化氢、胺、酚、靛基质、细菌毒素、致癌物（亚硝基化合物、环氧化物、次级胆汁酸）等有害物质的量减少。

可见乳酸菌在平衡氨基酸，调节体内氮平衡是有巨大作用的，对被毛的正常披备起一定作用的。

乳酸菌代谢过程中可以产生维生素B1.B2.B6.B12、叶酸、尼克酸、维生素k 及丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和苏氨酸等机体必需的营养物质，对于机体具有营养作用。

另外乳酸菌在酵解过程中产生大量的短链脂肪酸、（短链脂肪酸包括甲酸，乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸，被后肠迅速吸收后，既储存了能量又降低了渗透压，并且短链脂肪酸对于维持大肠的正常功能和结肠上皮细胞的形态和功能具有重要作用。短链脂肪酸还可促进钠的吸收，丁酸在这方面的作用比乙酸和丙酸更强并且丁酸可增加乳酸杆菌的产量而减少大肠杆菌的数量。）抗氧化剂和各种维生素（维生素B族和K等)，直接提供给宿主使用。

乳酸菌还能通过抑制某些维生素分解菌来保障维生素的供应。貂没有盲肠，狐貉有盲肠，导致微生物在体内合成B族维生素的能力没有狐貉强。盲肠的主要作用就是消化粗纤维，合成B族维生素。说道维生素了，不得不提一下维生素H。每年都有维生素H缺乏给养殖户带来大量的经济损失。维生素H属于B族维生素，有肠道内乳酸菌合成提供。

维生素H又称生物素。毛皮动物维生素H缺乏或不足，引起表皮角化，被毛卷起及自身剪毛为主要特征的维生素缺乏症。发病原因是长期生喂禽蛋；长期在饲料中添加抗生素，破坏了场内细菌群（维生素H是肠内乳酸菌制造而成）大量食用生蛋白可阻碍生物素的吸收导致生物素缺乏，如脱毛、剪毛、体重减轻、皮炎等。生物素在脂肪合成、糖质新生等生化反应途径中扮演重要角色。

乳酸菌在肠道内发酵后可产生乳酸和醋酸，能提高钙、磷、铁的利用率，促进铁和维生素D的吸收，进而达到为宿主提供必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用。乳酸菌发酵乳糖产生半乳糖，是构成脑神经系统中脑苷脂的成分，与幼兽出生后脑的迅速生长有密切关系。

此外，乳酸菌产生的酸性代谢产物使肠道环境偏酸性，而一般消化酶的最适PH值为偏酸性(淀粉酶6.5、糖化酶4．4)，这样就有利于营养素的消化吸收。有机酸的产生还可加强肠道的蠕动和分泌，也可促进消化吸收养分。

可见乳酸菌，活性乳酸菌对毛皮动物水溶性维生素（B族维生素）和维生素K缺乏性疾病有预防和治疗的作用，特别是生物素的缺乏。对氨基酸不平衡有调理平衡作用，增加含硫氨基酸的吸收。对钙磷代谢性疾病有预防和辅助治疗的作用。

2．改善胃肠道功能，维持肠道菌群平衡动物的整个消化道在正常情况下都寄生有大量微生物。在肠道内栖息着数百种的细菌，其数量超过百万亿个。其中对动物健康有益的叫益生菌，以乳酸菌（乳酸杆菌属、双歧杆菌属、嗜酸乳杆菌属、乳球菌属等）屎肠球菌等为代表，对人体健康有害的叫有害菌，以肠杆菌（埃希、志贺和沙门）、产气荚膜梭状芽胞杆菌等为代表。益生菌是一个庞大的菌群，有害菌也是一个不小的菌群，当益生菌占优势时（占总数的80%以上），机体则保持健康状态，否则处于亚健康或非健康状态。

微生物群的平衡，对机体的健康十分重要，而乳酸菌就能够调节这种微生态平衡，保障宿主正常生理状态。乳酸菌是肠道常在菌（常生菌），动物服用乳酸菌后，可以改变肠道内环境，抑制有害菌繁殖，调整胃肠道菌群平衡。乳酸菌通过粘附素与肠粘膜细胞紧密结合，在肠粘膜表面定植占位，成为生理屏障的主要组成部分，从而达到恢复宿主抵抗力，修复肠道菌群屏障、治愈肠道疾病的作用。如果这个屏障遭到抗生素或其他因素的破坏，宿土丧失了对外来菌抵抗力，会使具有耐药性的肠内菌异常增殖而取代优势菌的位置，造成肠道内微生态平衡的失调。乳酸菌可以分泌肠黏膜细胞的重要营养物质酪酸，从而达到修复肠黏膜，消除肠道炎症，营养肠道的目的。

乳酸菌分解的乳酸还是肠黏膜的营养物质，有修复肠黏膜、消除炎症的功能。同时凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)能促进肠道有益菌生长，分泌抗菌凝固

素，抑制肠道内变形杆菌、痢疾杆菌等肠道有害菌，将氨、胺、粪臭素、吲哚等肠道毒素的产生减少50%以上，消除肠道毒素对肠的麻痹作用，避免肠道毒素吸收入血对肝、脑、皮肤等造成损伤。同时凝结芽孢杆菌在肠道内产生促进营养物质消化吸收的酶以及多种维生素类营养物质。

乳酸菌的这一功能在毛皮动物养殖业对于卡他性胃肠炎，急性胃肠炎、仔兽消化不良，幼兽胃肠炎和消化道细菌性传染病（巴氏杆菌病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、魏氏梭菌病等）以及加德纳氏菌病有极强的防治作用。

3．改善免疫能力。乳酸菌具有广泛的免疫原性，一方面能明显激活巨噬细胞的吞噬作用，另一方面由于它能在肠道定植，相当于天然自动免疫。它们还能刺激腹膜巨噬细胞、诱导产生干扰素、促进细胞分裂、产生抗体（可以激活全身血液中的免疫细胞，另外，它们可以促进机体产生免疫球蛋白IgA，这种粘膜抗体是分布在全身的，当然呼吸道和胃肠道中最多。）及促进细胞免疫等，所以能增强机体的非特异性和特异性免疫反应，提高机体的抗病能力。口服乳酸菌后，对巨璇细胞的半乳糖甙酶活性、巨噬细胞的吞噬活性等具有显著的激活和促进作用。当异物侵入机体时，免疫细胞被乳酸菌激活，增强了机体对异物产生抗体的作用。乳酸菌之所以具有有激机体产生抗体的作用，是由于菌体通过淋巴结、粘膜刺激淋巴细胞接受刺激的淋巴细胞再通过肠系膜淋巴结(MIN)循环到血流中，并分布全身，从而调节机体的免疫应笞。关于乳酸菌的免疫特性，我们公司曹亚斌研究员已有成果来证明，这个链接可以看到《乳酸菌活菌制剂对动物免疫调节作用研究进展》

https://www.wendangku.net/doc/cf5348253.html,/view/ef46b37f168884868762d663.html

有兴趣可以看一下，里面阐述乳酸菌只有活性乳酸菌，在肠内存在至少48 h～72 h 才能发挥作用，这是所有颗粒性抗原要诱导肠内免疫促进作用所必须的。这一结果提示了对于每一种动物来说每天定量的活性乳

酸菌摄入对于其发挥免疫作用是非常重要的.

乳酸菌可产生有机酸、游离脂肪酸、过氧化氢、细菌素抑制其它有害菌的生长；通过“生物夺氧”使需氧型致病菌大幅度下降，益生菌能够定殖于粘膜、皮肤等表面或细胞之间形成生物屏障，这些屏障可以阻止病原微生物的定殖，起着占位、争夺营养、互利共生或拮抗作用。并可以刺激机体的非特异性免疫功能，提高自然杀伤（NK）细胞的活性，增强肠道免疫球蛋白IgA的分泌，改善肠道的屏障功能。乳酸菌还可以酸化泌尿生殖道的作用。它可以通过降低pH值来抑制有害细菌的生长。还可以通过与有害细菌竞争空间和资源而遏制它们。

免疫力增强了，干扰素和IgA是预防和治疗病毒性疾病和细菌性疾病的天然良药，体质增强了，疾病自然不来了。IgA是呼吸道和消化道黏膜天然屏障以外的又一屏障，有效预防了经呼吸道和消化道病毒性疾病（犬瘟热、病毒性肠炎、阿留申、狂犬病、传染性脑炎等）和细菌性疾病（菌痢、传染性肺炎等）

简单提一下自咬病，经过这几年使用乳酸菌养殖户的观察，使用乳酸菌后自咬病发病率降低了。2006年钱国成、魏海军、刘晓颖编著的《新编毛皮动物疾病防治》认为自咬病和病毒感染有关，认为是慢性病毒或缺陷病毒引起的隐形传染病。这与乳酸菌

的使用提高机体的免疫力发病率低相呼应了。

4．抗菌作用研究资料表明：乳酸菌对一些腐败菌和低温细菌有较好的抑制作用。可用于防治腹泻、下痢、肠炎、便秘和由于肠道功能紊乱引起的多种疾病以及皮肤炎症。其抗菌机制主要表现在以下几个方面：①产生的乳酸等有机酸能显著降低环境pH值和Eh(氧化还原电位)值，使肠内处于酸性环境，对于致病菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球蔺等有拮抗作用；②产生的过氧化氢能够激活牛乳中的“过氧化氢酶-硫氰酸”系统，抑制和杀灭革兰氏阴性菌、过氧化氢酶阳性细菌如假单胞菌属、大肠杆菌类和沙门氏菌属等；③产生类似细菌素的细小蛋白质或肽类（抗菌肽），如各种乳酸杆菌素，对葡萄球菌、梭状芽孢杆阔以及沙门氏菌和志贺氏菌有拮抗作用。另外，双歧杆菌等还可将结合的胆酸分解为游离的肌酸，后者对细菌的抑制作用比前者更强。

同样是对细菌性消化道的防治起作用，特别是水貂的痢疾有治疗作用（痢疾杆菌属于志贺氏菌属），乳酸菌产生的细菌素对它有拮抗作用。

5.动物自身及许多致病菌都会产生有毒物质，如毒性胺、氨、细菌毒素、氨自由基等。乳酸菌中有硝化作用的硝化菌，可阻止毒性胺和氨的合成，可净化动物肠道微生态环境。减少动物粪便中的氨的排放量，降低氨气浓度，减少污染。降低对呼吸道的刺激，降低肺炎的发生。经过几年的应用，乳酸菌的降低养殖区域的氨含量，净化空气，减少污染是有目共睹的，养殖户认可的。

由此可见，乳酸菌在毛皮动物的养殖中降低饲料成本，减少疾病发生，减少用药，改善环境等方面有巨大作用的。接下来就是应用的问题了，众多研究表明，益生菌发挥作用，首先要保持活性，其次要保证有效数量。菌株决定功效。所有乳酸菌都是按属、种、株三个层次划分的，乳酸菌菌的功效是以“菌株”为准的。我公司专注活菌50年，“中药微生态制剂”的基础研究历时十多个春秋，科学选育菌株及中药配伍，并经过大量的生产实验，经过各学科专家的认证。并且乳酸菌应用要保证乳酸菌的活性，活性是关键。

前面已经说了乳酸菌是一类无芽孢的细菌，在脱离适宜的环境很快就灭活了或者活性低下，保证不了活菌在体内发挥作用，只能是死菌在体内发挥低弱的作用，与活菌没有可比性。经过烘干、冻干、包被等技术制成的死菌制剂，含有大量的死的菌体、代谢产物、休眠的芽孢等，性状为干燥粉末，产品效能大打折扣。

我们公司的产品就是活菌制剂，分为固态发酵和液态发酵：

固态发酵：性状为潮湿粉末，以保持有益菌活性。根据载体不同可分为中药发酵微生态饲料添加剂（中药益生素、狐康源、六合一预混料）发酵蛋白饲料（大

豆益维蛋白）。

液态发酵：采用全自动乳酸菌发酵系统，采用优质菌株，农户自发酵，以保持有益菌活性，保证产品使用效果。（本草倍利康）

活性解决了，但是消化道环境是很复杂，在经过胃酸、胆汁等环境后依然能存活的菌株，才能到达大肠发挥其功效。第一关是胃，胃液的强酸性和所含的消化酶能够杀死、消化掉大多数细菌；第二关是小肠，那里的胆汁酸和消化酶也会对细菌造成破坏，而且由于小肠的环境是碱性的，那些不怕胃酸的细菌到了小肠可能就适应不了了。我公司引进俄罗斯国家科学院最新的耐胃酸、乃胆汁的菌株，彻底的解决了这一问题。

这样具有活性的，能顺利达到定置部位的乳酸菌，才能发挥最大的优势效应。对养殖户理想的活菌制剂。

MTT法测定乳酸菌活菌数的研究

62 MTT法测定乳酸菌活菌数的研究 黄立坤，杜鹏2，霍贵成* 乳品科学教育部重点实验室（东北农业大学） (哈尔滨 150030) 摘要建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。以乳酸菌中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌为研究对象，探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围、反应时间、MTT 的用量、是否加入溶解剂等实验条件。结果：保加利亚乳杆菌在(1.0×105～2.18×107) cfu/mL内测出的OD 570值与细菌浓度呈良好的正相关，反应时间1.5 h，MTT添加量20 μL，测量前用DMSO溶解；嗜热链球菌在(2.0×105～5.12×107) cfu/mL范围内测出的OD 570值与细菌浓度呈良好的正相关，反应时间2.0 h，MTT添加量20 μL，可不添加溶解剂直接测量。MTT比色分析法可用于检测乳酸菌活菌数量。关键词MTT；保加利亚乳杆菌；嗜热链球菌；活菌计数 Inquiring into the Method of Counting Live Germ with MTT Abstract To establish a rapid, steady and sensitive bacteria-counting method that could reflect the bacteria’s activity. Lactabacillus delbrueckii ssp. bulgaricus and St reptococcus thermophilus were employed to discuss the feasibility of application of MTT method to bacteria-counting and determine the conditions of the assay, including linear range, reaction time, MTT dosage and whether solvent is added etc.. Results: The optical density at 570 nm is positively related to the concentration of L.delbrueckii ssp. bulgaricus when the number of the bacteria is in the range of (1.0×105~2.18×107) cfu/mL, and reacting time is 1.5 h, MTT dosage is 20 μL, and DMSO is used as solvent before assay; For St.thermophilus , the optical density at 570 nm is positively related to the concentration of the bacteria when the number of the bacteria is in the range of (2.0×105~5.12×107) cfu/mL, and reacting time is 2.0 h, MTT dosage is 20 μL and solvent is not added.. Conclusion: MTT colorimetry could be used to measure the viability of lactic acid bacteria. Keywords MTT colorimetry ；lactobacillus bulgaricus ；Streptococcus thermophilus ；live germ counting 基金项目：国家科技基础条件平台项目（2005DKA21204-08）资助。* 通讯作者 活菌计数在科研生产中有着广泛的应用，用于细菌计数的常规方法有平板稀释计数法(SPC)，自动菌数测定仪法，浊度法，菌体干重法等。SPC法为经典方法，但方法繁琐，耗时长，不能及时反映菌体生长情况，不适合于做大批量的实验；后几种方法不能区分细胞的死活，且测定结果受培养基、代谢产物的影响较大[1]。试验用MTT快速活菌计数法，以克服上述缺点，且工作量小，操作简单，快速，重复性好，能区分死活菌等。 MTT是一种噻唑盐，化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑，结构式如图1。MTT法基本原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT的四唑环还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲臜（Fonmazan），而死细胞无此作用[2]。形成的甲臜颗粒沉积于细胞内或细胞周围，在一定细胞浓度范围内，其生成量与细胞数目和/或细胞活性呈正相关，用二甲亚砜(DMSO)溶解所生成的甲臜，通过检测光密度值变化，可间接反映细胞生长及增殖活性[3]。1 材料与方法 1.1 材料 图1 MTT的分子结构式 1.1.1 菌种 保加利亚乳杆菌（L . delbrukki subsp. bulgaricus ，L.b ）1.8501菌株和嗜热链球菌（S .thermophilus ，S.t ）3.8501菌株，均为乳品科学教育部重点实验室（KLDS ）提供。1.1.2 试剂及溶液 （1）试剂：MTT，二甲亚砜(DMSO)。 （2）MTT溶液配制：称取100 mg MTT (Amresco 分装)于小烧杯中。加20 m L P B S (0.0l m o l /L ，pH=7.2)，使其充分溶解，用0.22 μm微孔过滤器除菌，分装于1.5 mL的EP管中，4℃避光保存。两周内使用，时间过长，溶液中易进微生物起反应，改变MTT溶液的浓度。

常用乳酸菌培养基

常用乳酸菌培养基 SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-

M R S培养基的组织成分（百度知道）：组成成重量(g) 牛肉蛋白粉10 鱼肉汁10 酵母浸出汁粉5 葡萄糖20 醋酸钠5 柠檬酸二铵2 吐温800.1 硫酸镁0.58 硫酸锰0.28 蒸溜水1000ml 备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 1．改良的MRS培养基（用于保加利亚乳杆菌的生长繁殖）： 胰陈10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温80ml、K2HPO42g、乙酸钠5g、柠檬酸胺2g、MgSO4·7H2O0.02g、MgSO4·4H2O0.05g、蒸馏水1000ml、pH(5.6～5.8)。 3.葡萄糖-酵母膏培养基（用于嗜热链球菌的生长繁殖）： 酵母膏2.5g,蛋白胨5g,葡萄糖1g,蒸馏水1000ml,pH7.0。 4.改良M17基础培养基(用于嗜热链球菌的平板计数):

胰陈10g、牛肉膏5g、酵母膏2.5g、磷酸甘油二钠10g、MgSO4·7H2O0.25g、异维C0.5g、琼脂15g、蒸馏水950ml、pH(7.1～7.2)。 2.M17培养基(2号)：大豆胨5g；蛋白胨2.5g；酪蛋白胨2.5g；酵母浸粉2.5g；牛肉粉5g；乳糖5g；抗坏血酸钠0.5g；β-甘油磷酸钠19g；MgSO40.25g；琼脂12.75g；蒸馏水1000ml，pH7.0～7.4；121℃，15min灭菌。 LBS培养基(5号)：酵母浸粉5g；胰酪蛋白胨10g；葡萄糖20g；柠檬酸铵2g；KH2PO46g；FeSO40.034g；MgSO40.575g；CH3COONa25g；MnSO40.12g；Tween801ml；冰乙酸1.3ml；蒸馏水1000ml，pH5.5±0.2；118℃，15min灭菌。 改良MC琼脂（g/l）：用于乳酸菌的培养和计数。大豆蛋白胨5.0，牛肉膏粉5.0，酵母粉5.0，葡萄糖20.0，乳糖20.0，碳酸钙10.0，琼脂粉14.0，中 性红0.05，pH6.0±0.1，121℃、15分钟灭菌 SL培养基：蛋白胨10g；酵母粉5g；葡萄糖20g；柠檬酸二铵2g；醋酸钠 25g；硫酸镁0.58g；硫酸锰0.15g；吐温-80ml；磷酸二氢钾6g；硫酸亚铁 0.03；琼脂15——20g Elliker琼脂培养基（用于乳球菌的分离）：胰蛋白胨20g；蔗糖5.0g；酵母粉5g；氯化钠4.0g；明胶2.5g；乙酸钠1.5g；葡萄糖5g；抗坏血酸0.5g；乳糖5.0g；琼脂15—20g 明串球菌的分离和培养，选择性培养基： 1.HP培养基 植物蛋白胨20g；柠檬酸铵5g；酵母粉6g；硫酸亚铁0.04g；牛肉膏10g硫酸镁0.2g；吐温801ml；硫酸锰0.05g；葡萄糖10g

乳酸菌饮料的研究现状与发展趋势

乳酸菌饮料的研究现状及展望 摘要：阐述了乳酸菌饮料的概念及其营养与保健作用及其发展的现状，指出了我国乳酸菌饮料市场存在的问题并给出了解决对策，同时预测其发展前景。 关键词：乳酸菌饮料：问题：对策； 随着我国消费饮食习惯已经从精细转变为健康、绿色，代表着健康的益生菌制品将会进一步扩大市场份额。乳酸菌饮品也不断走向成熟，新技术不断发展，迎合消费者口味和理念的新产品不断涌现。 1乳酸菌发酵饮料的概念及其保健作用 1.1乳酸菌及其代谢产物的营养与保健作用 乳酸菌是指那些能发酵糖产生大量乳酸的细菌总称。从形态上可分为球菌和杆菌。呈球形的菌有乳球菌、片球菌及明串珠菌属;呈杆状的菌有乳杆菌及双歧杆菌两个属。从发酵类型来看,可分为同化和异化两个类型。常用的菌株为乳杆菌、乳球菌及双歧杆菌属。乳酸菌的作用可分为活菌、死菌及其代谢产物两方面功能。活菌占据定居场所,抑止并排除腐败菌,其活性物质直接或间接作用于机体;死菌及其代谢产物可被机体吸收能增强机体免疫功能,促进并维持肝功能正常运转[1]。 1.2乳酸菌发酵饮料的营养和保健作用 1.2.1乳酸菌发酵饮料的营养作用 1.2.1.1蛋白质乳酸菌发酵饮料含有较丰富的蛋白质,这些蛋白质通过乳酸作用可以变成微小的凝乳,如:多肽类、胨等易被消化酶作用而被机体吸收,为机体提供能量和重新构成机体蛋白。 1.2.1.2脂肪和维生素通过乳酸菌作用可以增加发酵饮料中脂肪酸含量和维生素含量,而且脂肪酸的结构不同程度地被改变,易于消化吸收。 1.2.1.3矿物质元素发酵饮料中富含多种矿物质,如钙、钾、镁、锌、铁等。这些元素是构成机体的重要成分,同时也是维持机体正常功能的重要 物质。 1.2.2乳酸菌发酵饮料的保健作用 1.2.2.1对乳糖不耐症的治疗作用 众所周知,黄种人、黑种人肠道中的乳糖分解酶比白种人少,因此,饮用牛奶后易发生腹泻等不良反应。对于发酵饮料,由于乳酸菌可以将牛奶中20%~40%乳糖分解掉,所以喝发酵饮料不会发生 腹泻现象。 1.2.2.2降低胆固醇、抑止肾病发生 有人调查食用高胆固醇膳食的东非麻塞族人,他们同时饮用发酵饮料(酸奶),经测试其血液中胆固醇含量较低。有人用高肉食喂饲地鼠进行致肾病试验,一组用高肉食饲喂,另一组是高肉加酸奶饲喂进行对比,结果是高肉食组地鼠致肾病,而加酸奶饲喂组的地鼠血液中胆固醇、尿素氮和肌酸酐都降低,可抑制肾病发生[2]。 1.2.2.3抑菌和抗感染 乳酸菌产生的乳酸和醋酸具有杀菌作用,有些菌种如嗜酸杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌还能产生H2O2,抑制葡萄球菌生长;此外有些菌种还可产生抗菌素,对沙门氏菌、志贺氏菌、葡萄球菌等均有拮抗作用[3]。

乳酸菌在泡菜生产中的应用

乳酸菌在泡菜生产中的应用 作者：杨春哲， 冉艳红 作者单位：杨春哲(山东省酿酒葡萄科学研究所,济南,250100)， 冉艳红(华南理工大学食品与生物工程学院) 刊名： 中国食物与营养 英文刊名：FOOD AND NUTRITION IN CHINA 年，卷(期)：2003(1) 被引用次数：18次 引证文献(18条) 1.王琳琳.郑一敏.胥秀英.傅善权.李杰.周慧.曾品涛肠膜明串珠菌的最适发酵培养基筛选[期刊论文]-重庆理工大学学报（自然科学版） 2010(9) 2.盛海圆.郭艳萍.常艳.张明传统泡菜中乳酸菌多样性的分析[期刊论文]-中国微生态学杂志 2010(7) 3.陈飞平微生物发酵对蔬菜腌制品品质的影响[期刊论文]-中国食物与营养 2009(9) 4.刘永娜.燕平梅.李锐绵白糖对发酵白菜中微生物区系的影响[期刊论文]-中国调味品 2009(4) 5.罗凤莲.欧阳建勋.夏延斌.王燕发酵辣椒中主要风味物质的研究进展[期刊论文]-食品工业科技 2009(7) 6.吴海波.张兰威.黄艳玲不同地域发酵蔬菜分离的乳酸菌抑菌效果及降亚硝酸盐能力的研究[期刊论文]-食品工业科技 2009(2) 7.李锐.燕平梅.刘永娜不同贮藏条件下白菜中亚硝酸盐含量的研究[期刊论文]-食品工程 2008(4) 8.胡书芳.王雁萍乳酸菌在泡菜生产中的应用[期刊论文]-安徽农业科学 2008(21) 9.姜彬.陈一.冯志彪黄瓜在纯菌接种恒温发酵过程中的化学成分变化[期刊论文]-食品工业科技 2008(12) 10.孙锦婷.陈一.姜彬.张艳梅.高晨晨发酵过程中蔬菜化学成分的变化研究[期刊论文]-食品工程 2007(2) 11.田永峰.吴天祥.胡晓瑜.赵飞乳酸菌在酿造和食品工业上的应用[期刊论文]-酿酒科技 2007(4) 12.蔡永峰.熊涛.岳国海.李绩.张贵林直投式生物法快速生产泡菜工艺条件的研究[期刊论文]-食品与发酵工业2006(6) 13.杨荣玲.肖更生.吴晓玉.刘学铭我国蔬菜发酵加工研究进展[期刊论文]-保鲜与加工 2006(2) 14.吴祖芳.刘璞.翁佩芳榨菜加工中乳酸菌技术的应用及研究进展[期刊论文]-食品与发酵工业 2005(8) 15.张坤生.刘晨.任云霞复配型防腐剂延长巴氏杀菌鸡肉香肠货架期的研究[期刊论文]-食品科学 2005(8) 16.刘哲君.王海伟.霍建伟.周锐.姜莹.丁玉萍肠膜明串珠菌,植物乳杆菌,短乳杆菌的最适培养基的筛选[期刊论文]-佳木斯大学学报（自然科学版） 2005(4) 17.乳酸菌在果蔬及谷物制品中的应用[期刊论文]-现代食品科技 2005(4) 18.张岩.肖更生.陈卫东.张友胜发酵蔬菜的研究进展[期刊论文]-现代食品科技 2005(1) 本文链接：https://www.wendangku.net/doc/cf5348253.html,/Periodical_zgswyyy200301011.aspx

乳酸菌菌种的分离筛选方法

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类 时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。 乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。 乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。 培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。 乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。 一.筛选方法： 1.溶钙圈法： 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。 筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养

常用乳酸菌培养基

常用乳酸菌培养基 集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-

M R S培养基的组织成分（百度知道）：组成成重量(g) 牛肉蛋白粉10 鱼肉汁10 酵母浸出汁粉5 葡萄糖20 醋酸钠5 柠檬酸二铵2 吐温800.1 硫酸镁0.58 硫酸锰0.28 蒸溜水1000ml 备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 1．改良的MRS培养基（用于保加利亚乳杆菌的生长繁殖）： 胰陈10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温80ml、K 2HPO 4 2g、 乙酸钠5g、柠檬酸胺2g、MgSO 4·7H 2 O0.02g、MgSO 4 ·4H 2 O0.05g、蒸馏水 1000ml、pH(5.6～5.8)。 3.葡萄糖-酵母膏培养基（用于嗜热链球菌的生长繁殖）：酵母膏2.5g,蛋白胨5g,葡萄糖1g,蒸馏水1000ml,pH7.0。 4.改良M17基础培养基(用于嗜热链球菌的平板计数):

胰陈10g 、牛肉膏5g 、酵母膏2.5g 、磷酸甘油二钠10g 、 MgSO 4·7H 2O0.25g 、异维C0.5g 、琼脂15g 、蒸馏水950ml 、pH(7.1～ 7.2)。 2.M17培养基(2号)：大豆胨5g ；蛋白胨2.5g ；酪蛋白胨2.5g ；酵母浸粉2.5g ；牛肉粉5g ；乳糖5g ；抗坏血酸钠0.5g ；β-甘油磷酸钠19g ；MgSO40.25g ；琼脂12.75g ；蒸馏水1000ml ，pH7.0～7.4；121℃，15min 灭菌。 LBS 培养基(5号)：酵母浸粉5g ；胰酪蛋白胨10g ；葡萄糖20g ；柠檬酸铵2g ；KH 2PO 46g ；FeSO 40.034g ；MgSO 40.575g ；CH 3COONa25g ； MnSO 40.12g ； Tween801ml ；冰乙酸1.3ml ；蒸馏水1000ml ，pH5.5±0.2；118℃，15min 灭菌。 改良MC 琼脂（g/l ）：用于乳酸菌的培养和计数。大豆蛋白胨5.0，牛肉膏粉 5.0，酵母粉5.0，葡萄糖20.0，乳糖20.0，碳酸钙10.0，琼脂粉14.0，中 性红0.05，pH6.0±0.1，121℃、15分钟灭菌 SL 培养基：蛋白胨10g ；酵母粉5g ；葡萄糖20g ；柠檬酸二铵2g ；醋酸钠25g ；硫酸镁0.58g ；硫酸锰0.15g ；吐温-80ml ；磷酸二氢钾6g ；硫酸亚铁0.03；琼脂15——20g

乳酸菌研究进展

乳酸菌研究进展 摘要:本文对乳酸菌、乳酸菌的应用、乳酸菌菌剂真空冷冻干燥技术、冻干保护剂等多方面进行了阐述。 关键词: 乳酸菌；应用；发酵剂；真空冷冻干燥 1. 前言 早在5000年前人类就已经在使用乳酸菌。今天，利用乳酸菌生产的健康食品已经一跃成为全世界关注的健康食品。到目前为止，人们利用乳酸菌的乳酸发酵，制作泡菜[1]、酸菜、乳酪、酸奶等食品。另外青贮饲料经乳酸发酵后可增加贮藏时间和提高饲料的利用率。在工业上制取乳酸是用淀粉类物质先糖化后，再用乳酸菌进行乳酸发酵生产纯乳酸[2-3]。发酵乳中的乳酸菌有预防肠癌、降低血液胆固醇含量、提高系统免疫功能、减轻过敏反应和防止糖尿病等功能[1-3]。由于乳酸菌所具有的营养、健康的特殊功效，使其风靡欧、美、日、韩等市场，并被广泛应用于乳制品、饮料、肉制品、保健食品等食品及预防医学领域[4-6]。 泡菜产业是我国传统发酵食品中对国民经济具有重要贡献的产业之一。但我国泡菜企业长期沿用自然菌发酵，企业规模小，泡菜生产周期长，产品质量不稳定，食用安全性差。这些问题严重影响和制约了我国泡菜产业的发展。采用现代生物技术，开发泡菜发酵专用复合菌粉生物技术产品，对改造我国传统泡菜产业具有非常重要的现实意义。直投式泡菜发酵专用复合菌粉产品，是泡菜工业化生产的专用发酵剂，但目前市场上还没有见到该产品销售。直投式泡菜发酵专用复合冻干菌粉产品的使用，可以保证泡菜的产品质量，极大地缩短泡菜的发酵时间，提高泡菜的产量和质量。 2. 乳酸菌 2.1 乳酸菌的分类 乳酸菌是指在代谢过程中能产生乳酸的细菌的总称。其中能进行乳酸发酵的大部分是细菌，有些为球菌、有些为杆菌，一般都不会运动。 常见的球形乳酸菌主要有：链球菌属将糖类经双磷酸已糖途径分解产生右旋乳酸，属正型乳酸发酵。多见于动物及动物性制品上；明串珠菌属将糖经单磷酸己糖途径分解产生左旋乳酸及乙醇等物质，属异型乳酸发酵。多见于植物体及植物制品之上；片球菌属将糖类经双磷酸己糖途径分解产生混旋的乳配。多数生活在植物及其制品上。 常见的杆形乳酸菌是乳杆菌属，约有20多种，有些种类产生右旋乳酸、也有产生左旋和混旋的乳酸，动、植物及其制品上均可找到它们。 2.2 乳酸菌特殊生活特点 乳酸菌具有强抗酸能力，大部分乳酸菌还具有很强的抗盐性，都能耐5％以

乳酸菌保存

1、乳酸菌不产酸？ 我于去年下半年分离的乳酸菌，现在却没有产酸了，接入牛奶中培养好几天了但牛奶不凝固？不知道是怎么回？请哪位高手指点一下。这半年我都是把菌种接在MRS培养基上培养的，并且一个月转接一次。 半年了都在MRS培养传代，肯定不行的，容易变异应该在分纯之后冻存； 转接太频繁了，可能出现变异尽力减少传代，并进行复壮； 进行划线分纯，挑取几个菌落染色鉴定一下，然后再接种脱脂牛奶，也许可以重新筛选到一个有活力的； 将菌种接种到双斜面乳酸琼脂平板上，选取离含乳酸厚度最大的生长乳酸菌复壮！ 、乳酸菌活化后没长出怎么回事 近期将原来已保存的乳酸菌菌种进行活化，但是平板上没长出来。后来又重新做了一次还是没有。这是怎么回事呢？ 可以先用液体培养基富集，如果均悬液混浊后再划线接种； 乳酸菌的生存条件很宽。因为它是原核生物，结构相对简单。可以用50ml饱和脱脂奶粉溶液＋30ml 50％甘油＋20％对数期细菌原液在-85度条件下保存好几年。我做的实验中，pH到达3，乳酸菌还可以生长。不过培养乳酸菌不要培养时间过长，不然会出现自溶现象，菌液里的细菌数反而减少。 细菌生长曲线分潜伏期，对数期/生长期，成熟期，衰退期，一般而言，成熟期的细菌对外界因数的抵抗力最强但乳酸菌容易自溶，成熟期很难控制，一不小心就生产过头，出现自溶。那样的话，解冻后的细菌潜伏期会加长，甚至无法生长。所以保存的时候最好取对数期的细菌，活力大一点； 3、第一次做乳酸菌检测,请高人指点菌落特征 因第一次做乳酸菌检测,分别用了MRS培养基和改良TJA培养基厌氧培养,不同样品长出了不同的菌落形态,请高人指点乳酸菌在这两种培养基上的菌落特征,我才能进一步选定几种菌落做革兰式染色和过氧化氢检测,谢谢! MRS培养基上生长的是乳杆菌,改良TJA培养基上生长的是乳酸菌 一般的看镜检结果,粉红的是乳球.白的乳杆多. 4、乳酸菌培养 很是郁闷，我做实验分离的菌株，经过微生物菌种中心鉴定是罗伊氏乳酸杆菌，但是有一个很头疼的特点就是长的特慢，别的菌株在24小时就能长出来计数了，可这个菌株到48小时才能长出来，而且我们要做乳酸菌的冻干菌粉，别人冻干出来的能达到12次方，我的最多能达到10次方，各位专家，谁能帮帮我，应该怎么做才能更好一些啊，谢谢 乳酸杆菌不同种之间生物特性差别很大，这是正常的，没有什么办法能够改变。 我的经验是，在平板上长得慢的乳酸菌，在液体培养中生长速度并不慢，你可以试一下液体培养。 至于冻干的能力，牵涉到因素非常多，包括保护剂，菌种，预冻，冻干机性能，冻干方式等等，无法确定，只有自己摸索或者找有经验的人现场指导 5、乳酸菌产酸最大能达到多少 有谁知道乳酸菌产酸最大达到多少啊？有的说至多百分之一点多。但有的文章上却说能达到五点多？哪个对呢？ 不同菌种，不同条件下的产酸量是不同的，中国的文献是报道的最大产酸量是在1.3%~2%。 6、有没有能把乳酸菌和细菌鉴别开的培养基或抗生素？ 我想从酱中分离乳酸菌，但在MRS培养基上是不是乳酸菌和细菌都长啊？有没有能从外表上把它们区别开的培养基？我听别人说可以往培养基中加入溴甲酚绿，菌落周围变色的就是

乳酸菌维持肠道菌群的微生态平衡

乳酸菌维持肠道菌群的微生态平衡 乳酸菌表面有能与肠粘膜细胞牢固结合的特异性物质，推测可能是脂磷壁酸或肽聚糖，或细胞蛋白，或者其中二者，或三者全部。这些特异性物质被称为粘附素，乳酸菌通过粘附素与肠粘膜紧密结合，在肠粘膜表面定植占位，是形成生理屏障的主要组成部分。该屏障可以抵御外来细菌的入侵，维持肠道内微生态平衡。定植后的乳酸菌在体内发酵乳糖，产生大量的乳酸、乙酸等有机酸，使肠道pH值降低。肠内处于酸性环境，对志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等致病菌有拮抗作用。低pH值有利于肠道蠕动，维持正常生理功能，阻止致病菌的定植。嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌产生的H2O2能抑制葡萄球菌等致病菌的生长。双歧杆菌和某些乳杆菌产生的孢外糖苷酶，可降解肠粘膜上皮细胞的复杂多糖，由于这些糖是致病菌素的潜在受体，所以通过酶的作用，将其分解，阻止致病菌毒素对上皮细胞的粘附。不少乳酸菌产生细菌素如乳酸毒素、双歧杆毒素，对葡萄球菌、棱状芽孢杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌有拮抗作用。此外双歧杆菌还可将结合的胆酸分解为游离胆酸，游离胆酸对致病菌也有一定的抑制作用。 易位是肠道微生态失衡的主要原因之一，易位有纵向转移和横向转移，纵向转移是指正常菌群由原位向周围转移，横向转移是指正常菌群由原位向组织的不同层次转移[3]。正常情况下，只有少量的细菌发生纵向或横向转移，但在原籍菌的生物拮抗和宿主的免疫机制的作用下，不会引起微生态失衡。如果机体免疫功能下降，或者是滥用抗生素，使常驻菌的定植抗力下降，菌群的平衡失调，使致病菌大量繁殖、增生，并不断向周围扩散，使转移的数量过大，易位成为可能，一旦易位发生，微生物屏障就遭受破坏、导致体内微生态平衡的失调、紊乱从而引起疾病发生。易位的另一种情况是，有些细菌在正常情况下对人体是有益的，易位后反而成了致病菌——机会致病菌，对人体有害。如肠球菌在肠道和口腔部位是正常菌群，但由于菌群失衡或宿主免疫功能下降，该菌可通过粘膜渗透，易位（纵向转移）于心脏、脑、尿道、胆道等部位则可分别引起心内膜炎、脑膜炎、尿道炎及胆道炎等疾病。 乳酸菌可防止肠道菌群发生易位，其作用机理有以下几个途径。第一，乳酸菌直接参与构成肠道定植抗力，阻止病原菌的定植和入侵；第二，对肠道有营养作

乳杆菌属(Lactobacillus)内13个新种的分类

乳杆菌属（Lactobacillus）内13个新种的分类东北酸菜是我国传统的发酵制品,主要分布在我国东北地区,酿造和食用历史悠久,以自酿酸菜为采集菌种的来源。西藏地区的自然发酵酸奶已经有几千年的历史,具有独特的营养价值,它们中都蕴藏着丰富的乳酸菌资源。 本研究的目的是通过多相分类手段对从东北酸菜中分离得到的12个潜在乳酸菌新种和从西藏酸奶中分离得到的1个潜在乳酸菌新种进行鉴定,确定它们的分类学地位。采用多相方法进行鉴定,包括16S rRNA基因序列分析,phe S基因序列分析,rpo A基因序列分析,DNA G+C mol%测定,平均核苷酸一致性分析(ANI),脂肪酸甲酯(FAME)分析和表型特征分析。 菌株54-2~T与Lactobacillus composti、Lactobacillus floricola、Lactobacillus selangorensis、Lactobacillus perolens、Lactobacillus harbinensis和Lactobacillus shenzhenensis处于一个系统发育分支,16S rRNA 基因序列相似性在90.4-96.5%之间;phe S基因序列相似性在56.7-74.6%之间;rpo A基因序列相似性在57.2-81.6%之间;ANI计算结果分别在66.26-72.50%之间。菌株54-5~T、143-6~T、247-4~T、17-4~T和143-1~T与Lactobacillus dextrinicus和Lactobacillus concavus处于一个系统发育分支,16S rRNA基因序列相似性为94.9-99.9%;phe S基因序列相似性在70.1-83.1%之间;rpo A基因序列相似性在81.0-98.3%之间;ANI计算结果在70.34-81.73%之间。 菌株33-7~T、116-2~T、184-8~T、204-8~T、8-1(1)~T,256-3~T和M1575~T 与Lactobacillus tucceti、Lactobacillus nodensis、Lactobacillus insicii、Lactobacillus allii、Lactobacillus metriopterae、Lactobacillus terrae、Lactobacillus versmoldensis和Lactobacillus furfuricola处于一个系统发

乳酸菌菌种及发酵乳品

乳酸菌菌种及发酵乳品、乳制品 无铅鹌鹑皮蛋、清凉薄荷水系列项目简介 一、清凉薄荷水 清凉爽口、消暑解渴，不含任何防腐剂及有害物质，口味口感赶上甚至超过南剑牌薄荷水，投资小获利大（利润超过８０％），市场前景（特别是夏季）可观。 二、无铅鹌鹑皮蛋 皮蛋是已消费者广为喜爱的传统食品，无铅鹌鹑皮蛋是近年出现的新兴皮蛋品种。我系研制的无铅鹌鹑皮蛋与传统鸭皮蛋相比，风味更加浓厚、回味更为悠长，营养愈加丰富，成熟期短（１５天左右），以锌代铅，不但去除了传统工艺中的有害物质“铅”，更有补锌功效。可主要以手工操作方式生产，故能减少设备投入，降低生产成本，实为一相投入小、获利大，且投资风险极低的项目。 三、系列乳制品项目简介 “一杯牛奶强壮一个民族”，奶畜饲养及其乳品加工是目前我国农业产业化重点发展的方向。通过近几年来对原料乳（牛乳、羊乳）、乳酸菌选育及其生物学特性、系列乳品加工工艺及配方、乳制品保藏等方面的研究和开发，对凝固型酸奶、搅拌型酸奶、活性乳酸菌饮料、灭菌型乳酸菌饮料、保健型酸奶、酸奶冰淇淋、山药酸奶冰淇淋等具有成熟的成套技术。一些产品技术已在一些乳品企业成功应用，技术可靠，企业经济效益较好。根据投资规模，本技术项目特别适宜于中、小乳品企业。 四、优良乳酸菌菌种及其发酵乳品应用技术项目简介 发酵乳品特别是保健型发酵乳品是乳业发展的方向。10多年来，我们通过引进、筛选、选育获得了应用于发酵乳品生产的各种菌种，类别上有产香型、产粘型、产酸型三类菌种，主要有保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、植物乳杆菌等菌种的不同菌株。可以提供试管菌种、冻干菌种、干粉菌种，满足不同生产的需要。也可提供系列发酵乳品生产的成套技术。 五、全汁猕猴桃酒的生产技术项目简介 猕猴桃誉为“水果之王”，随着退耕还林工程的实施，是近年来发展较快的一类水果。猕猴桃酒正处于研究和开发中，市场上该类产品很少，具有广阔的市场前景。我们通过研究选育获得了适宜于猕猴桃酒酿造的优良酵母菌种（优于其他果酒酵母）、比较了不同的发酵工艺，筛选并组装出了猕猴桃酒的生产工艺技术。本项目可以提供酵母菌种和全汁猕猴桃酒的生产技术。 联系人：秦文蒲彪陈安均 联系电话：0835- 288287528824382882340

常用乳酸菌培养基

常用乳酸菌培养基 MRS培养基的组织成分： 组成成重量(g) 牛肉蛋白粉10 鱼肉汁10 酵母浸出汁粉 5 葡萄糖20 醋酸钠 5 柠檬酸二铵 2 吐温80 0.1 硫酸镁0.58 硫酸锰0.28 蒸溜水1000ml 备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 1．改良的MRS培养基（用于保加利亚乳杆菌的生长繁殖）： 胰陈10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温80ml、K2HPO4 2g、乙酸钠5g、柠檬酸胺2g、MgSO4·7H2O 0.02g、MgSO4·4H2O 0.05g、蒸馏水1000ml、pH(5.6～5.8)。3.葡萄糖-酵母膏培养基（用于嗜热链球菌的生长繁殖）： 酵母膏2.5g, 蛋白胨5g, 葡萄糖1g, 蒸馏水1000ml ,pH7.0。 4.改良M17基础培养基(用于嗜热链球菌的平板计数): 胰陈10g、牛肉膏5g、酵母膏2.5g、磷酸甘油二钠10g、MgSO4·7H2O 0. 25g、异维C0.5g、琼脂15g、蒸馏水950ml、pH(7.1～7.2)。 5. M17培养基(2号)： 大豆胨5g；蛋白胨2.5g；酪蛋白胨2.5g；酵母浸粉2.5g；牛肉粉5g；乳糖5g；抗坏血酸钠0.5g；β-甘油磷酸钠19g；MgSO 4 0.25g；琼脂12.75g；蒸馏水1000ml，pH7.0～7.4；121℃，15min灭菌。 6. LBS培养基(5号)：酵母浸粉5g；胰酪蛋白胨10g；葡萄糖20g；柠檬酸铵2g；KH2 PO4 6g；FeSO4 0.034g；MgSO4 0.575g；CH3COONa 25g；MnSO4 0.12g；Tween80 1ml；冰乙酸1.3ml；蒸馏水1000ml，pH5.5±0.2；118℃，15min灭菌。 7. 改良MC琼脂（g/l）：用于乳酸菌的培养和计数。大豆蛋白胨5.0，牛肉膏粉5.0，酵母粉5.0，葡萄糖20.0，乳糖20.0，碳酸钙10.0，琼脂粉14.0，中性红0.05，pH6.0±0.1，121℃、15分钟灭菌 8. SL培养基：蛋白胨10g；酵母粉5g；葡萄糖20g；柠檬酸二铵2g；醋酸钠25g；硫酸镁0.58g；硫酸锰0.15g；吐温-80 ml；磷酸二氢钾6g；硫酸亚铁0.03；琼脂15——20g 9. Elliker琼脂培养基（用于乳球菌的分离）：胰蛋白胨20g；蔗糖5.0g；酵母粉5g；氯化钠4.0g；明胶2.5g；乙酸钠1.5g；葡萄糖5g；抗坏血酸0.5g；乳糖5.0g；琼脂15—20g 10.明串球菌的分离和培养，选择性培养基： 1）. HP培养基植物蛋白胨20g；柠檬酸铵5g；酵母粉6g；硫酸亚铁0.04g；牛肉膏10g 硫酸镁0.2g；吐温80 1ml；硫酸锰0.05g；葡萄糖10g 2）. 蔗糖硫胺培养基蔗糖100g ；磷酸氢二钾5g；酵母粉2.5g；硫酸镁0.2g；硫酸铵0.2g；氯化钠0.6g；琼脂15—20g 。

酸奶中乳酸菌的研究与展望

酸奶中乳酸菌的研究与展望 食品科学与工程：呼庆真 指导老师：吴士云 摘要：本文主要分析了酸奶现状及酸奶发展趋势进行了展望。同时，对酸奶中乳酸菌的作用 进行说明。并对酸奶的现状、未来、储存方式及消费群体等方面进行分析。 关键词：酸奶，乳酸菌,室温 1概述 酸奶是以新鲜牛乳经有效杀菌,用不同乳酸菌发酵剂制成的乳制品,味酸甜细腻,营养丰富,深受人们喜爱,专家称它是“21世纪的绿色食品”,是一种“功能独特的营养品”[1]。它对人体 有较多的好处,可以维持肠道正常菌群平衡,调节肠道有益菌群到正常水平等[2];在我国,近几年生产销售的酸乳及酸乳饮品数量直线上升,品种花样繁多,很受消费者的青睐。目前市售的各种酸奶制品中,作为发酵剂的乳酸菌,通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌,乳制品中可任意添加乳粉、脱脂乳粉、乳清粉等,在最终产品中必须大量存在这些微生物[3]。 乳酸菌是一种存在于人类体内的益生菌。乳酸菌能够将碳水化合物发酵成乳酸，因而得名。益生菌能够帮助消化，有助人体肠脏的健康，因此常被视为健康食品，添加在酸奶之内。在人体肠道内栖息着数百种的细菌，其数量超过百万亿个。其中对人体健康有益的叫益生菌，以乳酸菌、双歧杆菌等为代表，对人体健康有害的叫有害菌，以大肝杆菌、产气荚膜梭状芽胞杆菌等为代表。益生菌是一个庞大的菌群，有害菌也是一个不小的菌群，当益生菌占优势时（占总数的80%以上），人体则保持健康状态，否则处于亚健康或非健康状态。长期科学研究结果表明，以乳酸菌为代表的益生菌是人体必不可少的且具有重要生理功能的有益菌，它们数量的多和少，直接影响到人的健康与否，直接影响到人的寿命长短，科学家长期研究的结果证明，乳酸菌对人的健康与长寿非常重要。 目前世界上常用于益生菌的菌种大多为乳酸菌，如嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus）、发酵乳杆菌（Lactobacillusfermentum）、干酪/副干酪乳杆菌（Lactobacillus casei/paracasei）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri）、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosu s）、双歧杆菌（Bifidobacterium）等中的一些菌株。但并不是这些菌种中的每一株菌都可以作为益生菌，只要经过科学验证的菌株才可以作为益生菌。同时，并不是每一株益生菌都是全面手，能够发挥所有的健康功效[4]。 目前的食品和保健品市场上,很多产品的保健概念比较好,但是对人体的实际效果则很一般。益生菌常常耐受不了销售过程中的环境条件而导致含量大幅度下降,或者耐受不了胃酸和胆汁的杀菌作用而丧失活性。因此,选育耐酸和耐胆汁的益生菌菌株以保证它们能够在 人的胃酸和肠道的胆汁中生存等菌种选育课题都是非常活跃的研究领域[5]。鉴于乳酸菌在 - 1 -

乳酸菌调研报告

乳酸菌调研报告 乳酸菌是指碳水化合物（即糖类等）经过发酵，获得能源所生成大量的乳酸菌群的总称。它的繁殖如同人类一样，需要很多的营养物质。因此，乳酸菌主要存在于动植物及食品当中与人类的生活息息相关。乳酸菌从形态上粗分为杆菌和球菌，在分类学上分为12属以上的属类中，到目前为止，已被证实有250种以上。 乳酸菌一般不会运动，在自然界中种类多，分布广。到目前为止，这类细菌共发现了59种，分别归属于乳链球菌及乳杆菌两大家族。随着高新技术的不断发展和人类社会的日益进步，乳酸茵对人体健康的有益作用，越来越受到社会各界特别是研究领域和生产企业的广泛关注。因此，乳酸菌的开发利用具有了重要的意义。 1 乳酸菌菌种特性 不同属的乳酸茵在冷冻、干燥和保藏过程中表现出不同的特性。早先有报道细菌细胞形态、尺寸大小对其在冻干后的存活率有影响。例如,肠球菌属一种小的球形细胞。对冻干的抵抗力明显强于乳酸杆（棒）菌属。据Fonseca等研究, 在冷藏和冷冻干燥过程中, 由于细胞外冰晶的形成,细胞的表面积越大, 细胞膜破坏越严重。 在相同的外部条件下, 同种菌的不同菌株在冻干及固体状态下保藏也可能表现出不同的特性。乳酸菌的这些特性还不十分清楚, 有待于一步研究,目前有人提出一些假设来解释这一现象: 1）不同菌株遗传物质的差异导致菌株有不同的表现型, 这种差异性引起细胞对冷冻干燥的不同抵抗力; 2）不同菌株的细胞壁和细胞膜组成成分不同以及磷脂的熔点不一样, 也能引起细胞特性不同。 2 乳酸菌的功能 乳酸菌具有强抗酸能力，如在含糖丰富的食物制作中，虽然其他很多的菌类也能生长，但因乳酸菌不断地产生乳酸使得环境变酸而杀死多种不耐酸的细菌。大部分乳酸菌具有很强的抗盐性，都能耐5％以上的NaCl浓度。如嗜盐链球菌甚至能在浓度为15．18％的盐水中生存。这样在腌制品中其他不抗盐的有害菌

乳酸菌及其乳酸菌发酵食品

乳酸菌及其乳酸菌发酵食品 发酵是一种古老、传统的食品储存与加工的方法，凡利用微生物的作用而制得的食品都可以称为发酵食品。发酵食品是人类巧妙地利用有益微生物加工制造的一类食品，具有独特的风味和营养价值，丰富了我们的饮食生活。发酵食品因在食品加工过程中有微生物参与作用，进而可以形成一些特异性风味物质和营养因子，如乳酸菌参与牛乳发酵，产生乙醛、丁二酮、丙酮、3-羟基丁酮、挥发性酸等芳香物质，以及胞外多糖、乳酸菌素、γ-氨基丁酸等营养因子。 乳酸菌是发酵食品最主要的有益微生物之一，人类对于乳酸菌的应用历史非常久远，在远古人类就在酿造食品方面不自觉地利用了乳酸菌。但是，人类能主动地去研究和掌握乳酸菌的生活规律，并加以应用，还是近百年的事。 1 乳酸菌 1.1 乳酸菌的分类 乳酸菌是一类以糖为原料产乳酸为主的细菌的总称，乳酸菌不是分类学上的名词，属于真细菌纲(Eubacteriac)真细菌目(Eabacteriales)中的乳酸细菌科(lactobacillaceae)。在伯杰氏系统细菌分类学上，目前已发现的乳酸菌，至少分布于乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Strptococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)，乳球菌属(Lactococcus)等19个属的微生物中。其中，在食品、医药等领域应用较多的乳酸菌主要分布在乳杆菌属、双歧杆菌属、链球菌属、肠球菌属、乳球菌属、片球菌属和明串珠菌属等七个属种。 1.2 乳酸菌的基本特性 乳酸菌是革兰氏阳性，不形成芽孢(个别属除外)，不运动或少运动，不耐高温，但耐酸的球菌或杆菌，乳酸菌是一种兼性厌氧菌，适合于在氧含量低或无氧的环境中生长。与其它细菌相比，乳酸菌对营养的要求比较严格，除了要供给适量的水分、充足的碳源、氮源和无机盐类外，还需要加入维生素、氨基酸等生长因子。乳酸菌都能发酵一定的糖类产生乳酸，但分解蛋白质和脂肪能力微弱，过氧化氢酶反应呈阴性，适宜在偏酸的环境中生长，可使培养基pH 值降到5.0以下，产酸及耐酸能力都较强。 1.3 乳酸菌的发酵类型 乳酸菌的发酵根据产物的不同，分为三种类型：同型乳酸发酵、异型乳酸发酵和双歧发酵。同型乳酸发酵是指发酵终产物中90%以上为乳酸的乳酸发酵过程，以乳酸链球菌和多数乳酸杆菌为主。异型乳酸发酵是指发酵终产物中除乳酸外,还有乙醇、二氧化碳等成分的乳酸发酵过程，以明串珠菌属的乳酸菌以及某些乳酸杆菌,如肠膜明串珠菌、短乳杆菌、甘露醇乳杆菌等。双歧发酵是双歧杆菌的产能模式，双歧杆菌是一类特殊的严格厌氧菌,对营养要求较高,它们对葡萄糖的代谢也可归入异型乳酸发酵,但与其他乳酸菌的异型发酵不同。 1.4 乳酸菌的代谢产物 乳酸菌发酵的代谢产物主要有有机酸类、细菌素类、乙醛等芳香物质、胞外多糖、γ-氨基丁酸等。有机酸类主要有乳酸、乙酸，及少量的甲酸、丙酸等，具有抗菌防腐的作用，并带给食品酸性的口感；细菌素又称乳酸菌素，具有固定抗菌谱，对病原菌和腐败菌具有很强的抑制能力；乙醛等芳香物质给乳酸菌发酵食品带来独特的发酵风味；胞外多糖作为生命物质的重要组成部分，广泛参与细胞的各种生命现象及生理过程的调节；γ-氨基丁酸是神经系统中重要的抑制性神经递质，具有改善脑机能，调节情绪抗焦虑，降低血压等方面具有重要作用。

DVS乳酸菌种菌株传代过程中遗传稳定性分株中的作用

42卷　2期2002年4月 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica V ol.42April N o.2 2002 作者简介:孔　健(1964-),女,山东菏泽人,山东大学微生物技术国家重点实验室副教授,博士,主要从事乳酸菌应用基础性研究。 收稿日期:2001211206,修回日期:2001212219 限制和修饰系统Lla BIII 在构建抗噬菌体菌株中的作用 孔　健1 　Jytte Josephsen 2 　马桂荣 1 (1山东大学微生物技术国家重点实验室　济南　250100)(2丹麦皇家畜牧农业大学乳制品和食品科学系　丹麦) 关键词:乳酸乳球菌,噬菌体,限制和修饰系统,乳制品发酵 中图分类号:Q933 文献标识码:A 文章编号:000126209(2002)022******* 限制和修饰(restriction and m odification ,R ΠM )系统是指由限制性内切酶和甲基化酶组成的单亚基或多亚基复合酶系统,两者通常成对出现,具有相同的DNA 识别位点,其作用相反。R ΠM 系统在原核生物中普遍存在,在保护细胞免遭外源病毒侵害方面具有重要作用[1]。 作为发酵剂的乳酸乳球菌在乳制品发酵中具有重要作用,但这类菌株极易遭受噬菌体感染,导致菌株产酸力降低,甚至发酵失败,造成严重的经济损失。所以在乳制品发酵过程中防止噬菌体感染就成为十分重要的问题。 通过自然筛选或诱变处理等手段筛选噬菌体不敏感突变株以及利用基因克隆技术构建抗噬菌株菌株在发酵过程中起到了良好的抗噬菌体感染效果[2,3]。质粒pJW566分离于乳酪发酵剂乳酸乳球菌 (Lactococcus lactis subsp.cremoris )W56[4],发现携带有一种新的编码限制和修饰(R ΠM )系统的基因Lla BI 2II [5] (G enBank 注册号为AF347071),本文通过电转化方法将R ΠM 系统Lla BIII 导入到不同的乳酸乳球菌 中,分析含有R ΠM 系统Lla BIII 的工程菌株对噬菌体的抗性。 1　材料和方法 1.1　菌株、噬菌体和培养基 11111　菌株和噬菌体:本实验所有菌株和噬菌体列表于1。 11112　培养基:乳酸乳球菌培养基(G M17)为M17培养基(Difco ),加015%葡萄糖;转化培养基(SG M17) 为M17培养基,加1%葡萄糖,215mm ol ΠL MgCl 2,215mm ol ΠL CaCl 2,5μg Πm L 氯霉素;噬菌体感染培养基为 G M17培养基加5mm ol ΠL CaCl 2。1.2　质粒DNA 的提取 L .Lactis 培养到指数生长期,离心收集菌体。菌体细胞用10mg Πm L 溶菌酶37℃酶解20min ,用GI A 2 GE N plasmid Mini 2prep kit (Chatsw orth ,US A ),按照实验说明提取质粒DNA 。1.3　噬菌体效价(efficiency of plating ,EOP)的测定 噬菌体在抗性菌株中的噬菌斑数与在敏感菌株中的噬菌斑数之比,敏感菌株的E OP 为1。噬菌斑的测定采用双层平板法。 1.4　电转化 参见H olo 和Nes 的方法[6]。电穿孔仪为G ene Pulser (BioRad 公司产品),脉冲参数1125kV Πmm ,25μF 和200 Ω。