简要概述狂犬病毒疫苗的研制进展
狂犬病疫苗研究进展
Hans Journal of Biomedicine 生物医学, 2019, 9(3), 143-147 Published Online July 2019 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/c718594383.html,/journal/hjbm https://https://www.wendangku.net/doc/c718594383.html,/10.12677/hjbm.2019.93021 Research Progress on Rabies Vaccine Qianfen Wang Hualan Biological Bacterin Co. Ltd., Xinxiang Henan Received: Jul. 2nd, 2019; accepted: Jul. 17th, 2019; published: Jul. 24th, 2019 Abstract Rabies is a zoonotic infection caused by rabies virus. The rabies virus infects the central nervous system of warm-blooded animals and humans leading to acute lethal encephalomyelitis. The de-velopment of rabies vaccine has a long history. The first generation of rabies vaccine was devel-oped in the late 19th century, followed by the development of second- and third-generation vac-cines with higher efficacy and less adverse reactions. The correct application of vaccines to pre-vent the development of rabies is very effective. A large number of experimental vaccines are un-der development, including DNA vaccines, recombinant viral vaccines and recombinant protein vaccines. This article outlines the past, present and possible future of rabies vaccine. Keywords Rabies Vaccine, Rabies Virus, Research 狂犬病疫苗研究进展 王乾芬 华兰生物疫苗有限公司，河南新乡 收稿日期：2019年7月2日；录用日期：2019年7月17日；发布日期：2019年7月24日 摘要 狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患传染病。狂犬病毒感染温血动物和人类的中枢神经系统后导致急性致命脑脊髓炎。狂犬病疫苗的开发有着悠久的历史，19世纪后期开发出第一代狂犬病疫苗，随后开发出更高疗效和更少不良反应的第二代和第三代疫苗，疫苗的正确应用对于防止狂犬病的发展是非常有效的。 大量的实验性疫苗正在发展中，包括DNA疫苗、重组病毒疫苗和重组蛋白疫苗。本文概述狂犬病接种疫苗的过去、现在和可能的未来。
狂犬病疫苗接种卡(四针法)
狂犬病疫苗接种卡（暴露后免疫四针法） 狂犬病疫苗接种卡（暴露后免疫四针法） 姓名： 性别： 年龄： 姓名： 性别： 年龄： 住址： 住址： 特别提醒： 特别提醒： 1、 忌饮酒、浓茶、咖啡、辛辣等刺激性食物； 1、忌饮酒、浓茶、咖啡、辛辣等刺激性食物； 2、不要剧烈运动， 接种当天不洗澡； 2、不要剧烈运动，接种当天不洗澡； 3、禁止臀部注射，不能进行血管内注射； 3、禁止臀部注射，不能进行血管内注射； 4、使用皮质类固醇或免疫抑制剂治疗时， 4、使用皮质类固醇或免疫抑制剂治疗时， 可干扰抗体产生，并导致免疫接种失败； 可干扰抗体产生，并导致免疫接种失败； 5、注射后出现严重不良反应（皮疹、过敏性 5、注射后出现严重不良反应（皮疹、过敏性 休克、过敏性紫癜、血管神经性水肿和神经 休克、过敏性紫癜、血管神经性水肿和神经 系统反应请及时就诊； 系统反应请及时就诊； 狂犬病疫苗接种卡（暴露后免疫四针法） 狂犬病疫苗接种卡（暴露后免疫四针法） 姓名： 性别： 年龄： 姓名： 性别： 年龄： 住址： 住址： 特别提醒： 特别提醒： 6、 忌饮酒、浓茶、咖啡、辛辣等刺激性食物； 1、忌饮酒、浓茶、咖啡、辛辣等刺激性食物； 7、不要剧烈运动， 接种当天不洗澡； 2、不要剧烈运动，接种当天不洗澡； 8、禁止臀部注射，不能进行血管内注射； 3、禁止臀部注射，不能进行血管内注射； 9、使用皮质类固醇或免疫抑制剂治疗时， 4、使用皮质类固醇或免疫抑制剂治疗时， 可干扰抗体产生，并导致免疫接种失败； 可干扰抗体产生，并导致免疫接种失败； 10、注射后出现严重不良反应（皮疹、过敏性 5、注射后出现严重不良反应（皮疹、过敏性 休克、过敏性紫癜、血管神经性水肿和神经 休克、过敏性紫癜、血管神经性水肿和神经 系统反应请及时就诊； 系统反应请及时就诊； 针 次 第1针（2剂） 0天 第2针（1剂） 7天 第3针（1剂） 21天 程序接种日期 实际接种日期 接种医生签字 针 次 第1针（2剂） 0天 第2针（1剂） 7天 第3针（1剂） 21天 程序接种日期 实际接种日期 接种医生签字 针 次 第1针（2剂） 0天 第2针（1剂） 7天 第3针（1剂） 21天 程序接种日期 实际接种日期 接种医生签字 针 次 第1针（2剂） 0天 第2针（1剂） 7天 第3针（1剂） 21天 程序接种日期 实际接种日期 接种医生签字
狂犬疫苗接种新程序
狂犬疫苗接种启用新程序 以前被动物咬伤或者抓伤后，伤者需立即接种人用狂犬病疫苗，原有程序是在第0天、3天、7天、14天、28天分别接种1针，共5针。由于接种次数多，周期长达一个月，很多人忘记或者耽误了接种后续针次，导致免疫效果受到影响。而且多达5次的交通费、误工费是一个沉重的经济负担。现在，新型狂犬病疫苗接种程序——“2-1-1”接种程序已经正式开始使用，将极大方便接种者。调整后的狂犬病疫苗接种程序为第0天、7天、21天，新接种程序首次接种两针狂犬疫苗，分别在左、右上臂三角肌各注射1针，在第7天和第21天再分别注射1针。该接种程序接种者只需就诊3次，注射4针（其中第一次注射两针），并在三个星期就完成接种程序，接种周期缩短了一周。调整后的狂犬疫苗的接种程序，方便了接种者，降低了社会成本、节约了资源、减轻医疗负担，既省时又省力，也有利于接种者完成全程接种获得高效保护。而且“2-1-1”接种程序产生抗体迅速，对就诊时间比较晚、严重咬伤者更加适用。 一、“2-1-1”的优势在于：第7天的血清阳转率可达70%左右，优于5针法。因为首次接种抗原量加倍，并同时刺激双侧淋巴系统，可以更快产生抗体，早期抗体水平也更高。 二、“2-1-1”方案第一次注射两针，严禁合在一支针管里一次注射。因为只有通过在两侧分别注射一剂，疫苗中的抗原才会激发左右两侧的淋巴系统，产生更多的抗体，免疫效果才能更好。如果只在一个部位接种，则达不到上述效果。如延迟期太长（超过10天），建议重新开始一个新的免疫程序。 三、再次暴露后的伤口处理 1、无论前次暴露是否（全程）接种狂犬病疫苗，也不管距离前次免疫时间长短，任何一次暴露后均应首先及时彻底地进行伤口处理。 2、再次暴露后的疫苗接种 一般情况下，全程接种狂犬病疫苗后体内抗体水平可维持1年。 （1）如再次暴露发生在免疫接种过程中，则继续按照原有程序完成全程接种，不需加大剂量。 （2）全程免疫后半年内再次暴露者一般不主张再次免疫，可根据医生建
狂犬病疫苗研究进展
狂犬病疫苗研究进展 马君1*，王栋2 （1.北京海淀中海动物保健科技公司，北京，100081；2.中国兽医药品监察所， 北京，100081） ［摘要］接种狂犬病疫苗是目前防治狂犬病的唯一有效措施。根据狂犬病疫苗发展的不同阶段，从巴斯德首次研制的狂犬病神经组织疫苗到高度纯化的细胞疫苗，将狂犬病疫苗进行了分类，并对各类狂犬病疫苗的作用机理、生产应用以及优缺点分别予以了阐述。 ［关键词］狂犬病，疫苗，进展 狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies Virus）引起的一种人畜共患传染病。全世界每年约有6万人死于狂犬病［1］。我国每年狂犬病发病人数在印度之后，居世界第二位，近几年每年约1000～1200万人接受狂犬病暴露后接种［2］。目前本病几乎无有效的治疗办法，只能通过接种疫苗来预防。 从巴斯德首次制成狂犬病弱毒疫苗以来，各国不断完善并研制了更加安全有效的人、兽狂犬病疫苗，主要有以下几种。 1．弱毒疫苗 1885年，法国科学家巴斯德首次用兔脑脊髓制备成狂犬病弱毒疫苗，应用于人体治疗获得了成功［3］。目前弱毒疫苗仅在少数发展中国家用于人体免疫，而更多用于欧美等国野生动物及发展中国家的家养动物。弱毒疫苗所使用的毒株主要为SAD衍生株，如SAG1和ERA等［4］。其中欧洲应用SAG1株接种野生动物［5］。我国目前生产ERA株活疫苗，最近又重新修订了用Flury株生产活疫苗的制造及检验试行规程，对于已取得GMP认证的企业可申请产品的批准文号。 狂犬病弱毒疫苗在体内的增殖过程与病原感染机体的过程相似，能诱导产生细胞免疫和体液免疫，且产生的免疫反应较强，持续时间较长，在我国狂犬病防制工作中曾起到一定的积极作用。但由于我国目前对活疫苗安全监测与监管制度尚不完善，狂犬病毒流行毒株与疫苗株之间分子流行病学的亲缘性研究尚不充分，对于活疫苗的安全性尚存在争论。 周桂兰等对2种国产狂犬病活疫苗（ERA株）的免疫抗体监测结果表明，对6月龄以上、5岁以内的成年健康犬1次接种后6个月和8个月，分别有28.57%和5. 71%的犬抗体水平高于0.5IU/mL（WHO确认的抗体保护水平），半年后再进行2次接种，有81.82%的犬抗体水平达到0.5IU/mL［6］。而英国对Nobivac 狂犬病灭活疫苗的监测结果是，6个月至12.5岁的成年犬1次接种失败率为5.7%。在20 06年5月召开的我国首届人兽共患病研讨会上，弱毒疫苗的安全性再次成为争
狂犬疫苗注射的注意事项及禁忌
狂犬疫苗注射的Q&A 炎炎夏日，随着气温的不断升高，我院狂犬病门诊每天都能接诊20-30位被各种小动物咬伤的市民。天气炎热，动物的情绪烦躁，常常“出口伤人”。当不慎被猫狗等小动物咬伤后，我们应该如何处理呢？针对我们日常接诊工作中遇到的常见问题，我院专家来为你一一解答。 Q：被什么动物咬伤后需要注射狂犬疫苗？ A：狗咬伤，猫抓伤，老鼠、豚鼠咬伤、抓伤，蝙蝠咬伤Q：被狗咬伤后在第一时间内如何处理？ A：用肥皂水、和流动的清水交替清洗，至少15分钟，然后到专业医院进行正规处置，同时视伤口轻重注射狂犬疫苗和免疫球蛋白。 Q:什么时间注射好？ A：受伤后应尽快注射狂犬疫苗，如果因为特殊原因耽误了也应在有条件时注射。 Q：我家狗狗已经注射了狂犬疫苗，我被咬后还用再注射吗？ A：狂犬疫苗是免疫制剂，狗狗注射是为防止小狗患病，
所以人被咬后依然需要注射狂犬疫苗。 Q：我小孩在喂小狗时，被小狗舔了一下，用不用注射狂犬疫苗？ A：如果孩子的皮肤是完好、无破损的，不用注射。 Q：我刚刚喝完酒，被邻居家狗咬了，能不能扎针？ A：当日不能注射，可以隔日再来。注射疫苗期间可照常工作，但切忌饮酒、浓茶、咖啡；亦不要吃有刺激性的食物诸如辣椒、葱、大蒜等。同时要避免受凉、剧烈运动或过度疲劳，防止感冒。注射当日，不要洗澡，以免注射部位感染。 Q：因为出差了，第三针不能按时注射怎么办？ A:接种狂犬病疫苗应当按时完成全程免疫，按照程序正确接种对机体产生抗狂犬病的免疫力非常关键，当某一针次出现延迟一天或者数天注射，其后续针次接种时间按延迟后的原免疫程序间隔时间相应顺延。 Q:我第一针在江西老家注射的，现在开学了，回到大连没有一个牌子的疫苗怎么办？ A：应当尽量使用同一品牌狂犬病疫苗完成全程接种。若无法实现，使用不同品牌的合格狂犬病疫苗应当继续按原程
狂犬病病毒感染免疫反应研究进展
综述 狂犬病病毒感染免疫反应研究进展* 金宏丽1,2,王化磊2,齐瑛琳1,2,赵平森2,3,赵丽丽1,2,梁萌1,2,杨松涛2**,夏咸柱2** (1.吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;2.中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春,130122; 3.北京协和医学院医学实验动物研究所,北京100021) 摘要 狂犬病病毒感染机体后可引起严重的脑炎,病死率几乎为100%。暴露前预防免疫和及时的暴露后免疫可有 效阻止脑炎的发生,一旦出现狂犬病临床症状后,几乎所有的治疗方法均无效。病毒感染机体后,激发机体产生先天性 和获得性免疫应答,而在病毒进入中枢神经系统前,机体产生的免疫应答不足可能是免疫保护失败的原因之一。本文综 述了机体对狂犬病病毒感染与疫苗免疫产生的免疫反应。 关键词 狂犬病病毒;免疫反应;免疫抑制;综述 中图分类号 R373.9 文献标识码 A 文章编号 1673 5234(2011)08 0614 04 [J our nal of Pathogen B iology.2011A ug;6(8):614-617.] The immune response to rabies virus infection JIN H ong li1,2,WANG H ua lei2,QI Ying lin1,2,ZH AO Ping sen2,3,ZH AO Li li1,2,LIANG Meng1,2,YAN G Song tao2,XIA Xian zhu2 (1.College of A nimal Science and Veter inar y Medicine,J ilin U niv er sity,Changchun130062,China;2.I nstitute of M ilitar y Veter inar y M edicine,A cademy of M ilitar y M ed ical Sciences;3.I nstitute of L abo rator y A nimal Science,Chinese A cademy of M edical Sciences&Pek ing Union M ed ical Colleg e) Abstract Rabies vir us causes encephalit is in humans w ith a fata lity rate of almost100%.Encephalitis can be effect ive ly prev ented by pre ex po sur e vaccinatio n and pr ompt post ex po sur e vaccinatio n.H ow ever,almost all metho ds of treat ment are ineffect ive once the clinical sy mpto ms of rabies develop.Innate and adaptive immune responses are trigg ered once the body is infected with the pathog en.An inadequat e adaptive immune response trigg ered by the v irus,part icularly be fo re the virus enters the CNS,may be one of the reasons fo r failed immunopro tection in humans.T his paper rev iews the immune r esponse to r abies infectio n and vaccinat ion. Key words Rabies virus;immune r espo nse;immunosuppr essio n;rev iew 狂犬病病毒(rabies v ir us,RA BV)属于弹状病毒科狂犬病毒属,为单股负链不分节段的R NA病毒。RA BV的基因组大小为12kb,可编码5种结构蛋白[1],依次为核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)和RN A依赖的RN A聚合酶(L)。RA BV具有高度嗜神经性,侵入感染部位的外周神经,逆轴突传输至背根神经节,此时此处可检测到病毒粒子。病毒传播速度较快,通过足垫接种病毒感染小鼠,立即截肢或切断坐骨神经后,可阻断病毒传播,而感染数天后再用此方法将不能阻止病毒的传播。人感染病毒后,潜伏期为数月甚至数年,其原因可能为病毒可在伤口附近的肌肉组织内持续的静止存在或以低量复制。一旦病毒由外周神经轴突转运至脊髓,即以极快的速度上行至脑,此过程一般仅需数小时。病毒侵入脑内后,即进行大量增殖并迅速扩散至全脑。目前,一旦出现狂犬病临床症状,尚无有效的治疗方法,病人会在数天或数星期后死亡[2]。 1 RABV感染的免疫反应 1.1 抗病毒作用的免疫反应 病毒侵入机体后,会诱导机体产生一系列的免疫应答过程,包括先天性免疫和获得性免疫反应。宿主的先天性免疫是抵抗病毒感染的第一道防线,包括干扰素(inter fero n,IF N)、炎症反应的产生,巨噬细胞吞噬功能的增强等;获得性免疫包括特异性体液免疫和细胞免疫。狂犬病暴露后不一定能发病,可能因为病毒没有成功引起感染,或虽引起感染但却被机体产生的免疫反应控制在早期阶段。以上两种情况可研究的病例极少。此外,免疫反应抵抗病毒感染机制中,RA BV中和抗体(vir us neutra lizing ant ibody,V NA)起重要作用,而大多数病人在出现临床症状后几天才能检测到抗体[3]或一直检测不到抗体[4]。2004年,美国一女孩在感染蝙蝠RA BV后存活[5],在其治疗过程中主要采用了诱导昏迷及抗病毒药物,此治疗方法被称为M ilwaukee法,然而仅有2例病人采用此法获得成功,大多数病例均以失败告终[6,9]。此小女孩在入院时即在其脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中检测到了VN A,因此狂犬病病人CSF内的中和抗体可能是有利于病人存活的主要因素。 研究表明,R ABV实验室致弱毒株能激活机体的先天性免疫反应,尤其是IF N / 信号通路[10]。RA BV实验室致弱毒株 * ** 基金项目 国家重点基础研究发展计划(No.2011CB504706); 公益性行业(农业)科研专项(No.201103032)。 通讯作者 杨松涛,E mail:Yst610223@yah https://www.wendangku.net/doc/c718594383.html, 夏咸柱,E mail:xia_xzh@https://www.wendangku.net/doc/c718594383.html, 作者简介 金宏丽(1987-),女,黑龙江七台河人,硕士研究生,主要从事狂犬病病毒致病机理与新型疫苗研究。 E mail:jin8616771@https://www.wendangku.net/doc/c718594383.html,
狂犬病疫苗的发展现状
狂犬病疫苗的发展现状 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【关键词】狂犬病；病毒活疫苗；灭活疫苗 狂犬病（rabies），即疯狗病，又称恐水症（hydrophobia），是由狂犬病毒感染所致的损害中枢神经系统为主的急性传染病，属人兽共患的自然疫源性疾病。该病极为凶险，一旦发病，病死率100%［1～2］。全世界每年约有3.5～5万人死于狂犬病［3］，其中99%的病例发生在发展中国家，亚洲约占发病总数的56%，而非洲约占44%［1］。2009年7月16日据参考消息报道，中国2007年由狂犬病引发的死亡人数上升至3300人。当前控制狂犬病是当务之急，应采取“管、免、灭”为主的综合性防治措施。目前应用狂犬病疫苗接种是预防狂犬病的有效方法。本文就狂犬病疫苗的发展、国内外主要疫苗使用情况及新型疫苗的进展作一综述。 疫苗的研制与改进创新 100多年来，全世界应用固定毒种发展了多种人用狂犬病疫苗，由最初的神经组织疫苗到现代的细胞培养疫苗。神经组织疫苗接种反应大，免疫原性低。现代疫苗接种剂量及针次少，接种反应低，
免疫效果不断提高。纵观疫苗的发展，1882年巴斯德（Pasteur）从牛脑分离到一株狂犬病病毒，将其在家兔脑内连续传90代。该病毒传代至50代时的潜伏期已由原来的15天缩短为固定的7天，并且毒力也减弱，称为固定毒［4］。将感染后7天发病的兔脊髓取出，在室温空气中干燥，后发现病毒的毒力很快降低，一般干燥15天后可完全减弱。1885年，巴斯德首次对一名被疯狗严重咬伤60小时后的9岁男孩腹部皮下注射神经组织疫苗，连续注射13针，结果该小孩获得了免疫保护。巴斯德这一成功的预防和治疗狂犬病的方法开创了人用狂犬病疫苗的新纪元，引起了医学界的极大重视。此后许多国家对狂犬病疫苗的研制方法进行了许多次改进和创新，主要有：①减毒活疫苗：1887年由匈牙利Hoegyes研制，即将固定毒以稀释法降低毒力。一般开始免疫时，病毒以1/10000稀释，最后以1/100稀释，持续免疫2～3周。这一方法曾在一些国家广泛使用，并证明效果良好。 ②灭活疫苗：1911年由在印度的英国人Semple首创，即将感染的固定毒的羊脑组织研制疫苗。该疫苗主要在非洲和亚洲使用，并一直沿用到20世纪50年代。由于用羊脑研制的疫苗接种反应严重，一般注射14～21针，到20世纪70年代末逐渐被细胞培养疫苗所替代。我国自1949年起，一直使用羊脑研制有的Semple疫苗，1980年停止使用，由原代地鼠肾细胞疫苗取代［5］。国外主要疫苗使用概况为提高疫苗的有效性，减少注射针次、剂量和简化免疫程序，降低不良反应，各国开始研究细胞培养疫苗，目前研制成功各种细胞培养疫苗，并不断改进和提高，得到广泛应用的有如下几种：①人二倍体细胞疫
狂犬疫苗注射须知
狂犬疫苗注射须知 目前，对狂犬病还没有确实有效的手段，注射狂犬疫苗是唯一的治疗方法。因此，如果孩子被狗咬伤，一定要立即到防疫站注射狂犬疫苗。在被咬伤的第一时间，要进行急救措施：用流水冲洗伤口，或者用肥皂，清洁剂冲洗后再用普通水清洗伤口，然后用酒精和碘酒消毒。 按照世界卫生组织（WHO）的分类原则，对Ⅱ类和Ⅲ类伤口病人，要尽可能快的接种抗狂犬病疫苗。对所有Ⅲ类伤口病人和有免疫抑制的Ⅱ类伤口病人，要在伤口周围浸润注射抗狂犬病免疫球蛋白，伤口要延迟缝合。但如果需要免疫球蛋白必须首先使用。同时抗破伤风治疗，抗生素和其他抗感染治疗也要进行。 暴露后免疫的疫苗要注射5个剂量，分别在当天，第3天，第7天，第14天，第28天进行。使用狂犬疫苗的主要目的是尽可能快的产生保护性抗体，使病毒在进入中枢神经系统之前被中和。对于儿童，一定要选择高效快速的狂犬病疫苗。 常见不良反应： 1.过敏反应：如出现皮疹，过敏性休克，过敏性紫癜，出现血管神经性水肿和神经 系统反应。出现上述反应应立即就诊。 2.一般接种疫苗后24小时内，注射局部可出现红肿，疼痛，发痒，一般不需处理， 即可自行缓解。 3.全身性反应可有轻度发热，无力，头痛，眩晕，关节痛，肌肉痛，呕吐，腹痛等， 一般不需处理，即可自行消退。 禁忌：由于狂犬病是致死性疾病，暴露后接种疫苗无任何禁忌。 注意事项： 1.以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者，患慢性疾病者，有癫痫史者，过敏体 质者，哺乳期，妊娠妇女。 2.接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。 3.忌饮酒，浓茶等刺激性食物及剧烈运动。 4.抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白不得与疫苗使用同一注射器，不得在同侧肢 体注射。 患者姓名：性别：年龄： 注射起始日期： 备注：本须知每次注射必带，请严格按照注射时间进行接种，如不按时间进行接种所发生的一切后果由病人自行承担。
狂犬病疫苗的研制
狂犬病及其疫苗的研制过程 摘要：目的应用Vero细胞研制人用精制狂犬病疫苗。方法应用Vero细胞经转瓶或生物反应 器培养制备人用精制狂犬病疫苗。结果各项质控指标均符合WHO 和中国生物制品规程标准, 经 Ⅰ期临床观察疫苗是安全的。结论用Vero细胞生产的狂犬病疫苗产量大, 效价高, 不良反应 少, 且能进行工业化生产。 关键词：狂犬病病毒疫苗 Vero细胞 狂犬病是一种自然疫源性疾病, 是由狂犬病毒引起的所有温血动物都易感的人兽共患性疾病, 一旦发病, 100%死亡。唯一有效的预防手段就是及时注射狂犬疫苗。我国每年需要600万人份左右的狂犬病疫苗。但是我国现行的原代地鼠肾细胞培养狂犬病疫苗。生产工艺落后, 生产效率低, 特别是疫苗的稳定性差, 免疫失败的例子很多, 尽管1994 年开始浓缩3～5 倍, 一定程度上解决了疫苗稳定性差的问题, 但浓缩后的副反应比较严重。所以研制和生产国际上已得到广泛承认和推广的Vero细胞疫苗已势在必行。 狂犬病即疯狗症，又名恐水症，是一种侵害中枢神经系统的急性病毒性传染病，所有温血动物包括人类，都可能被感染。它多由染病的动物咬人而得。一般认为口边出白色泡沫的疯狗咬到传染，其实猫，白鼬，浣熊，臭鼬，狐狸或蝙蝠也可能患病并传染。患病的动物经常变得非常野蛮，在唾液里的病毒从咬破的伤口进入下一个病人。狂犬病从一个人传到另外一个人极为少见，患狂犬病的人类患者多数会发病身亡。 狂犬病病毒对神经系统有强大的亲和力，病毒进入人体后，主要沿神经系统传播和扩散，病毒侵入人体后先在伤口的骨骼肌和神经中繁殖，这称为局部少量繁殖期，此期可长可短，最短为72小时，最长可达数周、数月甚至更长。病毒在局部少量繁殖后即侵入神经末梢，沿周围神经以每小时3mm的速度向中枢神经推进，到达脊髓后即大量繁殖，24小时后遍布整个神经系统。以后病毒又沿周围神经向末梢传播，最后到达许多组织器官，如唾液腺、味蕾、角膜、肌肉、皮肤等，由于头、面、颈、手等部位神经比较丰富，病毒易于繁殖，再加上离中枢神经较近，故这些部位被咬伤后发病者较多，潜伏期也较短；伤势越严重，也越容易发病。病毒在中枢神经中主要侵犯迷走神经核、舌咽神经核和舌下神经核等。这些神经核主要支配吞咽肌和呼吸肌，受到狂犬病病毒侵犯后，就处于高度兴奋状态，当饮水时，听到流水声，受到音响、吹风和亮光等刺激时，即可使吞咽肌和呼吸肌发生痉挛，引起吞咽和呼吸困难。 导致狂犬病的病原体是弹状病毒科狂犬病病毒属的狂犬病病毒（Rabies Virus）。完整的狂犬病病毒呈子弹形，长度大约为200纳米左右直径为70纳米左右。整个病毒由最外层的脂质双分子层外膜、结构蛋白外壳和负载遗传信息的RNA分子构成。目前普遍认为狂犬狂犬病说明及防治病病毒有四个不同的血清型。狂犬病病毒对不利环境的抵抗力非常弱，在表面活性剂、消毒剂如甲醛、升汞、碘酒还有酸碱环境下会很快失去活性，并且对热和紫外线极其敏感。 人用狂犬病疫苗既往种类较多，现今国内外多使用细胞培养疫苗。我国现在使用的有精制VERO细胞狂犬病疫苗和精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗，浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗已禁用。狂犬病疫苗人用精制VERO细胞狂犬病疫苗及精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗均为轻度混浊白色液体，久放形成可摇散的沉淀，含硫柳汞防腐剂。 1材料和方法 1.1细胞及其培养
…狂犬病疫苗常见问答
周围养宠物的朋友越来越多，关于狂犬病疫苗的问题经常被问起。下面这些问题你遇到过吗？知道处理的规范吗？ 1. 狂犬病疫苗有哪些种类？各有什么不同？ 我国现在使用的有精制VERO 细胞狂犬病疫苗和精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗；均为灭活疫苗。除去狂犬病疫苗以外，对于严重动物咬伤的患者，还需要注射狂犬病抗血清和狂犬病免疫球蛋白（HRIG），这两种药物属于被动免疫制剂，用于中和狂犬病毒，以获得快速的保护作用。 狂犬病抗血清的主要成分是免疫球蛋白，狂犬病抗血清和狂犬病免疫球蛋白有时可看作同义词，但是二者的来源不同。 抗血清属异种血清，纯度不是很高，不少人有过敏反应，故必须先做皮试；如果是阳性，只能用脱敏疗法少量多次注射，费时长，有可能引起血清病，副作用重。HRIG 的来源具有同源性，无过敏反应，故不要做皮试，安全性可靠、效价高、稳定性好、冻干品效期可达三年，除偶尔发生局部疼痛和低热外，无血清病和其他不良反应，但价格较贵。 2. 什么时候需要同时接种狂犬疫苗和抗毒血清，有那些注意事项？ 暴露级别高的要打。 按照接触方式和暴露程度将狂犬病暴露分为三级。接触或者喂养动物，或者完好的皮肤被舔为I 级。裸露的皮肤被轻咬，或者无出血的轻微抓伤、擦伤为Ⅱ级。单处或者多处贯穿性皮肤咬伤或者抓伤，或者破损皮肤被舔，或者开放性伤口、粘膜被污染为Ⅲ级。 确认为Ⅱ级暴露者且免疫功能低下的，或者Ⅱ级暴露位于头面部且致伤动物不能确定健康时，按照Ⅲ级暴露处置。 判定为Ⅲ级暴露者，暴露后疫苗免疫必须合并抗血清进行。在受伤当天注射疫苗的同时用抗狂犬病血清（40IU/kg 体重）或狂犬病免疫球蛋白（20IU/kg 体重）在被咬伤的局部浸润注射和肌内注射。 凡联合使用抗狂犬病血清或免疫球蛋白者，必须在疫苗全程注射完毕后，再加强注射2～3 针疫苗，即在全程注射后第15、75 天或第10、20、90 天分别加强注射1 针。 3. 正在接受计划免疫接种的儿童可否接种狂犬病疫苗？ 可以打。 正在进行计划免疫接种的儿童可按照正常免疫程序接种狂犬病疫苗。接种狂犬病疫苗期间也可按照正常免疫程序接种其他疫苗，但优先接种狂犬病疫苗。 4. 狂犬疫苗必须在被狂犬或可疑狂犬咬伤24 小时以内接种才有效吗？ 原则上是接种越早效果越好。 只要在疫苗生效前，也就是疫苗刺激机体产生足够的免疫力之前人还没有发病，疫苗就可以发挥效用，对暴露已数日数月而因种种原因一直未接种狂犬疫苗的人，只要能得到疫苗，也应与刚暴露者一样尽快给予补注射，争取抢在发病之前让疫苗起作用，这时，前一针或前两针的接种剂量应当加倍。 5. 没按流程注射疫苗，晚了一天或几天怎么办，要重新按流程打吗？
狂犬病免疫学
2011年2月，WHO最新发布了《疫苗接种的免疫学基础丛书，第17分册：狂犬病(The Immunological Basis for Immunization Series，Module 17: Rabies）》，现将其中的《第2章：狂犬病的免疫学》全文翻译如下： 2.1 临床疾病的预防 狂犬病与其他传染病相比最独特之处，就是在暴露于病毒之后，如能及时实施暴露后预防（PEP），仍能防止临床疾病的出现，即使病人以前未接种过疫苗。WHO推荐的PEP包含三部分内容：（a）对伤口进行清洁、冲洗、消毒等处理；（b）依据不同的治疗方案和给药途径，在28至90天的期间内接种疫苗；（c）所有三级（严重）暴露病人应在接种第一针疫苗的同时或之后一周内注射狂犬病毒免疫球蛋白（RIG）。暴露于狂犬病毒的后果取决于多种因素，包括：暴露位置及严重程度，进入伤口的病毒量及其型别（基因型或生物型），以及接种是否及时、是否严格遵照WHO关于PEP的建议。病人的先天免疫（基础免疫系统产生的非特异抗病作用）和适应性免疫（高度特异，系统的细胞和体液免疫）都参与发挥保护作用以预防狂犬病的发生。 除了对伤口的一些物理和化学处理措施以外，PEP主要的免疫学目的是中和并清除暴露时侵入病人体内的狂犬病毒。为达此目的，需要以最快速度增加狂犬病毒中和抗体（RVNA）的数量。因此，一个关键问题是，保护性免疫反应应当能确保尽快产生直接针对狂犬病毒G 蛋白的RVNA。RVNA水平几乎总是能在初次接种后的7至14天之间达到足以被检测到的浓度（适应性或主动免疫）。不过，由于人狂犬病无例外地是致命的，疫苗接种方案中尽早接种免疫球蛋白(RIG)（被动免疫）的目的是提供补充的保护作用，尤其是对于严重和/或多处受伤的病人。 2.2 狂犬病疫苗 自从30年前开始开发以来，细胞培养和基于鸡（鸭）胚的狂犬病疫苗（CCV）已证明对于预防人狂犬病高度有效，包括用于暴露前预防性接种（PrEP）和与RIG联合用于PEP。CCV的投产是一项重大进展，特别是其质量明显优于在一个世纪以前用受感染动物脑
人用狂犬病疫苗Vero细胞制备标准操作规程
目的：制定和规范Vero细胞制备的程序，保证生产用细胞质量。范围：人用狂犬病疫苗生产用细胞的制备。 责任：细胞组全体人员对本规程实施负责。 程序： 1．材料 名称规格 1.1MEM 6L/瓶400ml/瓶1.2精制小牛血清400ml/瓶 1.33%谷氨酰胺100ml/瓶50ml/瓶1.4庆大霉素溶液（1万单位/ml）200ml/瓶50ml/瓶1.57.5%碳酸氢钠溶液400ml/瓶50ml/瓶1.60.02%EDTA溶液400ml/瓶 1.775%乙醇溶液 1.83%甲酚皂溶液 1.90.1%新洁尔灭溶液 1.100.85%生理盐水溶液 1.11注射用水（本室自制） 1.12二甲基亚砜 以上液体配制方法各自液体配制标准操作程序编号： 2．设备 2.1转瓶机45瓶/台 2.24℃冰箱1台 2.3-20℃组合式冰库1个
2.437℃孵箱1台 2.537℃恒温室 2.6不锈钢止血钳子规格：20cm 16cm 2.7液氮罐 2.8不锈钢工作台 2.9不锈钢边台 2.10不锈钢双层车 2.11喷灯及管道 2.12不锈钢盒子大小 2.13倒置显微镜1台 2.14乙醇罐 2.15大不锈钢盒 2.16小不锈钢盒 2.17栓盒 2.18安瓶封口器 2.19不锈钢单层车 3．器具 3.1吸管 1 ml 2ml 5ml 10ml 3.2吸耳球1ml 10ml 3.3250ml 瓶 3.4500ml 瓶 3.5100ml 瓶 3.6方瓶、大方瓶 3.73L瓶 3.810L瓶 3.9安瓶 3.10分液管道
3.11中试管架 3.12青瓶10ml 3.13废液缸 3.16方瓶不锈钢盒 4．辅助材料 4.1灭菌纱布 4.2硫酸纸 4.3绳 4.6无毛布 4.7胶布 4.8剪刀 4.9裁纸刀 4.10封口膜 4.11砂锯片 4.12二连管（球） 4.13记号笔 4.14方瓶架 4.15高压灭菌指示卡 4.16镊子 4.17脱脂棉 4.18细胞计数板 5．操作步骤 5.1生物反应器用细胞的制备（以制备900ml细胞悬液为例） 5.1.1细胞的复苏 5.1.1.1物品准备 5.1.1.1.14号栓、翻帽栓的准备 从干燥室取出20个4号栓，装入铺好无毛布的饭盒内，从干燥室取出20个翻帽栓，
狂犬病病毒培养技术研究进展
狂犬病病毒培养技术的研究进展 狂犬病作为一种几乎100%致死的人兽共患传染病，对人类的危害已经存在了4000多年，至今仍无有效的治疗药物，可行的控制策略只有暴露前免疫和暴露后预防。其中暴露前免疫主要是针对动物而言，因为人的狂犬病来源于动物，只要动物的狂犬病免疫预防有效，可完全控制人狂犬病的发生；而暴露后预防主要用于人，因为人一旦被带毒动物咬伤，必须及时进行全程的暴露后预防才能防止感染狂犬病病毒。 不论是暴露前免疫，还是暴露后预防，都离不开安全、有效、廉价的疫苗。人和兽用狂犬病疫苗的发展，都依赖于病毒培养技术的不断进步，尤其是微载体、发酵技术和无血清培养基的广泛应用，把狂犬病病毒的增殖滴度提高到了一个新的水平，同时降低了生产成本，从而使高质量的细胞纯化疫苗逐渐占领市场。 无论是传统的体内培养技术，还是现在的细胞培养技术，以及新型的细胞发酵和生物反应器，目前都广泛应用于狂犬病病毒的实验室研究或疫苗生产。本文主要就狂犬病病毒培养技术的发展和新技术的应用现状综述如下。 1 体内培养技术 体内培养技术利用了狂犬病病毒的嗜神经特性，具有敏感性好的优点，可以提高病毒检测的阳性率，而且易于操作，适用于不具备组织培养条件的实验室。其中，小鼠脑内接种是实验室最常用的狂犬病诊断和病毒培养技术之一，其他动物如大鼠、羊、兔等，过去主要用于狂犬病神经组织疫苗的生产。 禽胚胎培养技术主要是利用鸭胚和鸡胚进行狂犬病病毒培养，如鸡胚传代致弱的Flury-HEP、Flury-LEP和Kelev毒株。 1.1 脑内培养技术 小鼠脑内接种是最常用的狂犬病病毒脑内培养技术，最早用于狂犬病野毒株的分离培养是在1925年[5]。1955年，该技术开始用于疫苗生产，Fuenjalida和Palacios用新生鼠脑制备出人用组织疫苗（SMBV），该疫苗曾在南美洲使用了40多年，最终因使用后会引起严重的神经综合症而被迫停产[1]，但是小鼠脑内接种技术却一直延用至今。目前，该技术已成为病毒分离、毒力测定及中和试验等的常用方法，所用动物一般为小鼠，乳鼠对狂犬病病毒脑内接种的敏感性高于幼鼠和成年鼠[6]。小鼠中，以瑞士白化鼠（Swiss albino）为首先品种，该品种小鼠在实验室饲养容易，对狂犬病病毒高度敏感，但迄今尚未发现任何对狂犬病病毒具有遗传抗性的小鼠品系，因此也可使用其他品种的小鼠。实验室一般不采用野生灰鼠或家鼠，因为其野性较大，人工饲养困难。狂犬病脑内接种试验周期长，通常需观察21天，且成本较高，操作技术性强，鉴于此，有的实验室已改用细胞（如小鼠成神经瘤细胞和BHK细胞等）代替小鼠进行试验。
兽用狂犬病疫苗研究进展
兽用狂犬病疫苗研究进展 孙招金，陈晶，梁红茹 （华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２） 中图分类号：￥８５２．６５９．６文献标识码：Ａ文章编号：１００５—８５６７（２００８）０５—０００７—０２ 狂犬病是人类最古老的疾病之一，是由狂犬病病毒引起的一种人畜共患病，病死率几乎高达１００％。目前，狂犬病尚无有效的治疗方法，及时接种疫苗是预防该病的最有效措施之一。狂犬病病毒宿主范围广，几乎所有的温血动物均易感，但犬是该病毒的主要宿主，在携带和传播狂犬病过程中起主要作用。据报道，狂犬病分布于世界１００多个国家，全世界每年因狂犬病死亡的人数达５５０００人，绝大多数病例发生在发展中国家，其中主要在亚洲。２００７年１１月１２日，我国卫生部召开新闻发布会，介绍中国人狂犬病发病数仅次于印度，居全球第二，成为世界上狂犬病流行最严重的国家之一。 近年来，我国人狂犬病疫情持续上升，疫情波及范围不断扩大。从１９５０－２００４年我国人狂犬病的死亡总人数约为１０３２００例，２００５年全国共报告狂犬病死亡２５４５例，２００６年卜９月全国累计报告发病数己达２２５４例，比前一年同期上升了２９．７９６。根据中国卫生部公布的最新数字显示，２００７年全国共报告狂犬病死亡病例２７９５例，较２００６年（２６９２例）上升了３．６８％，高居３７种法定传染病报告病死数之首。而我国人狂犬病约９４％由家犬引起，６％由猫引起，另外还有为数不多的由猪和鼠引起【¨。我国人狂犬病主要发生在农村，其主要原因是我国对于犬狂犬病监管力度不足，特别是农村从犬传染给人的事件连续发生嘲。从病毒的传染源入手，对动物接种兽用狂犬病疫苗是预防人狂犬病最好的办法，兽用狂犬病疫苗的发展已逐渐引起人们的关注。 １国外兽用狂犬病疫苗的研究进展 １．１兽用灭活疫苗早在１８８４年，Ｐａｓｔｅｕｒ就应用由狂犬病固定毒制成的疫苗给５０多只犬进行预防接种试验，结果发现这些犬能抵抗狂犬病病毒的攻击。１９１１年，Ｓｅｍｐｌｅ开始应用石炭酸灭活的神经组织疫苗，该疫苗对犬和其他动物都有较好的免疫 收稿日期：２００８－０４－１６保护力，免疫期长达１年左右，但是疫苗中含有髓磷酯结合的蛋白物质，接种后有约０．０５％的动物出现神经性麻痹。限于经济和技术条件，直至２００５年前仍有不少国家使用这种疫苗，其中印度是主要的制造、应用和出口这种疫苗的国家阅。现在国外生产的兽用狂犬病灭活疫苗是由狂犬病疫苗株在体外细胞上繁殖，灭活后与佐剂按一定比例制备。常用的生产用疫苗株有１９４０年Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ等分离，鸡胚传代培养得到的Ｆｌｕｒｙ株以及由巴斯德派生的ＣＶＳ、ＰＭ、Ｋｉｓｓｉｎｇ、ＳＡＤ、Ｕｎｕｋｏｖｏ、Ｋｅｌｅｖ等毒株：常用繁殖病毒的细胞有仓鼠肾细胞（ＢＨＫ一２１）、犬肾、猪肾细胞和鸡胚成纤维细胞等；常用的免疫佐剂有氢氧化铝、磷酸铝。近年来，灭活疫苗的研制取得很大的进步。已经研制出ＩＳＣＯＭ（免疫刺激复合物）、角鲨烯、脂质体等新型疫苗佐剂，克服了传统铝佐剂难以吸收、注射部位反应大等缺陷：灭活剂由９一丙内酯、ＢＥＩ（二乙烯亚胺）和维生素Ｃ取代了传统的甲醛和石炭酸灭活，克服了传统灭活剂灭活不彻底和副作用大等不足；疫苗的剂型也由传统的液体型发展到了冻干型，使狂犬病灭活疫苗的效力变得更加稳定。目前，国外较好的狂犬病灭活苗品牌有“英特威”、“维克”、“梅里亚”。狂犬病灭活苗可与犬瘟热、犬细小病毒病、犬传染性肝炎、犬副流感、犬腺病毒病和犬钩端螺旋体病等疫苗联合使用，预防犬的上述常见传染病。 １．２兽用活疫苗目前弱毒疫苗主要有１９３５年美国从狂犬病患犬的脑中分离到一个狂犬病街毒株经仓鼠肾细胞、鸡胚、牛肾细胞和猪肾细胞传代后育成的ＳＡＤ苗、ｋｅｌｅｖ苗；１９４０年Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ等从狂犬病致死的一个女孩脑内分离到的Ｆｌｕｒｙ鸡胚低代苗（也称ＬＥＰ）和Ｆｌｕｒｙ鸡胚高代苗（也称ＨＥＰ）；１９８５年日本利用来源于兔传代的固定毒病原株，经鸭胚传２９４代，再经鸡胚细胞培养及 万方数据
狂犬病免疫球蛋白使用方法
狂犬疫苗 狂犬疫苗是人用精制VERO细胞狂犬病疫苗及精制地鼠肾细胞，狂犬病疫苗均为轻度混浊白色液体，久放形成可摇散的沉淀，含硫柳汞防腐剂。 1用药剂量 狂犬疫苗接种流程 VERO细胞狂犬病疫苗及精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗规格为1ml/安培,效价≧2.5IU。巴斯德精制VERO细胞狂犬病疫苗规格为0.5ml/安培,效价≧2.5IU。 规程：咬伤后预防 0,3,7,14,30 无咬伤预防 0,7,21 具体方法 (1)咬伤后预防。对一般咬伤，即皮肤无流血的轻度擦伤、抓 伤或破损皮肤被舔舐，应于0(第1天，注射当天)、3(第4天，以下类 推)、7、14、30天各注射该疫苗1安瓿，儿童用量相同。对严重咬伤，除应按上述方法注射该疫苗外，应于0、3天注射加倍量疫苗，并在0 天注射疫苗的同时用抗狂犬病血清(40IU/kg体重)或狂犬病免疫球蛋白 (20IU/kg体重)，浸润咬伤局部和肌内注射。凡联合使用抗狂犬病血清 或免疫球蛋白者，必须在疫苗全程注射完毕后，再加强注射2～3针疫苗，即在全程注射后第15、75天或第10、20、90天分别加强注射1针。 凡注射疫苗 1天前注射抗狂犬病血清、慢性病人如肝硬化、免疫缺陷症、服用免疫抑制药物、老人、严重营养不良和咬伤后48小时才 开始免疫等7种情况，均应于初种时加2～3倍疫苗量，分部位注射，才 有较好的免疫效果。此外，有的虽属轻伤，但侵入的病毒量较多或伤及 富含神经部位，亦可出现潜伏期短而单用疫苗无效病例。世界卫生组织 重新建议，不论任何部位的破皮咬伤均应合用抗血清。
(2)对未咬伤健康者预防注射，可按0、7、21天注射3针。1 年后加强1针，以后每隔1～3年再加强1针。 (3)该疫苗供上臂三角肌肌内注射。儿童应在大腿前内侧区肌内 注射。 (4)使用前将疫苗振摇成均匀悬液。 2接种人群 可分为两种 :一为咬伤后预防，二为无咬伤预防。 ⑴咬伤后 (暴露后)预防。任何可疑接触狂犬病毒，如被动物(包括 貌似健康动物)咬伤、抓伤(即使很轻的抓伤)，皮肤或粘膜被动物舔过，都必须接种本疫苗。 ⑵无咬伤 (暴露前)预防。在疫区有咬伤的高度危险或有接触 病毒机会的工作人员，如疫区兽医、动物饲养管理人员、畜牧人员、屠宰人员、狂犬病毒实验人员、疫苗制造人员、狂犬病人的医护人员、岩洞工作人员，以及与其他哺乳动物接触频繁人员及严重疫区儿童、邮递员、去疫区旅游者，均应用狂犬病疫苗进行预防接种。[1] 3伤口处理 (1)就地及时(最好是在咬伤后几分钟内)对伤口进行清洗消毒，对预防狂犬病具有非常重要的意义。先用3%-5%肥皂水或0.1%新洁尔灭或再用清水反复洗涤15分钟；对较深的伤口，用注射器伸人伤口深部进行灌注清洗，做到全面彻底。再用75%乙醇消毒，继而用浓碘酊涂擦。局部伤口处理愈早愈好，即使延迟1～2天甚至3～4天也不应忽视局部处理，此时如果伤口已结痂，也应将结痂去掉后按上法处理。 (2)伤口不宜包扎、缝口，开放性伤口应尽可能暴露。如果伤口 必须包扎缝合(如侵入大血管)，则应保证伤口已彻底清洗消毒并已按上述方法使用抗狂犬病血清。 (3)必要时使用抗生素或精制破伤风抗毒素。