微生物形态观察
实验一微生物形态观察
一、实验目的
1.认识细菌、放线菌、酵母菌和真菌的基本形态特征和特殊结构
2.巩固显微镜的使用方法，重点掌握油镜的使用方法
3.学习微生物画图法
二、实验原理
1.细菌基本形态：细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：
球状、杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌和螺旋菌。
2.细菌的特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
3.真菌的特征结构：菌丝和菌丝变态
4.放线菌的特征结构：孢子
5.微生物菌落：不同微生物的菌落有自己的特征，如大小、表面、透明度、外形、高度、
边缘、光泽、乳化、硬度、气味等。
三、实验用品
实验仪器：普通光学显微镜、镜油、镜头纸、擦镜液
装片：8个细菌装片：金黄色葡萄球菌、八叠球菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、破伤风梭菌、固氮菌、螺菌
5个霉菌装片：黑根霉、黑根霉接合孢子、曲霉、青霉、毛霉
1个酵母菌：出芽酵母
1个放线菌
微生物单菌落划线平板：大肠杆菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、泾阳链霉菌、青霉
四、实验步骤
1.调节显微镜，熟悉显微镜使用方法，清楚显微镜使用规则。
2.观察细菌、真菌等装片，手绘6幅图，注意选择拍照无法拍出较好效果的装片绘图，另
外选择6张装片拍照。
3.观察菌落平板并记录。
五、实验结果
1.见附图
具体说明：（按照绘图顺序排列）
1)霉菌：体积比较大，结构比较复杂，可以看到很多菌丝结构。
黑根霉接合孢子：有的刚开始接合，有的已接合成圆形，可见较透明的丝状菌丝、假根，表面有星状突起的孢子。
黑根霉：染成蓝色，较透明。假根和菌丝成丝状，孢子囊有球形，图示为伞盖形，其中的孢子已经排出，可以看出孢子囊柄、孢子囊孢子。
曲霉：10*40已可看清，但为了进一步看清孢子囊结构，我采用了10*100倍放大。染成褐色，中间较深边缘较浅，可以看出从内到外放射状分布着顶囊、初生小梗、次生
小梗和分生孢子。图示是为横切，所以没有显示分生孢子梗，在其他视野可见染色
稍浅的分生孢子梗。
青霉：染成蓝色，装片边缘部分可以看到清楚的扫帚状，可以看到分生孢子（成串状）、小梗和分生孢子梗
毛霉：有无隔、多核、分枝状菌丝，但由于切片横向切开了孢子囊，无法看到其下部的孢囊梗，可见囊内很多球形的孢子，染成褐色，边缘染色深，中间略浅。
2)细菌：个体非常小，用油镜放大1000倍看才能看出结构。分球菌、杆菌、螺旋菌，
有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等特殊结构。
螺菌：弧形，染成红色，两头染色深，中间稍浅，将孔径光阑稍调小可见很细微的鞭毛。巨大芽孢杆菌：杆状，单个或链状排列，有的细胞中间可见椭圆形芽孢。
金黄色葡萄球菌：个体微小，10*100也看不太清，很多细胞聚集成葡萄状。
破伤风梭菌：有的细胞没有芽孢，呈梭形染色较浅半透明。有芽孢的细胞呈蝌蚪状，芽孢很大位于菌体顶端，芽孢边缘染色深，中间稍浅。
褐球固氮菌：图为示荚膜装片。菌体呈圆形，周围有无固定形态的荚膜。
3)放线菌：成散乱的丝状分布，菌丝无隔膜，没有成型的细胞核。
4)酵母：图示可见出芽。菌体呈椭球状，较小。
六、实验总结
本次实验中学习了显微镜的使用尤其是油镜的用法，观察了不同细菌、真菌的显微结构，学习了实验作图的方法。
在观察中，要注意物镜的选择，如对于较大的真菌，为了看到整体情况就可以用40倍物镜，而要观察某一部分精细结构的时候就要选择油镜。观察前要对要观察的装片有一定了解，比如看金黄色葡萄球菌的时候，应该知道它是很小的，这样在调节的时候心里有数，才不会把观察到的杂质当成细胞。调节过程中不要忘记调节孔径光阑，一般从低倍换到高倍是孔径光阑需调大，当觉得对比度不够时可将其适当调小。使用油镜不用每一次都擦洗镜头，在实验结束时认真擦洗即可。图像清晰时也可适当调节细准焦螺旋，这样能更清楚地了解不同层面的结构特征，特别是看霉菌的孢子囊，通过调节，同一个孢子囊可以从表面看到中央，这样的观察就比较有立体感。
同样的菌液有不同的结构，看一张装片时要多看几个视野，才能更全面地了解它的特点。而且在制片过程中一些结构会遭到破坏而产生一些本来不该出现的图像，要合理分析和对比来确认观察到的图像是否和实际符合，是属于特殊结构还是制片造成的。
作图时尽量选择那些拍照无法很好地反应结构特点的，一般选择如金黄色葡萄球菌这样的小细胞，这样作图比较简单而且更有意义，我一开始就作了一幅青霉的图片，其实完全可以拍照的。这就要求自己一开始对各个装片有大概的认识，至少应该知道霉菌大而复杂，拍照更能如实反应其结构，而细菌小而简单，手绘特别是加上细准焦螺旋调节的手绘，能更好地反应其结构。
观察菌落时注意从多个角度观察，如高度、正反面，特别是看反面颜色的时候要注意减去培养基的颜色，很多真菌的菌落正反面颜色不该是一样的，可是由于培养基颜色影响看似没有太大差别，这时就要自己分析和查阅资料，看其颜色应该是什么样子。另外观察时一定不要打开来看，否则孢子会飞出来，而且外界的孢子也可能进入而造成污染。
用完显微镜一定要复原，如果临时离开要记得把显微镜的灯关掉。
七、参考文献
1. 陈金春陈国强微生物学实验指导清华大学出版社2005
附图：