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血细胞常用的染色方法

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导言：在学习完显微镜使用以及血涂片制备课程之后，我们借助于显微镜观察到了细胞，但是显微镜下细胞都是圆形的，如何将这些细胞区分开呢？我们可以借助于染色技术将血细胞染上颜色，这样我们就能在显微镜下观察到它们的形态了

【板书】

五、血细胞常用的染色方法

1、瑞氏染色法

【讲解策略及方法】：图示法讲解

瑞氏染色法是临床检验血细胞检查中最常用的染色技术，简要介绍其历史再从试剂组成、染色原理、染色方法、染色结果、影响因素等方面进行讲解。

试剂组成：酸性染料伊红E-和碱性染料美蓝M+

染色原理：化学的亲合作用+物理的吸附作用（配合图例进行讲解）

染色方法：涂片、染色、水洗

染色结果：结合图例进行讲解

影响因素：pH

讲解中应注意重点突出，对染色原理、染色结果做重点讲解。影响因素是本段的难点，可以对蛋白质的化学结构进行分析，加深学生理解。其余略讲。

2、吉姆萨染色法

【讲解策略及方法】：简单介绍。

几种常用的染色方法

几种常用的染色方法 1．美蓝染色法??? 在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法?? （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3．抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS 液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法? 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液? 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ?②碱性复红溶液? 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ?③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 ?7.结晶紫福尔马林荚膜染色法

细胞化学染色

细胞化学染色检验前言细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。瑞氏染色法：瑞氏染色液的配制：瑞氏染料（粉）1g 纯甲醇60ml 将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。制配好的染液保存于温室中一周便可应用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。缓冲液的配制及其作用: 1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml 1% Na2HPO420ml 加蒸馏水至1000ml PH 6.4~6.8 过氧化物酶染色一、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使

联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。二、过氧化物酶染色法染液的配制：（1）联苯胺（Benzidine）0.3g 95%乙醇（Ethye alcohol）99ml 36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside）1ml (0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。) （2）30%mlml过氧化氢溶液： 30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。三、结果判断：细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。单核系细胞：原单核细胞呈阴性反应，幼单核细胞及成熟单核细胞多呈弱阳性反应。淋巴系．巨核系．红系细胞均呈阴性反应。POX反应主要用于白血病的鉴别。（一）过氧化物酶染色阳性急性原粒细胞性白血病（M1、M2型）、急性早幼粒细胞性白血病（M3型）急性粒单细胞性白血病（M4型）、急性单核细胞性白血病（M5型）、急性红白血病（M6型）均可呈阳性反应，阳性率＞3%。M3型阳性反应最强，M5型反应最弱。（二）过氧化物酶染色阴性急性淋巴细胞性白血病、急性巨核细胞性白血病（M7型）成阴性反应。阳性率＜3%。部分M1型、M5a型可呈阴性反应，M6型的幼红细胞成阴性反应。中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色一、原理：细胞内碱性磷酸酶能分解磷酸萘酚AS-BI为磷酸和芳基萘酰胺，后者与

细胞染色方法总结

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤 PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！ annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。 JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。 JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

常见气体的检验方法

常见气体的检验方法知识小结：

火焰上方；（3）用内壁上沾有澄清石灰水的烧杯罩在火焰上。烧杯内壁有水珠。石灰水变浑浊。氮气将燃着的木条放在瓶中。燃着的木条熄灭。氯化氢将湿润的蓝色石蕊试纸放在瓶口。通入硝酸银溶液。变红。有白色的沉淀。氨气将湿润的红色石蕊试纸放在瓶口。变蓝。水将水蒸气接触无水硫酸铜粉末。无水硫酸铜粉末由白色变为蓝色。例题分析： 1、为了鉴别甲烷、氢气和一氧化碳三种无色气体，分别把它们燃烧后的产物依次通过右图装置。

（1）如果甲装置中无明显变化，乙装置中澄清石灰变浑浊，则燃烧的气体是。（2）如果甲装置中白色粉末变蓝，乙装置中澄清石灰水无变化，则燃烧的气体是。（3）如果装置中白色粉末变蓝，乙装置中澄清石灰水变浑浊，则燃烧的气体是。 2、现有六瓶无色气体，它们分别是氧气、氮气、氢气、二氧化碳、一氧化碳、甲烷，设计实验鉴别六瓶气体。简要写明实验方法、实验现象及结论。 3、某无色混合气体中可能含有一氧化碳、二氧化碳、氢气中的一种或几种。把混合

气体依次通过澄清石灰水、灼热的氧化铜和无水硫酸铜时，依次出现石灰水变浑浊，氧化铜由黑变红，无水硫酸铜由白变蓝的现象（假设每步反应完全）。由此可以推断：（1）混合气体中一定含有，其理由是。（2）混合气体中可能含有，其理由是。如果要确定它是否存在，需进行以下操作：。提高练习： 1、区别一氧化碳与二氧化碳的方法是，除去一氧化碳中混有的二氧化碳的方法是，除去二氧化碳中混有一氧化碳的方法是。

A：将气体通过氢氧化钠溶液；B：将气体通过灼热的氧化铜粉末； C：将气体通过澄清石灰水；D：将气体通过灼热的木炭。 2、有一混合气体可能由二氧化碳、一氧化碳、氢气、氮气组成，按下列顺序进行实验：（1）将混合气体通过澄清石灰水，石灰水变浑浊；（2）将余下气体点燃，火焰呈淡蓝色；（3）燃烧后的产物通入紫色石蕊试液中，试液不变成红色。混合气体中一定有；一定没有；可能含有。写出（1）（2）两个实验中有关化学反应方程式：。 3、为了鉴别氢气、一氧化碳、甲烷三种气体，

几种常用的染色方法精编版

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几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3．抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法

（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。

初级检验技师《临床血液学检验》年练习题第四章血细胞化学染色的临床应用

2017 第四章血细胞化学染色的临床应用一、A1 1、采用过氧化物酶染色鉴别急性粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病的主要鉴别点是 A、急性粒细胞白血病阳性颗粒呈弥散分布，急性淋巴细胞白血病阳性颗粒呈局灶分布 B、急性粒细胞白血病阳性颗粒较多且粗大，急性淋巴细胞白血病阳性颗粒较小且细小 C、急性粒细胞白血病阳性颗粒较小且细小，急性淋巴细胞白血病阳性颗粒较多且粗大 D、白血病性原始粒细胞呈阴性反应，原始、幼稚淋巴细胞均呈阳性反应 E、白血病性原始粒细胞呈阳性反应，原始、幼稚淋巴细胞均呈阴性反应 2、过氧化物酶染色呈阴性的细胞是 A、早幼粒细胞 B、中性中幼粒细胞 C、淋巴细胞 D、嗜酸性粒细胞 E、单核细胞 3、过氧化物酶染色阳性反应程度最强的是 A、中性分叶核粒细胞 B、嗜酸性粒细胞 C、嗜碱性粒细胞 D、单核细胞 E、淋巴细胞 4、过氧化物酶染色结果显示“颗粒较粗，局灶分布”，结果判断应为 A、（－） B、（＋） C、（＋＋） D、（＋＋＋） E、（＋＋＋＋）

5、属于细胞化学染色的是 A、瑞氏染色 B、革兰染色 C、墨汁染色 D、抗酸染色 E、铁染色 6、过氧化物酶染色中，被初生态氧氧化的物质是 A、酒石酸 B、重氮盐 C、过碘酸 D、四甲基联苯胺 E、亚铁氰化钾 7、抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的是 A、慢性淋巴细胞白血病 B、淋巴肉瘤 C、尼曼-匹克病 D、多毛细胞白血病 E、B淋巴细胞 8、骨髓增生程度极度活跃，原始细胞占30%，这些原始细胞的化学染色结果分别是：POX（＋），ALP积分5分，PAS部分细胞呈颗粒状阳性，α-NBE（-），据此，下述最可能的选择是 A、急性粒细胞性白血病 B、慢性粒细胞性白血病 C、急性单核细胞性白血病 D、急性淋巴细胞性白血病 E、急性早幼粒细胞白血病 9、鉴别慢性淋巴细胞白血病与多毛细胞白血病首选的细胞化学染色是 A、过氧化酶染色 B、耐L-酒石酸酸性磷酸酶染色 C、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 D、非特异性酯酶加氟化钠抑制 E、苏丹黑染色 10、过氧化物酶染色强阳性的是 A、多毛细胞白血病 B、急性单核细胞白血病 C、急性早幼粒细胞白血病 D、急性红白血病 E、急性淋巴细胞白血病 11、铁染色常用于哪种疾病的诊断 A、缺铁性贫血

几种常用的染色方法修订稿

几种常用的染色方法 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法? 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液? 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ?②碱性复红溶液? 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ?③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。

免疫荧光细胞化学染色方法

免疫荧光细胞化学染色方法一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。二、荧光抗体染色方法（一）直接法 1．染色切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。 2．洗片倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或 pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1min，除去盐结晶。 3．用50%缓冲（0.5mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0～9.5）甘油封固、镜检 4．对照染色 ①正常免荧光血清染色，如上法处理切片，结果应为阴性。 ②染色抑制试验（一步法）：将荧光抗体和未标记的抗体球蛋白或血清（相同）等量混合，如上法处理切片。结果应为阴性。为证明此种染色抑制不是由于荧光抗体被稀释所致，可用盐水代替

未标记抗血清，染色结果应为阳性。此法结果较二步法稳定。③类属抗原染色试验，前面已作叙述。直接法比较简单，适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原，特异性高而敏感性较低。（二）间接法（1）切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。（2）再滴加间接荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。对照染色：①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清，再用上法进行染色，结果应为阴性。②抗原对照：即类属抗原染色，亦应为阴性。③阳性对照。间接法中上述方法称双层法（Double Layer Method）。另一种称夹心法，即用未标记的特异性抗原加在切片上先与组织中之相应抗体结合，再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上，而间接地显示出组织和细胞中抗体的存在，方法步骤如下： ①切片或涂片固定后，置于染色湿盒内。 ②滴加未标记的特异性抗原作用切片于37℃，30min。

统计学常用检验方法

统计中经常会用到各种检验，如何知道何时用什么检验呢，根据结合自己的工作来说一说： t检验有单样本t检验，配对t检验和两样本t检验。单样本t检验：是用样本均数代表的未知总体均数和已知总体均数进行比较，来观察此组样本与总体的差异性。配对t检验：是采用配对设计方法观察以下几种情形，1，两个同质受试对象分别接受两种不同的处理；2,同一受试对象接受两种不同的处理；3，同一受试对象处理前后。 u检验：t检验和就是统计量为t,u的假设检验，两者均是常见的假设检验方法。当样本含量n较大时，样本均数符合正态分布，故可用u检验进行分析。当样本含量n小时，若观察值x符合正态分布，则用t检验（因此时样本均数符合t 分布），当x为未知分布时应采用秩和检验。F检验又叫方差齐性检验。在两样本t检验中要用到F检验。从两研究总体中随机抽取样本，要对这两个样本进行比较的时候，首先要判断两总体方差是否相同，即方差齐性。若两总体方差相等，则直接用t检验，若不等，可采用t'检验或变量变换或秩和检验等方法。其中要判断两总体方差是否相等，就可以用F检验。简单的说就是检验两个样本的方差是否有显著性差异这是选择何种T检验（等方差双样本检验，异方差双样本检验）的前提条件。在t检验中，如果是比较大于小于之类的就用单侧检验，等于之类的问题就用双侧检验。卡方检验是对两个或两个以上率（构成比）进行比较的统计方法，在临床和医学实验中应用十分广泛，特别是临床科研中许多资料是记数资料，就需要用到卡方检验。方差分析用方差分析比较多个样本均数,可有效地控制第一类错误。方差分析(analysis of variance,ANOVA)由英国统计学家，以F命名其统计量，故方差分析又称F检验。其目的是推断两组或多组资料的总体均数是否相同，检验两个或多个样本均数的差异是否有统计学意义。我们要学习的主要内容包括单因素方差分析即完全随机设计或成组设计的方差分析（one-way ANOVA）：用途：用于完全随机设计的多个样本均数间的比较，其统计推断是推断各样本所代表的各总体均数是否相等。完全随机设计（completely random design）不考虑个体差异的影响，仅涉及一个处理因素，但可以有两个或多个水平，所以亦称单因素实验设计。在实验研究中按随机化原则将受试对象随机分配到一个处理因素的多个水平中去，然后观察各组的试验效应；在观察研究（调查）中按某个研究因素的不同水平分组，比较该因素的效应。两因素方差分析即配伍组设计的方差分析（two-way ANOVA）：用途：用于随机区组设计的多个样本均数比较，其统计推断是推断各样本所代表的各总体均数是否相等。随机区组设计考虑了个体差异的影响，可分析处理因素和个体差异对实验效应的影响，所以又称两因素实验设计，比完全随机设计的检验效率高。该设计是将受试对象先按配比条件配成配伍组（如动物实验时，可按同窝别、同性别、体重相近进行配伍），每个配伍组有三个或三个以上受试对象，再按随机化原则分别将各配伍组中的受试对象分配到各个处理组。值得注意的是，同一受试对象不同时间（或部位）重复多次测量所得到的资料称为重复测量数据

血细胞化学染色检验

血细胞化学染色检验发表时间：2011-05-13T17:08:37.940Z 来源：《中外健康文摘》2011年第5期作者：张辉[导读] 中性、嗜酸性较细胞及单核细胞胞质能将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，生成蓝色颗粒。张辉 (黑龙江省林甸县中医院 166300) 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)5-0146-02 【关键词】血细胞检验染色 (一)过氧化物酶(POX)染色中性、嗜酸性较细胞及单核细胞胞质内含过氧化物酶(POX)，能将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，生成蓝色颗粒。 1.酶活性增高可见于再生障碍性贫血、急性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、放射病，嗜碱性粒细胞在慢性粒细胞白血病时可出现阳性。 2.酶活性减低可见于肿瘤、MDS、链球菌感染、风湿热等。 (二)中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞中的碱性磷酸酶(NAP)能使试剂中的成分产生一系列化学反应，形成棕黑色颗粒定位于胞质中。胞质中出现灰色到棕黑色颗粒为阳性反应，视反应强度可分为阴性反应，+～4+。由此可计算出NAP阳性细胞的百分率和阳性积分值。 1.NAP积分增高可见于①细菌性感染时，NAP活性明显增高，病毒性或寄生虫性感染时常无明显变化或减低，这有助于感染性质的鉴别；②真性红细胞增多症以及再生障碍性贫血；③类白血病，由化脓性球菌引起的白血病反应；④急性淋巴细胞性白血病；⑤多发性骨髓瘤时，NAP活性显著升高；⑥烧伤、中毒、手术、外伤等。 2.NAP积分降低可见于①慢性粒细胞性白血病时NAP活性明显降低，经治疗病情缓解时活性恢复正常，急变时活性增强，有助于对病情判断；②粒细胞缺乏症、脾功能亢进等疾病；③感染革兰阴性杆菌、结核、病毒感染以及立克次体病等。 (三)酸性磷酸酶染色血细胞中的酸性磷酸F(ACP)在酸性条件下水解试剂中的成分，产生的化学反应形成黑色颗粒定位于胞质中。 1.单核细胞、网状细胞、巨噬细胞、组织细胞中此酶呈阳性反应，有助于急性单核细胞性白血病、组织细胞性淋巴瘤及恶性组织细胞病的诊断。 2.毛细胞白血病时呈阳性反应，且不为左旋酒石酸所抑制，有助于毛细胞白血病的诊断。 3.高雪细胞呈阳性反应尼曼-匹克细胞细胞呈阴性反应，有助于两者鉴别。 (四)特异性酯酶染色特异性酯酶(SE)为粒细胞所特有，能将试剂成分形成不溶性红色沉淀定位于胞质中。急性粒细胞性白血病时，原粒及早幼粒细胞的SE活性显著增强；急性单核细胞性白血病时一般呈阴性反应；急性淋巴细胞性及单核细胞性白血病时均呈阴性反应。 (五)非特异性酯酶染色血细胞中的非特异性酚酶(NSE)能将试剂中的成分形成不溶性的有色沉淀定于胞质中。 NSE主要存在干单核细胞系，从原单核细胞到成熟单核细胞其活性逐渐增强，粒系细胞一般为阴性或弱阳性反应，淋巴细胞系一般呈阴性反应。在急性单核细胞性白血病时呈强阳性反应，但其活性能被氟化钠抑制。急性粒细胞性白血病时，有部分病理可呈弱阳性反应，但其活性不被氟化钠抑制，有助于急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病的鉴别。 (六)糖原染色糖原染色又称过碘酸-雪夫(FAS)反应。过碘酸能将血细胞内的糖原氧化后与雪夫试剂反应形成紫红色化合物定位于细胞质中。胞质中出现红色颗粒或块状物质为阳性反应因细胞不同，其反应程度各异粒系细胞中原始粒细胞多呈阴性反应；早幼粒细胞以下各阶段随细胞成熟，阳性反应增强；红系细胞呈阴性反应；单核细胞呈弱阳性淋巴细胞多呈阴性；巨核细胞及血小板均呈阳性反应按阳性强度计算积分值。 1.鉴别良性与恶性淋巴细胞增生性疾病在良性淋巴细胞增生如传染性单核细胞增多症时，其淋巴细胞PAS阳性反应产物呈细小颗粒状，积分值正常；在恶性增生时如恶性淋巴瘤、急或慢性淋巴细胞性白血病时，其淋巴细胞中常呈粗颗粒或块状红细胞沉淀的阳性反应，积分值增高。 2.鉴别幼红细胞增生的性质在巨幼红细胞性贫血、溶血性贫血时，幼红细胞PAS反应积分值正常；在红血病、红白血病时则呈强阳性反应，积分值增高。 3.鉴别急性白血病的类型原始及幼稚粒细胞PAS反应呈阴性；原始淋巴细胞及幼稚淋巴细胞反应呈颗粒状或块状阳性；原始单核细胞及幼稚单核细胞反应呈弥漫性强阳性。 4.鉴别某些细胞类型如巨核细胞呈强阳性反应，尼曼-匹克细胞呈弱阳性或阴性，李-斯细胞一般为阴性或弱阳性反应。 (七)铁染色骨髓组织中的含铁血黄素(细胞外铁)和幼红细胞中的铁粒(细胞内铁)在酸性溶液中与亚铁氰化钾反应，生成蓝色沉淀定位于含铁部位及胞质中。 1.细胞内外铁消失或减低，见于铁原料摄入降低，铁吸收功能障碍或铁的丢失和消耗过度，使幼红细胞血红蛋白合成量减少或障碍，如临床常见的缺铁性贫血及能引起机体缺铁的相关疾病，如钩虫病、ITP等均能使机体细胞内外铁减少，产生贫血症状。 2.细胞内外铁增多，见于机体造血功能障碍，铁利用和转换能力下降或迟缓，临床常见的疾病有再生障碍性贫血、铁粒幼细胞贫血、骨髓增生异常综合征、溶血性贫血、白血病等。 3.铁染色与血清铁、总铁结合力联合检测，有助于了解机体内铁的动态变化以及铁剂治疗的效果，可评价骨髓代偿造血能力。参考文献

几种常用的染色方法

几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 3．抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 7.结晶紫福尔马林荚膜染色法

数学建模常用各种检验方法及常用方法

数学建模各种检验方法 1.单个总体2 Nμσ的均值μ的检验: (,) 2 σ已知,关于均值的检验用ztest命令来实现. [h,p,ci]=ztest(x,mu,sigma,alpha,tail) 2 σ已知,关于均值的检验用ttest命令来实现. [h,p,ci]=ttest(x,mu,alpha,tail) 2.两个正态总体均值差的检验（t 检验）还可以用t 检验法检验具有相同方差的2 个正态总体均值差的假设。在Matlab 中由函数ttest2 实现，命令为： [h,p,ci]=ttest2(x,y,alpha,tail) 3.分布拟合检验在实际问题中，有时不能预知总体服从什么类型的分布，这时就需要根据样本来检验关于分布的假设。下面介绍2χ检验法和专用于检验分布是否为正态的“偏峰、峰度检验法”。 2 χ检验法 0 H ：总体x的分布函数为F(x) , 1 H : 总体x的分布函数不是F(x). 在用下述χ 2检验法检验假设0 H 时，若在假设0 H 下F(x)的形式已知，但其参数

值未知，这时需要先用极大似然估计法估计参数，然后作检验。偏度、峰度检验 4．其它非参数检验 Wilcoxon秩和检验在Matlab中，秩和检验由函数ranksum实现。命令为： [p,h]=ranksum(x,y,alpha) 其中x，y可为不等长向量，alpha为给定的显著水平，它必须为0和1之间的数量。p返回产生两独立样本的总体是否相同的显著性概率，h返回假设检验的结果。如果x和y的总体差别不显著，则h为零；如果x和y的总体差别显著，则h为1。如果p 接近于零，则可对原假设质疑。 5．中位数检验在假设检验中还有一种检验方法为中位数检验,在一般的教学中不一定介绍,但在实际中也是被广泛应用到的。在Matlab中提供了这种检验的函数。函数的使用方法简单，下面只给出函数介绍。 signrank函数 signrank Wilcoxon符号秩检验 [p,h]=signrank(x,y,alpha)

常用血细胞化学染色原理及应用

常用血细胞化学染色原理及应用 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX） [原理]粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。正常血细胞的染色反应： 1.粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性粒细胞呈阴性反应。 2.单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。 3.红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS） [原理]过碘酸-雪夫又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。正常血细胞的染色反应： 1.粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性,至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强度逐渐增强。嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性反应，阳性物质为大小不一的紫红色颗粒。 2.单核细胞系---原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应。 3.淋巴细胞系---大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。 4.红细胞系----红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。

实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法(详细)

实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。 2、用自来水冲洗5min。 3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。 4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。 5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。 6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。 1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。 3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。如Mueller固定液、Flemming固液、FAA 固定液、Carnoy固定液、Rossman固定液、Altmann固定液、Bouing固定液等。

实验室做细胞常用染色

2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。 3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。如Mueller固定液、Flemming固液、FAA固定液、 Carnoy固定液、Rossman固定液、Altmann固定液、Bouing 固定液等。不同的固定液对细胞的化学成分、酶类及细胞结构固定效果不同。因此，选择合适的固定液是达到固定目的的基础。 (1)4％甲醛-PBS:甲醛是一种气体，其饱和水溶液无色，约含40％甲醛。在很多情况下，甲醛常常产生多聚甲醛的白色沉淀。4％甲醛-PBS使组织变硬速度比乙醇快，并能较好地保存组织的外部形式，固定效果不受制片影响，固定材料可用苏木精和其他合成染料染色。甲醛的穿透力较强，对组织固定均匀，能增强组织的弹性，大标本的固定和保存多用甲醛。甲醛是染色体、线粒体和高尔基体的固定液，在冷冻切片中，甲醛作固定剂具有显著的优点。用40％甲醛水溶液:PBS=1:9配方制备甲醛固定液。 (2)丙酮：丙酮为无色易挥发液体，用纯冷丙酮(4℃)固定细胞内酶效果较佳。 (3)乙醇：乙醇又称酒精，固定血纤维蛋白、色素、弹性纤维、细菌和白细胞等效果优良。无水乙醇或乙醇和醋酸的混合液是固定肝糖原及肌糖原的良好固

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