融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组伪狂犬病毒TK~-_gE~-_VP22 GP5~+的构建

融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒

GP5重组伪狂犬病毒TK -/gE -/VP22GP5+的构建

赵武

1,2

,肖少波1,方六荣1,江云波1,宋云峰1,严琳1,余晓岚1,陈焕春

1*

(11华中农业大学动物医学院动物病毒室,湖北武汉430070;

21广西兽医研究所,广西南宁530001)

关键词:牛疱疹病毒1型V P22;猪繁殖与呼吸综合征病毒;OR F5M 基因;重组伪狂犬病毒中图分类号:Q 786 文献标识码:A 文章编号:1000-8721(2006)01-0062-04

收稿日期:2005-05-16;修回日期:2005-09-12

基金项目:国家自然科学基金(30300257;30400322)和国家/9730项目(2005CB523200)资助。

作者简介:赵武(1965-),男,广西人,壮族,副研究员,博士生。主要从事动物病毒分子生物学与基因工程疫苗研究。E -mail:z haow u168866@1631com

*通讯作者:陈焕春,Tel:86-27-87282608;E -mail:hzauvet @public 1w h 1hb 1cn

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)和伪狂犬病(pseudora -bies,PR)是两种严重危害养猪业的重要病毒性传染病。而引发PR 的伪狂犬病病毒(pseudorabies

v irus,PRV )是构建基因工程疫苗优良的活病毒载体[1]。已有报道将表达猪瘟病毒(hog cholera virus,HCV)囊膜蛋白E1基因的重组PRV(rPRV)二价基因工程疫苗免疫猪后,能同时抵抗HCV 和PRV 的强毒攻击[2],显示了PRV 作为活病毒载体的可行性和/一针防两病0的独特优点。由ORF5基因编码的囊膜糖蛋白GP5是猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome v irus,PRRSV )最主要的免疫保护性抗原蛋白[3]。而经修饰的ORF5基因(ORF5M,即在其N 端的覆盖表位与中和表位间插入通用型辅助性T 淋巴细胞表位PADRE)编码的GP5具有更好的免疫原性[4]

。因此,ORF5M 基因是研制PRRS 基因工程疫苗的首选靶基因。

牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus 1,BHV -1)VP22具有独特的蛋白转导功能[5],即它能将与之融合的外源蛋白在无任何辅助条件介导下直接跨膜转运进入细胞,并可在细胞间传递,而且被转导进入细胞内的外源蛋白仍保留其原有的生物活性与功能[6-8],从而提高外源蛋白的递呈效率进而提高其免疫原性。已证实将VP22与靶抗原基因融合表达

能显著增强腺病毒载体疫苗的免疫效应[7,8]。因此,将靶基因与VP22融合表达是rPRV 设计中的一种新策略。

此研究以PRV gE 基因缺失标志疫苗株TK -

/gE -/LacZ +为活病毒载体[9],构建了融合表达BHV -1VP22与PRRSV ORF5M 基因的rPRV,以期获得一种可同时预防PRRS 和PR 的二价基因工程疫苗。

首先构建含VP22-ORF5M 融合基因的PRV 转移质粒。采用常规基因操作方法将PRRSV ORF5M 基因与不含终止密码子的VP22基因依次插入到PRV 通用转移载体pIECMV [10]上,使VP22位于ORF5M 的上游并与ORF5M 基因读码框吻合,获得含VP22-ORF5M 融合基因的PRV 转移质粒pIECMV -VP22-ORF5M,经酶切、PCR 鉴定证实构建正确。

为了提高同源重组的效率,将经过Eco RI 消化后的线性化的载体病毒PRV TK -/gE -/LacZ +

基因组与纯化的PRV 转移质粒pIECMV -VP22ORF5M 采用脂质体法共转染IBRS -2细胞。按文献[1]介绍的方法,在PK -15细胞上通过蚀斑试验结合PCR 扩增来筛选及纯化重组病毒。对VP22和ORF5M 基因PCR 扩增均为阳性的重组子,再重复进行3轮蚀

斑纯化,获得的阳性重组子命名为rPRV TK -/gE -/VP22GP5+。

对获得的重组病毒进行鉴定。首先,再进行一轮蚀斑试验,提取重组病毒基因组作模板,采用扩增VP22、ORF5M 和LacZ 基因的3对引物进行PCR 扩增验证重组病毒。引物VP22P1和VP22P2根据B H V -1VP22基因序列设计,可扩增约780bp 的VP22基因;引物ORF5MP1和ORF5M P2根据PRRSV ORF5M 基因序列设计,可扩增约650bp 的

第22卷 第1期2006年1月 病 毒 学 报CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY

Vol.22 No.1

January 2006

ORF5M 基因;引物LacZP1和LacZP2可扩增约430

bp 的LacZ 基因的部分片段。上述引物均由上海生工合成。引物序列为:VP22P1:5c -TTT GAA TT C GCC ATG GCC CGG TTC CAC AG -3c ,VP22P2:5c -T TT GAA T TC CGG CCG GGC CCG CT C GCC -3c ;ORF5MP1:5c -GAA CTC GAG AGT ATG TT G GGG AAA T GC TTG ACC -3c ,ORF5M P2:5c -TTT T CT AGA GAC GAC CCC ATT GT T CCG C -3c ;LacZP1:5c -GAA CTG CCT GAA CTA CC -3c LacZP2:5c -ACT GCA ACA ACG CTG C -3c 。PCR

扩增条件为:95e 5min 后进入循环,95e 1min,退火

温度(VP22为60e ,ORF5M 为57e ,L acZ 为50e )1min,72e 1m in,35个循环后,72e 延伸10min 。结果所有蚀斑均能扩增到约780bp 的VP22片段和约650bp 的ORF5M 片段,而扩增不到约430bp 的LacZ 片段(图1)。载体病毒

TK -/gE -/LacZ +则能扩增出约430bp 的L acZ 片段。

表明构建的rPRV TK -/gE -/VP22GP5+

整合有VP22及ORF5M 基因,

且无载体病毒污染。

图1 重组病毒T K -/gE -/V P22GP 5+的PCR 鉴定

Fig ure 1 Ident ification of the reco mbinant virus T K -/gE -/V P22GP5+by PCR

A.PCR product of VP22gene from TK -/gE -/VP22GP5+;

B.PCR product of ORF5M gene from TK -/gE -/VP22GP5+.

M.DNA marker (DL2000); 1.Positive control (pIECM V -VP22-ORF5M );2.Negative control (T K -/gE -/LacZ +);3.PK -15cel l control;4.

H 2O control;5-13.Recombinant virus TK -/gE -/VP22GP5+.

进一步以地高辛标记的PRRSV ORF5M 基因为探针,与分别用K p n I 、Sal I 酶切的rPRV TK -/g E -/VP22GP5+

基因组以及载体病毒PRV TK -

/

g E -/LacZ +基因组进行Southern blot 杂交。结果发现,K p n I 、Sal I 酶切的rPRV TK -/gE -/VP22GP5+基因组分别在约218kb 和512kb 处出现一条特异性图2 重组病毒TK -/gE -/VP22GP5+

的Southern blot 鉴定

Figure 2 I dentification of t he recombinant virus

T K -/gE -/V P22GP 5+by Southern blot

1.T K -/gE -/LacZ +/K pn ?;

https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html, -/gE -/LacZ +/K pn ?;

https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html, -/gE -/VP22GP5+/S al ?;

https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html, -/gE -/LacZ +

/Sal ?.

的杂交带(图2),大小与预期的相符。而PRV TK -/

g E -/LacZ +基因组无论是用Kp n I 酶切还是用Sal I

酶切均无任何杂交带出现。表明VP22和ORF5M 基因已成功整合到载体病毒的基因组中。

为了解VP22-ORF5M 融合基因在重组病毒中的表达,将rPRV TK -/g E -/VP22GP5+

和PRV TK -

/gE -/LacZ +

分别接种PK -15细胞,产生病变后收集细胞进行处理,以抗PRRSV GP5的多克隆兔血清为一抗进行Western blot 检测。结果发现,rPRV TK -/gE -/VP22GP5+

在大小约为60kD 处出现特异性条带,与预期的VP22-GP5融合蛋白的相对分子质量相当。而PRV T K -/g E -/LacZ +

没有任何特异

性条带出现。证实rPRV TK -/gE -/VP22GP5+能够

表达具有生物活性的VP22-GP5融合蛋白(图3)。 按常规方法测定rPRV T K -/gE -/VP22GP5+和载体病毒PRV T K -/gE -/LacZ +在IBRS -2及PK -15细胞上的TCID 50值。在IBRS -2细胞上,rPRV

TK -/gE -/VP22GP5+及PRV T K -/gE -/LacZ +的

TCID 50各为10-

710

/011ml 及10-712

/011ml;在PK -15细胞上,则各为10-618

/011ml 与10-619

/011ml 。

结果表明,VP22与ORF5M 融合基因的插入不影响病毒在体外培养细胞中的增殖。

许多国家利用PRV 基因缺失标志疫苗已成功

#

63# 1期 赵武等:融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组伪狂犬病毒T K -/gE -/VP22G P5+的构建

图3重组病毒T K-/gE-/V P22GP5+

的Western blot检测

Figure3T he detect ion of V P22-GP5ex pr ession of the

recombinant v irus T K-/gE-/VP22GP5+

by W estern blo t

M.Protei n marker; https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html,-/gE-/VP22GP5+; https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html,-/gE-/ LacZ+.

根除了PR[11]。本研究所用的载体病毒为目前国际上通用的gE基因缺失表型(gE-)的PRV基因缺失标志疫苗株T K-/gE-/LacZ+。在同源重组操作时,可利用载体PRV gE基因中插入的LacZ基因的单一Eco R?酶切位点来消化载体病毒基因组,以提高重组效率。通过同源重组将VP22-ORF5M融合基因置换掉插入载体病毒gE基因中的L acZ基因。因此,所构建的rPRV不影响基于gE基因缺失所建立的配套区别PRV野毒感染或疫苗免疫的gE-ELISA鉴别诊断试剂盒的应用。

在我们先前的研究中,发现单独表达PRRSV ORF5基因的rPRV诱导的免疫反应低下,并且检测不到中和抗体[12]。Ostrow ski等[13]研究发现由于PRRSV ORF5基因的中和表位紧邻的上游存在一个对中和表位产生覆盖效应的覆盖表位,从而导致不能诱导产生较早及较强的中和抗体。这一研究结果揭示了表达PRRSV ORF5的基因工程疫苗诱导的抗体水平不高的原因,并为发展高效的基因工程疫苗提供了新思路。江云波等[4]据此对ORF5基因进行了修饰,获得了结构优化的免疫原性更好的修饰型ORF5基因(ORF5M),可诱导机体产生较早及更强的中和抗体。本研究正是以ORF5M为靶基因,为进一步增强其免疫原性,以极具开发应用潜力的蛋白转导相关蛋白B H V-1VP22作为免疫佐剂,构建了融合表达B H V-1VP22与ORF5M基因的rPRV。为了检测其有效性,将计划进行该rPRV在实验动物及本动物猪的免疫及攻毒保护试验。

本研究以PRV g E基因缺失标志疫苗株TK-/ g E-/LacZ+为活病毒载体,以PRRSV ORF5M为靶基因以及以BHV-1VP22为免疫增强佐剂分子,成功构建了融合表达VP22与ORF5M的rPRV TK-/ gE-/VP22GP5+。Western blot证实其能在体外有效表达VP22-GP5融合蛋白。而且VP22及ORF5M融合基因的插入不影响病毒的增殖。这些研究结果为下一步研制PRRS和PR二价基因工程疫苗奠定了前期工作基础,同时也为其它疾病的高效基因工程疫苗研究提供了思路。

参考文献:

[1]M ettenleiter T C.Pseudorabies(Aujes z ky.s disease)virus:S tate

of the art[J].Vet Res,2000,33(1):99-115.

[2]H oott van Iddekinge B J L,de Wind N,Wensvoort G,et https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html,-

parison of the protective efficacy of recombinant pseudorabi es virus-es against pseudorabies and classical sw ine fever in pigs;infl uence of different promoters on gene ex pres sion and on protection[J].Vac-cine,1996,14:6-12.

[3]W eiland E,Wieczorek-Krohmer M,Kohl D,et al.M onoclonal an-

tibodies to the GP5of porcine reproductive and respiratory syn-drome virus are more effective i n virus neutralization than monoclon-al antibodies to the GP4[J].Vet M icrobi ol,1999,66:171-186.

[4]江云波,方六荣,肖少波,等.修饰的ORF5基因增强猪繁殖与

呼吸综合征DNA疫苗的体液免疫[J].中国兽医学报,2005, 25(1):1-3.

[5]Harms J S,Ren X,Oliveira S C,et al.Disti n ctions between bovine

herpesvirus1and herpes simplex virus type1VP22tegument pro-tein s ubcellular as sociations[J].J Virol,2000,74:3301-3312..

[6]El liott G,O.Hare P.Intercell ular trafficking and protein delivery

by a h erpesvi rus structural protein[J].Cell,1997,88(2):223-233.

[7]W ills K N,Atencio I A,Avanzini J B,et al.Intratumoral spread

an d increased efficacy of a p53-VP22fusion protei n expressed by a recombinant adenovirus[J].J Virol,2001,75:8733-8741. [8]Cheng W F,Hung C F,Hsu K F,et al.Cancer immunotherapy

using Sindbis virus replicon particles encoding a VP22-anti gen fusion [J].Hum Gene T her,2002,13:553-568.

[9]刘正飞,陈焕春,何启盖,等.伪狂犬病病毒Ea株TK-gE-gp63-

突变株的构建及其生物学特性研究[J].微生物学报,2002,42

(3):370-374.

[10]方六荣.猪繁殖与呼吸综合征/自杀性0DNA疫苗与活病毒载

体疫苗研究[D].[博士学位论文],武汉:华中农业大学, 2003.

[11]M ettenleiter T C.Immunobiol ogy of pseudorabies(Aujes z ky.s

disease)[J].Vet Immunopathol,1996,54:221-229. [12]方六荣,肖少波,江云波,等.表达猪繁殖与呼吸综合征病毒

(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒T K-/gG-/GP5+的构建及其生物学特性初步探讨[J].病毒学报,2004,20(3):249-254.

[13]Ostrow ski M,Galeota J A,Jar A M,et al.Identification of neu-

tralizing and nonneutralizing epitopes in the Porci n e Reproductive and Respiratory S yndrome Virus GP5ectodomain[J].J Virol, 2002,76:4241-4250.

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64

#病毒学报22卷

Constru ction of the Recombinant Pseudorabies Virus TK -/gE -/VP22GP5+

Expressing GP5of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Fused with VP22of Bovine Herpesvirus 1

ZHAO Wu 1,2,XIAO Shao -bo 1,FANG Liu -rong 1,JIANG Yun -bo 1,SONG Yun -feng 1,

YAN Lin 1,YU Xiao -lan 1,CHEN Huan -chun 1*

(11L aboratory o f A nimal Virology ,College of Ve terinary M edicine ,Huaz hong Agricultu ral Univer sity ,

W uhan 430070,China ;21Gua ngx i Ve terinary Resear ch Institute ,N anning 530001,China )

Abstract:To construct the b-i v alent genetic engineering vaccine against pseudorabies virus(PRV)and porcine re -productive and respiratory syndrome virus (PRRSV),the modified PRRSV ORF5gene (ORF5M )and the

VP22g ene of bovine herpesv irus 1(BH V -1),w hich encodes VP22protein and has been demonstrated to ex hibit the unusual protein transduction property,w ere inserted into a PRV universal transfer vector pIECMV by turns 1A recombinant v irus transfer vector pIECM V -VP22ORF5M possessing VP22-ORF5M fusion gene was g enerated 1T he recombinant virus transfer vector pIECM V -VP22ORF5M co -transfected the IBRS -2cells w ith

PRV T K -/gE -/L acZ +

genomic DNA digested by Eco R ?using liposome method 1Based on homologous recom -bination,the recombinant virus w as generated and then purified by the plaque assay and PCR amplification 1Af -ter three rounds of plaque purification,the recombinant virus was further confirmed by PCR,Southern blot and

Western blot 1A recom binant PRV(rPRV)TK -/gE -/VP22GP5+ex pressing VP22-GP5fusion protein w as con -structed 1The results of T CID 50tests show ed that the insertion of the foreign genes had no influence on the prop -agation of rPRV in IBRS -2or PK -15cells 1T he construction of rPRV T K -/g E -/VP22GP5+provides a basis for further study of b-i valent genetic engineering vaccines against PRRSV and PRV,and that this strateg y may also

be useful to develop more efficient genetic eng ineering vaccines ag ainst other pathog ens 1Key words:bovine herpesvirus 1VP22(B H V -1VP22);porcine reproductive and respriatory syndrome virus (PRRSV);modified ORF5g ene (ORF5M);recombinant pseudorabies virus(rPRV)

*

Corresp ond ing author :CHEN H uan -chu n,Tel:86-27-87282608;E -mail :hz auv et @pu blic 1w h 1hb 1c n

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65# 1期 赵武等:融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组伪狂犬病毒T K -/gE -/VP22G P5+的构建

2006锦鲤疱疹病毒病的研究进展_刘宗晓

１前言 锦鲤疱疹病毒（ＫＨＶ），属于疱疹病毒科，是双链ＤＮＡ病毒，有囊膜，与其同科的ＣＨＶ、ＣＣＶ之间有免疫交叉反应［１］。ＷａｌｔｚｅｋＴＢ等［２］通过比较疱疹病毒的主要囊膜蛋白基因、衣壳蛋白基因、ＤＮＡ聚合酶基因、螺旋酶基因４个基因，认为，ＫＨＶ与ｃａｒｐｐｏｘｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ（Ｃｙｐｒｉｎｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ１，ＣｙＨＶ－１）和ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｏｆｇｏｌｄｆｉｓｈ（Ｃｙｐｒｉｎｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ２，ＣｙＨＶ－２）十分相近，而与ｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｖｉｒｕｓ（Ｉｃｔａｌｕｒｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ１，ＩｃＨＶ－１）也有在相近之处，因此建议将ＫＨＶ隶属于ＣｙＨＶ－３。目前ＫＨＶ的主要囊膜蛋白基因、衣壳蛋白基因、ＤＮＡ聚合酶基因、螺旋酶基因、胸苷激酶基因及某些未知功能的蛋白基因的部分或完整的核苷酸序列已有报道，但关于ＫＨＶ的其他基因的研究未见报道，其完整的基因组序列及基因图谱还有待于进一步研究和完善。ＫＨＶ的感染谱较小，仅感染锦鲤和鲤鱼；死亡率高达８０％￣１００％，且很快死亡；研究表明，该病毒的致病性具有水温依赖性，该病毒的最适生活温度为１８￣２７℃，其发病水温主要在２３￣２８℃之间；ＫＨＶ的潜伏期长，一般为１４天，甚至更长。 ２国内外流行现状 １９９８年在以色列的ＭａｇａｎＭｉｃｈａｅｌ地区的首次暴发锦鲤疱疹病毒病，但以色列官方宣称这次发作是来源于欧洲，也许是从英国非法进口的鱼及渔场设备所致。在１９９８年夏至１９９９年春的发病导致渔场主损失肉用鲤鱼６００ｔ，出口损失近４００万美元，但直到１９９９年才确认ＫＨＶ为其真正的病原。自１９９８年以来该病在英国、欧洲大陆、美国及以色列等国家和地区暴发流行。日本也于２００３年１０月首次证实了该病的存在［４］。自１９９８年以来，ＫＨＶ在英国每年夏天都要流行一次。另外，１９９８年南非也有此病的报道。 ２００１年４月在以色列的Ｈａｚｏｒｅａ地区再次暴发流行ＫＨＶ，且由于这次ＫＨＶ的暴发流行，ＫＨＶ被列入以色列水生动物疾病名录，作为以色列必须向官方报告的水生动物疾病。但目前还不能明确判断ＫＨＶ的危害在生产实践中所占的地位。随后该病在美国、德国、中国台湾均有报道，据分析该病的流行和蔓延主要通过外贸出口及观赏鱼类的交流所造成。 ２００２年４月，广东省某养殖场进口的锦鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）出现了暴发性疾病，死亡率高达８０％以上，刘荭［５］等人用ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ证实了本次流行的主要病原可能是ＫＨＶ，同时伴有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的继发感染。究其原因，ＫＨＶ可能是从进口的观赏锦鲤中传入我国的。这提示，ＫＨＶ随着进口锦鲤进入我国的风险极大，并且有可能对我国养殖锦鲤及锦鲤出口贸易造成严重的影响。 ３临床症状 ＫＨＶ感染锦鲤后，临床症状主要表现为：停止游泳；鱼皮肤上出现苍白的块斑与水泡；鳃出血，产生大量的粘液或组织坏死；鳞片有血丝；鱼眼凹陷，类似寄生虫感染和细菌感染，出现症状后２４￣４８ｈ死亡；有些鱼表现神经症状，极小的刺激能引起较强烈的反应，然后是不活跃期［６］。 ４诊断方法研究进展 锦鲤疱疹病毒病的临床表现与许多普通的细菌感染和寄生虫侵袭相似，这些现象会掩盖病毒所致的危害。不能单纯通过观察鱼的外部特征或临床表现来进行决定性的判断，因此，确诊还需必要的实验室诊断。目前的诊断方法有细胞培养分离技术、电镜技术、ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、原位杂交技术及ＬＡＭＰ法等，聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和细胞培养技术是ＯＩＥ推荐的诊断方法。 ４．１常规的临床诊断 如果出现下列情况，再结合临床特征，则可怀疑ＫＨＶ的感染： １）仅有鲤鱼（包括锦鲤）及其普通变种能被感染 锦鲤疱疹病毒病的研究进展 刘宗晓刘荭江育林 （华中农业大学水产学院，湖北武汉，４３００７０）（深圳出入境检验检疫局动植中心，广东深圳，５１８００１）作者简介：刘荭（１９７１－），女，毕业于华中农业大学，博士，高级兽医师，已发表文章４０多篇。

中东呼吸综合征疫情防控方案设计(第二版)

中东呼吸综合征疫情防控方案（第二版） 中东呼吸综合征（Middle East Respiratory Syndrome，简称为MERS）是2012年9月发现的，由一种新型冠状病毒引起的发热呼吸道疾病。世界卫生组织将该冠状病毒命名为中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus，简称为MERS-CoV）。 为适应防控形势的变化，进一步做好防控工作，切实维护人民群众身体健康和生命安全，根据中东呼吸综合征疫情形势和研究进展，特对《中东呼吸综合征疫情防控方案（第一版）》进行修订，形成了本方案。 一、目的 及时发现和报告中东呼吸综合征病例，规疫情调查和密切接触者管理，防止疫情扩散蔓延。 二、适用围 适用于尚未发生中东呼吸综合征持续社区传播疫情时各地的监测与防控工作。本方案将根据疫情形势的变化和评估结果，及时更新。 三、防控措施 （一）加强组织领导，高度重视中东呼吸综合征疫情的防控工作。各级卫生计生行政部门在本级政府领导下，加强对本地疫情防控工作的指导，组建防控技术专家组，按照“预

防为主、防治结合、科学指导、及时救治”的工作原则，组织有关部门制订并完善相关工作和技术方案等，规开展中东呼吸综合征防控工作。 各级卫生计生行政部门负责疫情控制的总体指导工作，落实防控资金和物资。 各级疾控机构负责开展监测工作的组织、协调、督导和评估，进行监测资料的收集、分析、上报和反馈；开展现场调查、实验室检测和专业技术培训；开展对公众的健康教育与风险沟通。 各级各类医疗机构负责病例的发现与报告、诊断、救治和临床管理，开展标本采集工作，并对本机构的医务人员开展培训。 （二）加强中东呼吸综合征病例的监测。各级各类医疗机构、各级疾控机构负责开展中东呼吸综合征病例的发现和报告工作（相关定义见附件1）。 1．病例发现。 （1）建立健全中东呼吸综合征病例的监测体系。各级 各类医疗机构的医务人员在日常诊疗活动中，应提高对中东呼吸综合征病例的诊断和报告意识，对于不明原因发热病例，应注意询问发病前14天的旅行史或可疑的暴露史，了解本人或其密切接触的类似病人近期有无赴沙特、阿联酋、卡塔尔、约旦等中东国家以及韩国等其他近期有中东呼吸综合征病

XX医院中东呼吸综合征冠状病毒感染疫情防控应急预案

XXXX医院 中东呼吸综合征冠状病毒感染疫情防控应急预案 版本：2014版 编制：医务部日期：2014年01月20日 审核：日期：2014年01月22日 批准：日期：2014年01月22日 生效日期：2014年01月22日

1.目的 根据《XX市中东呼吸综合征医疗救治应急预案》要求，为有序、有效地开展我院防控工作，特制定本预案。 1.1早期发现疑似病例； 1.2规范监测、疑似病例发现、报告、隔离、转院等工作； 1.3防止疾病交叉感染。 2.适用范围 2.1本预案适用于在上级卫生行政部门宣布中东呼吸综合征应急医疗救 治工作结束之前，XXXX医院发现疑似病例时立即启动应急预案； 2.2在上级卫生行政部门指导下，随流行病学认知及疫情形式变化适时更新； 2.3XXXX医院承担预检分诊、接诊疑似病例的任务，并按预案制定的流程和措施及时隔离、转诊病人；市级定点医院：XX市中心医院、XX市第一人民医院、XX市妇幼保健院、XX市第二人民医院、XX市第三人民医院、XX市第五人民医院；市级重症病例定点医疗机构：XX市中心医院、XX市第一人民医院。 3.相关法规制度 《XX市中东呼吸综合征医疗救治应急预案》 《中东呼吸综合征病例诊断程序》 《中东呼吸综合征病例诊疗方案》 《中华人民共和国传染病防治法》 《突发公共卫生事件应急条例》 《XXXX医院感染管理工作规范性文件汇编》（含《医疗机构消毒技术规范》、《医院空气净化管理规范》、《医疗废物管理条例》、《医疗卫生机构医疗废物管理办法

》、《医院隔离技术规范》、《医务人员手卫生规范》） 《首诊负责制度》 《预检分诊制度》 4.定义 中东呼吸综合征、疑似病例、临床诊断病例、确证病例参见《中东呼吸综合征病例诊疗方案》。 5.组织机构 防控应急领导小组，小组办公室设医务部。 组长： 副组长： 组员： 6.工作职责与程序 6.1工作原则 6.1.1预防为主、立足准备：坚持“预防为主”的工作方针，积极组织落实应对中东呼吸综合征散发、流行的各项准备工作； 6.1.2指挥有力、协调有序：坚持院应急领导小组及上级卫生行政部门的统一指挥，积极协调各科室落实应对准备工作和应急处理工作； 6.1.3加强能力、落实制度：加强人员、技术和物资准备，严格落实相关规章制度。 6.2病例发现与报告 6.2.1加强门急诊和发热门诊的管理，实行24小时值班制：XXXX医院中

2012鲤鱼患锦鲤疱疹病毒病的诊断和防控_唐绍林

近几年来我国养殖鲤鱼的锦鲤疱疹病毒病危害十 分严重，全国主要鲤鱼养殖地区都有流行，池塘养 殖、网箱养殖到小型湖泊养殖等各种养殖模式发病 率、死亡率都很高。由于对该病的宣传力度不够，绝 大多数鲤鱼养殖业者和基层鱼病防控单位甚至还不知 道有这种疾病或知之甚少，鲤鱼患该病后错误地当成 细菌性烂鳃病、鳃霉病和肠炎病来治疗，结果是越治 疗死亡越严重，造成的经济损失非常大。本文将该病 在国内的流行特点、现场初步诊断和防控方法做一介 绍，希望对大家有所帮助。 一、鲤鱼患锦鲤疱疹病毒病的主要症状 发病前和发病前期池鱼常常有几天“暴食”的现 象，就是特别能吃，发病死鱼的同时吃料很凶，渔民 称“该吃的吃、该死的死”。但发病严重塘吃食不好。 病鱼在水面停滞或漫游，有的体色严重发黑、在 池塘边缘少量聚堆、停滞，渔民称“散边”。发病后 期鱼体色暗淡、灰白色，中后期体表出现花斑，特别 是无鳞的框镜鲤在水中明显，有鳞的鲤鱼不明显。小 部分体表呈不规则的块状出血，之后逐渐连成一片， 成大面积出血，小部分框鲤、锦鲤都有这种症状。 把病鱼捕捞上来检查，本病的特征性症状就是 “缩头”，渔民也叫“骷髅头”、“眍?眼”，就是眼睛 内陷。有的鱼不明显。检查鳃部，鳃丝呈局部性溃 烂，与养殖鲤鱼常见的细菌性烂鳃呈大面积浅表溃烂 不同。不烂处的鳃丝外观正常，并挂泥，养殖户称 “花鳃”或“黑鳃”。 解剖典型病鱼见脾脏肿大，发黑；肾脏肿大，像 含水；肝脏颜色鲜艳，出血或是淤血。很大一部分发 病鱼肠道内壁呈均匀的大面积出血，肠内有黄色脓状 物。有的病鱼只有肠道发红的单一症状，没有其他症 状，以全鳞鲤鱼为多和不在适宜水温发病时为多，有 时又同时有其他症状。具体图见彩中插２。 二、鲤鱼锦鲤疱疹病毒病的流行特点 锦鲤疱疹病毒病的发病适宜水温约１８～３０℃， 在辽宁每年有两个发病阶段，一是６月初至７月末， 大约２个月；二是约８月２５日－９月３０日。每当夏初 雨水多、长期低温的年份，水温长期处在鱼类发病适 温，发病更严重。当７月末水温超过３０℃，不论是发 病初期，还是发病高峰期的池塘死亡量马上大幅度下 降，很快自愈，停止死亡。原来烂鳃严重的病鱼鳃丝 溃烂部分脱落，伤口愈合（图见彩中插２）。但１０月初处于发病高峰阶段的池塘，水温继续下降以后不能完全恢复，在北方越冬期间死亡量会很高，特别是越冬期和春季融冰期如用药不当死亡量会更大。近两年发病期明显延长，在辽宁有时甚至全年发病。只有养殖的框镜鲤、全鳞鲤、锦鲤发病，从夏花鱼种到成鱼都可发病，同池或湖泊中的鲢、鳙、草鱼、鲫、团头鲂、傻鲫（鲤鲫杂交鱼）、黄颡鱼、乌鳢等未见发病。六七月份以２龄鱼为主，即成鱼池发病严重。八九月份以当年鱼种为主，２龄成鱼也发病。病程明显，正常情况下全鳞鲤鱼病程约１５天，六七天时达到死亡高峰，高峰持续约２～３天，池塘养殖死亡率一般１％～３０％；框镜鲤病程约２５天，第１２、１３天达到死亡高峰，高峰持续约２～３天，死亡率一般１０％～７０％。网箱养殖比池塘养殖死亡率高。如在辽宁７月下旬发病、发病后水温马上升高到３０℃以上的池塘，死亡率很低，一般不到５％，如在６月份发病，发病期间水温处于病毒繁殖的适宜温度，再加之用药不合理死亡率会很高，有的死亡率９０％以上。发病池塘水质好，不并发鳔炎、寄生虫等其他疾病，治疗及时，不用刺激性强的药物，水温升高到接近３０℃前发病等情况下病程短、死亡率低；反之，病程长、死亡率高。传染性强。从各个池塘发病时间上看，有明显的相邻池塘接连发病、逐渐向远方传染的现象。鱼种、网具、水源等都可以造成传染。同一来源的鲤鱼种在不同养殖场养殖相继发病，专业网队在发病塘拉完网后，再拉其他鱼塘（轮捕），拉哪一个池塘哪个池塘就发病。一张旋网在发病池塘使用后再到其他塘使用，其他塘就发病。有的池塘注完共用的河道水后发病。发病后的鱼具有免疫性。池塘春天得过锦鲤疱疹病毒病后，不重复感染，一般秋天不再得该病。秋天鱼种得病以后，一般次年春天不再发病。有的渔场春天有几个池塘患病，就只有一个池塘没得，可到了秋天别的池塘不再发病，只有没发过病的一个池塘发病。三、鲤鱼患锦鲤疱疹病毒病的现场诊断在养殖场和一般鱼病诊所没有对锦鲤疱疹病毒检测条件的情况下，可以根据该病的流行特点和发病鱼的症状对该病进行初步诊断。如果池塘只有鲤鱼发病，其他种类的鱼不发病，发病水温在１８～３０℃， 鲤鱼患锦鲤疱疹病毒病的诊断和防控 2012.12 61

韩国中东呼吸综合征MERS疫情

韩国中东呼吸综合征（MERS）疫情 防控态势简报 Situational Report on Middle East Respiratory Syndrome Prevention and Control （第6期） 中国疾病预防控制中心 2015年6月18日

（第6期） 一、韩国疫情进展 （一）新增病例情况 1、6月17日10时-6月18日10时，新增3例确诊病例（1名男性、2名女性），年龄35-79岁。其中，第163例病例于6月5日-9日期间与第119例病例共住牙山忠武医院同一病房；第164例曾与第75例、第80例共住三星首尔医院同一病房；第165例是江东庆熙大学医院的病人，目前正接受流行病学调查。 此外，6月16日确诊的第162例病例（男，33岁）为三星首尔医院的放射科医生，他曾在6月11日-12日为第72、80、135和137例确诊病例做过移动式X光检查。 2、6月17日10时至6月18日10时，新增4例死亡病例，分别为：第31例（男，69岁，结核病/高血压）、第42例（女，54岁，支气管扩

张/高血压）、第77例（男，64岁，高血压/哮喘/坏死性胰腺炎）和第82例（女，82岁，白内障两眼手术）。 （二）总体疫情 1、截止2015年6月18日，韩国共报告MERS确诊病例165例（较昨日新增3例），死亡23人（较昨日新增4人）（参见图1）。其中，二代病例30例（包括输入中国的病例），三代病例122例，四代病例10例，另2例病例感染来源及代数不详。共有4个省份（首尔、京畿道、忠清南道、大田）10个区域的15家医院报告了确诊病例（参见表1，图2）。 目前有118人（72%）住院治疗，24人（较昨日新增5人）治愈出院。 165例确诊MERS病例中，包括在医院就医的其它疾病患者77名（47%），家属/探视者58名（35%），医院工作人员30名（18%）。 图1 韩国MERS确诊病例发病曲线（WHO，2015-6-17）

人类疱疹病毒

第二十四章人类疱疹病毒 P310 1学时概述： 1．是一类中等大小有包膜病毒，根据生物学特性可分三个亚科。 3．共同特点 1．球形，20面体，双股DNA，包膜病毒。 2．除EBV外均能在二倍体细胞核内复制，产生明显的细胞病变，核内噬酸性包涵体，形成多核巨细胞。 3．均具有增殖性感染和潜伏性感染，整合感染和先天性感染。 第1节单纯疱疹病毒(HSV) 生物学性状：

1、分两种血清型：HSV-Ⅰ，HSV-Ⅱ 2、核心为两个互相接连的长片段（L）和短片段（S）组成 的双股线状DNA； 3、现认为：HSV包膜表面有10--11种蛋白，其中gB，gD 与病毒感染的吸附有关， gD是两型HSV共同抗原决定簇产生中和抗体能力最强，也是研究亚单位疫苗最佳选择； 4、gC为HSV-1型特异性抗原，gG为HSV-2型特异性抗原，区别两型病毒 5．HSV除血清学分型外，还可根据细胞选择性试验、溴乙烯脱氧尿苷抗性实验、DNA内切酶谱和温度敏感性差异等来分型 6．HSV对动物感染范围相当广泛，常用的实验动物有家兔、豚鼠、小鼠等。 致病性与免疫性 人群普遍易感。直接接触和性接触为主要途径。呼吸道也可传播。 快速诊断，可采用原位核酸杂交和PCR法检测病毒DNA，ELISA法检测病毒感染早期产生的IgM。

防治：尚无特异性方法预防控制。有些药物对急性感染有较好疗效，但很难防止潜伏感染再发。 第2节水痘-带状疱疹病毒(VZV) 生物学性状与HSV相似，只有1个血清型； 主要靶细胞为皮肤。初次感染表现为水痘，儿童期较轻，而成人表现较重，易得重症水痘，孕妇还可引起胎儿畸形、流产或死产。 病愈后，病毒长期潜伏在脊髓后根神经节或颅神经节，中年以后如复发，感染部位沿感觉神经节支配的皮肤分布，串联成带状，故称带状疱疹。该病临床症状典型不需特殊检测。 减毒活疫苗接种可有效预防水痘感染和流行。 第3节巨细胞病毒(CMV) 细胞病变特点是细胞肿大变园，核变大，核内出现周围绕有一轮“晕”的大型嗜酸性包涵体。 生物学性状 1、感染HCMV的细胞可释放不同的3种颗粒：典型病毒颗粒、致密颗粒和包膜颗粒； 2、典型病毒颗粒：核心，衣壳，被膜，包膜组成； 3、致密颗粒：皮层蛋白，包膜（无衣壳和DNA），存在于感染细胞质中；无感染性 4、包膜颗粒：有衣壳，无DNA，无感染性 5、病毒感染种属特异性高 6、病毒复制周期长，增殖缓慢 7、病毒基因表达时相蛋白质：分立即早期（IE蛋白，感染1h后）、早期蛋白（E蛋白，感染2~4h后）、晚期蛋白（L，感染约36h后）； 8、病毒具有不稳定性，易被脂溶剂等灭活。

中东呼吸综合征病例诊疗方案(2015年版)

附件2 中东呼吸综合征病例诊疗方案（2015年版） 一、前言 2012年9月沙特首次报告了2例临床表现类似于SARS 的新型冠状病毒感染病例。2013 年5月23日，世界卫生组织（WHO）将这种新型冠状病毒感染疾病命名为“中东呼吸综合征”(Middle East Respiratory Syndrome，MERS)。截至2015年6月10日，全球共有25个国家累计报告MERS实验室确诊病例1231例，其中死亡451例，病死率37.0%。韩国自2015年5月20日确诊首例输入性病例，截至6月10日，累计报告确诊病例108例，其中死亡9例。 根据WHO通报的MERS疫情，结合文献报道，对《中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版）》进行修订。 二、病原学 中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）属于冠状病毒科,β类冠状病毒的2c亚群，是一种具有包膜、基因组为线性非节段单股正链的RNA病毒。病毒粒子呈球形，直径为120-160 nm。基因组全长约30kb。病毒受体为二肽基肽酶4（Dipeptidyl peptidase 4，DPP4, 也称为CD26），该受体与ACE2类似，主要分布于人深部呼吸道组织，可以部分解释MERS临床症状严重性。2014年分别从沙特地区一个MERS-CoV感染病人及其发病前接触过的单峰骆驼体内分离

出基因序列完全相同的MERS-CoV，同时在埃及、卡塔尔和沙特其他地区的骆驼中也分离到和人感染病例分离病毒株相匹配的病毒，并在非洲和中东的骆驼中发现MERS-CoV抗体，因而骆驼可能是人类感染来源。但不排除蝙蝠或其他动物也可能是中东呼吸综合征冠状病毒的自然宿主。 该病毒被病原学特征仍不完全清楚，病毒结构、性状、生物学和分子生物学特征还有待于进一步的研究。 三、流行病学 截至2015年6月10日，中东呼吸综合征已在中东地区（10个：沙特、阿联酋、约旦、卡塔尔、科威特、阿曼、也门、埃及、黎巴嫩和伊朗）、欧洲（8个：法国、德国、意大利、英国、希腊、荷兰、奥地利和英国）、非洲（2个：突尼斯和阿尔及利亚）、亚洲（4个：马来西亚、菲律宾、韩国、中国）与美洲（1个：美国）等25个国家报告。自MERS发现以来，包括沙特、韩国、阿联酋、英国、法国等在内的国家报告了至少10起聚集病例，多发生在医院和家庭。此次韩国中东呼吸综合征疫情的多数病例为医院感染。 根据目前已知的病毒学、临床和流行病学资料，中东呼吸综合征冠状病毒已具备一定的人传人能力，虽然大多数第二代病例发生在医务人员、在院的其他病人或探视的家属，尚无证据表明该病毒具有持续人传人的能力，但应警惕社区传播的可能性。 MERS-CoV的确切来源和向人类传播的准确模型尚不清楚。从现有的资料看，单峰骆驼可能为MERS-CoV的中间宿

鲤鲫疱疹病毒病在静海地区流行及诊治情况

栏目编辑刘柱军 防治 病害2019.5 天津市静海区的池塘养殖面积约3.5万亩，大多数乡镇都有面积不等的池塘养殖水面，随着天津市“菜篮子”工程的发展，区域内老旧池塘多进行了规划修整，养殖户基本掌握了 鲤鱼、鲫鱼、花白鲢、草鱼、南美白对虾等的养殖技术。鱼虾混养已成为我区池塘养殖的主要模式。然而，近两年来传统养殖品种鲤鱼、鲫鱼的病害发生明显呈上升态势，已引起相关部门和专家的高度重视。2018年笔者从流行病学的角度对静海区域内养殖鲤鱼、鲫鱼发生病害引发重大损失的案例做了调查和分析后发现，鲤鲫疱疹病毒是引发2018年某些养殖户损失惨重的元凶。 静海地区自2016年开始发现鲫鱼鳃出血病例，呈散发状、零星池塘有发病，并未呈大规模流行。2018年开始出现鲫鱼和鲤鱼疱疹病毒病的同时暴发，并呈流行状态。发病的池塘一般面积为50～300亩，水深1.3～1.7米，淤泥20～50厘米，均为土池。水源大部分引自流经静海的独流减河。养殖模式为鱼虾混养。具体亩放养密度为鲫鱼1000～1200尾、鲤鱼500～800尾、花鲢30～40尾、白鲢100～200尾、南美白对虾1万～3万尾。 一、发病情况 水温18℃左右，一般鲫鱼首先发病，最早的池塘清明前后开始出现零星死亡，以一龄异育银鲫为死亡主体。日均死亡量100～1000尾/亩，死亡鲫鱼均体表正常，只在胸鳍基部点状出血。病鱼放入清水中鳃盖部有大量血液流出。剖检发现肝肾充血，部分病鱼有黄色腹水，鱼鳔出血点明显。患病鱼无力、无食欲、呈无方向感地游动，或在水中漂游。鱼体皮肤上出现苍白的块斑和水泡，鳍条充血、鳃出血并产生大量黏液，鱼眼凹陷，有些鱼表现神经症状，较强的刺激能引起较激烈的反应。 鲤鱼发病迟于鲫鱼。一般鲤鱼发病前未有明显症状。均吃食正常，甚至出现抢食现象。大部分发病池发病前均发生浮头现象，经增氧后浮头消失。但1～2天即可发现少量死鱼，并有大量鲤鱼在白天浮于水面，初期发病症状不明显，均为黑背黑头，头、各鳍、背部出现白色黏液、漫游，一般两天后表现出CYHV-3的典型症状，双眼、鼻部凹陷，死亡量增大，50亩池塘最多时达 到日均1500尾，剖检脾肾肿大、苍白、肠道内有点状或面状出血，无脓液、鳃部黏液增多，鳃丝肿大，呈暗红色。发病3天后死亡达到高峰。 二、池塘水质 发生鲫鱼疱疹病的池塘水质大部分较清瘦，多以绿藻门的栅藻、衣藻、球藻为主，以裸藻、硅藻为辅，小部分原虫，pH 8.2～8.6，氨氮和亚硝酸盐含量均不高。发生鲤鱼疱疹病毒病的池塘水质以中等偏上肥度为主，以隐藻、裸藻、绿藻为主，水体透明度较低，一般在10～15厘米，水体发黏，氨氮0.5～1.0毫克/升，亚硝酸盐0.15～0.25毫克/升。 三、流行情况分析 1.患CYHV-2病鱼的苗种大部分来自江苏(盐城、射阳、连云港等地)，均称为异育银鲫“中科3号”(由于江苏2018年鲫鱼苗种8～10元/千克，价格较上年低1倍左右，养殖户纷纷自江苏进苗，只有小部分养殖户投放本地培育的春片)；鲤鱼CYHV-3发病的苗种多来自天津各区(宝坻、宁河、武清)及河北唐山，尤其是鲤鱼CYHV-3病在静海地区往年从未发现过。 2.各地池塘条件不同、位置不同，但鲫鲤的疱疹病毒病发作时间基本一致，即4月初至6月初，6月末即无死亡病例，鲤鱼发病要比鲫鱼发病平均晚10天左右。 3.鲤鱼、鲫鱼发病后虽然每天都有死亡，但对正常摄食的鱼类影响很小，基本开机后除漫游不上台的鱼，其他大部分鱼还能正常摄食。 4.鲤鱼发病池塘发病前大都进行过处理，如杀虫、消毒、进水、冲水、肥水、净水等，一般在处理过之后两天开始出现病症。鲫鱼的发病塘几乎未进行过水处理，发病比较突然。 5.发病鱼的鳃部变化明显，或出血或黏液增多，而寄生虫很少，烂鳃症状明显，尤其是鲤鱼。前期鲫鱼出现漫游之后即开始出现鳃出血现象，出血后的鲫鱼鳃丝变淡，严重的全部重要器官出血。而鲤鱼发病初期未有明显变化，仅仅鳃部、头部黏液增多，无溃烂，部分鱼有异物附 44 DOI:10.14184/https://www.wendangku.net/doc/dd1799805.html,ki.issn1004-843x.2019.05.023

中东呼吸综合征医院感染防控应急预案

中东呼吸综合征医院感染防控应急预案 根据世界卫生组织通报的“中东呼吸综合征（MERS）”疫情，部分国家出现聚集性疫情和医务人员感染。根据沙特阿拉伯对402例MERS感染病例的统计资料显示，医务人员感染者占27%，医务人员感染者中57.8%无症状或症状轻微。由此表明MERS病毒已具备有限的人传人能力，特根据 文件 要求制定本防控预案。 一、基本要求 （一）根据MERS的流行病学特点，针对传染源、传播途径和易感人群三个环节，结合我院的实际情况进行医院感染预防。 （二）加强对医务人员的培训，提高全员工作人员对就诊病人患中东呼吸综合征的警惕性及医院感染预防与控制的意识，做好早发现、早隔离、早诊断、早报告、早治疗。 （三）严格落实预检分诊、发热门诊及首诊医师负责制，发现疑似、临床诊断或确诊中东呼吸综合征感染患者时，按照要求，做好处置工作。 （四）重视和加强消毒、隔离和防护工作，保证充足的防护用品，确保诊疗区域内的工作环境，达到切断传播途径，保护义务人员安全救治患者的需求。

（五）严格按照《医疗机构消毒技术规范》，做好医疗器械、污染物品、物体表面、地面等的清洁与消毒；按照《医院空气净化管理规范》要求进行空气消毒。 （六）应当合理安排医务人员的工作，避免过度劳累，及时对其健康情况进行监测，注意监测医务人员的体温和呼吸系统的症状。 （七）在诊疗中东呼吸综合征感染患者过程中产生的医疗废物，应根据《医疗废物处理条例》和《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的有关规定进行处置和管理。 二、医院感染预防与控制措施 （一）发热门诊 1、布局和工作流程符合《医院隔离技术规范》等有关要求。 2、配备数量充足、符合要求的消毒用品和防护用品。 3、医务人员在诊疗工作中应当遵循标准预防和额外预防相结合的原则。严格执行手卫生、消毒隔离及个人防护等措施。在诊疗所有患者时应当戴外科口罩，诊疗疑似、临床诊断或确诊患者时应当戴医用防护口罩。戴口罩前和摘口罩后应当进行洗手或手消毒。 4、疑似、临床诊断或确诊中东呼吸综合征感染患者的转运过程中应当采取相应隔离防护措施，避免疾病的传播。 （二）收治疑似、临床诊断或确诊中东呼吸综合征感染

中东呼吸综合征院感防控应急预案第二版

BatchDoc Word文档批量处理工具 北京复兴医院 中东呼吸综合征院感防控应急预案 为做好中东呼吸综合征院感防控工作，提高我院医务人员对中东呼吸综合征院感的防控水平和应对能力，做到早发现、早诊断、早隔离、早报告，及时、有效地采取各项防控措施，防范疫情的发生，控制疫情的传播、蔓延，保障广大人民群众和医务人员的身体健康和生命安全，维护社会的稳定，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《国家突发公共卫生事件应急预案》、《突发公共卫生事件应急条例》、《中东呼吸综合征病例诊疗方案（2013年第1版）》、《中东呼吸综合征疫情防控方案（第二版）》等相关要求，特制定本预案。 适用范围 本预案适用于我院应对中东呼吸综合征疫情的防控及疫情发生后的 应急处理。 一、基本要求 (一)医务人员应加强学习和培训,提高对中东呼吸综合征医院感染预防与控制意识、报告与处置能力,做到早发现、早诊断、早隔离、早报告。 (二)应加强医院感染监测工作,发现疑似或确诊中东呼吸综合征感染患者时,应当按照有关要求,及时报告,做好相应处置工作。 (三)各科室应规范消毒、隔离和防护工作,医院为医务人员提供充足、

必要、符合要求的消毒和防护用品,确保消毒、隔离和个人防护等措施落实到位。 (四)严格按照《医疗机构消毒技术规范》的规定,做好医疗器械、污染物品、物体表面、地面等清洁与消毒;按照《医院空气净化管理规范》的规定,加强诊疗环境的通风,必要时进行空气消毒。 文档批量处理工具BatchDoc Word BatchDoc Word文档批量处理工具 (五)在中东呼吸综合征感染患者诊治过程中产生的医疗废物,应根据《医疗废物管理条例》和《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的有关规定进行管理和处置。 二、医院感染预防与控制 (一)发热门诊。 1、建立疑似、确诊患者隔离、转出和救治的工作流程,工作流程应当符合《医院隔离技术规范》等有关要求。 2、发热门诊出入口应设有手卫生设施。 3、医务人员在诊疗工作中应当遵循标准预防原则,接触所有患者时均应当戴外科口罩,严格执行手卫生等措施。接触疑似患者或确诊患者时应当戴医用防护口罩。 4、医务人员应当掌握人中东呼吸综合征感染的流行病学特点与临床特征,对疑似或确诊患者立即采取隔离措施并及时报告。患者转出后按《医疗机构消毒技术规范》进行终末处理。 5、医务人员进入或离开发热门诊时,要按照有关要求,正确穿脱防护

中东呼吸综合征病例诊疗方案(2015年版)

中东呼吸综合征病例诊疗方案 （ 2015 年版） 一、前言 2012年9月沙特首次报告了 2例临床表现类似于 SARS勺新型冠状病毒感染病例。 2013 年 5 月 23 日，世界卫生组织（WHO）将这种新型冠状病毒感染疾病命名为“中东呼吸综合征” （Middle East Respiratory Syndrome ， ME R S。）截至 2015 年 6 月10日，全球共有25个国家累计报告 MERS实验室确诊病例 1231 例，其中死亡 451 例，病死率 37.0%。韩国自 2015 年 5 月 20 日确诊首例输入性病例，截至 6 月 10 日，累计报告确诊病例 108 例，其中死亡 9 例。 根据WHO通报的MERSS情，结合文献报道，对《中东呼吸综合征病例诊疗方案（ 2014 年版）》进行修订。 二、病原学 中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV属于冠状病毒科，B 类冠状病毒的2c 亚群，是一种具有包膜、基因组为线性非节段单股正链的RNA 病毒。病毒粒子呈球形，直径为 120-160 nm。基因组全长约 30kb 。病毒受体为二肽基肽酶4（Dipeptidyl peptidase 4, DPP4,也称为CD2Q ,该受体与 ACE2类似，主要分布于人深部呼吸道组织，可以部分解释MERSS床症状严重性。 2014年分别从沙特地区一个MERS-CoV感染病人及其发病前接 触过的单峰骆驼体内分离出基因序列完全相同的MERS-CoV同 时在埃及、卡塔尔和沙特其他地区的骆驼中也分离到和人感染病例分离

病毒株相匹配的病毒，并在非洲和中东的骆驼中发现MERS-CoV抗体，因而骆驼可能是人类感染来源。但不排除蝙蝠或其他动物也可能是中东呼吸综合征冠状病毒的自然宿主。 该病毒被病原学特征仍不完全清楚，病毒结构、性状、生物学和分子生物学特征还有待于进一步的研究。 三、流行病学 截至2015年6月10日，中东呼吸综合征已在中东地区（10 个：沙特、阿联酋、约旦、卡塔尔、科威特、阿曼、也门、埃及、黎巴嫩和伊朗）、欧洲（8个：法国、德国、意大利、英国、希腊、荷兰、奥地利和英国）、非洲（2个：突尼斯和阿尔及利亚）、亚洲（4个：马来西亚、菲律宾、韩国、中国）与美洲（ 1 个：美国）等25个国家报告。自MERS发现以来，包括沙特、韩国、阿联酋、英国、法国等在内的国家报告了至少10起聚集 病例，多发生在医院和家庭。此次韩国中东呼吸综合征疫情的多数病例为医院感染。 根据目前已知的病毒学、临床和流行病学资料，中东呼吸综合征冠状病毒已具备一定的人传人能力，虽然大多数第二代病例发生在医务人员、在院的其他病人或探视的家属，尚无证据表明该病毒具有持续人传人的能力，但应警惕社区传播的可能性。 MERS-CoV勺确切来源和向人类传播的准确模型尚不清楚。 从现有的资料看，单峰骆驼可能为MERS-CoV勺中间宿主。人可 能通过接触含有病毒的单峰骆驼的分泌物、排泄物（尿、便）、未煮熟的乳制品或肉而感染。而人际间主要通过飞沫经呼吸道 传播，也可通过密切接触患者的分泌物或排泄物而传播。

【CN109825645A】一种检测人类疱疹病毒6HHV6的RCA方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910189789.2 (22)申请日 2019.03.13 (71)申请人 湖北朗德医疗科技有限公司 地址 443000 湖北省宜昌市西陵经济开发 区西湖路产业孵化中心5号楼2层 (72)发明人 朱世新　朱玉华　石康　 (74)专利代理机构 宜昌市三峡专利事务所 42103 代理人 成钢 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) (54)发明名称 一种检测人类疱疹病毒-6（HHV-6）的RCA方 法 (57)摘要 本发明公开了一种检测人类疱疹病毒-6 （HHV -6） 的RCA方法，按照如下步骤完成：（1）标本DNA的提取；（2）捕获探针的杂交，（3）锁式探针的 环化连接与酶切，（4）RCA扩增，再用琼脂糖凝胶 电泳，通过凝胶成像仪观察电泳结果。本发明锁 式探针结合RCA技术是一种检测人类疱疹病毒-6 （HHV -6）的新方法，通过锁式探针特异识别靶基 因序列，RCA扩增放大检测信号。该方法不需特殊 设备、操作简单、特异性好、灵敏度高，在病毒检 测方面具有独特优势。 权利要求书1页 说明书5页序列表1页 附图1页CN 109825645 A 2019.05.31 C N 109825645 A

权　利　要　求　书1/1页CN 109825645 A 1.一种检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，按照如下步骤完成： (1)将待测标本按Qiagen公司的病毒DNA提取试剂盒步骤处理，获得含人类疱疹病毒-6 (HHV-6)的基因组DNA样品； (2)捕获探针的杂交：在反应管中依次加入含人类疱疹病毒-6(HHV-6)的基因组DNA样品、锁式探针、捕获探针，充分混匀，55±1℃水浴杂交，杂交完成后自然冷却至室温，加入溶于2×结合缓冲液的链霉亲和素包被的磁珠，混匀，室温放置，磁性分离，用1×结合缓冲液清洗磁珠数次，弃去洗液，得到杂交产物； (3)锁式探针的环化连接与酶切：去离子水、步骤(2)制得的杂交产物和10×E.coli Buffer，轻轻混匀，在95±1℃下反应3-5min，然后再在45±1℃下孵育后，加入10×BSA缓冲液和E.coli DNA连接酶，混匀，在37±1℃进行环化连接反应；反应完成后加入10×Exonuclease Ⅰ Buffer和Exonuclease Ⅰ核酸外切酶，混匀，在37±1℃反应，反应完成后在95±1℃下条件下灭活Exonuclease Ⅰ核酸外切酶，得到探针环化连接产物； (4)RCA扩增：取步骤(3)中制得的探针环化连接产物、加入引物和10×phi29 Buffer，混匀后在95±1℃下反应3-5min，然后进行冰浴；再加入phi29 DNA聚合酶、dNTPs液，混匀后在37±1℃进行RCA反应，得到扩增产物； (5)取步骤(4)制得的扩增产物用的琼脂糖凝胶电泳，有肉眼可见条带扩增出来的为人类疱疹病毒-6(HHV-6)阳性，反之为人类疱疹病毒-6(HHV-6)阴性，即可完成对人类疱疹病毒-6(HHV-6)的检测； 所述步骤(4)中所设计用于RCA反应的引物是： 5’-ACCAGATCGACCACCTTATCGTTATCATAGAG-3’ SEQ NO1； 所述步骤(2)中的锁式探针为： 5’-CACCAAGAGTCTAGATAAACTAGATAAAAGCGGGAAGACCAACTACACGAATTCTGCTAACTTGCGATA CTAGTTAGCGACCGAATTCATTAGGTTTCAGTTTCAGACAACCACAGACACCGTCC-3’探针的5’端进行磷酸化修饰SEQ NO2； 所述步骤(2)中的捕获探针为： Biotin-ACCAGATCGACCACCTTAAGTACCACGCACAAGCCTAAGTACCCTAGASEQ NO3。 2.根据权利要求1所述的检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，步骤(2)中锁式探针、捕获探针的浓度均为0.5-1.5μmol/L，且锁式探针、捕获探针相对于DNA样品体积的10-20％。 3.根据权利要求1所述的检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，步骤(3)中10×E.coli Buffer相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％；10×BSA缓冲液相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％；E.coli DNA连接酶相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的1.5-2.5％；10×Exonuclease I Buffer相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％；Exonuclease I相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％。 4.根据权利要求1所述的检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，步骤(4)中引物的添加量为探针环化连接产物的1.8-3％；10×phi29 Buffer的添加量为探针环化连接产物的9.5-15％；phi29 DNA聚合酶的添加量为探针环化连接产物的1.8-3％。 2

中东呼吸综合征院感防控应急预案

中东呼吸综合征院感防控应急预案

唐山市人民医院 中东呼吸综合征院感防控应急预案 为做好中东呼吸综合征院感防控工作，提高我院医务人员对中东呼吸综合征院感的防控水平和应对能力，做到早发现、早诊断、早隔离、早报告，及时、有效地采取各项防控措施，防范疫情的发生，控制疫情的传播、蔓延，保障广大人民群众和医务人员的身体健康和生命安全，维护社会的稳定，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《国家突发公共卫生事件应急预案》、《突发公共卫生事件应急条例》、《中东呼吸综合征病例诊疗方案（2013年第1版）》、《中东呼吸综合征病例诊断程序》、《中东呼吸综合征医院感染预防与控制技术指南（2013年第1版）》等相关要求，特制定本预案。 适用范围 本预案适用于我院应对中东呼吸综合征疫情的防控及疫情发生后的应急处理。 一、基本要求 (一)医务人员应加强学习和培训,提高对中东呼吸综合征医院感染预防与控制意识、报告与处置能力,做到早发现、早诊断、早隔离、早报告。 (二)应加强医院感染监测工作,发现疑似或确诊中东呼吸综合征感染患者时,应当按照有关要求,及时报告,做好相应处置工作。 (三)各科室应规范消毒、隔离和防护工作,医院为医务人员提供充足、必要、符合要求的消毒和防护用品,确保消毒、隔离和个人防护等措施落实到位。

(四)严格按照《医疗机构消毒技术规范》的规定,做好医疗器械、污染物品、物体表面、地面等清洁与消毒;按照《医院空气净化管理规范》的规定,加强诊疗环境的通风,必要时进行空气消毒。 (五)在中东呼吸综合征感染患者诊治过程中产生的医疗废物,应根据《医疗废物管理条例》和《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的有关规定进行管理和处置。 二、医院感染预防与控制 (一)发热门诊。 1、建立疑似、确诊患者隔离、转出和救治的工作流程,工作流程应当符合《医院隔离技术规范》等有关要求。 2、发热门诊出入口应设有手卫生设施。 3、医务人员在诊疗工作中应当遵循标准预防原则,接触所有患者时均应当戴外科口罩,严格执行手卫生等措施。接触疑似患者或确诊患者时应当戴医用防护口罩。 4、医务人员应当掌握人中东呼吸综合征感染的流行病学特点与临床特征,对疑似或确诊患者立即采取隔离措施并及时报告。患者转出后按《医疗机构消毒技术规范》进行终末处理。

疾病预防控制中心中东呼吸综合征疫情处置应急预案

疾病预防控制中心 关于印发《疾病预防控制中心中东呼吸综合征疫情处置应急预案》的通知 中心各科室： 为有效应对中东呼吸综合征，规范和指导中心各应急专业组科学处置中东呼吸综合征疫情，严防中东呼吸综合征的扩散和蔓延，根据《卫生局突发公共卫生事件应急预案》、《中东呼吸综合征疫情防控方案（第二版）》和《宁市疾控中心中东呼吸综合征疫情处置预案（修订）》（疾控函…2015?132号）通知精神，特制定中心应急预案，请各科室认真执行，不足之处及时反馈，以便修改完善。 附件：疾病预防控制中心中东呼吸综合征疫情处置预案 疾病预防控制中心 2015年6月29日

附件 疾病预防控制中心 中东呼吸综合征疫情处置预案 1.总则 1.1编制目的 中东呼吸综合征病例在沙特等中东地区和部分欧洲国家 不断增加，在韩国出现暴发疫情，病死率较高，引起全球广泛关注，宁市风险评估结论:宁市出现输入性病例以及由输入性病例引起二代病例风险增加。为有效应对中东呼吸综合征，指导中心进行规范处置，最大程度地减少中东呼吸综合征对公众健康和社会造成危害，保障公众身心健康和生命安全，维护社会稳定和经济发展，特制定本预案。 1.2编制依据 《中华人民共和国传染病防治法》、《国家突发公共卫生事件应急预案》、《医疗机构传染病预检分诊管理办法》、《中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014版）》、《中东呼吸综合征疫情防控方案（第二版）》、《中东呼吸综合征医院感染预防与控制技术指南（2014年版）》、《中东呼吸综合征医院感染预防与控制技术指南（2014版）》、《四川省突发公共卫生事件应急预案》、《宁市突发公共卫生事件应急预案》、《卫生局突发公共卫生事件应急预案》等。

中东呼吸综合征简介

简介 世界卫生组织23日将最近爆发的新型冠状病毒感染命名为“中东呼吸综 发布 合症”（Middle East Respiratory Syndrome，MERS）。该病已经造成23人死亡。[1] 世卫接获的最新死亡病例是沙特阿拉伯一名63岁男子。死者生前于2013年5 月15日因急性呼吸困难住院治疗，2013年5月20日医治无效死亡。该病例的具体病理分析仍在进行中。 世卫组织助理总干事福田敬二23日表示，研究机构对该病毒所知依然“非常有限”。沙特阿拉伯卫生部门仍在调查在艾尔阿赫萨地区一家医院爆发的多起“中东呼吸综合症”疫情。 事件严重性 世卫23日通报说，自2012年9月以来，全球共向世卫组织通报了44例感染新型冠状病毒实验室确诊病例，其中23例死亡。 2命名 为统一新型冠状病毒名称，促进新型冠状病毒感染病例的通报，国际病毒分类委员会冠状病毒研究小组决定将此新型冠状病毒命名为“中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV))”,并于2013年5月15日在《病毒学杂志》上发布了公告（doi:10.1128/JVI.01244-13）。2013年5月23日，WHO在通报疫情时，开始正式使用“中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus ，MERS-CoV)” 这一名称。建议我国也采用此名称，病毒名称为“中东呼吸综合征冠状病毒”，英文简称为“MERS-CoV”；疾病名称为“中东呼吸综合征”,英文简称为“MERS”。[2] 3发展 大多数确诊病例集中于中东国家，但也有欧洲国家陆续报告该病。病例应与中东直接或间接有关，特别是有患者曾赴阿拉酋旅行。在法国和英国，新型冠状病毒在从中东旅行归来的人有密切接触者当中发生了有限传播。