ROS介导的JNK信号通路及其对细胞自噬的调节_唐锦华
·综 述· ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２０１５．０６．０４８
ＲＯＳ介导的ＪＮＫ信号通路及其对细胞自噬的调节
唐锦华１综述，吴 江１，连继勤２审校
（１．第三军医大学学员旅五营，重庆４０００３８；２．第三军医大学生物化学与分子生物学教研室，重庆４０００３８）
关键词：ＲＯＳ；ＪＮＫ信号通路；细胞自噬
中图分类号：Ｒ３４文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－８３４８（２０１５）０６－０８４８－０３
活性氧簇（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）是生物有氧代谢过程中产生的一类活性含氧化合物的总称，作为细胞内的一种信号分子，ＲＯＳ可通过多种途径激活ｃ－Ｊｕｎ氨基末端激酶（ｃ－Ｊｕｎ ＮＨ２－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ，ＪＮＫ）。调节细胞自噬是ＲＯＳ介导的ＪＮＫ信号通路的一个重要功能，其能够以ＲＯＳ水平依赖的方式激活细胞自噬和凋亡。下面本文仅就近年来研究发现的ＲＯＳ介导ＪＮＫ信号通路激活的主要途径，以及其对细胞自噬的作用作简要综述。
１ ＲＯＳ与ＪＮＫ信号通路
ＲＯＳ是一类可以氧化蛋白质、脂质和ＤＮＡ的小分子，是生物有氧代谢过程中产生的一类活性含氧化合物的总称，包括超氧阴离子（·Ｏ２－）、过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）和自由基（超氧化物、羟自由基）等。正常生理状态下，ＲＯＳ的产生被严格控制，且ＲＯＳ作为一种信号分子参与调节了细胞内多种信号通路，而ＪＮＫ信号通路就是受ＲＯＳ调控的一条重要通路［１］。
ＪＮＫ是丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）家族中的一员，能有效地磷酸化ｃ－Ｊｕｎ的氨基末端并激活ｃ－Ｊｕｎ，是哺乳动物细胞内广泛存在的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。由于ＪＮＫ信号通路可被环境中的应激因素（如电离辐射、渗透压改变、营养因素撤除、热休克及活性氧等）激活，因此ＪＮＫ又被称为应激激活蛋白激酶（ｓｔｒｅｓｓ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ＳＡＰＫ）［２］。在细胞活动过程中，ＲＯＳ可通过多种途径激活ＪＮＫ在细胞内发挥重要的生理功能。
２ ＲＯＳ通过多种途径激活ＪＮＫ
２．１ 凋亡信号调节激酶１（ＡＳＫ１）途径 ＡＳＫ１在ＲＯＳ介导的ＪＮＫ通路活化过程中起桥梁作用。在ＭＡＰＫ信号传递过程中，ＡＳＫ１是一个通过磷酸化ＭＫＫ４和ＭＫＫ７、进而激活ＪＮＫ通路的上游ＭＡＰＫＫＫ，可被ＲＯＳ等多种信号所激活［３］。在ＲＯＳ的作用下，硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ，Ｔｒｘ）分子上第３２位与第３５位的半胱氨酸残基被氧化形成二硫键，从而失去对ＡＳＫ１的抑制作用。游离的ＡＳＫ１之间可通过Ｎ端和Ｃ端的卷曲螺旋域形成寡聚体，并进一步被磷酸化而激活，最终导致ＪＮＫ激活［４］。Ｔｒｘ是一种结合在ＡＳＫ１蛋白Ｎ端卷曲螺旋域的负性调节因子。有研究提示在ＡＳＫ１的Ｃ端卷曲螺旋域也存在一个负性调节因子谷氧还蛋白（ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ，Ｇｒｘ），Ｇｒｘ可与氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）反应形成复合物（Ｇｒｘ－ＳＳＧ及Ｇｒｘ［Ｓ－Ｓ］），促使Ｇｒｘ与ＡＳＫ１解离［５］。在Ｔｒｘ和Ｇｒｘ从ＡＳＫ１解离下来之后，作为ＡＳＫ１正性调节因子的肿瘤坏死因子受体相关因子２（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ ２，ＴＲＡＦ２）和ＴＲＡＦ６可以结合到ＡＳＫ１上，组成了一个活化的大分子复合体，即活化的ＡＳＫ１信号小体，进而激活ＪＮＫ。研
究表明，Ｔｒｘ可以抑制ＡＳＫ１信号小体的形成，而ＴＲＡＦ２的过表达则可以抑制Ｔｒｘ与ＡＳＫ１的相互作用，使ＡＳＫ１活化并激活ＪＮＫ［６］。
２．２ Ｓｒｃ激酶途径 Ｓｒｃ家族激酶（Ｓｒｃ－ｆａｍｉｌｙ ｋｉｎａｓｅｓ，ＳＦＫｓ）目前由ＬＹＮ、ＦＹＮ、ＬＣＫ、ＨＣＫ、ＦＧＲ、ＢＬＫ、ＹＲＫ、ＹＥＳ和Ｓｒｃ等９个成员组成，其中，Ｓｒｃ蛋白是目前研究最多的成员。Ｓｒｃ广泛存在于组织细胞中，通过与信号转导通路中重要分子相互作用，调控细胞的生长、发育、分化和死亡等过程。在ＲＯＳ介导的ＪＮＫ信号通路中，Ｓｒｃ的缺失将严重抑制ＪＮＫ的活化，Ｓｒｃ途径是ＲＯＳ激活ＪＮＫ的信号通路之一。Ｃｈｅｎ等［７］发现内皮细胞暴露Ｈ２Ｏ２后１５ｍｉｎ内可观察到的ＪＮＫ通路快速激活，认为Ｈ２Ｏ２可诱导表皮因子受体磷酸化，通过Ｓｒｃ依赖性的途径启动ＪＮＫ的信号通路。在肿瘤的发生和转移过程中，高活性的Ｓｒｃ可使Ｂｒｕｔｏｎ蛋白激酶Ｂｔｋ２９Ａ肽链上的５５１位酪氨酸去磷酸化而活化，同时活化连接蛋白ｐ１２０ｃｔｎ，后两者可通过小Ｇ蛋白Ｒｈｏ１激活ＪＮＫ［８－９］。
２．３ 谷胱甘肽ｓ－转移酶π（ＧＳＴπ）途径 ＧＳＴπ也是ＲＯＳ介导ＪＮＫ活化的另一重要中间分子。最新的研究发现，两种单体形式的ＧＳＴπ可以通过与ＪＮＫ底物活化转录因子２（ａｃｔｉｖａ－ｔｉｎｇ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ２，ＡＴＦ２）的直接作用来抑制ＡＴＦ２的磷酸化，进而抑制ＪＮＫ１或ＪＮＫ２的激活［１０］。Ｈ２Ｏ２可使原来与ＪＮＫ羧基末端结合的ＧＳＴπ寡聚化并从ＧＳＴπ－ＪＮＫ复合体上分离下来，从而恢复被抑制的ＪＮＫ活性［１１］。
２．４ 混合谱系激酶３（ＭＬＫ３）途径 ＭＬＫ３是ＭＡＰＫＫＫ家族ＭＬＫｓ亚家族的成员之一，也是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。它通过磷酸化激活ＭＡＰＫ通路的丝／苏氨酸蛋白激酶，介导下游信号通路激活，是连接ＲＯＳ和ＪＮＫ的重要纽带。Ｚｈａｏ等［１２］的研究发现，混合谱系结构域样激酶（ＭＬＫＬ）是ＲＩＰ３诱导细胞坏死样凋亡的重要下游分子，ＭＬＫＬ的缺失会严重影响ＪＮＫ的磷酸化，进而降低ＲＯＳ对ＪＮＫ的激活作用。ｖａｎｄｅｎ Ｂｅｒｇ等［１３］发现，氧化应激引起的ＲＯＳ水平增加可通过ｃ－Ｊｕｎ氨基末端相互作用蛋白１（ＪＩＰ１）支架复合体激活小Ｇ蛋白ＲＡＬＡ，进而调控ＪＮＫ的磷酸化，而ＭＬＫ３则是直接激活ＭＫＫ４并与ＭＫＫ４组成ＪＩＰ１支架复合体的重要分子。２．５ 受体相互作用蛋白（ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）－ＴＲＡＦ２复合体途径 ＲＩＰ－ＴＲＡＦ２复合体途径是ＲＯＳ激活ＪＮＫ的又一重要途径。ＲＩＰ与ＴＲＡＦ２是ＴＮＦ与ＴＮＦ受体１（ＴＮＦ－Ｒ１）结合后，激活核转录因子ＮＦ－κＢ、触发信号传导级联导致细胞凋亡的重要信号分子。近年来的研究表明，ＲＩＰ和ＴＲＡＦ２可以相互结合在靶细胞膜上的脂筏区，形成一个ＲＩＰ－ＴＲＡＦ２信号复合体，在ＲＯＳ的诱导下直接激活ＪＮＫ通路［１４］。
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作者简介：唐锦华（１９９２－），本科，主要从事检验医学研究。
２．６ 抑制丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶（ＭＡＰＫ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ，ＭＫＰｓ）途径 ＭＫＰｓ的活性是ＲＯＳ激活ＪＮＫ的另一有效途径。Ｋａｍａｔａ等［１５］的研究表明，细胞内Ｈ２Ｏ２可以通过氧化ＭＫＰｓ的半胱氨酸残基而抑制ＭＫＰｓ的活性，被氧化的ＭＫＰｓ很快被泛素－蛋白酶体途径降解，从而消除了ＭＫＰｓ对ＪＮＫ的抑制作用，导致ＪＮＫ通路持续激活。Ｈｏｕ等［１６］进一步证实，ＲＯＳ介导的ＭＫＰ失活就是导致ＪＮＫ通路持续激活的原因。Ｌｏｒｎｅｊａｄ－Ｓｃｈｆｅｒ等［１７］在ＡＲＰＥ－１９细胞中通过光诱导的方法也发现随着ＲＯＳ产生的增加，ＭＫＰ－１的水平会显著下降并导致ＪＮＫ激活。
３ ＲＯＳ－ＪＮＫ通路对细胞自噬的调节作用
细胞自噬是细胞依赖溶酶体途径对胞质蛋白和细胞器进行降解的过程，是细胞清除受损蛋白与细胞器的重要途径，通常在饥饿、氧化损伤、内质网应激等条件下水平增强［１８］。因此，自噬是细胞的一种自我保护机制，它的作用受到多种因素的诱导和调节。其中，ＲＯＳ－ＪＮＫ通路就是诱导和调节细胞自噬的一条重要通路。
３．１ 通过影响Ｂｃｌ－２磷酸化激活细胞自噬 研究发现，ＪＮＫ１被ＲＯＳ激活后可直接磷酸化Ｂｃｌ－２蛋白，使Ｂｃｌ－２从自噬关键蛋白Ｂｅｃｌｉｎ １上解离下来，Ｂｅｃｌｉｎ １被活化后可形成Ｂｅｃｌｉｎ １－Ｖｐｓ３４－ＰＩ３Ｋ多蛋白复合体，从而激活自噬。当使用ＪＮＫ１的抑制剂或外源性导入磷酸化位点突变的Ｂｃｌ－２蛋白时，自噬被抑制；而结构性激活ＪＮＫ１，则会引起Ｂｃｌ－２的多位点磷酸化，导致自噬激活［１９］。尽管Ｂｃｌ－２和Ｂｃｌ－ｘＬ之间具有相似的结构及相同的磷酸化位点，但Ｂｅｃｌｉｎ １与Ｂｃｌ－ｘＬ间的结合能不能受到ＪＮＫ１介导的磷酸化调节目前仍不清楚［２０］。
３．２ 通过上调ＡＴＧ７激活细胞自噬 Ｗａｎｇ等［２１］的研究表明，ＲＯＳ－ＪＮＫ信号通路还可通过Ｂｅｃｌｉｎ １非依赖的方式直接上调自噬关键基因ＡＴＧ７与ＡＴＧ５，激活细胞自噬。这一激活方式只存在于肿瘤细胞中，而在良性组织及正常细胞中不存在。
３．３ 通过激活凋亡信号间接抑制细胞自噬 细胞凋亡与自噬是细胞的两种重要功能，对凋亡与自噬相互作用的研究是当前的一个热点。凋亡可以通过多种途径抑制自噬的发生，反之自噬亦可以抑制凋亡。在研究二者发生机制的过程中，研究人员发现信号分子（如ＪＮＫ、Ａｋｔ等）在二者信号通路中频繁交叉出现，提示着凋亡与自噬存在必然的联系［２２］。ＲＯＳ通过双特异性激酶ＪＮＫＫ（包括ＭＫＫ４、ＭＫＫ７）激活ＪＮＫ，而激活的ＪＮＫ又可以通过转录因子ＡＰ－１促进ｐ５３、Ｂａｘ、Ｆａｓｌ、ＴＮＦ等促凋亡蛋白的表达。高表达的促凋亡蛋白如Ｂａｘ、Ｂａｋ等作用于线粒体，可促使细胞色素Ｃ释放入胞浆，细胞色素Ｃ和ｃａｓｐａｓｅ－９结合，最终作用于ｃａｓｐａｓｅ－３，而使ｃａｓｐａｓｅ－３活化。活化的ｃａｓｐａｓｅ具有十分重要的作用，它们可以裂解自噬相关蛋白，裂解的自噬相关蛋白可进入线粒体，促进细胞色素Ｃ的释放而进一步促进细胞凋亡的发生。有研究表明，Ｂｅｃｌｉｎ １可以被ｃａｓｐａｓｅ－３裂解产生Ｃ端Ｂｅｃｌｉｎ １片段，它可进入线粒体内促进细胞色素Ｃ的释放，抑制自噬，诱发凋亡［２３］。另外，表达的Ｆａｓｌ、ＴＮＦ等配体与细胞膜上的死亡受体（Ｆａｓ、ＴＮＦＲ等）结合形成死亡诱导信号复合物（ｄｅａｔｈ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ，ＤＩＳＣ），ＤＩＳＣ促进前体ｃａｓｐａｓｅ－８裂解，生成活化的ｃａｓｐａｓｅ－８，ｃａｓｐａｓｅ－８一方面可以激活细胞凋亡的下游ｃａｓｐａｓｅ，启动凋亡信号，另一方面可以诱导产生ｃ－ＦＬＩＰ、ｖ－ＦＬＩＰ等物质与Ａｔｇ３结合，从而抑制Ａｔｇ３和ＬＣ３的结合，抑制细胞自噬的发生。用ｃａｓｐａｓｅ－８的广谱抑制剂ｚＶＡＤ处理小鼠Ｌ９２９纤维肉瘤细胞发现，ｚＶＡＤ可以促进这细胞发生自噬性死亡，这表明细胞的凋亡信号受到抑制后，其自噬途径反而被激活。而进一步的研究发现，抑制ｃａｓｐａｓｅ－８可能与ＲＯＳ的产生及ＪＮＫ的激活关系密切［２４］。
３．４ ＲＯＳ－ＪＮＫ通路对自噬的调节作用依赖于细胞内ＲＯＳ水平 ＲＯＳ－ＪＮＫ通路既可介导细胞凋亡也可以介导细胞自噬，其关键在于细胞内的ＲＯＳ水平。适度水平的ＲＯＳ可导致ＪＮＫ信号短暂激活，通过Ｂｅｃｌｉｎ１途径诱导细胞自噬水平增加，但还不足以引起细胞凋亡。但当ＲＯＳ超过一定水平后则会导致ＪＮＫ的持续激活，引起线粒体途径介导的细胞凋亡［２５－２６］。最近的研究发现，使用冬凌草甲素处理多发性骨髓瘤细胞ＲＰＭＩ８２２６细胞可以诱导细胞内高水平的ＲＯＳ产生，以及随之而来的细胞凋亡的增加和自噬抑制［２７］。相反，低水平的ＲＯＳ则可促进自噬、抑制凋亡。在低ＲＯＳ水平（即基本氧化应激）下，ＪＮＫ可通过活化Ａｔｇ７介导细胞自噬的发生。研究证明，在基本的氧化应激下，敲除自噬相关基因Ａｔｇ７会显著降低药物引起的Ｈ２Ｏ２介导的细胞自噬反应，而进一步的研究提示ＲＯＳ依赖的ＪＮＫ和ＥＲＫ的激活均是介导Ｈ２Ｏ２升高、促进自噬水平增加的重要上游调控机制［２１］。
４ 展 望
ＲＯＳ的产生作为重要的第二信使参与多种生物学效应的启动，而ＲＯＳ－ＪＮＫ通路作为细胞信号转导研究中备受关注的一条重要通路，参与了细胞增殖、分化、存活、死亡（凋亡为主，包括自噬性细胞死亡）等许多生命过程。在哺乳动物细胞内存在着ＲＯＳ－ＪＮＫ通路直接或间接激活或调控细胞自噬的复杂机制，ＲＯＳ的水平直接影响了这一过程。至于ＲＯＳ－ＪＮＫ通路作用于自噬的结果及其对凋亡的影响，目前尚不明确，但最新的研究表明可能与ＲＯＳ激活ＪＮＫ的途径等关系密切。总之，ＲＯＳ介导ＪＮＫ信号通路的调控网络相当繁琐，不断深入研究ＲＯＳ激活ＪＮＫ的实现过程以及ＲＯＳ－ＪＮＫ激活自噬介导细胞存亡的作用机制，将有助于阐明与自噬相关的某些肿瘤性疾病的发病机制，为临床治疗提供更为有意义的研究方向。
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１８）０
５８重庆医学２０１５年２月第４４卷第６期
细胞信号通路大全
1 PPAR信号通路：过氧化物酶体增殖物激活受体( PPARs) 是与维甲酸、类固醇 和甲状腺激素受体相关的配体激活转录因子超家族核激素受体成员。它们作为脂 肪传感器调节脂肪代谢酶的转录。PPARs由PPARα、PPARβ和PPARγ 3种亚型组成。PPARα主要在脂肪酸代谢水平高的组织，如：肝、棕色脂肪、心、肾和骨骼肌表达。他通过调控靶基因的表达而调节机体许多生理功能包括能量代谢、生 长发育等。另外，他还通过调节脂质代谢的生物感受器而调节细胞生长、分化与 凋亡。PPARa同时也是一种磷酸化蛋白，他受多种磷酸化酶的调节包括丝裂原激活蛋白激酶( ERK-和p38．M APK) ，蛋白激酶A和C( PKA，PKC) ，AM PK和糖原合成酶一3( G SK3) 等调控。调控PPARa生长信号的酶报道有M APK、PKA和G SK3。PPARβ广泛表达于各种组织，而PPAR γ主要局限表达在血和棕色脂肪，其他组织如骨骼肌和心肌有少量表达。PPAR-γ在诸如炎症、动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和糖代谢调节，以及肿瘤和肥胖等方面均有着举足轻重的作用， 而其众多生物学效应则是通过启动或参与的复杂信号通路予以实现。鉴于目前人 们对PPAR—γ信号通路尚不甚清，PPARs通常是通过与9-cis维甲酸受体( RXR)结合实现其转录活性的。 2 MAPK信号通路:mapk简介:丝裂原激活蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）是广泛存在于动植物细胞中的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。作用主要是将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞的生物化学反应（增殖、分化、凋亡、应激等）。 MAPKs家族的亚族 :ERKs（extracellular signal regulated kinase)：包括ERK1、ERK2。生长因子、细胞因子或激素激活此通路，介导细胞增殖、分化。 JNKs(c-Jun N-terminal kinase)包括JNK1、JNK2、JNK3。此亚族成员能使 Jun转录因子N末端的两个氨基酸磷酸化而失活，因此称为Jun N末端激酶(JNKs)。物理、化学的因素引起的细胞外环境变化以及致炎细胞因子调节此通路。P38 MAPKs：丝氨酸/络氨酸激酶，包括p38 α、p38β、p38γ、p38δ。p38 MAP K参与多种细胞内信息传递过程 ,能对多种细胞外刺激发生反应,可磷酸化其它细胞质蛋白,并能从胞浆移位至细胞核而调节转录因子的活性来改变基因的表达水平 ,从而介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。 ERK5:是一种非典型的MAPK通路，也叫大MAPK通路，只有一个成员。它可被各种刺激因素激活。不仅可以通过磷酸化作用使底物活化，并且通过C端的物理性结合作用激活底物。 3 ERBB信号途径:ErbB 蛋白属于跨膜酪氨酸激酶的 EGF 受体家族成员。ErbB 的命名来源于在禽红白血病 B( v-Erb-B) 发现的 EGF 受体的突变体,因而 EGF 受体 亦称为“ ErbB1”。人源 ErbB2 称为HER2, 特指人的 EGF 受体。ErbB 家族的
细胞信号转导
细胞信号转导 李婧 2015212351 一、名词解释 内分泌 接触依赖性通讯 受体 G蛋白 第二信使 二、单项选择题 1、下列不属于信号分子的是 A.K+ B.cAMP C. cGMP D.Ca2+ 2、下列那个不是信号转导系统的主要特性 A.特异性 B.放大效应 C.整合作用 D.传递作用 3、（）是细胞表面受体中最大的多样性家族 A.G蛋白偶联受体 B.RTK C.Notch D.细胞因子 4、G蛋白偶联受体中（）是分子开关蛋白 A.G α B.Gβ C.GΘ D.Gγ 5、G蛋白偶联的光敏感受体的活化诱发（）的关闭 A.cAMP–PKA信号通路 B.Notch信号通路 C.JAK-STAT信号通路 D. cGMP门控阳离子通道 6、（）信号对细胞内糖原代谢起关键调控作用 -Ca2+ B.DAG-PKC C. cAMP–PKA D.RTK-Ras A.IP 3 7、（）的主要功能是引发贮存在内质网中的Ca2+转移到细胞质基质中，使 胞质中游离Ca2+浓度提高 B.PIP2 C.DAG D.PKC A. IP 3 8、（）主要功能是控制细胞生长、分化，而不是调控细胞中间代谢 A.RTK B. PKC C.PKB D.Wnt 9、Hedgehog信号通路控制 A.糖原代谢 B.细胞凋亡 C.细胞分化 D.氨基酸代谢 10、细胞通过配体依赖性的受体介导的（）减少细胞表面可利用受体数目。 A. 抑制性蛋白产生 B.内吞作用 C.敏感性下调 D.消化降解 三、多项选择题 1、细胞分泌化学信号可长距离或短距离发挥作用，其作用方式分为 A.内分泌 B.旁分泌 C.通过化学突出传递神经信号 D.外分泌 2、下列（）是糖脂 A.霍乱毒素受体 B.百日咳的毒素受体 C.甲状腺受体 D.胰岛素受体 3、下面关于受体酪氨酸激酶的说法正确的是 A.是一种生长因子类受体 B.受体蛋白只有一次跨膜 C.与配体结合后两个受体相互靠近，相互激活 D.具有SH2结构域
(完整版)细胞信号转导研究方法
细胞信号转导途径研究方法 一、蛋白质表达水平和细胞内定位研究 1、信号蛋白分子表达水平及分子量检测: Western blot analysis. 蛋白质印迹法是将蛋白质混合样品经SDS-PAGE后,分离为不同条带，其中含有能与特异性抗体(或McAb)相应的待检测的蛋白质(抗原蛋白)，将PAGE胶上的蛋白条带转移到NC膜上此过程称为blotting，以利于随后的检测能够的进行，随后,将NC膜与抗血清一起孵育，使第一抗体与待检的抗原决定簇结合(特异大蛋白条带)，再与酶标的第二抗体反应,即检测样品的待测抗原并可对其定量。 基本流程： 检测示意图：
2、免疫荧光技术 Immunofluorescence （IF） 免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。 采用流式细胞免疫荧光技术（FCM）可从单细胞水平检测不同细胞亚群中的蛋白质分子，用两种不同的荧光素分别标记抗不同蛋白质分子的抗体，可在同一细胞内同时检测两种不同的分子（Double IF），也可用多参数流式细胞术对胞内多种分子进行检测。 二、蛋白质与蛋白质相互作用的研究技术 1、免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）
Co-IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A”能特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象而开发出来的方法。目前多用精制的protein A预先结合固化在agarose的beads 上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原抗体达到沉淀抗原的目的。 当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。进一步进行Western Blot 和质谱分析。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合，也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。缺点：可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用。 2、GST pull-down assay GST pull-down assay是将谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合蛋白（标记蛋白或者饵蛋白，GST, His6, Flag, biotin …）作为探针，与溶液中的特异性搭档蛋白(test protein或者prey被扑获蛋白)结合，然后根据谷胱甘肽琼脂糖球珠能够沉淀GST融合蛋白的能力来确定相互作用的蛋白。一般在发现抗体干扰蛋白质－蛋白质之间的相互作用时，可以启用GST沉降技术。该方法只是用于确定体外的相互作用。
干货 细胞信号通路图解之MAPK通路【值得珍藏】
干货细胞信号通路图解之MAPK通路【值得珍藏】 科研小助手原创，转载请注明来源。公众号内回复“Cell Signaling Pathway”获取全套信号通路图本文由百度贴吧nosce吧吧主黄杰投稿一、MAPK信号通路： （1）有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)是一族在真核生物中非常保守的丝/苏氨酸蛋白激酶，在许多细胞活动中起作用，如生长增殖，细胞分化，细胞运动或死亡。MAPK级联信号传导由3 个不同层次的分子所组成。MAPK被MAPK的激 酶( MAPKK)磷酸化后激活，MAPKK被MAPKK的激酶(MAPKKK )磷酸化而激活。而MAPKKK通过与小GTPase 和/或其他蛋白酶相互作用而被激活，从而将MAPK和细胞 表面的受体以及胞外的信号联系在一起。 （2）许多参与生长和分化的受体都能够激活MAPK/ERK信号通路，比如说受体酪氨酸激酶(RTK)，整合素，和离子通道。响应特定信号所涉及到的具体分子会相差很大，但通路的结构是一致的，那就是接头分子(adaptor，如Shc, GRB2, Crk等)将鸟苷酸交换因子(SOS, C3G 等)和受体连接在一起，然后把信号向小GTP 结合蛋白(Ras, Rap1)传递，后者又激活核心的级联反应，这是由一个MAPKKK( Raf) ，一个MAPKK( MEK1/2)和MAPK( Erk)所构成的。活化的ERK 二聚体能调节胞浆中的目标分子，也可以转移到细胞核中，然
后对一系列转录因子进行磷酸化以调节基因表达。SciRes（3）很多外部的刺激都能够激活G蛋白偶联受体(GPCR)。在受体活化以后，G 蛋白将GDP 转换成GTP ，然后结合了GTP的α和β/γ亚基从受体脱离开，启动信号向胞内的传导。与不同亚型的异质三聚体G 蛋白结合的受体可以采取不同 的手段激活小G 蛋白/MAPK级联反应，至少有三个不同家族的酪氨酸激酶参与其中。Src家族激酶响应活化的PI3Kγ，而后者被β/γ亚基激活。它们还能够响应受体的内化，受体酪氨酸激酶的交叉活化，以及有Pyk2 和/或FAK参与的整 合素途径信号。GPCRs同样可以通过PLCβ去激活PKC 和CaMKII ，对下游的MAPK通路可以有激活或抑制的影响。SciRes（4）压力激活的蛋白激酶(Stress-activated protein kinase, SAPK)或称Jun氨基端激酶(Jun amino-terminal kinase, JNK) 是MAPK的家族成员，能被一系列的环境压力，炎症细胞因子，生长因子和GPCR激动剂所激活。压力信号通过Rho家族的小GTP 酶(small GTPase)向这条级联通路传导，这些小GTP酶包括(Rac, Rho, cdc42) 。和其他的MAPK情况一样，靠近膜的激酶是一个MAPKKK，一般 是MEKK1-4 ，或者是一个混合激酶去磷酸化并激活 MKK4(SEK)或MKK7，它们是SAPK/JNK的激酶。另外，MKK4/7也可以被生发中心激酶(germinal center kinase, GCK)以一种GTPase 依赖的方式激活。活化后的
TCR细胞通路研究进展
T C R细胞通路研究进展标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
T C R信号通路研究新进展 T细胞相关免疫疗法在近期的癌症研究中大放异彩，“主力部队”是CAR-T和TCR-T这两种技术。相对于CAR-T细胞疗法，TCR-T疗法的关注度相对低些，但是这两种细胞疗法都属于利用患者自身的T淋巴细胞治疗癌症的前沿基因疗法。研究发现，在实体瘤治疗方面，TCR疗法可能比CAR疗法更有优势。 T细胞在免疫系统中具有重要作用，可以攻击病原体和肿瘤细胞。T细胞受体（TCR）能识别不同的广泛亲和力的配体，参与激活多种生理过程。TCR细胞疗法定制功能性TCR，具有最佳的抗原识别特性，利用人体免疫系统来对抗癌症。那么，这种疗法的分子机制是什么呢？与之相关的TCR信号通路的分子调控机制有怎样的研究进展呢？本文将对这些问题进行综合性讲述。 TCR蛋白结构 图一TCR复合物结构 T细胞作为适应性免疫应答的主要组成部分，其抗原识别受体结构以被证实，克隆获得的TCR由α-链和β-链构成异源二聚体。TCR异源二聚体主要与CD3的多个信号转导亚基结合，如图所示，CD3γ、CD3δ和CD3ε异源二聚体以及CD3ζ同源二聚体。在CD3的不同亚基含有免疫受体酪氨酸的活化基序-ITAM，但是每个亚基的数量不同，CD3γ、CD3δ和CD3ε分别含有一个，而CD3ζ含有三个串联的ITAM，这样就使的每个T细胞受体可以产生10个ITAM。酪氨酸磷酸化的ITAM可以使TCR与胞内信号转导通路发生偶联，向TCR募集含有SH2结构域的蛋白质，如酪氨酸激酶ZAP70。但是现在还没有解决为什么TCR复合物包含这么多的信号转导亚基和ITAM的问题，主要有两种假说，一种是CD3分子或单独的ITAM可能通过募集独特的效应分子，执行不同的信号转导功能；另一种是多个ITAM的主要功能是放大TCR信号。 TCR识别与抗原递呈细胞（APC）呈递的可以结合MHC分子（pMHC）的肽。单独的TCR能够识别具有广泛亲和力的不同配体（自身肽和外来肽）。TCR参与触发不同的功能输出。在胸腺中，pMHC与TCR信号结合强度决定了细胞发育与分化过程。当结合力在最小值到最大值之间时，促进胸腺细胞的存活，并转化成CD4+CD8-或CD4-CD8+的成熟阶段；如果TCR与pMHC太低或太高，细胞会发生凋亡。在外围，自体pMHC对TCR的低亲和力结合提供了维持初始T细胞所必需的强直性存活信号，并且还可以促进其与外来抗原高亲和力遭遇时的完全激活。 图二TCR结合强度对胸腺细胞的影响 TCR信号强度对于产生合适的应答T细胞至关重要。TCR信号传导应答指导 CD4+T细胞分化成功能不同的T辅助细胞亚群，对特定T细胞亚群（如调节性T 细胞）也起着关键作用。TCR细胞的强度和持续时间与记忆T细胞分化相关，也是诱导T细胞无能或耗竭的基本决定因素。TCR信号受到生化及分子机制的调控，导致信号放大或衰减。调控TCR的机制复杂多样，不过可以分为三个基本层面：早期信号转导效应分子（如关键激酶和磷酸酶的调节）；信号分子发育阶段（特异性表达调控）；以及TCR信号强度的动态调控。 TCR信号通路概述 图三：TCR信号通路概述
信号通路研究思路
信号通路研究思路
证明一个药物能通过抑制P38表达而发挥保护细胞的作用，需要做的是： 要证明你的药物是通过抑制P38表达而发挥保护作用，首先要证明P38表达增加会导致损伤。 其次，要证明你的药物存在保护作用。 再次，证明你的药物可以抑制P38表达。 最后，证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。 首先证明P38表达增加会导致损伤。 这里需要建立一个损伤模型。正如你提到的，钙离子导致P38mapk的增高，如果某种损伤可以通过钙离子导致P38mapk的增高，那么你就建立起了一个损伤模型。这时，对P38做个RNA干扰，使其表达下降，再来损伤刺激，如果这时损伤刺激不会导致损伤，那么可以说P38mapk的增高会导致损伤。 这里最好不要用P38的抑制剂SB来处理，因为这个抑制剂是针对P38活性的抑制剂，抑制的是P38的磷酸化，而不是表达量。 如果说明的问题是p38磷酸化水平增加而导致损伤，那么我建议用抑制剂。这时还可以用Dominant-negative。抑制剂的实验证实该药物不影响P38表达，而影响其活化。（应该首先考虑选用抑制剂，因为目前一些药物的作用机制不是抑制靶点的表达，而是抑制靶点的激活。如果在此应用RNAi的话，很可能会漏掉这个机制或增加实验步骤。） 其次，要证明你的药物存在保护作用。
当然就是用你的药物先处理一下，再来损伤刺激，如果这时损伤刺激不会导致损伤，那么可以说你的药物存在保护作用。 再次，证明你的药物可以抑制P38表达。 用你的药物先处理一下，再来损伤刺激，再检测P38表达，如果用药组相对于没有用药组P38表达下降，那么可以说你的药物可以抑制P38表达。 最后，证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。 这一步看似不必要，其实是最重要的步骤，而国内的文章往往忽略了这一关键环节。 这里建议还是用RNA干扰P38表达，再用你的药物处理，再进行损伤刺激，如果用药组与没有用药组的损伤程度一致，那么才可以说你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。 抑制剂也有其局限性，有时是“致命”的，主要原因是抑制剂缺乏特异性。虽然我们在文章里看到用抑制剂的时候都说是什么什么的特异性抑制剂，但真的那么特异吗？其实往往是作者为了写文章发文章的需要而夸大了抑制剂的特异性。细胞里无数的信号通路，谁也不能保证抑制剂在作用于靶分子时不会影响其他信号通路。其实无论什么抑制剂，对剂量的要求都相对比较苛刻，为什么？就是因为一旦浓度高了，就不知道会干扰到其他哪些信号通路，从而产生很多说不清道不明的现象。 PI3K的抑制剂---LY294002和wortmannin,它们都能抑制PI3K和相关的激酶，但LY294002的浓度达到200μM常用来抑制DNA依赖的蛋白激酶（DNA-PK）；wortmannin在浓度超过3μM常用来抑制运动失调性毛细血管扩张基因
细胞常见信号通路图片合集
目录 actin肌丝 (5) Wnt/LRP6 信号 (7) WNT信号转导 (7) West Nile 西尼罗河病毒 (8) Vitamin C 维生素C在大脑中的作用 (10) 视觉信号转导 (11) VEGF，低氧 (13) TSP-1诱导细胞凋亡 (15) Trka信号转导 (16) dbpb调节mRNA (17) CARM1甲基化 (19) CREB转录因子 (20) TPO信号通路 (21) Toll-Like 受体 (22) TNFR2 信号通路 (24) TNFR1信号通路 (25) IGF-1受体 (26) TNF/Stress相关信号 (27) 共刺激信号 (29) Th1/Th2 细胞分化 (30) TGF beta 信号转导 (32) 端粒、端粒酶与衰老 (33) TACI和BCMA调节B细胞免疫 (35) T辅助细胞的表面受体 (36) T细胞受体信号通路 (37) T细胞受体和CD3复合物 (38) Cardiolipin的合成 (40) Synaptic突触连接中的蛋白 (42) HSP在应激中的调节的作用 (43) Stat3 信号通路 (45) SREBP控制脂质合成 (46) 酪氨酸激酶的调节 (48) Sonic Hedgehog (SHH)受体ptc1调节细胞周期 (51) Sonic Hedgehog (Shh) 信号 (53) SODD/TNFR1信号 (56) AKT/mTOR在骨骼肌肥大中的作用 (58) G蛋白信号转导 (59) IL1受体信号转导 (60) acetyl从线粒体到胞浆过程 (62) 趋化因子chemokine在T细胞极化中的选择性表达 (63) SARS冠状病毒蛋白酶 (65) SARS冠状病毒蛋白酶 (67) Parkin在泛素-蛋白酶体中的作用 (69)
参与细胞信号转导通路的蛋白简写及全拼
参与细胞信号转导通路的蛋白简写及全拼 4E-BP eIF4E binding protein Abl Ableson protein tyrosine kinase ACTR A histone acetyltransferase AIF Programmed cell death protein 8 ANT Adenine nucleotide translocation channel Apaf-1 Apoptotic protease activating factor 1 APP beta-Amyloid precursor protein APPs Acute phase proteins ASIP Agouti switch protein ASK Apoptosis signal-regulating kinase (e.g., ASK1) ATF-2 Activating transcription factor 2 ATM Ataxia telangiectasia?mutated protein kinase ATR ATM and Rad3?related protein kinase Bam32 B-cell adaptor molecule 32 kDa BCAP B-cell adaptor for PI3K Bcl-10 B-cell leukemia 10 protein Bfl-1 Bcl-2-related protein A1 Bid A BH3 domain?only death agonist protein Bimp1 B-lymphocyte-induced maturation protein 1 BLNK B-cell linker protein BRCA Breast cancer growth suppressor protein Btk Brutonís tyrosine kinase C3G Guanine nucleotide?releasing factor 2 CAD Caspase-activated deoxyribonuclease Cam Calmodulin CaMK Calcium/calmodulin-dependent kinase CAP c-Cbl-associated protein Cas p130CAS, Crk-associated substrate Caspase Cysteine proteases with aspartate specificity CBL Cellular homologue of the v-Cbl oncogene CBP CREB binding protein CD19 B-lymphocyte antigen CD19 CD22 B-cell receptor CD22 CD40 B-cell surface antigen CD40 CD45 Leukocyte common antigen, a phospho-tyrosine phosphatase CD5 Lymphocyte antigen CD5 cdc2 Cell division cycle protein 2, CDK1 cdc34 Cell division cycle protein 34, a ubiquitin conjugating (E2) enzyme cdc42 Cell division cycle protein 42, a G-protein CDK Cyclin-dependent kinase Chk Checkpoint kinase CHOP C/EBP homologous protein 10
mTOR信号通路图
mTOR信号通路图 mTOR可对细胞外包括生长因子、胰岛素、营养素、氨基酸、葡萄糖等多种刺激产生应答。它主要通过PI3K/Akt/mTOR途径来实现对细胞生长、细胞周期等多种生理功能的调控作用。正常情况下，结节性脑硬化复合物-1(TSC-1)和TSC-2形成二聚体复合物，是小GTP 酶Rheb(Ras-homolog enriched in brain)的抑制剂，而Rheb是mTOR活化所必需的刺激蛋白，因此TSC-1/TSC-2在正常情况下抑制mTOR的功能。当Akt活化后，它可磷酸化TSC-2的Ser939和Thr1462，抑制了TSC-1/TSC-2复合物的形成，从而解除了对Rheb 的抑制作用，使得mTOR被激活。活化的mTOR通过磷酸化蛋白翻译过程中的某些因子来参与多项细胞功能，其中最主要的是4EBP1和P70S6K。
在整个PI3K/Akt/mTOR信号通路中，有一条十分重要的负反馈调节剂就是10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10, PTEN)。PTEN是一个肿瘤抑制基因，位于人染色体10q23。它有一个蛋白酪氨酸磷酸酶结构域，在这条通路中可以将PI-3，4-P2与PI-3，4，5-P3去磷酸化，从而负调节PI3K下游AKt/mTOR信号通路的活性。 本信号转导涉及的信号分子主要包括 IRS-1，PI3K，PIP2，PIP3，PDK1，PTEN，Akt，TSC1，TSC2，Rheb，mTOR，Raptor，DEPTOR，GβL，p70S6K，ATG13，4E-BP1，HIF-1，PGC-1α，PPARγ，Sin1，PRR5，Rictor，PKCα，SGK1，PRAS40，FKBP12，Wnt，LRP，Frizzled，Gαq/o，Dvl，Erk，RSK，GSK-3，REDD1，REDD2，AMPK，LKB1，RagA/B，RagC/D等。
细胞信号传导通路
细胞信号传导通路 1. 信息传导通路的基本组成 人体细胞之间的信息转导可通过相邻细胞的直接接触来实现，但更重要的也是更为普遍的则是通过细胞分泌各种化学物质来调节自身和其他细胞的代谢和功能，因此在人体中，信息传导通路通常是由分泌释放信息物质的特定细胞、信息物质（包含细胞间与细胞内的信息物质和运载体、运输路径等）以及靶细胞 （包含特异受体等）等构成。 信号转导通常包括以下步骤： 释放信息物质→信息物质经扩散或血循 环到达靶细胞→与靶细胞的受体特异性 结合→受体对信号进行转换并启动细胞 内信使系统→靶细胞产生生物学效应 【1】。通过这一系列的过程，生物体对外界刺激作出反应。 3. 信息物质及其分类 信息物质可分为细胞间信息物质与细胞内信息分子。 凡由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质统称为细胞间信息物质，即第一信使，按照细胞分泌信息物质的方式又可将细胞间信息物质分为神经递质、内分泌激素、局部化学介质和气体信号分子。在细胞内传递细胞调控信号的化学物质称为细胞内信息物质，其组成多样化。通常将Ca2+、cAMP、cGMP、DAG、IP3、Cer、花生四烯酸及其代谢物等这类在细胞内传递信息的小分子化合物称为第二信使。责细胞核内外信息传递的物质称为第三信使，能与靶基因特异序列结合，发挥着转录因子或转录调节因子的作用。 研究发现一些信息物质能与位于分泌细胞自身的受体结合而起调节作用，称为自分泌信号。如肝癌细胞能分泌多种血管生成因子，其中VEGF是目前发现的刺激肿瘤血管形成最重要的促进因子，研究表示，肿瘤细胞分泌的VEGF除选择性作用于肿瘤血管内皮细胞上的特异性VEGF受体（Flt-1和KDR），通过酪氨酸激酶介导的信号转导，调控内皮细胞分化和血管形成外，肿瘤细胞自身也有VEGF受体的表达，而且针对VEGF及其受体的干预措施可以改变这些肿瘤细胞的体外增殖活性和其他生物学特征，这些研究表示肿瘤中存在VEGF的自分泌机制【2】。自分泌所产生的信息物质也具有其独特而重要的生理功能。4. 受体分类及与受体相关的信息转导途径 受体是细胞膜上或细胞内能识别生物活性分子并与之结合的成分，他能把识别和接受的信号正确无误地放大并传递到细胞内部，进而引起生物学效应。存在于细胞质膜上的受体称为膜受体，化学本质绝大部分是糖镶嵌蛋白；位于胞液和细胞核中的受体称为胞内受体，它们
第九章 细胞信号转导知识点总结
第九章细胞信号转导 细胞通讯：一个信号产生细胞发出的信息通过介质（又称配体）传递到另一个靶细胞并与其相应的受体相互作用，然后通过信号转导产生靶细胞内一系列的生理生化变化，最终表现为靶细胞整体的生物学效应。 信号传导：是指信号分子从合成的细胞中释放出来，然后进行传递。信号传导强调信号的产生、分泌与传送。 信号转导：是指信号的识别、转移与转换，包括配体与受体的结合、第二信使的产生及其后的级联反应等。信号转导强调信号的接收与接收后信号转换的方式与结果。 受体：是一类能够结合细胞外特异性信号分子并启动细胞反应的蛋白质。 第二信使：细胞外信号分子不能进入细胞，它作用于细胞表面受体，经信号转导，在细胞内产生非蛋白类小分子，这种细胞内信号分子称为第二信使。 分子开关：细胞信号传递级联中，具有关闭和开启信号传递功能的分子。 信号通路：细胞接受外界信号，通过一整套特定机制，将胞外信号转化为胞内信号，最终调节特定基因表达，引起细胞的应答反应，这种反应系列称为细胞信号通路。 G蛋白偶联受体：指配体-受体复合物与靶细胞的作用是要通过与G蛋白的偶联，在细胞内产生第二信使，从而将细胞外信号跨膜传递到胞内影响细胞行为的受体。 cAMP信号通路：细胞外信号与细胞相应受体结合，导致细胞内第二信使cAMP 水平的变化而引起细胞反应的信号通路。 （磷脂酰肌醇信号通路）双信使系统：胞外信号分子与细胞表面G蛋白偶联受体结合，激活膜上的磷脂激酶C，使质膜上的PIP2分解成IP3和DAG两个第二信使，将胞外信号转导为胞内信号，两个第二信使分别激活两种不同的信号通路，即IP3-Ca2+和DAG-PKC途径，实现对胞外信号的应答，因此将这种信号通路称为“双信使系统”。 钙调蛋白：真核细胞中普遍存在的Ca2+应答蛋白。 Ras蛋白：Ras基因的产物，分布于质膜胞质侧，结合GTP时为活化状态，结合GDP时失活状态，因此Ras蛋白属于GTP结合蛋白，具有GTP酶活性，具有分子开关的作用。
信号通路研究思路
证明一个药物能通过抑制P38表达而发挥保护细胞的作用，需要做的是： 要证明你的药物是通过抑制P38表达而发挥保护作用，首先要证明P38表达增加会导致损伤。 其次，要证明你的药物存在保护作用。 再次，证明你的药物可以抑制P38表达。 最后，证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。 首先证明P38表达增加会导致损伤。 这里需要建立一个损伤模型。正如你提到的，钙离子导致P38mapk的增高，如果某种损伤可以通过钙离子导致P38mapk的增高，那么你就建立起了一个损伤模型。这时，对P38做个RNA干扰，使其表达下降，再来损伤刺激，如果这时损伤刺激不会导致损伤，那么可以说P38mapk的增高会导致损伤。 这里最好不要用P38的抑制剂SB来处理，因为这个抑制剂是针对P38活性的抑制剂，抑制的是P38的磷酸化，而不是表达量。 如果说明的问题是p38磷酸化水平增加而导致损伤，那么我建议用抑制剂。这时还可以用Dominant-negative。抑制剂的实验证实该药物不影响P38表达，而影响其活化。（应该首先考虑选用抑制剂，因为目前一些药物的作用机制不是抑制靶点的表达，而是抑制靶点的激活。如果在此应用RNAi的话，很可能会漏掉这个机制或增加实验步骤。） 其次，要证明你的药物存在保护作用。 当然就是用你的药物先处理一下，再来损伤刺激，如果这时损伤刺激不会导致损伤，那么可以说你的药物存在保护作用。 再次，证明你的药物可以抑制P38表达。 用你的药物先处理一下，再来损伤刺激，再检测P38表达，如果用药组相对于没有用药组P38表达下降，那么可以说你的药物可以抑制P38表达。 最后，证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。 这一步看似不必要，其实是最重要的步骤，而国内的文章往往忽略了这一关键环节。 这里建议还是用RNA干扰P38表达，再用你的药物处理，再进行损伤刺激，如果用药组与没有用药组的损伤程度一致，那么才可以说你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。 抑制剂也有其局限性，有时是“致命”的，主要原因是抑制剂缺乏特异性。虽然我们在文章里看到用抑制剂的时候都说是什么什么的特异性抑制剂，但真的那么特异吗？其实往往是作者为了写文章发文章的需要而夸大了抑制剂的特异性。细胞里无数的信号通路，谁也不能保证抑制剂在作用于靶分子时不会影响其他信号通路。其实无论什么抑制剂，对剂量的要求都相对比较苛刻，为什么？就是因为一旦浓度高了，就不知道会干扰到其他哪些信号通路，从而产生很多说不清道不明的现象。 PI3K的抑制剂---LY294002和wortmannin,它们都能抑制PI3K和相关的激酶，但LY294002的浓度达到200μM常用来抑制DNA依赖的蛋白激酶（DNA-PK）；wortmannin在浓度超过3μM常用来抑制运动失调性毛细血管扩张基因突变（ATM)以及DNA-PK。相对而言，MEK1/2
细胞信号通路大全
1PPAR信号通路：过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是与维甲酸、类固醇和甲状腺激素受 体相关的配体激活转录因子超家族核激素受体成员。它们作 为脂肪传感器调节脂肪代谢酶的转录。PPARs由PPARα、PPARβ和PPARγ3种亚型组成。PPARα主要在脂肪酸代谢水平高的组织，如：肝、棕色脂肪、心、肾和骨骼肌表达。他通过 调控靶基因的表达而调节机体许多生理功能包括能量 代谢、生长发育等。另外，他还通过调节脂质代谢的生物感受器而调节细胞生长、分化与凋亡。PPARa同时也是一种磷酸化蛋白，他受多种磷酸化酶的调节包括丝裂原激活蛋白激酶(ERK-和 p38．MAPK)，蛋白激酶A和C(PKA，PKC)，AMPK和糖原合成酶一3(GSK3)等调控。调控PPARa 生长信号的酶报道有MAPK、PKA和GSK3。PPARβ广泛表达于各种组织，而PPARγ主 要局限表达在血和棕色脂肪，其他组织如骨骼肌和心肌有少量表达。PPAR-γ在诸如炎症、动 脉粥样硬化、胰岛素抵抗和糖代谢调节，以及肿瘤和肥胖等方面 均有着举足轻重的作用，而其众多生物学效应则是通过启动或参与的复杂信号 通路予以实现。鉴于目前人们对PPAR—γ信号通路尚不甚清，PPARs通常是通过与9-cis维 甲酸受体(RXR)结合实现其转录活性的。 2MAPK信号通路:mapk简介:丝裂原激活蛋白激酶（mitogen—activatedproteinkinase，MAPK）是广泛存在于动植物细胞中的一类丝氨酸/苏氨酸蛋 白激酶。作用主要是将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞的生物化学反 应（增殖、分化、凋亡、应激等）。 MAPKs家族的亚族:ERKs（extracellularsignalregulatedkinase) ：包括 ERK1、ERK2。生长因子、细胞因子或激素激活此通路，介导细胞增殖、分化。 JNKs(c-JunN-terminalkinase)包括JNK1、JNK2、JNK3。此亚族成员能使Jun转录因子N末 端的两个氨基酸磷酸化而失活，因此称为JunN末端激酶(JNKs)。物理、化学的因素引起的 细胞外环境变化以及致炎细胞因子调节此通 路。 P38MAPKs：丝氨酸/络氨酸激酶，包括p38α、p38β、p38γ、p38δ。p38MAPK参与多种细胞内信息传递过程,能对多种细胞外刺激发生反应,可磷酸化 其它细胞质蛋白,并能从胞浆移位至细胞核而调节转录因子的活性来改变基因的表达水平,从而 介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。 ERK5:是一种非典型的MAPK通路，也叫大MAPK通路，只有一个成员。它可 被各种刺激因素激活。不仅可以通过磷酸化作用使底物活化，并且通过C端的物理性结合作用 激活底物。 3ERBB信号途径:ErbB蛋白属于跨膜酪氨酸激酶的EGF受体家族成员。ErbB的命名来源于在禽 红白血病B(v-Erb-B)发现的EGF受体的突变体,因而EGF
细胞信号转导练习题 四套题
细胞信号转导 第一套 一、选择题（共10题，每题1分） 1、Ca2+在细胞信号通路中是（） A. 胞外信号分子 C. 第二信使 B. 第一信使 D. 第三信使 2、动员细胞内源性Ca2+释放的第二信使分子是（）。 A. cAMP C. IP3 B. DAG D. cGMP 3、细胞通讯是通过（）进行的。 A. 分泌化学信号分子 C. 间隙连接或胞间连丝 B. 与质膜相结合的信号分子 D. 三种都包括在内 4、Ras蛋白由活化态转变为失活态需要( )的帮助。 A. GTP酶活化蛋白（GAP） C. 生长因子受体结合蛋白2（GRB2） B. 鸟苷酸交换因子（GEF） D. 磷脂酶C-γ(PLCγ) 5、PKC在没有被激活时，游离于细胞质中，一旦被激活就成为膜结合蛋白，这种变化依赖于（）。 A. 磷脂和Ca2+ C. DAG和 Ca2+ B. IP3和 Ca2+ D. DAG和磷脂 6、鸟苷酸交换因子（GEF）的作用是（）。 A. 抑制Ras蛋白 C. 抑制G蛋白 B. 激活Ras蛋白 D. 激活G蛋白 7、cAMP依赖的蛋白激酶是（）。 A. 蛋白激酶G（PKG） C. 蛋白激酶C（PKC） B. 蛋白激酶A（PKA） D. MAPK 8、NO信号分子进行的信号转导通路中的第二信使分子是（）。 A. cAMP C. IP3 B. DAG D. cGMP 9、在下列蛋白激酶中，受第二信使DAG激活的是（）。 A. PKA C. MAPK B. PKC D. 受体酪氨酸激酶 10、在RTK－Ras蛋白信号通路中，磷酸化的（）残基可被细胞内的含有SH2结构域的信号蛋 白所识别并与之结合。 A. Tyr C. Ser B. Thr D. Pro 二、判断题（共10题，每题1分） 11、生成NO的细胞是血管平滑肌细胞。（） 12、上皮生长因子（EGF）受体分子具酪氨酸激酶活性位点。（） 13、Ras蛋白在cAMP信号通路中起着分子开关的作用。（）
最新细胞各种信号通路
最新细胞各种信号通路《Cell》 SnapShots are handy reference guides, carefully designed to highlight the key information on a particular topic on one page. SnapShots present up-to-date tables of nomenclature and glossaries, full signaling pathways, and schematic diagrams of cellular processes.Snapshots in red are FREE[/B]. Actin Regulators I[/url] Actin Regulators II[/url]
Antibiotic Inhibition of Protein Synthesis I[/url] Antibiotic Inhibition of Protein Synthesis II[/url] ENHANCED[/url]
Auxin Signaling and Transport Bacterial Appendages I Bacterial Appendages II B7/CD28 Costimulation
BCL-2 Proteins Ca2+-Calcineurin-NF A T Signaling
Ca2+-Dependent Transcription in Neurons Cell-Cycle Regulators I
细胞信号通路大全
1 PPAR 信号通路：过氧化物酶体增殖物激活受体( PPARs) 是与维甲酸、类固醇和甲状腺激素受体相关的配体激活转录因子超家族核激素受体成员。它们作为脂肪传感器调节脂肪代谢酶的转录。PPARs由PPAR a、PPAR B和PPAR 丫3种亚型组成。PPAR a主要在脂肪酸代谢水平高的组织，如：肝、棕色脂肪、心、肾和骨骼肌表达。他通过调控靶基因的表达而调节机体许多生理功能包括能量代谢、生长发育等。另外，他还通过调节脂质代谢的生物感受器而调节细胞生长、分化与凋亡。PPARa 同时也是一种磷酸化蛋白，他受多种磷酸化酶的调节包括丝裂原激活蛋白激酶(ERK-和p38 . M APK)，蛋白激酶A和C( PKA , PKC) , AM PK和糖原合成酶一3( G SK3) 等调控。调控PPARa 生长信号的酶报道有M APK 、PKA和G SK3。PPAR B广泛表达于各种组织，而PPAR 丫主要局限表达在血和棕色脂肪，其他组织如骨骼肌和心肌有少量表达。PPAR- 丫在诸如炎症、动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和糖代谢调节，以及肿瘤和肥胖等方面均有着举足轻重的作用，而其众多生物学效应则是通过启动或参与的复杂信号通路予以实现。鉴于目前人们对PPAR―丫信号通路尚不甚清，PPARs通常是通过与9-cis维甲酸受体(RXR) 结合实现其转录活性的。 2 MAPK信号通路:mapk简介丝裂原激活蛋白激酶(mitogen —activated protein kinase ，MAPK )是广泛存在于动植物细胞中的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。作用主要是将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞的生物化学反应(增殖、分化、凋亡、应激等)。 MAPKs 家族的亚族:ERKs (extracellular signal regulated kinase) ：包括ERK1、 ERK2。生长因子、细胞因子或激素激活此通路，介导细胞增殖、分化。 JNKs(c-Jun N-terminal kinase) 包括JNK1、JNK2、JNK3。此亚族成员能使 Jun 转录因子N 末端的两个氨基酸磷酸化而失活，因此称为Jun N 末端激酶(JNKs)。物理、化学的因素引起的细胞外环境变化以及致炎细胞因子调节此通路。 P38 MAPKs :丝氨酸/ 络氨酸激酶，包括p38 a、p38 B、p38 丫、p38 3。p38 MAP K 参与多种细胞内信息传递过程,能对多种细胞外刺激发生反应,可磷酸化其它细胞质蛋白,并能从胞浆移位至细胞核而调节转录因子的活性来改变基因的表达水平,从而介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。 ERK5:是一种非典型的MAPK通路，也叫大MAPK通路，只有一个成员。它可被各种刺激因素激活。不仅可以通过磷酸化作用使底物活化，并且通过 C 端的物理性结合作用激活底物。 3 ERBB信号途径：ErbB蛋白属于跨膜酪氨酸激酶的EGF受体家族成员。ErbB的命名来源于在禽红白血病B( v-Erb-B) 发现的EGF 受体的突变体,因而EGF 受体亦称为“ ErbB1 ” 。人源ErbB2 称为HER2, 特指人的EGF 受体。ErbB 家族的另外两个
主流信号通路大盘点
PI3K/AKT信号通路
介绍 1987年，Staal等发现小鼠的白血病病毒Akt8可以引起水貂上皮细胞系CCL264出现恶性转化灶，随后在这个反转录病毒中找到了一个癌基因，并命名为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)。1991年，3个独立的研究小组分别宣布找到了Akt基因，因其与蛋白激酶A(PKA)及蛋白激酶C(PKC)在结构上相似，因此又被命名为蛋白激酶B(PKB)。1995年，Akt作为磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K，phosphatidylinositol-3-kinase）经多种生长因子活化后的下游靶点被发现，同时第一个Akt底物糖原合成激酶3(glycogen synthesis kinase-3，GSK-3)被确认，分别揭示了PI3K/Akt通路在调控细胞新陈代谢中的重要作用。查看更多 在该信号转导通路中往往会涉及以下信号分子： ntegrin，FAK，Paxillin，ILK，PIP3，S6，p70S6K，RTK，Gab1， Gab2，IRS-1，PI3K，PTEN，AKT，PDK1，CytokineReceptor，Jak1，CD19，BCR，Ag，BCAP，Syk，Lyn，GPCR，TSC1，TSC2，Gβγ， GαGTP，PP2A，PHLPP，CTMP，PDCD4，4E-BP1，ATG13， mTORC1，TSC1，TSC2，PRAS40，XIAP，FoxO1，Bim，Bcl-2，Bax，MDM2，p53，Bax，Bad，14-3-3，Wee1，Myt1，p27Kip1， p21Waf1/Cip1，CyclinD1，GSK-3，GS，Bcl-2，mTORC2，LaminA， Tpl2，IKKα，eNOS，GABAAR，Huntingtin，Ataxin-1，PFKFB2，PIP5K，AS160