当前位置：文档库 › 白细胞五分类原理和散点图特征

白细胞五分类原理和散点图特征

血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征

2008-12-14 来源:检验世界网浏览:5747次转发至：我要评论【字号：大中小】

核心提示：本文主要介绍全自动血细胞分析仪在白细胞五分类上的原理和散点图分布特点。此类仪器在红细胞、血红蛋白、血小板和计算参数上一般会采用类似的测定原理和计算方法，此类仪器的进展和其功能特点可参考作者撰写的其它文章。赞

北京协和医院检验科张时民检验地带网

血细胞分析技术已经进入自动化时代，而具有白细胞五分类或更多分析参数的仪器也普遍的应用于国内各级医院实验室中，为临床诊断和治疗服务。而具有18项参数带有白细胞三分群功能的血细胞分析仪也已经普及进入到基层医院和社区医疗中心，在许多大型医院中已不占主流位置，因此可以说目前在较大医院的检验科，常规血细胞分析仪已经进入全自动化和白细胞五分类的时代。

本文主要介绍全自动血细胞分析仪在白细胞五分类上的原理和散点图分布特点。此类仪器在红细胞、血红蛋白、血小板和计算参数上一般会采用类似的测定原理和计算方法，此类仪器的进展和其功能特点可参考作者撰写的其它文章（见参考文献）。具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器是指通过各种物理和化学技术对白细胞进行分析，以获得外周血液中白细胞的五种常见类型，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞，淋巴细胞和单核细胞的百分率和绝对值的测定结果，此外还应该具有对出现异常白细胞的提示或初步分类功能。

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

目前国内外具有开发研制白细胞五分类法仪器的主要为欧美和日本生产厂商，比较著名的欧美厂家有Beckman-Coulter；ABBOTT；Siemens（Bayer）；ABX；日本有Sysmex和Nihon Kohdon。在国内已经有迈瑞（MINDRAY）公司生产几个型号的五分类血细胞分析仪器投入医疗市场。检验地带网

一简要发展史

1974年，一种名为HEMALOG D的具有初步白细胞分类功能的白细胞分析仪问世。

1982年，Technicon公司生产了H6000型血液细胞分析仪器，应该是首款具有白细胞五分类能力的仪器。同时代日本日立公司推出图像分析法的白细胞分析仪HITACHI 8200型，仅仅是用于完成白细胞血片分类的仪器，没有其他血细胞计数分析能力。

Technicon 公司1985 年开发了比较成熟的具有白细胞五分类功能的Technicon H1 型血液细胞分析仪，随后升级为H2型和H3型。

COULTER公司在1987 年开发研制其经典VCS技术，并推出持续具有多年影响力的、具有白细胞五分类功能的血液细胞分析仪MAXM 型。

1990年前后，欧洲和日本许多厂家都陆续推出了各种类型的具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器。各厂家设计生产的此类血细胞分析仪，其在白细胞分类技术上原理各不相同，

分析测定项目略有不同，且形式多样，结构复杂，试剂种类和成分也趋于复杂。不断改进和升级的新产品使得仪器在白细胞分类技术上更加成熟和可靠。而技术的提高也带来了仪器和消耗品（试剂）价格的增加。

检验地带网

二仪器原理和散点图特点

1 体积、电导和激光散射原理

这是Beckman－Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法，他集三种物理学检测技术于一体，在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在标本中首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞，然后加入稳定剂来中和红细胞溶解剂的作用，使白细胞表面、胞浆和细胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池（Flowcell）中，接受仪器VCS三种技术的检测。

V代表体积（Volume）测量法，是采用经典的库尔特专利技术，用低频电流准确分析细胞体积。体积是区分白细胞亚群的一个重要的参数，它可有效区分体积大小差异显著的淋巴细胞和单核细胞。C代表高频电导性（Conductivity），采用高频电磁探针原理测量细胞内部结构间的差异，也是该公司的专利技术。细胞膜对高频电流具有传导性，当电流通过细胞时，细胞核的化学组份可使电流的传导性产生变化，其变化量可以反映出细胞内含物的信息。该参数可用来区分体积相近而内部性质不同的细胞群体，如淋巴细胞和嗜碱性粒细胞，由于它们的细胞核特性不同而在传导性参数上有所区别。S代表激光散射（Scatter）测量技术，采用氦氖激光源发出的单色激光扫描每个细胞，收集细胞在10°～70°角度内出现的散射光(MALS)信号。该激光束可穿透细胞，探测细胞内核分叶状况和胞浆中的颗粒情况，提供有关细胞颗粒性的信息，可以区分出颗粒特性不同的细胞群体。例如细胞内颗粒粗的要比颗粒细的散射光更强，因此可以用于区分粒细胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜碱性三种细胞。https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

图1 VCS法的测定原理

仪器将分析每个细胞在V、C、S 三种检测技术上的测量结果，因为不同类别的细胞会在体积、表面特征、内部结构等方面呈现明显的不同。将这些特征性信息被定义到以VCS 为三维坐标(分辨率为256×256×256=16,777,216)所形成的立体散点图中，这五类细胞可在三维空间中形成特定的细胞群。通过计算某群细胞数量占白细胞总数的百分比，即可得到五项白细胞分类结果。仪器不仅仅做出对正常白细胞的五项分类结果，给出典型的散点图型，还可以提示许多异常细胞区域的报警。

VCS技术可通过DF1、DF2、DF3三个散点图将五种类型白细胞明显区分开。三个散点图的纵坐标均定义为细胞体积。DF1为细胞体积和激光散射的直方图，DF2和DF3为细胞体积和高频电导性的直方图，DF3为除去粒细胞群体后显示出淋巴细胞后面的嗜碱性粒细胞图像。

图2 各类白细胞在VCS三维空间中的分布特点

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

图3 各类白细胞在散点图中的分布特点

VCS技术是Beckman－Coulter公司开发研制的经典专有方法，到目前为止的各种高档血细胞分析仪均采用该方法对白细胞进行分析。该方法在白细胞分析上尚有特殊能力，例如可以测定和分析中性粒细胞的体积、核浆比例、细胞颗粒特性等参数，也就是将中性粒细胞的VCS三个参数分别给出，用于了解细菌感性疾病与其它疾病的区别。也可对淋巴细胞、单核细胞等均作出其细胞群体的三个技术参数值，是比较有前景的研究内容。

仪器在RBC、PLT、WBC计数上依然采用电阻抗法，血红蛋白仍然采用比色法测定。该公司的五分类法血细胞分析仪先后推出多种类型，如MAXM、STKS、GEN·S、HmX、LH755

和最新的LH780等型号，在某些机型还具有网织红细胞分析功能和T淋巴细胞亚群分析功能。

媒体转载请自觉注明本文来自: 检验地带网(https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,) 详细出处：https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,/a/yixuejianyan/linchuangjianyan/419.html

血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征(2)

2008-12-14 来源:检验世界网浏览:5748次转发至：我要评论【字号：大中小】

核心提示：2. 电阻抗、射频和细胞化学技术日本Sysmex公司系列血细胞分析仪是在国内应用非常广泛的仪器，从三分类法到五分类法的各种型号仪器都有大量用户。其仪器型号种类丰富，功能和测定参数各异，其各种仪器间均有近似的-

2. 电阻抗、射频和细胞化学技术

日本Sysmex公司系列血细胞分析仪是在国内应用非常广泛的仪器，从三分类法到五分类法的各种型号仪器都有大量用户。其仪器型号种类丰富，功能和测定参数各异，其各种仪器间均有近似的检测原理，但在结合特定的功能以达到不同的分析目的方面，其原理和所用试剂又有不完全相同之处。本文以目前其最高配置的XE-2100型血细胞分析仪为例说明其在白细胞计数和分类方面的原理和特点。

Sysmex XE-2100在白细胞分类上采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光染色技术进行白细胞计数和分类。半导体激光照射在通过鞘流技术处理的细胞上，可根据每个细胞所产生的三种信号来鉴别细胞类别。前向散射光（FSC）信号可反应细胞体积大小；侧向散射光（SSC）信号可反应细胞的颗粒和细胞核等内含物的信息；侧向荧光（SFL）强度信号则用于分析细胞内脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量。

在白细胞分析上主要采用两个通道进行细胞计数和分类，两个通道均采用激光和鞘流进样的方式测定。DIFF通道：STROMATOLYSER-4DL试剂中的表面活性剂可以溶解掉标本中的红细胞和血小板，并在白细胞膜上打出小孔；然后第二种试剂STROMATOLYSER-4DS中的聚次甲基染料通过这个小孔进入白细胞中，与细胞核的核酸和细胞器结合，在经过波长633nm 的激光照射，产生的荧光强度与细胞的核酸含量成正比。STROMATOLYSER -4DL试剂还具有与嗜酸性颗粒特异性结合的能力，可根据侧向散射光信号强度，将嗜酸性粒细胞从中性粒细胞中分离出来。这样可以将中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞清楚的分离开。在DIFF散射图当中可以得到白细胞的四个分群（LMNE）。https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

WBC/BASO通道是专用作检测嗜碱性粒细胞的通道，因为嗜碱性粒细胞数量非常少，因此必须采用特殊技术处理。STROMATOLYSER –FB是一种酸性试剂，可将红细胞和血小板形成淡影化，将除嗜碱性粒细胞以外的白细胞处理成裸核形态，然后采用前向散射光（FSC）信号和侧向散射光（SSC）信号使嗜碱性粒细胞从其它细胞中分离出来。前向散射光与细胞体积测定相关，侧向散射光与裸核后的细胞结构复杂性有关。在这个通道中可以获得白细胞总数和嗜碱性粒细胞的数量。

图4 Sysmex XE-2100白细胞分类散点图

仪器在幼稚粒细胞分析上有特殊的IMI通道，在IMI检测通道中主要应用射频（RF）技术和直流电阻抗法（DC）。这个测定通道根据幼稚细胞膜表面比成熟细胞膜表面含有脂质少的现象，在稀释液中加入硫化氨基酸（IM试剂），由于占位不同，结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多，对溶血剂有抵抗作用，对幼稚细胞具有保护作用。当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解掉，而幼稚细胞不易被溶解破坏，可通过电阻法检测出来。射频技术用于测量细胞核的大小和颗粒的多少，而直流电信号可反应出细胞体积的大小。

检验地带网

在有核红细胞计数上通过专门的有核红细胞检测程序和专用通道-NRBC通道，在处理标本时加入STROMATOLYSER－NR专用试剂，它能使成熟红细胞溶解又可保持有核红细胞的核结构，同时也将白细胞保持完好。STROMATOLYSER－NR试剂中的聚次甲基荧光染料可渗透进入白细胞膜内，将白细胞和有核红细胞的核染色。通过检测荧光强度得到：白细胞核大荧光强度高，有核红细胞核小，荧光强度低，正常红细胞无细胞核和破碎，荧光强度极低。根据荧光强度差和前向散射光信号测定的细胞体积差，可将有核红细胞从其他细胞群中区分出来。

图5 Sysmex XE-2100 的幼稚细胞通道和有核红细胞通道散点图

该仪器在红细胞和血小板的计数和分析上仍然沿用了经典的电阻抗方法，在血红蛋白测定上采用了无剧毒物质的SLS溶血剂比色法。检验地带网

3 激光散射和细胞化学染色技术

最早采用该技术的是Technicon公司的H1,H3型，现在的最新型为西门子公司的Advia120型和2120型（2007年以前为Bayer公司产品）。他是一款开发比较早的高等级仪器，其在白细胞分类上采用了过氧化酶测定通道和嗜碱粒细胞测定通道。根据细胞化学染色的特性进行白细胞分类。在红细胞和血小板分析都采用了双角度激光法。在仪器的管路、电磁阀门、反应杯上采用了独特设计的集成液流版管路系统，是目前血细胞分析仪中所独有和特有的技术。

集成液流板实际上是将各种管路和电磁阀门、反应杯等血球计数仪的常用硬件进行综合处理，系统化，微小化，透明化和集成化。形成的集成板被放置在仪器的明显部位，方便观察，并具一定的美观效果。其另一特点则是细小的管路和反应杯可是标本和试剂用量明显减少。

图6 Advia 120的集成液流板。

在白细胞分类上，该仪器采用两个通道进行，一个为过氧化酶检测通道，另一个为嗜碱细胞检测通道。

过氧化酶反应（peroxidase，POX）是血涂片染色的一个常用细胞化学染色方法，用于鉴别原始细胞与成熟的粒细胞，鉴别粒细胞与非粒细胞。染色后的细胞内无蓝黑色颗粒出现为阴性反应，出现细小颗粒或稀疏样分布的黑色颗粒为弱阳性反应，出现黑色粗大而密集的颗粒为强阳性反应。过氧化物酶主要存在于粒细胞系和单核细胞系中，各类白细胞对过氧化物酶的反应是这样的：早期的原始粒细胞为阴性，早幼粒以后的各阶段都含有过氧化物酶，并随着细胞的成熟过氧化酶含量逐渐增强，中性分叶核粒细胞会出现强阳性反应，嗜酸性粒细胞具有最强的过氧化物酶反应，嗜碱粒细胞不含此酶呈阴性反应。在单核细胞系统，除早期原始阶段外，幼稚单核和单核细胞会出现较弱的过氧化物酶反应。淋巴细胞、幼稚红细胞、巨核细胞等都为过氧化物酶阴性反应。Advia 120/2120血细胞分析仪的过氧化酶（Perox）检测通道就是根据这个原理设计的，它检测每一个通过流动计数池中的白细胞，经过激光照射所产生的过氧化酶散射光吸收率，来当然试剂和辅助试剂均进行了改良。

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

在Perox通道所产生的散点图，横轴表示在5°-15°激光散射获得的细胞过氧化物酶含量情况，纵轴是低角度散射光测量的细胞体积大小。在此通道内细胞被分为五类。1）过氧化酶最强阳性的嗜酸性粒细胞；2）过氧化酶强阳性的嗜中性分叶核粒细胞；3）体积较大、过氧化酶弱阳性的单核细胞；4）体积较小、过氧化物酶阴性的淋巴细胞；5)体积大于淋巴细胞且过氧化物酶阴性的未染色大细胞，此类细胞增加提示幼稚或原始的各类细胞可能出现。

在嗜碱细胞（Baso）通道中采用的检测原理是：专用的嗜碱细胞试剂（Baso）将除了嗜碱细胞以外的白细胞除去细胞膜，使其裸核化并体积变小，仅将嗜碱性粒细胞保持原有状态，体积明显大于其他类的白细胞。在散点图上处于上面区域的为嗜碱性粒细胞；散点图的横坐标可表示细胞核结构的复杂性，处于左侧的为单个核的细胞群，包括单核细胞和淋巴细胞；处于右侧的为分叶核细胞；中间部位则考虑为杆状核细胞；左下端为单个核的原始细胞区。

图7：ADVIA 120/2120仪器Perox通道和Baso通道散点图

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

该仪器在红细胞、血小板的测定上也采用了光学检测技术。通过激光照射扫描每个通过Flowcell的红细胞，低角度散射光（2 °~3 °）用于测量细胞体积；高角度(5°～15°)散射光测量每个红细胞内的血红蛋白浓度（CH）和血红蛋白含量平均值CHCM。这两个值不受红细胞数量和血红蛋白测定的影响。还可根据每个红细胞内血红蛋白浓度，计算出红细胞内血红蛋白分布宽度（HDW）值。其根据红细胞在体积大小和单个红细胞内血红蛋白含量的分析，将红细胞划分为9个区域，得到红细胞体积和色素含量分布的九分图，也是该仪器在红细胞分析方面独有的特色，根据红细胞分布情况可初步判断疾病类别（下图中）。在血小板计数分析上也同样采用了二维光散射分析法，即可获得血小板体积大小，可测量1~60fl 内的各种大小不同的血小板，还可对血小板内容物含量（MPC）进行测定。血红蛋白测定采

用连续流动比色法和红细胞散射光直接测定法两种方法，有助于高脂血和高胆红素血标本的血红蛋白测定准确性。

图8：ADVIA 120/2120 红细胞散点图（左）和血小板散点图（右）

血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征(3)

2008-12-14 来源:检验世界网浏览:5749次转发至：我要评论【字号：大中小】

核心提示：4 双鞘流技术和细胞化学染色法ABX是法国生成血细胞分析仪器的著名厂家，其生产的全自动血细胞分析仪Pentra 120型为其高端产品。在白细胞分类上采用该公司特有的专利技术-双鞘流（DHSS）分析法。双鞘流是专利技术，

4 双鞘流技术和细胞化学染色法

ABX是法国生成血细胞分析仪器的著名厂家，其生产的全自动血细胞分析仪Pentra 120型为其高端产品。在白细胞分类上采用该公司特有的专利技术-双鞘流（DHSS）分析法。双鞘流是专利技术，而测定本身是通过电阻抗和光吸收法双重原理。标本首先在第一鞘流液中经过电阻抗测定分析，得到细胞体积测定结果，然后通过第二鞘流引导再行光吸收率分析，对细胞内容物进行测定，最终将细胞测定信息在散射图相应的位置表现出来。双鞘流技术的核心部件是含有红宝石小孔的复杂的鞘流池，在双鞘流系统的上下两端分别加上恒定电流，是保证电阻法的测量要素。为了保证被检测的细胞能够正确通过计数孔和鞘流通道，需要利用外来鞘流来进行矫正，因此通过左侧鞘流泵注入稀释液形成第一鞘流液，其作用是保护溶液能够直接通过计数小孔，并且保证其中携带的细胞处于中心部位，液流不发生偏移和扭曲；溶液通过计数小孔后，再通过中间鞘流泵注入稀释液形成第二股鞘流，用以保证吸光度测量。这样的过程被称为双鞘流分析技术。

图9 双鞘流技术示意图

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

仪器通过两个通道来完成白细胞的五项分类。其采用的细胞化学染色技术（Cytochemistry）的原理是经典的细胞分类技术，此染色剂中含有溶血素及氯唑黑活体染料（Chlorazol Black E）。在仪器的LMNE检测池中，全血样品与染色剂充分混匀，在35℃条件下进行孵育，此过程的作用是：①溶解红细胞②对单核细胞的初级颗粒、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的特异颗粒进行不同程度的染色，同时对细胞的膜（细胞膜、核膜、颗粒膜）也进行不同程度的着色③固定细胞的形态，使其保持自然状态。由于淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞对染色剂的着色程度不同、每种细胞特定的细胞核形态和颗粒的结构造成光散射的强度不同，产生了特定的吸光率。

染色后的标本被引导进入鞘流池进行双鞘流分析，首先经过60mm红宝石小孔进行电阻法分析，用于判断细胞体积大小，在LMNE散点图上的横坐标即可表示出细胞大小的特性。然后样本迅速进入直径为42mm的第二鞘流检测通道进行光吸收率测定，以判断细胞形态和内容物等情况。根据每类细胞在这两个分析参数上所表现出来的特性，形成二维分布的散点图。在此通道内可完成白细胞中淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸细胞群的分类。此通道内在分析的同时还能够检测两群异常白细胞亚群：巨大未成熟细胞（LIC）百分比及绝对值，异型淋巴细胞（ALY）百分比及绝对值，同时还可提供多达82种提示和报警信息。https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

在LMNE散点图上，各类白细胞的特点是：①淋巴细胞：典型的淋巴细胞体积较小、形态规则、胞浆内没有颗粒，其吸光率最低，所以定位在散点图的右下部矩阵中，正常淋巴细胞散点图为正态体积分布。②单核细胞：典型的单核细胞体积较大、肾状核、胞浆内有初级颗粒（几乎不着色），细胞核大且不分叶，光散射较少，所以位于吸光率轴的最下端，依据

单核细胞的体积，位于体积轴的最右端，而异常单核细胞及特大单核细胞则可能出现在LIC 的矩阵中。③中性粒细胞：典型的中性粒细胞具有嗜中性颗粒及分叶核的结构，中性颗粒部分着色，同时由于颗粒及核的分叶等形态上的复杂性，而产生光散射。所以中性粒细胞群散点图位于中部。核分叶越多的中性粒细胞，吸光性越强，在散点图上的位置向右移。同时杆状细胞（Bands）体积与中性粒细胞接近，但核的复杂程度低，吸光率低，散点图位于中性粒细胞与单核细胞之间。④嗜酸性粒细胞：由于嗜酸性粒细胞含有特异性颗粒，与染色液特异性着色，其着色强度最深，位于Y-轴的最上端，此方法提高了嗜酸性粒细胞的分类的准确性。⑤巨大未成熟细胞（Large Immature Cell）：未成熟粒细胞因其体积较大，可含有颗粒，光散射强，位于嗜中性粒细胞散点图的右侧，在LIC矩阵图中从左到右依次排列晚幼粒、中幼粒、早幼粒细胞，另外各种原始细胞位于单核细胞的右侧区域中。由于此散点图中可能有大单核细胞，可引起LIC假性计数增加（LIC的计数结果被计算到在嗜中性粒细胞中）。LIC 包括：大单核细胞、高嗜碱性的单核细胞、巨大中性粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、原始细胞。⑥异型淋巴细胞(Atypical Lymphs)：在散点图中位于淋巴细胞与单核细胞之间的一群细胞，包括：小原始粒细胞、大淋巴细胞等。

检验地带网

在WBC/BASO检测池中，全血样品与BasolyseII（PH2.4）溶血素混合，在35°C恒温下，溶解红细胞，由于嗜碱性粒细胞具有抗酸性，能够保持形态完整，而其他白细胞胞浆溢出，成为裸核状态。细胞通过一个直径为80mm的鞘流微孔时，根据电阻抗原理进行测定，以细胞体积大小为横坐标绘制WBC/BASO直方图。依据阈值设定区分裸核化的白细胞与嗜碱性粒细胞。在直方图上可以看出在中心界标左侧的是细胞体积变小的其它细胞群，界标右侧是体积较大的嗜碱性粒细胞。因嗜碱性粒细胞数量极少，因此在直方图上基本见不到明显分布曲线和峰。https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

图10 ABX血细胞分析仪LMNE散点图和BASO直方图

红细胞和血小板仍然采用电阻抗原理测定，血红蛋白采用比色法。此为在软件系统中采用了浮动界标技术用于血小板计数及嗜碱细胞计数，直方图的界标会依据细胞群的变化做出相应的自动调整。血小板计数上还采用了防返流装置，目的为防止涡流现象对血小板计数产生影响。在白细胞计数过程中还采用了白细胞平衡检测原理（WBC Count Balance），使得白细胞计数在WBC/HGB通道中与LMNE双鞘流池计数结果相联系，如果出现较大差别则可进行报警提示。

最近该厂推出新一代ABX Pentra DX120型血细胞分析仪，其测定原理仍然采用双鞘流技术。采用新技术扩展了散点图分布范围，形成可对血液中未成熟的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞共20个参数的分类或提示性报告信息，这对异常血细胞的筛检提供了很大帮助。

图11 Pentra DX120型幼稚细胞散点图

检验地带网

5 多角度偏振光激光散射技术

美国雅培公司（ABBOTT）推出的血细胞分析仪，在白细胞分类中采用独特的多角度偏振光散射（MAPSS）技术，其所生产的血细胞计数仪从CELL-DYN 3000，3200，3500，3700，4000，以及Sapphire（蓝宝石），在白细胞分类上均采用了MAPSS技术。该技术基本原理是细胞在激光束的照射下，在多个角度都产生散射光，仪器在四个角度的四个检测器将接收到的相应的散射光信号，然后经过微处理器分析处理，将各类细胞安置在散点图上的相应位置，并计算出白细胞分类结果。

多角度偏振光散射白细胞分类技术（Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell，MAPSS）其原理是一定体积的全血标本用鞘流液按适当比例稀释。其白细胞内部结构近似于自然状态，因嗜碱性粒细胞颗粒具有吸湿的特性，所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改

变。红细胞内部的渗透压高于鞘液渗透压而发生改变，红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来，而鞘液内的水分进入红细胞中，细胞膜的结构仍然完整，但此时的红细胞折光指数与鞘液的相同，故红细胞不干扰白细胞检测。在鞘流系统的作用下，样本被集中为一个直径30μm的小股液流，该液流将稀释的血细胞单个排列，然后通过激光束，激光照射于细胞上，在各个方向都有其散射光出现。0°为前向角散射（1°～3°）光，可粗略地测定细胞大小；

②10°为狭角散射光（7°～11°），可测细胞结构及其复杂性的相对特征；③90°为消偏振光散射（70°`～110°），基于颗粒可以将垂直角度的偏振激光消偏振的特性，将嗜酸细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来。④90°垂直光散射（70°～110°），主要对细胞内部颗粒和细胞成分进行测量。这四个角度同时对单个白细胞进行测量和分析后，即可将白细胞划分为嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞5种。ABBOTT的五分类法定量很有意思，不用传统的体积定量，而是采用数量定量，每次计数时完成10000个细胞测定即停止。https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

图12 MAPSS测定原理示意图

该类型仪器除了基本的白细胞五分类外，还提供了其它异常白细胞的信息和报警，提供给检验者参考，以通过人工显微镜检查复核这些结果，例如异常淋巴细胞、原始细胞、未成熟粒细胞、杆状核中性粒细胞。

图13 ABBOTT CELL-DYN五分类血细胞分析仪各类白细胞在散射图上的分布图

血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征(4)

2008-12-14 来源:检验世界网浏览:5750次转发至：我要评论【字号：大中小】

核心提示：6 激光散射技术日本光电公司是开发和生产五分类血细胞分析仪的厂家之一，目前所知仅有两款类型的仪器投入市场，均采用相同的测定原理，型号是MEK-7222和MEK-8222。其WBC、RBC和PLT计数原理采用电阻法，白细胞分类测赞

6 激光散射技术

日本光电公司是开发和生产五分类血细胞分析仪的厂家之一，目前所知仅有两款类型的仪器投入市场，均采用相同的测定原理，型号是MEK-7222和MEK-8222。其WBC、RBC和PLT 计数原理采用电阻法，白细胞分类测定采用鞘流技术和激光散射原理。在鞘流液中白细胞通过管路进入鞘流池内，激光照射白细胞后发生的各种散射光，根据血细胞的体积、血细胞的复杂性（有无颗粒、核的构造等）的不同，散射光的强度和方向有所不同。激光直进方向和同方向小角度的散射光（表示Size）、激光直进方向和同方向大角度的散射光（表示Complexity）、与激光直进方向相对垂直的方向的散射光（表示Granularity）为参数的作为散点图，对淋巴细胞、单核细胞、嗜中性白细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞进行分类。Size 表示血细胞的大小、Complexity表示白细胞结构的复杂度、Granularity表示白细胞颗粒的程度。采用此原理可提供了三个散射图，MAIN散点图、NE-EO散点图和MO-BA散点图。在MAIN散点图上（大图部分）下面散点表示淋巴细胞群，右侧为粒细胞群；两个小图，NE-EO 为中性粒细胞和嗜酸性粒细胞散点图，MO-BA为单核细胞和嗜碱性粒细胞细胞散点图。此外仪器还能给出大的不成熟细胞（LIC）提示信息。检验地带网

图14 日本光电MEK7222型五分类血细胞分析仪散点图检验地带网

7 迈瑞激光散射和细胞化学染色技术

迈瑞（MINDRAY）公司是国内最早有能力生产五分类血细胞分析仪的厂家，他们目前生产有三种型号的五分类血细胞分析仪。BC-5500，BC5380和BC5300型自动五分类血液细胞分析仪，采用半导体激光散射技术和细胞化学染色技术，配合改良的流式分析装置对白细胞进行精确的五分类分析。BC-5500型为目前最高配置，可选择使用静脉血或预稀释末梢血，均能获得良好的各种细胞计数结果和白细胞五分类结果。可提供27项计数和计算参数、2个散点图和2个直方图以及异常报警信息。测定速度为80个标本/小时（配自动进样器），全中文的操作界面，操作及提示功能一目了然，具有大型彩色TFT触摸屏，操作简单方便。

鞘流技术是所有高档血细胞分析仪均采用的细胞进样技术，为了达到更高的液流速度压力差和更稳定的液体流动，该公司独创性地采用了二次加速鞘流技术，分级实现鞘液的第二次加速，增加了单位时间内细胞的通过流量，从而能够完成对预稀释血液进行白细胞五分类分析。

仪器通过两个通道完成白细胞分类测定。在DIFF通道中增加了利用了可对嗜酸性粒细胞进行染色的特殊试剂。激光散射分析技术是五分类法常用的分析技术，由于细胞的物理特性，当激光照射到细胞时，会有不同角度的散射光出现。低角度(1°~5°)散射光可反映细

胞体积大小信息；中高角度(10°~20°)散射光可反映细胞颗粒的复杂性信息。综合这两个角度散射光的信息，结合其他特殊技术来完成白细胞的五分类测定。标本在鞘流的带动下进入仪器的检测区域后，激光照射于细胞之上所发射出的低角度和中高角度散射光信号可表现出细胞大小和内容物复杂程度（包括细胞内颗粒等）的特性信息，经仪器检测分析，将其分布在一个二维空间的散点图中，可区分淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。而化学染色技术可进一步实现对嗜酸性粒细胞的准确判定。检验地带网

在WBC/BASO通道中通过强溶型试剂和特异性染色技术，可保留完整的嗜碱性粒细胞，并对其进行特异性修饰，同时破坏其它四类白细胞，使之形成膜包核状态，在激光的照射下同样形成两个角度的散射光，完整的嗜碱性粒细胞体积偏大，其他类别白细胞体积变小，通过激光信号的强弱来计数嗜碱性粒细胞并在该通道中计数白细胞总数。该方法可以有效排除难溶性红细胞、巨大血小板、血小板聚集及其它非细胞颗粒等因素对计数的影响，保证嗜碱性粒细胞及WBC总数的精确分类和计数。

图15 迈瑞五分类血细胞分析仪散点图特征检验地带网

三图像分析法白细胞分类仪器

文章开始部分已经提到在1982年日本日立公司生产的8200型白细胞图像分析系统，应该是此类仪器的原始机型。而作者在1984年也曾经参与过中科院某研究所的一个关于血细胞形态特征数字化的研究工作，其目的是将5类白细胞基本信息在显微镜下扫描后形成数据模型，可惜这项工作因为当时技术条件的限制而没有取得预想的结果。

近年来瑞典CellaVision AB公司开发出一种新型自动影像血细胞形态分析系统CellaVision已经投入临床应用，该产品2005年3月在欧洲开始投放市场,已经有许多实验室配备了该系统，用于进行血涂片的过筛检查，该产品2007年进入中国市场，正处于推广中。该系统目前有两款机型，CellaVision DM96和CellaVision DM8。该系统是以染色后的血涂片为标本，以最接近传统显微镜观察法的技术对血液中的白细胞、红细胞进行初步分类的仪器，

该仪器采用先进的人工智能神经网络系统和全自动的操作程序，可使血细胞形态学检验在自动化、标准化、智能化方面达到一定的目的和水准，在强调形态学检验重要性的背景下有良好的发展前景。

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

图16 检验医师在Cellavision显示屏前审查白细胞分类结果

该仪器的组成可分为五大部分

1 血片自动传输系统将染色后的标准血涂片放在片盒内。该系统不具染色功能，需先将血片用瑞氏或瑞氏-姬姆萨染液染色。血片可按照顺序被仪器传输系统传送到显微镜载物台上。

2 血片自动传输系统将血片从片盒内取出并通过扫描条码记录标本编号，然后将标本送到自动显微镜的载物台上。

3 自动加油系统自动吸取适量的显微镜油，滴加到血涂片适当的位置，用于油镜头下的细胞观察和分类。其感应器能提示加油的状态和加油的量。

4 自动血涂片扫描系统包括一台具有物镜头自动转换、血涂片可三维方向移动的自动显微镜和一台具有自动调焦能力的数码照相机。物镜头可根据要求自动转换×10、×40、×100倍镜头；载物台可水平上下左右移动，并可按照Z字型路线移动血片，供照相机摄取不同部位的细胞形态图像。

5 数据光电转换系统数码相机拍摄后的数字图像信息，将光学信号转变成数字信号，然后对每个视野下的图像进行分析，辨识单细胞层，白细胞定位点，从而为软件系统的白细胞分类提供源数据。

检验地带网

仪器分析原理：首先在×10倍物镜头下搜索单细胞层，转换×40倍物镜头后拍摄红细胞图像，再转换×100倍油镜头后，在镜油加入后，在单细胞层扫描拍摄有核的白细胞，其所搜寻拍摄的白细胞数量可自行定义。获得细胞数码图像后，通过软件系统提取细胞特征，例如

红细胞，需提取红细胞直径、颜色、色素含量、对比度等特征性信息；白细胞需提取白细胞形状、大小、纹理、颜色、空隙、细胞核和细胞质比例关系等360个信息参数。将所提取的特征信息转化为数字信号，然后通过人工智能神经网络系统（ANN）进行形态学分析。这种人工神经网络系统是根据大型细胞数据库进行制作的。

图17 Cellavision拍摄的中性粒细胞图片

检验地带网

图18 Cellavision拍摄的中性杆状核粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞和幼稚细胞图片

仪器显示屏上可提供白细胞分类的结果和分割成单细胞的图片，在一般情况下操作者只需要确认分类结果，以及侧重于那些处于边缘的细胞分类即可。对仪器不能确认的细胞，可通过屏幕调出，放大观察，再确认类别。操作者还可建立自己的参考细胞图库，并可对细胞形态和报告添加备注。系统还可与血细胞分析仪连接，获取血细胞计数的结果，形成血细胞自动化分析+形态学报告的更加完美的结果。该系统可给出白细胞17个类别，除了五分类结果外，还有早幼粒细胞、晚幼粒细胞、原始细胞、异型淋巴细胞等类别；红细胞分析上可得到大小不均、小型红细胞、巨红细胞、低色素红细胞、多色性红细胞、异型红细胞等信息；在血小板上可观察到血小板聚集情况，以及根据图像中血小板数量判断核实血小板数量，与血细胞分析仪计数的血小板数量相互比对核实。可形成带有白细胞分类图的结果报告。检验地带网

仪器涂片和染色可通过手工方式操作，但需要较好的技术水平，薄血片，并有一定数量的单细胞层，染色颜色保持稳定。也可配置自动涂片和自动染色机完成血涂片的前期预备性工作。该仪器可与全自动血细胞分析仪测定数据进行连接，可以将具有形态学特点的分类结果与仪器分析结果进行合并，得到更加可靠的血细胞分析数据。

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

小结：本文从全自动五分类式血细胞分析仪谈起，主要介绍各种品牌和代表类型的仪器在白细胞分析和分类上的不同原理和散点图特征，这些仪器应该是目前国内在应用五分类血细胞分析仪上有代表性的仪器。文中材料来自教材、图书、文献报道和厂家宣传资料。如有不妥或错误请大家指正。

https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

参考文献

1 张时民. 血细胞分析仪50年的发展历史和展望. 临床检验及实验室设备，2004，6（4）：27-36

2 张时民. 当代血细胞分析仪进展和展望.中国医疗器械信息，2005，14(特刊)：13-23

3 张时民，李晓京. 网织红细胞检测技术的进展和临床应用.中国医疗器械信息, 2007,16(6):15-23

4.乐家新周建山兰亚婷血细胞分析仪检测原理.中华检验医学杂志，2004，27（3）：205-208

5.丛玉隆乐家新.再论血细胞分析技术进展与临床应用.2007，中华检验医学杂志.30（4）：365-370

6 张旭凯，陆海峰五分类血液细胞分析仪的原理及应用，中国医疗器械信息，2006，12（10）：52-56 https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,

临检--异常白细胞形态

异常白细胞形态 1.中性粒细胞异常形态（1）毒性变化：严重传染病、化脓性感染、中毒、恶性肿瘤、大面积烧伤等情况。大小不均中毒颗粒空泡形成杜勒小体退行性变 1）大小不均中性粒细胞大小相差悬殊，不均一性增大。 2）中毒颗粒中性粒细胞的胞质中出现比正常中性颗粒粗大、大小不等、分布不均的染色较深黑色或紫黑色颗粒。 3）空泡形成中性粒细胞的胞质或胞核可出现1个或数个空泡。细胞发生脂肪变性或颗粒缺失的结果。 4）杜勒小体（Dohle）：中性粒细胞因毒性变化而在胞质中保留的局部嗜碱性区域（源自RNA），呈圆形、梨形或云雾状，染成灰蓝色，直径1～2μm，亦可见于单核细胞。

5）退行性变：细胞发生胞体肿大、结构模糊、边缘不清晰、核固缩、核肿胀和核溶解等。（2）棒状小体（Auer小体）急性白血病类型急粒（M3）数条急单一条急淋无白细胞胞质中出现呈紫红色细杆状物质，长约1～6μm，1条或数条，称为棒状小体。（3）中性粒细胞核象变化 3叶核居多，杆状与分叶核之比1:13 1）核左移：外周血中杆状核粒细胞增多和（或）出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒等细胞时（＞5%）。再生性核左移核左移伴白细胞总数高，提示骨髓造血功能旺盛，机体抵抗性强。见于：急性化脓性细菌感染、急性中毒、急性溶血、急性失血。退行性核左移核左移伴白细胞总数正常或减少，提示骨髓释放功能受到抑制，机体抵抗力差。见于再生障碍性贫血、粒细胞减少症、严重感染（如伤寒、败血症等）。 2）核右移中性粒细胞核分叶5叶以上者超过3%，常伴白细胞总数减低，为造血物质缺乏、脱氧核糖核酸减低、骨髓造血功能减退所致。见于营养性巨幼细胞性贫血、恶性贫血、应用抗代谢药物（如阿糖胞苷、6-巯基嘌呤等）、炎症恢复期。

医院检验中心VCS白细胞五项分类原理技术特点和应用问题

医院检验中心VCS白细胞五项分类原理、技术特点和应用问题 VCS原理和技术特点在一个流式通道内,对单个白细胞进行直接、同时、三重测量,然后再进行三维分析。 1.Scatterpak试剂保证”接近原态”分析,避免化学方法对细胞特性的破坏 Scatterpak(Erythrolyse—低渗、低pH、具表面活化性) (Stabilyse—高渗、高pH) WBC EL 肿胀ST：恢复等渗、生理pH 接近原态 RBC----------------- 肿胀---------------------------------------去除debris-------流式通道 PLT 肿胀El的表面活化作用继续发挥去除debris (28μL) (300μL×2) (133μL)

2.流体动力聚焦细胞,令其在流式通道内作最适的单细胞排列 ISOTON III作为鞘流 3.VCS检测-视角与手工相似 VCS技术检测细胞的角度与镜检血片相似,都是从体积、核质比、颗粒特性、膜特性和形态等方面观察。但检测工具的敏感度大大提高,描绘程度上更精细,细胞的状态比染色情况下的更自然。 Volume ◆运用低频电流准确分析细胞体积体积是区分白细胞亚群一个很重要的参数,它能有效区分LY和MO。但仍然存在一定程度的混淆,如：LY和BA(φ同在9-12μm范围);不成熟LY和NE(φ同在12-14μm范围) ◆该技术1967年开始使用 ◆库尔特专利

Conductivity-Opacity ◆运用高频电磁探针检测细胞内含物(细胞核、颗粒和其他化学组份)的特性。细胞膜对高频电流具传导性,当电流通过细胞时,细胞核、颗粒和细胞内的化学组份令电流的传导产生变化,其变化量(RF)可以用来反映细胞内含物的信息 ◆RF=f(细胞体积,细胞内含物传导性) ◆Opacity(阻光性)是指将细胞体积对RF的影响去除后的高频传导数据,可以更确切地描述细胞内含物 Opacity?RF/DC ◆该参数可用来进一步区别体积差不多的细胞,如：LY和 BA(φ同在9-12μm范围),由于它们的核质比不同而在C参数上有所区别 ◆库尔特先生在60年代着手研究该项技术,1970年获美国专利 Light Scatter-RLS

末梢血涂片白细胞形态变化及临床意义

末梢血涂片白细胞形态变化及临床意义 1. 中性粒细胞核左移 2. 外周血中性杆状粒细胞增高，并可见晚幼粒细胞、中幼粒细胞甚至早幼粒细胞时称为中性粒细胞核左移。仅见杆状粒细胞>6%时，称为轻度核左移；杆状粒细胞>10%，伴少量晚幼粒细胞、中幼粒细胞时称为中度核左移；杆状粒细胞>25%，出现更幼稚的粒细胞如早幼粒细胞甚至原粒细胞时称为重度核左移。重度核左移又称为类白血病反应，此时中性粒细胞常伴有明显的中毒性病理改变。中性粒细胞核左移常见于急性化脓性感染、急性中毒、急性溶血等。骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血可见原始、幼稚粒细胞，并出现病态造血，如中性粒细胞核分叶不良等。图-1 图-2

图-1视野可见中性分叶粒细胞、中性杆状粒细胞、中性晚幼和中幼粒细胞。中性粒细胞胞质中可见中毒颗粒。图-2可见中性分叶粒细胞、中性杆状粒细胞、中幼粒细胞和早幼粒细胞。中性粒细胞胞质中可见中毒颗粒。 2. 中性粒细胞核右移正常成熟中性粒细胞胞核以分三叶者为主，如血片中五叶核中性粒细胞>3%，则称为中性粒细胞核右移。核右移常伴有白细胞总数减低和中性粒细胞胞体增大，常见于巨幼细胞性贫血及恶性贫血等。其原因主要是由于缺乏叶酸、VitB12等造血物质，DNA合成减少，影响了细胞的正常分裂。在应用某些抗核酸代谢药物及炎症恢复期等也可见核右移现象。图-3 图-3视野中可见一巨大中性粒细胞，胞核分为10余叶。 3. 中性粒细胞中毒颗粒中毒颗粒(toxic granulation) 中性粒细胞胞质中出现的粗大且分布不均的黑蓝色颗粒，称为中毒颗粒。中毒颗粒是细胞在生成特殊颗粒过程中受到某种阻力或发生颗粒变性所致。常见于严重的化脓菌感染及大面积烧伤等患者中。

五分类血细胞计数仪

五分类血细胞计数仪 ?CBC分析原理和技术 ?库尔特原理 ?HGB测量原理 ?白细胞分类原理 ?三分类原理：库尔特直方图分类 ?五分类原理：VCS三维分析原理 1. CBC分析原理和技术库尔特原理当一个不良导体颗粒，例如血细胞，通过两个电极之间时，导致电路的电阻抗发生变化。库尔特原理图负压 HGB测量原理 I C S H H G B检测参考方法氰化高铁血红蛋白(H i C N-H b)测定方法试剂反应时间长达5分钟以氰化H G B检验方法(细胞仪) 氰化血红蛋白(C N-H b)测定方法试剂成分：氰化钾两者不可混为一谈！ 2.白细胞分类原理三分类原理：库尔特直方图分类向一个计数池的稀释血样加入溶血剂细胞化学-体积法溶血剂令不同亚群的白细胞不同程度地失水皱缩，显示体积差异；电阻法技术得到白细胞分布直方图根据直方图上的体积范围定义白细胞三项分类 L Y:35-90f L，M O:90-160f L，G R:160-450f L 五分类原理：VCS三维分析分析外周血液中的淋巴细胞单核细胞嗜中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞运用V C S技术,对白细胞进行多参量分析大小、核形、颗粒特性 V CS三维分析原理运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。 V-低频波，分析细胞体积； C-高频波，分析细胞核型； S-激光，分析细胞的颗粒特性。接近原态的W B C分析 S c a t t e r P a k双试剂系统的作用去红细胞:红细胞溶解剂（低渗透压，低P H液）通过渗透压差溶解红细胞；保持白细胞原态:溶解终止液（高渗透压，高P H液）令白细胞恢复到“接近原态”大小。流体动力聚焦

白细胞五分类原理和散点图特征

血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征2008-12-14来源:检验世界网浏览:5747次转发至：我要评论【字号：大中小】核心提示：本文主要介绍全自动血细胞分析仪在白细胞五分类上的原理和散点图分布特点。此类仪器在红细胞、血红蛋白、血小板和计算参数上一般会采用类似的测定原理和计算方法，此类仪器的进展和其功能特点可参考作者撰写的其它文章。赞北京协和医院检验科张时民检验地带网血细胞分析技术已经进入自动化时代，而具有白细胞五分类或更多分析参数的仪器也普遍的应用于国内各级医院实验室中，为临床诊断和治疗服务。而具有18项参数带有白细胞三分群功能的血细胞分析仪也已经普及进入到基层医院和社区医疗中心，在许多大型医院中已不占主流位置，因此可以说目前在较大医院的检验科，常规血细胞分析仪已经进入全自动化和白细胞五分类的时代。本文主要介绍全自动血细胞分析仪在白细胞五分类上的原理和散点图分布特点。此类仪器在红细胞、血红蛋白、血小板和计算参数上一般会采用类似的测定原理和计算方法，此类仪器的进展和其功能特点可参考作者撰写的其它文章（见参考文献）。具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器是指通过各种物理和化学技术对白细胞进行分析，以获得外周血液中白细胞的五种常见类型，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞，淋巴细胞和单核细胞的百分率和绝对值的测定结果，此外还应该具有对出现异常白细胞的提示或初步分类功能。目前国内外具有开发研制白细胞五分类法仪器的主要为欧美和日本生产厂商，比较着名的欧美厂家有Beckman-Coulter；ABBOTT；Siemens（Bayer）；ABX；日本有Sysmex 和NihonKohdon。在国内已经有迈瑞（MINDRAY）公司生产几个型号的五分类血细胞分析仪器投入医疗市场。检验地带网一简要发展史 1974年，一种名为HEMALOGD的具有初步白细胞分类功能的白细胞分析仪问世。1982年，Technicon公司生产了H6000型血液细胞分析仪器，应该是首款具有白细胞五分类能力的仪器。同时代日本日立公司推出图像分析法的白细胞分析仪HITACHI8200型，仅仅是用于完成白细胞血片分类的仪器，没有其他血细胞计数分析能力。Technicon公司1985年开发了比较成熟的具有白细胞五分类功能的TechniconH1型血液细胞分析仪，随后升级为H2型和H3型。 COULTER公司在1987年开发研制其经典VCS技术，并推出持续具有多年影响力的、具有白细胞五分类功能的血液细胞分析仪MAXM型。 1990年前后，欧洲和日本许多厂家都陆续推出了各种类型的具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器。各厂家设计生产的此类血细胞分析仪，其在白细胞分类技术上原理各不相同，分析测定项目略有不同，且形式多样，结构复杂，试剂种类和成分也趋于复杂。不断改进和升级的新产品使得仪器在白细胞分类技术上更加成熟和可靠。而技术的提高也带来了仪器和消耗品（试剂）价格的增加。检验地带网二仪器原理和散点图特点 1体积、电导和激光散射原理这是Beckman－Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法，他集三种物理学检测技术于一体，在细胞处于自然原始的状态下对其进行多参数分析。该方法也称为体积、电导、激光散射血细胞分析法。此技术采用在标本中首先加入红细胞溶血

白细胞不分类

机型：贝克曼库尔特HMX血液分析仪分析仪故障：白细胞不分类美国贝克曼库尔特公司生产的HMX全自动五分类血液分析仪，具有分析速度快、检测项目多、结果准确、重复性好、性能稳定等特点，被广泛应用于各医院检验科，但在日常工作中常遇到白细胞不分类的现象，HMX 血液分析仪进行白细胞分类是采用VCS技术，是从体积、核质比、颗粒特性、膜特性和形态等方面对白细胞综合分析，在分类中涉及两种试剂：一种是五分类溶血剂；另一种是稳定剂，稀释液(IS0T0N I)作为鞘液，当全血进入混匀池时，五分类溶血素(低渗)首先将细胞胀大，但由于红细胞膜比较薄，很快就胀破，只剩下胀大的白细胞，这时稳定剂(高渗)注入混匀池，使白细胞恢复到原态，混匀后的样品在样品压力与鞘流的作用下，在流式通道内作单细胞排列，进行三种参数的同时测量，然后经过计算得出结果，现将造成白细胞不分类的原因及排除方法介绍如下：一、温度问题：按照分析仪使用说明，要求温度控制在：20～29℃，但有文献报道：妇最佳温度控制在25℃左右，因为溶血剂中的表面活性剂能与细胞膜作用，破坏脂质双层结构在细胞膜表面的表面活性剂，利用流体动力聚集细胞形成由密到疏的表面活性剂层，由于其疏水基团较大为不良导体，加之膜结构疏松肿胀从而使粒细胞在分析仪上的表现体积变大。倘若温度太低，会使溶血剂溶解红细胞的能力减弱，使红细胞不能完全溶解，从而干扰白细胞的分类计数。分析仪故障排除方法：室内温度未达到要求时，应采用空调或取暖器将温度控制在2O℃以上，最好在25℃左右。二、试剂配比问题：血液、溶血剂、稳定剂三者之比为：28：300：133，若该比例失衡则导致溶血不充分或溶血过度，以致于大量红细胞或很少细胞进入流式通道内，因此导致白细胞分类不正常。分析仪故障排除方法：可通过调节液流比例相应参数加以纠正。三、标本的问题： 1、部分血液病、肿瘤化疗病人等出现不分类；因为这些病人在治疗过程中使用的药物使红细胞的抗溶能力增强，使红细胞不能完全溶解，还有部分化疗后白细胞总数很低，使分析仪在规定的时间内很难测到足够量的白细胞，从而导致白细胞分类不准确或不分类，甲亢病人的白细胞不分类也有可能与药物影响有关。分析仪故障排除方法：对于已确诊的病人且进行治疗观察的标本应做复片即用显微镜进行检查确认。 2、有报道黄疸、高血脂(血浆乳浊)、孕妇以及新生儿标本部分不分类，其原因是红细胞碎片难于溶解所致。分析仪故障排除方法：将标本稀释使标本浓度降低，溶血剂浓度相对增高，可使红细胞破坏完全，将分析仪由全自动状态进入半自动状态便可进行测试，取百分比作为结果，绝对值采用总数乘以百分比。

血细胞分析仪五分类检测技术及原理

血细胞分析仪五分类检测技术及原理血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着科学技术日新月异的发展，血细胞分析的技术也从几年前的三分类转向现在的五分类，从二维空间进而转向三维空间，同时现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了先进的技术，如鞘流技术、激光技术等。下面就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以说明。 1 采用阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法直流电阻抗法（DC）用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测白细胞体积大小、细胞内含物的情况（细胞核以及颗粒情况），侧向荧光则可以反映细胞内脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量，特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂Str-matolyzer-EO可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。在嗜碱细胞通道中，使用特殊溶血剂Strmatolyzer-BA可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。幼稚细胞检查通道（IMI）可以根据幼稚细胞膜比成熟细胞膜表面含有脂质较少的现象，在细胞稀释悬液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多，对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解，而幼稚细胞不易被破坏，可通过电阻法检测出来。综合各个测量方法，得到白细胞五分类的图形和数据。这种技术主要应用在Sysmex研制和开发的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中。 2 电阻抗和射频电导联合检测法这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞:（1）淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个群体。（2）嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统:在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩，再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。（3）幼稚细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。目前日本东亚公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血细胞分析仪就是采用这种方法进行五分类的。 3 多角度激光偏振光散射检测法

血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征

北京协和医院检验科张时民血细胞分析技术已经进入自动化时代，而具有白细胞五分类或更多分析参数的仪器也普遍的应用于国内各级医院实验室中，为临床诊断和治疗服务。而具有18项参数带有白细胞三分群功能的血细胞分析仪也已经普及进入到基层医院和社区医疗中心，在许多大型医院中已不占主流位置，因此可以说目前在较大医院的检验科，常规血细胞分析仪已经进入全自动化和白细胞五分类的时代。本文主要介绍全自动血细胞分析仪在白细胞五分类上的原理和散点图分布特点。此类仪器在红细胞、血红蛋白、血小板和计算参数上一般会采用类似的测定原理和计算方法，此类仪器的进展和其功能特点可参考作者撰写的其它文章（见参考文献）。具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器是指通过各种物理和化学技术对白细胞进行分析，以获得外周血液中白细胞的五种常见类型，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞，淋巴细胞和单核细胞的百分率和绝对值的测定结果，此外还应该具有对出现异常白细胞的提示或初步分类功能。目前国内外具有开发研制白细胞五分类法仪器的主要为欧美和日本生产厂商，比较著名的欧美厂家有Beckman-Coulter；ABBOTT；Siemens（Bayer）；ABX；日本有Sysmex和Nihon Kohdon。在国内已经有迈瑞（MINDRAY）公司生产几个型号的五分类血细胞分析仪器投入医疗市场。一简要发展史 1974年，一种名为HEMALOG D的具有初步白细胞分类功能的白细胞分析仪问世。 1982年，Technicon公司生产了H6000型血液细胞分析仪器，应该是首款具有白细胞五分类能力的仪器。同时代日本日立公司推出图像分析法的白细胞分析仪HITACHI 8200型，仅仅是用于完成白细胞血片分类的仪器，没有其他血细胞计数分析能力。 Technicon 公司1985 年开发了比较成熟的具有白细胞五分类功能的Technicon H1 型血液细胞分析仪，随后升级为H2型和H3型。 COULTER公司在1987 年开发研制其经典VCS技术，并推出持续具有多年影响力的、具有白细胞五分类功能的血液细胞分析仪MAXM 型。 1990年前后，欧洲和日本许多厂家都陆续推出了各种类型的具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器。各厂家设计生产的此类血细胞分析仪，其在白细胞分类技术上原理各不相同，分析测定项目略有不同，且形式多样，结构复杂，试剂种类和成分也趋于复杂。不断改进和升级的新产品使得仪器在白细胞分类技术上更加成熟和可靠。而技术的提高也带来了仪器和消耗品（试剂）价格的增加。二仪器原理和散点图特点 1 体积、电导和激光散射原理这是Beckman－Coulter公司生产的血细胞分析仪所采用的经典分析方法，他集三种物

白细胞形态观察教案教学设计

教学活动设计方案模块二：白细胞检验授课对象：医学检验技术1003班学习任务：白细胞形态观察学时：1学时授课类型：教学做一体化授课时间：2011年9月25日教学要求教学目标学会正确使用显微镜，能在显微镜下识别五种白细胞的正常形态，认识到镜下形态辨认功夫的重要性，增强责任感。教学重难点重点：白细胞的形态特征鉴别要点。难点：镜下识别五种白细胞的正常形态。教学地点集多媒体、实训一体化教室教学方法讨论法、练习法教学手段十人共览显微镜、高倍数码显微镜、自制血涂片教学程序教师提出问题—学生自学—教师理论讲解并演示—学生操作，教师指导—学生讨论并总结—教师点评—教学效果检测—教师总结教学实施学生活动教师活动时间思考讨论教师提问，带着问题进入新课内容——“白细胞形态”的学习导言：发烧就诊，首先要查血，为什么？引起发烧最常见的原因是感染，查血可确定是否为感染，是细菌性还是病毒性，主要依据血液中白细胞的数量。引入新课内容——白细胞的形态（核心：形态学鉴别） 2min 在显微镜下浏览视野，了解背景细胞，观察到有核细胞和无核细胞两大类，在教师指导下，认识了红细胞和血小板，看到了形态各异的白细胞。结合前述白细胞的种类，思考如何辨认出不同种类的细胞。指导学生浏览视野，利用十人共览显微镜，对照屏幕，对背景细胞进行讲解，引出白细胞。按照白细胞胞质有无特异性颗粒，将其分为有粒白细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）和无粒白细胞（淋巴细胞、单核细胞）两大类。 5min 回顾细胞的基本结构：细胞膜、细胞质、细胞核思考：如何鉴别五种白细胞的形态？细胞形态的鉴别要点： 1、细胞外观：（1）形状（2）大小 2、细胞质：（1）量；（2）颜色； 4min

人体白细胞的种类和功能精编版

人体白细胞的种类和功能人体内白细胞为无色有核细胞，在血液中呈球形，它能以变形运动穿过毛细血管壁，进入结缔组织。正常5000—10000/mm3。一、种类及特点根据细胞质和细胞核的染色特点，可把白细胞分为两大类：有颗粒白细胞：嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞无颗粒白细胞：淋巴细胞，单核细胞正常时各种白细胞数目保持一定比例，称为白细胞分类计数，正常情况下数目如下：疾病状况下，白细胞总数和分类计数都可发生改变。二、白细胞的功能 ①中性粒细胞白细胞: 吞噬和消化侵入微生物和机体本身的各种坏死细胞,包括衰老和受损红细胞.是机体防御功能重要组成部分。细胞内溶酶体丰富，并做变形运动。中性粒细胞可通过变形运动渗出毛细血管壁进入组织液,在组织液内游走(趋化性)。如果白细胞的的溶酶体释放的酶量过多，不仅能杀死和溶解细菌，本身也将致死，死亡的白细胞连同细菌分解物一起成为浓液组成部分。 ②嗜酸性粒细胞：能限制嗜碱性粒细胞和肥大细胞中的活性物质的合成和释放；当机体患某些过敏性疾病时，嗜酸性粒细胞数量增多，有人认为她和机体的过敏性反应有关。 ③嗜碱性粒细胞：含有多种生物活性物质，与肥大细胞相似，细胞颗粒中能合成组织胺和过敏性慢作用物质。

组织胺：使小动脉和毛细血管扩张，并使毛细血管和微静脉通透性增加，与人过敏反应有关。过敏性慢作用物质：可使血管通透性增加，并使平滑肌收缩，特别是使支气管和细支气管的平滑肌收缩，从而引起哮喘。总括起来嗜碱性粒细胞所释放的活性物质可引起哮喘，寻麻疹，食物过敏等各种反应，同时又引起嗜碱性粒细胞聚集这一局部。 ④淋巴细胞：具有免疫功能 T细胞：骨髓中生成的淋巴系干细胞在胸腺中发育成熟，参与细胞免疫。血液中80-90% 淋巴细胞属于T淋巴细胞。 B细胞：造血干细胞在骨髓中分裂分化成B细胞，多集中在淋巴结等淋巴器官中。参与体液免疫—抗体免疫。 ⑤单核细胞：从血管进入组织后，便分化成巨噬细胞，吞噬细菌和病毒等三、白细胞测定临床意义（一）白细胞增加：外周血液中白细胞数超过10×109/L称为白细胞增多症。白细胞增多可以是中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞增多。临床常见为淋巴细胞增多症。 1、中性粒细胞增多症生理性：如饭后和剧烈运动后；冷水浴后及极度恐惧和疼痛后等、妇女经期及妊娠等。病理性：（1）急性感染：某些细菌（葡萄球菌、肺炎球菌等）病毒（水痘病毒、狂犬病毒）引起的感染；（2）非感染性炎症，如急性风湿热、少年型类风湿关节炎等（3）组织坏死：严重外伤、手术创伤、烧伤等。（4）急性失血及贫血（5）急性中毒：如化学毒物及药物中毒、尿毒症等。（6）粒细胞异常增生：急性粒细胞白血病，骨髓增生性疾病（7）其他：如脾脏切除后。 2、嗜酸性粒细胞增多症外周血中嗜酸性粒细胞绝对值超过0.45×109/L,称为嗜酸性粒细胞增多症. 嗜酸性粒细胞增多常与许多疾病有关，特别是寄生虫感染和过敏性疾病。３、白血病是骨髓和其他造血组织中原始和幼稚细胞异常增生的一种恶性疾病。临床表现贫血、出血、感染及白血病细胞侵润机体各组织、器官所产生的相应表现。 ⑴病因：病毒：人类T细胞白血病，已肯定是由人T细胞病毒-Ⅰ引起的放射性核素：其致白血病的作用是肯定的，其作用与照射剂量的大小和部位有关化学因素：（如烷化剂、细胞毒药物）及化学毒物（苯）可诱发遗传因素：家族性白血病约占7%。其他血液病：骨髓增生性疾病、淋巴瘤等最终可发展为急性白血病。 ⑵分类：按病程缓急及白细胞分化程度可分为急性白血病：起病急，自然病程约半年以内。骨髓中以原始和早期幼稚细胞增生为主，正常造血受到抑制的恶性疾病。成人以急性粒细胞白血病多见，儿童以急性淋巴细胞较多见。临床表现主要为贫血、出血、继发感染发热及白血病细胞侵润

血液中的白细胞有五种

血液中的白细胞有五种，按照体积从小到大是：淋巴细胞，嗜碱性粒细胞，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞和单核细胞。白细胞是无色有核的血细胞，在血液中一般呈球形，根据形态差异可分为颗粒和无颗粒两大类。颗粒白细胞（粒细胞）中含有特殊染色颗粒，用瑞氏染料染色可分辨出三种颗粒白细胞即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。中性粒细胞具有变形运动和吞噬活动的能力，是机体对抗入侵病菌，特别是急性化脓性细菌的最重要的防卫系统。当中性粒细胞数显著减少时，机体发生感染的机会明显增高。嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶和酸性磷酸酶。嗜酸性粒细胞具有趋化性，能吞噬抗原抗体复合物，减轻其对机体的损害，并能对

抗组织胺等致炎因子的作用。嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、肝素与5-羟色胺等生物活性物质，在抗原－抗体反应时释放出来。在人体的正常粪便中偶尔能见到少许白细胞，所以粪便检查中白细胞的多少可以作为肠道是否有炎症的一种依据，无颗粒白细胞无细胞质颗粒，但有圆形细胞核，包括单核细胞和淋巴细胞。单核细胞是血液中最大的血细胞。目前认为它是巨噬细胞的前身，具有明显的变形运动，能吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片。单核细胞还参与免疫反应，在吞噬抗原后将所携带的抗原决定簇转交给淋巴细胞，诱导淋巴细胞的特异性免疫反应。单核细胞也是对付细胞内致病细菌和寄生虫的主要细胞防卫系统，还具有识别和杀伤肿瘤细胞的能力。淋巴细胞则为具有特异性免疫功能

的细胞。T淋巴细胞主要参与细胞免疫反应而B 淋巴细胞参与体液免疫反应。成年人白细胞数为每立方毫米5000～9000单位，其中中性粒细胞占0.50～0.70，嗜酸性粒细胞占0.005～0.05，嗜碱性粒细胞占0.005～0.01，单核细胞占0.03～0.08，淋巴细胞占0.20～0.40。幼儿血液中白细胞数高于成年人。不同生理状态（如妊娠期）会引起白细胞数量的变化。有炎症时，血中的白细胞数明显增加。各类白细胞的防御保护作用各不相同。瑞氏染色外周血五种白细胞形态特征：细胞类型大小（μm）外形细胞核细胞质功能核形染色质着色颗粒中性杆状核粒细胞10～15 圆形弯曲呈腊肠样，两端钝圆深紫红色粗糙淡橘红色量多，细小，均匀布满胞质，浅紫红

白细胞分类计数的临床意义分析

白细胞分类计数的临床意义分析目的：探讨白细胞分类计数的临床意义。方法：通过对我院血常规检验工作的分析，白细胞分类计数的工作重要性。结果：白细胞分类计数具有较高的临床价值，值得临床医师使用。结论：白细胞检验结果在一定程度上决定着临床诊疗的正确诊断和。白细胞分类计数；临床意义；检验科白细胞分类计数是临床血液学检验中的常规检验项目[1]。随着基础医学及机的飞速，使得血液学检验技术突飞猛进，特别是近几年来各种新型的血细胞分析仪以其自动化程度高、检测参数多等优势而不断充斥市场，这对减轻检验人员劳动强度和提高检测速度无疑起着积极的作用。现将我院检验科进年来总结的白细胞分类计数的临床资料报道如下。 1材料与方法 1．1 材料:仪器日本Sysmex XT-1800i全自动五分类血细胞分析仪；日本产尼康显微镜。试剂：原装进口配套试剂。标本来源：我院近3年经过血常规检查的1988例我院住院患者。 2结果白细胞分类计数具有较高的临床价值，白细胞检验结果在一定程度上决定着临床诊疗的正确诊断和治疗。值得临床医师参考使用。 3讨论

人体血液中非细胞成分包括血清或血浆，细胞成分包括红细胞、白细胞和血小板。在末梢血液中，根据白细胞胞浆中有无颗粒，分为粒性白细胞和非粒性白细胞。粒性白细胞中包括中性粒细胞(又分杆状核及分叶核)、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；非粒性白细胞中包括淋巴细胞及单核细胞。其中中性粒细胞和单核细胞在人体内游戈，可以吞噬和消化进入人体内的细胞等微生物，还能吞噬人体坏死的细胞。淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞、K细胞，它们参与人体的细胞免疫和体液免疫反应。白细胞总数的增多或减少，以及分类的改变，均有一定的临床意义。 3.1嗜中性粒细胞(N) :在外周血中可分为中性杆状核粒细胞(NST)和中性分叶核粒细胞(NSG)两类。 X线、γ射线，放射性核素；苯、铅、汞以及氯霉素、磺胺类药、抗肿瘤药、抗糖尿病及抗甲状腺药。单核一巨噬细胞系统功能亢进。自身免疫性疾病。如系统性红斑狼疮等。 3.2嗜酸性粒细胞(E) 3.3嗜碱性粒细胞(B) 3.3.1嗜碱性粒细胞增多：①过敏性疾病。结肠炎、药物、食物、吸人物超敏反应、红斑及类风湿性关节炎等。②血液病。如慢性粒细胞白血病，嗜碱性粒细胞白血病，以及骨髓增殖性疾病的骨髓纤维化等。③恶性肿瘤。特别是转移癌时。④其他。如糖尿病、水痘、流感、天花、结核等。 3.3.2嗜碱性粒细胞减少：无临床意义。 3.4淋巴细胞:

白细胞分类计数

白细胞分类计数 [定义]白细胞分类计数是将血液制成分布均匀的薄膜涂片，用染料染色，根据各类白细胞着色特征，在显微镜下观察其数量、形态和质量的变化、予以分类计数并求出各种白细胞所占的百分率。 [意义]血液中的白细胞一般包括：颗粒细胞（嗜中性、嗜酸性和碱性细胞）、淋巴细胞（大、中、小淋巴细胞）和单核细胞，它们分工不同，在体内发挥各自的作用。①嗜中性白细胞，成熟的嗜中性白细胞通过吞噬作用而消灭入侵的细菌，特别是球菌。在严重感染和炎症初期时最活跃；②嗜酸性白细胞，常积聚在抗原-抗体反应的部位，因此，认为它抑制组胺等物质的活动；③嗜碱性白细胞，碱性颗粒中有肝素，表明它有抗凝作用；④淋巴细胞；参与机体免疫反应；⑤单核细胞；它有特殊的酶系统，能对付顽强的病原体，如真菌、原生动物、结核杆菌及布病等。在慢性感染时或体内有较多组织碎片需要清除时，它会大量出现。在正常情况下，白细胞构成的比例、形态和质量基本是不变的，但在病理情况下，这种比例、形态、质量将会发生变化，故临床上常把计数白细胞总数和分类计数结合起来，进行分析和诊断某些感染性疾病的种类。 [目的与要求]掌握计数的原理、方法和临床意义 [原理]由于白细胞内含有带不同电荷的物质，其中带正电荷的物质易与酸性染料结合呈现红色（这种物质叫嗜酸性物质或颗粒，而其本身呈碱性）；而带负电荷的物质易与碱性染料结合呈现蓝色（这种物质叫嗜碱性物质或颗粒，而其本身呈酸性）；当细胞内物质带的正负电荷相等时，那么结合的酸性染料和碱性染料几乎相等，这些物质就呈现红、蓝相混的紫红色（这种物质叫嗜中性物质或颗粒）。这样血片中的白细胞经过染色后就被染成红、蓝及紫红色，从而可以识别分类。【器材与试剂】器材：载玻片、染色缸及支架、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数器、吸水纸等。试剂：染液、缓冲液 [步骤] 1．采血 2．制作血涂片：①取洁净载玻片数张，选择边缘光滑的载片作为推片（也可用血细胞计数板的盖玻片做为推片），用左手的拇指及中指夹持载片并置于平稳的台面上，右手持推片。 ②取被检血（经EDTA抗凝）1小滴，放于载玻片的右端，手持推片放于血滴之前并与载片接触，以30°～40°角向后拉动推片，使之与血滴接触，待血液扩散形成一条线状之后，以均等的速度轻轻向前推动推片，则血液就被均匀地涂于载片上而形成一薄血膜。良好的血片，血液应分布均匀，厚度要适当，对光观察时呈霓红色，血膜应位于玻片中央，两端留有空隙，以便标上患畜名称、畜别、编号、日期。常温下自然风干（冬天可适当加温）。3．染色 3．1单染色瑞氏染色：滴加染液（约20滴）盖满血膜，染1分钟后，再加等量的缓冲液，继续染色3～10分钟（外界温度低染色时间长，反之亦然），用水冲去染液，吸干染片，干燥后，油镜观察。对胞浆及颗粒染色效果好。姬姆萨氏染色：在血膜上先加2-3滴甲醇使血膜固定，3-5分钟后待甲醇挥发后再加染液；染色20-60分钟（依外界温度高低而定染色时间长短）；水洗，干后油镜观察。对胞核及血液原虫染色效果好。 3．2复染色（混合染色）瑞氏-姬姆萨氏复合染色：先加瑞氏染液，半分钟后用水洗去染液；再加姬姆萨氏染液染约

白细胞计数和白细胞分类

实用标准文案白细胞计数和白细胞分类显微镜下计数一定体积内将全血用稀酸溶液稀释一定倍数并破坏红细胞后充入血细胞计数池内，原理一) ( 的白细胞数，经换算求出每升血液内的白细胞数。显微镜计数法)方法 (二参考值(三) 白细胞计数 109/L ×成人 4~10 109/L ×新生儿 15~20 白细胞分类 1%~5% 中性杆状核粒细胞 50%~70% 中性分叶核粒细胞 0.5%~5% 嗜酸性粒细胞 0%~1% 嗜碱性粒细胞 20%~40% 淋巴细胞 3%~8% 单核细胞临床意义(四) ，因此它的数由于中性粒细胞在白细胞中所占百分率最高 (50%~70%)1.中性粒细胞增多、减少的临床意义值增减是影响白细胞总数的关键。 (1)中性粒细胞增多，分娩时疼痛和产伤可使其 109/L15×个月以上白细胞增多可达①生理性增多见于胎儿、新生儿，妊娠5 剧烈运动、严寒、暴热等刺激也可见白细胞增多。2症于产后周左右恢复正常;10进一步增高，如无合并系边缘池内的白细胞过多地进入循环池所致，以上一过性白细胞增多在去除影响因素后不久则可恢复正常，而持续时间较长的白细胞增多则与贮备池加快释放等有关。精彩文档．实用标准文案 ②病理性增多反应性增多A. 最常见于急性化脓菌感染，如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等。其白细胞总数的增高视感染范围、严重程中度轻度感染时白细胞总数可正常，分类时可见中性粒细胞百分率增高;.度及机体反应性如何而有所不同并出现个/L并可伴轻度核象左移；重度感染时白细胞明显增高常>20×109感染时白细胞多>l0×109个/L明显的核象左移。感染过于严重如感染中毒性休克或机体反应性较差时白细胞可不增高反而减低但伴有严重的核象左移。严重的组织损伤如严重的烧伤、机械性损伤、较大手术后、心肌梗塞等均可见白细胞增高，并可借此来区别心梗与心绞痛。，×109/L)破裂或宫外孕破裂所致大出血，此时白细胞可迅速增高，达20大量血细胞破坏内脏(如肝、脾且可出现于血红蛋白降低之前。尿毒症等也代谢性中毒如糖尿病酮症酸中毒、急性中毒见于急性化学药物中毒如安眠药、有机磷等中毒；增多。(中性粒细胞)常见白细胞

白细胞分类

白细胞分类是在进行血液显微镜检察时，将白细胞分类计数的一种医学检测法。血液中的白细胞共有五种，即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。它们各有其生理功能。长期接触铅、汞、苯、放射线等可引起白细胞总数及白细胞分类的改变. 血液中的白细胞有五种，按照体积从小到大是：淋巴细胞，嗜碱性粒细胞，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞和单核细胞。白细胞是无色有核的血细胞，在血液中一般呈球形，根据形态差异可分为颗粒和无颗粒两大类。颗粒白细胞颗粒白细胞（粒细胞）中含有特殊染色颗粒，用瑞氏染料染色可分辨出三种颗粒白细胞即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。中性粒细胞具有变形运动和吞噬活动的能力，是机体对抗入侵病菌，特别是急性化脓性细菌的最重要的防卫系统。当中性粒细胞数显著减少时，机体发生感染的机会明显增高。嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶和酸性磷酸酶。嗜酸性粒细胞具有趋化性，能吞噬抗原抗体复合物，减轻其对机体的损害，并能对抗组织胺等致炎因子的作用。嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、肝素与5-羟色胺等生物活性物质，在抗原－抗体反应时释放出来。在人体的正常粪便中偶尔能见到少许白细胞，所以粪便检查中白细胞的多少可以作为肠道是否有炎症的一种依据，无颗粒白细胞无颗粒白细胞无细胞质颗粒，但有圆形细胞核，包括单核细胞和淋巴细胞。单核细胞是血液中最大的血细胞。目前认为它是巨噬细胞的前身，具有明显的变形运动，能吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片。单核细胞还参与免疫反应，在吞噬抗原后将所携带的抗原决定簇转交给淋巴细胞，诱导淋巴细胞的特异性免疫反应。单核细胞也是对付细胞内致病细菌和寄生虫的主要细胞防卫系统，还具有识别和杀伤肿瘤细胞的能力。淋巴细胞则为具有特异性免疫功能的细胞。T淋巴细胞主要参与细胞免疫反应而B淋巴细胞参与体液免疫反应。成年人白细胞数为每立方毫米5000～9000单位，其中中性粒细胞占0.50～0.70，嗜酸性粒细胞占0.005～0.05，嗜碱性粒细胞占0.005～0.01，单核细胞占0.03～0.08，淋巴细胞占0.20～0.40。幼儿血液中白细胞数高于成年人。不同生理状态（如妊娠期）会引起白细胞数量的变化。有炎症时，血中的白细胞数明显增加。各类白细胞的防御保护作用各不相同。正常值：（1）嗜中性粒细胞（N）：成人：0.40到0.75

血液分析仪五分类技术原理

血液分析仪五分类技术原理随着电子技术、流式细胞技术、激光技术、电子计算机技术和新荧光化学物质等各种高新技术在血细胞分析仪中的应用.使血细胞分析仪的检测原理不断完善、测量参数不断增加、检测水平不断提高.尤其在白细胞五分类技术方面，已发展到利用多项技术(如射频、细胞化学染色、流式细胞术和荧光染色技术等)联合同时检测一个白细胞.再用先进的计算机技术区分、辨别经上述方法处理后的各自细胞间的细胞差别.综合分析实验数据，得出较为准确的白细胞分类结果。为临床疾病的诊断、治疗提供了重要的实验室依据。近年来。可以对白细胞进行五分类计数的血细胞分析仪已经普遍使用。本文就目前血细胞五分类测定中常用技术及其最新应用进展作一综述。 1 血细胞五分类技术的原理 1.1 流式细胞术流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。首先，待测细胞经处理或染色后被压人流动室，与此同时，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在包绕下单行排列，依次通过检测区域.在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两个光源信号分别反映了细胞体积的大小和内部的信息.经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模，数转换器.将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，经计算机处理，可将分析结果显示在屏幕上。为了保证细胞单个排列地逐一通过检测区域，鞘流技术在流式细胞术中被广泛应用。根据层流理论，由于两种液体的流速和压力不同。在一定条件下样品溶液与包裹它的鞘液在流动中可以保持相互分离并且同轴。同时鞘液流可以加速样品溶液中颗粒的流动并迫使他们的流动轨迹保持在液流的中轴线上，使细胞单排列地逐一通过检测区域，这便是所谓的液流聚焦原理 1_2 阻抗法根据库尔特原理，将不良导体血液按一定比例稀释于等渗的电解液中，在小孔电极的两侧加一恒流源.在负压作用下，使稀释的血细胞通过小孔。当细胞通过截面时会由于电阻增大产生相应的脉冲，其脉冲的幅度与细胞的体积成正比，脉冲的频度与细胞的数量成正比。这便是著名的库尔特原理或称变阻脉冲原理。利用库尔特原理可以有效地区分淋巴及单核细胞。 1.3 激光散射法／多角度偏振光散射技术根据光散射理论，当激光照射到流动室内流过的每一个细胞时，由于细胞的物理特性，部分光线从细胞上经不同的角度散射。其中，前向小角度散射光的光强可以反应细胞体积；大角度散射光的光强可以反应细胞核，浆复杂度和细胞颗粒的信息；而侧向散射光的光强可以反应细胞膜、核膜、细胞质的变化。因此，可以依据细胞表明光散射的特点对细胞进行分类。https://www.wendangku.net/doc/d72615431.html,用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区，在不同角度(10度～7O度)对每个细胞进行扫描分析，测定其散射光强度，从而提供细胞结构、形态的光散

白细胞计数实验报告

白细胞计数和分类目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、原理：各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wright’s）染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中各种白细胞的相对比值，以观察其数量、形态和质量变化，通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞的绝对值。实验器材：香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.4~6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水、计数板及专用盖片、针1ml 刻度移液管、1ml EP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片实验步骤白细胞分类 1．血片制作：取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血涂片晾干，不可加热。注：（1）良好涂片标准：１) 呈头、体、尾舌形２) 血膜厚薄适宜３) 两边留有空隙（2）涂片好坏与下列因素有关：1）血滴大小 2）推片与玻片之间角度 3）推片速度 2、血涂片的染色步骤：（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。（2）滴加瑞氏染液，共计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。（3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合均匀，静置15分钟。（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。 3、白细胞分类计数：先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均匀处（一般在体尾交界处），在油镜下由此处开始按其形态特征进行分类计数，计数移动时避免重复。根据所见到的100个白细胞，记录各种白细胞所占的百分数。

白细胞分类

1.什么是三分类和五分类？他们之间有什么区别？三分类和五分类是国内的不准确的说法，应该叫三分群和五分群，也就是3DIFF和5DIFF。指的是血液常规中的白细胞分群。三分群就是将白细胞分成淋巴群、中间群和中性群，也就是小中大细胞群；五分群更准确些，把白细胞分成淋巴群、单核群、中性群、嗜酸群和嗜碱群。很多机器都可以产生很多衍生项目，例如其他的各类亚群等。分类项目越细，衍生项目越多，对临床指导越有意义。三分类：小型细胞（淋巴细胞）；中型细胞（单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）；大型细胞（中性粒细胞）。五分类：淋巴细胞；单核细胞；嗜酸性粒细胞；嗜碱性粒细胞；中性粒细胞。血液中的白细胞有五种，按照体积从小到大是：淋巴细胞，嗜碱性粒细胞，中性粒细胞，嗜酸性粒细胞和单核细胞。白细胞是无色有核的血细胞，在血液中一般呈球形，根据形态差异可分为颗粒和无颗粒两大类。颗粒白细胞（粒细胞）中含有特殊染色颗粒，用瑞氏染料染色可分辨出三种颗粒白细胞即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。无颗粒白细胞包括单核细胞和淋巴细胞。人体内白细胞总数和种类白细胞的百分比是相对稳定的。各种白细胞的百分比为：中性粒细胞50～70％；嗜酸性粒细胞0.5～5％；嗜碱性粒细胞0～1％；淋巴细胞20～40％；单核细胞为3～8％。机体发生炎症或其他疾病都可引起白细胞总数及各种白细胞的百分比发生变化，因此检查白细胞总数及白细胞分类计数成为辅助诊断的一种重要方法。 2.ABX三分类血液分析仪WBC分类原理

WBC 测定原理与RBC/PLT 测定原理完全相同。在WBC/HGB 计数池中进行WBC 计数。电信号处理装置在WBC 和PLT 之间设定一个电阈值。随后根据脉冲大小将电脉冲放入256 个通道。然后，确定脉冲阈值、按大小分组，再经数学计算，得出用于WBC 测定的数值。WBC 直方图是一种分布研究可显示下列三种白细胞亚群：（淋巴细胞、单核细胞和粒细胞）。ABX Micros 60 稀释液和溶血素对于划分WBC 分布曲线中的亚群具有极为重要的作用。稀释液可保留WBC 细胞膜，为差分反应作准备。溶血剂对WBC 质膜具有差分作用。当溶血素与淋巴细胞质膜发生反应时，溶血素可将水溶性细胞质释放出来，而让质膜收缩环绕在细胞核上。当溶血剂与单核细胞质膜反应时，其中间反应可使细胞在一定程度上保持稳定，与淋巴细胞相比，单核细胞可维持其较大的体积。当溶血剂与粒细胞反应时，反应程度受细胞质结构中一种分子的限制，这种分子可保护细胞免受溶血素收缩作用的影响。这也使粒细胞成为细胞分化中体积较大的一个WBC 亚群。经过差分溶血作用后，ABX Micros 60 分析WBC 通过微孔时各个电脉冲的高度。随后根据细胞体积大小（30fl 至450fl），将这些脉冲放入不同的通道、确定阈值、分组，再经过数学计算得出WBC 分布曲线，该曲线也称之为WBC 直方图。然后按照各组细胞数以及细胞的大小，把WBC 的三个亚群进行相应的分组。 WBC 亚群分布如下： ◆淋巴细胞体积介于30 - 100fl 之间。 ◆单核细胞体积介于100 - 150fl 之间。 ◆粒细胞体积介于150 - 450fl 之间。